TH2010 Zeinyeh Wael V Abregee PDF

Conception et synthèse dheterocycles azotes et de
derives sterodiens, modulateurs potentiels de

transporteurs ABC (glycoproteine-P)
Wael Zeinyeh
To cite this version:
Wael Zeinyeh. Conception et synthèse dheterocycles azotes et de derives sterodiens, mod-
ulateurs potentiels de transporteurs ABC (glycoproteine-P). Human health and pathology.
Universite Claude Bernard - Lyon I, 2010. French. <NNT : 2010LYO10325>. <tel-00874305>
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N dordre 325 - 2010

THSE DE LUNIVERSIT DE LYON

dlivre par

LUNIVERSIT CLAUDE BERNARD LYON 1

COLE DOCTORALE INTERDISCIPLINAIRE SCIENCES-SANT

DIPLME DE DOCTORAT

(arrt du 7 aot 2006)

soutenue publiquement le 17 dcembre 2010

par

M. Wal ZEINYEH

TITRE

:
Conception et synthse dhtrocycles azots et de drivs
strodiens, modulateurs potentiels de transporteurs ABC
(glycoprotine-P)

Directeur de thse : Pr. Nadia WALCHSHOFER

JURY : Pr. Ahcne BOUMENDJEL (Universit Joseph Fourier, rapporteur)
Pr. Roger ESCALE (Universit Montpellier I)
Dr Sylvie RADIX (MCU-HDR, UCB Lyon 1, ISPB)
Pr. Pascal RATHELOT (PU-PH, Universit Aix-Marseille II, rapporteur)
Pr. Nadia WALCHSHOFER (UCB Lyon 1, ISPB)

UNIVERSITE CLAUDE BERNARD - LYON 1

Prsident de lUniversit
Vice-prsident du Conseil Scientifique
Vice-prsident du Conseil dAdministration
Vice-prsident du Conseil des Etudes et de la Vie Universitaire
Secrtaire Gnral
M. le Professeur L. Collet
M. le Professeur J-F. Mornex
M. le Professeur G. Annat
M. le Professeur D. Simon
M. G. Gay

COMPOSANTES SANTE
Facult de Mdecine Lyon Est Claude Bernard
Facult de Mdecine Lyon Sud Charles Mrieux
UFR dOdontologie
Institut des Sciences Pharmaceutiques et Biologiques
Institut des Sciences et Techniques de Radaptation
Dpartement de Biologie Humaine

Directeur : M. le Professeur J. Etienne
Directeur : M. le Professeur F-N. Gilly
Directeur : M. le Professeur D. Bourgeois
Directeur : M. le Professeur F. Locher
Directeur : M. le Professeur Y. Matillon
Directeur : M. le Professeur P. Farge
COMPOSANTES ET DEPARTEMENTS DE SCIENCES ET TECHNOLOGIE
Facult des Sciences et Technologies
Dpartement Biologie
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Dpartement Mcanique
Dpartement Physique
Dpartement Sciences de la Terre
UFR Sciences et Techniques des Activits Physiques et Sportives
Observatoire de Lyon
Ecole Polytechnique Universitaire de Lyon 1
Institut Universitaire de Technologie de Lyon 1
Institut de Science Financire et d'Assurance
Institut Universitaire de Formation des Matres
Directeur : M. le Professeur F. Gieres
Directeur : M. le Professeur C. Gautier
Directeur : Mme le Professeur H. Parrot
Directeur : M. N. Siauve
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Directeur : Mme S. Fleck
Directeur : M. le Professeur P. Hantzpergue
Directeur : M. C. Collignon
Directeur : M. B. Guiderdoni
Directeur : M. le Professeur J. Lieto
Directeur : M. le Professeur C. Coulet
Directeur : M. le Professeur J-C. Augros
Directeur : M R. Bernard

1

Remerciements

Mes plus sincres remerciements vont toutes les personnes grce auxquelles cette
thse a pu voir le jour.
A Monsieur le Professeur Michel Pugeat, pour mavoir accueilli dans son quipe de
recherche.
A Madame le Professeur Nadia Walchshofer, pour mavoir encourag ds le dbut
emprunter la voie de la recherche, et pour avoir tout fait pour que je puisse poursuivre ma
thse dans les meilleures conditions.
A Madame le Docteur Sylvie Radix. Son soutien mtait inestimable, tant au niveau
scientifique quhumain. Cest grce sa prsence et sa disponibilit que ce travail a pu
avancer, mme si les mots me manquent pour lui exprimer toute ma gratitude.
A Monsieur le Docteur Bruno Claustrat, chef du service dHormonologie au Groupement
Hospitalier Est Hospices Civils de Lyon. Sans la confiance quil ma accorde, ce travail de
thse naurait jamais pu tre effectu. Je lui exprime mes plus profonds respects.
A Monsieur le Docteur Henri Dchaud, pour toutes ses qualits scientifiques et
humaines, et pour tout ce quil ma appris durant ces trois dernires annes. Je lui prsente
mes plus sincres remerciements en esprant avoir t digne de sa confiance.
A Messieurs les Professeurs Ahcne Boumendjel et Pascal Rathelot, pour mavoir fait
lhonneur dtre rapporteurs de ce manuscrit, et pour toutes leurs remarques constructives.
A Monsieur le Professeur Roger Escale, pour mavoir fait lhonneur de figurer dans mon
jury de thse.
A toute lquipe du laboratoire de chimie organique de la facult de pharmacie de Lyon,
ma grande famille durant ces trois dernires annes: M. le Pr. Pascal Nebois pour son
encouragement et son accueil, M. le Dr Zouhair Bouaziz pour sa grande exprience, ses
conseils toujours pertinents et son agrable sourire, M
me
le Dr Christelle Marminon pour sa
bonne humeur et sa disposition permanente offrir de laide, M. le Dr Luc Rocheblave pour
les petites ides qui mont trs souvent mis sur la bonne voie aux moments durs o les
molcules dcident de ne pas ragir, et M. Jacques Gentili pour ses prcieuses
connaissances en chimie et en informatique.
2

A M
me
le Dr Catherine Grenot, M. le Pr. Charles Dumontet, M. le Dr Philippe Lawton, M
me

le Dr Ghina Alameh et M
me
Eva Matera, pour avoir effectu les tests biologiques des produits
synthtiss dans le cadre de cette thse.
A lquipe du laboratoire de chimie thrapeutique pour leur disponibilit et leur aide : M.
le Pr. Roland Barret, M. le Pr. Marc Leborgne, M
me
le Dr Marie-Emmanuelle Millon, M. le Dr
Laurent Ettouati, et M. le Dr Thierry Lomberget.
A Monsieur le Docteur Julien Pilm, pour les discussions enrichissantes que nous avons
eues au sujet de la modlisation molculaire.
A Monsieur Marc Rolland de Ravel, pour toutes les techniques quil ma apprises et que
je naurais peut-tre apprises nulle part ailleurs ! Ainsi que pour sa patience et sa trs
agrable compagnie au laboratoire. Merci.
A mes amis, leur prsence mtait essentielle mme sils ne le savent probablement pas :
Alan, Mouhammad, Nada, Ilona, Claire, Graldine, Nicoletta, Touatia, Mouhannad, Elma, et
tous ceux que jai oublis.
A ma trs chre famille en Syrie : mon pre, ma mre, Amer et Zeina...
3

Table des matires
Abrviations .............................................................................................................................................. 6
Introduction ............................................................................................................................................... 7

CHAPITRE 1 : La multichimiorsistance et la famille des transporteurs ABC............................................. 10
1. La glycoprotine-P (Pgp) ................................................................................................................... 11
1.1. Historique ...................................................................................................................................... 11
1.2. Structure ........................................................................................................................................ 12
1.3. Les sites de liaison de la Pgp ......................................................................................................... 14
1.3.1. Les sites de liaison de lATP (Nucleotide-Binding Domains, NBD) ...................................... 14
1.3.2. Les autres sites de liaison .................................................................................................... 15
1.3.3. Le cas du (des) site(s) aux strodes .................................................................................... 16
1.4. Mcanisme daction de la Pgp ...................................................................................................... 21
1.5. Rle de la Pgp dans les tissus sains ............................................................................................... 24
1.6. La Pgp et la multichimiorsistance en clinique ............................................................................. 25
1.6.1. Les mthodes de dtection ................................................................................................. 25
1.6.2. Les implications cliniques de la multichimiorsistance ....................................................... 26
1.7. Les inhibiteurs de la Pgp ................................................................................................................ 27
1.7.1. Les structures ....................................................................................................................... 27
1.7.2. Mcanismes daction ........................................................................................................... 31
1.7.3. Perspectives ......................................................................................................................... 32
2. Le transporteur CpABC3 ................................................................................................................... 33

CHAPITRE 2 : Conception et synthse de drivs dimidazo[4,5-b]pyridin-7-ones .................................... 36
1. Les inhibiteurs dATPases ................................................................................................................. 37
2. Bibliographie concernant la synthse des imidazo[4,5-b]pyridines ................................................... 39
2.1. Synthse du noyau imidazo[4,5-b]pyridine ................................................................................... 39
2.1.1. Synthses partir du noyau imidazole ................................................................................ 39
4

2.1.2. Synthses partir de pyridines ............................................................................................ 41
2.2. Synthses dimidazo[4,5-b]pyridin-7-ones partir dimidazo[4,5-b]pyridines ............................. 44
2.2.1. partir dun groupement NO
2
en position 7 ....................................................................... 44
2.2.2. partir dun chlore en position 7 ........................................................................................ 44
3. Travaux personnels : Synthse et valuation des drivs dimidazo[4,5-b]pyridin-7-one ................. 46
3.1. Synthse des drivs 7-chloroimidazo[4,5-b]pyridine (III) ............................................................ 47
3.1.1. Synthse des drivs N-oxydes (9) et (10) ........................................................................... 47
3.1.2. Etude de la rgioslectivit de la N-benzylation des composs (9) et (10) ......................... 48
3.1.3. Chloration des drivs N4-oxyde benzyls N1-(11) et N3-(11) ........................................... 53
3.2. Synthse des imidazo[4,5-b]pyridin-7-ones (V) ............................................................................ 55
3.2.1. Synthse de limidazo[4,5-b]pyridin-7-one (15) .................................................................. 55
3.2.2. Alkylation en N4 de limidazo[4,5-b]pyridin-7-one (15) ...................................................... 57
3.3. Evaluation biologique .................................................................................................................... 62

CHAPITRE 3 : Conception, synthse et valuation biologique de drivs bivalents progestrone-adnine
comme inhibiteurs potentiels de la P-glycoprotine ...................................................................................... 66
1. Le concept du ligand bivalent ............................................................................................................... 67
2. Exemples de ligands bivalents .............................................................................................................. 68
3. Les ligands bivalents de la Pgp dans la littrature ................................................................................ 72
4. Conception, synthse et valuation biologique de drivs bivalents progestrone-adnine comme
inhibiteurs potentiels de la P-glycoprotine ................................................................................................... 76
4.1. Synthse des ligands bivalents adnine-progestrone ................................................................. 78
4.1.1. Fonctionnalisation de la progestrone ....................................................................................... 78
4.1.2. Synthse des drivs adnine-bras-NH
2
..................................................................................... 85
4.1.3. Couplage des drivs adnine-bras-NH
2
avec les acides (29) et (30) ......................................... 95
4.2. Evaluation biologique des ligands bivalents progestrone-adnine ............................................. 99
4.2.1 Principe du test .................................................................................................................... 99
4.2.2. Rsultats et discussion ....................................................................................................... 101

5

CHAPITRE 4 :Synthse de bras de type oligocyclohexylidne ................................................................. 105
1. Rappels bibliographiques ............................................................................................................... 106
1.1. Mthode de Barton et Kellogg .................................................................................................... 106
1.2. Synthse par raction de Grignard ............................................................................................. 107
1.3. Synthse via des composs dinitrs vicinaux
,
............................................................................ 108
1.4. Synthse par raction de McMurry ............................................................................................. 109
1.5. Synthse via des acides |-hydroxycarboxyliques ........................................................................ 110
1.6. Structure ...................................................................................................................................... 112
2. Travaux personnels : Rsultats et discussion .................................................................................. 114
2.1. Essais par raction de Wittig ....................................................................................................... 114
2.2. Essais par raction de Grignard ................................................................................................... 118
2.3. Essais par raction de dshydratation-dcarboxylation ............................................................. 121
2.4. Fonctionnalisation des oligocyclohexylidnes ............................................................................ 124
Conclusion et perspectives .................................................................................................................... 129
Partie exprimentale ............................................................................................................................. 133
Partie exprimentale Chimie ........................................................................................................134
Partie exprimentale Biologie ......................................................................................................217
Rfrences............................................................................................................................................220
Abrviations
6

Abrviations

%m. : pourcentage massique
Boc : tert-butyloxycarbonyl
Boc
2
O : dicarbonate de di-tert-butyle
Cbz : benzyloxycarbonyl
CCM : chromatographie en couche mince
CI : ionisation chimique
DCC : dicyclohexylcarbodiimide
DCM : dichloromthane
DDQ : 2,3-dichloro-5,6-dicyanobenzoquinone
DEAD : azadicarboxylate de dithyle
DHP : 3,4-dihydro-2H-pyrane
DIAD : azadicarboxylate de diisopropyle
DMAP : 4-(dimthylamino)pyridine
DMF : dimthylformamide
DMF-DMA : N,N-dimthylformamide dimthtylactal
DMF-DNPA : N,N-dimthylformamide dineopentylactal
DNR : daunorubicine
EI : ionisation lectronique
ESI : ionisation par lectrospray
Fmoc : fluorenylmthyloxycarbonyle
HOSu : N-hydroxysuccinimide
HRMS : spectromtrie de masse haute rsolution
Hz : hertz
IR : infra-rouge
LDA : diisopropylamidure de lithium
MM : masse molaire
MO : micro-onde
MsCl : chlorure de mthanesulfonyle
PBS : tampon phosphate salin
PDC : dichromate de pyridinium
Pf : point de fusion
Pgp : glycoprotine-P
ppm : partie par million
Pyr : pyridine
quant. : quantitatif
Rac. : racmique
Rdt : rendement
RMN : rsonance magntique nuclaire
RPMI : milieu de culture cellulaire dvelopp au Roswell Park Memorial Institute
SM : spectromtrie de masse
TA : temprature ambiante
TBAF : fluorure de ttrabutylammonium
TBS : tert-butyldimthylsilyle
THF : ttrahydrofurane
pTsCl : chlorure de para-tolunesulfonyle
UI : Unit Internationale
UV : ultra-violet
Introduction
7

Introduction
La multichimiorsistance (multidrug resistance, MDR), est dfinie comme la rsistance
simultane, exprime par la cellule, lencontre dagents cytotoxiques trs varis du point
de vue de leurs structures et de leurs mcanismes daction.
Elle est lun des mcanismes par lesquels les cancers dveloppent une rsistance aux
traitements antitumoraux, et constitue, par consquent, lune des raisons de lchec de ces
traitements.
Plusieurs mcanismes peuvent intervenir pour confrer la cellule une rsistance un
principe actif donn ou une classe mdicamenteuse donne. Parmi ces mcanismes, on
peut citer la modification des voies mtaboliques, laltration des protines cibles, la
surexpression ou linactivation de certains gnes impliqus dans la rgulation de lapoptose,
etc
La multichimiorsistance, qui confre la cellule une protection contre un large spectre
de substances actives nayant en commun ni leur structure ni leur cible, est souvent due
lexpulsion des cytotoxiques en dehors de la cellule par des pompes defflux, protines
appartenant la famille des ABC (ATP-binding cassettes).
A lheure actuelle, plusieurs protines de la famille des ABC sont connues pour tre
impliques dans le phnotype MDR : BCRP ou ABCG2 (Breast Cancer Resistance Protein),
MRP-1 ou ABCC1 (Multidrug Resistance Protein) et la glycoprotine-P ou ABCB1 (P-
glycoprotein, Pgp)
1,2
De plus, la famille ABC nest pas exclusivement dorigine humaine, on trouve ces
transporteurs dans des organismes couvrant toute lchelle de lvolution, allant des
procaryotes (les bactries) et des eucaryotes unicellulaires (dont certains parasites de
. Cette dernire a t la premire tre dcouverte. Elle est la plus
largement tudie, mais elle reste une cible de choix pour lutter contre le phnotype MDR.
A lheure actuelle, les traitements visant inhiber la Pgp nont pas montr defficacit
clinique significative. En effet, les inhibiteurs actifs in vitro se sont souvent rvls trs
toxiques ou peu spcifiques, in vivo. La recherche dinhibiteurs de la Pgp reste donc un dfi
dactualit dans le domaine de la cancrologie. Notre quipe a donc orient lun de ses axes
de recherche vers la synthse dinhibiteurs potentiels de la Pgp.
Introduction
8

lhomme) jusquaux mammifres. En particulier, une deuxime protine de la famille ABC a
t explore dans notre laboratoire, il sagit de CpABC3, transporteur membranaire chez le
parasite Cryptosporidium parvum, et possdant un rle potentiel dans la rsistance de ce
parasite aux traitements. En outre, cette protine possde galement lintrt de prsenter
une importante homologie de structure avec la Pgp, en particulier au niveau des domaines
liant lATP (Nucleotide Binding Domains ou NBDs), ce qui lui permet de constituer un modle
valable pour lvaluation des inhibiteurs potentiels de lactivit ATPasique de la Pgp.
Dans le cadre de cette thse, nous exposons le travail de recherche men dans notre
laboratoire dans lobjectif de dvelopper des inhibiteurs potentiels des transporteurs ABC,
en particulier la Pgp.
Le premier chapitre de ce document est un rappel bibliographique sur les connaissances
actuelles concernant la multichimiorsistance par surexpression de transporteurs ABC. Nous
traitons plus particulirement de la Pgp : sa structure, son mcanisme daction, ses sites de
liaison, son rle clinique ainsi que ses inhibiteurs chimiques.
Le deuxime chapitre est consacr la synthse dhtrocycles de type
imidazo[4,5-b]pyridin-7-one. En effet, ce noyau peut tre considr comme une
dazapurine, et de ce fait, pourrait avoir un effet inhibiteur de lactivit ATPasique des
transporteurs ABC. Nous prsentons la synthse du noyau imidazo[4,5-b]pyridin-7-one, ainsi
que diffrentes modulations effectues en positions 1, 2 et 4. Les tests dinhibition de
lactivit ATPasique de CpABC3 par ces composs sont galement prsents la fin du
chapitre.
N
N
N
O
Imidazo[4,5-b]pyridin-7-one
1
2
3
4
5
6
7
R
1
R
2
R
3

Le troisime chapitre est consacr la synthse de drivs bivalents, de structure
progestrone-espaceur-adnine, destins se lier simultanment sur le site aux strodes et
Introduction
9

sur le site ATP de la Pgp. En plus de leur activit inhibitrice potentielle de la Pgp, ces
bivalents pourraient constituer des outils pharmacologiques pour ltude structurale de
cette protine, en fournissant des informations prcieuses sur lventuelle proximit du site
aux strodes de celui ATP. Nous exposons ainsi la synthse de dix-sept drivs bivalents,
avec des bras de liaison de longueur et de gomtrie variable, et un point de fixation sur la
progestrone en C7 ou C20. Lvaluation de lactivit inhibitrice de la Pgp par ces composs
est prsente la fin du chapitre.
N
N
N
N
b
r
a
s
progestrone
adnine
site des strodes
site de l'ATP
Pgp

Enfin, dans le quatrime chapitre, nous prsentons la synthse de composs de type
oligocyclohexylidne. En effet, ces composs possdent une structure rigide, longueur bien
dtermine, et peuvent servir comme bras de liaison dans des composs bivalents activit
biologique. La synthse de chanes deux et trois units cyclohexylidnes est expose dans
ce chapitre, ainsi que la fonctionnalisation du driv bicyclohexylidne avec des
groupements permettant, terme, deffectuer le couplage de ces chanes avec un strode
et un htrocycle azot.
RO
O
RO
O
O
O
H
2
N
OH

Chapitre 1 : La multichimiorsistance et la famille des transporteurs ABC
10

CHAPITRE 1
La multichimiorsistance et la famille des transporteurs ABC

11

1. La glycoprotine-P (Pgp)
1.1. Historique
La Pgp a t dcouverte en 1976 par des chercheurs canadiens (Juliano et al.)
3
Des tudes antrieures avaient reli cette rsistance la diminution de laccumulation des
anticancreux lintrieur de la cellule
. Ces
chercheurs ont tudi des lignes cellulaires tumorales issues de lovaire du hamster chinois,
prsentant une rsistance un large spectre danticancreux.
4
En analysant le profil lctrophortique des protines membranaires issues de ces
lignes rsistantes, Juliano et al. ont montr quune glycoprotine membranaire de 170kDa
tait largement surexprime dans les cellules rsistantes par rapport aux lignes parentales
sensibles. Ils ont baptis cette glycoprotine : la P-glycoprotine, P pour Permeability ,
supposant quelle avait un rle dans la modulation de la permabilit membranaire aux
anticancreux.
.
En 1983, Kartner et al.
5
Ainsi, en partant dune partie du gnome qui subit une amplification significative dans les
cellules cancreuses multichimiorsistantes
ont montr que la Pgp tait galement surexprime dans des
lignes tumorales multichimiorsistantes humaines. Depuis cette date, la Pgp est devenue
une cible dtude privilgie dans le domaine de la cancrologie.
6,7,8
, le gne codant pour la Pgp a t identifi
en 1986
9
. Il a t appel mdr1 (pour Multiple Drug Resistance), et sa localisation
chromosomique a t dtermine en 1987
10
Le fait que la surexpression de la Pgp soit le rsultat de lamplification dun gne faisant
partie du patrimoine gntique des cellules saines, suggre que la Pgp joue un rle dans ces
cellules. Ceci a t confirm, soit en localisant directement la Pgp dans des chantillons
tissulaires grce un anticorps monoclonal (par exemple, ltude mene en 1987 par
Thiebaut et al.
, sur le chromosome 7. Les auteurs ont
galement montr que le gne mdr est en grande partie conserv entre les diffrentes
espces tudies (lhomme, le hamster et la souris)
8
.
11
), soit en tudiant lexpression du gne mdr1 dans les diffrents tissus (par
exemple, Fojo et al. en 1987
12
). Les rsultats, concordant, indiquaient que la Pgp tait
exprime dans certains tissus humains sains : le foie, les reins, le pancras, le tube digestif,
les glandes corticosurrnales et la barrire hmato-encphalique. Dans ces tissus, la Pgp est
12

essentiellement localise sur la surface apicale des cellules pithliales, soutenant
lhypothse selon laquelle la Pgp joue un rle dans la rgulation de labsorption et de
llimination des xnobiotiques.
Pendant les deux dernires dcennies, la Pgp a t trs largement tudie. Les
recherches se sont portes sur sa structure, son mode de fonctionnement, et ses inhibiteurs
potentiels.
1.2. Structure
La nature glycoprotque et la localisation membranaire de la Pgp ont t suggres
depuis la premire publication la dcrivant en 1976
3
.
La Pgp humaine est une protine de 1280 acides amins. Elle est constitue de deux
parties quivalentes par leur taille et presque identiques par leur squence dacides amins.
Chacune des deux parties comprend six domaines transmembranaires hydrophobes
(TMs), trois boucles extracellulaires, deux boucles intracellulaires, et un domaine
cytoplasmique hydrophile, capable de lier les nuclotides (NBD, Nucleotide-Binding Domain)
(figure 1). Chacun de ces domaines NBD contient deux squences dacides amins, connus
sous le nom de motifs Walker, A et B
13

. Ces squences caractrisent la plupart des protines
capables dhydrolyser lATP. Les parties N-terminale et C-terminale de la protine sont
intracellulaires.
Figure 1 . Structure schmatique de la Pgp, les domaines transmembranaires sont
numrots de 1 12, les motifs Walker A et B sont nots A et B. (daprs C.-H. Choi
14
)

Cette figure ne peut pas tre diffuse en accs libre.
Merci de consulter la publication dorigine (rfrence ci-dessous).
13

Ce modle a t propos daprs la structure primaire de la protine, tablie partir du
squenage de son gne
15
Trs rcemment, la structure tridimensionnelle de la Pgp de souris, ayant 87%
dhomologie de structure avec la Pgp humaine, a t tablie par diffraction des rayons X
. Ltude de cette structure et la comparaison avec les structures
primaires dautres protines de transport membranaires dj connues (en particulier des
protines bactriennes), a permis de prdire lexistence de ces douze domaines
transmembranaires hydrophobes, et de la squence NBD dj identifie dans plusieurs
ATPases.
16
Cette tude a galement rvl lexistence de deux portes dentre la cavit
hydrophobe, dune largeur de 9 environ, donnant sur le feuillet interne de la bicouche
lipidique de la membrane cytoplasmique. Ceci vient confirmer danciennes hypothses selon
lesquelles les molcules expulses par la Pgp passent dabord par la bicouche lipidique, et
sont expulses partir du feuillet interne de la membrane

(figure 2). Elle a une longueur de 136 et une largeur de 70 . La cavit interne de la Pgp a
un volume de 6000
3
environ, et elle est entoure essentiellement dacides amins chaine
latrale hydrophobe, appartenant aux hlices o des domaines transmembranaires (TM 1
12).
17,18

.
Figure 2. Deux vues opposes de la Pgp de souris. TM1, TM2, etc... : domaines
transmembranaires. NBD1 et NBD2: domaines de liaison de lATP. N et C : parties N-
terminale et C-terminale. (daprs S.G.Aller et al.
16
)

14

1.3. Les sites de liaison de la Pgp
1.3.1. Les sites de liaison de lATP (Nucleotide-Binding Domains, NBD)
Lactivit ATPasique de la Pgp est dmontre depuis 1988
19
. Des mutations dun seul
acide amin sur lun ou lautre des deux domaines NBD ou sur les deux domaines en mme
temps ont montr que pour le fonctionnement de la protine, ces deux domaines devaient
tre intacts
20
. Les domaines NBD des transporteurs ABC chez les diffrentes espces
vivantes prsentent dimportantes homologies. Ils sont constitus de motifs conservs,
Walker A et Walker B (quon trouve dans la plupart des ATPases
13
que ces protines soient
des transporteurs membranaires ou non), de boucles D, H, Q et A, et dune squence
signature particulire aux transporteurs ABC, quon appelle galement le motif C
21
Aller et al.
16
ont mis en vidence une distance entre les deux domaines NBD de 30
environ ; de plus, des tudes rcentes
.
22,23

ont propos un modle selon lequel la liaison
dune molcule dATP sur chacun des deux NBDs induit la formation dun dimre entre ces
deux domaines. La prsence dun cation Mg
2+

est ncessaire pour cette liaison. Les
interactions entre les deux molcules dATP et les deux NBD sont schmatises dans la
figure 3. Cest sous cette forme dimrise que la Pgp expulserait, vers le milieu
extracellulaire, la molcule mdicamenteuse initialement retenue dans sa cavit centrale.
Figure 3. Interactions supposes entre les deux molcules dATP et les deux domaines NBD
dimriss (daprs Ambudkar et al.
21
)

15

Lhydrolyse de lATP serait lorigine du retour de la Pgp sa conformation initiale, avec
deux domaines NBDs loigns. En effet, lhydrolyse de lATP en ADP est suppose engendrer
des rpulsions lectrostatiques conduisant lloignement des deux NBDs.
Par consquent, les deux motifs NBDs seraient le moteur qui induit les changements de
conformation ncessaires pour le travail de pompe defflux de la Pgp. Ces changements
seraient ultrieurement transmis aux parties transmembranaires.

1.3.2. Les autres sites de liaison
A lheure actuelle, il parat vident que la Pgp contient plusieurs sites de liaisons, tant
donn le nombre important de molcules susceptibles dtre transportes ou de moduler
son activit.
Plusieurs tudes ont dtermin des sites de liaison de mdicaments transports par la
Pgp. La mthode la plus utilise est le photomarquage daffinit de la protine par des
drivs photoactivables de la molcule tudie. Le terme photoactivable indique que ces
drivs deviennent chimiquement ractifs par activation par le rayonnement
lectromagntique. La forme ractive du driv forme alors une liaison covalente avec un
acide amin adjacent au site de la liaison du driv sur la protine.
Cette mthode permet dune part, de prouver lexistence dune liaison spcifique entre
le driv chimique et la protine (par comptition avec dautres ligands). Dautre part, le
photomarquage daffinit permet de localiser le site de liaison de la molcule sur la protine,
ceci en effectuant une digestion enzymatique de la protine pour donner des polypeptides,
qui seront analyss (essentiellement par spectromtrie de masse MALDI-TOF) afin de
dterminer les fractions qui ont t marques par le driv photoactivable.
Ainsi, lexistence de sites de liaison de la ciclosporine
24
, de la daunomycine
25
, du
vrapamil
26
, de la prazosine
27
et des alcalodes de la Pervenche
28
En se basant sur les rsultats de photomarquage daffinit, ainsi que sur ltude des
consquences de plusieurs mutations ponctuelles sur lactivit de la Pgp, Shilling et al.
a t mise en vidence.
29
ont
propos un modle selon lequel les sites de liaison des mdicaments sur la Pgp sont
concentrs dans la zone des parties TM 5 et 6, et TM 11 et 12.
16

Ces rgions sont riches en acides amins chane latrale aromatique qui favorisent les
interactions de stacking avec des cycles aromatiques, et en acides amins donneurs de
liaison hydrogne galement caractristiques des rgions riches en sites de liaison.

1.3.3. Le cas du (des) site(s) aux strodes
Les premires tudes concernant les interactions strodes-Pgp datent de 1988. En
partant du fait que les cellules de lendomtre de lutrus de la souris gravide surexpriment
le gne mdr1, Yang et al
30
. ont suppos que la Pgp pourrait jouer un rle dans la rgulation
du transport des hormones sexuelles, scrtes en abondance pendant la gestation. Les
auteurs ont effectu une tude de photomarquage daffinit pour montrer que certains
strodes hydrophobes, en particulier la progestrone, inhibaient le photomarquage de la
Pgp par des drivs photoactivables de certains mdicaments (azidopine et vinblastine). Ceci
suggrait une liaison de la progestrone sur la Pgp. La progestrone sest montre
galement capable dinhiber la Pgp et ainsi daugmenter la sensibilit cellulaire vis--vis
dagents anticancreux. Cette tude a t galement la premire valuer linteraction des
substances endognes avec la Pgp, confirmant lhypothse dun rle de la Pgp dans les tissus
sains. Ces rsultats ont ensuite t confirms sur des lignes cellulaires cancreuses
humaines
31
En 1992, Ueda et al.
.
32
Les auteurs ont pu conclure que, parmi les strodes tudis, le cortisol, laldostrone et la
dexamthasone (figure 4) taient transports par la Pgp. Etonnamment, la progestrone,
quant elle, ne ltait pas, bien quil sagisse du strode qui avait montr la plus grande
activit inhibitrice du transport de la Pgp.
ont tudi le transport de diffrents strodes par la Pgp. Le
principe de ltude reposait sur lvaluation du mouvement des strodes tudis travers
une monocouche de cellules, surexprimant la Pgp sur leur surface apicale et non pas sur leur
surface basale. Les substances transportes par la Pgp se retrouvaient alors plus concentres
dans le milieu qui tait en contact avec la surface apicale de la monocouche cellulaire.
17

O
O
Dexamthasone
O
O
OH
O
HO
11
Aldostrone
O
O
OH
HO
Cortisol
OH
F
HO
OH
OH
Figure 4. Strodes transports par la Pgp

Suite ces rsultats, il a t propos que le transport des strodes dpendait de leur
hydrophilie : ainsi, les strodes qui possdent un caractre hydrophile (en particulier le
groupement hydroxyle en position 11) sont transports (par ex. le cortisol et laldostrone),
tandis que la progestrone, trs hydrophobe, ne lest pas.
Par la suite, dautres drivs de la progestrone, tel que lactate de mgestrol
33
et le
RU486
34
O
O
Progestrone
O
O
Actate de mgestrol
O
11
RU486
OH
OAc
N
CH
3
(figure 5) se sont avrs des inhibiteurs plus puissants de lactivit de la Pgp que la
progestrone.
Figure 5. Strodes inhibiteurs de la Pgp

Les premiers lments concernant le site de liaison de la progestrone sur la Pgp datent
de 1997. Dayan et al.
35
Dayan et al.
35
ont montr que :
ont explor un fragment recombinant de la Pgp de souris, appel le
fragment NBD1-tendu, contenant les acides amins 371-705, qui correspond au domaine
cytosolique NBD1. Lvaluation de la liaison de diffrents ligands a t ralise par la mesure
du quenching de la fluorescence intrinsque du fragment NBD1-tendu, d la prsence
dun rsidu tryptophane en position 696.
18

- la progestrone, et certains de ses analogues (le RU486 et la A6-progestrone) qui
sont connus pour avoir une activit inhibitrice de la Pgp sans tre transports, se lient sur ce
fragment NBD1 cytosolique.
- les strodes transports par la Pgp, mais qui sont trs faiblement inhibiteurs de son
activit (tels que le cortisol et la dexamthasone) ne se lient pas, ou se lient trs faiblement,
ce fragment NBD1.
- le site de liaison de la progestrone et du RU486 se trouve proximit du site de
liaison de lATP. Ceci a t suggr daprs une tude de comptition qui a montr que le
MANT-ATP (figure 6) (analogue de lATP contenant un rsidu hydrophobe li au sucre)
antagonise la liaison du RU486 sur son site. Par contre, la prsence dATP ninflue pas la
liaison des strodes leur site. Ceci montre que les sites ATP et aux strodes, mme sils
sont proches, ne se chevauchent pas.
N
N
N
N
NH
2
O
O OH
O P
OH
O
O P O
OH
O
P HO
HO
O
O HN
MANT-ATP
O
OH
O
HO
OH
OCH
3
Kaempferide
Figure 6.

Des rsultats ultrieurs de la mme quipe sont venus appuyer lhypothse de la
proximit des deux sites de liaison
36
Cette tude a montr que certains flavonodes, tels que le kaempferide (figure 6),
empchent simultanment la liaison, sur le NBD2, de lATP et des strodes inhibiteurs
comme le RU486. Ceci suggre fortement que les deux sites de liaison sont proches lun de
lautre. Cest dans ce cadre-l, quune tude
. Cette fois, les auteurs ont explor, selon la mme
mthode dvaluation, un fragment cytosolique NBD2 recombinant, qui a montr les mmes
affinits que le fragment NBD1 vis--vis des strodes, de lATP et du MANT-ATP.
37
a t mene au sein de notre quipe INSERM
U863, dans le but de mettre en vidence le site de liaison de la progestrone sur la Pgp. Un
photomarquage daffinit a t ralis par le biais de six drivs de la progestrone,
19

porteurs dun groupement photoactivable de type azoture daryle, en position 3, 7 ou 11
(figure 7). Aprs irradiation et digestion trypsique de la Pgp, les peptides marqus ont t
identifis par spectromtrie de masse MALDI-TOF, avec ou sans immunopurification
pralable des peptides laide danticorps anti-strodes.
O
O
O
RO
O
O OR
RO
H
N
C
O
N
3
OH
H
N
C
O NO
2
N
3
R= ou
3
7
11
Figure 7.
Aprs confirmation pralable que ces marqueurs drivs de la progestrone entrent bien
en comptition avec cette dernire dans sa liaison sur la Pgp, ltude a mis en vidence deux
rgions photomarques : lextrmit C-terminale du domaine NBD1 proximit du segment
transmembranaire TM7 (peptides 682 702), et la boucle intra-cytoplasmique comprise
entre les segments transmembranaires TM8 et TM9 (peptides 799 808) (cf. figure 1).
Ces rsultats confortent lhypothse dune proximit entre les sites de lATP et de la
progestrone, tant donn que des peptides photomarqus semblent proches du domaine
NBD sur la structure primaire de la protine. Nanmoins, des tudes de modlisation
tridimensionnelle sont ncessaires pour pouvoir confirmer cette proximit dans lespace.
Trs rcemment, Mares-Samano et al
38
. ont publi une tude in silico des interactions de
diffrentes hormones strodiennes (progestrone, estradiol, testostrone, cortisol) et de
corticodes de synthse (dexamthasone, triamcinolone) (figure 8) avec le domaine NBD2 de
la Pgp, bti par homologie de squence avec des transporteurs ABC bactriens dont la
structure cristalline est connue (cette tude est antrieure la publication de la structure
cristalline de la Pgp de souris par Aller et al.
16
).
20

OH
O
OH
HO
O
O
HO
Estradiol
Testostrone
OH
OH
OH
Triamcinolone
F
Figure 8.

Cette tude prdit le rle de la squence P-loop du NBD de la Pgp dans la liaison des
strodes. La squence P-loop , connue galement sous le nom de squence Walker A,
fait partie du site liant lATP au niveau des groupements phosphates par lintermdiaire de
liaison hydrogne avec Gly 1073, Cys 1074, Gly 1075, Ser 1077 et Thr 1078. Le noyau adnine
interagit, quant lui, avec Tyr 1044. Le site liant les strodes serait voisin de lATP, les deux
sites pouvant comporter des rgions communes. Les cycles A et B des strodes donneraient
lieu des interactions hydrophobes avec Gly 1073, Gly 1075, Ser 1077 et Tyr 1044, de mme
que les cycles C et D avec Ile 1050 et Val 1052 (figure 9).

Figure 9. Daprs Mares-Samano et al.
38
: modle 3D du NBD2 de la Pgp.
a) progestrone (violet), dexamthasone (gris), testostrone (vert clair), stradiol (rose), corticostrone (bleu
clair) ; b) cortisol (bleu clair), dihydrotestostrone (orange), lanostrol (marron), pregnanedione (vert),
triamcinolone (bleu fonc). En rouge : ATP.

En rsum, plusieurs lments sont en faveur de lexistence, sur le domaine cytosolique
de la Pgp, dun site de liaison des strodes. Laffinit des strodes vis--vis de ce site semble
proportionnelle leur hydrophobie, et ce sont les strodes les moins bien transports par la

21

Pgp qui ont la plus grande affinit pour ce site. Le site serait proche du site de liaison de
lATP, et aurait un effet inhibiteur de laction de la Pgp.
A lheure actuelle, la prsence dautres sites de liaison des strodes ne peut pas tre
exclue. Des recherches
39
ont mis en vidence un photomarquage daffinit de la Pgp par des
strodes transports, sans dterminer de site de liaison. Dautres tudes, bases sur des
mutations ponctuelles de la Pgp
40
1.4. Mcanisme daction de la Pgp
, ont suggr la prsence dun site aux strodes dans le
domaine transmembranaire de la protine.
Vraisemblablement, la Pgp capte la molcule mdicamenteuse depuis le feuillet
cytoplasmique de la membrane cellulaire. Cette hypothse a t suggre par deux
tudes
17,18
menes sur deux molcules diffrentes transportes par la Pgp : le LDS-751 et le
Hoechst 33342 (figure 10).
N
N
N
H
N
N
H
N
OH
.3 HCl
Hoechst 33342
N
S
N Et
ClO
4
LDS 751

Figure 10.

Ces deux molcules ont la particularit dtre fluorescentes uniquement dans un
environnement lipidique (par exemple la membrane cytoplasmique) et non en milieu
aqueux. Ces deux composs ont montr une vitesse de diffusion entre les deux feuillets de la
membrane beaucoup plus faible que leur vitesse de transport par la Pgp.
Dans cette exprience, les chercheurs utilisaient des vsicules membranes inverses. La
molcule fluorescente injecte dans le milieu se concentre dans le feuillet cytoplasmique
22

(qui est vers lextrieur) avant de diffuser lentement vers le feuillet extracellulaire. Aprs un
dlai dtermin (T), le transport par la Pgp est initi en ajoutant de lATP dans le milieu.
La mesure de la vitesse initiale du transport (proportionnelle la diminution de la
fluorescence de la molcule qui est expulse en milieu aqueux) est calcule pour des dlais T
variables. Ceci a montr que la vitesse initiale diminue avec laugmentation du dlai T. Ce
profil est en faveur dun transport partir du feuillet cytoplasmique de la membrane (figure
11). En effet, la concentration dans ce feuillet diminue avec le temps cause de la diffusion
vers le feuillet externe. Si le transport se faisait partir du feuillet extracellulaire, la vitesse
initiale augmenterait avec laugmentation du dlai T, car la concentration dans le feuillet
extracellulaire augmente, par diffusion, avec laugmentation du dlai T.
Par ailleurs, la prsence dun portail dentre la cavit centrale de la Pgp, partir du
feuillet cytoplasmique de la membrane, a t confirme par la structure tridimensionnelle
de la protine (cf. 1.2. de ce chapitre).

Figure 11. Transport des substrats de la Pgp partir du feuillet cytoplasmique de la
membrane (vsicule membrane inverse). Les losanges noirs symbolisent les molcules
transportes (daprs Shapiro et al.
17
).

Rcemment, Sauna et al.
41
- Il nest pas encore mis en vidence si la liaison du substrat avec la Pgp est
antrieure ou postrieure la liaison de lATP sur ses sites. Mais il apparait que la liaison
dun substrat ne change pas laffinit de lATP pour la Pgp, elle augmente juste sa vitesse
dhydrolyse.
ont publi une revue des connaissances actuelles concernant
le cycle de transport de la Pgp. Les points essentiels sont rsums dans ce qui suit :

23

- La liaison de deux molcules dATP sur les deux NBDs induit la dimrisation de
ces deux domaines. Chaque molcule dATP sera lie dun ct aux motifs Walker A et B, la
boucle Q et la boucle H du premier NBD, et de lautre ct la boucle D et la squence de
signature (motif C) sur lautre NBD.
- La Pgp, prsentant des NBDs dimriss, a moins daffinit pour le substrat que
la Pgp dont les NBDs sont spars. Ceci explique la libration du substrat aprs liaison des
deux molcules dATP. Par contre, les changements de conformation conduisant cette
baisse daffinit ne sont pas encore lucids (figure 12).
- Lhydrolyse de lATP en ADP dstabilise le dimre de NBDs, trs probablement
cause de rpulsions lectrostatiques. Ceci contribue restaurer la Pgp son tat initial, de
nouveau prte accueillir une nouvelle molcule de mdicament.
Par contre, deux points restent clarifier :
- Lvnement qui dclenche lhydrolyse de lATP.
- La libration des deux molcules dADP est-elle suffisante pour restaurer la
Pgp son tat initial ou bien sagit-il dun processus multifactoriel ?

Figure 12. Reprsentation schmatique du mcanisme daction de la Pgp (daprs S.G.Aller
et al.
16
)
A. Le mdicament, color en rouge, est capt partir du feuillet interne de la membrane cytoplasmique, il est
li un site dans la cavit centrale de la Pgp. Deux molcules dATP (en jaune) se lient sur les deux NBDs.
B. La liaison des deux molcules dATP induit la dimrisation des NBDs et lexpulsion du mdicament.
Lhydrolyse de lATP (non-reprsente) est suivie par la restauration de la Pgp son tat initial.

24

1.5. Rle de la Pgp dans les tissus sains
- Dans les poumons : La Pgp est exprime dans la surface apicale des bronches et des
bronchioles, et sur la membrane des macrophages alvolaires. Elle participerait
llimination des toxines inhales
42
-
.
Dans lappareil digestif: La Pgp est rencontre tout au long du tube digestif, sur la
surface apicale des cellules pithliales. Elle joue un rle dans la protection de
lorganisme contre diffrentes toxines, comme les pesticides
43
et module
labsorption des mdicaments
44,45
. Elle participerait galement la protection du
tractus digestif contre les inflammations et les toxines bactriennes
46
-
.
Dans le foie : La Pgp fait partie dun grand arsenal de transporteurs de la famille des
ABC, rencontrs dans le foie
47,48
. Elle est exprime sur la surface apicale des
hpatocytes, et participe la dtoxification de lorganisme en expulsant les
xnobiotiques dans les canalicules biliaires
49,50
-
.
Dans les reins : La Pgp est trouve sur la surface apicale des cellules pithliales des
tubules proximales
11
. Elle est suppose participer lexcrtion de molcules peu
hydrophiles
51
-
.
Dans la barrire hmato-encphalique : La Pgp est exprime sur la surface luminale
des cellules de lendothlium capillaire du systme nerveux. Le rle de la Pgp dans la
protection du systme nerveux central contre les xnobiotiques (en particulier les
mdicaments) a t trs tudi
52
. Par ailleurs, des expriences ont montr leffet
dltre de labsence de la Pgp chez des souris mutes, qui devenaient beaucoup
plus sensibles aux agents neurotoxiques que les animaux normaux. Cette toxicit
touchait autant le systme nerveux central que le priphrique
53,54
. Les recherches
actuelles mettent en vidence linfluence de la Pgp dans lchec du traitement chez
certains pileptiques, en empchant les antipileptiques daccder au systme
nerveux
55
-
.
Dans le placenta : La Pgp est exprime la surface des cellules du
syncytiotrophoblaste, du ct du sang maternel
56
, o elle participe la protection du
ftus contre les agressions des xnobiotiques. En effet, les ftus danimaux muts
dpourvus de Pgp ont montr une sensibilit anormalement leve aux
xnobiotiques
57,58
.
25

1.6. La Pgp et la multichimiorsistance en clinique
1.6.1. Les mthodes de dtection
Il existe plusieurs mthodes de dtection de lexpression de la Pgp en clinique
59
- La dtection de lARNm correspondant au gne mdr1, par amplification par RT-PCR
(Reverse Transcription, Polymerase Chain Reaction), qui est la mthode de rfrence.
:
- La dtection de lexpression de la protine par immunohistochimie : lheure
actuelle, plusieurs anticorps monoclonaux sont disponibles pour la dtection de la
Pgp, sur coupes tissulaires fixes. Cette mthode est moins quantitative que la
prcdente, mais offre une meilleure vue de la distribution tissulaire de la protine.
- Limagerie in vivo, qui est une mthode non-invasive permettant dtudier, non pas
uniquement la distribution tissulaire de la Pgp, mais galement son tat fonctionnel.
Le marqueur le plus utilis lheure actuelle est le
99m
Tc-sestamibi, un complexe
organomtallique comportant un atome de techntium radioactif
60

(figure 13). Ce
complexe est transport par la Pgp, et sa concentration intracellulaire diminue dans
les cellules multichimiorsistantes. Aprs injection dune dose de ce traceur, les
techniques de tomographie par mission de photon permettent davoir une image
radiographique de laccumulation du traceur dans les tissus, qui est inversement
proportionnelle lexpression de la Pgp dans ces tissus.
Figure 13. Daprs Luker et al.
61

: image radiographique de laccumulation du
99m
Tc-
sestamibi, sans inhibiteur de la Pgp ( gauche), et avec inhibiteur (le valspodar ou PSC833,
droite).
- La cytomtrie en flux, technique particulirement utilise dans le cas des
hmopathies malignes, beaucoup moins dans les tumeurs solides. La Pgp est
dtecte au moyen danticorps coupls un fluorochrome. La quantification est
99m
Tc-sestamibi

26

ensuite ralise par comptage des cellules fluorescentes laide dun cytomtre en
flux.

1.6.2. Les implications cliniques de la multichimiorsistance
Mme sil est admis lheure actuelle que la surexpression de la Pgp et/ou des autres
transporteurs de la famille des ABC confre aux cellules in vitro une multichimiorsistance, le
rle que jouent ces transporteurs dans la mauvaise rponse des cancers rsistants est loin
dtre compris en clinique. Leffet de linhibition de ces transporteurs dans lamlioration du
rendement des traitements anticancreux reste galement confirmer.
La Pgp est rencontre dans plusieurs hmopathies malignes. On estime que le tiers des
malades souffrant de leucmie mylode aige (LMA) prsente une surexpression de la Pgp
au moment du diagnostic de la maladie, mais cette proportion dpasse la moiti des
malades en rechute. Le niveau dexpression de la Pgp augmente avec lge du patient, et
constitue un facteur de mauvais pronostic dans la LMA du patient adulte
62,63,64,65
Dans les autres hmopathies malignes, le rle de la Pgp est moins vident. Toutefois, les
autres transporteurs de la famille des ABC, comme MRP1 et LRP (Lung Resistance-related
Protein), joueraient un rle dans la multichimiorsistance des leucmies lymphodes
chroniques
.
66
Le cas de la multichimiorsistance des tumeurs solides est souvent considr comme
plus difficile tudier. Ceci est d aux contraintes techniques lies la collecte des
chantillons, leurs traitements, et puis aux mthodes dvaluation de lexpression de la
Pgp qui ne font pas consensus.
.
Une difficult supplmentaire vient du fait que la Pgp est abondamment exprime dans
certains tissus sains (rein, colon, foie et glandes corticosurrnales), ce qui rend lvaluation
de son rle dans les pathologies malignes de ces tissus encore plus difficile. La Pgp ne semble
pas tre un facteur dterminant dans la multichimiorsistance de ces tissus, qui stend
des mdicaments non-transports par cette protine.
Cest dans les tumeurs des tissus qui nexpriment la Pgp quaprs traitement, que cette
dernire semble jouer un rle certain dans le phnomne de la multichimiorsistance. Dans
le cancer du sein, il est estim que 40% des malades surexpriment la Pgp, et il existerait une
27

corrlation avec une mauvaise rponse au traitement
67
. La Pgp semble galement jouer un
rle dans la multichimiorsistance des sarcomes
68,69

.
1.7. Les inhibiteurs de la Pgp
Leonard et al.
70
, Szakacs et al.
71
et Colabufo et al.
72

dcrivent les diffrents inhibiteurs
connus de la Pgp et leur dveloppement en clinique, dans des revues datant respectivement
de 2003, 2006 et 2010.
1.7.1. Les structures
Le premier inhibiteur connu de la Pgp est le vrapamil. Son pouvoir inhibiteur a t
dcouvert dune manire fortuite en 1981
73
. Les auteurs tudiaient leffet de plusieurs
substances sur la restauration de la sensibilit des cellules rsistantes aux alcalodes
cytotoxiques de la Pervenche (la vincristine et la vinblastine). Le choix du vrapamil tait
bas sur sa capacit interagir avec des protines de transport membranaire, en particulier
celles des ions Ca
2+
. Le vrapamil sest rvl efficace en co-administration avec les
alcalodes anticancreux, mais lidentification de la Pgp comme cible na t faite quen
1987
74
Durant les annes 80, plusieurs autres molcules bioactives ont t identifies comme
inhibiteurs du transport de la Pgp : la quinidine, la quinine, le tamoxifne, la rserpine, la
ciclosporine A, la progestrone, etc. (figure 14).
en montrant que le vrapamil inhibe le photomarquage daffinit de la Pgp par la
vinblastine.
Ces inhibiteurs, connus sous le nom dinhibiteurs de premire gnration, ont en
commun le fait dtre des molcules mdicamenteuses, toxiques partir dune certaine
concentration. Ainsi, les premiers essais cliniques sur lhomme ont rvl la difficult
datteindre des concentrations plasmatiques suffisantes en inhibiteur, tout en vitant ses
effets toxiques
75,76
.
28

N
CN
H
3
CO
H
3
CO
Vrapamil
R,S
OCH
3
OCH
3
N
N
N
H
N
N
O
O
O
O
O
N
O
N
H
O
H
N
O
N
H
N
O
N
HO
O
O
Ciclosporine A
N
H
N
O
O
H
MeOOC
O
OMe
OMe
MeO
H
H
OMe Rserpine
H
O
N
Tamoxifne
Figure 14. Quelques inhibiteurs de Pgp de premire gnration.
29

Les inhibiteurs de deuxime gnration sont drivs des prcdents, conus dans le but
de diminuer leur toxicit et daugmenter leur affinit pour la Pgp (figure 15). Ainsi, le
valspodar, un analogue de la cylcosporine A synthtis en 1988
77
et sans activit
immunosuppressive, a montr une activit inhibitrice de la Pgp beaucoup plus intressante
que la ciclosporine
78
Par ailleurs, des inhibiteurs de la Pgp de type analogues de reversin 121
.
79
ont t
rcemment dvelopps par notre quipe
80
Dautres molcules ayant une structure drive ou inspire des inhibiteurs de premire
gnration ont t synthtises, citons : le S9788
.
81
, le biricodar (issu dune famille
dimmunosuppresseurs)
82
Des tudes cliniques ont t menes sur le valspodar, le biricodar et le S9788 (pour une
revue, rf.
, et des drivs de type aminoesters (apparents au vrapamil, cf.
chapitre 3, 3).
83,84
). Ces molcules ont montr une toxicit moins importante que celle des
inhibiteurs de premire gnration, et leur concentration plasmatique thrapeutique tait
accessible. Nanmoins, des interactions pharmacocintiques avec les anticancreux ont
limit leur intrt thrapeutique. Ces interactions sont dues, en partie, linhibition du
mtabolisme des anticancreux par les modulateurs de la Pgp, ce qui entrane une
augmentation non prvisible de la toxicit systmique de lanticancreux. Afin de limiter
cette toxicit, une diminution de la dose de lanticancreux sest donc avre ncessaire
avec le valspodar
85
et le biricodar
86
En effet, en plus dinhiber la Pgp, ces molcules inhibent le cytochrome P450
, ce qui a entrain une diminution de lefficacit du
traitement.
87
, une
enzyme trs implique dans le mtabolisme des mdicaments, et qui a effectivement
montr un profil daffinit, vis--vis des ligands chimiques, assez proche de celui de la Pgp
88
Dautres phnomnes peuvent jouer un rle dans ces interactions pharmacocintiques,
notamment au niveau de linhibition de lexcrtion rnale des anticancreux et de leurs
mtabolites. Ceci serait d la faible spcificit de ces inhibiteurs, car ils sont galement
capables dinhiber dautres transporteurs ABC.
.
Cette action inhibitrice contribue augmenter la concentration srique des anticancreux et
prolonger leur demi-vie, augmentant ainsi leur toxicit.
30

N
N
N
H
N
N
O
O
O
O
O
N
O
N
H
O
H
N
O
N
H
N
O
N
O
O
O
Valspodar
N
O
O
N
N
O
O
OCH
3
OCH
3
H
3
CO
Biricodar
N
H
N
COOtBu
NH
BnO
O
O
O
Bz
O
Analogue de reversin 121
N
H
N
N N
F
F
HN
S9788
Figure 15. Quelques inhibiteurs de Pgp de deuxime gnration.

La synthse dinhibiteurs de troisime gnration a t entreprise en utilisant les
mthodes de la chimie combinatoire et dtudes de relation structure-activit. Plusieurs
molcules ont vu le jour, entre autres : le zosuquidar
89
(LY335979), le OC144-093
90
et le
tariquidar
91
Ces molcules ont montr beaucoup moins dinteractions pharmacocintiques avec
dautres principes actifs ; de plus, elles ninteragissent pas avec le cytochrome P450 aux
concentrations requises pour inhiber la Pgp
90,
(XR9576) (figure 16). Elles possdent une activit inhibitrice in vitro de lordre du
nM, contrairement aux inhibiteurs de deuxime gnration qui ncessitent une
concentration de lordre du M.
92,93
Les tudes en phase I, II ou III de ces inhibiteurs sont toujours en cours, mais les rsultats
cliniques sont, malheureusement, souvent dcevants. Ainsi, une tude en phase III
regroupant 304 patients, sur le tariquidar dans le traitement du cancer du poumon en
association avec le paclitaxel ou la vinorelbine, a t interrompue en 2003 cause dune
. De ce fait, la rduction de la dose en
agent anticancreux nest pas ncessaire.
31

importante toxicit
94
. Depuis, aucune autre tude de cette ampleur na t mene sur ce
modulateur, notre connaissance. Le zosuquidar a t galement valu dans le cancer du
sein en coadministration avec la paclitaxel. Une augmentation de lhmatotoxicit de
lanticancreux a t observ, et aucune amlioration au niveau de la rponse au traitement
na t observe
95

.
N
H
N
H
N
N
OCH
3
OCH
3
O
OCH
3
OCH
3
O
Tariquidar
N
N
O N
OH
F
F
Zosuquidar
H
N
N
H
N
N
H
Me
Me
Me
Me
O
Me
OC144-093

Figure 16. Quelques inhibiteurs de Pgp de troisime gnration.

1.7.2. Mcanismes daction
La plupart des inhibiteurs de la Pgp sont des inhibiteurs comptitifs, ils entrent donc en
comptition avec les mdicaments transports sur leur site de liaison. Certains de ces
inhibiteurs sont eux-mmes transports par la Pgp, comme le vrapamil
96
et la
ciclosporine
97,98
, mais dautres ne le sont pas, comme le valspodar
99
et le zosuquidar
100
.
32

Par contre, le tariquidar bloque le transport de la vinblastine et du paclitaxel dune
manire non-comptitive
101

, ce qui suggre une liaison la protine sur un site diffrent des
sites de liaison de ces mdicaments.

1.7.3. Perspectives
A lheure actuelle, aucune des molcules inhibitrices de la Pgp na dpass le stade des
tudes cliniques. Les checs de ces molcules sont gnralement imputs leur manque de
spcificit vis--vis de la Pgp, et/ou aux interactions pharmacocintiques quelles peuvent
montrer avec dautres principes actifs.
Dautres stratgies ont t values pour inhiber la Pgp :
- Des anticorps dirigs contre les fragments extracellulaires de la Pgp ont montr une
activit inhibitrice in vitro par augmentation de laccumulation intracellulaire de
mdicaments transports par la Pgp
102
. Une autre tude a valu limmunisation de
la souris par des fragments peptidiques synthtiques correspondant aux boucles
extracellulaires 1,2 et 4 de la Pgp. Les animaux pralablement immuniss ont alors
montr une moindre chimiorsistance et un taux de survie plus important
103
- Des peptides synthtiques analogues aux fragments transmembranaires de la Pgp
ont montr un important pouvoir inhibiteur, et une faible toxicit. Le mcanisme
daction suppos pour ce type dagents thrapeutiques serait une interfrence
strique spcifique lors du repliement de la protine empchant son
fonctionnement
.
104
- Plusieurs tudes ont montr que lencapsulation dagents anticancreux amliorait
leur accumulation intracellulaire. Ainsi, ladministration de la doxorubicine
encapsule dans des liposomes PEGyls, associe au valspodar comme inhibiteur de
la Pgp, amliore la rponse au traitement in vivo chez des souris xnogreffes avec
des tumeurs multichimiorsistantes
.
105
. Une tude plus rcente a montr que
lutilisation de liposomes coupls la transferrine (qui permet aux liposomes de
cibler les cellules tumorales surexprimant, en gnral, le rcepteur de la transferrine)
permet damliorer significativement laccumulation de la doxorubicine dans les
cellules rsistantes, in vitro
106
.
33

2. Le transporteur CpABC3
Le Cryptosporidium parvum est un parasite unicellulaire de lhomme et des animaux, de
lembranchement des Apicomplexa. Cest un parasite dveloppement intracellulaire, qui
colonise les cellules pithliales des intestins. Il provoque la cryptosporidiose, caractrise
par des diarrhes et des gastroentrites gnralement anodines. Toutefois, chez lenfant en
bas ge, et surtout chez lindividu immunodprim, linfection peut se dvelopper et devenir
grave, voire mortelle
107
A lheure actuelle, il nexiste pas de traitement efficace contre C.parvum
. La contamination est fco-orale, partir deau et de nourriture
contenant les oocystes du parasite (stade extracellulaire du parasite pouvant rester viable
plusieurs mois). La contamination des rservoirs deau potable peut conduire des
pidmies, et des diarrhes no-natales graves chez les ruminants.
108
. En effet, de
nombreux antimicrobiens et antiparasitaires se sont rvls inefficaces pour traiter la
cryptosporidiose. Cependant, certains antibiotiques permettent de diminuer la charge
parasitaire (paromomycine, clarithromycine, nitazoxanide)
109
Paromomycine
Nitazoxanide
O
HO
HO
HO
NH
2
H
2
N NH
2
O O
OH
O
HO
O
OH
NH
2
H
2
N
OH
H
H
OH
H
S
N
O
2
N
NH
O
AcO
O
O
Me
OH
HO
Me
Et
Me
O
O
Me
Me
O
OMe
O Me
NMe
2
O
H
Me
OH
OMe
Me
H
HO
Clarithromycine
(figure 17).
Figure 17. Antibiotiques utiliss pour le traitement de la cryptosporidiose

34

Des protines de transport de la famille ABC ont t retrouves chez plusieurs
protozoaires (Plasmodium, Leishmania, Trypanosomes, Entamoeba, Trichomonas,
Cryptosporidium). On suspecte limplication de certaines dentre elles dans la rsistance des
parasites divers traitements : chez Plasmodium falciparum et Leishmania entre autres.
Chez C. parvum
110,111
- CpABC1, localise dans les sporozotes et les stades intracellulaires, suppose
jouer un rle dans les interactions mtaboliques entre hte et parasite ;
, deux protines de transport ABC ont t tudies, CpABC1 et 2,
analogues des transporteurs MRP chez lhomme, ainsi que le gne dune troisime CpABC3,
apparente la glycoprotine-P :
- CpABC2, localise dans la pointe apicale des sporozotes, non dtecte dans les
stades intracellulaires, suppose jouer un rle dans linvasion et/ou les premiers
stades du trophozote ;
- CpABC3 (gene accession number AF315509), protine denviron 1394 acides
amins, non dtecte jusqu prsent dans les sporozotes mais exprime dans
les stades intracellulaires. Ce transporteur est constitu, linstar de la Pgp, de
deux domaines transmembranaires TMD1 et TMD2, et de deux domaines
cytosoliques, liant lATP, NBD1 et NBD2
112
LADN gnomique de ce pathogne a t utilis pour lamplification de la squence
voulue de CpABC3. Ce travail a t ralis par le Dr Philippe LAWTON du laboratoire de
Parasitologie de la Facult de Pharmacie de Lyon. La squence a t exprime chez E. coli
sous forme dune protine recombinante marque par une squence hexahistidine N-
terminale. Le fragment H6-NBD1 comprend le site catalytique pour lATP appel NBD1
(Nucleotide-Binding Domain 1) de la CpABC3, soit 198 AA. Il a t montr quil tait
pleinement fonctionnel vis--vis des ligands dcrits pour ce type de fragment : 2,3-O-(2,4,6-
trinitrophnyl)adnosine 5-triphosphate (TNP-ATP), querctine, progestrone
.
113
. Les
constantes cintiques pour les trois substrats ATP, ADP et AMP ont t dtermines, ainsi
que la constante dinhibition Ki pour le TNP-ATP. Les tests dinhibition de fluorescence,
combins la dtermination de lactivit ATPasique, peuvent indiquer si une molcule se lie
au site catalytique, proximit, ou sur une autre partie du H6-NBD1. Ce fragment
recombinant peut donc constituer un modle valable pour valuer leffet inhibiteur de
35

ligands potentiels du site ATP prsent notamment chez les transporteurs ABC humains, en
particulier la Pgp.

Chapitre 2 : Synthse dimidazo[4,5-b]pyridin-7-ones
36

CHAPITRE 2
Conception et synthse de drivs
dimidazo[4,5-b]pyridin-7-one

37

Dans le cadre de notre recherche concernant les inhibiteurs potentiels des transporteurs
membranaires de la famille des ABC, nous nous sommes intresss des structures de type
imidazo[4,5-b]pyridin-7-ones qui peuvent tre considres comme des analogues dadnine
(figure 18).
N
H
N
H
N
O
N
N
H
N
OH
N
N
N
H
N
NH
2
Adnine
Imidazo[4,5-b]pyridin-7-one
1
2
3
4
5
6
7

Figure 18

Ces composs sont susceptibles dinhiber le fonctionnement du transporteur, en
antagonisant la liaison de lATP sur son site, et ainsi, en empchant la production dnergie
ncessaire la protine.
1. Les inhibiteurs dATPases
Les protines activit ATPasique sont trs nombreuses dans lorganisme. Elles assurent
des tches qui ne sont thermodynamiquement possibles que si elles sont couples
lhydrolyse de lATP qui constitue la source dnergie pour ces protines.
Malgr leur grande diversit fonctionnelle, le domaine de ces protines liant lATP a la
particularit dtre bien conserv. A lheure actuelle, il est admis que la liaison entre lATP et
son rcepteur rsulte principalement de linteraction des groupements phosphates de lATP
avec le motif Walker A de la protine (cf figure 3). Ceci constitue un dfi pour les
pharmacochimistes qui souhaitent synthtiser des inhibiteurs dATPases. En effet, les
groupements poly-phosphates ne peuvent pas tre incorpors dans des structures
mdicamenteuses en raison de leur instabilit dans les milieux biologiques, ce qui diminue la
biodisponibilit du principe actif. Cette absence de groupements phosphates peut
cependant tre compense par un htrocycle analogue dadnine conu pour avoir la plus
forte affinit possible vis--vis du site ATP.
Chez les ATPases connues, il a t montr que trs peu de liaisons hydrogne se
formaient entre ladnine et le site ATP
114
; par contre, ladnine semble mettre en place
38

des interactions hydrophobes avec les rsidus dacides amins chanes latrales
aromatiques, qui se trouvent proximit de ce site. Par ailleurs, chez certaines ATPases, le
site de liaison ladnine est souvent adjacent des poches hydrophobes qui restent
inoccupes lors de la liaison de lATP. De nouveaux inhibiteurs plus affins et plus slectifs
pourraient donc tre conus prsentant un noyau central analogue de ladnine et des
chanes latrales capables de se lier ces poches
115
La plupart des inhibiteurs dATPases utiliss en thrapie ne sont pas des inhibiteurs
comptitifs de lATP, mais inhibent laction de la protine en se liant sur dautres sites : cest
le cas, par exemple, de la digoxine (htroside cardiotonique) qui inhibe la pompe
Na
+
/K
+
ATPase, ou de lomprazole (antiacide gastrique) qui inhibe la pompe H
+
/K
+
ATPase.
Rcemment, des inhibiteurs comptitifs du site de lATP ont t conus pour certaines
ATPases : par exemple, le driv dindazole 3,4-disubstitu prsent dans la figure 19 qui a
t conu in silico puis synthtis par Boehm et al.
.
116
N
NH
S
O O
O O
OH
N
H
O
OH
O O
OH
O
O
O
NH
2
Novobiocine
Indazole 3,4-disubstitu
. Ce compos a montr une activit
inhibitrice vis--vis de lADN-gyrase bactrienne dix fois plus leve que la novobiocine.

Figure 19. Inhibiteurs de lADN-gyrase.

Dans le cas des transporteurs ABC, bien que beaucoup dinhibiteurs modulent lactivit
ATPasique de la protine, cette modulation est attribue des interactions allostriques
plutt qu une liaison avec le site ATP. Les seuls inhibiteurs de lactivit ATPasique de la
Pgp, connus pour avoir une liaison comptitive sur le site de lATP, sont certains flavonodes
(cf. chapitre 1, 1.3.3.). De ce fait, il parat important dexplorer la possibilit de dvelopper
des inhibiteurs comptitifs du site de lATP des transporteurs de la famille des ABC, tant
donn que cest une stratgie qui na pas encore t suffisamment explore.
39

2. Bibliographie concernant la synthse des
imidazo[4,5-b]pyridines

La famille des imidazo[4,5-b]pyridines est constitue de molcules activits biologiques
trs varies. Ces composs sont des 1-deazapurines, et ont t dvelopps lorigine
comme analogue de bases puriques dans lobjectif dinterfrer avec le mtabolisme de ces
bases dans les bactries et les virus
117
La synthse des imidazo[4,5-b]pyridines peut senvisager selon deux approches
diffrentes : partir dimidazoles avec construction du noyau pyridine, ou partir de
pyridines diamines avec construction du cycle imidazole :
. La structure imidazo[4,5-b]pyridine a t choisie par
notre laboratoire comme plateforme pour dvelopper des analogues dadnosine,
susceptibles dinhiber lactivit ATPasique de transporteurs transmembranaires tels que
CpABC3 et la glycoprotine-P.
N
N
N
N
N
N
5
6
7
N
N

Figure 20

2.1. Synthse du noyau imidazo[4,5-b]pyridine
2.1.1. Synthses partir du noyau imidazole
-
Tennant et al.
partir du 5-chloro-4-nitroimidazole

118
ont dcrit une synthse de N-hydroxyimidazo[4,5-b]pyridin-7-ones
partir du 5-chloro-4-nitroimidazole
119
. Aprs substitution nuclophile aromatique de latome
40

de chlore par un groupement nitrile, le chlorure dacide (1) est synthtis. La raction
dacylation en prsence dun nolate de magnsium de -cto-ester, suivie de la cyclisation
par hydrognation catalytique de limidazole dictoester intermdiairement obtenu, permet
daccder avec un bon rendement la N-hydroxyimidazo[4,5-b]pyridinone (2).

N
N
X
NO
2
R
2
R
1
N
N
N
R
2
R
1
O O
OEt
R
3
OH
N
N
COCl
NO
2
R
2
R
1
R
3
OEt
O O
iv
v
i: X=Cl X=CN
ii:X=CN X=COOH
iii: X=COOH X=COCl
i: KCN, cat.KI, EtOH, A; ii: H
2
SO
4
(aq), A, puis NaNO
2
; iii: SOCl
2
, A;
iv: Mg(OEt)
2
, ether, A; v:H
2
, Pd/C, EtOH, TA
R
1
=Me, Et
R
2
=H, Me
(1)
(2)
R
3
=Me, Ph
N
N
R
2
R
1
HO
O
OEt
O
R
3
NO
2
Schma 1

Aprs rduction du driv N-hydroxy (2), le groupement ester peut tre limin par
saponification et dcarboxylation thermique.
N
N
N
R
2
R
1
O O
OEt
R
3
N
N
N
H
R
2
R
1
O O
OEt
R
3
N
N
N
H
R
2
R
1
O
R
3
i: Na
2
S
2
O
4,
EtOH, H
2
O, A; ii: NaOH (aq), A; iii: A
ii,iii
i
OH
(2)
Schma 2

-
Des imidazo[4,5-b]pyridin-7-ones possdant une fonction ester ou acide en position 6
ont galement pu tre obtenues par cyclisation acido-catalyse des imidazoles (3)
partir de 5-aminoimidazole
120,121
:
41

CO
2
Et
CO
2
Et
EtO
A
N
H
N
N
R
O O
N
N
H
2
N
R
N
N
N
H
R
EtO
2
C
CO
2
Et
(3)
H
2
SO
4
conc. / Ac
2
O
EtO

Schma 3

Une cyclisation en milieu basique est galement possible, partir dadduits dicyano. Ceci
conduit des imidazo[4,5-b]pyridines possdant une fonction amine en position 5
122
N
N
H
2
N
R
1
R
2
N
N
H
2
N
R
1
R
2
NC
CN
N
N
N
R
1
R
2
NC
H
2
N
N
N
O
2
N
R
1
R
2
i ii
iii
i:H
2,
Pd/C, dioxane; ii:EtOCH=C(CN)
2
; iii: NaOH, MeOH/H
2
O, A
:

Schma 4

Lintermdiaire de type 5-aminoimidazole peut galement tre prpar partir de
linosine en milieu lgrement basique, aprs protection de lazote en position 1
123
. Une
substitution nuclophile par lanion de lactonitrile sur lamide (4), suivie dune cyclisation
en milieu basique par attaque nuclophile du groupement nitrile par le groupement amino,
permet daccder la dazaguanosine (5)
124
N
NH
N
N
O
R
NH
2
NH
2
N
N
O
R
NH
2
CH
2
CN
N
N
O
R
N
H
N
N
O
R
NH
2
O
OH
HO
HO
EtOH, 90C
R=
Inosine (4) (5)
Na
2
CO
3
:

Schma 5

2.1.2. Synthses partir de pyridines
-
La mthode la plus couramment utilise consiste construire le cycle imidazole par
cyclisation de la 2,3-diaminopyridine, commerciale, en prsence dun acide carboxylique
partir de la 2,3-diaminopyridine
125
.
42

La raction peut tre active par les microondes
126
ou mene dans lacide polyphosphorique
utilis comme solvant
127
La nature de lacide carboxylique utilis dtermine la nature du substituant en position 2
du noyau imidazopyridine. Cette mthode a permis la synthse dun large ventail de
drivs substitus en 2.
.
N
NH
2
NH
2
N
N
N
H
R
R-COOH
Acide poly-
phosphorique

Schma 6

Lacide carboxylique peut galement tre remplac par lorthoester en excs, la
cyclisation seffectuant en prsence dun acide (HCl ou pTSOH) chaud. Cette voie peut tre
illustre par la synthse rgioslective dimidazopyridines N-alkyles dcrite par Khanna et
al.
128
N
NH
2
NH
2
N
N
NH
2
ArCHO NaBH
4
N
NH
NH
2
2
3
4
5
6
1
N
N
N pTsOH
90C
1
2
3
4
5
6
7
Ar Ar
Ar
(6)
HC(OEt)
3
. En outre, ces auteurs proposent de pallier le problme de rgioslectivit de la N-
alkylation des imidazo[4,5-b]pyridines en alkylant demble la diaminopyridine. Du fait de la
plus grande basicit de lamine en position 3, le traitement de la 2,3-diaminopyridine par le
benzaldhyde conduit trs majoritairement limine (6). La rduction, suivie de la cyclisation
en prsence dorthoformiate dthyle, permet dobtenir limidazopyridine N1-substitue :

Schma 7

Une dernire variante consiste faire ragir une diaminopyridine avec un aldhyde, puis
procder une cyclisation dans des conditions oxydantes
129
N
NH
2
NH
2
CHO
R'
R
N
N
N
H
R'
100C
R
Na
2
S
2
O
5,
DMF
:

Schma 8

43

-
Gnralement, la 2-chloro-3-nitropyridine, trs lectrophile, est mise en uvre dans une
raction de substitution nuclophile aromatique pour remplacer, dans des conditions
douces, latome de chlore par un groupement amino. Le groupement NO
2
est ensuite rduit
en amine :
partir de la 2-chloro-3-nitropyridine
ArCH
2
NH
2
N Cl
NO
2
DMF, A, 1h
N
NO
2
N
NH
2
Ni Raney
N
H
Ar N
H
Ar
CH
3
OH
Na
2
CO
3
H
2

Schma 9

La cyclisation finale est ralise par couplage un isothiocyanate suivie par une
cyclodsulfuration en prsence doxyde de mercure dans le THF
130
N
N
N
NH
N
NH
N
H
RNCS
THF, A
N
NH
2
NH S
R
R
Ar
N
H
Ar
3
Ar
HgO, S

:

Schma 10

A linstar de la mthode de Khanna et al.
128
, cette mthode met en uvre une
diaminopyridine rgioslectivement N-alkyle avant de raliser la cyclisation.
Trs rcemment, Salom et al.
131
ont dcrit une mthode daccs direct toute une srie
dimidazo[4,5-b]pyridines diversement substitues partir de 2-chloro-3-nitropyridine.
Ltape cl de cette squence ractionnelle est une amidation directe pallado-catalyse en
prsence damides primaires, secondaires ou cycliques, dcrite par Buchwald et al.
132
.
Schma 11
44

2.2. Synthses dimidazo[4,5-b]pyridin-7-ones partir
dimidazo[4,5-b]pyridines
2.2.1. partir dun groupement NO
2
en position 7
Lintroduction dun groupement nitro en position 7 de limidazopyridine ncessite une
oxydation pralable de lazote pyridinique.

Antonini et al.
133
N
N
H
N
N
N
H
N
O
N
N
H
N
O
HNO
3
CF
3
CO
2
H
NO
2
H
2
O
2
ont ralis la nitration de
limidazopyridine N4-oxyde en prsence dacide nitrique dans lacide trifluoroactique avec
un bon rendement de 75% :

Schma 12

Par la suite, la rduction de NO
2
et du N-oxyde pourrait senvisager par hydrognation
catalytique, fournissant lamine qui conduirait la fonction hydroxy par diazotation, en
suivant lexemple dcrit par Leroy et al.
134
N
O
NO
2
H
2,
Pd/C
AcOH
N
NH
2
N
NH
2
NaNO
2,
HCl
H
2
O
N
OH
CO
2
H CO
2
H CH
2
OH
CH
2
OH
propos de la pyridine :

Schma 13

2.2.2. partir dun chlore en position 7
Loxydation de limidazopyridine en position 4 dirige la chloration par POCl
3

majoritairement vers la position 7 du noyau (sachant que le driv 5-chloro est souvent
obtenu en mlange)
135
.
45

N
N
N
CH
3
mCPBA
N
N
N
CH
3
O
N
N
N
CH
3
Cl
POCl
3
+
N
N
N
CH
3
Cl
40,5% 12,5%
7
5
4

Schma 14

partir du driv chlor, plusieurs mthodes peuvent tre utilises pour accder au
noyau pyridinone. La substitution de Cl par OH peut senvisager :
- en milieu basique
136
N
Cl
O
KOH, H
2
O
A, 16h
N
OH
O
30%
:

Schma 15

- ou en milieu acide
137
N
N
O
N
OH
N
O
O
NHBoc
N
Cl
CF
3
CO
2
H
24h
63%
:

Schma 16

La prsence du chlorure offre galement la possibilit deffectuer une substitution
nuclophile aromatique. Ainsi, un groupement benzyloxy a pu tre introduit, avec des
rendements nanmoins modestes. Lhydrognolyse du benzyloxy permet daccder au
noyau imidazopyridinone (ici une dazaguanine)
138
(schma 17).
46

N
N
N
Cl
N
N
N
O
N
H
N
N
O
BnONa
BnOH
110C
H
2
Pd/C
N
H
O
O
Et
H
2
N
OH OH
O
HO
H
2
N
OH OH
O
HO
OH OH
O
HO

Schma 17

Une deuxime mthode consiste passer du driv chlor au driv mthoxyl,
galement par substitution nuclophile aromatique
139
. Cela a permis daccder la
pyridinone en prsence dun agent dmthylant, comme liodure de trimthylsilyle
140
N
OCH
3
N
H
O
Me
3
SiI
CH
3
CN, A
80%
NH
2
CN CN
NH
2
:

Schma 18

3. Travaux personnels : Synthse et valuation des drivs
polysubstitus dimidazo[4,5-b]pyridin-7-one
La structure gnrale de nos molcules cibles est la suivante :
N
N
N
R
1
R
2
R
3
1
2
3
3a
4
5
6
7
7a
N
N
N
R
1
R
2
R
3
1
2
3
3a
4
5
6
7
7a
ou
(I) (II)
O O

Figure 21

Une analyse rtrosynthtique nous a amen envisager une stratgie de synthse via un
intermdiaire cl (III) de type 7-chloroimidazo[4,5-b]pyridine N-alkyl en position 1 ou 3.
Latome de chlore en position 7 pourra nous permettre dintroduire la fonction oxo afin
47

dobtenir limidazo[4,5-b]pyridin-7-one (IV). Enfin, les molcules cibles (V) seront prpares
par N-alkylation de (IV) en position 4 :

Figure 22

3.1. Synthse des drivs 7-chloroimidazo[4,5-b]pyridine (III)
3.1.1. Synthse des drivs N-oxydes (9) et (10)
La cyclisation de la 2,3-diaminopyridine en prsence dorthoformiate dthyle ou
dorthoactate dthyle, suivie dun traitement en prsence de lacide chlorhydrique
concentr chaud, a permis dobtenir les imidazo[4,5-b]pyridines (7)
133
et (8)
141
N
NH
2
NH
2
N
N
N
H
1) RC(OEt)
3
, 3h30, A
2) HCl 37%, 1h, A
R
(7) R=H (74%)
(8) R=CH
3
(78%)
avec des
rendements respectifs de 74% et 78% aprs purification.

Schma 19

Conformment au schma rtrosynthtique, ces deux composs ont t oxyds par le
mCPBA, selon la mthode de Ochiai
142

, pour donner respectivement la 3H-imidazo[4,5-
b]pyridine-4-oxyde (9)
135
et la 2-mthyl-3H-imidazo[4,5-b]pyridine-4-oxyde (10).
48

N
N
H
N
N
N
H
N
O
R R
mCPBA (90%)
TA, 3h30
solvant
(9) R=H, solvant=AcOH (75%)
(10) R=CH
3,
solvant=CHCl
3
(70%)

Schma 20

Les premiers essais doxydation mens avec un lot commercial dacide mta-
chloroperbenzoque (75 %m. de puret) nont conduit qu de faibles rendements. Une
purification pralable du peracide sest avre ncessaire pour obtenir des rsultats
satisfaisants et reproductibles. Cette purification a consist laver une solution de mCPBA
dans le chloroforme avec un tampon phosphate 0,1M (KH
2
PO
4
/K
2
HPO
4
, pH 7,5), puis, aprs
schage sur Na
2
SO
4
anhydre et filtration, dvaporer la phase chloroforme sous pression
rduite et froid. La puret du peracide ainsi obtenu est dtermine par titrage
iodomtrique 90 %m.
143
Du fait de son insolubilit dans AcOH, le compos (9) a pu facilement tre extrait du
milieu ractionnel par simple filtration. Par contre, le driv N-oxyde (10), soluble en milieu
acide actique, a t prpar dans le chloroforme et purifi par chromatographie sur
colonne de silice afin dliminer lacide mta-chlorobenzoque form.
.

3.1.2. Etude de la rgioslectivit de la N-benzylation des composs (9) et (10)
ce stade, les imidazopyridines N4-oxydes (9) et (10) ont t N-benzyles dans les
conditions classiques de substitution nuclophile utilisant K
2
CO
3
anhydre dans le DMF pour
gnrer les anions correspondants (9) et (10)
144,145
. Quel que soit lagent alkylant mis en
uvre (BnBr ou BnI), la raction a conduit un mlange de deux rgioisomres N1 et N3
facilement sparables par chromatographie sur colonne de silice (schma 21 et tableau 1). Il
est intressant de noter que, dans les deux cas (R=H et R=CH
3
), les isomres N1 se sont
systmatiquement rvls les plus polaires sur gel de silice
146,147
et quils ont montr les
points de fusion les plus levs (cf. partie exprimentale), par rapport aux isomres N3.
49

Schma 21

Tableau 1. Rsultats obtenus lors de la N-benzylation des composs (9) et (10) dans les
conditions dcrites dans le schma 21.
entre R PhCH
2
X Temps
de raction
N-1/N-3 ratio
a

[%:%]
Rdt [%]
b

1 H PhCH
2
Br 20 h N1-(11):N3-(11) 60:40 86
2 H PhCH
2
I 4 h N1-(11):N3-(11) 70:30 84
3 CH
3
PhCH
2
Br 20 h N1-(12):N3-(12) 40:60 60
4 CH
3
PhCH
2
I 4 h N1-(12):N3-(12) 30:70 100
a
N-1/N-3 ratios ont t dtermins aprs purification et tude de la structure des
rgioisomres par RMN
1
H.
b
Rendements isols globaux.

La structure des rgioisomres N1-(11) et N3-(11) a t dtermine par exprience RMN
de type NOE-diffrence. Comme le montre la figure 23, lirradiation des signaux
correspondants aux protons NCH
2
provoque un effet NOE sur le proton H7 pour N1-(11) et
sur le proton H5 pour N3-(11).

50

N
N
N
O
H
H
H
H
7
2
7,92%
11,54%
N
N
N
5
O
1,46%
4,10%
H
H
H
N1-(11)
N3-(11)

Figure 23. Dtermination de la structure des rgioisomres N1-(11) et N3-(11) par
expriences de
1
H-RMN NOE-diffrence. Irradiation du signal du NCH
2
o=5,54 ppm pour
N1-(11) et o=5,72 ppm pour N3-(11).

Une fois la rgioslectivit de la N-benzylation tablie sans ambigit en srie R=H, il est
apparu que la comparaison des spectres RMN
1
H permettait de dterminer facilement la
structure de chacun des rgioisomres N1 et N3 (tableau 2).

Tableau 2. Attributions en RMN
1
H des rgioisomres N1,N3-(11) et N1,N3-(12) synthtiss
selon le schma 21.
H N1-(11)
a
N3-(11)
a
Ao N1-(12)
a
N3-(12)
a
Ao
H-2 8,64 (s) 8,37 (s) - -
CH
3
- - 2,55 (s) 2,58 (s)
H-5 8,20 (d) 8,39 (d) 8,12 (d) 8,17 (d)
H-6 7,21 (dd) 7,17 (dd) 6,98 (dd) 7,03 (dd)
H-7 7,60 (d) 8,32 (d) -0.72 7,55 (d) 8,04 (d) -0.49
N-CH
2
5,54 (s) 5,72 (s) -0.18 5,53 (s) 5,67 (s) -0.14
a
Spectres RMN
1
H enregistrs 300MHz dans le DMSO-d
6
23C. Les dplacements
chimiques sont reports en partie pour million (ppm). La multiplicit est donne entre
parenthses (constantes de couplage [J] en Hertz sont dcrites dans la partie
exprimentale).

En effet, les signaux des protons H7 et NCH
2
des isomres en srie N1 sont
significativement blinds par rapport aux mmes protons en srie N3 : Ao=-0,72 ou -0,49
pour H7 et Ao=-0,18 ou -0,14 pour NCH
2
.
51

Il est connu que la N-alkylation des imidazo[4,5-b]pyridines aboutit la formation
prfrentielle du rgioisomre N3
117,128,148
Pour rationaliser ces rsultats exprimentaux, nous avons sollicit le Dr Julien Pilm du
Laboratoire de Chimie Physique de la Facult de Pharmacie de Lyon
. Notre tude a, quant elle, montr que, quel
que soit lagent alkylant employ, la N--benzylation du driv 4-oxyde (11) conduisait
majoritairement lisomre N1 (tableau 1, entres 1 et 2) avec, certes, une faible
rgioslectivit
135
. Par contre, dans le cas du driv 4-oxyde (12) mthyl en position 2, nous
avons observ une inversion de rgioslectivit (tableau 1, entres 3 et 4). Enfin, de manire
prvisible, lutilisation de liodure de benzyle comme agent alkylant a permis une diminution
significative du temps de raction et une lgre amlioration de la rgioslectivit (tableau
1, entres 2 et 4).
i
Dans un premier temps, ces calculs, en phase gaz ou solvant, ont montr quun
mcanisme S
N
2 impliquant une approche directe de lhalognure de benzyle restait
nergtiquement favoris (stabilisation nergtique denviron 30 kcal/mol) par rapport un
mcanisme S
N
1 qui implique la formation dun carbocation benzyle.
pour une tude
thorique du mcanisme concernant cette raction de N-benzylation. Les calculs ont t
effectus au niveau ab initio par la Thorie de la Fonctionnelle de la Densit ou DFT (B3LYP)
afin de dterminer prcisment les paramtres nergtiques et structuraux des composs
impliqus dans les processus ractifs.
Lutilisation dun modle de continuum polarisable (PCM) a ensuite mis en vidence
quun milieu polaire (DMF, c=38) stabilisait plus les isomres N1 que les isomres N3
(diffrence de 3 kcal/mol). En effet, dans le cas des deux drivs 4-oxyde (9) et (10),
lanalyse des facteurs lectroniques (charges atomiques et polarisations dipolaires locales
des azotes N1 et N3) a montr quils favorisaient lattaque nuclophile en position N1.
Lazote N1 des anions solvats (9) et (10) sest rvl plus charg que lazote N3 (-0,94e vs
-0,90e). Par ailleurs, il existe une forte interaction rpulsive O
-
X
-
qui dfavorise lattaque
nuclophile en N3.

i
Situation lpoque o ces travaux ont t effectus, depuis le Dr J. Pilm a rejoint lUniversit Paris VI.
52

Cependant, la rgioslectivit N1/N3 dpend essentiellement de la stabilit relative des
tats de transition impliqus dans le mcanisme S
N
2. Cette analyse a permis de mettre en
vidence que les nergies dtat de transition dpendaient de la nature du groupement en
position 2 en phase gaz ou solvant. Les calculs effectus en phase solvant sont apparus en
bon accord avec nos rsultats exprimentaux et avec les donnes de la littrature qui
voquent un contrle strique de la rgioslectivit des N-alkylations des systmes
htrocycliques azots
149
Loptimisation de la gomtrie des tats de transitions a montr que le noyau aromatique
de lhalognure de benzyle se positionne toujours perpendiculairement au plan de
limidazopyridine N4-oxyde (figure 24).
. En effet, dans le cas o R=H, ltat de transition de N1-(11) est
apparu trs lgrement favoris par rapport une approche en N3, et ceci quel que soit
lhalogne utilis. Par contre, le groupement mthyle provoque une interaction strique
supplmentaire avec le groupement benzyle abaissant ainsi le niveau dnergie de ltat de
transition de N3-(12) par rapport celui de N1-(12).
- Pour R=H :
-
une interaction rpulsive X
-.
O
-
--N
+
entre lhalogne partant et loxygne
du N-oxyde en position 4 tend globalement lgrement dfavoriser une approche en N3,
orientant ainsi la raction vers la formation du produit N1 (figures 24-A et 24-B).
Pour R=CH
3
: le groupement mthyle en position 2 exerce une gne strique sur le
phnyle lors dune approche en N1 de lhalognure de benzyle (figure 24-C). Ceci favorise la
formation du produit N3 malgr la rpulsion X
-.
O
-
--N
+
toujours prsente dans ltat de
transition N3 (figure 24-D).
53

Figure 24. Structures optimises par B3LYP des tats de transition impliqus dans la N-
benzylation des drivs (9) et (10). A : N1-(11) ; B : N3-(11) ; C : N1-(12) ; D : N3-(12).

Cette tude de la rgioslectivit de la N-benzylation de drivs dimidazo[4,5-b]pyridine-
4-oxyde a fait lobjet dune publication dans Tetrahedron Letters en 2009
150

.

3.1.3. Chloration des drivs N4-oxyde benzyls N1-(11) et N3-(11)
La synthse a t poursuivie sur les imidazopyridine-4-oxydes N1-benzyls prsentant un
atome dhydrogne en position 2.
La chloration de la molcule N1-(11) par POCl
3
, reflux dans le chloroforme, a conduit
trs majoritairement lisomre (13) chlor en 7 avec un excellent rendement de 95% aprs
purification par chromatographie sur gel de silice
135
. Lanalyse par RMN
1
H des autres
fractions de colonne na montr que des traces de lisomre (13) chlor en position 5
(schma 22).
54

N
N
N
O
Ph
N
N
N
Ph Cl
Tamis 4A, 50C, 19h
7
POCl
3,
CHCl
3
N
N
N
O Ph
Tamis 4A, 50C, 19h
N1-(11)
N3-(11)
(13) 95%
N
N
N
Ph (14)
POCl
3,
CHCl
3
70%
N
N
N
Ph
(13') traces
5
+
Cl

Schma 22

La structure du rgioisomre (13) a t dtermine par comparaison de son spectre
RMN
1
H avec celui de son prcurseur N1-(11). Cette analyse met en vidence que le proton
H5, qui est toujours le plus dblind des protons pyridiniques, est encore prsent dans le
spectre du compos (13) sous la forme dun doublet 8,37 ppm prsentant une constante
de couplage de 5,3 Hz, valeur caractristique dun
3
J
HH
entre les protons H5 et H6.
N
N
N
O
Ph
N
N
N
Ph Cl
7
7
N1-(11)
(13)
H
H
6
5
3
J
HH
=5,3Hz
o=8,37ppm
H
H
H
6
5
3
J
HH
=6,3Hz
o=8,20ppm
3
J
HH
=8,3Hz
o=7,60ppm
N
N
N
Ph
7
(13')
H
Cl
6
5
H
o=8,07ppm
3
J
HH
=8,5Hz

Figure 25

La structure de lisomre (13), quant elle, a t confirme par la prsence dun doublet
plus grand (
3
J
6,7
= 8,5 Hz) attribu au proton H7 8,07 ppm.
trangement, la raction de chloration mene dans les mmes conditions sur le
rgioisomre N3-(11) na conduit qu la rduction du groupement N-oxyde pour obtenir la
3-benzylimidazo[4,5-b]pyridine (14) avec un rendement de 70%.
55

Nous avons alors dcid de poursuivre la synthse des imidazo[4,5-b]pyridin-7-ones (IV)
partir du driv chlor (13).
3.2. Synthse des imidazo[4,5-b]pyridin-7-ones (V)
3.2.1. Synthse de limidazo[4,5-b]pyridin-7-one (15)
Dans un premier temps, nous avons cherch synthtiser limidazopyridinone (15) par
hydrolyse directe du driv chlor (13) en milieu acide chlorhydrique concentr aqueux.
Cette mthode nous a permis dobtenir le compos (15) avec un rendement moyen de 52%
aprs un reflux dune semaine.
N
N
N
Ph Cl
N
H
N
N
Ph O
A ,7 jours
(15)
(13)
52%
HCl conc.
H
2
O

Schma 23

Malheureusement, un meilleur rendement na pas pu tre obtenu en utilisant une
solution mthanolique de HCl
151
N
Cl
MeO
2
C OBn
H
3
C OH
Cl
N
O
MeO
2
C OBn
CH
3
Cl
H
H
CH
3
Cl
N
OH
MeO
2
C OBn
CH
3
OH
HCl
CH
3
OCH
3
. Le mcanisme de cette raction repose sur une
substitution nuclophile aromatique de latome de chlore par le mthanol suivie dune
attaque S
N
2 dun ion chlorure sur le mthyl du groupe OCH
3
qui conduit finalement
lhydroxypyridine et au chloromthane (qui ragit directement avec le mthanol en excs
pour donner du dimthylther) (schma 24).

Schma 24. Mcanisme dhydrolyse dune chloropyridine par MeOH/HCl
151
.

56

Par analogie, nous avons dvelopp une squence en deux tapes pour synthtiser
limidazopyridinone (15) partir du driv chlor (13) via lintermdiaire mthoxyl (16). Le
driv chlor (13) a donc t soumis une raction de substitution nuclophile aromatique,
en prsence du mthanolate de sodium. La raction a conduit un unique produit
mthoxyl (16) avec un excellent rendement de 82% aprs purification.

N
N
N
Ph Cl
N
N
N
Ph OCH
3
A ,48h
(16)
(13)
82%
MeONa
MeOH

Schma 25

La position du groupement benzyle a alors t confirme par NOE-diffrence :
N
N
N
H
H
O
H
3
C
H
3,6%
0,51%
6
7
0,19%
(16)

Figure 26. NOE-diffrence sur le compos (16) aprs irradiation du CH
3
o = 3,92 ppm.

La dmthylation du produit (16) a ensuite t ralise par attaque nuclophile dun
thiolate sur le groupement CH
3
. Des ractions prliminaires ont t menes au laboratoire
utilisant lthanethiolate de sodium comme agent nuclophile
152
conduisant
limidazopyridin-7-one (15) en 3 heures avec un rendement de 90%. Cependant, en raison
des nuisances olfactives inhrentes lutilisation de ce ractif, nous avons men la
dmthylation en prsence du dianion de lacide thioglycolique pour aboutir au mme
compos (15) avec cependant, un rendement plus faible (77%) et un temps de raction plus
long.
57

N
N
N
OCH
3
Ph
N
H
N
N
O
Ph
DMF, A, 12h, 77% (16)
(15)
NaSCH
2
COONa
NaSCH
2
CH
3
DMF, A, 3h, 90%

Schma 26

Quel que soit lagent de dmthylation utilis, le processus squentiel en deux tapes de
mthoxylation / dmthylation sest donc avr plus efficace pour accder
limidazopyridinone (15) (rendement global de 63 74%) que lhydrolyse directe du driv
chlor (13) (rendement de 52%).

3.2.2. Alkylation en N4 de limidazo[4,5-b]pyridin-7-one (15)
A ce stade, nous avons obtenu lintermdiaire cl de la synthse qui va nous permettre
daccder toute une gamme dimidazo[4,5-b]pyridin-7-ones polysubstitues. En effet,
notre objectif est dintroduire sur le noyau central imidazopyridinone , ciblant
potentiellement le site ATP, des chanes latrales de nature et de longueur diverses qui
seraient capables de se lier aux poches adjacentes ce site ATP afin daugmenter laffinit
et la slectivit de ces molcules vis--vis de la protine cible
115
. De plus, la chane latrale
introduite sur lazote N4 pourra constituer, terme, le bras reliant limidazopyridinone au
fragment strode afin daccder des composs bivalents analogues ceux qui seront
dcrits dans le chapitre 3 de ce manuscrit.
-
La N-alkylation en position 4 de limidazopyridinone (15) a t mise au point lors de
travaux antrieurs mens au laboratoire. Cette raction avait alors t mise en uvre en
prsence dagents alkylants comme MeI ou de e-halo alkyl esters dans une solution
thanolique de KOH 90C pour accder, avec des rendements moyens excellents, aux
drivs prsentant un groupement mthyle ou une chane de type alkyl ester sur lazote N4
(schma 27 et tableau 3). Dans tous les cas, la raction a conduit un seul rgioisomre
dont la structure a d tre confirme par RMN. En effet, limidazopyridin-7-one (15) existant
Travaux prliminaires
58

sous la forme de deux tautomres (figure 27), lalkylation peut se produire sur latome
doxygne ou latome dazote en 4.
N
H
N
N
O
Ph
(15)
KOH (1,1 q.), EtOH, 90C
R
3
X (1,2 q.)
temps de raction
N
N
N
O
Ph
R
3
4
(17)-(20)

Schma 27

Tableau 3. Conditions opratoires et rendements de N4-alkylation de (15).
R
3
X Produit Temps Rendements
a

CH
3
I (17) 5h30 91%
BrCH
2
CO
2
Et (18) 5h30 82%
Br(CH
2
)
3
CO
2
Et (19) 22h30 64%
ClCH(CH
3
)CO
2
Et rac./NaI (20) rac. 22h30 51%
a
Rendements isols.

Alors que le spectre NOE-diffrence du driv mthoxyl (16) montrait prcdemment
une corrlation entre les protons du CH
3
et le proton H6 du noyau imidazopyridinone ainsi
que les protons ortho du groupement phnyle (figure 26), les donnes enregistres pour le
compos (17) rvlent un couplage travers lespace entre les protons du CH
3
et le proton
H5 du noyau imidazopyridinone (figure 28), confirmant la N-alkylation.
N
H
N
N
O
Ph
(15)
N
N
N
OH
Ph

Figure 27. Deux formes tautomres de limidazo[4,5-b]pyridin-7-one (15).

59

N
N
N
O
2,0%
5
4
(17)
H
H
3
C

Figure 28. NOE-diffrence sur le compos (17) aprs irradiation du CH
3
o = 3,75 ppm.

Nous avons alors appliqu ces conditions de N-alkylation rgioslective des chanes
amino-alkyles pour accder des imidazopyridin-7-ones possdant une fonction NHBoc en
position N4.
-
Afin dalkyler la molcule (15) en position N4 dans les conditions de substitution
nuclophile dcrite ci-dessus, nous avons procd la synthse de plusieurs chanes de
diffrentes longueurs, substitues en positions terminales, dune part, par un groupement
partant de type halogne ou msylate, et dautre part, par un groupement amino-protg.
Les diffrents composs prcurseurs disponibles commercialement comportaient 3, 4 ou 6
chanons mthylne.
Synthse des prcurseurs des chanes amino-alkyles (21), (22) et (23)
H
N O
O
NH
2
HBr
Br Br
(21) 93%
NEt
3
, THF
(Boc)
2
O
O
S
H
3
C
O
O
H
N O
O
HO
NH
2
1) (Boc)
2
O, NEt
3
, THF
50%
(22)
2) CH
3
SO
2
Cl, NEt
3
, THF
O
S
H
3
C
O
O
H
N O
O
NH
2
HO
100% (23)
1) (Boc)
2
O, NEt
3
, THF
2) CH
3
SO
2
Cl, NEt
3
, THF
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
Schma 28

Dans un premier temps, la fonction amine primaire des diffrents prcurseurs a t
protge sous la forme dun carbamate de tert-butyle rsistant en milieu basique. Les
groupements hydroxyle des deux drivs amino alcools protgs ont ensuite t
60

transforms en msylate pour pouvoir procder la substitution nuclophile. Les drivs
(21) et (23) ont t obtenus avec dexcellents rendements en une ou deux tapes
(respectivement 93% et 100%), contrairement au compos (22) qui na pu tre synthtis
quavec un rendement moyen de 50%. Cet amino msylate comportant une chane de type
(CH
2
)
4
- sest avr instable : une cyclisation intramolculaire par substitution nuclophile de
lazote sur le carbone porteur du groupe OSO
2
CH
3
conduisant la pyrrolidine N-Boc
153
O
S
H
3
C
O
O
H
N O
O
(22)
CH
3
CH
3
CH
3
N
O O CH
3
CH
3
CH
3
NEt
3
HNEt
3
MeSO
3

pourrait expliquer ce mauvais rsultat (schma 29), mme si nous navons pas pu isol ce
driv pyrrolidine.

Schma 29

En effet, des travaux de Berre et al.
154
Br
N
N
Boc
Boc
O
O
OEt
LiOH
Br
H
N
Boc
t
BuOK
Br
N
Boc
K
1) LiOH
2)
t
BuOK
68%
(24)
ont montr que loxamate N-alkyl (24) pouvait
conduire facilement la pyrrolidine N-Boc par traitements successifs par LiOH (limination
du groupement ethoxalyl) et par tBuOK (formation de lamidure et substitution nuclophile
intramolculaire) (schma 30).

Schma 30

-
La N-alkylation de limidazopyridin-7-one (15) a t conduite dans les mmes conditions
que prcdemment : cest--dire dans lthanol, chaud, mais en prsence dun plus grand
excs dagent alkylant (6 q.) et de KOH (8 q.). Le temps de raction a galement d tre
Alkylation de limidazopyridine
61

prolong pour obtenir des rendements satisfaisants. Les produits (25) et (27) ont alors t
obtenus, chacun avec un rendement de 60%.

Cette raction de N-alkylation sest avre rgioslective, cependant dans le cas de
lalkylation en prsence du bromure (21), des traces du rgioisomre O-alkyl (26) ont pu
tre isoles. Le spectre
1
H RMN du driv O-alkyl (26) met en vidence des signaux
correspondants aux protons H5 et H6 analogues ceux obtenus pour le compos mthoxyl
en position 7 (16).

N
N
N
O
NHBoc
N
H
N
N
O
4
KOH (8eq), EtOH
4 jours, A
(25), 60%
N
N
N
O
+
(26), traces
NHBoc
(15)
Br NHBoc
(21) 6 q.
4
7
N
N
N
O
H
N O
O
(27), 60%
KOH (8eq), EtOH
4 jours, A
MsO
NHBoc 6
(23) 6 q.
4

Schma 31

Par contre, la raction, mene en prsence de 6 quivalents du msylate (22) dans des
conditions basiques analogues, na pas permis dobtenir le produit de N-alkylation (28). Le
driv (28) a pu finalement tre obtenu avec un faible rendement de 22% en utilisant des
conditions plus douces (1,1 q. de KOH ; 1,3 eq de (22), schma 32).
62

N
N
N
O
H
N O
O
N
H
N
N
O
4
(28), 22%
(15)
KOH (1,1 q.), EtOH
4 jours, A
MsO
NHBoc
4
(22) 1,3 q.

Schma 32

3.3. Evaluation biologique
Lvaluation biologique des imidazo[4,5-b]pyridin-7-ones (15), (17)-(20), (25), (27), (28)
et de la 7-mthoxy-1-benzylimidazo[4,5-b]pyridine (16) a t ralise par le Dr P. Lawton du
Laboratoire de Parasitologie de la Facult de Pharmacie de Lyon. Cette tude a t mene
sur le fragment recombinant H6-NBD1 du transporteur CpABC3 de C. parvum (cf. chapitre 1,
2). Laffinit de liaison des molcules (100 M) a t value par la mesure du
quenching de fluorescence intrinsque du fragment H6-NBD1, qui montre un pic
dmission caractristique 328 nm d des rsidus tryptophanes proches du site ATP
(tableau 4)
113
. Limidazopyridinone (28), obtenue en trop faible quantit et avec une puret
non satisfaisante, na pas pu tre teste.

63

Tableau 4. Evaluation biologique des imidazo[4,5-b]pyridines synthtises sur CpABC3.

Compos
Quenching de fluorescence
a
(% par rapport au contrle)
Activit inhibitrice de lATPase
(Ki, en M)
N
H
N
N
O
Bn
(15)

N
N
N
OCH
3
Bn
(16)

N.A.
b

N.A.
N.D.
c

N.D.
N
N
N
O
Bn
(17)
CH
3
N.A. N.D.
N
N
N
O
Bn
(18)
CO
2
Et

85.51.8 N.D.
N
N
N
O
Bn
(19)
CO
2
Et

80.18.2 N.D.
N
N
N
O
Bn
(20)
CO
2
Et H
3
C
rac.

69.34.4 232.026.8
N
N
N
O
Bn
(25)
NHBoc
3

96.117.4 538.973.4
N
N
N
O
Bn
(27)
NHBoc 6

60.818.5 N.A.

TNP-ATP 33.17.9 36.64.5

Progestrone 71.75.1 N.D.

a
Mesures de fluorescence effectues en triplicats. Les drivs synthtiss et les rfrences ont t
tests 100 M. Les rsultats sont exprims en pourcentage de fluorescence de la protine en
prsence du compos test par rapport la protine seule (plus ce pourcentage est bas, plus
laffinit du compos est grande) ;
b
N.A. : non actif ;
c
N.D. : non dtermin
64

Les deux molcules de rfrences (100 M) ont t dune part, le TNP-ATP, inhibiteur
comptitif de lATP
155
, et dautre part, la progestrone, modulateur strodien connu de la
Pgp
156
Les drivs (15), (16), (17) et (25) nont montr aucune liaison au transporteur. Toutefois,
les imidazopyridin-7-ones (18)-(20) et (27) provoquent, quant elles, un faible quenching de
fluorescence, proche de celui de la progestrone.
suppos se lier un site proche de celui de lATP.
Le fragment recombinant H6-NBD1 possde galement une activit ATPasique, qui, bien
que plus faible que lactivit ATPasique du transporteur CpABC3 entier, a pu tre exploite
pour valuer laction inhibitrice dun panel de trois molcules (tableau 4) : le driv (20)
comportant une fonction ester et les drivs (25) et (27) possdant une fonction NHBoc.
Les drivs (20) et (25) se sont rvls des inhibiteurs comptitifs (figure 29). Le
compos (25) montre toutefois un pouvoir inhibiteur aussi faible que son affinit. Ces
rsultats soulignent cependant limportance de la nature de la chane latrale en position 4 :
il semblerait quune fonction ester soit prfrable une fonction NHBoc pour lactivit
inhibitrice.

Figure 29. Inhibition comptitive de lactivit ATPasique par les composs (20) et (25).

Enfin, il faut noter que linhibition de lactivit ATPasique par les drivs (20) et (25)
requiert des concentrations leves, et que le compos (27) qui avait provoqu le meilleur
quenching de fluorescence parmi lensemble des imidazopyridinones testes, na pas montr
dactivit inhibitrice. Ceci pourrait tre d au fait que ces molcules formeraient une liaison
sur CpABC3 comparable celle de certains flavonodes sur la Pgp, qui se lieraient
65

simultanment sur le site de lATP et sur le site voisin lipophile liant les strodes. Mais ceci
reste confirmer en testant un nombre de molcules plus important.
Lensemble de cette tude concernant la synthse et lvaluation biologique des
imidazo[4,5-b]pyridin-7-ones N1- et N4-substitues a fait lobjet dune publication dans
European Journal of Medicinal Chemistry en 2010
157

.

Chapitre 3 : Bivalents progestrone-adnine comme inhibiteurs de la Pgp
66

CHAPITRE 3
Conception, synthse et valuation biologique de drivs
bivalents progestrone-adnine comme inhibiteurs
potentiels de la P-glycoprotine
67

1. Le concept du ligand bivalent
Un ligand bivalent est une entit capable de se lier simultanment deux sites distincts.
Ce ligand peut tre homo-bivalent, cest--dire quil est constitu de deux structures
identiques relies par un bras, ou htro-bivalent avec deux motifs diffrents.
Les ligands bi- ou mme polyvalents sont prsents abondamment dans le monde vivant.
A titre dexemple, la liaison des virus aux surfaces cellulaires, la liaison des anticorps aux
antignes, les voies de signalisation intracellulaires, la liaison de facteurs de transcription
lADN, etc Toutes ces liaisons voquent des interactions polyvalentes.
Comme tout processus chimique, linteraction entre un ligand et son rcepteur peut tre
dcrite thermodynamiquement par lquation de lnergie libre
158
AG=AH-TAS
:
o G est lenthalpie libre (dite de Gibbs),
H lenthalpie,
S lentropie de linteraction,
et T est la temprature du milieu en Kelvin.
Plus lenthalpie libre diminue, plus linteraction est favorise.
Pour valuer le gain (ou la perte) daffinit vis--vis du rcepteur, provoqu(e) par le
passage de deux ligands monovalents A et B un ligand bivalent A-espaceur-B, il est utile de
comparer la diminution denthalpie libre AG correspondant chacun de ces deux processus,
deux liaisons monovalentes versus une liaison bivalente :
- Lenthalpie de liaison dun ligand bivalent avec son rcepteur est souvent un
facteur dfavorisant linteraction bivalente. En effet, sauf dans le cas peu
probable o il est parfaitement adapt ses deux sites, la liaison dun ligand
bivalent saccompagne souvent dune dformation du ligand qui engendre des
contraintes striques permettant aux deux motifs du ligand de mieux sadapter
leurs sites respectifs. Ces contraintes de conformation sont consommatrices
dnergie, il en rsulte donc une valeur de AH plus importante (moins ngative)
que la valeur de AH correspondant une liaison des deux fragments monovalents
avec leurs deux sites.

68

- Leffet de lentropie sur la liaison bivalente dpend de deux facteurs :
Du fait mme de la prsence du bras espaceur, un ligand bivalent possde
moins de degrs de libert (rotation, translation) que les fragments
monovalents. En solution, un ligand bivalent possde donc une entropie
moins importante que les deux fragments monovalents. Il en rsulte que la
liaison dun ligand bivalent avec ses rcepteurs saccompagne de moins de
perte dentropie que deux interactions monovalentes spares. Cest un
facteur favorisant, toujours prsent.

Contrairement aux deux fragments monovalents, un ligand bivalent subit
une perte de flexibilit intramolculaire lors de sa liaison avec les
rcepteurs. Except le cas o le bras espaceur prsente une trs forte
rigidit par nature, linteraction du ligand bivalent avec ses rcepteurs le
rend toujours plus rigide et saccompagne dune perte dentropie. Cest un
facteur dfavorable, mais qui dpend de la nature du bras espaceur : plus le
bras est rigide, moins lentropie de la molcule de dpart est leve, moins
ce facteur est important.
En rsum, le ligand bivalent thermodynamiquement idal doit tre le plus rigide
possible, pour limiter la perte entropique, mais le plus adapt possible ses deux sites, pour
limiter les contraintes striques et les besoins nergtiques de linteraction, donc pour
limiter le gain denthalpie.
2. Exemples de ligands bivalents
- Ligands des rcepteurs aux opiodes
Les ligands bivalents destins interagir avec deux rcepteurs aux opiodes ont t
largement tudis

159
. Actuellement, cette famille de rcepteurs est classe comme suit : le
rcepteur (mu, MOP), le rcepteur o (delta, DOP), le rcepteur k (kappa, KOP) et le
rcepteur la nociceptine / orphanine FQ (NOP). Les agonistes du rcepteur MOP, avec la
morphine comme chef de fil, sont responsables dun puissant effet analgsique. Toutefois,
ils ont des effets indsirables bien connus : dpression respiratoire, constipation, et surtout
69

la tolrance qui sinstalle au cours des traitements chroniques. Il a t montr que les effets
indsirables des drivs morphiniques diminuaient en bloquant les rcepteurs DOP et en
activant les rcepteurs MOP simultanment. Ainsi, le ligand bivalent MDAN-21, contenant
deux pharmacophores dune part, loxymorphone (agoniste du rcepteur MOP) et dautre
part, le naltrindole (antagoniste du rcepteur DOP) relis par un bras 21 chanons
(figure 30), permet dactiver le rcepteur MOP des doses 50 fois plus faibles que celles
utilises pour la morphine (DE
50
(MDAN-21) 0,08 nM, DE
50
(morphine) 4,1 nM) tout en
rduisant le phnomne de tolrance et la dpendance physique in vivo
160

.
HO
O
OH
N
CH
3
N
H
O
O
N
H
O
N
H
O
O
NH
O
7
N
H
O
HO
N
OH
oxymorphone
naltrindole
MDAN-21
Figure 30. Ligand bivalent MDAN-21 comportant deux pharmacophores de type
oxymorphone (agoniste du rcepteur MOP) et naltrindole (antagoniste du rcepteur DOP)
relis par un bras espaceur 21 chanons

-
Linhibition de cette pompe, situe au niveau des synapses du systme nerveux central,
est lune des stratgies thrapeutiques utilises contre la dpression nerveuse. Des ligands
homo
Ligands de la pompe de recapture de la srotonine
161
et htro-bivalents
162
ont montr une meilleure efficacit dans linhibition de ces
pompes que leurs analogues monovalents (figure 31). Deux explications peuvent tre
envisages : lexistence de deux sites de liaison sur ces pompes ou une dimrisation de la
protine. Les inhibiteurs bivalents ont galement montr une bien meilleure slectivit
envers les pompes de recapture de la srotonine, par rapport aux autres pompes de
recapture de neurotransmetteurs (dopamine et noradrnaline).
70

N
CH
3
Cl
N
H
O
CH
2
N
H
O
N
CH
3
Cl
5
Ki 1,2 nM 0,1
+
-

Figure 31. Ligand homo-bivalent inhibiteur slectif du transporteur de la srotonine.

-
Les inhibiteurs de cette enzyme sont notamment utiliss comme mdicaments contre la
maladie dAlzheimer. Lactylcholinestrase possde deux sites de liaisons (un site
catalytique enfoui et un site priphrique, spars de 14 ) o des interactions de type
t-cation se mettent en place entre les rsidus Trp 84 et 279 et les groupements ammoniums
quaternaires de lactylcholine. Des ligands bivalents destins se lier ces deux sites ont
t synthtiss, en partant soit dinhibiteurs connus de lactylcholinestrase comme la
tacrine (ex-Cognex, qui nest plus commercialis)
Ligands de lactylcholinestrase
163
ou lhuperzine A
164
-
, soit damines plus
simples comme lhupyridone. Des homo- et des htro-bivalents ont t tests et ont
montr une meilleure affinit de liaison vis--vis de lactylcholinestrase par rapport celle
montre par les drivs monovalents. Ltude cristallographique des complexes ligand-
enzyme a confirm la liaison simultane de ces bivalents aux deux sites mentionns ci-
dessus (figure 32).
Les agonistes de ces deux rcepteurs, prsents dans le muscle cardiaque, possdent un
effet protecteur contre les consquences de lischmie cardiaque. Lactivation de lun de ces
deux rcepteurs, ou des deux la fois, limite le phnomne de mort cellulaire provoque
par un manque doxygne. Il a t montr que des ligands bivalents (figure 33), runissant
un agoniste pour chacun des rcepteurs A1 et A3, possdent un effet protecteur du muscle
cardiaque suprieur leffet protecteur obtenu avec deux ligands monovalents
co-admnistrs
Ligands des rcepteurs de ladnosine A1 et A3
165
.
71

Figure 32. Structure cristalline du complexe actylcholinestrase dlectrocyte de Torpedo
californica / (S,S)-(-)-bis(10)-hupyridone (daprs Wong et al.
164
).

N
N
N
N
NH
O
OH
OH
H
H
H
H
HO
N
N
N
N
HN
O
OH
OH
H
H
H
H
H
3
CHN
O
Agoniste du rcepteur A3
Agoniste du rcepteur A1
N
H
S
N
H
H
N
S
H
N NH
O
O
HN
Figure 33. Exemple du MRS1741, ligand bivalent agoniste des rcepteurs A1 et A3.
HN
N
H
CH
2
N
H
NH
O
n
n= 10, 12, 13
O

72

3. Les ligands bivalents de la Pgp dans la littrature
La Pgp est constitue de deux fragments homologues, rpts en tandem. Cette
structure est idale pour concevoir des ligands homo-bivalents, susceptibles dinteragir avec
deux sites identiques en mme temps. Quelques tudes, assez rcentes, ont dcrit de tels
ligands.
- Les dimres de stipiamide
166
La stipiamide est un antibiotique dorigine fongique, qui a montr une certaine activit
inhibitrice vis--vis de la Pgp. Lactivit inhibitrice dhomodimres de stipiamide, o deux
motifs stipiamide sont relis par un bras polythylne glycol de longueur variable, sest
avre dpendante de la longueur de ce bras. Les auteurs ont valu plusieurs paramtres :
laugmentation de laccumulation dagents anticancreux dans des cellules
multichimiorsistantes, linhibition de la liaison de photomarqueurs daffinit de la Pgp, et
linhibition de lactivit ATPasique. Les rsultats ont mis en vidence une longueur optimale
de bras de 35 correspondant n = 8 (figure 34). Enfin, cette tude a montr que les
meilleurs bivalents avaient une affinit 11 fois plus importante pour la Pgp que le monomre
de stipiamide.

CH
3
OH
CH
3
CH
3
O
H
N
n = 0, 2, 5, 8, 12
O
N
H
n
O
CH
3
CH
3
OH
CH
3

Figure 34. Homodimres de stipiamide.

- Les dimres dmtine
167
Lmtine est un alcalode, extrait de lIpeca, qui inhibe la Pgp. Cet effet inhibiteur a pu
tre amlior en synthtisant des homodimres dmtine. Comme dans le cas de la
stipiamide, la longueur du bras espaceur est un facteur dterminant dans lefficacit des

73

bivalents. Toutefois, la longueur optimale du bras des dimres dmtine sest avre moins
importante que dans le cas de la stipiamide (10 correspondant n = 2 dans la figure 35
contre 35 ). Enfin, les bras polymthylnes ont permis damliorer lefficacit de ces
drivs bivalents par rapport celle observe pour lmtine, alors que lutilisation de bras
caractre hydrophile (comme les chanes polythylne glycol utilises dans les dimres de
stipiamide) a diminu voire supprim cet effet inhibiteur. Au vu de ces rsultats, les auteurs
ont conclu que les sites de liaison de lmtine taient situs dans un environnement
diffrent de ceux de la stipiamide.
N
N
H
3
CO
H
3
CO
OCH
3
OCH
3
O
R =
N
H
H
N
O
O
avec n = 1-7
H
H
H
R
N
O
OCH
3
OCH
3
N
H
H
3
CO
H
3
CO
H
H
n

Figure 35. Homodimres dmtine
- Les dimres de flavonodes
168, 169
Certains de ces polyphnols dorigine naturelle ont une activit inhibitrice de la Pgp.
Toutefois le mcanisme daction peut tre diffrent dun flavonode lautre : les plus
polaires sont supposs interagir avec les domaines NBD de la Pgp et inhiber lactivit
ATPasique, tandis que les moins polaires pourraient tre des substrats comptitifs qui se
lieraient aux sites de liaison des substrats de la Pgp. Chan et al. ont synthtiss des dimres
de drivs dapignine et ont pu amliorer lactivit observe pour le monomre. Les
auteurs ont fait varier la longueur de la chane PEG, la nature des substituants sur le noyau
A, ainsi que le point dattache du bras espaceur, pour finalement obtenir un dimre (figure
36) possdant, selon lagent anticancreux utilis, une activit 10 40 fois plus importante

74

que lapignine elle-mme. Labsence dinhibition de lactivit ATPasique de ces dimres
suggre quils interagiraient avec les domaines transmembranaires de la Pgp plutt quavec
les domaines NBD.
O
O
O
O
O
O
H
3
C
CH
3
4
A
A

Figure 36. Homodimre de driv dapignine.
- Les dimres de quinine et de quinidine
Pires et al.

170
N
OCH
3
H
O
O O
O
N
H
3
CO
H
N
N
ont choisi de relier les deux monomres au bras espaceur par
lintermdiaire dun groupement ester dans le but de favoriser llimination de ces dimres
aprs hydrolyse de cette fonction, et ainsi de limiter lapparition dune toxicit additionnelle
par rapport celle observe pour les monomres. Cette tude a montr que certains
dimres possdaient une activit significativement meilleure que celle des monomres,
notamment un dimre de quinine comportant un bras polymthylne 8 chanons (figure
37), 3000 fois plus actif que la quinine, qui a rendu leur complte sensibilit des cellules
cancreuses rsistantes au paclitaxel.

Figure 37. Homodimre de quinine.
-
Teodori et al.
Les dimres inspirs du vrapamil et de la pervilleine A
171
ont propos une nouvelle approche pour llaboration dinhibiteurs de la
Pgp. Les auteurs se sont bass sur deux observations :
75

Des tudes indiquent la prsence dune grande concentration dacides amins
chaine latrale aromatique et dacides amins donneurs ou rcepteurs de
liaisons hydrogne dans la cavit centrale de la Pgp.
La structure de deux inhibiteurs connus de la Pgp, le vrapamil et la pervilleine
A, comprend deux rsidus aromatiques (H1 et H2), relis par un bras contenant
un atome dazote protonable (L) (figure 38).
O
O
N
HO
CH
3
O
O
OCH
3
OCH
3
OCH
3
OCH
3
H
3
CO
H
3
CO
CN
N
OCH
3
H
3
CO
OCH
3
OCH
3
CH
3
Pervilleine A
Verapamil
(R,S)
H1 H2 L
Figure 38. Daprs Teodori et al.
171
, des molcules flexibles comportant des noyaux
aromatiques spars par diffrentes longueurs de bras peuvent sadapter et se lier au site de
reconnaissance de la Pgp avec une plus grande affinit.
Les auteurs ont alors conu une nouvelle srie de molcules qui, en plus de possder les
caractristiques de la plupart des pharmacophores des substrats ou inhibiteurs connus de la
Pgp (noyaux aromatiques et azote protonable), sont flexibles (figure 39). Ltude de
linhibition de lactivit de la Pgp a montr que les produits tudis taient des inhibiteurs de
la Pgp, et que leur activit devenait maximale pour une longueur du bras espaceur de lordre
de 22 . Il a t montr galement que la prsence de noyaux anthracne ou fluorne et de
groupements mthoxy augmentait laffinit de liaison. De plus, ces travaux ont dmontr
que, lors de la liaison la protine, la perte dentropie due la flexibilit de ces molcules
tait compense par une adaptation plus aise des composs au site de liaison.

76

Ar O
(CH
2
)
N
R
O
Ar
1
O O
(CH
2
)
O Ar
O
N
N
O Ar
1
O
O
O
Ar
O
N
O
O Ar
1
O
R
O Ar
O
N
CH
3
N
CH
3
O Ar
1
O
OCH
3
H
3
CO
H
3
CO
OCH
3
H
3
CO
H
3
CO
H
3
CO
H
3
CO
CH
3
CN
OCH
3
OCH
3
H
3
CO
Ar, Ar
1
=
R = H, CH
3
n n
Figure 39

4. Conception, synthse et valuation biologique de drivs
bivalents progestrone-adnine comme inhibiteurs
potentiels de la P-glycoprotine
Lors de lintgration de notre quipe dans lunit Inserm U863 (dir. Pr. Michel Pugeat), le
laboratoire a orient un de ses axes de recherche vers la synthse de ligands htro-
bivalents susceptibles de se lier simultanment au site strodes et au site ATP de la Pgp.
En effet, plusieurs tudes ont suggr la proximit de ces deux sites (cf. chapitre1, 1.3.3.).
Un ligand bivalent est susceptible de possder une affinit plus forte et dtre plus
spcifique de la protine considre quun driv monovalent
172, 173
. Linhibition de lactivit
ATPasique par un analogue de lATP, couple une liaison au site des strodes (connue
pour inhiber la Pgp mme si le mcanisme reste peu clair) permettrait donc de bloquer
lactivit de la Pgp dune manire la plus spcifique possible. Ainsi, la nature bivalente de ces
inhibiteurs, en plus daugmenter laffinit du ligand pour la Pgp, diminuerait le risque de
77

liaison dautres protines ou rcepteurs analogues, tels que les rcepteurs des hormones
strodes ou les autres transporteurs de la famille des ABC.
Nous avons alors entrepris de synthtiser des molcules bivalentes contenant un driv
de progestrone reli l'adnine par un bras (figure 40).
N
N
N
N
b
r
a
s
strode
adnine ou
htrocycle azot
site des strodes
site de l'ATP

Figure 40

Historiquement, la progestrone est le premier strode avoir montr une activit
inhibitrice vis--vis de la Pgp, sans toutefois tre transporte par cette dernire, ce qui a
permis davancer lhypothse de lexistence dun site de liaison des strodes distinct (cf.
chapitre1, 1.3.3.). Ladnine, quant elle, est le ligand naturel des sites ATP, cependant
caractrise par une faible affinit. Nanmoins, du fait mme de leurs faibles activits, la
progestrone et ladnine vont constituer des monomres intressants pour la conception
de modulateurs htro-bivalents de la Pgp. En effet, ces deux synthons vont nous permettre
doptimiser la nature et la longueur du bras espaceur en vue dobtenir les inhibiteurs les plus
affins possibles. Enfin, la progestrone et ladnine sont toutes deux disponibles
commercialement, et offrent diffrentes possibilits dancrage du bras espaceur selon des
procds gnralement bien connus.
Nous avons choisi de relier ces deux motifs par lintermdiaire dune fonction amide
secondaire. En effet, les liaisons amides sont assez stables en milieu biologique, et il existe
plusieurs mthodes chimiques disponibles pour effectuer des couplages peptidiques.
78

4.1. Synthse des ligands bivalents adnine-progestrone
4.1.1. Fonctionnalisation de la progestrone
Afin d'obtenir des inhibiteurs de la Pgp plus affins et plus spcifiques, nous avons dcid
de faire varier lorientation du strode dans son site de liaison en synthtisant deux sries
de ligands bivalents qui diffrent par la position du point dancrage du bras sur la
progestrone : une premire srie en C20 et une deuxime en C7.
O
H
3
C
H
3
C
O H
N
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
20
7
H
N
O
Y
N
N
N
N
NH
2
Y
N
N
N N
NH
2
17
17

Figure 41. Ligands htro-bivalents cibles.

La srie des drivs bivalents en C7 a t choisie par analogie avec les inhibiteurs de Pgp
dvelopps par Leonessa et al.
174
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
S NH
NH
O
H
3
C
dont la molcule phare est reprsente dans la figure 42.

Figure 42.Driv de progestrone substitu en C7 inhibiteur de Pgp.

En vue dun couplage peptidique entre le motif strode et ladnine, il tait ncessaire
dintroduire une fonction acide carboxylique sur la progestrone en position C17 et C7.

-
Pour accder aux drivs bivalents en C20, notre attention sest naturellement porte
sur le groupement mthylctone port par le carbone 17 de la progestrone. La raction
haloforme reste la mthode la plus couramment utilise pour transformer ce groupement
Introduction dune fonction acide carboxylique en C17
79

en acide carboxylique mme si dautres procds utilisant des conditions plus douces ont
t dvelopps pour pouvoir tre appliqus des strodes baso-sensibles
175
La raction haloforme applique la progestrone a t dcrite en dtail par Bessard et
al.
.
176

et constitue une mthode directe pour obtenir lacide carboxylique correspondant
(29). Lhypobromite de sodium (NaOBr) est prpar in situ basse temprature par action
dune solution aqueuse dhydroxyde de sodium sur le dibrome sous atmosphre inerte. Ce
ractif est ensuite rapidement additionn, 0C, sur lnolate de la progestrone engendr
en milieu basique. Aprs un traitement rducteur par Na
2
SO
3
, lacide carboxylique (29) est
obtenu par prcipitation aprs acidification de la phase aqueuse avec 57% de rendement. Le
compos (29) sest avr dune puret suffisante pour tre directement utilis dans la suite
de la synthse.
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
1) NaOH, Br
2
H
2
O,
t
BuOH, 3h, 0C
O
H
3
C
H
3
C
O
OH
(29), 57%
Progestrone
17
2) Na
2
SO
3
, H
2
O
15h, 20C

Schma 33

-
Lacide (30) a t obtenu selon le schma rtrosynthtique 34 o le cyanure (32)
constitue lintermdiaire cl de la synthse.
Introduction dune fonction acide carboxylique en C7
Les drivs de progestrone substitus en position 7 sont gnralement obtenus par
addition-1,6 dun nuclophile sur la A
6
-progestrone (31), elle-mme obtenue par oxydation
de la progestrone.

80

O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
7
OH
O
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
CN O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
A
6
-progestrone (31)
(30) (32)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11 12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
Schma 34

La dshydrognation des A
4
-3-cto strodes a t dcrite en prsence de plusieurs
oxydants. Parmi les plus utiliss, on trouve la tetrachloro-p-benzoquinone (ou chloranil).
Cette raction dcrite par Agnello et al.
177
La 2,3-dichloro-5,6-dicyanobenzoquinone (ou DDQ) a t galement mise en uvre
comme agent oxydant en utilisant lacide chlorhydrique gazeux anhydre comme catalyseur.
Ces conditions ractionnelles permettent dobtenir majoritairement le driv 4,6-dine, et
limitent la formation des drivs polyconjugus de type 1,4-dine ou 1,4,6-trine
en 1957, a t mene dans diffrents solvants
(tolune, xylne, tert-butanol, etc), parfois en prsence dun catalyseur acide (souvent
lacide p-tolune sulfonique) qui favorise lnolisation de la ctone o,|-insature. Les
rendements obtenus schelonnent entre 40% et 80% selon le strode.
178
Pour notre part, nous avons choisi doxyder la progestrone par le chloranil dans le tert-
butanol utilis comme solvant (schma 35). Le mlange est chauff au reflux jusqu
disparition totale du strode de dpart. Le suivi de la raction a t ralis, non pas par
chromatographie sur couche mince puisque le produit doxydation possde une polarit trs
proche de celle de la progestrone, mais par spectromtrie UV. Des prlvements successifs
ont alors t effectus et les spectres ultraviolets enregistrs, aprs filtration pralable du
mlange ractionnel sur alumine et dilution dans lthanol. Le spectre UV a montr la
disparition du pic dabsorption 240 nm, caractristique de la progestrone, et lapparition
dun pic 280 nm, caractristique des strodes 4,6-dine.
.
81

O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
Chloranil
tBuOH, A ,2h30
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
17|-(31), 50%
17
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
+
17o-(31), traces
18
6
7
18
17
Schma 35

A lissue de la raction, aucun produit 1,4-dine ou 1,4,6-trine na t isol, toutefois,
leur formation nest pas exclue. Par contre, loxydation a galement conduit la formation
trs minoritaire de lpimre 17o de la A
6
-progestrone qui a rendu la purification de cette
dernire difficile : plusieurs chromatographies sur gel de silice ont t ncessaires pour
finalement isoler le driv 17|-(31) avec une puret satisfaisante mais un rendement moyen
de 50%.
La structure de 17o-(31) a pu tre confirme par spectromtrie RMN. En effet, par
comparaison des spectres RMN
1
H enregistrs dans CDCl
3
, on constate que les signaux des
protons du CH
3
-18 (o = 0,96 ppm) et H-17 (o = 2,82 ppm) de lpimre 17o-(31) sont
significativement dblinds par rapport aux mmes protons chez 17|-(31) : o(CH
3
-18) = 0,70
ppm et o(H-17) = 2,55 ppm
179
Lpimrisation des strodes en position 17 est un processus connu qui se produit en
milieu acide ou basique via la formation de lnol ou de lnolate de la mthylctone. Dans
des conditions quilibrantes, lpimre 17| est gnralement majoritaire dans une
proportion de 75/25 (17|/17o)
. En RMN
13
C, les variations les plus significatives ont t
constates au niveau du carbone C17, centre de lpimrisation : C17[17o-(31)] = 60 ppm et
C17[17|-(31)] = 63 ppm.
180
Le schma rtrosynthtique prvoyait ensuite de synthtiser le cyanure (32) partir de la
A
6
-progestrone 17|-(31). Plusieurs ractions daddition-1,6 appliques aux A
4,6
-3-cto
strodes pour conduire des drivs substitus en position 7 ont t rpertories dans la
littrature :
.

82

-
Les organocuprates sont prpars in situ partir dorganomagnsiens et de chlorure
cuivreux (CuCl) ou de iodure cuivreux (CuI). Ils sont ensuite mis en raction avec les drivs
A
4,6
-3-ctostrodes pour conduire un mlange de diastroisomres avec lisomre alkyl
en 7o majoritaire. La sparation des deux isomres 7o et 7| est facilite puisque seul
lisomre 7| peut subir une r-oxydation par le chloranil pour donner une nouvelle dinone
alkyle A
4,6
-3-cto-7-alkyl
Addition dorganocuprates
181, 182
O
OCOEt
O
OH
R
1) RMgCl excs, CuCl cat
THF / Et
2
O, 0C, 30mn
2) HCl, H
2
O
R = Et, Pr, Bu
Rdts globaux (7o+7|) = 68-78%
.

Schma 36
182

- Addition de thiols
Les thiols sadditionnent avec de bons rendements (60-80%) sur les A
4,6
-3-cto strodes
174,

183,184,185
O
O
HS NH
2
NaOH, dioxanne
74C, 6 jours O
O
S NH
2
61%
. La raction est effectue en milieu basique, et conduit stroslectivement
lisomre 7o.

Schma 37
174

-
Laddition dun cyanure de sodium ou de potassium conduit un mlange des deux
diastroisomres 7o et 7|
Hydrocyanation
186
. Cette absence de stroslectivit est probablement le
rsultat dune pimrisation due aux conditions ractionnelles (chauffage) et la basicit
relative des sels de cyanure. Par contre, il a t montr que lutilisation de cyanures
83

dalkylaluminium, tel que (Et)
2
AlCN, conduit au seul isomre 7o. La formation de cet isomre
rsulte dune attaque axiale du cyanure favorise par un recouvrement orbitalaire avec les
orbitales t de la dinone
187
Dans lobjectif dintroduire une fonction acide carboxylique en position 7o de la
progestrone, nous avons effectu lhydrocyanation de la A
6
-progestrone selon une
mthode dcrite pour un strode analogue
. De plus, les conditions douces de la raction empchent une
pimrisation ultrieure.
188
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
2) NaOH, H
2
O
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
(32), 88%
7
CN
1) (Et)
2
AlCN,
THF/ tolune, TA
17|-(31)
6
7
8
. La raction a t effectue dans un mlange
THF/tolune, temprature ambiante, en prsence dun excs de cyanure de
dithylaluminium pour obtenir le cyanure (32) avec un bon rendement :

Schma 38

Comme attendu, cette raction dhydrocyanation a conduit un seul stroisomre. La
strochimie 7o du cyanure (32) a t confirme par ltude du spectre RMN
1
H. En effet, le
signal o = 3,01 ppm correspondant au proton H7 prsente une largeur mi-hauteur de
8,30 Hz, ce qui est caractristique dun proton quatorial et exclut la prsence de couplages
de type axial-axial (figure 43).

84

Figure 43. Multiplet correspondant au proton H-7| dans le compos (32).

La synthse sest poursuivie par la rduction du cyanure (32) en prsence dhydrure de
diisobutylaluminium (DIBAL-H). La raction a t conduite dans le tolune anhydre, -40C,
pour obtenir quantitativement laldhyde (33) sous la forme dun mlange de
diastroisomres du fait de la rduction concomitante des fonctions ctones en positions 3
et 20. La RMN du proton du mlange montre clairement lapparition de signaux
correspondant aux protons aldhydiques des diffrents isomres.
2) HCl, MeOH, H
2
O
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
(33), quant.
CN
1) DIBAL-H, tolune, -40C
HO
H
3
C
H
3
C
HO
CH
3
CHO
(32)
3
20
actone, -15C
(30), 67%
CrO
3,
H
2
SO
4
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
COOH 3
20
7

Schma 39

Le mlange (33) a finalement t mis en uvre, sans purification supplmentaire, dans
une oxydation de Jones (CrO
3
, H
2
SO
4
), basse temprature, pour obtenir une fonction acide
W/2 = 8,30 Hz
85

carboxylique en 7o et rgnrer les deux fonctions ctones en 3 et en 20. Lacide (30) a t
isol par prcipitation en milieu aqueux acide avec un rendement satisfaisant sous la forme
dun unique isomre.
4.1.2. Synthse des drivs adnine-bras-NH
2

Dans cette partie, nous allons dcrire la synthse des diffrents drivs adnine-bras-NH
2

qui vont constituer les prcurseurs directs des composs cibles. Les drivs adnine-bras-
NH
2
sont issus du couplage des bras espaceurs ladnine. Les diffrents bras envisags
(figure 44) devront donc comporter deux fonctions terminales diffrentes : lune de type
alcool qui rendra possible le couplage la purine, lautre de type amine primaire permettant
de procder au couplage peptidique avec les acides (29) et (30). Notre choix sest port vers
la synthse de 7 bras comportant tous une structure centrale carbone mais de longueur et
surtout de flexibilit variables.
OR
GPHN
OR GPHN
OR
GPHN
OR
GPHN
OR
GPHN GPHN
OR
GPHN
OR
A B
C
D
E F
G
Figure 44. Structures de bras envisages.

-
Le bras A comportant une chane hexamthylnique a t facilement prpar partir du
6-aminohexan-1-ol commercial par simple protection de la fonction amine sous forme de
Synthse des bras A,B et C, et leur couplage ladnine :
86

carbamate de benzyle. Lamino alcool protg (34) a t obtenu avec un bon rendement
(79%) aprs recristallisation dans le cyclohexane.
H
N O
O
HO
PhCH
2
OCOCl, Na
2
CO
3
H
2
O, 0C
(34), 79%
Ph NH
2
HO
Schma 40

Les bras B et C contenant des structures cycliques ont ensuite t prpars en utilisant
comme prcurseurs les amino acides correspondants, commercialement disponibles. Le bras
de type cyclohexyle (36) a t facilement synthtis partir de lacide trans-4-
(aminomthyl)cyclohexane carboxylique, par rduction de la fonction acide carboxylique en
alcool primaire suivie de la protection de lamine sous forme de carbamate de benzyle
(schma 41).
(35), 70%
THF anh.
COOH
LiAlH
4 H
2
N H
2
N
HN
CbzCl, Na
2
CO
3
H
2
O
(36), 70%
OH
OH
Cbz
Schma 41

Le bras (38), contenant un noyau phnyle, a t synthtis selon la mme squence
ractionnelle, partir de lacide p-(aminomthyl)benzoque, commercial, avec un
rendement global plus faible que celui obtenu pour le driv (36). En effet, dans ce cas, nous
avons rencontr des difficults pour purifier lamino alcool (37).
(37), 25%
THF anh.
COOH
LiAlH
4 H
2
N H
2
N
HN
CbzCl, Na
2
CO
3
H
2
O
(38), 90%
OH
OH
Cbz
Schma 42

Nous avons ensuite procd aux couplages des bras (34), (36) et (38) ladnine par
raction de Mitsunobu. Les premiers travaux concernant lalkylation de ladnine par cette
mthode ont t publis par Overberger et al.
189
en 1989. Les agents activants de la
87

triphnylphosphine les plus souvent utiliss sont lazadicarboxylate de dithyle
190
(DEAD) ou
lazadicarboxylate de diisopropyle
191
Ainsi, nous avons pu obtenir les drivs (39), (40) et (41), toutefois avec des rendements
moyens. La purification par chromatographie sur gel de silice de ces drivs dadnine sest
souvent avre difficile ce qui a entran cette perte de rendement. Dans une dernire
tape, le groupement Cbz des drivs (39), (40) et (41) a t limin par hydrognation
catalytique sur Pd/C (la pression dhydrogne et le temps de raction ncessaires pour que
la raction soit complte sont indiqus dans le schma 43) pour accder aux amines (42),
(43) et (44) avec des rendements bons excellents.
(DIAD), gnralement dans le dichloromthane ou le
ttrahydrofurane. Enfin, la raction de Mitsunobu est rgiospcifique et ne conduit quaux
drivs alkyls en N9.
N
N
N
H
N
NH
2
PPh
3
, DIAD, THF anh.
N
N
N
N
NH
2
Y
Y= -(CH
2
)
6
- (39),41%
(40), 49%
(41), 18%
NHCbz
(34), (36) ou (38)
HO
Y
NHCbz
H
2
, Pd/C
MeOH
N
N
N
N
NH
2
Y
NH
2
(42), 1h, (1atm), quant.
(43), 15mn, (5atm), 71%
(44), 10h, (12atm), 77%
Schma 43

-
Nous avons pu accder aux trois drivs adnine-bras-NH
2
(46), (47) et (48) par rduction
partielle ou totale de la fonction alcyne dun prcurseur commun (45).
Synthse des bras D, E, F et G et leur couplage ladnine :
88

N
N
N
N
NH
2
NH
2
N
N
N
N
NH
2
NH
2
N
N
N
N
NH
2
H
2
N
N
N
N
N
NH
2
NH
2
(46)
(45)
(47)
(48)

Schma 44

Pour obtenir le compos (45), nous avons d pralablement prparer un driv N-
protg du 4-aminobut-2-yn-1-ol partir du but-2-yn-1,4-diol commercial. Aprs plusieurs
essais infructueux de couplage de ce bras de type amino-alcool par raction de Mitsunobu,
nous avons dcid de synthtiser le driv (45) par substitution nuclophile de ladnine sur
un msylate propargylique (schma 45).

HO HN HO OH GP MsO HN GP
N
N
N
N
NH
2
NHGP
Schma 45

Lintroduction de la fonction amine sur le but-2-yn-1,4-diol commercial a t ralise via
une monomsylation de ce diol, suivie par un traitement par lammoniaque de lalcool
obtenu (49). Lamino alcool (50) a alors pu tre facilement isol avec un bon rendement
(76%) aprs passage sur rsine basique changeuse danions. Lamine a ensuite t protge
sous forme de carbamate de tert-butyle dans les conditions usuelles pour aboutir au
89

compos (51). Enfin, le driv (52) est quantitativement obtenu aprs activation de la
fonction alcool primaire de (51) (schma 46).
CH
3
SO
2
Cl, NEt
3
THF anh.
(49), 45%
OH
HO
1) NH
4
OH, H
2
O
2) Dowex 550A OH
(50), 76%
OMs
HO
NH
2
HO
Boc
2
O, NEt
3
NH
HO
THF anh.
(51), 72%
O
O
H
3
C
CH
3
CH
3
MsCl, NEt
3
THF anh.
(52), quant.
NH
MsO
O
O
H
3
C
CH
3
CH
3
Schma 46

Aprs lobtention du mesylate (52), nous avons procd son couplage ladnine par
substitution nuclophile. Plusieurs bases peuvent tre utilises pour gnrer lanion
adninyle, citons : lhydrure de sodium
192
, le carbonate de csium
193
, le carbonate de
potassium ou la trithylamine
194
dans un solvant polaire comme le DMF ou le DMSO. Lagent
lectrophile est un halognure
195,196
ou un ester sulfonique
197,198,199
. Les iodures de ttra-
alkylammonium ont galement t utiliss pour favoriser la raction
200

. Ces N-alkylations
sont connues pour tre rgioslectives et conduire majoritairement au produit alkyl en N9.
2) Br(CH
2
)
4
OAc
N
N
N
H
N
NH
2
N
N
N
N
NH
2
OAc
N
N
N
N
NH
2
OAc
+
54% 15%
1) K
2
CO
3,
DMF 7
9
Schma 47. Daprs Volpini et al.
201

Le greffage du bras (52) sur ladnine a alors t ralis dans des conditions de
substitution nuclophile en utilisant le carbonate de potassium dans le DMF. Aprs 2h30
75C, la raction a conduit rgioslectivement lisomre alkyl en N9 (53) avec un
90

rendement de 75%. Il est noter quaucune trace disomre N7 na pu tre observe. La
dprotection de la fonction amine en milieu acide chlorhydrique a ensuite conduit au
chlorhydrate damine correspondant qui a t neutralis par passage sur la rsine basique
DOWEX 550A OH pour finalement obtenir le driv (45) avec un bon rendement global
(schma 48).
N
N
N
H
N
NH
2
1) K
2
CO
3
, DMF, 75C
2)
N
N
N
N
NH
2
NHBoc
(53), 75%
NHBoc MsO
(52)
DMF, 75C, 2h30
1) HCl, H
2
O
2) Dowex 550A OH
(45), 80%
N
N
N
N
NH
2
NH
2

Schma 48

Le driv adnine-bras-NH
2
(45) a alors servi de prcurseur commun pour accder aux
amines (46), (47) et (48) par rduction partielle ou totale de la triple liaison (schma 49).
H
2
(1atm), Pd Lindlar
N
N
N
N
NH
2
NH
2
(46), 67%
N
N
N
N
NH
2
NH
2
(45)
, MeOH
N
LiAlH
4
, A
(47), 20%
N
N
N
N
NH
2
NH
2
THF anh.
H
2
(1atm), Pd/C
(48), quant.
N
N
N
N
NH
2
NH
2
MeOH

Schma 49
91

Lamine allylique (46) de configuration Z est obtenue, avec 67% de rendement, par
hydrognation catalytique de la fonction alcyne de (45) en prsence de palladium Lindlar et
de quinoline. La rduction de la triple liaison avec de lhydrure de lithium et daluminium
dans du THF reflux a conduit, quant elle, lallylamine trans (47) avec un trs faible
rendement (de nombreux produits de dgradation ont t observs par CCM). Enfin,
lhydrognation catalytique sur palladium sur charbon a permis daccder au driv satur
(48) quantitativement.

-
Quelle que soit la mthode utilise, la raction de N-alkylation de ladnine a toujours
conduit un seul rgioisomre qui, au vu des donnes de la littrature, correspondait trs
probablement lisomre alkyl en position N9. Toutefois, nous avons effectu une tude
RMN bidimensionnelle pour confirmer la rgioslectivit de nos produits dalkylation. Cette
tude a t ralise sur les composs (39) et (47) issus dune alkylation mene
respectivement par raction de Mitsunobu ou par substitution nuclophile. Les spectres
HMBC (corrlation htronuclaire {
1
H,
13
C} longue distance,
3
J
C,H
) ont t enregistrs pour
chacun de ces deux drivs (figure 45).
Rgioslectivit de lalkylation de ladnine :

N
N
N
N
N
8
H
9
1'
4
5
H
NH
2
H H
N
N
N
N
N
8
H
9
1'
4
5
H
H H
NHCBz
(47)
(39)

Figure 45. Corrlations {
1
H,
13
C} observes sur les spectres HMBC des drivs (39) et (47)

Dans les deux cas, il existe une corrlation entre les protons du groupement NH
2
de
ladnine avec le carbone quaternaire C5 (o = 119ppm) alors que les protons du CH
2
(1)
directement li ladnine corrlent avec les carbones C8 et C4 (respectivement o = 140
ppm et 149 ppm). Ces rsultats sont donc en accord avec une rgioslectivit de la N-
alkylation en faveur de lisomre N9.
92

Les spectres UV de nos produits confirment galement cette rgioslectivit. En effet,
plusieurs tudes
201,202

ont signal une diffrence de longueur donde dabsorption en
spectromtrie UV pour les isomres N7 et N9 de ladnine : le pic dabsorption des drivs
N7 est lgrement suprieur 270 nm alors que celui des drivs N9 se trouve vers 260 nm.
Or, nos produits ont montr un pic dabsorption 260-261 nm, ce qui tait en accord avec
des drivs dadnine N9-alkyls.
-

Voies de synthse infructueuses :
Pour le compos (46)
Avant dobtenir ce compos par rduction partielle de la triple liaison du compos (45),
nous avons explor une voie de synthse partir du but-2-ne-1,4-diol, commercial (schma
50). Ladnine pouvant tre N-alkyle par substitution nuclophile, nous avons dcid de
prparer le msylate (55) en deux tapes partir du diol. Lalcool (54) est tout dabord
prpar par monoprotection du diol avec un groupement 2-ttrahydropyranyle. La fonction
hydroxyle rsiduelle de (54) est ensuite quantitativement msyle dans les conditions
classiques. Le msylate (55) a alors pu tre mis en uvre dans une raction de N-alkylation
de ladnine par substitution nuclophile.
OH HO DHP, pTsOH
DCM, TA, 2h
OTHP HO
(54), 43%
MsCl, NEt
3
THF, 0C, 2h
OTHP MsO
(55), quant.
Schma 50

La N-alkylation de ladnine par le msylate (55) a t mene dans le DMF en utilisant
K
2
CO
3
comme base et a conduit aprs 1h30 70C au driv alkyl en N9 (56) avec 47% de
rendement.
93

N
N
N
H
N
NH
2
1) K
2
CO
3
, DMF, 40C, 30mn
2)
70C, 1h30
N
N
N
N
NH
2
OTHP
(56), 47%
HCl 1N
70C
N
N
N
N
NH
2
OH
(57), quant.
1) MsCl, NEt
3
, DCM
2) NH
4
OH
3) NaOH 1N
N
N
N
N
NH
2
NH
2
(46)
OTHP MsO
(55) 9
Schma 51. Tentative de synthse du driv adnine-bras-NH
2
(46).

Nous avons ensuite tent de prparer lamine (46) partir de lalcool (57), obtenu aprs
hydrolyse du groupement THP en milieu acide. La stratgie envisage consistait introduire
la fonction amine via une activation de lalcool (57) sous forme de msylate directement
trait par lhydroxyde dammonium. Cependant, le driv (46) na pas pu tre extrait du
milieu ractionnel aqueux malgr des lavages basiques pour obtenir lamine libre. Cette voie
a donc t abandonne.
Pour le compos (45)
Pralablement la synthse du bras (52) expose dans le schma 46, nous avions tent
dintroduire la fonction NH
2
sur le but-2-yn-1,4-diol en utilisant la raction de Gabriel. Le N-
alkylphtalimide (58) a t synthtis par raction de Mitsunobu applique une des
fonctions hydroxyle du diol en prsence de triphnylphosphine et dazadicarboxylate de
diisopropyle (DIAD)
203

. Le produit (58) a t obtenu avec un rendement moyen de 44%, du
fait de la formation probable du driv bis-phtalimide.
HO OH
HN
O
O
+
N
O
O
HO
DIAD, PPh
3
THF, 0C
(58), 44%

Schma 52

94

Le motif phtalimide tant un groupement protecteur de lamine primaire, nous avons
directement coupl lalcool (58) ladnine par raction de Mitsunobu. Le couplage a
conduit au produit attendu (59) avec toutefois un trs faible rendement. De plus, une
tentative douverture du groupement phtalimide par une solution aqueuse de mthylamine
na pas abouti lamine dsire (45) (schma 53).

N
O
O
DIAD, PPh
3
, THF anh.
(59), 15%
N
N
N
H
N
NH
2
N
N
N
N
NH
2
NH
2
N
N
N
N
NH
2
CH
3
NH
2
N
O
O
HO
(58)
H
2
O
(45)

Schma 53

Au vu de ces rsultats, le groupement phtalimide a t remplac par un groupement
carbamate de benzyle. Le driv N-Cbz du 4-aminobut-2-yn-1-ol a t synthtis partir du
compos (58) (schma 54). Aprs dprotection par MeNH
2
, lamino alcool
intermdiairement obtenu est transform en chlorhydrate (50).HCl pour permettre sa
purification par prcipitation en milieu organique. Cet ammonium a directement t mis en
uvre dans une raction de protection par le groupement benzyloxycarbonyle pour
finalement donner le produit (60) avec un rendement global de 40% par rapport (58).

95

N
O
O
HO
1) CH
3
NH
2
, H
2
O
2) HCl, H
2
O
NH
2
HO
PhCH
2
OCOCl
Na
2
CO
3
H
2
O
NH
HO
(60), 40%
(58)
, HCl
(50).HCl, quant.
O
O

Schma 54

Le couplage entre lalcool (60) et ladnine par raction de Mitsunobu a conduit au
produit dalkylation N9 (61) mais toujours avec un faible rendement (17%). Lhydrognation
catalytique ne pouvant pas tre applique en raison de la prsence de la triple liaison, nous
avons eu recours un agent nuclophile pour liminer le groupement Cbz. Le carbamate
(61) a donc t trait par TMS-I, engendr in situ partir du chlorure de trimthylsilyle et de
liodure de sodium. Malheureusement, cette raction na donn que des produits de
dgradations, ce qui nous a oblig abandonner cette voie pour privilgier la stratgie via
une substitution nuclophile dcrite plus haut.
NHCbz
DIAD, PPh
3
, THF anh.
(61), 17%
N
N
N
H
N
NH
2
N
N
N
N
NH
2
NH
2
N
N
N
N
NH
2
TMSCl, NaI
MeCN
NHCbz HO
(60)
(45)
Schma 55

4.1.3. Couplage des drivs adnine-bras-NH
2
avec les acides (29) et (30)
Les diffrents composs bivalents ont t obtenus dans les conditions classiques de
couplage peptidique ralis entre les amines synthtises prcdemment et les drivs de
progestrone (29) et (30) comportant une fonction COOH respectivement en position 17 et
96

7. Les acides carboxyliques (29) et (30) ont t pralablement transforms en esters activs
par raction avec le N-hydroxysuccinimide (HOSu) en prsence de dicyclohexylcarbodiimide
(DCC). Ces esters activs ont ensuite t mis en raction avec les diffrentes amines pour
accder aux deux sries de ligands bivalents en C20 et en C7.
Dans le cas des couplages en position 20 de la progestrone, lester activ (62)
204
DCC, HOSu
O
H
3
C
H
3
C
O
OH
(29)
THF
O
H
3
C
H
3
C
O
O
N
O
O
(62), 55%
a non
seulement pu tre purifi mais il a montr une bonne stabilit dans le temps, ce qui a permis
de le stocker en vue des couplages suivants.

Schma 56

Les ractions de couplage ont alors t effectues dans le DMF en prsence de
diisopropylthylamine (DIEA) pour maintenir un milieu alcalin ncessaire ce type de
raction (schma 57). Sept composs bivalents en srie C20 ont t obtenus avec des
rendements moyens excellents (tableau 5).

Adnine-Y-NH
2
DIEA, DMF, TA
O
H
3
C
H
3
C
O
NH
Y
(62)
O
H
3
C
H
3
C
O
O
N
O
O
N
N
N
N
H
2
N
(42)-(48)
(63)-(69)

Schma 57

97

Tableau 5. Rendements de couplage peptidique en srie C20.
Y Bivalents C20 Rendements (%)
a
-(CH
2
)
4
- (63) 77
-(CH
2
)
6
- (64) 79

(65) 92

(66) 55

(67) 40

(68)
(69)
60
61
a
Rendements isols

Les couplages en srie C7, quant eux, ont t effectus dune manire un peu
diffrente. En effet, lester activ, synthtis de manire analogue, sest dgrad sur plaque
CCM prparative. Le couplage peptidique a donc t ralis selon un processus squentiel
one-pot .
Lacide (30) a t activ par le N-hydroxysuccinimide en prsence de DCC dans le DMF
pendant la nuit temprature ambiante. Chacun des cinq drivs adnine-bras-NH
2
(42) et
(45)-(48) a ensuite t additionn pour conduire dans tous les cas et de manire inattendue,
deux composs en proportion gale : le produit de couplage peptidique (srie a) et le
produit rsultant de louverture du cycle succinimide par attaque nuclophile de lamine sur
lun des deux carbonyles de ce noyau (srie b). Ces deux sries de bivalents ont t obtenus
avec des rendements globaux moyens faibles (schma 58, tableau 6).
Louverture du cycle succinimide a rarement t dcrite dans la littrature. Il existe
cependant quelques exemples dattaque nuclophile dune amine secondaire
205
, ou dun
alcool
206
sur lun de ses groupements carbonyles. Dans notre cas, lencombrement strique
98

de lester activ plus important en C7 quen C20 doit probablement dfavoriser les
attaques nuclophiles sur cet ester tout en favorisant celles qui peuvent se tenir sur des sites
lectrophiles plus loigns du squelette strodien.

2) Adnine-Y-NH
2
1) DCC, NHS, DMF, 15h
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
(30)
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
COOH
H
N
Y
N
N
N
N
NH
2
O
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
H
N
Y
N
N
N
N
NH
2
O
O
N
H
O
O
DIEA, DMF, TA
(42), (45)-(48)
(70)-(74)
a b
+
Schma 58

99

Tableau 6. Rendements de couplage peptidique en srie C7.
Y Bivalents C7a/C7b Rendements (%)
a
-(CH
2
)
4
- (70)-a/(70)-b 32 / 23
-(CH
2
)
6
- (71)-a/(71)-b 37 / 31

(72)-a/(72)-b 9 / 5

(73)-a/(73)-b 22 / 21

(74)-a/(74)-b 28 / 26
a
Rendements isols

4.2. Evaluation biologique des ligands bivalents progestrone-
adnine
Lvaluation biologique des dix-sept composs bivalents synthtiss dans le cadre de
cette thse a t ralise en premier lieu, par le Dr Catherine Grenot (MCU-PH) et le Dr.
Ghina Alameh (thse soutenue en 2009) de notre quipe INSERM U863/EA 4443, puis par
M
me
Eva Matera de lquipe du Pr. Charles Dumontet (INSERM U590, Facult de Pharmacie
de Lyon) aprs le dpart de Ghina Alameh.
4.2.1 Principe du test
Lactivit inhibitrice de nos composs bivalents vis--vis de la Pgp a t value en
mesurant laugmentation de laccumulation de la daunorubicine (anticancreux fluorescent)
dans des lignes cellulaires tumorales surexprimant la Pgp (cellules leucmiques humaines
K562/R7), par cytomtrie en flux.

100

- La culture cellulaire :
La ligne cellulaire K562/R7 est issue dune ligne de leucmie mylode chronique
humaine sensible la doxorubicine (ligne K562/S). Cette ligne a t rendue rsistante en
induisant lexpression de la Pgp par exposition la doxorubicine des concentrations
variables (de 0.5 10 nM). Les cellules rsistantes ainsi obtenues sont ensuite maintenues
dans un milieu nutritionnel (milieu RPMI
i
- Le substrat fluorescent :
1640 + srum de veau ftal 10% PAA)
supplment en antimicrobiens : pnicilline (100 UI/mL), streptomycine (100 g/mL) et
nystatine (20 UI/mL). La rsistance cellulaire est conserve grce la prsence dune
concentration constante de doxorubicine (5nM). La surexpression du gne mdr1 a t
vrifie dans cette ligne par PCR quantitative, et la prsence de la Pgp confirme par
Western Blot.
La daunorubicine (DNR) (figure 46) est un agent intercalant et inhibiteur de la
topoisomrase II, de la famille des anthracyclines, utilis dans le traitement de certaines
leucmies et lymphomes. La DNR est un substrat transport par la Pgp
207
O
O
O
OH
OH
O
O O
H
3
C
OH
CH
3
OH
NH
2
R= -H: Daunorubicine
-OH: Doxorubicine
R
.

Figure 46

- Mesure de laccumulation de la daunorubicine :
Les cellules K562/R7 (environ 10
6
cellules) sont incubes dans 1 mL de milieu RPMI 1640
pendant 1 heure 37C sous 5% CO
2
, avec 17 M de DNR, en absence ou en prsence dun
inhibiteur de la Pgp (10 M ou 50M). Un tmoin dautofluorescence des cellules (sans DNR

i
RPMI : milieu de culture cellulaire humaine dvelopp par Moore et al. au Roswell Park Memorial
Institute ; PAA : socit produisant des cultures cellulaires.
101

ni modulateur) ainsi quun tmoin ngatif (DNR seule) sont galement prpars. La mesure
de laccumulation de la DNR est ralise par un cytomtre FACS-II aprs lavage par un
tampon PBS afin dliminer toute fluorescence extracellulaire. Laugmentation de la
fluorescence intracellulaire est synonyme daugmentation de laccumulation de la DNR, et
donc dune inhibition de la Pgp par le modulateur test.

- Les contrles positifs :
Laccumulation de la DNR aprs incubation avec les modulateurs tester est compare
son accumulation aprs incubation avec les inhibiteurs de rfrence : la progestrone (10
M ou 50 M) ou la ciclosporine A (3.3M).

4.2.2. Rsultats et discussion
Une premire campagne de tests a t ralise par le Dr Catherine Grenot et Ghina
Alameh sur les sept drivs bivalents progestrone-adnine en position C20, (63)-(69). La
synthse et lvaluation biologique de ces composs en tant que modulateurs de la Pgp ont
t publies dans Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters en 2010
208
Les rsultats des tests daccumulation de la DNR mens sur ces sept drivs sont
prsents dans la figure 47 o laccumulation de la DNR sans modulateur a t considre
comme rfrence (100%). Ces composs ont t tests la concentration de 10 M. Il faut
noter qu cette concentration, leur cytotoxicit sest avre nulle vis--vis des cellules K562
ne surexprimant pas la Pgp. En effet, dans tous les cas, la survie cellulaire, aprs 24h
dincubation en prsence de progestrone ou de modulateurs (63)-(69), tait comprise entre
80% et 100% par rapport au contrle.
.
Ces bivalents en C20 se sont avrs des modulateurs de la Pgp peu actifs une
concentration de 10 M. Quelle que soit leur rigidit, les composs possdant les bras
espaceurs les plus longs ont montr une activit inhibitrice analogue voire un peu suprieure
celle de la progestrone (cas du driv (64) avec une chane hexamthylnique). Par
contre, les composs chane courte (63), (65), (66) et (67) ont montr une activit nulle ou
infrieure celle de la progestrone. Ce rsultat semble suggrer que, dans le cas de ces
quatre derniers drivs, le motif progestrone ne se positionnerait pas correctement dans
son site sur la Pgp du fait de la prsence du motif adnine-bras, trop encombrant.
102

Figure 47

M
me
Eva Matera du laboratoire du Pr. Charles Dumontet a ralis une deuxime srie de
tests qui a permis dvaluer lactivit inhibitrice des dix drivs bivalents en C7
prcdemment obtenus. Pour comparaison, nous y avons galement inclus les deux
composs en C20, (64) et (65), qui avaient respectivement montr lactivit la meilleure et la
plus faible une concentration de 10 M. Les mmes conditions exprimentales ont t
appliques que prcdemment. Nanmoins, ces tests ont t raliss en prsence de 10 M
ou 50 M de progestrone et de modulateurs. Cette dernire concentration a t choisie
afin de se placer dans des conditions o la progestrone montre une activit inhibitrice
significative vis--vis de la Pgp, car 10M, la progestrone na montr quune faible activit
inhibitrice (figure 47).
Ainsi, les rsultats de tests des dix produits bivalents en C7 prsentant une liaison amide
(srie a) ou un radical succinimidyle (srie b) - (70)-a,b, (71)-a,b, (72)-a,b, (73)-a,b, et (74)-
a,b - sont prsents dans la figure 48. Laccumulation de la DNR sans modulateur est
toujours considre comme rfrence (100%).

100%
125%
97.5%
(+8.7%)
137.5%
(+17.1%)
76.5%
(+10)
90.25%
(+8.3)
107.75%
(+3.2)
123.6%
(+7.7)
122.6%
(+0.6)
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
103

Figure 48

Les rsultats de ces tests ont confirm que, contrairement 10 M, la progestrone
montrait une activit inhibitrice significative de la Pgp pour une concentration de 50 M. Par
contre, quelle que soit la concentration utilise, et contrairement aux drivs dvelopps
par Leonessa et al.
174
, aucune inhibition nest observe en prsence de nos drivs bivalents
en C7. Par contre, ces tests ont confirm les rsultats prcdemment obtenus concernant le
compos (64), qui a montr une activit inhibitrice significativement plus importante que la
progestrone 50M.
En conclusion, parmi les dix-sept composs bivalents synthtiss et tests, le compos
(64) o ladnine est relie la progestrone par un bras hexamthylne en position 20 sest
avr le plus actif puisquil a montr une activit inhibitrice une fois et demie suprieure
celle de la progestrone. Bien que la concentration requise pour cette activit (50 M) soit
trop leve pour que (64) soit considr comme un bon inhibiteur de la Pgp, lamlioration
0%
50%
100%
150%
200%
250%
300%
350%
400%
450%
500%
O
H
3
C
H
3
C
O
NH
(64)
N
N
N
N
H
2
N
104

constate par rapport la progestrone pourrait signifier que laffinit de liaison du noyau
progestrone la Pgp serait renforce par la fixation simultane du motif adnine au site
ATP. Cette hypothse pourra tre confirme par une tude actuellement en cours (par le Dr
P.Lawton du Laboratoire de Parasitologie de la Facult de Pharmacie de Lyon) sur la capacit
ventuelle du compos bivalent (64) inhiber lactivit ATPasique du fragment recombinant
H6-NBD1 de CpABC3, apparente la glycoprotine-P.
Cette premire tude visant concevoir et synthtiser des inhibiteurs bivalents de la
Pgp a donc conduit une premire piste intressante qui mrite dtre exploite dans le
cadre du dveloppement de nouveaux composs bivalents plus actifs.

Chapitre 4: Synthse de bras de type oligocyclohexylidne
105

CHAPITRE 4
Synthse de bras de type oligocyclohexylidne

106

Dans le cadre de notre recherche sur les composs bivalents possdant une activit
biologique, nous nous sommes intresss la synthse de bras espaceurs de type
oligocyclohexylidne, oligomres constitus de groupes cyclohexyles relis entre eux par les
positions-1,4 via des doubles liaisons exocycliques. Ces structures rigides, connues pour
prsenter une bonne inertie chimique, offrent la possibilit de constituer des bras de
longueur bien dfinie, qui peut tre incrmente en ajoutant de nouvelles units
cyclohexylidne.
1. Rappels bibliographiques
1.1. Mthode de Barton et Kellogg
209,

210,

211
Le traitement de la cyclohexanone, ou de ses drivs substitus, par lhydrazine, conduit
la formation de la bicyclohexylidne azine, correspondant la condensation de deux
molcules de cyclohexanone avec une molcule dhydrazine. Le traitement de lazine par H
2
S
gazeux, utilis comme agent de transfert de soufre, permet la formation du noyau
thiadiazolidine qui est ensuite oxyd en thiadiazoline en prsence dactate de plomb. La
liaison thylnique est finalement gnre par extrusion de diazote et dsulfurisation en
prsence de triphnylphosphine chaud.

NH
2
NH
2
.H
2
O
EtOH
O O
O
O O
O O
N
N
H
2
S
EtOH
O O
O O
HN
HN
S
Pb(OAc)
4
O O
O O
N
N
S
CH
2
Cl
2
O O
O O
PPh
3
A
86% (deux tapes) 95% quant.
Schma 59. Synthse doligocyclohexylidne selon Barton.
209

107

Afin dobtenir des bicyclohexylidnes asymtriques, Hoogesteger et al.
212
O O
O
O O
N
N
O O
O O
N
NH
P O
EtO
EtO
THF
88%
89%
P
OEt
OEt
O
H
2
NHN
NaH
O
ont propos
une mthode base sur la synthse dazines asymtriques prpares par raction de Horner-
Emmons entre une hydrazone et une ctone. Les drivs oligocyclohexylidnes sont ensuite
obtenus selon la mthodologie prcdente.
Schma 60. Synthse doligocyclohexylidne selon Hoogesteger
212

Il faut cependant noter une baisse des rendements en srie asymtrique qui sexplique
par lchange des groupements alkyles des azines asymtriques conduisant des azines
symtriques :
N N
R
1
R
1
R
2
R
2
N N
R
2
R
2
R
2
R
2
N N
R
1
R
1
R
1
R
1
+

Schma 61

Cette raction secondaire constitue une limitation majeure cette mthode puisque le
nombre de sous-produits augmente proportionnellement avec le nombre dunits
cyclohexylidnes.

1.2. Synthse par raction de Grignard
Humphreys et al.
213
ont dvelopp une synthse de 4-(cyclohexylidne)cyclohexn-2-one
via une raction de Grignard du bromure de p-mthoxyphnylmagnsium sur la
cyclohexanone suivie dune rduction de Birch qui conduit, aprs acidification, la dinone
conjugue.
108

O
MgBr
MeO
HO
MeO
Li/NH
3
HO
MeO
O
EtOH/THF
60% en 2 tapes
Ether
TA puis A
AcOH

Schma 62

Cette dinone sest avre instable dans la plupart des conditions classiques de rduction
qui ont conduit la migration de la double liaison exocyclique dans le cycle. Par contre, une
rduction pralable de la dinone en dinol par le borohydrure de sodium, suivie dune
rduction slective de la double liaison la moins encombre en | du groupement hydroxyle
par le diimide, engendr in situ partir dhydrazine, a permis dobtenir majoritairement le
bicyclohexylidne dsir.
O
HO
HO
68%
1) NaBH
4,
MeOH
2) HCl, H
2
O
NH
2
NH
2,
Cu
II
quant.
MeOH
N
N H
H
-N
2
Schma 63

1.3. Synthse via des composs dinitrs vicinaux
214, 215
Les composs dinitrs vicinaux sont prpars par substitution nuclophile du
groupement nitro dun o,o-dinitrocycloalcane par le sel lithien dun nitrocycloalcane. Cette
raction est catalyse par la lumire visible. Le driv bicyclohexylidne est obtenu aprs
limination des deux groupements nitro par irradiation du produit dinitr en prsence dun

109

rducteur comme le sulfure de sodium. Bien quil nait pas t dtermin avec prcision, le
mcanisme de cette raction est suppos radicalaire.
NO
2
O
2
N
NO
2
Li
OH
NO
2
OH
O
2
N
66%
Na
2
S, hv
DMF
DMSO
OH
36%
hv
+
O
2
N
NaNO
2,
AgNO
3,
NaOH
EtOH, H
2
O
OH
42%
Schma 64

Le prcurseur dinitr est prpar par nitration oxydante du driv mononitr
correspondant en prsence de nitrite de sodium et de nitrate dargent en milieu alcalin.
NO
2
HO
NaOH
N HO
O
O
H
2
O
NaNO
2
AgNO
3
N HO
O
O
Ag
O
N
O
HO
NO
2
NO
2
Ag(0)

Schma 65

1.4. Synthse par raction de McMurry
Cette raction a t applique la synthse de bicyclohexylidnes symtriques
216
O
85%
TiCl
3,
K
THF, A
. A
notre connaissance, il nexiste pas dexemple dans la littrature rapportant la synthse
doligocyclohexylidnes substitus par la mthode de McMurry.

Schma 66

110

1.5. Synthse via des acides |-hydroxycarboxyliques
Humphreys et al.
217
HO COOEt
N Li
Li
THF
COOH
O
O
84%
COOLi
O
O
OSiMe
3
O
/ THF
O
HO
COOH
OH
26%
Ac
2
O
pyr
O OAc
O
O
56%
O OAc
73%
MeOCH
2
CH
2
OH
125C
NaHCO
3
MeOH/H
2
O
O OH
quant.
- CO
2
2) HCl/H
2
O
1)
ont propos une mthode de synthse de bicyclohexylidnes 4,4-
disubstitus par pyrolyse dune |-lactone, elle-mme issue dun acide |-
hydroxycarboxylique. Ce dernier est synthtis par addition nuclophile du dianion lithi
dun acide cyclohexanecarboxylique sur une cyclohexanone. La lactonisation de lacide |-
hydroxycarboxylique peut ensuite tre mene en prsence de diffrents agents dactivation
de la fonction hydroxyle (anhydride actique, chlorure de benznesulfonyle ou
chloroformiate dthyle). La double liaison exocyclique est finalement obtenue par pyrolyse
de la lactone reflux dans un solvant hydroxyl comme le 2-mthoxythanol qui a conduit
aux meilleurs rendements.
Schma 67

En raison des rsultats peu satisfaisants obtenue lors de la synthse
doligocyclohexylidnes, longue chane ou substitus, selon la mthodologie via les azines
dveloppe par Barton et Kellogg, Hoogesteger et al.
212
ont propos une nouvelle mthode
itrative qui, comme prcdemment, passe par un acide |-hydroxycarboxylique. Dans ce
cas, la double liaison exocyclique est forme par raction de dshydratation-dcarboxylation
sur cet acide en prsence du N,N-dimthylformamide dineopentylactal (DMF-DNPA).
111

COOH
O
O
O
COO
2 Li
LDA
THF
HOOC
O
O
OH
O
O
, THF
2) HCl, H
2
O
1)
86%
89%
MeCN, TA puis A
DMF-DNPA
O
O
Rdt global 55% partir de
la bicyclohexylidnone
O
H
3
O
Schma 68. Daprs Hoogesteger et al.
212

Cette mthode itrative permet de facilement allonger la chane aprs dprotection de la
fonction ctone en milieu acide, addition nuclophile du dianion dun acide
cyclohexanecarboxylique suivie dune raction de dshydratation-dcarboxylation.
Le mcanisme de cette raction implique une rtro-cycloaddition [2+2+2] thermique sur
lintermdiaire cyclique form par substitution nuclophile des deux groupements
neopentyloxy du DMF-DNPA par les fonctions OH et COOH de lacide |-hydroxycarboxylique.
Cette fragmentation conduit lalcne avec dgagement de dioxyde de carbone et
formation de dimthylformamide
218
R
2
R
1
R
4
R
3
HOOC OH
N
CH
3
CH
3
O
O
H
O
N
H
O
O
2
t
BuCH
2
OH
O
H
N
CH
3
CH
3
CO
2
R
2
R
1
R
3
R
4
CH
3
CH
3
A
.

Schma 69

112

Il faut noter que les actals du DMF peu encombrs sont connus pour tre des agents
alkylants des acides carboxyliques pour conduire aux esters correspondants. Ltape
limitante du mcanisme destrification est lalkylation du carboxylate par le cation
alkoxyiminium selon une substitution nuclophile de type S
N
2 (schma 70)
219
R' OH
O
NMe
2
H
O O
+
k
R' O
O
R
R
N
CH
3
CH
3
H
O
R
+ RCH
2
OH
+
R' O
O
N
CH
3
CH
3
H
O
R
k'< k R' O
O
R
+
O
H NMe
2
S
N
2
. Or,
lutilisation dun actal encombr comme le DMF-DNPA permet dviter la raction
destrification. En effet, dans ce cas, le cation iminium ragit trs lentement avec le
carboxylate.

Schma 70

1.6. Structure
Le systme bicyclohexylidne peut adopter deux conformations (figure 49). Le passage
dune conformation lautre est possible temprature ambiante, mais lquilibre est en
faveur de la conformation anti qui ne prsente pas dinteractions striques 1,6-diaxiales.
anti syn
H
H
H
H

Figure 49

Les bicyclohexylidnes substitus en position 4 et 4 peuvent tre bloqus dans lune des
deux conformations si les substituants sont suffisamment encombrants. Ainsi, les deux
isomres cis et trans du 4,4-di-tert-butyl-bicyclohexylidne sont bloqus chacun dans une
conformation puisque le groupement tert-butyle occupe forcment la position quatoriale.
Lisomre trans est plus stable que lisomre cis (AAG
30C
= 0,95 kcal/mol)
220
.
113

cis
trans

Figure 50

Plus rcemment, Hoogesteger et al.
212
ont effectu une tude structurale plus
approfondie des oligocyclohexylidnes, par modlisation molculaire et diffraction des
rayons X. Ltude de modlisation, par mthode semi-empirique ou par calculs ab initio, a
prdit que les oligocyclohexylidnes sagencent sous forme dune chane dunits
cyclohexylidne en conformation chaise. Chaque unit cyclohexylidne incrmente la chane
dune longueur de 4,1 (tableau 7).
La cristallographie par diffraction des rayons X du trans-4,4"-diheptyl-1,1':4',1"-
tercyclohexylidne a confirm dune part, la gomtrie du systme en conformation chaise
et dautre part, lincrmentation de 4,1 par unit cyclohexylidne (figure 51).

n

Tableau 7. Longueur des oligocyclohexylidnes calcule par mthodes semi-empiriques et
ab initio (daprs Hoogesteger et al.
212
)
n Distance H...H
a
() Distance C...C
b
()

1 9,05 (9,03)
c
7,11 (7,16)
2 13,05 (13,19) 11,29 (11,39)

3 17,33 (17,35) 15,48 (15,60)

4 21,43 19,64

a
Distance entre les deux hydrognes terminaux quatoriaux (mthode semi-empirique).
b
Distance entre les deux carbones terminaux (mthode semi-empirique).
c
Valeurs entre parenthses : calculs ab initio.
114

Figure 51. Reprsentation de la structure cristalline par diffraction des rayons X du trans-
4,4"-diheptyl-1,1':4',1"-tercyclohexylidne, la distance entre les deux carbones terminaux est
mesure 11,42 (daprs Hoogesteger et al.
212
).

2. Travaux personnels : Rsultats et discussion
Dans le cadre de notre recherche concernant les ligands bivalents progestrone-adnine,
nous avons envisag de synthtiser des bras espaceurs de type oligocyclohexylidne
fonctionnaliss en position 4 et 4 afin dtre en mesure de raliser les couplages sur
ladnine (ou tout autre htrocycle azot) et la progestrone (figure 52). Pour accder ces
structures, nous avons explor diffrentes mthodes classiques de formation de double
liaison.
NH-P
HO
1) Couplage
l'adnine
2) Dprotection puis
couplage la progestrone
n

Figure 52

2.1. Essais par raction de Wittig
PPh
3
O
O
O R +
X
O
O
R

Schma 71

Le sel de phosphonium ncessaire pour le couplage de Wittig a t synthtis partir de
la cyclohexane-1,4-dione mono protge commerciale, le 1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-one.

115

Une rduction par le borohydrure de sodium dans le mthanol, permet de prparer le
cyclohexanol (75) quantitativement.
O
O
O
O
O
OH
NaBH
4
MeOH, TA, 2h30
(75) quant.

Schma 72

Nous avons ensuite tent de substituer directement le groupement hydroxyle par un
atome de brome. Pour ce faire, nous avons reproduit la mthode utilise par Kabalka et
al.
221
O
O
OH
CBr
4
, PPh
3
CH
2
Cl
2
, 0C
nuit
(75)
O
O
Br
(76), 27%
pour synthtiser le mme bromure (76) utilisant du ttrabromure de carbone en
prsence de triphnylphosphine dans du dichloromthane. Malgr les bons rsultats dcrits
dans la littrature, nous navons obtenu quun faible rendement du compos attendu qui
tait accompagn de beaucoup de sous-produits non-identifis.

Schma 73

Nous avons alors opt pour une mthode alternative, en activant lalcool sous forme de
tosylate puis en effectuant une substitution nuclophile par le bromure de lithium au reflux
du THF. Aprs plusieurs essais de bromation infructueux en conditions thermiques
classiques, notre choix sest port sur lactivation micro-onde qui a donn de meilleurs
rsultats : rendement suprieur, moins de sous-produits et un temps de raction beaucoup
plus court par rapport celui ncessaire sous reflux.
O
O
OH
pTsCl
pyridine
(75)
O
O
OTs
(77), 90%
O
O
Br
LiBr / THF
MO, 150C, 3 min
(76), 70%
TA, nuit

Schma 74

Malheureusement, la synthse du bromure de phosphonium partir de (76) na pas
abouti, malgr les diffrents essais mens pour mettre au point la raction (schma 75). La
116

raction a t conduite soit sous reflux du xylne, soit sous activation micro-onde dans
diffrents solvants (tolune, chloroforme ou DMF) et diffrentes tempratures.
Dans tous les cas, la raction nvoluait pas, et aucun produit correspondant au bromure de
phosphonium (78) na pu tre isol.
O
O
Br
(76)
O
O
PPh
3
Br
(78)

Schma 75

Par consquent, nous avons dcid dexplorer la synthse du tosylate de phosphonium
(79) partir de (77). Sous reflux du xylne pendant trois jours, la raction donne le sel (79)
avec un rendement de 40% aprs purification sur colonne. La raction de Wittig tant
gnralement dcrite avec des halognures de phosphonium, nous avons procd un
change danions par passage sur rsine Dowex pour remplacer lanion tosylate par un
chlorure. Le chlorure de phosphonium (80) a t obtenu avec un rendement quantitatif.
O
O
OTs
(77)
O
O
PPh
3
PPh
3
xylne, A
3 jours
(79), 40%
O
O
PPh
3
Cl
Dowex Cl
OTs
(80), quant.
MeOH
Schma 76

Le premier partenaire du couplage de Wittig en main, nous avons ensuite procd la
synthse du deuxime, la ctone (82) partir du trans-4-aminocyclohexanol, commercial.
Aprs protection de la fonction amine sous forme de carbamate et oxydation de la fonction
alcool par le chlorochromate de pyridinium, nous avons obtenu la cyclohexanone (82) avec
un excellent rendement global (97% pour deux tapes).
OH
(Boc)
2
O
NEt
3,
THF
(81), 97%
(82), quant.
H
2
N OH BocHN
O BocHN
PCC
CH
2
Cl
2
0C TA, 3h
TA, nuit

Schma 77

117

Le compos N,N-diprotg (83) a galement t synthtis partir de lamine
monoprotge (82) en utilisant le mme groupement protecteur. Les deux composs ont
t engags dans les essais de couplage suivants.
O (Boc)
2
N
(Boc)
2
O, DMAP
THF, A, 2h
(83), 63%
O BocHN
(82)

Schma 78

Plusieurs tentatives de ractions de Wittig ont ensuite t effectues (tableau 8) en
prsence des sels de phosphonium (79) et (80). Quelles que soient les conditions de solvant
et de temprature et quel que soit le driv carbonyl utilis, aucun essai na abouti au
produit de couplage attendu. Lutilisation de nBuLi dans le THF 0C a toutefois permis
dobserver des traces de lalcne (85) produit de la raction de Wittig entre le phosphonium
(80) et le benzaldhyde. Le driv (85) a uniquement pu tre identifi par son spectre RMN
1
H. Bien que lanion ylure semble avoir t engendr chaque essai, comme en tmoignait
la coloration rouge du milieu, le couplage avec le driv carbonyl prsent na jamais abouti,
probablement en raison de lencombrement strique du phosphonium et/ou de la ctone.
Les seuls produits qui ont t isols aprs raction taient la ctone ou laldhyde de dpart
dans leur presque totalit, et loxyde de diphnylphosphine (84) rsultant de lhydrolyse de
lylure de phosphonium. La formation de ce driv (84) a t observe lissue de chaque
tentative de couplage. Il a t isol et identifi une seule fois (tableau 8, entre 4) avec 80%
de rendement calcul par rapport au phosphonium de dpart.
Suite ces rsultats, le couplage par raction de Wittig a t abandonn.
solvant anhydre
2) Hydrolyse
O
O
PPh
3
X
O
O
PPh
3
O
O
PPh
2
(84)
(79) X = OTs
(80) X = Cl
base
X
1) R
1
R
2
C=O
+
O
O
R
1
R
2
(85) R
1
= Ph, R
2
= H
O

Schma 79
118

Tableau 8. Tableau rcapitulatif des essais de ractions de Wittig.
Entre RPPh
3
+
X
-
R
1
R
2
C=O Base Conditions
Produit de
couplage
1
2
3
4
5
6
7
8
(79)
(79)
(79)
(80)
(80)
(80)
(80)
(80)
(82)
benzaldhyde
benzaldhyde
benzaldhyde
(83)
(83)
cyclohexanone
cyclohexanone
NaH
NaH
nBuLi
nBuLi
nBuLi
NaH
NaH
NaH
DMSO, 50C
DMSO, 50C
THF, 0C
THF, 0C
THF, 0C
THF, reflux
THF, reflux
DMSO, 60C
-
-
-
(85) traces
-
-
-
-

2.2. Essais par raction de Grignard
O
O
BrMg R +
O
O
R
O

Schma 80

Afin de synthtiser le bromure prcurseur du magnsien, le 7-oxabicyclo[2.2.1]heptane
commercial a t mis en raction avec lacide bromhydrique pour obtenir aprs une semaine
le trans-4-bromocyclohexanol (86). La fonction alcool a ensuite t protge sous forme
dther de tert-butyldimthylsilyle, groupement protecteur connu pour sa bonne stabilit
dans les conditions de la raction de Grignard.
O
HO
Br
HBr, 48%
H
2
O, 50C
6 jours
TBSCl
Imidazole, DMF
TBSO
Br
(87),80% (86),71%
TA, nuit

Schma 81

La formation du magnsien partir du bromure (87) a t matrise aprs quelques
essais. La raction est effectue sous reflux du THF, en prsence de traces de 1,2-
dibromothane comme activateur. Aprs consommation du magnsium, la solution est
119

refroidie 0C et la cyclohexane-1,4-dione monoprotge est ajoute. Le suivi CCM de la
raction montre que la ctone est consomme au bout dune heure environ. A lissue de la
raction, plusieurs produits ont pu tre spars par chromatographie :
- Lalcool attendu (88) a t isol avec un rendement de 32% (par rapport la ctone),
sous la forme dun mlange de deux isomres cis/trans qui nont pas pu tre spars.
Cependant, sans pouvoir attribuer chaque strochimie, le spectre RMN
13
C montre
que lun de ces isomres est majoritaire.
- Le compos (89) qui rsultait dune raction daldolisation a t isol avec un
rendement de 62% (par rapport la ctone). Le magnsien agit dans ce cas-l en
tant que base et non pas en tant que nuclophile.
TBSO
Br
Mg
THF, A
TBSO
MgBr
O
O
O
TBSO
OH
O
O
+
O
O
O
HO
O
O
(88), 32%
(89), 62%
0C/1h puis TA/3h
(87)
H
THF
Schma 82

Lutilisation dorganocriques est lune des mthodes connues pour limiter les ractions
secondaires lies la basicit des organomagnsiens. Ces organomtalliques possdent une
basicit plus faible et conduisent de meilleurs rendements que les ractifs de Grignard lors
dune addition nuclophile sur une ctone nolisable
222
. Nous avons prpar
lorganocrique in situ partir de lorganomagnsien et de CeCl
3
anhydre, lui-mme prpar
par schage du chlorure de crium heptahydrat (CeCl
3
.7H
2
O), commercial, selon des
mthodes dcrites dans la littrature
223
. Pour engendrer lorganocrique, le chlorure de
crium doit tre pralablement activ par chauffage ou par ultra-sons
224
dans du THF
anhydre. On procde ensuite aux additions successives du ractif de Grignard puis de la
120

ctone. Malheureusement, malgr plusieurs essais, cette mthode nous a toujours conduit
des rendements en alcool (88) plus faibles que ceux obtenus sans chlorure de crium.
A ce stade de ltude, nous avons dcid de procder des essais prliminaires de
dshydratation pour nous assurer que nous serions en mesure datteindre le
bicyclohexylidne (90) partir de lalcool (88).
TBSO
OH
O
O
(88)
TBSO
O
O
(90)
?

Schma 83

Un essai de dshydratation a donc t men par action du chlorure de thionyle sur
lalcool (91), analogue de lalcool (88) et prpar par raction de Grignard du bromure de
cyclohexyl magnsium sur la mme ctone. Une fois obtenu, lalcool (91) est mis en raction
avec SOCl
2
dans la pyridine 0C. Aprs une heure, deux nouveaux produits, dont lun trs
majoritaire, sont apparus sur CCM. Aprs traitement et purification par chromatographie sur
gel de silice, seul le produit majoritaire a pu tre isol et identifi comme le produit
dlimination avec la double liaison endocyclique (93). Le second produit a t obtenu
ltat de traces et en mlange avec le produit (93). Ltude du spectre RMN
1
H de cette
fraction de mlange a montr que dans le produit minoritaire, les deux noyaux cyclohexyles
taient prsents, ainsi que la protection dioxolane, par contre ce produit ne contenait pas
dhydrognes thylniques. Ajoutons cel le fait que ce produit possde un Rf trs proche
de (93) sur CCM, et que les deux produits se rvlent par KMNO
4
(indiquant la prsence
dune double liaison). Ces observations nous permettent de supposer que le produit
minoritaire serait le bicyclohexylidne (92).
121

(93), 50%
SOCl
2
pyridine, 0C, 1h
O O O O
+
(91), 41%
(92), traces
Br
Mg
THF, A
MgBr
O
O
O
THF, TA, 3h
OH
O O
(91)
OH
O O

Schma 84

Lensemble de ces rsultats (faibles rendements daddition nuclophile et difficult
dobtention de la double liaison exocyclique par dshydratation) nous ont amen
envisager une autre voie de synthse des drivs bicyclohexylidnes.
2.3. Essais par raction de dshydratation-dcarboxylation
Nous avons finalement appliqu la mthode dcrite par Hoogesteger et al.
212
, des
synthons nous permettant de rpondre notre objectif de construire des bras espaceurs de
composs bivalents.
O
O
HOOC OGP +
O
O
OH
O

Schma 85

Lacide cyclohexanecarboxylique (95) a t synthtis, en deux tapes et avec un
excellent rendement, partir du (4-hydroxycyclohexyl)carboxylate dthyle,
commercialement disponible sous forme dun mlange de deux isomres. Dans un premier
temps, la fonction alcool a t protge par un groupement tert-butyldimthylsilyle dans les
conditions classiques. Lester a ensuite t hydrolys par LiOH pour conduire lacide (95)
122

dont la purification par chromatographie sur gel de silice sest avre ncessaire pour le bon
droulement des tapes suivantes. Cet acide sest avr hygroscopique, et a t conserv
dans un dessiccateur sur P
2
O
5
.
HO
COOEt
TBSCl
Imidazole, DMF
TBSO
COOEt
(95), quant.
(94), quant.
TBSO
COOH
LiOH
THF, MeOH
TA, nuit 60C, 3h
Schma 86

Le couplage entre lacide (95) et la cyclohexane-1,4-dione monoprotge a ensuite t
ralis dans le THF anhydre. Dans un premier temps, le dianion lithi de lacide (95) est
prpar basse temprature, en utilisant le LDA comme base. Le dianion donne une couleur
rouge la solution. La ctone est alors ajoute. Aprs disparition de cette dernire, le milieu
a t acidifi et lacide |-hydroxycarboxylique (96) a t isol, aprs chromatographie sur
colonne de silice, avec un rendement satisfaisant. Comme attendu, ce produit intermdiaire
a t obtenu sous forme dun mlange de deux isomres, qui ont pu tre spars. Toutefois,
leur sparation nest pas ncessaire en raison de la formation de la double liaison ltape
suivante. Nous avons galement constat la formation de deux produits de dgradation de
lacide (95) qui apparaissent avant laddition de la ctone. Leurs structures nont pas pu tre
lucides mais lutilisation cet acide en excs pourrait constituer un moyen doptimiser le
rendement daddition nuclophile.
(95)
TBSO
COOH
1) LDA, THF, -40C puis 0C/15 min
THF, -40C puis 50C/2h
TBSO
COOH
O
O
HO
(96), 53%
3) HCl, H
2
O
2)
O
O
O

Schma 87

Nous avons ensuite tent deffectuer la raction de dshydratation-dcarboxylation avec
lactal de DMF que nous avions notre disposition dans le laboratoire, cest--dire le
dimthylformamide dimthylactal (DMF-DMA). Comme dcrit dans la littrature (cf 1.5.
123

de ce chapitre), le produit attendu (90) a t obtenu avec un faible rendement, la raction
conduisant essentiellement lester mthylique (97).
TBSO
COOH
O
O
HO
(96)
TBSO
O
O
+
TBSO
COOCH
3
O
O
HO
(90), 30%
(97), 70%
H NMe
2
MeO OMe
Schma 88

Comme dcrit par Hoogesteger et al.
212
, nous avons par la suite utilis le DMF-
dinopentylactal (DMF-DNPA) au reflux de lactonitrile, pour obtenir le bicyclohexylidne
(90) avec un bon rendement aprs purification (schma 89).
TBSO
COOH
O
O
HO
(96)
DMF-DNPA
MeCN
TA/1h puis A/nuit
TBSO
O
O
(90), 90%

Schma 89

Afin de poursuivre llongation de la chane et coupler un deuxime motif
cyclohexylidne, la fonction alcool du compos (90) a t dprotge par le TBAF puis
oxyde en ctone par le PDC pour obtenir la ctone (99) avec un excellent rendement global
de 81% en deux tapes.
(90)
TBAF
HO
O
O
(98), 90%
TBSO
O
O THF, A, 1h30
PDC
CH
2
Cl
2
O
O
O
(99), 90%
TA, 2 jours
Schma 90

Le couplage avec lacide (95) a t effectu dans les mmes conditions que
prcdemment, aprs formation du dianion lithi. Nous avons de cette manire obtenu
lacide |-hydroxycarbolique (100) sous forme dun mlange de deux isomres avec un
124

rendement correct. Cet acide a t mis dans les conditions de raction de dshydratation-
dcarboxylation en prsence de DMF-DNPA pour conduire au tercyclohexylidne (101) avec
un rendement satisfaisant.
OH
O
O
(95)
TBSO
COOH
TBSO
HOOC
(100), 45%
1) LDA, THF, -40C puis 0C/15 min
3) HCl, H
2
O
2) (99), THF, -40C puis 50C/2h
MeCN
TA/1h puis A/24h
(101), 68%
DMF-DNPA
O
O
TBSO
Schma 91

2.4. Fonctionnalisation des oligocyclohexylidnes
Dans lobjectif de coupler les bras oligocyclohexylidnes obtenus ladnine, dune part,
et la progestrone dautre part, nous avons envisag dintroduire un groupement
hydroxymthyle en position 4, et un groupement aminomthyle en position 4. Ce carbone
supplmentaire loignera les fonctions alcool et amine du systme oligocyclohexylidne
facilitant ainsi les ractions de couplage lhtrocycle azot et au strode. De plus, il
confrera une plus grande flexibilit au bras espaceur. Les premiers essais de
fonctionnalisation ont t mens sur le systme bicyclohexylidne.
(98)
OH
O
O
NH-P
HO
1) Couplage l'dnine
2) Dprotection puis
couplage la progestrone

Schma 92

125

Dans cette perspective, nous avons choisi de remplacer la fonction alcool du produit (98)
par un groupement cyanure qui constitue un prcurseur du groupement aminomthyle.
Pour cela, nous avons essay une mthode directe, dcrite par Iranpoor et al.
225
(98)
PPh
3,
DDQ, NBu
4
CN
HO
O
O
MeCN
NC
O
O
(102)
, qui peut
tre considre comme une raction de Mitsunobu modifie, utilisant la
triphnylphosphine, la dichlorodicyanobenzoquinone (DDQ) comme lectrophile et le
cyanure de ttra-butylammonium comme source de cyanure. Malheureusement, plusieurs
essais, dans des conditions identiques celles de la publication dorigine, nont donn aucun
produit, et le produit de dpart a t totalement rcupr.

Schma 93

Une deuxime voie de synthse a alors t mise en uvre par activation de la fonction
alcool sous forme de msylate suivie du dplacement du sulfonate par un cyanure. Ainsi, le
msylate (103) a t synthtis partir de (98), dans des conditions classiques, avec un
excellent rendement. Le groupement cyanure a t ensuite introduit en faisant ragir (103)
avec le cyanure de ttra-butylammonium. La raction mene dans des conditions
thermiques classiques volue trs lentement et aboutit un grand nombre de sous-produits.
Par contre, sous activation micro-onde, elle devient trs rapide, et donne majoritairement le
produit dsir, accompagn toutefois de deux sous-produits : le produit dlimination (104),
et trs minoritairement, lisonitrile (105). Cet isomre a t identifi par son spectre RMN
1
H
o on observe un multiplet 3,78 ppm correspondant au proton en o de lisonitrile alors
que le proton correspondant dans le cyanure (102) se trouve 2,79 ppm, et par son spectre
infrarouge, prsentant une forte bande dabsorption 2139 cm
-1
, contre une bande
dabsorption moyenne 2233 cm
-1
pour le cyanure (102).
126

MsCl, NEt
3
MsO
O
O
(103), quant.
THF
HO
O
O
(98)
0C puis TA/1h
NBu
4
CN, THF
MO, 100C, 10min
C
O
O
O
O
N
O
O
(102), 47% (104), 33% (105), 8%
N
C
+ +
Schma 94

Un essai sous micro-ondes, 150C, pendant 3 minutes a conduit des rendements
presque identiques.
La synthse sest poursuivie par la dprotection de la fonction ctone du cyanure (102),
par hydrolyse acide du ctal. Les conditions douces de dprotection ont conduit la ctone
(106) avec un rendement quantitatif.
HCl 5%m.
NC
(106), quant.
H
2
O, THF
NC
O
O
(102)
O 70C / 1h
NC
OCH
3
NC
H
O
(107), 85%
HCl 6N, H
2
O
0C puisTA/1h
PPh
3
MeO
t
BuOK, THF
0C/30min puis TA/nuit
Cl

Schma 95
127

Nous avons ensuite envisag linsertion dune fonction aldhyde comme prcurseur du
groupement hydroxymthyle. Une raction de Wittig a donc t ralise sur la ctone (106)
(schma 95) en prsence du chlorure de mthoxymthyltriphnylphosphonium pour
conduire intermdiairement un ther dnol, qui est hydrolys en condition acide fort pour
donner laldhyde (107). Le produit (107) a t obtenu sous forme dun mlange de deux
isomres cis et trans.
La suite de la synthse a t effectue sur ce mlange, les deux isomres ntant spars
qu la dernire tape. Nous avons alors effectu la rduction simultane des fonctions
aldhyde et cyanure du driv (107) par LiAlH
4
dans le THF anhydre. Aprs deux heures de
reflux, la raction nous a permis dobtenir le compos (108) prsentant le groupe
hydroxymthyle en position 4 et le groupe aminomthyle en position 4. Cet amino-alcool,
toujours sous la forme dun mlange de stroisomres cis/trans, a t engag sans
purification supplmentaire dans la raction suivante qui consiste protger la fonction
amine par un groupement fluorenylmthyloxycarbonyle (Fmoc). Le choix de ce groupement
protecteur relevait de considrations pratiques. En effet, il rend le compos visible lUV, ce
qui a permis la sparation des deux isomres cis et trans (109a,b) par chromatographie sur
couche mince, aprs plusieurs lutions successives.
LiAlH
4
NC
H
O
(107)
FmocOSu
OH
H
2
N
+
(108), quant.
(109a) + (109b), 78%
THF
0C puis A/2h
OH
NH
O
O
NH
O
O
OH
H
H
H
H
H
2
O, MeCN
TA / nuit
NaHCO
3
Schma 96
128

Afin de dterminer la strochimie de chacun des deux composs (109a) et (109b), des
essais de cristallisation sont en cours, en vue dobtenir leur structure cristallographique par
diffraction des rayons X.
Nous navons pas pu effectuer des essais de couplage de ces composs ladnine et la
progestrone dans le temps imparti ce travail de thse.

Conclusion et perspectives
129

La multichimiorsistance lie aux transporteurs de la famille des ABC occupe une place
centrale parmi les mcanismes de rsistance des cancers vis--vis des traitements
chimiothrapeutiques. Plusieurs transporteurs membranaires sont impliqus dans cette
rsistance pliotropique aux agents anticancreux, dont la glycoprotine-P (Pgp) qui est la
plus tudie et la mieux connue. Son inhibition reste un dfi majeur pour la recherche dans
le domaine de la cancrologie depuis les deux dernires dcennies.
Dans le cadre de cette thse, nous nous sommes intresss la synthse et lvaluation
de molcules susceptibles dinhiber la Pgp, et de ce fait, augmenter la sensibilit des
tumeurs aux chimiothrapies.
Nous avons mis au point une nouvelle voie de synthse dhtrocycles azots de type
imidazo[4,5-b]pyridin-7-one, substitus en position 1, 2 et 4. Ces htrocycles possdent une
homologie de structure avec le noyau adnine, ce qui leur permettrait dtre des inhibiteurs
potentiels des ATPases, en particulier des transporteurs ABC.
Dans un premier temps, nous avons tudi la rgioslectivit de la N-alkylation des
imidazo[4,5-b]pyridine-4-oxydes en rationalisant notre travail exprimental par des calculs
thoriques.
N
N
N
O
Ph
+
N
N
N
O Ph
R
R
N1,N3-(11) R=H (N1/N3 = 70/30, 84%)
N1,N3-(12) R=CH
3
(N1/N3 = 30/70, 100%)
N
N
H
N
O
R
(9) R=H
(10) R=CH
3
1
3
2
2 2
1) K
2
CO
3,
DMF
2) PhCH
2
I
N1 N3

Il sest avr que, dans tous les cas, une interaction rpulsive X
-.
O
-
--N
+
entre lhalogne
partant et loxygne du N-oxyde en position 4 tend globalement lgrement dfavoriser
une approche en N3, orientant ainsi la raction vers la formation du produit N1. Cependant,
le groupement mthyle en position 2 exerce une telle gne strique sur le phnyle lors dune
approche en N1 de lhalognure de benzyle quil favorise la formation du produit N3 malgr
la rpulsion X
-.
O
-
--N
+
toujours prsente dans ltat de transition N3.
130

La synthse a ensuite t poursuivie ce qui nous a permis de dcrire trois nouveaux
produits possdant le noyau imidazo[4,5-b]pyridin-7-one, substitus en position 1 par un
groupement benzyle, et en position 4 par une chane tert-butoxycarbonyl aminoalcane 3, 4
ou 6 units mthylne. Le compos ayant une chane hexamthylnique se lie faiblement au
fragment recombinant H6-NBD1 du transporteur CpABC3 (analogue de la Pgp), toutefois il
ninhibe pas son activit ATPasique. La comparaison avec des imidazopyridinones
prcdemment synthtises dans notre laboratoire suggre quune fonction ester sur la
chane en position 4 soit prfrable une fonction NHBoc pour lactivit inhibitrice.
Par la suite, le noyau imidazo[4,5-b]pyridin-7-one peut constituer un chssis
molculaire permettant la synthse de drivs polysubstitus. Il est connu que le site de
liaison de ladnine dans les ATPases est adjacent plusieurs poches hydrophobes, et le
ciblage de ces poches par des substituants adapts pourrait augmenter laffinit du noyau
htrocyclique (dans notre cas limidazopyridinone) vis--vis du site ATP.
Au cours de ce travail de thse, nous nous sommes galement intresss la synthse de
drivs bivalents, contenant un noyau adnine, li par un bras variable en position 7 ou 20
de la progestrone. Ces bivalents ont t conus dans lobjectif de cibler simultanment le
site ATP et le site aux strodes de la Pgp.
Ainsi, nous avons dcrit la synthse de dix-sept composs bivalents, dont le motif
adnine-bras est li par une liaison amide la position 7 ou 20 de la progestrone. Lactivit
inhibitrice de ces composs a t value en mesurant laugmentation de laccumulation
intracellulaire, chez des lignes cellulaires surexprimant la Pgp (cellules leucmiques
humaines K562/R7), dun substrat fluorescent transport par la Pgp (la daunorubicine).
Parmi tous les composs tests, seul le compos bivalent possdant un bras
hexamthylnique coupl en position 20 du strode, a montr une activit inhibitrice
suprieure celle de la progestrone.
O
H
3
C
H
3
C
O H
N
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
20
7
H
N
O
Y
N
N
N
N
NH
2
Y
N
N
N N
NH
2
17
17

131

Ce premier rsultat pourrait constituer une base pour llaboration ultrieure de
bivalents ciblant la Pgp :
- Dans un premier temps, la position 20 du strode pourra tre conserve
comme point de couplage. La progestrone pourra tre remplace par des
squelettes strodes plus affins, dont la structure pourra sinspirer dautres
strodes inhibiteurs de la Pgp, tel que le RU486.
- Ladnine pourra galement tre remplace par un htrocycle possdant
une plus forte affinit pour le site ATP. Lvaluation pralable de lactivit
anti-ATPasique de ces htrocycles vis--vis du fragment H6-NBD1 de CpABC3
va constituer un outil prcieux pour aider au choix des meilleurs ligands du
site ATP, avant de procder leur couplage.
- Enfin, la synthse de bras espaceurs plus longs devra tre effectue. La
structure polymthylnique de ces bras pourra tre maintenue dans un
premier temps. En effet, des tests dactivit inhibitrice ont t effectus en
parallle sur des bivalents adnine-progestrone
i
Dans le cadre de notre recherche concernant les composs bivalents, nous nous sommes
particulirement intresss la synthse de bras de type oligocyclohexylidne. Ces
composs possdent une structure rigide et sagencent sous forme dune chane longueur
bien dtermine. De ce fait, ils pourraient constituer des bras rigides adapts aux composs
bivalents.
, possdant des bras de
nature polythylne glycol (PEG). Les tests biologiques ont montr que les
bivalents en C20 de la progestrone, avec un bras deux ou trois units
polythylneglycol, possdaient une activit moins importante que le bivalent
analogue bras hexamthylnique.
Nous avons synthtis un compos deux units cyclohexylidne, substitu sur les
carbones terminaux par un groupement hydroxymthyle en position 4, et par un
groupement aminomthyle en 4. Ces groupements fonctionnels ont t choisis pour
permettre des couplages ultrieurs analogues ceux dcrits dans cette thse. Nous avons

i
Synthse effectue au sein de notre quipe EA 4443, sous la direction du Pr. Roland Barret et du Dr
Thierry Lomberget.
132

galement montr que cette mthode itrative pouvait tre adapte des drivs
fonctionnaliss par la synthse dun compos trois units cyclohexylidne.
O
O
TBSO
OH
FmocHN
4
4'

Partie exprimentale
133

Partie exprimentale
Partie exprimentale
134

Partie Exprimentale Chimie

Matriels et mthodes

Toutes les ractions sensibles lair ou lhumidit ont t ralises sous atmosphre
dargon. Les points de fusion ont t mesurs avec un appareil Barnstead Electrothermal
9200 et nont pas t corrigs. Les spectres infrarouges ont t enregistrs en utilisant des
pastilles de KBr ou des films sur NaCl avec un appareil Perkin-Elmer FT-IR SPECTRUM ONE.

Les spectres RMN
1
H ont t enregistrs sur des spectromtres Bruker ALS300, Bruker
DRX300 ou Bruker DRX400 transforme de Fourier, avec un lock interne sur le deuterium,
en oprant une frquence de 300 MHz ou de 400MHz. Les spectres RMN
13
C ont t
enregistrs sur des spectromtres Bruker DRX300 ou Bruker DRX400 transforme de
Fourier, avec un lock interne sur le deuterium, en oprant une frquence de 75 MHz ou de
100MHz. Tous les spectres ont t enregistrs 25C. Les dplacements chimiques ont t
exprims en partie par million (ppm) par rapport au signal rsiduel du solvant deuter (o =
2.50 ppm en RMN
1
H et o = 39.52 ppm en RMN
13
C pour le DMSO-d
6
, o = 7.26 ppm en RMN
1
H et o = 77.16 ppm en RMN
13
C pour CDCl
3
, o = 3.34 ppm en RMN
1
H et o = 49.86 ppm en
RMN
13
C pour le CD
3
OD). La multiplicit du carbone a t dtermine par des expriences
DEPT. La spectromtrie de masse basse et haute rsolution a t enregistre avec un
appareil ThermoQuest FINNIGAN MAT 95 XL fonctionnant 70eV. La purification des
produits par chromatographie sur colonne de silice a t ralise avec de la silice Merck
Kieselgel 60 (40 -63 m). La chromatographie analytique sur couche mince (CCM) a t
ralise laide de plaques Merck (silice Kieselgel 60 F254, paisseur 200m sur aluminium).
La chromatographie prparative sur couche mince a t ralise laide de plaques Merck
2020 cm, Kieselgel 60 F254 (paisseur 250 m). Tous les ractifs chimiques commerciaux
ont t utiliss sans purification, sauf mention contraire. Les masses molaires (MM)
indiques dans la partie exprimentale sont exprimes en g/mol.

Partie exprimentale
135

- 3H-Imidazo[4,5-b]pyridine (7)
133

N
N
N
H
C
6
H
5
N
3
MM: 119.12
1
2
3
4
5
6
7
7a
3a

La 2,3-diaminopyridine (4,00g, 36,7mmol) et lorthoformiate de trithyle

(80mL,
483mmol)

sont introduits dans un ballon quip dun rfrigrant. Le mlange ractionnel est
port au reflux (150C) pendant 3h. Aprs vaporation des produits volatils, le rsidu marron
est trait par une solution aqueuse de HCl (37%, 40mL) et le reflux est poursuivi pendant 1h.
Le milieu ractionnel est ensuite neutralis par K
2
CO
3
solide jusqu' pH=7. La phase aqueuse
est extraite par lactate dthyle. Les phases organiques runies sont sches sur Na
2
SO
4

puis concentres pour donner le produit (7) sous la forme dun solide blanc (3.23g, 74%)
sans autre purification.
Pf= 152-154C (litt.152-153c)
1
H RMN (300MHz, DMSO-d
6
) o: 12.84 (bs, 1H, NH), 8.43 (s, 1H, H2), 8.35 (dd, 1H, J1=
1.5Hz, J2= 4.7Hz, H5), 8.02 (dd, 1H, J1=1.5Hz, J2= 7.9Hz, H7), 7.23 (dd, 1H, J1=4.7, J2= 7.9 Hz,
H6).
IR (KBr) v(cm
-1
): 3135, 3093, 3028, 2981, 2921, 2855, 2810, 1475, 1436, 1385, 1344,
1315, 1277, 1235, 1226, 1115, 954, 898, 789, 777.

- 2-Mthyl-3H-Imidazo[4,5-b]pyridine (8)
141

N
N
N
H
1
2
3
4
5
6
7
CH
3
C
7
H
7
N
3
MM: 133.15
7a
3a

La 2,3-diaminopyridine (1 g, 9.1 mmol) est mise en solution dans 20mL dorthoactate de
trithyle. Le mlange est chauff au reflux sous agitation pendant 3h30. Ensuite, le solvant
est vapor sous vide. Lacide chlorhydrique (37%, 10mL) est alors additionn au rsidu. Le
mlange est chauff au reflux sous agitation pendant 1 heure 105C. Aprs
Partie exprimentale
136

refroidissement, le mlange est neutralis avec Na
2
CO
3
solide jusqu pH=6-7. Aprs
extraction avec AcOEt, la phase organique est sche sur Na
2
SO
4,
filtre et vapore. La
purification du rsidu par chromatographie sur gel de silice (CH
2
Cl
2
/ MeOH, 90/10) conduit
au produit (8) (Rf= 0,2) sous la forme de cristaux bruns (780 mg, 78%).
Pf= 195-196C (litt. 195-197C).
1
6
) o: 12.69 (bs, 1H, NH), 8.23 (d, 1H, J=4.9 Hz, H5), 7.86 (d, 1H,
J=7.9 Hz, H7), 7.16 (dd, 1H, J1=4.9 Hz, J2=7.9 Hz, H6), 2.53 (s, 3H, CH
3
).
13
C RMN (75MHz, DMSO-d
6
) o: 153.54* (C2), 151.92* (C3a), 142.53 (CH-5), 131.90 (C7a),
122.51 (CH-7), 117.14 (CH-6), 15.02 (CH
3
). (Les dplacements chimiques marqus dun
astrisque (*) peuvent tre interchangs ; les signaux sont trs largis du fait de la prsence
des 2 tautomres).
IR (KBr) v(cm
-1
): 3066-2661, 1413, 1265, 775.

- 3H-Imidazo[4,5-b]pyridine-4-oxyde (9)
135

N
N
N
H
1
2
3
4
5
6
7
O
C
6
H
5
N
3
O
MM: 135.12
7a
3a

mCPBA (60-70%) est pralablement lav par une solution tampon phosphate (pH=7,5)
puis titr par dosage iodomtrique pour obtenir un pracide 90% de puret. mCPBA (90%,
7g, 40,6mmol) est additionn, sous agitation et 0C, une solution du compos (7) (2.18g,
18.3mmol) dans de lacide actique glacial (40mL). Aprs dissolution totale, lagitation est
arrte pour permettre la prcipitation du produit. Aprs 3h, le mlange ractionnel est
filtr. Le compos (9) est obtenu sous la forme dun solide blanc (1.86g, 75%) sans autre
purification.
Pf= 255-258C (litt.
129
250-253c).
1
6
) o: 13.27 (bs, 1H, NH), 8.43 (s, 1H, H2), 8.20 (dd, 1H,
J1=0.8Hz, J2=6.3Hz, H5), 7.60 (1H, dd, J1=0.8Hz, J2=8.1Hz, H7), 7.21 (dd, 1H, J1=6.3Hz,
J2=8.1Hz, H6).
Partie exprimentale
137

IR (KBr) v(cm
-1
): 3349, 3118, 2868, 2764, 1678, 1585, 1472, 1438, 1400, 1351, 1306,
1275, 1258.

- 2-Mthyl-3H-imidazo[4,5-b]pyridine-4-oxyde (10)
N
N
N
H
1
2
3
4
5
6
7
O
CH
3
C
7
H
7
N
3
O
MM: 149.15
7a
3a

mCPBA (60-70%) est pralablement lav par une solution tampon phosphate (pH=7,5)
puis titr par dosage iodomtrique pour obtenir un pracide 90% de puret. mCPBA (90%,
7g, 40.6mmol), sous agitation 0C, une suspension du compos (8) (1.59g, 12mmol) dans
du chloroforme (80mL). Aprs 4h30, les produits volatils sont vapors. Le rsidu est purifi
par chromatographie sur gel de silice (THF/CH
2
Cl
2
/MeOH, 5/7/2,5). Le compos (10) (Rf=0.14
dans THF/MeOH, 8/2) est obtenu sous la forme dun solide jaune (1.24g, 70%).
Pf=266-269C.
1
6
) o: 8.09 (d, 1H, J=6.4 Hz, H5), 7.50 (d, 1H, J= 8.1Hz, H7), 7.14
(dd, 1H, J1= 6.4Hz, J2=8.1Hz, H6), 2.53 (s, 3H, CH
3
).
13
6
) o: 153.6 (C3a et C7a), 132.3 (CH-5), 118.1 (CH-6 et CH-7),
111.3 (C2), 14.82 (CH
3
).
IR (KBr) v(cm
-1
): 3332, 3098, 2968, 2895, 2791, 2753, 2716, 2637, 2555, 1587, 1524,
1463, 1446, 1407, 1384, 1319, 1279, 1233, 1165, 994, 873, 838, 785, 772, 738.
SM (ESI), m/z : 172 ([M+Na]
+
, 11%), 150 ([M+H]
+
, 100%), 149 (M
+
, 5%), 133 (15%).
HRMS (CI) : calc. pour C
7
H
7
N
3
O + H: 150.0667, trouve: 150,0666.

Partie exprimentale
138

De liodure de benzyle est prpar comme suit : un mlange dacide iodhydrique aqueux
(57%, 8.18mL, 36.4mmol) et de bromure de benzyle (1.09mL, 9.1mmol) est chauff 105c,
pendant 10 min, puis refroidi en ajoutant de la glace dans le milieu ractionnel. La phase
aqueuse est ensuite extraite trois fois par CH
2
Cl
2
, la phase organique rsultante est lave
deux fois par une solution aqueuse de bisulfite de sodium (5%m) et une fois avec de leau,
ensuite elle est sche par Na
2
SO
4
, et le solvant est vapor pour obtenir 1.96 g dun liquide
marron qui est mis en uvre sans autre purification.
N-Benzylation des imidazopyridines N-oxyde (9) et (10)

1) N-benzylation de limidazopyridine N-oxyde (9)
K
2
CO
3
(0.37g, 2.66mmol) est ajout une solution de compos (9) (0.3g, 2.22mmol) dans
du dimthylformamide (5mL). Le mlange est agit pendant 50 minutes temprature
ambiante, puis liodure de benzyle (400L, 3.2mmol) pralablement prpar est ajout. Le
mlange est agit pendant 3h30, puis les produits volatils sont vapors sous vide. Le rsidu
huileux marron est partag entre CH
2
Cl
2
et H
2
O. La phase aqueuse est extraite par CH
2
Cl
2
, les
phases organiques runies sont ensuite sches sur Na
2
SO
4
et le solvant est vapor. Le
rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice, (CH
2
Cl
2
/mthanol, 95/5) pour
obtenir deux produits : N3-(11) solide blanc (0.13g, 26%, Rf=0,08) et N1-(11) solide beige
(0.29g, 58%, Rf=0.22).

- 1-Benzyl-1H-imidazo[4,5-b]pyridine-4-oxyde, N1-(11):
N
N
N
1
2
3
4
5
6
7
O
1'
C
13
H
11
N
3
O
MM: 225.25
7a
3a

Pf= 174-176C.
1
6
) o: 8.64 (s, 1H, H2), 8.20 (dd, 1H, J1= 0.7Hz, J2=
6.3Hz, H5), 7.60 (dd, 1H, J1=0.7Hz, J2=8.3 Hz, H7), 7.40-7.25 (m, 5H, H arom.), 7.21
(dd, 1H, J1= 6.3Hz, J2=8.3Hz, H6), 5.54 (s, 1H, CH
2
).
Partie exprimentale
139

13
6
) o: 147.5* (C3a), 146.0* (C7a), 136.8 (CH-2), 134.1
(CH-5), 131.2 (C ipso, Ph), 129.7 (2xCH arom., Ph), 129.2 (CHpara, Ph), 128.4 (2xCH
arom., Ph), 120.0 (CH-7), 110.7 (CH-6), 49.4 (CH
2
). (Les dplacements chimiques
marqus dun astrisque (*) peuvent tre interchangs).
IR (KBr) v(cm
-1
): 3112, 3087, 2957, 2931, 1618, 1584, 1497, 1480, 1468, 1449,
1434, 1381, 1251, 1230, 1206, 1004, 752, 736.
SM (EI), m/z :225 (M
+
, 4%), 209 ([M-O]
+
, 54%), 208 ([M-OH]
+
, 96%), 195 (42%),
119 (16%), 91 (C
7
H
7
+
, 100%), 77 (14%), 65 (16%).
13
H
11
N
3
O + H: 226.0980, trouve: 226.0977.

- 3-Benzyl-3H-imidazo[4,5-b]pyridine-4-oxyde, N3-(11):
N
N
N
1
2
3
4
5
6
7
O 1'
C
13
H
11
N
3
O
MM: 225.25
7a
3a

Pf= 101-103C.
1
6
) o: 8.39 (d, 1H, J=6.8 Hz, H5), 8.37 (s, 1H, H2), 8.32
(d, 1H, J=7,7 Hz, H7), 7.51-7.39 (m, 5H, H arom.), 7.17 (dd, 1H, J1= 6.8Hz, J2=7.7 Hz,
H6), 5.72 (s, 2H, CH
2
).
13
6
) o: 160.2 (CH-2), 146.3* (C3a), 146.1* (C7a), 133.0
(Cipso , Ph), 129.9 (2xCHarom. , Ph), 129.5 (CH-5), 129.4 (CH para), 128.9 (CH-7),
128.6 (2xCH arom., Ph), 112.0 (CH-6), 80.1 (CH
2
). (Les dplacements chimiques
marqus dun astrisque (*) peuvent tre interchangs).
IR (KBr) v(cm
-1
): 3095, 3088, 3022, 2956, 2923, 2896, 1618, 1580, 1477, 1436,
1394, 1379, 1297, 1264, 1234, 1185, 1161, 1066, 1024, 938, 910, 843, 789, 747, 713,
697, 645.
SM (ESI), m/z: 226 (M
+
+H, 100%), 210 ([M-O]
+
+H, 13%).
Partie exprimentale
140

HRMS (EI): calc. pour C
13
H
11
N
3
O: 225,0902, trouve: 225,0903.

2) N-benzylation de limidazopyridine N-oxyde (10)
K
2
CO
3
(0,33g, 2,4mmol) est ajout une solution de compos (10) (0.30g, 2.01mmol)
dans du dimthylformamide (5mL). Le mlange est agit pendant 50 minutes temprature
ambiante, puis liodure de benzyle (350L, 2.8mmol) pralablement prpar est ajout. Le
mlange est agit pendant 5h, puis les produits volatils sont vapors sous vide. Le rsidu
huileux marron est partag entre CH
2
Cl
2
et H
2
O. La phase aqueuse est extraite par CH
2
Cl
2
, les
phases organiques runies sont ensuite sches sur Na
2
SO
4
et le solvant est vapor. Le
rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice (CH
2
Cl
2
/mthanol, 95/5) pour obtenir
deux produits : N3-(12) solide blanc (0.35g, 71%, Rf=0,62, CH
2
Cl
2
/MeOH, 90/10) et N1-(12)
solide blanc (0.14g, 29%, Rf=0.25, CH
2
Cl
2
/MeOH, 90/10).

- 1-Benzyl-2-mthyl-1H-imidazo[4,5-b]pyridine-4-oxyde, N1-(12):
N
N
N
1
2
3
4
5
6
7
O
1'
CH
3
C
14
H
13
N
3
O
MM: 239.27
7a
3a

Pf. = 194-196C.
1
6
) o: 8.12 (d, 1H, J=6.4 Hz, H5), 7.55 (d, 1H, J=8.3 Hz,
H7), 7.38-7.27 (m, 3H, 3H arom.), 7.20-6.97 (m, 3H, H6 et 2H arom.), 5.53 (s, 2H, CH
2
),
2.55 (s, 3H, CH
3
).
13
6
) o: 171.51 (C2), 149.91* (C7a), 148.34* (C3a), 134.02
(CH-5), 130.75 (2CHarom. Ph), 130.34 (Cipso, Ph), 129.50 (2CHarom. Ph), 127.63
(CHpara), 126.63 (CH-7), 112.19 (CH-6), 80.66 (CH
2
), 19.56 (CH
3
). (Les dplacements
chimiques marqus dun astrisque (*) peuvent tre changs).
Partie exprimentale
141

IR (KBr) v(cm
-1
): 3083, 3034, 2922, 2853, 1581, 1508, 1446, 1404, 1372, 1319,
1248, 1058, 716.
SM (ESI), m/z : 501 (2M
+
+Na
+
, 25%), 240 (MH
+
; 100%).
HRMS (EI) : calc. pour C
14
H
13
N
3
O: 239.1059, trouve: 239,1057.

- 3-Benzyl-2-mthyl-3H-imidazo[4,5-b]pyridine-4-oxyde N3-(12):
N
H
N
N
1
2
3
4
5
6
7
O 1'
CH
3
C
14
H
13
N
3
O
MM: 239.27
7a
3a

Pf. = 100-102C.
1
H RMN (300MHz,DMSO-d
6
) o: 8.18 (d, 1H, J= 6.8 Hz, H5), 8.05 (d, 1H, J=7.7 Hz,
H7), 7.50-7.41 (m, 5H, H arom.), 7.03 (dd, 1H, J1= 6.8, J2=7.7 Hz, H6), 5.67 (s, 2H,
CH
2
), 2.58 (s, 3H, CH
3
).
13
6
) o: 162.86 (C2), 154.71* (C3a), 146.52* (C7a), 133.75
(CH-5), 132.78 (Cipso), 129.78 (2CH arom. Ph), 128.71 (CH para), 127.67 (2CH
arom. Ph), 119.25 (CH-7), 109.72 (CH-6), 47.93 (CH
2
), 14.69 (CH
3
). (Les dplacements
chimiques marqus par un astrisque (*) peuvent tre interchangs).
IR (KBr) v(cm
-1
): 3107, 2924, 1614, 1570, 1446, 1370, 1325, 1270, 1240, 1216,
750, 697.
SM (ESI) , m/z: 240 (MH
+
; 100%), 134 (13%).
HRMS (EI) : calc. pour C
14
H
13
N
3
O 239.1059, trouve: 239.1054.

Partie exprimentale
142

POCl
3
(2.4mL, 25.8 mmol) est ajout une solution de compos N1-(11) (1.1g, 4.8mmol)
dans du chloroforme (30mL) en prsence dun tamis molculaire 4. Le mlange ractionnel
est chauff 50C pendant 24h, puis il est neutralis avec une solution aqueuse de NaHCO
3

(0.6M, 100mL). La phase aqueuse est ensuite extraite avec du chloroforme. Les phases
organiques runies sont sches (Na
2
SO
4
), filtres et le solvant est vapor. Le rsidu est
purifi par chromatographie sur gel de silice (CH
2
Cl
2
/mthanol, 95/5) pour obtenir le produit
(13) (Rf=0.45) sous la forme dun solide jaune (1.15g, 95%) et des traces de produit (13).
Chloration de limidazopyridine N-oxyde N1-(11)

- 1-Benzyl-7-chloro-1H-imidazo[4,5-b]pyridine (13)
N
N
N
1
2
3
4
5
6
7
1'
Cl
C
13
H
10
ClN
3
MM: 243.69
3a
7a

Pf. = 162-164C.
1
6
) o: 8.78 (s, 1H, H2), 8.37 (d, 1H, J= 5.3 Hz, H5), 7.36 (d, 1H, J=
5.3 Hz, H6), 7.33 (d, 2H, J= 7.2 Hz, 2xHmta), 7.28 (t, 1H, J= 7.2 Hz, Hpara), 7.12 (d, 2H, J= 7,2
Hz, 2xHortho), 5.75 (s, 2H, CH
2
).
13
6
) o: 158.5 (C3a), 149.6 (CH-5), 145.7 (CH-2), 138.4 (C7), 129.6
(2xCHarom. Ph), 128.4 (CHpara), 127.1 (2x CHarom. Ph), 126.6 (Cipso Ph), 123.3 (C7a), 120.1
(CH-6), 50.2 (CH
2
).
IR (KBr) v(cm
-1
): 3073, 2926, 1604, 1551, 1495, 1362, 1339, 1315, 1177, 957, 733.
SM (EI) , m/z: 245 (13%, [
37
Cl]M
+
), 243 (92%, [
35
Cl]M
+
), 242 (41%, M
+
-H), 91 (100%), 65
(8%).
HRMS (CI): calc. pour C
13
H
10
37
ClN
3
: 244.0641, trouve : 244,0641.

Partie exprimentale
143

- 1-Benzyl-5-chloro-1H-imidazo[4,5-b]pyridine (13)
N
N
N
1
2
3
4
5
6
7
1'
C
13
H
10
ClN
3
MM: 243.69
3a
7a
Cl
1
6
) o: 8.74 (s, 1H, H2), 8.07 (d, 1H, J= 8.5 Hz, H7), 7.38-7.11 (m, 6H, H6, H-
arom), 5.55 (s, 2H, CH
2
).
POCl
3
(2.4mL, 25.8 mmol) est ajout une solution de compos N3-(11) (1.1g, 4.8mmol)
dans du chloroforme (30mL) en prsence dun tamis molculaire 4. Le mlange ractionnel
est chauff 50C pendant 24h, puis il est neutralis avec une solution aqueuse de NaHCO
3

(0.6M, 100mL). La phase aqueuse est ensuite extraite avec du chloroforme. Les phases
organiques runies sont sches (Na
2
SO
4
), filtres et le solvant est vapor. Le rsidu est
2
Cl
2
(14) sous la forme dune huile incolore (0.70g, 70%).
Chloration de limidazopyridine N-oxyde N3-(11)

- 3-Benzyl-3H-imidazo[4,5-b]pyridine (14)
N
N
N
1
2
3
4
5
6
7
1'
C
13
H
11
N
3
MM: 209.25
3a
7a

1
6
) o: 8.70 (s, 1H, H2), 8.41 (d, 1H, J= 4.7 Hz, H5), 7.98 (d, 1H, J=
8.0 Hz, H7), 7.34-7.31 (m, 5H, H-arom), 7.24 (dd, 1H, J1 = 4.7 Hz, J2= 8.0 Hz, H7), 5.55 (s, 2H,
CH
2
).
Partie exprimentale
144

SM (ESI) , m/z: 441 (40) [2M
+
+Na], 232 (9) [M
+
+H], 210 [MH
+
].

- 1-Benzyl-7-mthoxy-1H-imidazo[4,5-b]pyridine (16)
N
N
N
1
2
3
4
5
6
7
1'
OCH
3
C
14
H
13
N
3
O
MM: 239.27
7a
3a

Une solution de CH
3
ONa dans du mthanol est prpare par addition de sodium (2.16g,
94mmol) dans du mthanol (75mL). Le compos (13) est ensuite ajout la solution
maintenue sous argon. Le mlange ractionnel est port au reflux pendant 48h, puis le
solvant est vapor. Le rsidu solide beige est partag entre CH
2
Cl
2
et H
2
O. La phase
aqueuse est extraite avec du dichloromthane, et les phases organiques runies sont laves
une fois leau, sches sur Na
2
SO
4
puis filtres. Aprs vaporation du solvant, le rsidu est
2
Cl
2
(16) (Rf=0.2) sous la forme dun solide blanc (0.9g, 82%).
Pf. = 169-170 C (dcomposition).
1
6
) o: 8.50 (s, 1H, H2), 8.26 (d, 1H, J= 5.5 Hz, H5), 7.36-7.22 (m,
5H, H phnyl), 6.87 (d, 1H, J= 5.5 Hz, H6), 5.55 (s, 2H, CH
2
), 3.92 (s, 2H, CH
3
).
13
6
) o: 157.84 (C3a), 153.38 (C-7), 145.96 (CH-5), 145.42 (CH-2),
137.87 (Cipso), 128.68 (2xCHmta), 127.73 (CHpara), 127.16 (2xCHortho), 115.61 (C7a),
101.20 (CH-6), 56.01 (CH
3
), 49.93 (CH
2
). (Lattribution des dplacements chimiques des CH et
dune partie des C quaternaires a t dtermine par corrlations de type COSY
htronuclaire {
1
H ;
13
C} longue distance ou HMBC).
IR (KBr) v(cm
-1
): 3081, 3026, 2924, 2848, 1618, 1568, 1495, 1455, 1397, 1374, 1322,
1297, 1280, 1237, 1206, 1184, 1124, 1098, 967, 908, 813, 778, 743.
SM (EI), m/z: 239 (M
+
, 100%), 224 ([M-CH
3
]
+
, 6%), 209 (8%), 91 (60%), 65 (6%).
14
H
13
N
3
O + H: 240,1137, trouve: 240,1138.
Partie exprimentale
145

- 1-Benzyl-1,4-dihydro-imidazo[4,5-b]pyridin-7-one (15)
N
H
N
N
1
2
3
4
5
6
7
1'
O
C
13
H
11
N
3
O
MM: 225.25
7a
3a

NaH (60%, 8,84g, 220mmol) est additionn une solution dacide thioglycolique (7,66mL,
110mmol) dans du dimthylformamide DMF (10mL) sous atmosphre dargon. Aprs 15
minutes, cette solution est ajoute une solution de compos (16) (1.76g, 7.4mmol)
solubilis dans du DMF (10mL). Le mlange est maintenu sous argon et chauff au reflux du
DMF. Aprs 24h, le milieu est neutralis avec une solution aqueuse dacide actique jusqu
pH=7. La phase aqueuse est extraite avec du dichloromthane. Les phases organiques
runies sont ensuite sche sur Na
2
SO
4
et filtres. Aprs vaporation du solvant, le rsidu
est purifi par recristallisation (mthanol, actate dthyle, ther de ptrole). Le produit (15)
est obtenu sous la forme dun solide blanc (1.27g, 77%).
Pf. = 236-237C.
1
6
) o: 12.32 (bs, 1H, NH ou OH), 8.23 (s, 1H, H2), 7.62 (d, 1H, J=
7.3 Hz, H5), 7.43-7.26 (m, 5H, Harom. Ph), 6.00 (d, 1H, J= 7.3Hz, H6), 5.68 (s, 2H, CH
2
).
Echange D
2
O : disparition du signal large 12,32 ppm.
13
6
) o: 170.6 (C7), 147.6 (C3a), 142.4 (CH-2), 139.03 (Cipso),
135.3 (CH-5), 129.4 (2xCHmta), 128.53 (2xCHortho), 128.51 (CHpara), 120.1 (C7a), 112.4
(CH-6), 49.5 (CH
2
).
IR (KBr) v(cm
-1
): 3436, 2962, 2925, 2854, 2525, 1613, 1532, 1517, 1478, 1261, 1217,
1078, 1092, 1026, 803, 731.
SM (CI), m/z: 226 ([M+H]
+
, 100%) , 89 (<3%).
13
H
11
N
3
O + H : 226,0980, trouve: 226,0982.

Partie exprimentale
146

- 3-Bromopropyl carbamate de tert-butyle (21)
226
H
N O
O
Br
CH
3
CH
3
CH
3
C
8
H
16
BrNO
2
MM: 238.12
3 1

(Boc)
2
O (1.05g, 4.60mmol) est additionn 0C une solution de bromhydrate de 3-
bromo-propan-1-amine (1g, 4.56mmol) dans du THF anhydre (25mL) maintenu sous
atmosphre dargon. La trithylamine (0.65mL, 4.66mmol) est ensuite ajoute. Le milieu
ractionnel est alors agit temprature ambiante pendant 24h. Aprs vaporation du
solvant, le rsidu est partag entre CH
2
Cl
2
et H
2
O. La phase organique est lave deux fois
avec de leau, puis concentre pour donner le produit (21) sous forme dune huile jaune
(1.06g, 93%) qui est mise en raction sans autre purification.
1
H RMN (300MHZ, DMSO-d
6
) o: 4.70 (bs, 1H, NH), 3.44 ( t, 2H, J= 6.5 Hz, H3), 3.27 (q, 2H,
J= 6.27 Hz, H1), 2.04 (qn, 2H, J= 6.5 Hz, H2), 1.44 (s, 9H, t-Bu).
IR (KBr) v(cm
-1
): 3349, 3005, 2978, 2934, 1811, 1690, 1521, 1451, 1392, 1367, 1251,
1213, 1171, 1120, 1076, 1043, 986, 871, 779.

- Mthanesulfonate de 4-(tert-butoxycarbonyl)aminobutyle (22)
O
S
H
3
C
O
O
H
N O
O
CH
3
CH
3
CH
3
C
10
H
21
NO
5
S
MM: 267.34
1
4

(Boc)
2
O (1.31g, 6.2mmol) est additionn 0C une solution de 4-aminobutanol (560L,
6.0mmol) dans du THF anhydre (20mL) maintenu sous atmosphre dargon. La trithylamine
(840L, 6.0mmol) est ensuite ajoute. Le mlange ractionnel est ensuite agit
temprature ambiante pendant 24h. Aprs vaporation du solvant, le rsidu est partag
entre CH
2
Cl
2
et H
2
O. La phase organique est lave deux fois avec de leau puis concentre
pour donner le produit NHBoc sous forme dun solide jaune (0.64g, 61%) qui est mis en
raction sans autre purification.
Partie exprimentale
147

Du chlorure de mthanesulfonyle (290L, 3.7mmol) est ajout une solution du driv
NHBoc (0.64g, 3.7mmol) dans du THF anhydre (18mL) maintenue sous argon 0C. La
trithylamine (570L, 4mmol) est ensuite ajoute. Le mlange est agit temprature
ambiante pendant 24h. Aprs vaporation le rsidu est repris dans CH
2
Cl
2
et la phase
organique est lave successivement avec une solution aqueuse sature de K
2
CO
3
, une
solution aqueuse dacide actique (5%), et de la saumure. Aprs schage (Na
2
SO
4
), filtration
et vaporation, le produit (22) est obtenu sous la forme dune huile jaune (0.8g) avec un
rendement global de 50%.
1
6
) o: 4.59 (bs, 1H, NH), 4.26 (t, 2H, J= 6.3Hz, -CH
2
O-),3.17 (q,
2H, J= 6.6Hz, -CH
2
N-),3.02 (s, 3H, CH
3
SO
2
-),1.80 (m, 2H, CH
2
), 1.63 (m, 2H, CH
2
), 1.45 (s, 9H,
tBu).
IR (NaCl) v(cm
-1
): 3403, 3352, 2977, 2938, 2873, 1707, 1523, 1353, 1252, 1173, 975, 935,
830, 736.

- Mthanesulfonate de 6-(tert-butoxycarbonyl)aminohexyle (23)
227
O
S
H
3
C
O
O
H
N O
O
CH
3
CH
3
CH
3
C
12
H
25
NO
5
S
MM: 295.40 6
1

(Boc)
2
O (1.86g, 8.8mmol) est additionn 0C une solution de 6-aminohexanol (1g,
8.5mmol) dans du THF anhydre (50mL) maintenue sous atmosphre dargon. La
trithylamine (1.2mL, 8.6mmol) est ensuite ajoute. Le mlange ractionnel est ensuite agit
temprature ambiante pendant 24h. Aprs vaporation du solvant, le rsidu est partag
entre CH
2
Cl
2
et H
2
O. La phase organique est lave deux fois avec de leau, puis concentre
pour donner le produit NHBoc sous la forme dun solide blanc (1.83g, quant.) qui est mis en
raction sans autre purification.
Du chlorure de mthanesulfonyle (360L, 4.6mmol) est ajout une solution du driv
NHBoc (0.93g, 4.3mmol) dans THF anhydre (16mL) maintenue sous argon 0C. La
trithylamine (725L, 5.2mmol) est ensuite ajoute. Le mlange est agit temprature
Partie exprimentale
148

ambiante pendant 24h. Aprs vaporation le rsidu est repris dans CH
2
Cl
2
et la phase
organique est lave successivement avec une solution aqueuse sature de K
2
CO
3
, une
solution aqueuse dacide actique (5%), et de la saumure. Aprs schage (Na
2
SO
4
), filtration
et vaporation, le produit (23) est obtenu sous la forme dune huile jaune (1,22g) avec un
rendement global quantitatif.
1
6
) o: 4.55 (bs, 1H, NH), 4.22 (t, 2H, J= 6.5Hz, -CH
2
O-),3.10 (q,
2H, -CH
2
N), 3.00 (s, 3H, CH
3
SO
2
-),1.75 (qn, 2H, J=6.5Hz, CH
2
IR (KBr) v(cm
-1
): 3371, 2978, 2964, 2943, 2857, 1691, 1656, 1528, 1465, 1366, 1344,
1328, 1301, 1277, 1173, 1163, 1096, 1063, 1038, 1020, 1008, 984, 954, 926, 840, 822 776,
735, 626, 529.
CH
2
O), 1.60-1.30 (m, 15H, tBu+
3xCH
2
).

N4-alkylation de limidazopyridinone (15)
Lagent alkylant est additionn une solution de KOH dans lthanol absolu. Aprs
addition de limidazopyridinone (15), le mlange est port au reflux jusqu ce que la
raction nvolue plus (suivi CCM). Aprs vaporation de lthanol, le rsidu est partag
entre CH
2
Cl
2
et H
2
O. La phase aqueuse est extraite trois fois par CH
2
Cl
2
. Aprs schage des
phases organiques runies (Na
2
SO
4
), filtration et vaporation, le rsidu est purifi par
chromatographie sur gel de silice (CH
2
Cl
2
/mthanol, 95/5).
Mode opratoire gnral:

- [3-(1-Benzyl-7-oxo-1,7-dihydro-imidazo[4,5-b]pyridin-4-yl)propyl]carbamate de
tert-butyle (25)
N
N
N
O
NHBoc
1
2
3 3a
4
5
6
7
7a
1'
2'
3'
C
21
H
26
N
4
O
3
MM: 382.46

Partie exprimentale
149

-Imidazopyridinone (15) : (0.13g, 0.58mmol)
-Agent alkylant : (21) (0.83g, 3.5mmol)
-Base : KOH (0.26g, 4.6mmol)
-Solvant : thanol (9mL)
-Dure de la raction : 4jours
-Rendement : 60%, 0.14g, solide blanc
Rf: 0.3 (CH
2
Cl
2
/mthanol, 95/5).
Pf.=136-137C.
1
6
) o: 8.23 (1H, s, H2), 7.71 (d, 1H, J= 7.5 Hz, H5), 7.55-
7.23 (m, 5H, phnyl), 6.90 (m, 1H, NH), 5.98 (d, 1H, J= 7.5 Hz, H6), 5.66 (s, 2H, CH
2
-
phnyl), 4.15 (t, 2H, J= 7.0 Hz, H3), 2.90 (q, 2H, J= 6.5 Hz, H1), 1.86 ( qn, 2H, J= 7.0
Hz, H2), 1.36 (s, 9H, tBu).
13
6
) o: 169.9 (C7), 156.4 (NHCO
t
Bu), 147.4 (C3a), 142.0
(C2), 138.8 (C-phnyl ipso), 138.7 (C5), 129.5 (2CH, C-phnyl meta), 128.65 (2CH,
C-phnyl ortho), 128.6 (C-phnyl para), 120.1 (C7a), 112.6 (C6), 78.5 (C(CH
3
)
3
), 49.5
(NCH
2
Ph), 48.4 (NCH
2
(CH
2
)
2
NHBoc), 38.0 (CH
2
NHBoc), 30.5 (CH
2
), 29.1 (3C, C(CH
3
)
3
).
IR (KBr) v(cm
-1
): 3373, 3093, 2979, 2967, 2937, 1709, 1638, 1573, 1505, 1466,
1269, 1256, 1163, 1144, 971, 955, 819, 787, 724, 700, 632.
SM (ESI), m/z: 1168 ([3M+Na]
+
, 16%), 787 ([2M+Na]
+
, 46%), 405 ([M+Na]
+
, 33%),
383 ([M+H]
+
, 100%), 327 ([M-C
4
H
8
]
+
, 64%).
HRMS (ESI): calc. pour C
21
H
26
N
4
O
3
+H: 383.2083, trouve: 383.20823.

- [3-(1-Benzyl-1H-imidazo[4,5-b]pyridin-7yloxy)propyl]carbamate de tert-butyle (26)
N
N
N
O
NHBoc
1
2
3
3a
4
5
6
7
7a
1'
2'
3'
C
21
H
26
N
4
O
3
MM: 382.46

Partie exprimentale
150

1
6
) o: 8.47 (s, 1H, H2), 8.23 (d, 1H, J=5.5Hz, H5), 7.38-
7.17 (m, 5H, phnyl), 6.91-6.82 (m, 1H, NH), 6.81 (d, 1H, J=5,5Hz, H6), 5.58 (s, 2H,
CH
2
-phnyl), 4.10 (t, 2H, H3), 3.04 (q, 2H, H1), 1.82 (qn, 2H, H2), 1.35 (s, 9H, tBu).

- [6-(1-Benzyl-7-oxo-1,7-dihydro-imidazo[4,5-b]pyridin-4-yl)hexyl]carbamate de tert-
butyle (27)
N
N
N
O
H
N O
O
1
2
3 3a
4
5
6
7
7a
1'
6'
C
24
H
32
N
4
O
3
MM: 424.54

-Imidazopyridinone (15): (0.16g, 0.71mmol)
-Dure de la raction : 4jours
-Rendement : 60%, 0.18g, huile incolore
Rf: 0,6 (CH
2
Cl
2
/mthanol, 95/5).
1
6
) o: 8.22 (s, 1H, H2), 7.69 (d, 1H, J= 7.4 Hz, H5), 7.39-
7.23 (m, 5H, H phnyl), 6.74 (m, 1H, NH), 5.97 (d, 1H, J= 7.4 Hz, H6), 5.65 (s, 2H,
CH
2
Ph), 4.13 (t, 2H, J= 7.1 Hz, H6), 2.91-2.82 (m, 4H, H5+H1), 1.74 ( m, 2H, H2),
1.36-1.23 (m, 13H, tBu+H3+H4).
13
C NMR (75MHz, CDCl
3
) o: 170.7 (C7), 156.4 (NHCO
t
Bu), 147.4 (C3a), 140.5 (C2),
137.1 (C5), 136.9 (C-phnyl ipso), 129.3 (2CH, C-phnyl meta), 128.8 (2CH, C-
phnyl ortho), 128.6 (C-phnyl para), 120.7 (C7a), 113.4 (C6), 79.4 (C(CH
3
)
3
), 51.1
(CH
2
, NCH
2
), 50.5 (NCH
2
), 33.0 (CH
2
NHBoc), 30.2 (CH
2
), 30.0 (CH
2
), 28.8 (C(CH
3
)
3
), 26.6
(CH
2
), 26.5 (CH
2
).
Partie exprimentale
151

SM (ESI), m/z: 447 ([M+Na]
+
, 18%), 425 ([M+H]
+
, 65%), 369 ([M-C
4
H
8
]
+
, 100%).
24
H
32
N
4
O
3
+H: 425.2553, trouve: 425.25522.

- [4-(1-Benzyl-7-oxo-1,7-dihydro-imidazo[4,5-b]pyridin-4-yl)butyl]carbamate de tert-
butyle (28)
N
N
N
O
H
N O
O
1
2
3
3a
4
5
6
7
7a
1'
2'
3'
4'
C
22
H
28
N
4
O
3
MM: 396.48

-Imidazopyridinone (15) : (0.11g, 0.49mmol)
-Dure de la raction : 2 jours
-Rendement : 22%, 0.042g, huile jaune
Rf: 0.6 (CH
2
Cl
2
/mthanol, 90/10).
1
6
) o: 8.23 (s, 1H, H2), 7.69 (d, 1H, J=7.53Hz, H5), 7.34-
7.26 (m, 5H, H phnyl), 6.80 (bt, 1H, J= 5.56 Hz, NH), 5.98 (d, 1H, J= 7.53 Hz, H6), 5.66
(s, 2H, NCH
2
Ph), 4.14( t, 2H, J=7.1Hz, H4), 2.90 (m, 2H, H1), 1.73 (qn, 1H, J=7.4 Hz,
CH
2
), 1.38-1.22 (m, 11H, t-Bu+CH
2
).
13
C RMN (75MHz, CDCl
3
) o: 170.8 (C7), 156.5 (NHCO
t
Bu), 147.3 (C3a), 140.3 (C2),
137.1 (C5), 136.8 (C-phnyl ipso), 129.3 (2CH, C-phnyl meta), 128.8 (2CH, C-
phnyl ortho), 128.7 (C-phnyl para), 120.8 (C7a), 113.6 (C6), 79.7 (C(CH
3
)
3
), 50.7
(CH
2
, NCH
2
), 50.5 (NCH
2
), 30.1 (CH
2
NHBoc), 30.2 (CH
2
), 28.8 (C(CH
3
)
3
), 27.5 (CH
2
), 27.3
(CH
2
).
SM (ESI), m/z: 815 ([2M+Na]
+
, 23%), 419 ([M+Na]
+
, 25%), 397 ([M+H]
+
, 100%),
341 ([M-C
4
H
8
]
+
, 50%).
Partie exprimentale
152

22
H
28
N
4
O
3
+H: 397.2240, trouve: 397.2244.

Remarque :

les pouvoirs rotatoires des composs chiraux, non dcrits dans la littrature,
prsents dans le chapitre 3 de cette thse nont pas pu tre dtermins pour cause de
quantit synthtise insuffisante.
- Acide 17|-(3-oxoandrost-4-nyl)carboxylique (29)
175

O
H
3
C
H
3
C
O
OH
C
20
H
28
O
3
MM: 316.43
3
4
20
17 11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19

Une solution dhypobromite de sodium est prpare en ajoutant lentement du dibrome
(0.73 mL, 14.2 mmol) une solution dhydroxyde de sodium (1.205 g, 30.1 mmol) dans de
leau distille (5 mL) sous atmosphre dargon. Cette solution est agite pendant 1 heure
pour donner une couleur orange. En parallle, une solution dhydroxyde de sodium (0.625 g,
15.6 mmol) dans de leau distille (5 mL) est ajoute une solution de progestrone (1.00 g,
3.18 mmol) dans du tert-butanol (10 mL) temprature ambiante. Le mlange est agit
pendant 1 heure puis est refroidi dans un bain de glace, avant dtre trait par la solution
pralablement prpare dhypobromite de sodium. Le mlange rsultant est
rigoureusement agit 0C pendant 3 heures puis la raction est stoppe par addition dune
solution aqueuse de sulfite de sodium (2.1M, 1.5 mL). Lagitation est maintenue la nuit
temprature ambiante. Ensuite le mlange est concentr sous vide, et extrait par le tolune.
Les extraits organiques runies sont acidifis par HCl concentr jusqu pH 0. Le prcipit
rsultant est filtr et sch sous vide pour donner le compos (29) sous la forme dun solide
blanc (0.570 g, 57 %) qui est recristallis dans un mlange mthanol/eau.
Pf (dcomp.)
1
6
) o: 5.62 (s, 1H, H4), 2.40-0.80 (m, 17H), 1.14 (s, 3H, CH
3
),
0.67 (s, 3H, CH
3
).
Partie exprimentale
153

IR (KBr) v(cm
-1
): 3435, 2941, 2853, 1728, 1702, 1658, 1383, 1189, 1164.

Oxydation de la progesterone par la DDQ
La ttrachlorobenzoquinone (4.6g, 18.7mmol) est additionne une solution de
progestrone (2.44g, 7.8mmol) dans du tert-butanol (170mL). Le mlange est chauff sous
reflux pendant une heure, puis refroidi et filtr. Le prcipit est lav avec du chloroforme.
Les filtrats runis sont concentrs, puis repris avec 200mL de chloroforme. La phase
organique est lave leau (3*20mL), puis avec une solution aqueuse de NaOH (5%m.,
4*20mL), puis de nouveau avec de leau (4*20mL). La phase organique est sche sur papier
sparateur de phase et concentre. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de
silice (actate dthyle/cyclohexane, 1/2) pour donner le compos (17|-31) sous la forme
dun solide blanc (1.23g, 50%) et des traces de son pimre (17o-31).
- A
6
-Progestrone (17|-31)
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
3
4
20
17 11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
21
C
21
H
28
O
2
MM: 312.45

1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 6.10 (m, 2H, H-6 et H-7), 5.67 (s, 1H, H-4), 2.64-2.51 (m,
2H), 2.42 (m, 1H), 2.29-1.10 (m, 13H), 2.12 (s, 3H, CH
3
-21), 1.10 (s, 3H, CH
3
-19), 0.70 (s,
3H, CH
3
-18).
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 209.15 (C-20), 199.58 (C-3), 163.53 (C-5), 140.64 (CH-7),
128.26 (CH-6), 123.92 (CH-4), 63.37 (CH-17), 53.79 (CH), 50.68 (CH), 44.84 (C), 38.69
(CH
2
), 37.72 (CH), 36.16 (C), 34.03 (2*CH
2
), 31.64 (CH
3
-21), 24.02(CH
2
), 23.02 (CH
2
),
20.76 (CH
2
), 16.42 (CH
3
-19), 13.39 (CH
3
-18).

Partie exprimentale
154

- 17-o-A
6
-Progestrone (17o-31)
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
3
4
20
17 11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
21
C
21
H
28
O
2
MM: 312.45

1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 6.10 (dd, 1H, J1=9.8Hz, J2= 1.5Hz, H-6), 6.05 (dd, 1H,
J1=9.8Hz, J2= 2.5Hz, H-7), 5.62 (s, 1H, H-4), 2.82 (dd, 1H, J1=8.3Hz, J2=2.0Hz, H-17), 2.60-
2.42 (m, 1H), 2.60-2.42 (m, 1H), 2.39-2.29 (m, 1H), 2.15-1.10 (m, 13H), 2.10 (s, 3H, CH
3
-
21), 1.06 (s, 3H, CH
3
-19), 0.96 (s, 3H, CH
3
-18).
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 212.45 (C-20), 199.48 (C-3), 163.59 (C-5), 141.28 (CH-7),
127.87 (CH-6), 123.69 (CH-4), 60.77 (CH-17), 50.05 (CH), 47.48 (CH), 46.33 (C), 37.79
(CH), 36.03 (C), 34.92 (CH
2
), 33.96 (CH
2
), 33.92 (CH
2
), 32.95 (CH
3
-21), 25.29 (CH
2
), 24.48
(CH
2
), 20.62 (CH
3
-18 +CH
2
), 16.36 (CH
3
-19).

- 7o-(3,20-dioxopregn-4-nyl)carbonitrile (32)
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
3
4
20
17 11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
21
CN
C
22
H
29
NO
2
MM: 339.47

Une solution de cyanure de dithylaluminium (1M dans tolune, 16mL, 16mmol) est
additionne une solution de A
6
-progestrone (17|-31) (1.23g, 3.9mmol) dans un minimum
de THF anhydre temprature ambiante. Aprs deux heures, le mlange est refroidi dans un
bain de glace et une solution aqueuse de NaOH (0.5N, 80mL) est ajoute. Le milieu est
ensuite extrait avec du dichloromthane, puis la phase organique est sche sur MgSO
4
,
filtre et concentre. Le rsidu est ensuite purifi par chromatographie sur gel de silice
Partie exprimentale
155

(cyclohexane/actate dthyle, 1/1), pour donner le compos (32) sous la forme dun solide
blanc (1.17g, 88%).
Pf= 164-165C
1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 5.87 (d, 1H, H-4), 3.01 (ddd, J1=5.0 Hz, J2=4.27 Hz, J3=2.21
Hz, 1H, H-7), 2.71-1.16 (m, 18H), 2.13 (s, 3H, CH
3
-21), 1.19 (s, 3H, CH
3
-19), 0.68 (s, 3H, CH
3
-
18).
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 208.85 (C-20), 198.37 (C-3), 163.13 (C-5), 127.26 (CH-4),
118.96 (CN), 63.08 (CH-17), 52.82 (CH), 48.72 (CH), 43.97 (C), 38.34 (C), 37.88 (CH
2
), 36.77
(CH), 35.37 (CH
2
), 34.96 (CH
2
), 33.90 (CH
2
), 32.96 (CH), 31.63 (CH
3
-21), 23.90 (CH
2
), 22.94
(CH
2
), 20.90 (CH
2
), 17.49 (CH
3
-19), 13.39 (CH
3
-18).

- Acide 7o-(3,20-dioxopregn-4-nyl)carboxylique (30)
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
3
4
20
17 11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
21
COOH
C
22
H
30
O
4
MM: 358.47

Une solution dhydrure de diisobutylaluminium (1M dans tolune, 20.7mL, 20.7mmol)
est ajoute goutte goutte une solution du compos (32) (1.17g, 3.4mmol) dans du
tolune (80mL) refroidie -40C. Le milieu est agit pendant deux heures. Le mlange,
maintenu -40C, est ensuite trait avec du mthanol (15mL), puis avec une solution
aqueuse dacide chlorhydrique (1N, 30mL), puis le milieu est laiss remonter temprature
ambiante. Le milieu est extrait lactate dthyle. La phase organique est ensuite lave
leau, sche sur papier sparateur de phases, puis concentre pour donner le produit (33)
sous la forme dun solide blanc (1.2g, rendement quantitatif) qui est utilis sans purification
dans ltape suivante.
Le ractif de Jones (8N, 4.32mL) est ajout goutte goutte une solution du produit (33)
(1.2g) dans lactone (60mL) refroidie -15C. Le milieu est maintenu sous agitation pendant
une demi-heure. Ensuite, lexcs du ractif est dtruit en ajoutant 40mL de mthanol. Le
Partie exprimentale
156

milieu est partag entre lactate dthyle et leau. La phase aqueuse est extraite plusieurs
fois lactate dthyle. Les phases organiques runies sont laves avec une solution sature
de NaCl, sches (Na
2
SO
4
) puis concentres pour donner un rsidu solide (1.1g) qui est repris
dans le minimum dactate dthyle.
Cette phase organique est extraite deux fois avec une solution sature de NaHCO
3
. Les
phases aqueuses runies sont refroidies dans un bain de glace puis acidifies avec HCl
concentr jusqu pH 3. Le milieu est extrait deux fois avec de lactate dthyle. Les phases
organiques runies sont sches sur MgSO
4
, filtres puis concentres pour donner le
compos (30) sous la forme dun solide blanc (0.83g, 67% pour les deux tapes : rduction et
oxydation).
Pf=224-226C
1
6
) o: 5.74 (s, 1H, H-4), 2.84 (bs, 1H), 2.74-2.31 (m, 5H), 2.28-
1.13(m, 13H), 2.12 (s, 3H, CH
3
-21), 1.20 (s, 3H, CH
3
-19), 0.66 (s, 3H, CH
3
-18).
13
6
) o: 208.53 (C-20), 197.74 (C-3), 174.46 (COOH), 169.35 (C-
5), 124.39 (CH-4), 62.40 (CH-17), 51.93 (CH), 45.71 (CH), 43.57 (C), 42.96 (CH), 37.92 (C),
37.64 (CH
2
), 36.23 (CH), 35.17 (CH
2
), 34.79 (CH
2
), 33.67 (CH
2
), 31.18 (CH
3
-21), 23.65 (CH
2
),
22.21 (CH
2
), 20.74 (CH
2
), 17.33 (CH
3
-19), 12.76 (CH
3
-18).

- 6-(N-benzyloxycarbonylamino)hexan-1-ol (34)
H
N O
O
Ph
HO
1
6
C
14
H
21
NO
3
MM: 251.32

A une solution, refroidie dans un bain de glace, de carbonate de sodium (2.12 g, 20
mmol) et de 6-aminohexan-1-ol (1.17 g, 10 mmol) dans leau (30 mL) est ajout goutte
goutte le chloroformiate de benzyle (2.41 mL, 17 mmol). Le mlange est agit la nuit
temprature ambiante, puis filtr. Le rsidu est solubilis dans du dichloromthane, et la
phase organique est lave avec de leau, sche sur Na
2
SO
4
, filtre puis concentre pour
donner un solide qui est recristallis dans du cyclohexane pour donner le compos (34) sous
la forme dun solide blanc (1.98 g, 79%).
Partie exprimentale
157

Pf=80-81C
1
6
) o: 7.39-7.23 (m, 5H, 5H-phnyl), 7.21 (m, 1H, NH), 5.00 (s,
2H, CH
2
Ph), 4.33 (t, 1H, J=5.2Hz, OH), 3.36 (q, 2H, J=5.2Hz, CH
2
O), 2.97 (q, 2H, J=6.6Hz,
CH
2
N), 1.40-1.20 (m, 8H, 4CH
2
).
13
6
) o: 156.9 (NHCOO), 138.18 (C-phnyl ipso), 129.19 (2C-
phnyl meta, C-phnyl para), 128.56 (2C-phnyl ortho), 65.91 (OCH
2
Ph), 61.50 (CH
2
OH),
41.11 (CH
2
), 33.34 (CH
2
), 30.33 (CH
2
), 27.02 (CH
2
), 26.08 (CH
2
).
SM (ESI) m/z : 827 (50%), 577 (53%), 561 (43%), 525 ([2M+Na]
+
,70%), 274 ([M+Na]
+
,
83%), 252 ([M+H]
+
, 100%).
HRMS (ESI): calc pour C
14
H
21
NO
3
+Na: 274.1419; trouve: 274.1423.

- [Trans-4-(N-benzyloxycarbonylaminomthyl)cyclohexyl]mthanol (36)
HN
HO
O
O
Ph
C
16
H
23
NO
3
MM: 277.36
1 4

A une suspension refroidie dans un bain de glace dhydrure de lithium et daluminium
(0.302 g, 7.9 mmol) dans du THF anhydre (20 mL) est ajoute une suspension dacide trans-
4-(aminomthyl)cyclohexylcarboxylique (0.500 g, 3.18 mmol) dans du THF anhydre (20 mL).
Le mlange est agit 0C pendant 1 heure puis chauff au reflux pendant 3 heures. Ensuite,
le mlange est refroidi temprature ambiante et de leau est ajoute. La phase aqueuse est
extraite avec du dichloromthane. Laddition de quelques gouttes dune solution aqueuse du
sel de Rochelle empche la formation dmulsion. Les phases organiques runies sont
sches sur Na
2
SO
4
, filtres puis concentres sous vide pour donner le [trans-4-
(aminomthyl)cyclohexyl]mthanol (35) sous la forme dune huile jaune (0.320 g, 70%) qui
doit tre immdiatement utilise.
IR (NaCl) v(cm
-1
): 3357, 3289, 2915, 2850, 1578, 1448, 1378, 1324, 1040.
A une solution refroidie dans un bain de glace du compos (35) (0.320 g, 2.23 mmol) et
de carbonate de sodium (0.475 g, 4.48 mmol) dans leau (20 mL) est ajout goutte goutte
Partie exprimentale
158

le chloroformiate de benzyle (540 L, 3.79 mmol). Le mlange est agit temprature
ambiante pendant la nuit, puis filtr. Le prcipit est lav avec de leau puis recristallis dans
du cyclohexane pour donner le compos (36) sous la forme dun solide blanc (0.432 g, 70%).
Pf = 95-96C.
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 7.40-7.30 (m, 5H, 5H-phnyl), 5.09 (s, 2H, CH
2
Ph), 4.80 (bs,
1H, NH), 3.45 (d, 2H, J=6.2 Hz, CH
2
O), 3.05 (t, 2H, J=6.3 Hz, CH
2
N), 1.9-0.9 (m, 11H, 10H-
cyclohexyl, OH).
13
C RMN (75MHz, CDCl
3
) o: 156.7 (COO), 136.8 (C-phnyl ipso), 128.7 (2C-phnyl meta),
128.29 (2C-phnyl ortho), 128.26 (C-phnyl para), 68.6 (OCH
2
), 66.8 (OCH
2
), 47.4 (NCH
2
),
40.6 (CH), 38.5 (CH), 30.1 (2CH
2
cyclohexyl), 29.0 (2CH
2
cyclohexyl).
SM (ESI) m/z : 577 ([2M+Na]
+
,100%), 300 ([M+Na]
+
, 65%).
HRMS(ESI): calc. pour C
16
H
23
NO
3
+Na: 300.1570; trouve: 300.1577.

- (4-aminomthylphnyl)mthanol (37)
228
NH
2
HO
1 4
C
8
H
11
NO
MM: 137.18

A une solution refroidie dans un bain de glace dhydrure de lithium et daluminium (0.629
g, 16.55 mmol) dans du THF anhydre (40 mL), est ajout, par portions, lacide 4-
(aminomthyl)benzoique (1.0 g, 6.62 mmol). Le mlange est agit 0C pendant 1 heure
puis chauff au reflux pendant 3 heures. Le mlange est ensuite refroidi 0C et de leau est
ajoute. La phase aqueuse est extraite avec un mlange dichloromthane/isopropanol (4/1).
Laddition de quelques gouttes dune solution aqueuse du sel de Rochelle empche la
formation dmulsion. Les phases organiques runies sont sches sur Na
2
SO
4
, filtres puis
concentres sous vide pour donner le compos (37) sous la forme dun solide jaune (0.250
g, 28%).
1
H RMN (300MHz, CD
3
OD) o: 7.32 (m, 4H, H-phnyl), 4.58 (s, 2H, OCH
2
), 3.79 (s, 2H,
NCH
2
).
Partie exprimentale
159

IR (KBr) v( cm
-1
): 3364, 3286, 2923, 2852, 1595, 1480, 1465, 1364, 1028, 941.

- 4-[(N-benzyloxycarbonylamino)mthylphnyl]mthanol (38)
HN
HO
1 4
O
O
Ph
C
16
H
17
NO
3
MM: 271.31

A une suspension, refroidie par un bain de glace, du compos (37) (0.240 g, 1.75 mmol)
et de carbonate de sodium (0.371 g, 3.5 mmol) dans leau (20 mL) est ajout goutte goutte
le chloroformiate de benzyle (420 L, 2.97 mmol). Le mlange est agit temprature
ambiante pendant 3 heures puis la phase aqueuse est extraite avec du dichloromthane. Les
phases organiques runies sont laves avec de leau, sches sur Na
2
SO
4
,

filtres puis le
filtrat est concentr sous vide pour donner un solide blanc qui est recristallis dans lactate
dthyle/cyclohexane pour donner le compos (38) sous la forme dun solide blanc (0.425 g,
90%).
Pf=112-113C
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 7.40-7.20 (m, 9H, 9H-phnyl), 5.14 (s, 2H, CH
2
OCONH), 5.04
(m, 1H, NH), 4.68 (d, 2H, J= 4.4Hz, CH
2
OH), 4.38 (d, 2H, J=5.8 Hz, CH
2
13
C RMN (75MHz, CDCl
3
) o: 156.54 (COO), 140.36 (C-phnyl ipso), 137.99 (C-phnyl ipso),
136.58 (C-phnyl ipso), 128.69 (CH-phnyl), 128.32 (CH-phnyl), 128.30 (CH-phnyl), 127.89
(CH-phnyl), 127.47 (CH-phnyl), 67.05 (CH
2
), 65.17 (CH
2
), 45.02 (CH
2
).
NH), 1.61 (m, 1H, OH).
SM (ESI) m/z : 564 ([2M+Na]
+
, 18%), 294 ([M+Na]
+
, 100%).
HRMS(ESI): calc. pour C
16
H
17
NO
3
+Na: 294.1101; trouve: 294.1092.

Partie exprimentale
160

- 9-[(6-N-benzyloxycarbonylamino)hexyl]adnine (39)
N
N
N
N
NH
2
O
Ph
O
H
N
C
19
H
24
N
6
O
2
MM: 368.43
6'
9
8
7
1
2
3
4
5
6
1'

A une suspension dadnine (1.61 g, 11.9 mmol) et de triphnylphosphine (2.34 g, 8.9
mmol) dans du THF anhydre (10 mL) sous atmosphre dargon, est ajoute une solution du
compos (34) (1.74 g, 6.9 mmol) et de DIAD (1.77 mL, 8.9 mmol) dans du THF anhydre (10
mL). Le mlange est agit temprature ambiante pendant la nuit, puis le solvant est
vapor. Le rsidu est solubilis dans du dichloromthane puis filtr. Le filtrat est concentr
sous vide et le rsidu purifi par chromatographie sur gel de silice (CH
2
Cl
2
/MeOH, 95/5) pour
donner un solide qui est recristallis dans du mthanol pour donner le compos (39) sous la
forme dun solide blanc (1.05g, 41%).
Pf=132-133C.
1
6
) o: 8.15 (s, 1H, H-2), 8.13 (s, 1H, H-8), 7.40-7.10 (m, 8H, 5H-
phnyl, NH
2
, NHCOO), 4.99 (s, 2H, CH
2
Ph), 4.11 (t, 2H, J=7Hz, CH
2
-1), 2.96 (q, 2H, J=6.3Hz,
CH
2
-6), 1.77 (m, 2H, CH
2
), 1.45-1.15 (m, 6H, 3CH
2
).
13
6
) o: 156.93 (NHCOO), 156.82 (C-6), 153.21 (C-2), 150.39 (C-4),
141.67 (C-8), 138.16 (C-phnyl ipso), 129.17 (2C-phnyl meta, C-phnyl para), 128.56 (2C-
phnyl ortho), 119.61 (C-5), 65.93 (CH
2
Ph), 43.67 (CH
2
), 40.98 (CH
2
), 30.21 (CH
2
), 30.07 (CH
2
),
26.56 (CH
2
), 26.51 (CH
2
).
SM (ESI) m/z : 758 ([2M+Na]
+
,13%), 629 (76%), 369 ([M+H]
+
, 100%).
19
H
24
N
6
O
2
+H: 369.2039; trouve 369.2035.

Partie exprimentale
161

- 9-[Trans-4-(N-benzyloxycarbonylaminomthyl)cyclohexylmthyl]adnine (40)
N
N
N
N
NH
2
4'
9
8
7
1
2
3
4
5
6
1'
NH
O
O
Ph
C
21
H
26
N
6
O
2
MM: 394.47

A une solution refroidie dans un bain de glace de triphnylphosphine (0.993 g, 3.79
mmol) dans du THF anhydre (15 mL), est ajout goutte goutte le DIAD (0.750 mL, 3.79
mmol). Le mlange est agit pendant 30 minutes temprature ambiante puis il est
additionn une suspension dans le THF anhydre (3 mL) dadnine (0.511 g, 3.79 mmol) et
de compos (36) (0.350 g, 1.26 mmol). Le mlange est agit pendant la nuit puis filtr. Le
prcipit est lav avec un mlange dichloromthane/mthanol (90:10) puis les filtrats runis
sont concentrs sous vide. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice
(CH
2
Cl
2
/MeOH, 95/5) pour donner le compos (40) sous la forme dun solide blanc (0.287 g,
49 %).
Pf=229C.
1
6
) o: 8.12 (s, 1H, H-2), 8.08 (s, 1H, H-8), 7.37-7.21 (m, 5H, 5H-
phnyl), 7.16 (s, 2H, NH
2
), 4.98 (s, 2H, CH
2-
Ph), 3.97 (d, 2H, J=7.0 Hz, CH
2
-adnine), 2.82 (t,
2H, J=6.1 Hz, CH
2
NHCbz), 1.80-0.70 (m, 10H, 10H-cyclohexyl).
13
6
) o: 156.23 (NHCOO), 155.94 (C-6), 152.36 (C-2), 149.72 (C-4),
141.20 (C-8), 137.30 (C-phnyl ipso), 128.32 (2C-phnyl meta, C-phnyl para), 127.70 (2C-
phnyl ortho), 118.64 (C-5), 65.09 (CH
2
Ph), 48.72 (CH
2
), 46.46 (CH
2
), 29.50 (2xCH
2
), 29.40
(2xCH
2
), 37.67 (2CH).
SM (ESI) m/z : 538 (100%), 417 ([M+Na]
+
,36%), 395 ([M+H]
+
, 6%), 304 (18%).
21
H
26
N
6
O
2
+Na: 417.2015; trouve: 417.2012.

Partie exprimentale
162

- 9-[4-(N-benzyloxycarbonylaminomthyl)phnylmthyl]adnine (41)
N
N
N
N
NH
2
4'
9
8
7
1
2
3
4
5
6
1'
NH
O
O
Ph
C
21
H
20
N
6
O
2
MM: 388.42

A une solution refroidie dans un bain de glace de triphnylphosphine (1.160 g, 4.42
mmol) dans du THF anhydre (18 mL), est ajout goutte goutte le DIAD (0.880 mL, 4.44
mmol). Le mlange est agit pendant 30 minutes temprature ambiante. Ensuite, ladnine
(0.598 g, 4.43 mmol) et une solution du compos (38) (0.400 g, 1.47 mmol) dans du THF
anhydre (10mL) sont ajoutes. Le mlange est agit temprature ambiante pendant la
nuit, puis filtr. Le prcipit est lav avec un mlange dichloromthane/mthanol (90/10)
puis les filtrats runis sont concentrs sous vide. Le rsidu est purifi par chormatographie
sur couche mince de silice (CH
2
Cl
2
/MeOH, 95/5) pour donner le compos (41) sous la forme
dun solide blanc (0.100 g, 18 %).
Pf=227-228C.
1
6
) o: 8.26 (s, 1H, H-2), 8.16 (s, 1H, H-8), 7.79 (t, 1H, J=6.1 Hz,
NH), 7.48-7.18 (m, 11H, 9H-phnyl+NH
2
), 5.33 (s, 2H, CH
2
-adnine), 5.01 (s, 2H,
CH
2
OCONH), 4.15 (d, 2H, J=6.1 Hz, CH
2
13
6
) o: 156.31(NHCOO), 155.58 (C-6), 152.09 (C-2), 149.36 (C-4),
140.95 (C-8), 139.32 (C-phnyl ipso), 137.12 (C-phnyl ipso), 135.58 (C-phnyl ipso), 128.33
(CH-phnyl), 127.78 (CH-phnyl), 127.74 (CH-phnyl), 127.56 (CH-phnyl), 127.34 (CH-
phnyl), 118.64 (C-5), 65.37 (CH
2
OCO), 45.96 (CH
2
), 43.50 (CH
2
).
NH).
SM (ESI) m/z : 798 ([2M+Na]
+
,72%), 776 ([2M+H]
+
, 17%), 649 (40%), 411 ([M+Na]
+
,
29%), 389 ([M+H]
+
, 100%).
21
H
20
N
6
O
2
+H: 389.1721; trouve: 389.1705.

Partie exprimentale
163

- 9-(6-aminohexyl)adnine (42)
N
N
N
N
NH
2
NH
2
6'
9
8
7
1
2
3
4
5
6
1'
C
11
H
18
N
6
MM: 234.30

Une suspension de palladium sur charbon (400 mg, 10%m.) et du compos (39) (0.95 g,
2.58 mmol) dans du mthanol (50 mL) est maintenue sous atmosphre dH
2
(1 atm.)
pendant 1 heure. Ensuite, le mlange est filtr sur clite, et le filtrat est concentr sous vide
pour donner le compos (42) sous la forme dun solide blanc (600 mg, 100%).
Pf=160-161C.
1
6
) o: 8.13 (s, 1H, H-2), 8.12 (s, 1H, H-8), 7.17 (s, 2H, NH
2
), 4.11
(t, 2H, J=7.1Hz, CH
2
-1), 2.93 (bs, 2H, NH
2
), 2.47 (m, 2H, CH
2
-6), 1.78 (qn, 2H, J=7.2 Hz, CH
2
),
1.35-1.15 (m, 6H, 3CH
2
).
13
6
) o: 155.94 (C-6), 152.33 (C-2), 149.54 (C-4), 140.83 (C-8),
118.73 (C-5), 42.83 (CH
2
), 41.37 (CH
2
), 32.91 (CH
2
), 29.39 (CH
2
), 25.92 (CH
2
), 25.79 (CH
2
).
SM (CI) m/z : 235 ([M+H]
+
, 100%), 219 (73%).
11
H
18
N
6
+H: 235.1671; trouve: 235.1671.

- 9-(Trans-4-aminomthylcyclohexylmthyl)adnine (43)
N
N
N
N
NH
2
4'
9
8
7
1
2
3
4
5
6
1'
NH
2
C
13
H
20
N
6
MM: 260.34

Une suspension de palladium sur charbon (0.100g, 10%m.) et du compos (40) (0.255 g,
0.65 mmol) dans du mthanol (20 mL) est maintenue sous une pression de H
2
(5 atm)
pendant 15 minutes. Ensuite, le mlange est filtr sur clite et le filtrat concentr sous vide.
Partie exprimentale
164

Le rsidu est purifi par chromatographie sur couche mince de silice
(CH
2
Cl
2
/MeOH/NH
4
OH
aq.
, 80/20/1) pour donner le compos (43) sous la forme dun solide
blanc (0.120 g, 71%).
Pf (dcomp.).
1
6
) o: 8.12 (s, 1H, H-2), 8.10 (s, 1H, H-8), 7.61(bs, 2H, NH
2
), 7.18
(s, 2H, NH
2
), 3.98 (d, 2H, J=7.1 Hz, CH
2
-adnine), 2.59 (d, 2H, J=7.1 Hz, CH
2
NH
2
), 1.89-1.68 (m,
3H, 3H-cyclohexyl), 1.60-1.44 (m, 3H, 3H-cyclohexyl), 1.05-0.78 (m, 4H, 4H-cyclohexyl).
13
C-RMN (75MHz, DMSO-d
6
) o: 155.93 (C-6), 152.36 (C-2), 149.70 (C-4), 141.24 (C-8),
118.64 (C-5), 48.61 (CH
2
), 44.17 (CH
2
), 29.14 (2CH
2
), 28.92 (2CH
2
), 37.29 (CH), 35.37 (CH).
SM (CI) m/z : 261 ([M+H]
+
, 100%), 257 (24%), 225 (20%).
13
H
20
N
6
+H: 261.1828, trouve: 261.1826.

- 9-(4-aminomthylphnylmthyl)adnine (44)
N
N
N
N
NH
2
4'
9
8
7
1
2
3
4
5
6
1'
NH
2
C
13
H
14
N
6
MM: 254.29

Une suspension de palladium sur charbon (0.080g, 10%m.) et du compos (41) (0.080 g,
0.20mmol) dans un mlange de mthanol (30 mL) et dactate dthyle (30mL) est
maintenue sous une pression dH
2
(13 atm) pendant la nuit. Le mlange est ensuite filtr sur
clite, puis concentr sous vide. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice
(CH
2
Cl
2
/MeOH 90/10 puis CH
2
Cl
2
/MeOH/NH
4
OH
aq.
, 90/10/2) pour donner le compos (44)
sous la forme dun solide blanc (0.040 g, 77%).
Pf (dcomp.).
1
H RMN (300MHz, CD
3
OD) o: 8.20 (s, 1H, H-2), 8.18 (s, 1H, H-8), 7.41-7.18 (m, 6H, H-
phnyl+NH
2
), 5.45 (s, 2H, CH
2
-adnine), 3.98 (s, 2H, CH
2
NH
2
).
Partie exprimentale
165

13
C-RMN (75MHz, CD
3
OD) o: 157.38 (C-6), 153.91 (C-2), 150.68 (C-4), 142.59 (C-8),
138.04 (C-phnyl ipso), 137.44 (C-phnyl ispo), 130.07 (CH-phnyl), 129.35 (CH-phnyl),
120.00 (C-5), 47.72 (CH
2
), 44.66 (CH
2
).
SM (ESI) m/z : 296 (19%), 255 ([M+H]
+
, 100%), 238 (44%).
13
H
14
N
6
+H: 255.1353; trouve 255.1342.

- 4-(Mesyloxy)but-2-yn-1-ol (49)
OSO
2
CH
3
HO
C
5
H
8
O
4
S
MM: 164.18
1
4

Le chlorure de mthanesulfonyle (2.30 mL, 30 mmol) et la trithylamine (4.20 mL, 30
mmol) sont ajouts, goutte goutte, une solution, refroidie dans un bain de glace, de but-
2-yne-1,4-diol (2.58 g, 30 mmol) dans du THF anhydre (35 mL). Ensuite, le mlange est laiss
monter temprature ambiante. Aprs 17h dagitation, le mlange est concentr sous vide.
Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice (CH
2
Cl
2
/ mthanol, 97/3) pour
donner le produit (49) sous la forme dune huile incolore (2.23 g, 45%).
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 4.89 (t, 2H, J=1.8 Hz, CH
2
OMs), 4.34 (m, 2H, CH
2
OH), 3.12 (s,
3H, CH
3
), 1.92(m, 1H, OH).
IR (NaCl) v(cm
-1
): 3524, 3029, 2939, 2871, 1632, 1444, 1414, 1351, 1258, 1219, 1172,
1140, 1019, 1140, 1019, 976, 939, 808.

Partie exprimentale
166

- 4-(N-tert-butyloxycarbonylamino)but-2-yn-1-ol (51)
229
NH
HO
1
4
O
O
C
9
H
15
NO
3
MM: 185.22

Le produit (49) (1.02 g, 6.02 mmol) est trait par une solution sature dhydroxyde
dammonium (15mL), et le mlange est agit pendant 1 heure. Aprs vaporation du
solvant, le rsidu est pass sur une rsine Dowex 1X8 R
3
N
+
Cl
-
, pralablement lave avec une
solution aqueuse de NaOH (4%m.). Le filtrat est concentr et sch sous vide pour donner le
4-aminobut-2-yn-1-ol (50) sous la forme dun solide jaune (0.88 g, 76%), qui est remis
immdiatement en raction.
Pf = 58C (lit.
230
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 4.22 (t, 2H, J=1.9 Hz, CH
2
O), 3.45 (t, 2H, J=1.9 Hz, CH
2
N), 3.42
(s, 1H, OH), 2.50 (s, 2H, NH
2
).
60-61C).
A une solution du compos (50) (0.65 g, 7.64 mmol) et de dicarbonate de di-tert-butyle
(1.67 g, 7.66 mmol) dans du THF anhydre (30mL) est ajoute, goutte goutte, la
trithylamine (1.08 mL, 7.69 mmol) 0C. Le mlange est agit temprature ambiante
pendant la nuit, puis le solvant est vapor et le rsidu repris dans du dichloromthane. La
phase organique est lave deux fois avec de leau, et la phase aqueuse extraite avec du
dichloromthane. Les phases organiques runies sont sches sur Na
2
SO
4
, filtres puis
concentres. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice (CH
2
Cl
2
/MeOH, 95/5)
pour donner le compos (51) sous la forme dune huile incolore (1.03 g, 73%).
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 5.18 (bs, 1H, NH), 4.18 (d, 2H, J=5.2 Hz, CH
2
O), 3.88 (d, 2H,
J=5.2 Hz, CH
2
N), 3.71 (m, 1H, OH), 1.38 (s, 9H, (CH
3
)
3
C).

Partie exprimentale
167

- 1-Mesyloxy-4-(N-tert-butyloxycarbonylamino)but-2-yne (52)
NH
O
1
4
O
O
S Me
O
O
C
10
H
17
NO
5
S
MM: 263.31

A une solution du compos (51) (0.26 g, 1.40 mmol) dans du THF anhydre (5mL) 0C
sont ajouts le chlorure de mthanesulfonyle (0.13 mL, 1.68 mmol) et la trithylamine (240
L, 1.71 mmol). Aprs laddition, le mlange est laiss monter temprature ambiante, et
lagitation est maintenue pendant 17 h. Le mlange est ensuite filtr puis le filtrat est
concentr sous vide. Le rsidu est repris dans du dichloromthane. Cette solution est lave
leau, sche sur Na
2
SO
4
, filtre puis concentre sous vide pour donner le compos (52)
sous la forme dune huile incolore (0.38 g, 76%) qui est immdiatement remise en raction.
IR (NaCl) v(cm
-1
): 3402, 2979, 2937, 1694, 1514, 1367, 1250, 1174, 944, 807.

- 9-[(4-N-tert-butyloxycarbonylamino)but-2-ynyl]adnine (53)
N
N
N
N
NH
2
4'
9
8
7
1
2
3
4
5
6
1'
NH
O
O
C
14
H
18
N
6
O
2
MM: 302.33

Une suspension dadnine (0.380 g, 2.8 mmol) et de carbonate de potassium (0.233 g,
1.68 mmol) dans du DMF (40 mL) est chauffe 75C pendant 1 heure. Ensuite, une solution
du compos (52) (0.370 g, 1.4 mmol) dans un mlange de DMF (10 mL) et de
dichloromthane (1 mL) est ajoute ce mlange. La raction est laisse sous agitation
75C pendant 1h30 puis les solvants sont vapors sous vide. Le rsidu est partag entre
dichloromthane et eau. La phase aqueuse est extraite par du CH
2
Cl
2
et les extraits
Partie exprimentale
168

organiques runis sont schs (Na
2
SO
4
), filtrs puis concentrs. Le rsidu est purifi par
2
Cl
2
/MeOH, 95/5) pour donner le compos (53) sous la
forme dun solide blanc (0.320 g, 75%).
Pf=200C (dc.).
1
6
) o: 8.18 (s, 1H, H-2), 8.15 (s, 1H, H-8), 7.26 (s, 2H, NH
2
), 5.00
(s, 2H, CH
2
-1), 3.75 (d, 2H, J=5.3 Hz, CH
2
-4), 1.36 (m, 10H, NH, (CH
3
)
3
C).
13
6
) o: 155.99 (C-6), 155.23 (NHCOO), 152.64 (C-2), 149.06 (C-4),
140.03 (C-8), 118.54 (C-5), 82.61 (CC), 78.27 (CC), 75.79 (C(CH
3
)
3
), 34.47 (CH
2
), 29.50
(CH
2
), 28.15 (3CH
3
).
SM (CI) m/z : 303 ([M+H]
+
, 100%).
14
H
18
N
6
O
2
+H: 303.1569, trouve: 303.1568.

- 9-(4-aminobut-2-ynyl)adnine (45)
N
N
N
N
NH
2
4'
9
8
7
1
2
3
4
5
6
1'
NH
2
C
9
H
10
N
6
MM: 202.22

A une suspension du compos (53) (0.280 g, 0.93 mmol) dans leau (15 mL), est ajout
goutte goutte du HCl concentr (3 mL) sous agitation vigoureuse. Le mlange est agit
pendant quelques minutes puis le solvant est vapor. Le rsidu est solublis dans de leau
puis trait par une rsine Dowex 1X8 R
3
N
+
Cl
-
pralablement lave par une solution aqueuse
de NaOH (4%m.). Le filtrat est concentr et sch sous vide pour donner le compose (45)
sous la forme dun solide blanc (150 mg, 80%) qui est recristallis dans du mthanol.
Pf=135C (dc.).
1
6
) o: 8.24 (s, 1H, H-2), 8.16 (s, 1H, H-8), 7.76 (bs, 2H, NH
2
),
7.29 (s, 2H, NH
2
), 5.10 (m, 2H, CH
2
-1), 3.71 (m, 2H, CH
2
-4).
Partie exprimentale
169

13
C RMN (75MHz, CD
3
OD) o: 157.34 (C-6), 153.88 (C-2), 150.20 (C-4), 142.04 (C-8), 119.93
(C-5), 86.94 (CC), 76.26 (CC), 34.22 (CH
2
), 31.41 (CH
2
).
SM (CI) m/z : 203 ([M+H]
+
, 100%).
9
H
10
N
6
+H: 203.1045, trouve: 203.1043.

- (Z)-9-(4-aminobut-2-nyl)adnine (46)
231
N
N
N
N
NH
2
4'
9
8
7
1
2
3
4
5
6
1'
NH
2
C
9
H
12
N
6
MM: 204.23

Une solution de palladium de Lindlar (7 mg, 5% m/m), de deux gouttes de quinoline et
du compos (45) (0.070 g, 0.35 mmol) dans du mthanol (70 mL) est maintenue sous
pression atmosphrique de H
2
(1 atm) jusqu consommation du produit de dpart (contrle
CCM). Ensuite, le mlange est filtr sur clite et le filtrat est concentr sous vide. Le rsidu
est purifi par chromatographie sur couche mince de silice (CH
2
Cl
2
/MeOH/NH
4
OH
aq.
,
30/20/1) pour donner le compos (46) sous la forme dun solide blanc (0.047 g, 67%).
1
H RMN (300MHz, CD
3
OD) o: 8.17 (s, 1H, H-2), 8.09 (s, 1H, H-8), 5.79 (dt, 1H, J1=10.5Hz,
J2=7.0Hz, HC=CH), 5.65 (dt, 1H, J1=10.5Hz, J2=7.0Hz, HC=CH), 5.00-4.70 (m, 6H, CH
2
-1 +
2NH
2
), 3.53 (d, 2H, J=6.8 Hz, CH
2
-4).
13
C RMN (75MHz, CD
3
OD) o: 157.28 (C-6), 153.70 (C-2), 150.46 (C-4), 142.34 (C-8), 134.46
(CH=CH), 126.19 (CH=CH

), 120.01 (C-5), 41.45 (CH
2
), 38.58 (CH
2
).

Partie exprimentale
170

- (E)-9-(4-aminobut-2-nyl)adnine (47)
231

N
N
N
N
NH
2
4'
9
8
7
1
2
3
4
5
6
1'
NH
2
C
9
H
12
N
6
MM: 204.23

A une suspension du compos (45) (0.200 g, 1 mmol) dans du THF anhydre (10 mL) est
ajout de lhydrure de lithium et daluminium (0.400 g, 20 mmol). Le mlange est agit
pendant deux jours temprature ambiante puis une solution aqueuse de NaOH (1N, 5 mL)
est ajoute. Le prcipit est filtr puis lav avec de lactate dthyle. Les filtrats runis sont
concentrs sous vide puis purifis par chromatographie sur gel de silice
(CH
2
Cl
2
/MeOH/NH
4
OH
aq.
, 20/20/1) pour donner le compos (47) sous la forme dun solide
blanc (0.057 g, 29%).
1
6
) o: 8.13 (s, 1H, H-2), 8.10 (s, 1H, H-8), 7.21 (s, 2H, NH
2
), 5.82
(m, 1H, HC=CH), 5.67 (dt, 1H, J1=15.5Hz, J2=4.8Hz, HC=CH), 4.73 (d, 2H, J=5.4 Hz, CH
2
-1),
3.40-3.10 (m, 4H, CH
2
-2 + NH
2
).
13
6
) o: 155.94 (C-6), 152.46 (C-2), 149.32 (C-4), 140.53 (C-8),
135.54 (CH=CH), 123.61 (CH=CH

), 118.65 (C-5), 44.11 (CH
2
), 42.52 (CH
2
).

- 9-(4-aminobutyl)adnine (48)
N
N
N
N
NH
2
4'
9
8
7
1
2
3
4
5
6
1'
NH
2
C
9
H
14
N
6
MM: 206.25

Partie exprimentale
171

Une suspension de palladium sur charbon (200 mg, 10%m.) et du compos (45) (0.250 g,
1.24 mmol) dans du mthanol (70 mL) est maintenue sous pression atmosphrique de H
2
(1
atm) jusqu consommation du produit de dpart (contrle CCM). Ensuite, le mlange est
filtr sur clite et le filtrat concentr sous vide. Le rsidu est purifi par chromatographie sur
gel de silice (CH
2
Cl
2
/MeOH/NH
4
OH
aq.
, 20:20:1) pour donner le compos (48) sous la forme
dun solide blanc (0.227 g, 90%).
Pf=164-166C.
1
6
) o: 8.14 (s, 1H, H-2), 8.12 (s, 1H, H-8), 7.17 (s, 2H, NH
2
), 4.12
(t, 2H, J=7.3 Hz, CH
2
-1), 1.81 (qn, J=7.5 Hz, 2H, CH
2
-4), 1.28 (qn, J=6.9 Hz, 4H, 2CH
2
).
13
6
) o: 155.93 (C-6), 152.33 (C-2), 149.54 (C-4), 140.83 (C-8),
118.73 (C-5), 42.85 (CH
2
), 41.08 (CH
2
), 30.26 (CH
2
), 26.99 (CH
2
).
SM (CI) m/z : 282 (12%), 219 (15%), 207 ([M+H]
+
, 100%).
9
H
14
N
6
+H: 207.1358; trouve: 207.1361.

- (Z)-4-(Ttrahydropyran-2-yloxy)-but-2-n-1-ol, R et S (54)
O HO
O
1 4
2'
R,S
*
C
9
H
16
O
3
MM: 172.22
6'

Le DHP (1.80mL, 20mmol) est ajout goutte goutte une solution de but-2-ne-1,4-diol
(1.76g, 20mmol) et dacide p-tolunesulfonique monohydrat (0.19g, 1mmol) dans du
dichloromthane (30mL). Le mlange est agit pendant 2 heures temprature ambiante.
Le solvant est ensuite vapor, et le rsidu purifi par chromatographie sur gel de silice
(dichloromthane/mthanol, 98.5/1.5) pour donner le produit (54) sous la forme dune huile
jaune (1.48g, 43%).
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 5.80 (dtt, 1H, J1=11.5Hz, J2=6.4Hz, J3=1.3Hz, CH=CH), 5.73-
5.60 (m, 1H, CH=CH), 4.65 (t, 1H, J=3.5Hz, CH-2), 4.29-4.05 (m, 4H, CH
2
CH=CHCH
2

), 3.82 (m,
1H, CH
a
-6), 3.49 (m, 1H, CH
b
-6), 2.58 (bs, 1H, OH), 1.90-1.30 (m, 6H, 3xCH
2
).
Partie exprimentale
172

- (Z)-1-Msyloxy-4-(ttrahydropyran-2-yloxy)-but-2-ne, R et S (55)
O O
O
1 4
2'
R,S
*
6'
S Me
O
O
C
10
H
18
O
5
S
MM: 250.31

Le chlorure de mthanesulfonyle (680L, 8.8mmol) et la trithylamine (1.23mL,
8.8mmol) sont ajouts, goutte goutte, une solution du compos (54) (1.37 g, 8mmol)
dans du THF anhydre (25 mL), refroidie dans un bain de glace. Ensuite, le mlange est laiss
monter temprature ambiante pendant 2 heures. Le milieu est ensuite filtr, et le filtrat
concentr, puis le rsidu est repris dans du dichloromthane. La phase organique est lave
avec de leau, sche sur Na
2
SO
4
puis concentre pour donner le produit (55) sous la forme
dune huile jaune (1.81g, quant.).

1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 5.90 (dtt, J1=11.5 Hz, J2=5.5 Hz, J3=1.0 Hz, 1H, CH=CH), 5.73
(dtt, J1=11.5 Hz, J2=6.8 Hz, J3=1.5 Hz, 1H, CH=CH), 4.86 (d, 2H, J=6.8Hz, CH
2
OMs), 4.62 (t, 1H,
J=3.2Hz, CH-2), 4.40-4.05 (m, 2H, CH
2

OTHP), 3.83 (m, 1H, CH
a
-6), 3.52 (m, 1H, CH
b
-6), 2.99
(s, 3H, CH
3
), 2.58 (bs, 1H, OH), 1.90-1.30 (m, 6H, 3xCH
2
).

- (Z)-9-[4-(Ttrahydropyran-2-yloxy)-but-2-nyl]adnine, R et S (56)
N
N
N
N
NH
2
4'
9
8
7
1
2
3
4
5
6
1'
O O
2'' *
6''
C
14
H
19
N
5
O
2
MM 289.33

Une suspension dadnine (2.31g, 17.1mmol) et de carbonate de potassium (1.42g,
10.2mmol) dans du DMF (80 mL) est chauffe 75C pendant 30 minutes. Ensuite, une
Partie exprimentale
173

solution du compos (55) (2.14g, 8.56mmol) dans du DMF (10 mL) est ajoute. Le mlange
est laiss sous agitation 75C pendant 1h30 puis les solvants sont vapors sous vide. Le
rsidu est partag entre dichloromthane et eau. La phase aqueuse est extraite par du
CH
2
Cl
2
et les extraits organiques runis sont schs (Na
2
SO
4
) puis concentrs. Le rsidu est
2
Cl
2
/MeOH, 96/4) pour donner le compos
(37) sous la forme dun solide blanc (1.12g, 47%).
1
6
) o: 8.13 (s, 1H, H-2), 8.10 (s, 1H, H-8), 7.20 (s, 2H, NH
2
), 5.90-
5.75 (m, 2H, CH=CH), 4.83 (d, 2H, J=5.3Hz, CH
2
-1), 4.66 (bs, 1H, CH-2), 4.40-4.20 (m, 2H,
CH
2
-4), 3.80 (m, 1H, CH
a
-6), 3.44 (m, 1H, CH
b
-6), 1.80-1.35 (m, 6H, 3xCH
2
).

- (Z)-9-(4-hydroxybut-2-nyl)adnine (57)
N
N
N
N
NH
2
4'
9
8
7
1
2
3
4
5
6
1'
OH
C
9
H
11
N
5
O
MM: 205.22

Le compos (56) (0.15g, 0.52mmol) est suspendu dans de leau distille (10mL). Une
solution aqueuse de HCl (1N, 10mL) est ensuite ajoute goutte goutte, puis le mlange est
chauff 70C jusqu la disparition du produit de dpart (contrle CCM). Le milieu est
neutralis jusqu pH=10 par une solution aqueuse sature de NaHCO
3
, puis le solvant est
vapor. Le solide est ensuite lav plusieurs fois avec un mlange
dichloromthane/mthanol (8/2), puis les filtrats runis sont concentrs et le rsidu purifi
par chromatographie sur gel de silice (dichloromthane/mthanol, 90/10) pour donner le
compos (57) sous la forme dun solide blanc (0.12g, quant.).
1
6
) o: 8.13 (s, 1H, H-2), 8.11 (s, 1H, H-8), 7.21 (s, 2H, NH
2
), 5.73
(dt, J1=10.9Hz, J2=5.9Hz, 1H, CH=CH), 5.59 (dtt, J1=10.9Hz, J2=6.8Hz, J3=1.4Hz, 1H, CH=CH),
4.95 (bs, 1H, OH), 4.82 (d, 2H, J=7.1Hz, CH
2
-adnine), 4.19 (s, 2H, CH
2
OH).
Partie exprimentale
174

- N-(4-Hydroxy-but-2-ynyl)phtalimide (58)
203

N
O
O
HO
C
12
H
9
NO
3
MM: 215.20
4'
1'

Le but-2-yne-1,4-diol (0.860g, 10mmol), la triphnylphosphine (1.83g, 7mmol) et le
phtalimide (1.03g, 7mmol) sont solubiliss dans du THF anhydre (40mL), et la solution est
refroidie 0C. Le DIAD (1.386mL, 7mmol) est ensuite ajout et le milieu est agit 0C
pendant la nuit. Le solvant est ensuite vapor, et le mlange repris dans du
dichloromthane. La phase organique est ensuite lave avec de leau et concentre, puis le
rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane/actate dthyle, 6/4)
pour donner le produit (58) sous la forme dun solide blanc (0.950g, 44%).
1
6
) o: 7.89-7.85 (m, 4H, H arom.), 5.17 (t, 1H, J=5.9Hz, OH),
4.39 (s, 2H, CH
2
-N), 4.02 (d, 2H, J=5.9Hz, CH
2
-O).

- 9-[4-Phtalimidylbut-2-ynyl]adnine (59)
N
O
O
N
N
N
N
NH
2
1
2
3
4
5
6 7
8
9
1'
4'
C
17
H
12
N
6
O
2
MM: 332.32

Ladnine (0.234g, 1.73mmol), la triphnylphosphine (0.473g, 1.80mmol) et le compos
(58) (0.311g, 1.44mmol) sont mis en suspension dans du THF anhydre (30mL) et le milieu est
refroidi 0C. Le DIAD (358L, 1.80mmol) est ensuite ajout goutte goutte et le milieu est
maintenu 0C pendant 2 heures puis port au reflux pendant la nuit. Le lendemain, le
Partie exprimentale
175

milieu est filtr et le filtrat concentr pour donner un rsidu, qui est purifi par
chromatographie sur gel de silice (dichloromthane/mthanol, 95/5) pour donner le produit
1
6
) o: 8.16 (s, 1H, H-2), 8.11 (s, 1H, H-8), 7.92-7.84 (m, 4H, H
phtalimide), 7.26 (s, 2H, NH
2
), 5.02 (s, 2H, CH
2
-1), 4.42 (s, 2H, CH
2
-4).

- Chlorhydrate de 4-aminobut-2-yn-1-ol (50).HCl
NH
2
HO
.HCl
C
5
H
12
ClNO
MM: 137.61
4
1

Le compos (58) (0.950g, 4.41mmol) est solubilis dans une solution de mthylamine
dans leau (40%, 14mL). Aprs 15 minutes, le milieu est concentr sous vide, et le rsidu
repris dans un mlange eau/thanol (1/1). HCl concentr est alors ajout (37%, 3.5mL) et le
mlange est chauff 70C pendant 15 minutes. Les solvants sont ensuite vapors, et le
rsidu lav plusieurs fois au dichloromthane jusqu lobtention dun solide blanc (0.530g,
quant.) qui a t utilis dans la raction suivante sans purification supplmentaire.

- 4-(N-benzyloxycarbonylamino)but-2-yn-1-ol (60)
O
H
N
O
HO
1'
4'
C
12
H
13
NO
3
MM: 219.24

Partie exprimentale
176

Le compos (50).HCl (0.53g, 4.38mmol) et le carbonate de sodium (0.928g, 8.76mmol)
sont mis en suspension dans leau (20mL). Le chloroformiate de benzyle (930L, 6.57mmol)
est ensuite ajout. La raction est agite pendant 1 heure temprature ambiante, ensuite
le solvant est vapor et le rsidu purifi par chromatographie sur gel de silice
(dichloromhtane/mthanol, 96/4) pour donner le produit (60) sous la forme dune huile
incolore (0.39g, 40%).
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 7.39 (m, 5H, H arom.), 5.21 (bs, 1H, NH), 5.10 (s, 2H, CH
2

-Ph),
4.23 (s, 2H, CH
2
-1), 3.99 (d, 2H, J=5.1Hz, CH
2
-4), 2.69 (bs, 1H, OH).

- 9-[4-(N-benzyloxycarbonylamino)but-2-ynyl]adnine (61)
O
H
N
O
N
N
N
N
NH
2
1
2
3
4
5
6 7
8
9
1'
4'
C
17
H
16
N
6
O
2
MM: 336.35

Ladnine (0.314g, 2.35mmol), la triphnylphosphine (0.508g, 1.93mmol) et le compos
(60) (0.340g, 1.55mmol) sont mis en suspension dans du THF anhydre (30mL) et le milieu est
refroidi 0C. Le DIAD (358L, 1.93mmol) est ensuite ajout goutte goutte et le milieu est
maintenu 0C pendant 2 heures puis remont temprature ambiante pendant la nuit. Le
lendemain, le milieu est filtr et le filtrat concentr pour donner un rsidu, qui est purifi par
1
6
) o: 8.17 (s, 1H, H-2), 8.15 (s, 1H, H-8), 7.42 (m, 5H, phnyle),
7.22 (s, 2H, NH
2
), 5.13 (s, 2H, CH
2
IR (KBr) v(cm
-1
): 1730, 1683, 1613.
-Ph), 5.03 (s, 2H, CH
2
-1), 3.95 (d, 2H, J=5.3 Hz, CH
2
-4).

Partie exprimentale
177

- 17-(3-Oxoandrost-4-nyl)carboxylate de N-succinimidyle (62)
204

O
H
3
C
H
3
C
O
O
3
4
20
17 11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
N
O
O
C
24
H
31
NO
5
MM: 413.51

A une solution de N-hydroxysuccinimide (0.110 g, 0.96 mmol) et du compos (29) (0.300
g, 0.95 mmol) dans du THF anhydre (6 mL) est ajoute une solution de DCC (0.195 g, 0.95
mmol) dans du THF anhydre (3 mL). Le mlange est agit pendant la nuit temprature
ambiante, puis il est filtr et le filtrat concentr sous vide. Le rsidu est purifi par
2
Cl
2
/MeOH, 99/1) suivie dune recristallisation dans un
mlange mthanol/eau pour donner le compos (62) sous la forme dun solide blanc (0.216
g, 55%).
Pf=233-236C (Litt. 236-238C).
1
6
) o: 5.64 (s, 1H, H-4), 2.81 (m, 4H, 2CH
2
-succinimide), 2.50-
0.90 (m, 20H), 1.16 (s, 3H, CH
3
-19), 0.78 (s, 3H, CH
3
-18).
IR (KBr) v(cm
-1
): 3457, 2938, 2850, 1809, 1776, 1745, 1673, 1657, 1609, 1362, 1209,
1063.

Partie exprimentale
178

- 17|-[4-(6-Aminopurin-9-yl)butylcarbamoyl]androst-4-n-3-one (63)
O
H
3
C
H
3
C
O
NH
3
4
20
17 11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
N
N
N
N
H
2
N
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1'
6'
4''
1''
C
29
H
40
N
6
O
2
MM: 504.67

Une solution du compos (48) (0.080 g, 0.39 mmol), du compos (62) (0.160 g, 0.39
mmol) et de la diisopropylthylamine (0.136 mL, 0.78 mmol) dans du DMF (10 mL) est agite
pendant la nuit temprature ambiante. Le solvant est vapore sous vide et le rsidu
solubilis dans du dichloromthane. La phase organique est lave avec de leau, sche
Na
2
SO
4
, filtre et concentre sous vide. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de
silice (CH
2
Cl
2
/MeOH, 98/2 puis 95/5) pour donner le compos (63) sous la forme dun solide
blanc (0.150 g, 77%).
Pf=178C.
1
6
) o: 8.12 (s, 1H, H-2), 8.11 (s, 1H, H-8), 7.45 (t, 1H, J =5.6Hz,
NH), 7.19 (s, 2H, NH
2
), 5.62 (s, 1H, H-4), 4.13 (t, 2H, J=6.8 Hz, CH
2
-adnine), 3.21 (m, 1H,
NHCH
a
H
b
), 2.90 (m, 1H, NHCH
a
H
b
), 2.50-0.78 (m, 24H), 1.13 (s, 3H, CH
3
-19), 0.50 (s, 3H, CH
3
-
18).
13
6
) o: 198.91 (C-3), 172.29 (CONH), 171.85 (C-5), 156.79 (C-6),
153.18 (C-2), 150.34 (C-4), 141.68 (C-8), 123.99 (CH-4), 119.59 (C-5), 56.34 (CH), 55.78
(CH), 54.12 (CH), 44.03 (C), 43.47 (CH
2
), 39.05 (C), 38.65 (CH
2
), 38.38 (CH
2
), 35.97 (CH
2
),
35.79 (CH), 34.49 (CH
2
), 32.85 (CH
2
), 32.53 (CH
2
), 27.98 (CH
2
), 27.58 (CH
2
), 25.02 (CH
2
), 24.05
(CH
2
), 21.21 (CH
2
), 17.71 (CH
3
-19), 14.06 (CH
3
-18).
SM (CI) m/z : 1031 ([2M+Na]
+
, 6%), 894 (7%), 505 ([M+H]
+
, 100%).
29
H
40
N
6
O
2
+H: 505.3291, trouve: 505.3287.
Partie exprimentale
179

- 17|-[6-(6-Aminopurin-9-yl)hexylcarbamoyl]androst-4-n-3-one (64)
O
H
3
C
H
3
C
O
NH
3
4
20
17 11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
N
N
N
N
H
2
N
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1'
6'
6''
1''
C
31
H
44
N
6
O
2
MM: 532.72

Une solution du compos (42) (0.234 g, 1 mmol), du compos (62) (0.413 g, 1 mmol) et
de la diisopropylthylamine (200 L, 1.15 mmol) dans du DMF (30 mL) est agite pendant la
nuit temprature ambiante. Le solvant est vapor sous vide et le rsidu est solubilis dans
du dichloromthane. La phase organique est lave avec de leau, sche sur Na
2
SO
4
, filtre
puis concentre sous vide. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice
(CH
2
Cl
2
/MeOH, 95/5) pour donner le compos (64) sous la forme dun solide blanc (0.420 g,
79%).
Pf=115C
1
6
) o: 8.13 (s, 1H, H-2), 8.12 (s, 1H, H-8), 7.41 (t, 1H, J=5.8 Hz,
NH), 7.17 (s, 2H, NH
2
), 5.62 (s, 1H, H-4), 4.11 (t, 2H, J=7.0 Hz, CH
2
-6), 3.14 (m, 1H, NHCH
a
H
b
),
2.87 (m, 1H, NHCH
a
H
b
), 2.50-0.82 (m, 28H), 1.12 (s, 3H, CH
3
-19), 0.58 (s, 3H, CH
3
-18).
13
C RMN (75MHz, CDCl
3
) o: 199.63 (C-3), 172.58 (CONH), 171.18 (C-5), 155.57 (C-6),
153.08 (C-2), 150.24 (C-4), 140.57 (C-8), 124.03 (CH-4), 119.79 (C-5), 57.16 (CH), 55.65
(CH), 53.91 (CH), 43.91 (CH
2
), 43.77 (C), 39.29 (CH
2
), 38.74 (C), 38.52 (CH
2
), 35.86 (CH
2
),
35.73 (CH), 34.08 (CH
2
), 32.92 (CH
2
), 32.06 (CH
2
), 30.13 (CH
2
), 29.89 (CH
2
), 26.44 (CH
2
), 26.33
(CH
2
), 24.53 (CH
2
), 23.72 (CH
2
), 21.06 (CH
2
), 17.50 (CH
3
-19), 13.36 (CH
3
-18).
SM (CI) m/z : 1072 (8%), 793 (9%), 533 ([M+H]
+
, 100%).
31
H
44
N
6
O
2
+H: 533.3604; trouve: 533.3609.
Partie exprimentale
180

- 17|-[4-(6-Aminopurin-9-yl)but-2-ynylcarbamoyl]androst-4-n-3-one (65)
O
H
3
C
H
3
C
O
NH
3
4
20
17 11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
N
N
N
N
H
2
N
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1'
6'
4''
1''
C
29
H
36
N
6
O
2
MM: 500.64

mmol) et de la diisopropylthylamine (200 L, 0.49 mmol) dans du DMF (7 mL) est agite
pendant la nuit temprature ambiante. Le solvant est vapor sous vide et le rsidu repris
dans du dichloromthane. La phase organique est lave avec de leau, sche sur Na
2
SO
4
,
filtre puis concentre sous vide. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice
(CH
2
Cl
2
/MeOH, 95/5 puis 93/7) pour donner le compos (65) sous la forme dun solide blanc
(0.160 g, 92%).
Pf=232C.
1
6
) o: 8.16 (s,1H, H-2), 8.14 (s, 1H, H-8), 7.88 (t, 1H, J=5.7 Hz,
NH), 7.25 (s, 2H, NH
2
), 5.62 (s, 1H, H-4), 5.00 (s, 2H, CH
2
-4), 3.94 (dd, 1H, J=17.2Hz , 5.7Hz,
CH
a
H
b
NH), 3.80 (dd, 1H, J=17.2Hz , 5.7Hz, CH
a
H
b
13
C RMN (75MHz, CDCl
3
) o: 199.64 (C-3), 172.50 (CONH), 171.07 (C-5), 155.54 (C-6),
153.40 (C-2), 149.81 (C-4), 139.97 (C-8), 124.07 (CH-4), 119.67 (C-5), 83.03 (CC), 75.37
(CC), 56.87 (CH), 55.67 (CH), 53.92 (CH), 44.03 (C), 38.74 (C), 38.50 (CH
2
), 35.89 (CH
2
), 35.72
(CH), 34.09 (CH
2
), 33.47 (CH
2
), 32.90 (CH
2
), 32.05 (CH
2
), 29.29 (CH
2
), 24.52 (CH
2
), 23.66 (CH
2
),
21.01 (CH
2
), 17.50 (CH
3
-19), 13.36 (CH
3
-18).
NH), 2.50-0.80 (m, 20H), 1.14 (s, 3H, CH
3
-
19), 0.50 (s, 3H, CH
3
-18).
SM (ESI) m/z : 501 ([M+H]
+
, 100%).
29
H
36
N
6
O
2
+H: 501.2978; trouve: 501.2979.
Partie exprimentale
181

- (E)-17|-[4-(6-Aminopurin-9-yl)but-2-nylcarbamoyl]androst-4-n-3-one (66)
O
H
3
C
H
3
C
O
NH
3
4
20
17 11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
N
N
N
N
H
2
N
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1'
6'
4''
1''
C
29
H
38
N
6
O
2
MM: 502.65

Une solution du compos (47) (0.030 g, 0.15 mmol), du compos (62) (0.60 g, 0.15 mmol)
et de la diisopropylthylamine (36 L, 0.20 mmol) dans du DMF (4 mL) est agite pendant la
nuit temprature ambiante. Le solvant est vapor sous vide et le rsidu solubilis dans du
dichloromthane. La phase organique est lave avec de leau, sche sur Na
2
SO
4
, filtre puis
concentre sous vide. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice
(CH
2
Cl
2
/MeOH, 95/5 puis 80/20) pour donner le compos (66) sous la forme dun solide
blanc (0.040 g, 55%).
Pf=206C.
1
6
) o: 8.12 (s, 1H, H-2), 8.07 (s, 1H, H-8), 7.63 (t, 1H, J=5.6 Hz,
NH), 7.19 (s, 2H, NH
2
), 5.62 (s, 1H, H-4), 5.76 (m dont J1=16Hz, 1H, HC=CH), 5.57 (m dont
J1=16Hz, 1H, HC=CH), 4.73 (d, 2H, J=5.6 Hz, CH
2
-4), 3.85-3.73 (m, 1H, NHCH
a
H
b
), 3.58-3.47
(m, 1H, NHCH
a
H
b
13
C RMN (75MHz, CDCl
3
+10% CD
3
OD) o: 200.55 (C-3), 173.20 (CONH), 172.36 (C-5'),
155.62 (C-6), 152.87 (C-2), 149.39 (C-4), 140.42 (C-8), 131.51 (
), 2.50-0.75 (m, 20H), 1.14 (s, 3H, CH
3
-19), 0.49 (s, 3H, CH
3
-18).
CH=CH), 125.21 (CH=CH
SM (ESI) m/z : 525 ([M+Na]
+
, 28%), 503 ([M+H]
+
, 100%), 368 ([M-adnine]
+
, 35%), 205
(23%).
),
123.70 (CH-4), 119.06 (C-5), 56.80 (CH), 55.49 (CH), 53.76 (CH), 45.02 (CH
2
), 43.87 (C), 40.41
(CH
2
), 38.72 (C), 38.18 (CH
2
), 35.63 (CH
2
), 35.60 (CH), 33.84 (CH
2
), 32.88 (CH
2
), 31.93 (CH
2
),
24.44 (CH
2
), 23.62 (CH
2
), 20.90 (CH
2
), 17.33 (CH
3
-19), 13.20 (CH
3
-18).
29
H
38
N
6
O
2
+H: 503.3134; trouve: 503.3132.
Partie exprimentale
182

- (Z)-17|-[4-(6-Aminopurin-9-yl)but-2-nylcarbamoyl]androst-4-n-3-one (67)
O
H
3
C
H
3
C
O
NH
3
4
20
17 11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
N
N
N
N
H
2
N
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1'
6'
4''
1''
C
29
H
38
N
6
O
2
MM: 502.65

mmol) et de la diisopropylthylamine (90 L, 0.51 mmol) dans du DMF (25 mL) est agite
pendant la nuit temprature ambiante. Le solvant est vapor sous vide et le rsidu
solubilis dans du chloroforme. La phase organique est lave avec de leau, sche sur
Na
2
SO
4
, filtre puis concentre sous vide. Le rsidu est purifi par chromatographie sur
couche mince de silice (CH
2
Cl
2
/MeOH, 38/3) pour donner le compos (67) sous la forme dun
solide blanc (0.070 g, 40%).
Pf=234C.
1
6
) o: 8.14 (s, 2H, H-2, H-8), 7.75 (bt, 1H, NH), 7.21 (s, 2H,
NH
2
), 5.62 (s, 1H, H-4), 5.72-5.51 (m, 2H, HC=CH), 4.86 (d, 2H, J= 6.5Hz, CH
2
-4), 4.07-3.78
(m, 2H, CH
2
NH), 2.77-0.80 (m, 20H), 1.13 (s, 3H, CH
3
-19), 0.61 (s, 3H, CH
3
-18).
13
C RMN (75MHz, CDCl
3
) o: 199.62 (C-3), 172.77 (CONH), 171.14 (C-5), 155.57 (C-6),
153.01 (C-2), 150.05 (C-4), 140.08 (C-8), 130.92 (CH=CH), 126.06 (CH=CH
SM (ESI) m/z : 525 ([M+Na]
+
, 45%), 503 ([M+H]
+
, 100%), 368 ([M-adnine]
+
, 17%).
), 124.07 (CH-4),
120.00 (C-5), 57.13 (CH), 55.71 (CH), 53.85 (CH), 44.02 (C), 40.69 (CH
2
), 38.74 (C), 38.50
(CH
2
), 35.86 (CH
2
), 35.79 (CH
2
), 34.09 (CH
2
), 32.93 (CH
2
), 32.07 (CH
2
), 24.63 (CH
2
), 23.86
(CH
2
), 21.04 (CH
2
), 35.76 (CH), 17.50 (CH
3
-19), 13.49 (CH
3
-18).
29
H
38
N
6
O
2
+H: 503.3134; trouve: 503.3134.

Partie exprimentale
183

- 17|-{[Trans-4-(6-Aminopurin-9-ylmthyl)cyclohexylmthyl]carbamoyl}androst-4-
n-3-one (68)
O
H
3
C
H
3
C
O
NH
3
4
20
17
11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
N
N
N
N
H
2
N
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1'
6'
C
33
H
46
N
6
O
2
MM: 558.76
1''
4''

pendant la nuit temprature ambiante. Le solvant est vapor sous vide et le rsidu est
solubilis dans du chloroforme. La phase organique est lave avec de leau, sche sur
Na
2
SO
4
, filtre et concentre sous vide. Le rsidu est purifi par chromatographie sur couche
mince de silice (CH
2
Cl
2
/MeOH, 90/10) pour donner le compos (68) sous la forme dun solide
blanc (0.115 g, 60%).
Pf=127C.
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 8.34 (s, 1H, H-2), 7.75 (s, 1H, H-8), 6.01 (s, 2H, NH
2
), 5.71 (s,
1H, H-4), 5.37 (t, 1H, J=5.9 Hz, NH), 4.02 (d, 2H, J=7.2 Hz, CH
2
-adnine), 3.18 (m, 1H,
NHCH
a
H
b
), 3.01 (m, 1H, NHCH
a
H
b
), 2.49-0.73 (m, 30H), 1.17 (s, 3H, CH
3
-19), 0.70 (s, 3H, CH
3
-
18).
13
C RMN (75MHz, CDCl
3
) o: 199.60 (C-3), 172.64 (CONH), 171.13 (C-5), 155.37 (C-6),
152.74 (C-2), 150.40 (C-4), 141.21 (C-8), 124.07 (CH-4), 119.67 (C-5), 57.26 (CH), 55.69
(CH), 53.93 (CH), 50.02 (CH
2
), 45.56 (CH
2
), 43.78 (C), 38.75 (C), 38.58 (CH
2
), 38.39 (CH), 38.01
(CH), 35.76 (CH), 35.89 (CH
2
), 34.10 (CH
2
), 32.93 (CH
2
), 32.07 (CH
2
), 30.13 (CH
2
), 30.08 (CH
2
),
30.03 (CH
2
), 29.83 (CH
2
), 24.53 (CH
2
), 23.79 (CH
2
), 21.11 (CH
2
), 17.52 (CH
3
-19), 13.40 (CH
3
-
18).
SM (ESI) m/z : 559 ([M+H]
+
, 100%), 261 (22%).
33
H
46
N
6
O
2
+H: 559.3760; trouve: 559.3760.
Partie exprimentale
184

- 17|-{[4-(6-Aminopurin-9-ylmthyl)phnylmthyl]carbamoyl}androst-4-n-3-one
(69)
O
H
3
C
H
3
C
O
NH
3
4
20
17
11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
N
N
N
N
H
2
N
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1'
6'
C
33
H
46
N
6
O
2
MM: 558.76
1''
4''

pendant 20h 35C. Le mlange est dissous dans lactate dthyle et la phase organique
lave avec de leau. La phase aqueuse est extraite de nouveau avec de lactate dthyle. Les
phases organiques runies sont concentres sous vide. Le rsidu est purifi par
chromatographie sur couche mince de silice (CH
2
Cl
2
/MeOH, 92/8) pour donner le produit
(69) sous la forme dun solide blanc (0.040 g, 61%).
Pf=155-157C.
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 8.39 (s, 1H, H-2), 7.76 (s, 1H, H-8), 7.25 (m, 4H, H-phnyl),
5.71 (m, 3H, H-4 + NH
2
), 5.63 (t, 1H, J=5.8 Hz, NH), 5.35 (s, 2H, CH
2
-adnine), 4.49 (dd, 1H,
J1= 14.8Hz, J2= 5.8Hz, NHCH
a
H
b
), 4.37 (dd, 1H, J1=14.8Hz, J2= 5.8Hz, NHCH
a
H
b
), 2.50-0.83
(m, 20H), 1.17 (s, 3H, CH
3
-19), 0.73 (s, 3H, CH
3
-18).
13
C RMN (75MHz, CDCl
3
) o: 199.59 (C-3), 172.61 (CONH), 171.09 (C-5), 155.59 (C-6),
153.42 (C-2), 150.35 (C-4), 140.49 (C-8), 139.27 (C-phnyl ipso), 134.91 (C-phnyl ipso),
128.63 (2xCH-phnyl), 128.22 (2xCH-phnyl), 124.05 (CH-4), 119.68 (C-5), 57.11 (CH), 55.69
(CH), 53.87 (CH), 47.04 (CH
2
), 43.95 (C), 43.30 (CH
2
), 38.73 (C), 38.54 (CH
2
), 35.86 (CH
2
),
35.72 (CH), 34.07 (CH
2
), 32.90 (CH
2
), 32.05 (CH
2
), 24.52 (CH
2
), 23.81 (CH
2
), 21.06 (CH
2
), 17.50
(CH
3
-19), 13.43 (CH
3
-18).
SM (ESI) m/z : 1127 ([2M+Na]
+
, 9%), 1105 ([2M+H]
+
, 7%), 553 ([M+H]
+
, 100%), 418 ([M-
adnine]
+
, 10%).
Partie exprimentale
185

33
H
40
N
6
O
2
+H: 553.3286; trouve 553.3292.

- 7o-[4-(6-Aminopurin-9-yl)butylcarbamoyl]pregn-4-n-3,20-dione (70)-a et N-(3,20-
dioxopregn-4-n-7-carbonyloxy)-N-[4-(6-aminopurin-9-yl)butyl]succinamide (70)-b
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
3
4
20
17
11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
N
N
N
N
H
2
N
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1' 6'
21
O
HN
4''
1''
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
N
N
N
N
H
2
N
O
O
NH
O
O NH
3
4
20
17
11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
21
4''
1''
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1' 6'
C
31
H
42
N
6
O
3
MM: 546.70
C
35
H
47
N
7
O
6
MM: 661.79
(70)-a
(70)-b

Le DCC (0.058g, 0.28mmol) et le N-hydroxysuccinimide (0.032g, 0.28mmol) sont ajouts
une solution dacide (30) (0.1g, 0.28mmol) dans DMF anhydre (4mL). Le mlange est laiss
sous agitation pendant la nuit temprature ambiante. Le lendemain, le compos (48)
(0.068g, 0.33mmol) puis la diisopropylthylamine (0.072mL, 0.41mmol) sont ajouts.
Lagitation est poursuivie pendant trois heures supplmentaires. Le solvant est ensuite
vapor, et le mlange partag entre dichloromthane et eau. La phase aqueuse est extraite
plusieurs fois au dichloromthane. Les phases organiques runies sont concentres, et le
rsidu est purifi par chromatographie sur couche mince de silice
(dichloromthane/mthanol, 93/7) pour donner deux produits : (70)-a, Rf 0.35, (0.048g,
32%) et (70)-b, Rf 0.3 (0.035g, 23%).

(70)-a : solide blanc
1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 8.32 (s, 1H, H-2), 7.82 (s, 1H, H-8), 6.03 (t, 1H, J=5.8
Hz, NH), 5.95 (s, 2H, NH
2
), 5.66 (d, 1H, J=1.2Hz, H-4), 4.25 (t, 2H, J=7.2 Hz, CH
2
N), 3.27
(m, 2H, NHCH
2
), 2.66 (m, 1H), 2.54-1.14 (m, 22H), 2.09 (s, 3H, CH
3
-21), 1.18 (s, 3H,
CH
3
-19), 0.62 (s, 3H, CH
3
-18).
Partie exprimentale
186

13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 209.30 (C-20), 198.88 (C-3), 173.13 (CONH), 169.06
(C-5), 155.47 (C-6), 152.61 (CH-2), 150.13 (C-4), 140.83 (CH-8), 125.46 (CH-4),
119.79 (C-5), 63.16 (CH-17), 52.20 (CH), 46.10 (CH), 44.95 (CH), 44.40 (C), 43.40
(CH
2
), 38.32 (CH
2
), 38.26 (C), 38.20 (CH
2
), 37.80 (CH), 36.54 (CH
2
), 35.53 (CH
2
), 34.04
(CH
2
), 31.67 (CH
3
-21), 27.63 (CH
2
), 26.60 (CH
2
), 24.75 (CH
2
), 22.85 (CH
2
), 21.41 (CH
2
),
17.99 (CH
3
-19), 13.25 (CH
3
-18).
SM (ESI) m/z : 569 ([M+Na]
+
, 5%), 547 ([M+H]
+
, 100%).
31
H
42
N
6
O
3
+H: 547.3391; trouve: 547.3392.

(70)-b: solide blanc
1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 8.31 (s, 1H, H-2), 7.92 (s, 1H, H-8), 6.60 (t, 1H, J=5.5
Hz, CONH), 6.40 (s, 2H, NH
2
), 5.69 (s, 1H, H-4), 4.21 (t, 2H, J=7.0 Hz, CH
2
N), 3.28 (m,
2H, NHCH
2
), 2.97 (bs, 1H, H-7), 2.73-1.10 (m, 22H), 2.56 (m, 4H, CO-CH
2
CH
2
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 209.44 (C-20), 199.20 (C-3), 172.46 (CO), 171.25 (C-
5), 167.46 (CO), 155.52 (C-6), 152.45 (CH-2), 149.94 (C-4), 141.17 (CH-8), 125.99
(CH-4), 119.56 (C-5), 63.16 (CH-17), 51.87 (CH), 46.32 (CH), 44.26 (C), 43.48 (CH
2
),
41.60 (CH), 38.82 (CH
2
), 38.33 (C), 38.05 (CH
2
), 37.42 (CH), 35.56 (CH
2
), 35.14 (CH
2
),
34.08 (CH
2
), 31.61 (CH
3
-21), 27.42 (CH
2
), 26.22 (CH
2
), 24.16 (CH
2
), 22.95 (CH
2
), 21.20
(CH
2
), 17.76 (CH
3
-19), 13.15 (CH
3
-18).
-CO), 2.07
(s, 3H, CH
3
-21), 1.18 (s, 3H, CH
3
-19), 0.63 (s, 3H, CH
3
-18).
SM (ESI) m/z : 684 ([M+Na]
+
, <5%), 662 ([M+H]
+
, 100%), 382 (15%).
35
H
47
N
7
O
6
+H: 662.3661; trouve: 662.3675.

Partie exprimentale
187

- 7o-[6-(6-Aminopurin-9-yl)hexylcarbamoyl]pregn-4-n-3,20-dione (71)-a et N-(3,20-
dioxopregn-4-n-7-carbonyloxy)-N-[6-(6-aminopurin-9-yl)hexyl]succinamide (71)-b
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
3
4
20
17
11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
N
N
N
N
H
2
N
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1'
6'
21
O
HN
6''
1''
C
33
H
46
N
6
O
3
MM: 574.76
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
N
N
N
N
H
2
N
O
O
NH
O
O NH
(71)-a
(71)-b
3
4
20
17
11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
21
1''
6''
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1'
6'
C
37
H
51
N
7
O
6
MM : 689.84

une solution dacide (30) (0.1g, 0.28mmol) dans du DMF anhydre (4mL). Le mlange est
laiss sous agitation pendant la nuit temprature ambiante. Le lendemain, le compos (42)
Lagitation est poursuivie pendant trois heures supplmentaires. Le solvant est ensuite
rsidu est purifi par colonne sur gel de silice (dichloromthane/mthanol , 92/8) pour
donner deux produits : (71)-a, Rf 0.35, (0.058g, 38%) et (71)-b, Rf 0.3 (0.047g, 31%).

1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 8.32 (s, 1H, H-2), 7.81 (s, 1H, H-8), 5.89 (s, 2H, NH
2
),
5.72 (t, 1H, J=6.0 Hz, NH), 5.68 (s, 1H, H-4), 4.17 (t, 2H, J=7.0 Hz, CH
2
-6), 3.16 (q, 2H,
J=6.0 Hz, NHCH
2
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 209.81 (C-20), 199.42 (C-3), 172.97 (CONH), 170.02
(C-5), 155.54 (C-6), 152.81 (CH-2), 149.77 (C-4), 140.48 (CH-8), 125.15 (CH-4),
119.20 (C-5), 63.18 (CH-17), 52.15 (CH), 46.02 (CH), 44.77 (CH), 44.42 (C), 43.88
(CH
2
), 38.80 (CH
2
), 38.23 (C), 38.14 (CH
2
), 37.72 (CH), 36.52 (CH
2
), 35.39 (CH
2
), 33.91
), 2.73-0.99 (m, 27H), 2.09 (s, 3H, CH
3
-21), 1.18 (s, 3H, CH
3
-19), 0.62
(s, 3H, CH
3
-18).
Partie exprimentale
188

(CH
2
), 31.59 (CH
3
-21), 30.05 (CH
2
), 26.27 (CH
2
), 26.16 (CH
2
), 24.98 (CH
2
), 24.61 (CH
2
),
22.81 (CH
2
), 21.35 (CH
2
), 17.92 (CH
3
-19), 13.17 (CH
3
-18).
SM (ESI) m/z : 597 ([M+Na]
+
, <5%), 575 ([M+H]
+
, 100%).
33
H
47
N
6
O
3
+H: 575.3704; trouve: 575.3710.

1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 8.32 (s, 1H, H-2), 7.86 (s, 1H, H-8), 6.13 (m, 3H,
NH
2
+NHCO), 5.70 (s, 1H, H-4), 4.19 (t, 2H, J=6.9 Hz, CH
2
N), 3.19 (q, 2H, J=6.4 Hz
NHCH
2
), 2.95 (bs, 1H, H-7), 2.74-1.10 (m, 26H), 2.54 (m, 4H, CO-CH
2
CH
2

13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 210.09 (C-20), 199.82 (C-3), 172.36 (CO), 170.83 (C-
5), 168.12 (CO), 155.46 (C-6), 152.60 (CH-2), 149.62 (C-4), 140.58 (CH-8), 125.72
(CH-4), 119.05 (C-5), 63.15 (CH-17), 51.77 (CH), 46.25 (CH), 44.26 (C), 43.94 (CH
2
),
41.50 (CH), 39.28 (CH
2
), 38.28 (C), 37.99 (CH
2
), 37.26 (CH), 35.35 (CH
2
), 35.09 (CH
2
),
33.84 (CH
2
), 31.48 (CH
3
-21), 31.10 (CH
2
), 28.96 (CH
2
), 28.52 (CH
2
), 26.13 (CH
2
), 26.11
(CH
2
), 24.02 (CH
2
), 22.84 (CH
2
), 21.14 (CH
2
), 17.64 (CH
3
-19), 13.01 (CH
3
-18).
-CO), 2.07 (s,
3H, CH
3
-21), 1.19 (s, 3H, CH
3
-19), 0.63 (s, 3H, CH
3
-18).
SM (ESI) m/z : 690 ([M+H]
+
, 100%), 410 (36%).
37
H
52
N
7
O
6
+H: 690.3974; trouve: 690.3974.

- 7o-[4-(6-Aminopurin-9-yl)but-2-ynylcarbamoyl]pregn-4-n-3,20-dione (72)-a et N-
(3,20-dioxopregn-4-n-7-carbonyloxy)-N-[4-(6-aminopurin-9-yl)but-2-ynyl]
succinamide (72)-b
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
3
4
20
17
11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
N
N
N
N
H
2
N
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1' 6'
21
O
HN
4''
1''
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
N
N
N
N
H
2
N
O
O
NH
O
O
H
N
3
4
20
17
11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
21
4''
1''
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1' 6'
C
31
H
38
N
6
O
3
MM: 542.67
C
35
H
43
N
7
O
6
MM: 657.76
(72)-a
(72)-b

Partie exprimentale
189

Lagitation est poursuivie toute la journe. Le solvant est ensuite vapor, et le mlange
partag entre dichloromthane et eau. La phase aqueuse est extraite plusieurs fois au
dichloromthane. Les phases organiques runies sont concentres, et le rsidu est purifi
par chromatographie sur couche mince de silice (dichloromthane/mthanol , 93/7) pour
donner deux produits : (72)-a, Rf 0.35, (0.013g, 9%) et (72)-b, Rf 0.3 (0.007g, 5%).
1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 8.32 (s, 1H, H-2), 8.00 (s, 1H, H-8), 6.24 (t, 1H, J=4.8
Hz, NH), 6.19 (s, 2H, NH
2
), 5.68 (s, 1H, H-4), 4.95 (bs, 2H, CH
2
-4), 4.02 (bs, 2H,
NHCH
2
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 209.38 (C-20), 199.01 (C-3), 172.74 (CONH), 168.86
(C-5), 155.56 (C-6), 153.03 (CH-2), 149.57 (C-4), 140.05 (CH-8), 125.55 (CH-4),
119.47 (C-5), 82.59 (CC), 75.65 (CC), 63.16 (CH-17), 52.06 (CH), 46.16 (CH), 44.53
(CH), 44.40 (C), 38.28 (C), 38.15 (CH
2
), 37.81 (CH), 36.22 (CH
2
), 35.50 (CH
2
), 34.03
(CH
2
), 33.49 (CH
2
), 31.65 (CH
3
-21), 29.19 (CH
2
), 24.65 (CH
2
), 22.88 (CH
2
), 21.39 (CH
2
),
17.96 (CH
3
-19), 13.19 (CH
3
-18).
), 2.79-1.05 (m, 19H), 2.08 (s, 3H, CH
3
-21), 1.17 (s, 3H, CH
3
-19), 0.60 (s, 3H,
CH
3
-18).
SM (ESI) m/z : 543 ([M+H]
+
, 100%).
31
H
38
N
6
O
3
+H: 543.3078; trouve: 543.3086.

1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 8.29 (s, 1H, H-2), 8.09 (s, 1H, H-8), 6.93 (bs, 1H,
CONH), 6.51 (s, 2H, NH
2
), 5.70 (s, 1H, H-4), 4.93 (bs, 2H, CH
2
N), 4.04 (bs, 2H, NHCH
2
),
2.97 (bs, 1H, H-7), 2.86-1.10 (m, 18H), 2.58 (m, 4H, CO-CH
2
CH
2
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 209.51 (C-20), 199.38 (C-3), 172.20 (CO), 171.28 (C-
5), 170.50 (CO), 155.55 (C-6), 152.88 (CH-2), 149.45 (C-4), 140.44 (CH-8), 126.00
(CH-4), 119.31 (C-5), 83.02 (CC) , 75.46 (CC), 63.16 (CH-17), 51.91 (CH), 46.39 (CH),
-CO), 2.07 (s, 3H, CH
3
-
21), 1.18 (s, 3H, CH
3
-19), 0.62 (s, 3H, CH
3
-18).
Partie exprimentale
190

44.27 (C), 41.64 (CH), 38.34 (C), 38.06 (CH
2
), 37.40 (CH), 35.54 (CH
2
), 35.16 (CH
2
),
34.07 (CH
2
), 33.73 (CH
2
), 31.61 (CH
3
-21), 29.83 (CH
2
), 29.64 (CH
2
), 24.17 (CH
2
), 22.94
(CH
2
), 21.22 (CH
2
), 17.77 (CH
3
-19), 13.15 (CH
3
-18).
SM (ESI) m/z : 680 ([M+Na]
+
, 7%), 658 ([M+H]
+
, 100%).
35
H
43
N
7
O
6
+H: 658.3348; trouve: 658.3348.

- (E)-7o-[4-(6-Aminopurin-9-yl)but-2-nylcarbamoyl]pregn-4-n-3,20-dione (73)-a et
N-(3,20-dioxopregn-4-n-7-carbonyloxy)-N-[(E)-4-(6-aminopurin-9-yl)but-2-nyl]
succinamide (73)-b
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
3
4
20
17
11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
N
N
N
N
H
2
N
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1' 6'
21
O
HN
4''
1''
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
N
N
N
N
H
2
N
O
O
NH
O
O NH
3
4
20
17
11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
21
4''
1''
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1' 6'
C
31
H
40
N
6
O
3
MM: 544.69
C
35
H
45
N
7
O
6
MM: 659.78
(73)-a
(73)-b

Lagitation est poursuivie pendant quatre heures supplmentaires. Le solvant est ensuite
(dichloromthane/mthanol , 90/10) pour donner deux produits : (73)-a, Rf 0.35, (0.033g,
22%) et (73)-b, Rf 0.3 (0.031g, 21%).
Partie exprimentale
191

1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 8.32 (s, 1H, H-2), 7.81 (s, 1H, H-8), 5.84 (t, 1H, J=5.6
Hz, NH), 6.01 (s, 2H, NH
2
), 5.80 (dt, 1H, J1=15.3Hz, J2=5.7Hz, CH=), 5.62 (s, 1H, H-4),
5.58 (dt, 1H, J1=15.3Hz, J2=5.5Hz, CH=), 4.78 (d, 2H, J=5.7Hz, CH
2
-4), 3.92-3.75 (m,
2H, NHCH
2
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 209.30 (C-20), 198.90 (C-3), 172.79 (CONH), 168.91
(C-5), 155.55 (C-6), 152.96 (CH-2), 149.95 (C-4), 140.50 (CH-8), 130.86 (HC=),
125.93 (HC=), 125.51 (CH-4), 119.63 (C-5), 63.14 (CH-17), 52.12 (CH), 46.05 (CH),
44.87 (CH), 44.83 (CH
2
), 44.38 (C), 40.37 (CH
2
), 38.26 (C), 38.15 (CH
2
), 37.80 (CH),
36.47 (CH
2
), 35.49 (CH
2
), 34.03 (CH
2
), 31.65 (CH
3
-21), 24.74 (CH
2
), 22.81 (CH
2
), 21.38
(CH
2
), 17.99 (CH
3
-19), 13.22 (CH
3
-18).
), 2.74-2.60 (m, 1H), 2.64-1.10 (m, 19H), 2.08 (s, 3H, CH
3
-21), 1.17 (s, 3H,
CH
3
-19), 0.61 (s, 3H, CH
3
-18).
SM (ESI) m/z : 567 ([M+Na]
+
, 14%), 545 ([M+H]
+
, 100%).
31
H
40
N
6
O
3
+H: 545.3235; trouve: 545.3239.


1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 11.19 (bs, 1H, NHOCO), 8.28 (s, 1H, H-2), 7.87 (s, 1H,
H-8), 6.77 (bs, 1H, CONH), 6.47 (s, 2H, NH
2
), 5.82 (dt, 1H, J1=15.3Hz, J2=5.8Hz, HC=),
5.68 (s, 1H, H-4), 5.62 (dt, 1H, J1=15.3Hz, J2=5.1Hz, HC=), 4.75 (d, 2H, J=5.1Hz, CH
2
-
4), 3.83 (bs, 2H, NHCH
2
), 2.94 (bs, 1H, H-7), 2.78-1.00 (m, 18H), 2.55 (m, 4H, CO-
CH
2
CH
2
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 209.64 (C-20), 199.44 (C-3), 172.38 (C), 171.35 (C),
170.58 (C), 167.65 (C), 155.68 (C-6), 152.89 (CH-2), 149.86 (C-4), 140.89 (CH-8),
131.35 (CH=), 126.05 (CH=), 125.55 (CH-4), 119.45 (C-5), 63.25 (CH-17), 51.97 (CH),
46.47 (CH), 45.06 (CH
2
), 44.35 (C), 41.70 (CH), 40.92 (CH
2
), 38.42 (C), 38.15 (CH
2
),
37.47 (CH), 35.63 (CH
2
), 35.24 (CH
2
), 34.15 (CH
2
), 31.70 (CH
3
-21), 24.23 (CH
2
), 23.01
(CH
2
), 21.30 (CH
2
), 17.84 (CH
3
-19), 13.24 (CH
3
-18).
-CO), 2.06 (s, 3H, CH
3
-21), 1.17 (s, 3H, CH
3
-19), 0.61 (s, 3H, CH
3
-18).
SM (ESI) m/z: 660 ([M+H]
+
, 100%)
35
H
45
N
7
O
6
+H: 660.3504; trouve: 660.3513.

Partie exprimentale
192

- (Z)-7o-[4-(6-Aminopurin-9-yl)but-2-nylcarbamoyl]pregn-4-n-3,20-dione (74)-a et
N-(3,20-dioxopregn-4-n-7-carbonyloxy)-N-[(Z)-4-(6-aminopurin-9-yl)but-2-nyl]
succinamide (74)-b
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
3
4
20
17
11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
N
N
N
N
NH
2
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1'
6'
21
O
H
N
4''
1''
O
H
3
C
H
3
C
O
CH
3
N
N
N
N
H
2
N
O
O
NH
O
O
NH
3
4
20
17
11
10
9
8
7
6
5
1
2
13
16
15
14
18
12
19
21
4''
1''
9'
8'
7'
5'
4'
3'
2'
1'
6'
C
31
H
40
N
6
O
3
MM: 544.69
C
35
H
45
N
7
O
6
MM: 659.78
(74)-a
(74)-b

une solution dacide (30) (0.1g, 0.28mmol ) dans du DMF anhydre (4mL). Le mlange est
Lagitation est poursuivie pendant quatre heures supplmentaires. Le solvant est ensuite
(dichloromthane/mthanol , 90/10) pour donner deux produits : (74)-a, Rf 0.35, (0.041g,
28%) et (74)-b, Rf 0.3 (0.040g, 26%).
1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 8.29 (s, 1H, H-2), 7.87 (s, 1H, H-8), 7.41 (t, 1H, J=5.2
Hz, NH), 5.94 (s, 2H, NH
2
), 5.79 (dd, 1H, J1=10.4Hz, J2=7.8Hz, CH=), 5.66 (m, 1H, CH=),
5.67 (s, 1H, H-4), 4.89 (d, 2H, J=7.3Hz, CH
2
-4), 4.15-3.95 (m, 2H, NHCH
2
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 209.33 (C-20), 198.95 (C-3), 172.92 (CONH), 169.09
(C-5), 155.65 (C-6), 152.39 (CH-2), 149.76 (C-4), 140.86 (CH-8), 130.31 (HC=),
126.63 (HC=), 125.42 (CH-4), 120.11 (C-5), 63.21 (CH-17), 52.20 (CH), 46.11 (CH),
), 2.68 (m,
1H), 2.61-1.13 (m, 18H), 2.09 (s, 3H, CH
3
-21), 1.19 (s, 3H, CH
3
-19), 0.63 (s, 3H, CH
3
-
18).
Partie exprimentale
193

44.90 (CH), 44.46 (C), 41.07 (CH
2
), 38.23 (CH
2
), 37.85 (CH), 36.48 (CH
2
), 35.51 (CH
2
),
35.03 (CH
2
), 34.06 (CH
2
), 31.67 (CH
3
-21), 24.60 (CH
2
), 22.89 (CH
2
), 21.46 (CH
2
), 18.02
(CH
3
-19), 13.25 (CH
3
-18).
SM (ESI) m/z: 567 ([M+Na]
+
, 12%), 545 ([M+H]
+
, 100%).
31
H
40
N
6
O
3
+H: 545.3235; trouve: 545.3225.

1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 11.00 (bs, 1H, NHOCO), 8.32 (s, 1H, H-2), 7.96 (s, 1H,
H-8), 7.59 (bs, 1H, CONH), 6.34 (s, 2H, NH
2
), 5.82-5.60 (m, 2H, HC=CH), 5.71 (s, 1H,
H-4), 4.90 (d, 2H, J=7.3Hz, CH
2
-4), 4.05 (t, 2H, J=6.3Hz, NHCH
2
), 2.98 (bs, 1H, H-7),
2.70-1.10 (m, 18H), 2.62 (m, 4H, CO-CH
2
CH
2
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 209.62 (C-20), 199.35 (C-3), 172.36 (C), 171.33 (C),
170.77 (C), 167.58 (C), 155.69 (C-6), 152.59 (CH-2), 149.80 (C-4), 141.18 (CH-8),
130.49 (CH=), 126.60 (CH=), 126.10 (CH-4), 119.79 (C-5), 63.26 (CH-17), 51.92 (CH),
48.58 (CH), 46.35 (CH), 44.36 (C), 41.72 (CH), 41.02 (CH
2
), 38.43 (C), 38.12 (CH
2
),
37.55 (CH), 36.22 (CH
2
), 35.16 (CH
2
), 35.24 (CH
2
), 34.17 (CH
2
), 31.71 (CH
3
-21), 24.29
(CH
2
), 23.07 (CH
2
), 21.29 (CH
2
), 17.85 (CH
3
-19), 13.25 (CH
3
-18).
-CO), 2.06 (s, 3H, CH
3
-21), 1.18 (s, 3H,
CH
3
-19), 0.62 (s, 3H, CH
3
-18).
SM (ESI) m/z: 660 ([M+H]
+
, 100%).
35
H
45
N
7
O
6
+H: 660.3504; trouve: 660.3510.

- 1,4-Dioxa-spiro[4.5]dcan-8-ol (75)
232
O
O
OH
C
8
H
14
O
3
MM: 158.19
8

NaBH
4
(0.49g, 12.8mmol) est ajout lentement (dgagement gazeux) une solution de
1,4-dioxa-spiro[4.5]dcan-8-one (1.0g, 6.41mmol) dans du mthanol (10mL). Aprs 2.5
heures, le mlange est concentr sous vide, et 20mL dune solution aqueuse de NaOH
(0.1M) sont ajouts. La phase aqueuse est extraite plusieurs fois avec un mlange
Partie exprimentale
194

chloroforme/2-propanol (4/1). Les phases organiques runies sont laves avec une solution
aqueuse sature de NaCl, sches sur MgSO
4
, filtres puis concentres sous vide pour
donner le compos (75) sous la forme dune huile incolore (1.0g, quant.).
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 3.92 (m, 4H, OCH
2
CH
2
O), 3.78 (m, 1H, CH-OH), 1.89-1.76 (m,
4H), 1.69-1.51 (m, 5H).

- 8-Tosyloxy-1,4-dioxa-spiro[4.5]dcane (77)
233
O
O
O
S
O
O
CH
3
C
15
H
20
O
5
S
MM: 312.38
8

Le compos (75) (0.6g, 3.79mmol) et p-TsCl (0.86g, 4.55mmol) sont solubiliss dans de la
pyridine (4mL). Le mlange est laiss sous agitation pendant la nuit. Le lendemain, une
solution aqueuse sature de NaCl (5mL) est ajoute, puis le mlange est extrait avec de
lactate dthyle. Les phases organiques runies sont laves successivement avec une
solution aqueuse de HCl (3M), une solution aqueuse sature de NaHCO
3
, puis une solution
aqueuse sature de NaCl. Aprs schage sur MgSO
4
et filtration, elles sont concentres sous
vide. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice (ther de ptrole/actate
dthyle, 3/1 puis 2/1) pour donner le compos (77) sous la forme dun solide blanc (1.05,
90%).
1
H RMN (300MHz, DMSO) o: 7.48 (d, 2H, J=8.1 Hz, CH-ortho), 7.14 (d, 2H, J=8.1 Hz, CH-
mta), 4.69 (m, 1H, CHOTs), 4.20 (m, 4H, OCH
2
CH
2
O), 2.25 (s, 3H, CH
3
), 2.001.92 (m, 2H),
1.80-1.69 (m, 3H), 1.421.08 (m, 3H).

Partie exprimentale
195

- 8-Bromo-1,4-dioxa-spiro[4.5]dcane (76)
221

O
O
Br
C
8
H
13
BrO
2
MM: 221.09 8

Mthode 1 :

Une solution du compos (75) (0.2g, 1.26mmol), de CBr
4
(0.42g, 1.26mmol)
et de triphnylphosphine (0.33g, 1.26mmol) dans du dichloromthane anhydre (5mL) est
agite 0C pendant la nuit. Le solvant est ensuite vapor et le rsidu repris dans de lther
thylique puis filtr, et le filtrat est concentr sous vide. Le rsidu obtenu est purifi par
chromatographie sur gel de silice (ther de ptrole/actate dthyle, 9/1) pour obtenir le
compos (76) sous la forme dune huile incolore (0.08g, 27%).
Mthode 2 :
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 4.34-4.28 (m, 1H, CH-Br), 3.98-3.88 (m, 4H, OCH
2
CH
2
O), 2.20-
2.01 (m, 4H), 1.95-1.86 (m, 2H), 1.64-1.56 (m, 2H).
Un mlange du produit (77) (0.5g, 1.6mmol) et de bromure de lithium
(0.66g, 7.6mmol) dans du THF anhydre (15mL) est chauff sous micro-ondes 150C
pendant 3 minutes. Le solvant est ensuite vapor, et le rsidu repris dans du
dichloromthane. La phase organique est lave avec une solution aqueuse de NaHCO
3
(1M),
puis elle est concentre sous vide. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice
(cyclohexane/actate dthyle, 9/1) pour donner le produit (76) sous la forme dune huile
incolore (0.25g, 70%).

- Para-tolunesulfonate de (1,4-dioxa-spiro[4.5]dc-8-yl)triphnylphosphonium (79)
O
O
P
8
O
S
O
O
CH
3
C
33
H
35
O
5
PS
MM: 574.67
.

Partie exprimentale
196

Un mlange du compos (77) (3.7g, 11.8mmol) et de triphnylphosphine (3.12g,
11.8mmol) dans du xylne (8mL) est chauff au reflux pendant 3 jours. Ensuite, le mlange
est refroidi jusqu 100C. Le prcipit apparu est filtr, puis purifi par chromatographie sur
gel de silice (dichloromthane/mthanol, 94/6) pour donner le produit (79) sous la forme
dun solide blanc (2.7g, 40%).
1
H RMN (300MHz, DMSO) o: 7.93-7.76 (m, 15H, 3xphnyl), 7.47 (d, 2H, J=8.1 Hz, CH-
ortho tosyl), 7.10 (d, 2H, J=8.1 Hz, CH-mta tosyl), 4.24 (m, 1H, CHPPh
3
), 4.03-3.84 (m, 4H,
OCH
2
CH
2
O), 2.28 (s, 3H, CH
3
), 2.011.97 (m, 2H), 1.80-1.69 (m, 3H), 1.431.10 (m, 3H).

- Chlorure de (1,4-Dioxa-spiro[4.5]dc-8-yl)triphnylphosphonium (80)
O
O
P
8 . Cl
C
26
H
28
ClO
2
P
MM: 438.93

Une rsine Dowex 1X8 est lave plusieurs fois avec une solution aqueuse sature de
NaCl, puis avec du mthanol. Le compos (79) (2.7g, 4.7mmol) est dissous dans le minimum
de mthanol, puis pass sur cette rsine. Le solvant est vapor, le rsidu repris dans
lactone puis filtr. Le filtrat est concentr pour donner le produit (80) sous la forme dun
solide jaune (1.97g, quant.)
1
H RMN (300MHz, CD
3
OD) o: 7.92-7.76 (m, 15H, 3xphnyl), 4.123.89 (m, 5H,
OCH
2
CH
2
O + CH-PPh
3
), 2.201.70 (m, 5H), 1.50-1.10 (m, 3H).

Partie exprimentale
197

- (Trans-4-hydroxycyclohexyl)carbamate de tert-butyle (81)
OH HN
O
O
C
11
H
21
NO
3
MM: 215.29

Le dicarbonate de di-tert-butyle (1.9g, 8.7mmol) puis la trithylamine (1.22mL, 8.7mmol)
sont ajouts une solution de trans-4-aminocyclohexanol (1.0g, 8.7mmol) dans le THF
anhydre (50mL) maintenue 0C. Aprs 3 heures dagitation temprature ambiante, le
solvant est vapor et le rsidu repris dans du dichloromthane. La phase aqueuse est lave
leau, puis concentre pour donner le produit (81) sous la forme dun solide blanc (1.84g,
97%).
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 4.34 (bs, 1H, NH), 3.61 (m, 1H, CH), 3.49 (bs, 1H, CH), 2.05-
1.97 (m, 4H), 1.55-1.25 (m, 3H), 1.46 (s, 9H, tBu), 1.25-1.1 (m, 2H).

- (4-Oxocyclohexyl)carbamate de tert-butyle (82)
234
HN O
O
O
4 1
C
11
H
19
NO
3
MM: 213.27

Le chlorochromate de pyridinium (0.45g, 2.1mmol) est ajout, temprature ambiante,
une solution du compos (81) (0.3g, 1.4mmol) dans du dichloromthane anhydre (30mL).
La raction est agite pendant la nuit. Le lendemain, le milieu est repris dans de lther
thylique, puis filtr sur clite qui est rince plusieurs fois lther thylique. Les filtrats
runis sont concentrs sous vide, et le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de
silice (dichloromthane/mthanol, 99.5/0.5) pour donner le produit (82) sous la forme dun
solide blanc (0.3g, quant.).
Partie exprimentale
198

1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 4.49 (bs, 1H, NH), 3.92 (bs, 1H, CH-N), 2.47-2.35 (m , 4H),
2.30-2.17 (m, 2H), 1.75-1.55 (m, 2H), 1.45 (s, 9H, tBu).

- 4-(N,N-Bis-tert-butoxycarbonylamino)cyclohexanone (83)
235
1
N O
O
O
O
O
4
C
16
H
27
NO
5
MM: 313.39

Une solution du compos (82) (1.4g, 6.5mmol), de dicarbonate de di-tert-butyle (4.3g,
19.5mmol) et de 4-dimthylaminopyridine (2.4g, 19.5mmol) dans du THF anhydre (10mL) est
chauffe au reflux pendant 2 heures. Ensuite, le solvant est vapor, et le rsidu repris dans
de leau. La phase aqueuse est acidifie jusqu pH=4-5, puis elle est extraite avec de lther
thylique. Aprs schage (Na
2
SO
4
) et filtration, la phase organique est concentre sous vide,
puis le rsidu purifi par chromatographie sur gel de silice (ther de ptrole/actate
dthyle, 9/1) pour donner le produit (83) sous la forme dun solide blanc (1.3g, 63%).
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 4.48 (m, 1H, CH-N), 2.42-2.24 (m, 6H), 2.10-1.95 (m, 2H),
1.48 (s, 18H, 2xtBu).

- Oxyde de (1,4-dioxaspiro[4.5]dc-8-yl)diphnylphosphine (84)
- 8-Benzylidne-1,4-dioxaspiro[4.5]dcane (85)
O
O
P
(84)
O
O
(85)
O
C
15
H
18
O
2
MM: 230.30
C
20
H
23
O
3
P
MM: 342.37
8
8
5

Partie exprimentale
199

n-BuLi (2.5M dans hexane, 60L, 0.15mmol) est ajout goutte goutte une suspension,
maintenue 0C, du compos (80) (0.065g, 0.15mmol) dans du THF anhydre (2mL). Le
benzaldhyde (14L, 0.15mmol) est ensuite ajout, et le mlange est agit temprature
ambiante. Aprs 2 heures, CH
3
OH est ajout et les solvants sont vapors. Le rsidu est
repris dans du dichloromthane, puis la phase organique est lave avec de leau, sche
(Na
2
SO
4
), filtre puis concentre. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice
(cyclohexane/ actate dthyle, 95/5 puis 70/30) pour donner le produit de couplage (85),
isol ltat de traces, et loxyde de phosphine (84) (0.041g, 80%).
(84): solide blanc
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 7.80-7.60 (m, 4H, CH ortho), 7.48-7.40 (m, 6H, CH
meta+para), 3.87-3.79 (m, 4H, OCH
2
CH
2
O), 2.62 (bs, 1H, CH-P), 1.80-1.35 (m, 8H).

13
C RMN (75MHz, CDCl
3
) o: 132.28 (d, J
C,P
= 96Hz, Cipso phenyl), 132.06 (d, J
C,P
=
95Hz, Cipso phenyl), 131.98 (d, J
C,P
= 2.7Hz, CHpara phenyl), 131.95 (d, J
C,P
= 2.2Hz,
CHpara phenyl), 131.42 (d, J
C,P
= 8.8 Hz, 2CHmta phenyl), 129.04 (d, J
C,P
= 11Hz,
CHortho phenyl), 128.98 (d, J
C,P
= 11Hz, CHortho phenyl), 108.90 (d, J
C,P
= 14.8Hz, C5),
64.40 (CH
2
O), 64.29 (CH
2
O), 35.40 (d, J
C,P
= 73Hz, CH-8), 34.91 (s, CH
2
), 33.64 (d, J
C,P
=
2.7Hz, CH
2
), 24.12 (CH
2
), 23.91 (d, J
C,P
= 3.3Hz, CH
2
).
31
P RMN (121.5MHz, CDCl
3
) o: 34.77.
SM (CI) m/z : 343 (MH
+
, 100%).

(85):
1
H RMN (CDCl
3
) o: 7.3-7.1 (m, 5H, H arom.), 6.4 (s, 1H, CH-phnyl), 3.90 (d, 4H,
J=2.8Hz, OCH
2
CH
2
O), 2.56 (s, 2H), 2.30-2.20 (m, 2H), 1.85-1.65 (m, 4H).

- Trans-4-bromocyclohexanol (86)
236
1
Br OH
4 C
6
H
11
BrO
MM: 179.05

Partie exprimentale
200

Un mlange de 7-oxabicyclo[2.2.1]heptane (3.0 g, 30.6mmol) et dune solution aqueuse
dacide bromhydrique (48%, 3.6mL) est chauff 50C pendant 6 jours. Ensuite, le mlange
est extrait lther thylique, puis la phase organique lave successivement avec une
solution sature de Na
2
CO
3.
puis avec de leau. La phase thre est ensuite sche sur
Na
2
SO
4
, filtre puis concentre sous vide pour donner le produit (86) sous la forme dun
solide blanc (3.9 g, 71%).
Pf : 81-82C (litt.81-82C)
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 4.14 (m, 1H, CH-1), 3.77 (m, 1H, CH-4), 2.31-2.24 (m, 2H),
2.07-1.95 (m, 2H), 1.90-1.75 (m, 2H), 1.50-1.22 (m, 3H).

- Trans-4-bromo-1-tert-butyldimthylsilyloxycyclohexane (87)
237
1
Br O
4
Si
C
12
H
25
BrOSi
MM: 293.32

Le compos (86) (1.122 g, 6.2mmol), le chlorure de tert-butyldimthylsilyle (1.325 g,
8.8mmol), et limidazole (1.193g, 17.5mmol) sont solubiliss dans du DMF anhydre (2mL). Le
mlange est agit temprature ambiante pendant la nuit. Le lendemain, de leau (10mL)
est ajoute et la phase aqueuse est extraite avec du cyclohexane. La phase organique est
sche (Na
2
SO
4
), filtre et concentre. Le rsidu est ensuite purifi par chromatographie sur
gel de silice (cyclohexane/actate dthyle, 99/1) pour donner le produit (87) sous la forme
dune huile incolore (1.46g, 80%).
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 4.24 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 2.29-2.21 (m, 2H), 1.94-1.75 (m,
4H), 1.48-1.35 (m, 2H), 0.87 (s, 9H, tBu), 0.04 (s, 6H, 2xCH
3
).

Partie exprimentale
201

- 8-[4-(tert-Butyldimthylsilyloxy)cyclohexyl]-1,4-dioxaspiro[4.5]dcan-8-ol (88)
- 7-(8-Hydroxy-1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-one (89)
O
OH
O
O
O
O
O
HO
O
O
(88) (89)
H
C
20
H
38
O
4
Si
MM: 370.60
C
16
H
24
O
6
MM: 312.36
8
4'
1'
Si
8'
7
8
2
3
5

Une solution du compos (87) (0.73g, 2.5mmol) dans du THF anhydre (3mL) est
additionne goutte goutte sur des tournures de magnsium (0.06g, 2.5mmol) maintenues
sous atmosphre dargon. La raction est initie en ajoutant une goutte de 1,2-
dibromothane, le milieu est ensuite chauff entre 60C et 70C. Aprs consommation du
magnsium, le milieu est refroidi 0C et une solution de 1,4-dioxa-spiro[4.5]dcan-8-one
(0.096g, 0.62mmol) dans du THF anhydre (2mL) est ajoute goutte goutte. La raction est
maintenue 1 heure 0C puis laisse monter temprature ambiante pendant 3 heures.
Ensuite, une solution aqueuse sature de NH
4
Cl est ajoute (5mL) puis le milieu est extrait
lactate dthyle. La phase organique est lave successivement avec une solution aqueuse
sature de NaHCO
3
puis avec de leau. Elle est ensuite sche sur Na
2
SO
4
, filtre et
concentre. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice
(dichloromthane/mthanol, 99/1) suivie dune deuxime colonne (cyclohexane/actate
dthyle, 2/1) pour isoler le produit de laddition de Grignard (88) (solide blanc, 0.075g, 32%)
et le produit daldolisation (89) (solide blanc, 0.060g, 62%).
(88):
1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) (mlange de deux isomres) o: 3.96-3.89 (m, 4H,
OCH
2
CH
2
O), 3.54-3.41 (m, 1H, CH-4), 1.95-1.48 (m, 11H), 1.40-1.05 (m, 6H), 0.87 (s,
9H, tBu), 0.04 (s, 6H, 2xCH
3
).
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) (isomre majoritaire) o: 108.92 (C5), 72.12 (C8), 71.85
(CH-4), 64.40 (O-CH
2
-CH
2
-O), 64.29 (O-CH
2
-CH
2
-O), 47.31 (CH-1), 36.09 (CH
2
), 32.22
(CH
2
), 30.44 (CH
2
), 26.07 (C(CH
3
)
3
), 25.20 (CH
2
), 18.39 (C(CH
3
)
3
), -4.44 (2CH
3
).
Partie exprimentale
202

13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) (isomre minoritaire) o: 71.58 (CH-4), 63.84 (O-CH
2
-
CH
2
-O), 47.43 (CH-1), 37.00 (CH
2
), 35.96 (CH
2
), 34.45 (CH
2
), 25.39 (CH
2
). (Il y a
recouvrement de certains pics de lisomre minoritaire avec ceux de lisomre
majoritaire)
SM (ESI) m/z : 393 ([M+Na]
+
, 100%), 353 ([M-OH]
+
, 43%), 221 ([M-OTBS-H
2
O]
+
,
72%).
20
H
38
O
4
Si+Na
+
: 393.2432 ; trouve : 393.2446.

(89) :
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) (mlange de deux isomres) o: 4.05-3.95 (m, 8H,
2xOCH
2
CH
2
O), 3.95-3.85 (m, 8H, 2xOCH
2
CH
2
O), 2.80-2.55 (m, 4H), 2.36 (t, 1H,
J=4.1Hz, CH-7), 2.31 (t, 1H, J=4.1Hz, CH-7), 2.15-1.40 (m, 26H).

- 8-Cyclohexyl-1,4-dioxaspiro[4.5]dcan-8-ol (91)
OH
O
O
8
C
14
H
24
O
3
MM: 240.34

Une solution de bromure de cyclohexyle (1.96mL, 16mmol) dans du THF anhydre (10mL)
est additionne goutte goutte sur des tournures de magnsium (0.39g, 16mmol)
maintenues sous atmosphre dargon. La raction est initie en ajoutant une goutte de 1,2-
dibromothane, le milieu est ensuite chauff entre 40C et 45C. Aprs consommation du
magnsium, le milieu est refroidi temprature ambiante, et une solution de 1,4-dioxa-
spiro[4.5]dcan-8-one (0.5g, 3.2mmol) dans du THF anhydre (3mL) est ajoute goutte
goutte. La raction est agite pendant 3 heures temprature ambiante. Ensuite, une
solution aqueuse sature de NH
4
Cl est ajoute (10mL) puis le milieu est extrait lactate
dthyle. La phase organique est lave successivement avec une solution aqueuse sature de
NaHCO
3
, puis avec de leau. Elle est ensuite sche sur Na
2
SO
4
, filtre et concentre. Le
Partie exprimentale
203

rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane/actate dthyle, 3/1)
suivie dune deuxime colonne (dichloromthane / mthanol, 99/1) pour isoler le produit
(91) (0.32g, 41%) sous la forme.
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 3.95-3.85 (m, 4H, OCH
2
CH
2
O), 2.00-1.52 (m, 13H), 1.35-0.95
(m, 7H).

- 8-Cyclohexyl-1,4-dioxa-spiro[4.5]dc-7-ene (93)
O
O
8
7
C
14
H
22
O
2
MM: 222.32

Le chlorure de thionyle (9L, 0.62mmol) est ajout goutte goutte une solution du
compos (91) (0.03g, 0.12mmol) dans la pyridine anhydre (0.4mL) maintenue sous
atmosphre dargon et refroidie dans un bain de glace. Aprs une heure, le milieu est repris
dans leau, et la phase aqueuse est extraite avec de lther thylique. La phase organique est
sche (Na
2
SO
4
), filtre et concentre, puis le rsidu est purifi par chromatographie sur gel
de silice (cyclohexane/actate dthyle 97.5/2.5) pour sparer deux fractions, la premire
contenant le produit (93) pur (0.015g, 50%), la deuxime consistant en un mlange de (93)
et probablement de (92) prsent sous forme de traces.
(93) :
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 5.27 (m, 1H, CH thylnique), 3.98-3.89 (m, 4H,
OCH
2
CH
2
O), 2.35-2.27 (m, 2H), 2.25-2.15 (m, 2H), 1.85-1.50 (m, 9H), 1.35-1.05 (m,
4H).

Partie exprimentale
204

- Acide 4-(tert-butyldimthylsilyloxy)cyclohexanecarboxylique (cis et trans) (95)
238
1
COOH
O
4
Si
C
13
H
26
O
3
Si
MM: 258.43

Le chlorure de tert-butyldimthylsilyle (2.63g, 17.4mmol) est ajout une solution de (4-
hydroxycyclohexyl)carboxylate dthyle (cis et trans) (2.5g, 14.5mmol) et dimidazole (1.97g,
29mmol) dans du DMF anhydre (20mL). Le mlange est agit pendant la nuit temprature
ambiante. Le lendemain, lther thylique (60mL) est ajout, suivi par 60mL dune solution
aqueuse de HCl (1M, 60mL). La phase aqueuse est ensuite extraite lther thylique
plusieurs fois. Les phases organiques runies sont laves successivement avec une solution
aqueuse de HCl (1M), puis par de la saumure. Elles sont ensuite sches sur Na
2
SO
4
, filtres
puis concentres sous vide pour donner le produit (94) sous la forme dune huile incolore
(4.26g, quant.). Ce produit est engag dans la raction suivante sans purification.
Lester (94) (4.26g, 14.5mmol) est solubilis dans un mlange de THF (20mL) et de
mthanol (12mL). Ensuite, lhydroxyde de lithium (0.7g, 29mmol) est ajout et le mlange
est chauff 60C pendant 3 heures. Les solvants sont ensuite vapors et le rsidu repris
dans de leau. La phase aqueuse est lave lther thylique, refroidie dans un bain de glace
puis acidifie avec une solution aqueuse de HCl (1M) jusqu pH=1. Le mlange est ensuite
extrait lactate dthyle. Les phases organiques sont sches (Na
2
SO
4
), filtres et
concentres et le rsidu purifi par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane/actate
dthyle, 1/1) pour donner le produit (95) sous la forme dune huile incolore (3.48g, quant.).

1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) (mlange de deux isomres) o: 10.84 (m, 2H, 2xCOOH), 3.89
(bs, 1H, CH-4), 3.56 (m, 1H, CH-4), 2.41-2.18 (m, 2H, 2xCH-1), 2.10-1.83 (m, 6H), 1.74-1.59
(m, 4H), 1.58-1.23 (m, 6H), 0.88 (s, 9H, tBu), 0.87 (s, 9H, tBu), 0.05 (s, 6H, 2xMe), 0.03 (s, 6H,
2xMe).
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) (mlange de deux isomres) o: 181.81 (2xCOOH), 70.48 et
66.70 (2xCH-4), 42.05 et 41.87 (2xCH-1), 34.77, 32.86, 27.08 et 23.39 (8xCH
2
), 26.01 et 25.96
(2xC(CH
3
)
3
), 18.32 et 18.23 (2xC(CH
3
)
3
), -4.50 et -4.69 (4xMe).

Partie exprimentale
205

- Acide 4-(tert-butyldimthylsilyloxy)-1-(8-hydroxy-1,4-dioxaspiro[4.5]dc-8-yl)
cyclohexanecarboxylique (96)
O
COOH
O
O
HO
4
1
8'
Si
C
21
H
38
O
6
Si
MM: 414.61
5'

nBuLi (1.8M dans hexane, 6.45mL, 11.6mmol) est ajout une solution de
diisopropylamine (1.63mL, 11.6mmol) dans du THF anhydre (20mL) -40C. Le mlange est
agit -40C pendant 15 minutes, ensuite la temprature est remonte 0C pendant 15
minutes, puis le milieu est de nouveau refroidi -40C. Une solution du compos (95) (1.5g,
5.8mmol) dans le THF anhydre (5mL) est ajoute la solution prcdente de LDA maintenue
-40C. Le mlange est agit pendant 15 minutes cette temprature, puis il est chauff
50C pendant 2 heures, puis refroidi de nouveau -40C. Une solution de 1,4-dioxa-
spiro[4.5]dcan-8-one (0.907g, 5.8mmol) dans le THF anhydre (3mL) est ensuite ajoute au
dianion lithi prcdemment obtenu. Le mlange est laiss -40C pendant 15 minutes, puis
il est chauff 50C pendant 1h30. Le milieu est ensuite refroidi dans un bain de glace, et un
volume quivalent deau est ajout. Aprs vaporation des solvants organiques, la phase
aqueuse est acidifie avec une solution aqueuse de HCl (1N) jusqu pH=1, puis elle est
extraite avec du dichloromthane. Les extraits organiques sont schs (Na
2
SO
4
), filtrs et
concentrs, puis le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice
(dichloromthane/mthanol, 93/7) pour donner le produit (96) sous forme dun solide blanc
(1.27g, 53%), mlange de deux isomres. Un chantillon pur de chaque isomre a pu tre
obtenu aprs une deuxime purification sur colonne (dichloromthane/mthanol, 97/3).
1
H RMN (400MHz, CDCl
3
):
Isomre a, o: 4.00-3.87 (m, 5H, OCH
2
CH
2
O + CH-4), 2.09-1.38 (m, 16H), 0.88 (s, 9H,
tBu), 0.01 (s, 6H, 2xMe).
Isomre b, o: 4.00-3.85 (m, 4H, OCH
2
CH
2
O), 3.55 (m, 1H, CH-4), 2.27-1.20 (m,
16H), 0.88 (s, 9H, tBu), 0.07 (s, 6H, 2xMe).
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) (sur le mlange de a et b) o: 180.50 et 179.20 (2xCOOH),
108.64 et 108.57 (2xC-5), 74.04 et 73.54 (2xC-8), 72.15 et 65.31 (2xCH-4), 64.45, 64.31,
Partie exprimentale
206

64.23 et 63.80 (2xOCH
2
CH
2
O), 55.34 et 54.69 (2xC-1), 33.20, 31.20, 30.43, 30.38, 30.23,
29.91, 27.49, et 22.26 (16xCH
2
), 26.01 et 25.96 (2xC(CH
3
)
3
), 18.45 et 18.15 (2xC(CH
3
)
3
), -4.61
et -4.75 (4xMe).
SM (ESI) m/z : 437 ([M+Na]
+
, 100%), 375 (42%).
HRMS (ESI) (sur le mlange de a et b): calc. pour C
21
H
38
O
6
Si+Na : 437.2335, trouve :
437.2337.

- 1-(tert-butyldimthylsilyloxy)-4-(1,4-dioxaspiro[4.5]dc-8-ylidne)cyclohexane (90)
- 4-(tert-butyldimthylsilyloxy)-1-(8-hydroxy-1,4-dioxaspiro[4.5]dc-8-yl)cyclohexyl
carboxylate de mthyle (97)
O
O
O
COOCH
3
O
O
HO
(90)
(97)
Si
O
Si
C
20
H
36
O
3
Si
MM: 352.58
C
22
H
40
O
6
Si
MM: 428.63
4
1
8'
4
1
8'
5'
5'

Mthode 1

: Le DMF-DMA (162L, 1.2mmol) est ajout une suspension de compos
(96) (0.1g, 0.24mmol) dans lactonitrile anhydre (4 mL). Le mlange est agit pendant une
heure temprature ambiante, il est ensuite chauff au reflux pendant la nuit. Le
lendemain, lactonitrile est vapor, et le rsidu purifi par chromatographie sur gel de
silice (cyclohexane/actate dthyle, 95/5 puis 80/20) pour isoler le produit de
dshydratation dcarboxylante (90) sous la forme dun solide blanc (0.025g, 30%) et le
produit destrification (97) sous la forme dun solide blanc (0.072g, 70%), mlange de deux
isomres (97a) et (97b), dont un chantillon pur a pu tre obtenu pour chacun aprs
sparation par chromatographie sur couche mince de silice (cyclohexane/actate dthyle,
95/5).
(90):
Pf=72-73C.
Partie exprimentale
207

1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 3.93 (s, 4H, OCH
2
CH
2
O), 3.82 (m, 1H, CH-1), 2.59-2.45
(m, 2H), 2.41-2.18 (m, 4H), 2.03-1.83 (m, 3H), 1.80-1.60 (m, 5H), 1.51-1.32 (m, 2H),
0.88 (s, 9H, tBu), 0.05 (s, 6H, 2xMe).
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 129.71 (C=C), 127.46 (C=C), 109.16 (C-5), 70.18 (CH-
1), 64.41 (OCH
2
CH
2
O), 36.86 (CH
2
), 36.42 (CH
2
), 26.68 (CH
2
), 26.45 (CH
2
), 26.02
(C(CH
3
)
3
), 18.30 (C(CH
3
)
3
), -4.50 (2xCH
3
).
SM (ESI) m/z : 353 ([M+H]
+
, 95%), 239 (17%), 221 ([M-OTBS]
+
, 100%).
HRMS (ESI) calc. pour C
20
H
36
O
3
Si+H: 353.2512, trouve: 353.2510.

(97a):
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 3.93 (m, 5H, OCH
2
CH
2
O + CH-1), 3.73 (s, 3H, COOCH
3
),
2.50 (s, 1H, OH), 2.00-1.30 (m, 16H), 0.87 (s, 9H, tBu), 0.01 (s, 6H, 2xMe). Le proton
2.50 ppm est changeable dans D
2
O.

(97b):
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 4.05-3.85 (m, 4H, OCH
2
CH
2
O), 3.74 (s, 3H, COOCH
3
),
3.44 (m, 1H, CH-1), 2.43 (s, 1H, OH), 2.25-2.15 (m, 2H), 2.05-1.65 (m, 7H), 1.62-1.25
(m, 7H), 0.86 (s, 9H, tBu), 0.03 (s, 6H, 2xMe). Le proton 2.43 ppm est changeable
dans D
2
O.

Mthode 2

: Le DMF-DNPA (1.22mL, 7.92mmol) est ajout une suspension du
compos (96) (0.55g, 1.32mmol) dans lactonitrile anhydre (20 mL). Le mlange est agit
pendant une heure temprature ambiante, il est ensuite chauff au reflux pendant la nuit.
Le lendemain, lactonitrile est vapor, et le rsidu est purifi par chromatographie sur gel
de silice (cyclohexane/actate dthyle, 95/5) pour isoler le produit (90) (0.42g, 90%).

Partie exprimentale
208

- 4-(1,4-Dioxaspiro[4.5]dc-8-ylidne)cyclohexan-1-ol (98)
HO
O
O
4
1
8'
C
14
H
22
O
3
MM: 238.32
5'

Une solution du compos (90) (0.6g, 1.7mmol) et de fluorure de ttrabutylammonium
(1M dans THF, 4.5mL, 4.49mmol) dans le THF anhydre est chauffe au reflux pendant 1h30.
Le solvant est vapor et le rsidu est repris dans le dichloromthane. La phase organique
est lave leau, sche sur Na
2
SO
4
, filtre puis concentre. Le rsidu est purifi par
Pf= 120-121C.
1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 3.96 (s, 4H, OCH
2
CH
2
O), 3.83 (m, 1H, CH-1), 2.63-2.56 (m,
2H), 2.39-2.24 (m, 4H), 1.98-1.82 (m, 4H), 1.69-1.58 (m, 4H), 1.57 (s, 1H, OH), 1.42-1.30 (m,
2H).
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 128.93 (C=C), 128.20 (C=C), 109.08 (C-5), 70.13 (CH-1),
64.41 (OCH
2
CH
2
O), 36.52 (2xCH
2
), 36.36 (2xCH
2
), 26.73 (2xCH
2
), 26.60 (2xCH
2
).
SM (EI) m/z: 238 (M
+
, 40%), 220 ([M-H
2
O]
+
, 10%), 176 (38%), 86 (100%).
HRMS (EI) calc. pour C
14
H
22
O
3
:238.1569, trouve: 238.1568.

- 4-(1,4-Dioxaspiro[4.5]dc-8-ylidne)cyclohexan-1-one (99)
O
O
O
4
1
8'
C
14
H
20
O
3
MM: 236.31
5'

Le compos (98) (0.100g, 0.42mmol) et le dichromate de pyridinium (0.189g, 0.50mmol)
sont solubiliss dans le dichloromthane anhydre (10mL) sous atmosphre dargon. Le
Partie exprimentale
209

mlange est agit pendant 2 jours temprature ambiante, puis il est filtr sur clite et le
filtrat est concentr. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de silice
(cyclohexane/actate dthyle, 2/1) pour donner le produit (99) sous la forme dun solide
blanc (0.090g, 90%).
Pf=100-102C.
1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 3.94 (s, 4H, OCH
2
CH
2
O), 2.57-2.53 (m, 4H), 2.39-2.31 (m, 8H),
1.67-1.63 (m, 4H).
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 212.61 (C=O), 130.97 (C=C), 124.92 (C=C), 108.76 (C-5),
64.42 (OCH
2
CH
2
O), 40.70 (CH
2
), 35.90 (CH
2
), 26.80 (CH
2
), 26.76 (CH
2
).
SM (EI) m/z: 236 (M
+
, 27%), 86 (100%).
14
H
20
O
3
: 236.1412, trouve: 236.1411.

- Acide 4-(tert-butyldimthylsilyloxy)-1-[1-hydroxy-4-(1,4-dioxaspiro[4.5]dc-8-
ylidne)cyclohexyl]cyclohexanecarboxylique (100)
OH
O
O
O
HOOC
Si
C
27
H
46
O
6
Si
MM: 494.74
4
4'
8''
1
1'
5''

LDA (1.4M dans hexane, 625L, 0.87mmol) est additionn une solution du compos
(95) (0.109g, 0.42mmol) dans le THF anhydre (0.5mL) -40C. Le mlange est agit pendant
15 minutes cette temprature, puis il est chauff 50C pendant 2 heures, enfin de
nouveau refroidi -40C. Une solution de la ctone (99) (0.236g, 0.87mmol) dans le THF
anhydre (1mL) est ajoute au dianion lithi prcdemment obtenu. Le mlange est agit -
40C pendant 15 minutes, puis il est chauff 50C pendant 2h30. Le milieu est ensuite
refroidi dans un bain de glace, et 2mL deau sont ajouts. Les solvants organiques sont
vapors. La phase aqueuse est acidifie avec une solution aqueuse de HCl (1N) jusqu
pH=1 et elle est extraite avec du dichloromthane. Les extraits organiques sont lavs avec
une solution aqueuse sature de NaCl, puis ils sont concentrs, et le rsidu est purifi par
Partie exprimentale
210

chromatographie sur gel de silice (dichloromthane/mthanol, 98/2 puis 90/10) pour
donner le produit (100) sous la forme dun solide blanc (0.095g, 45%), mlange quimolaire
de deux isomres, (100a) et (100b).
1
H RMN (CDCl
3
+CD
3
OD, 3/1) o: 3.92 (s, 8H, 2xOCH
2
CH
2
O), 3.92 (m, 1H, CH-4 100a), 3.44
(m, 1H, CH-4 100b), 2.58-1.97 (m, 10H), 1.92-1.26 (m, 14H), 0.83 et 0.81 (s, 18H, 2xtBu), 0.00
et -0.03 (s, 12H, 4xMe).
SM (ESI) m/z: 1011 ([2M+Na]
+
, 100%), 517 ([M+Na]
+
, 72%).
27
H
46
O
6
Si+Na: 517.2956, trouve: 517.2930.

- 1-(Tert-butyldimthylsilyloxy)-1-(1,4-dioxaspiro[4.5]dc-8-ylidne)-4,4-
bicyclohexylidne (101)
O
O
O
Si
4
4'
8''
1
1'
C
26
H
44
O
3
Si
MM: 432.71
5''

Le DMF-DNPA (112L, 0.40mmol) est ajout une suspension de compos (100) (0.050g,
0.10mmol) dans lactonitrile anhydre (1.5mL). Le mlange est agit pendant une heure
temprature ambiante, il est ensuite chauff au reflux pendant 1 jour. Lactonitrile est
ensuite vapor, et le rsidu purifi par chromatographie sur gel de silice
(cyclohexane/actate dthyle, 94/6) pour isoler le produit (101) sous la forme dun solide
blanc (0.030g, 68%).
Pf= 137-138C.
1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 3.91 (s, 4H, OCH
2
CH
2
O), 3.76 (m, 1H, CH-1), 2.53-2.38 (m,
2H), 2.31-2.07 (m, 12H), 1.93-1.79 (m, 2H), 1.76-1.55 (m, 6H), 1.44-1.26 (m, 2H), 0.83 (s, 9H,
tBu), 0.00 (s, 6H, 2xMe).
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 129.75 (C thylnique), 128.92 (C thylnique), 128.59 (C
thylnique), 127.51 (C thylnique), 109.28 (C-5), 70.40 (CH-1), 64.41 (OCH
2
CH
2
O), 36.74
Partie exprimentale
211

(CH
2
), 36.24 (CH
2
), 29.70 (CH
2
), 29.59 (CH
2
), 26.58 (CH
2
), 26.33 (CH
2
), 26.04 (C(CH
3
)
3
), 18.31
(C(CH
3
)
3
), -4.48 (2xCH
3
).
SM (ESI) m/z: 433 ([M+H]
+
, 17%), 301 ([M-OTBS]
+
, 100%), 239 (16%).
26
H
44
O
3
Si+H: 433.3138, trouve: 433.3130.

- 4-(1,4-Dioxa-spiro[4.5]dc-8-ylidne)-1-msyloxycyclohexane (103)
O
O
O
4
1
8'
S
O
O
C
15
H
24
O
5
S
MM 316.41
5'

MsCl (118L, 1.52mmol) et la trithylamine (258L, 1.80mmol) sont ajouts une
solution dalcool (98) (0.330g, 1.38mmol) dans le THF anhydre (11mL) maintenue 0C. Le
mlange est remont temprature ambiante pendant 1 heure, le solvant est ensuite
vapor. Le rsidu est repris dans de lactate dthyle, et la phase organique est lave
leau, puis sche sur Na
2
SO
4
, filtre et concentre sous vide pour donner le produit (103)
sous la forme dun solide blanc (0.415g, 95%) qui est engag dans la raction suivante sans
purification supplmentaire.

Partie exprimentale
212

- 4-(1,4-Dioxa-spiro[4.5]dc-8-ylidne)cyclohexanecarbonitrile (102)
- 8-(Cyclohex-3-nylidne)-1,4-dioxaspiro[4.5]dcane (104)
- 8-(4-isocyanocyclohexylidne)-1,4-dioxaspiro[4.5]dcane (105)
C
O
O
4
1
8'
N
N
O
O
C
O
O
C
15
H
21
NO
2
MM: 247.33
C
14
H
20
O
2
MM: 220.31
C
15
H
21
NO
2
MM: 247.33
(102) (104) (105)
4'
1'
8
1'
3'
8
5' 5 5

Une solution du compos (103) (0.150g, 0.47mmol) et de cyanure de
ttrabutylammonium (0.752g, 2.80mmol) dans le THF anhydre (15mL) est chauffe sous
micro-ondes 100C pendant 10 minutes. Le solvant est ensuite vapor et le rsidu repris
dans lactate dthyle. La phase organique est lave avec de leau, sche sur papier
sparateur de phase, puis concentre. Le rsidu est purifi par chromatographie sur gel de
silice (cyclohexane/ actate dthyle, 90/10), pour isoler trois produits :
(102) : solide blanc, (0.055g, 47%)
Pf=126C.

1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 3.96 (s, 4H, OCH
2
CH
2
O), 2.77 (m, 1H, CH-1), 2.54-2.45
(m, 2H), 2.32-2.28 (m, 4H), 2.19-2.10 (m, 2H), 1.93-1.62 (m, 8H).
IR (KBr) cm
-1
: 2233
15
H
21
NO
2
: 247.1572, trouve: 247.1559.

(104) : solide blanc (0.035g, 33%)
1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 5.76-5.62 (m, 2H, HC=CH), 3.95 (s, 4H, OCH
2
CH
2
O),
2.81 (bs, 2H), 2.36-2.28 (m, 6H), 2.08 (bs, 2H), 1.67-1.62 (m, 4H).

(105) : solide blanc (0.010g, 8%)

1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) o: 3.96 (s, 4H, OCH
2
CH
2
O), 3.77 (m, 1H, CH-4), 2.51-
2.42 (m, 2H), 2.33-2.29 (m, 4H), 2.19-2.10 (m, 2H), 1.91-1.62 (m, 8H).
IR (KBr) cm
-1
: 2139.

Partie exprimentale
213

- 4'-Oxo-1,1-bicyclohexylidne-4-carbonitrile (106)
C
4
1
4'
N
O
C
13
H
17
NO
MM: 203.28
1'

Le compos (102) (0.093g, 0.37mmol) est dissous dans un mlange de THF (2mL) et
dune solution aqueuse dacide chlorhydrique (5%, 2mL). Le mlange est chauff 70C
pendant 1 heure. Le solvant est ensuite vapor, et le rsidu repris dans du
dichloromthane. La phase organique est lave avec de leau, sche sur MgSO
4
, filtres
puis concentre sous vide pour donner le produit (106) sous la forme dun solide blanc
(0.076g, quant.).
Pf=66-68C.

1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 2.80 (m, 1H, CH-4), 2.58-2.37 (m, 10H), 2.22-2.14 (m, 2H),
1.95-1.73 (m, 4H).
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 212.24 (C=O), 129.59 (C=C), 126.12 (C=C), 122.09 (CN),
40.44 (CH
2
), 30.51 (CH
2
), 28.14 (CH-4), 27.46 (CH
2
), 26.50 (CH
2
).
SM (ESI) m/z: 204 ([M+H]
+
, 100%).
13
H
17
NO+H: 204.1388, trouve: 204.1380.

- 4'-Formyl-1,1-bicyclohexylidne-4-carbonitrile, cis et trans (107)
C
4
1
4'
N
1'
O
H
C
14
H
19
NO
MM: 217.31

Le chlorure de (mthoxymthyl)triphnylphosphonium (0.710g, 2.06mmol) et le t-BuOK
(0.229g, 2.06mmol) sont mis en suspension dans du THF anhydre (10mL) 0C. Le mlange
est agit cette temprature pendant 30 minutes, puis une solution de ctone (106)
Partie exprimentale
214

(0.210g, 1.03mmol) dans du THF anhydre (3.5mL) est ajoute. Le mlange est agit pendant
la nuit temprature ambiante. Le lendemain, le mlange est refroidi 0C, puis de leau
(0.8mL) est ajoute, suivie dune solution aqueuse de HCl (6N, 2.8mL). Le mlange est
remont temprature ambiante pendant 1 heure. Le solvant est ensuite vapor, et le
rsidu repris dans du dichloromthane. La phase organique est lave avec de leau, sche
(Na
2
SO
4
), filtre et concentre. Le rsidu est ensuite purifi par chromatographie sur gel de
silice (cyclohexane/actate dthyle, 4/1) pour donner le compos (107) sous la forme dun
solide blanc, mlange de deux isomres (0.188g, 85%).
1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 9.64 (s, 1H, CHO), 2.78 (m, 1H, CH-4), 2.66-2.36 (m, 5H),
2.22-2.06 (m, 2H), 2.03-1.66 (m, 8H), 1.54-1.36 (m, 2H).
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 204.32 et 204.27 (CHO), 129.83 (2xC=C), 127.16 (2xC=C),
122.25 et 122.23 (CN), 49.95 et 49.86 (CH-4), 30.86 et 30.83 (CH
2
), 28.31 et 28.28 (CH-4),
28.09 et 28.06 (CH
2
), 27.35 et 27.30 (CH
2
).
SM (CI) m/z: 218 ([M+H]
+
, 100%), 200 (84%).
HRMS (CI) calc. pour C
14
H
19
NO+H: 218.1545, trouve: 218.1533.

- (4'-Aminomthyl-1,1-bicyclohexylidn-4-yl)mthanol, cis et trans (108)
4
1
4'
H
2
N
1'
OH
C
14
H
25
NO
MM: 223.35

Une solution du compos (107) (0.196g, 0.90mmol) dans le THF anhydre (5mL) est
ajoute une suspension de LiAlH
4
(0.111g, 2.92mmol) dans le THF anhydre (9mL)
maintenue 0C. Le mlange est ensuite chauff au reflux pendant 2 heures puis refroidi
temprature ambiante. Une solution aqueuse de NaOH (15%, 20mL) est ajoute. Le solvant
organique est vapor, et la phase aqueuse est extraite plusieurs fois lactate dthyle.
Les extraits organiques sont schs (Na
2
SO
4
), filtrs et concentrs sous vide pour donner le
produit (108) sous forme dun solide blanc (0.200g, quant.). Ce matriel brut est utilis sans
purification supplmentaire dans la raction suivante.
Partie exprimentale
215

1
H RMN (300MHz, CDCl
3
) (mlange de deux isomres) o: 3.49-3.38 (4H, 2xCH
2
OH), 2.73
(bd, 8H, J=13.4Hz), 2.58-2.48 (4H, 2xCH
2

NH
2
), 2.22 (m, 6H, 2xNH
2
+2xOH), 1.91-1.60 (18H),
1.03-0.77 (10H).

- {4-[N-(9H-fluoren-9-yl-mthyloxycarbonyl)aminomthyl]-1,1-bicyclohexylidn-4-
yl}mthanol, cis et trans (109a,b)
OH
NH
O
O
NH
O
O
OH
H
H
H
H
C
29
H
35
NO
3
MM: 445.26
4
4' 9
1
2
3
4
5
6
7
8
H
e
H
a
H
a
H
e
H
a
H
a
H
e
H
e
2
2'
6'
6

Une suspension du compos (108) (0.200g, 0.89mmol), FmocOSu (0.360g, 1.07mmol) et
de bicarbonate de sodium (0.090g, 1.07mmol) dans un mlange deau (20mL) et
dactonitrile (20mL) est agite pendant la nuit temprature ambiante. Le lendemain, les
solvants sont vapors, et le rsidu repris dans du dichloromthane. La phase organique est
lave avec de leau, sche (Na
2
SO
4
), filtre puis concentre. Une premire purification par
chromatographie sur gel de silice (dichloromthane/mthanol, 99/1) permet davoir le
produit (109) sous forme de mlange de deux isomres (0.311g, 78%). Une purification
supplmentaire par chromatographie sur couche mince de silice (dichloromthane/ther
thylique, 95/5) permet de sparer les deux isomres, aprs plusieurs lutions successives.
(109a) : solide blanc (0.104g)
Pf=173-175C.
1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 7.76 (d, 2H, J=7.4Hz , H4 et H5 fluorne), 7.59 (d, 2H,
J=7.4Hz , H1 et H8 fluorne), 7.40 (t, 2H, J=7.2Hz, H2 et H7 fluorne), 7.29 (td, 2H,
J1=7.2Hz, J2=1.2Hz, H3 et H6 fluorne), 4.79 (bs, 1H, NH), 4.41 (d, 2H, J=6.7Hz,
CH
2
OCO), 4.21 (t, 1H, J=6.7Hz, H9 fluorne), 3.46 (d, 2H, J=6.2Hz, CH
2
OH), 3.04 (t, 2H,
Partie exprimentale
216

J=6.4Hz, CH
2
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 156.69 (C=O), 144.15 (C arom.), 141.46 (C arom.),
129.47 (C=C), 128.96 (C=C), 127.78 (2xCH arom.), 127.14 (2xCH arom.), 125.15 (2xCH
arom.), 120.09 (2xCH arom.), 68.32 (CH
2
-OH), 66.55 (CH
2
-OCO), 47.49 (CH-9
fluorne), 46.92 (CH
2
-NH), 40.83 (CH), 38.61 (CH), 31.96 (CH
2
), 30.88 (CH
2
), 28.89
(2xCH
2
).
NH), 2.72 (bd, J=13.4Hz, 4H, Hax-2,2,6,6), 1.90-1.60 (m, 8H), 1.05-0.78
(m, 4H).
+
, 94%), 446 ([M+H]
+
, 100%), 338 (30%), 224 ([M-
Fmoc+H]
+
, 12%).
29
H
35
NO
3
+H: 446.2690, trouve: 446.2670.

(109b) solide blanc (0.140g) :
Pf=66-68C. (dc.)

1
H RMN (400MHz, CDCl
3
) o: 7.76 (d, 2H, J=7.3Hz , H4 et H5 fluorne), 7.59 (d, 2H,
J=7.3Hz , H1 et H8 fluorne), 7.40 (t, 2H, J=7.3, H2 et H7 fluorne), 7.30 (td, 2H,
J1=7.3Hz, J2=1.0Hz H3 et H6 fluorne), 4.80 (bs, 1H, NH), 4.41 (d, 2H, J=6.8Hz,
CH
2
OCO), 4.21 (t, J=6.8Hz, 1H, H9 fluorne), 3.46 (d, 2H, J=6.2Hz, CH
2
OH), 3.05 (t, 2H,
J=6.5Hz, CH
2
13
C RMN (100MHz, CDCl
3
) o: 156.70 (C=O), 144.15 (C arom.), 141.47 (C arom.),
129.70 (C=C), 129.18 (C=C), 127.79 (2xCH arom.), 127.15 (2xCH arom.), 125.16 (2xCH
arom.), 120.10 (2xCH arom.), 68.37 (CH
2
-OH), 66.56 (CH
2
-OCO), 47.51 (CH-9
fluorne), 46.96 (CH
2
-NH), 41.01 (CH), 38.82 (CH), 32.36 (CH
2
), 31.29 (CH
2
), 28.98
(CH
2
), 28.95 (CH
2
).
NH), 2.72 (bd, J=13.4Hz, 4H, Hax-2,2,6,6), 1.92-1.56 (m, 8H), 1.04-0.77
(m, 4H).
+
, 100%), 446 ([M+H]
+
, 32%), 372 (6%), 224 ([M-
Fmoc+H]
+
, 6%).
29
H
35
NO
3
+Na: 468.2509, trouve: 468.2495.

Partie exprimentale
217

Partie Exprimentale Biologie

-

Tests de la liaison au fragment H6-NBD1 du CpABC3 et de linhibition de lactivit
ATPasique de ce fragment (effectus par le Dr P. Lawton, laboratoire de Parasitologie,
Facult de Pharmacie de Lyon) :
- Production de la protine recombinante H6-NBD1 : la protine recombinante est
surexprime dans E.coli BL21(DE3)pLysS et sa production est effectue dans un
racteur en verre de 3,5 L, sous contrle du logiciel BioXpert 1.3 (Applikon, Systeme C
Industrie, St-Paul-Trois-Chteaux, France). La temprature est rgle 37C, le pH
7.0 et loxygne dissous 20%. Trois heures aprs linoculation, la synthse est
induite par lIPTG (isopropyl--D-1-thiogalactopyranoside) 0.1mM, puis laisse se
poursuivre pendant 2 h. Les culots bactriens sont ensuite conservs -80C. Le
fragment H6-NBD1 est purifi par chromatographie daffinit sur des colonnes Ni-
NTA (nitrilotriactate de Nickel (II)) puis dialys pendant la nuit contre une solution
aqueuse pH 7,3, contenant : du Tris (2-amino-2-hydroxymthylpropane-1,3-diol)
50mM, du KCl 100mM, de lHECAMEG (6-O-[(N-heptylcarbamoyl)methyl]-o-D-
glucopyranoside) 0,02% et de la glycrine 20% (v/v). La protine est utilise
directement pour les essais ou conserve -80C.

- Tests de liaison par quenching de fluorescence : Les tests de quenching de
fluorescence sont raliss en triplicat laide dun spectrofluorimtre Perkin Elmer
LS-3B, dans des microcuvettes en quartz de 1 cm. La protine recombinante est
dilue une concentration de 0.25-0.5 M dans 390l dune solution aqueuse pH
7,3, contenant : du Tris 50mM, du KCl 100mM et de lHECAMEG 0.02%. Les
produits tester sont dilus dans le mme tampon, partir de solutions mres
10
-2
M dans le DMSO, jusqu une concentration finale de 4 mM. Un volume de 10L
de cette solution finale est introduit sur la suspension protique. Le mlange est
Partie exprimentale
218

ensuite incub pendant 30 minutes 20C. Les contrles sont constitus du mme
solvant de dialyse mentionn ci-dessus, et contiennent la mme concentration finale
en DMSO que les produits tests (ne dpassant pas 2,5%). La liaison des produits
tests est mesure par le quenching de la fluorescence intrinsque 328nm aprs
excitation 295nm. Les donnes sont analyses laide du logiciel Graph-Pad
Prism 4.

- Tests dinhibition de lactivit ATPasique : lactivit inhibitrice des produits tester
est mesure pour diffrentes concentrations en produit aprs incubation pendant 10
min 37C avec le fragment recombinant H6-NBD1 purifi (2,5 M finale, en
protine), dans une solution aqueuse pH 7,3, contenant : du Tris 50mM, du KCl
100mM, de lHECAMEG 0.02% et du MgCl
2
4mM, en prsence dATP diffrentes
concentrations. Les produits de lhydrolyse de lATP sont mesurs en triplicat par
HPLC en phase inverse sur une colonne de 5mm dHypersil (Interchim, Montluon,
France) avec 1,8% de mthanol (v/v) dans 25 mM (NH
4
)H
2
PO
4
aqueux comme luant.
Le volume dinjection est de 20l et le dbit de 0.5 ml/min, avec une dtection UV
254 nm. Les donnes sont analyses par rgression non-linaire laide du logiciel
Graph-Pad Prism 4.

-
La culture cellulaire est supplmente en milieu RPMI complet la veille du test, pour
sassurer dune croissance exponentielle le jour mme du test. Le lendemain, les cellules
sont reprises dans du milieu RPMI sans antibiotiques et rparties dans des tubes de faon
avoir 0,5-1,0 x 10
6
cellules dans 1mL de suspension. Quatre tmoins sont raliss :
Tests de linhibition de la Pgp dans les cellules K562/R7 (effectus dune part par Dr
C. Grenot et Dr G. Alameh, INSERM U863, et dautre part par Pr. C. Dumontet et M
me
E.
Matera, INSERM U590):
Tmoin dautofluorescence des cellules : contenant uniquement 1mL de la
suspension cellulaire.
Tmoin dautofluorescence de la molcule tester : contenant 1mL de la
suspension cellulaire avec la molcule tester la concentration voulue.
Partie exprimentale
219

Tmoin ngatif : contenant 1mL de la suspension cellulaire avec la
daunorubicine 17M (ajout de 4,6L dune solution mre 3,68mM).
Tmoin positif : contenant 1mL de la suspension cellulaire avec la
daunorubicine 17M et la ciclosporine A 3,3 M (ajout de 8L dune
solution mre 0,41mM).
En parallle, dans des tubes contenant 1mL de la suspension cellulaire avec la
daunorubicine 17M, les molcules tester sont introduites de telle sorte obtenir la
concentration voulue (10 ou 50 M), partir de dilutions dans le milieu RPMI de solutions
mres 10
-2
M dans le DMSO. Les tests, ainsi que les tmoins, sont raliss en double.
Les cellules sont incubes 1 heure 37C sous 5% de CO
2
. Les tubes sont ensuite
centrifugs pendant 5 minutes 700 g et les culots lavs dans du tampon PBS 1X. Les tubes
sont centrifugs de nouveau, puis les culots repris dans 1mL de tampon PBS 1X et analyss
par le cytomtre en flux FACS-Calibur (Becton-Dickinson), avec une mesure de la
fluorescence de la daunorubicine 560nm aprs excitation 488nm.

Rfrences

220

Rfrences :
1
M.M. Gottesman, V. Ling FEBS Lett. 2006, 580, 998-1009.
2
P.D.W. Eckford, F.J. Sharom Chem. Rev. 2009, 2989-3011.
3
R.L. Juliano, V. Ling Biochim. Biophys. Acta (Biomembranes). 1976, 455, 152-162.
4
Y.P. Seea, S.A. Carlsena, J. Tilla, V. Ling Biochim. Biophys. Acta (Biomembranes). 1974,
373, 242-252.
5
N.Kartner, J.R.Riordan, V. Ling Science. 1983, 221, 1285-1288.
6
I.B.Roninson, H.T.Abelson, D.E.Housman, N.Howell, A.Varshavsky Nature. 1984, 309,
626-628.
7
P.Gros, J.M.Croop, I.Roninson, A.Varshavsky, D.E.Housman Proc. Natl. Acad. Sci.USA.
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