02/02/2010

FINALITES DU LABORATOIRE

LE LABORATOIRE EN MILIEU
TROPICAL
(Dont recommandations pour les
prlvements et lacheminement)

Diagnostic :
examens biologiques = 80 % des donnes utiles la prise
en charge des malades.

Traitement

Prvention (dpistage de masse)

Justification de la prescription dune

analyse biologique
Connatre les indications des analyses biologiques
Connatre leurs caractristiques

FONCTIONNEMENT DES CENTRES DE SANTE

Habitants Acteurs principaux
Panel de soins
Agent de sant
Plaies, parasitoses simples, infections simples, petit
stock de MEG.

Poste de
1000
soins avanc

Dispensaire 10 000

Centre
mdical

100 000

Sensibilit
Spcificit
Valeur prdictive positive
Valeur prdictive ngative

PLAN
GENERALITES SUR LE LABORATOIRE
Locaux
Matriels
Ractifs
Rgles de scurit
Organisation
PRELEVEMENTS
Techniques
Traitement des chantillons

Centre
200 000
mdical avec
antenne
chirurgicale

Hpital

500 000

Infirmier
Sage femme
grant

Plaies, parasitoses, infections, petite traumatologie,

hospitalisation, sutures, accouchements, suite de
couches, MEG, consultations prnatales, PMI, PEV.
Laboratoire facultatif suivant taille.

Mdecin
Infirmiers
Accoucheuses

Parasitoses svres, infections rsistantes, orthopdie,

urgences mdicales, gyncologie, parfois radiologie.
Laboratoire recommand

Mdecins
Chirurgien
Anesthsiste
Infirmiers

Chirurgie, ranimation, radiologie, ventuellement

chographie.
Laboratoire obligatoire

Service complet
pluridisciplinaire

Spcialits mdicales et chirurgicales

Laboratoire de rfrence

LES LOCAUX ET LE MOBILIER (1)

Locaux :
Local en "dur" d' au moins 15 m2.
Porte-fentre et fentre avec moustiquaire amovible
(charnires) et renforts contre le vol.
Sol ciment et peint surlev par rapport l'extrieur.
Murs peints et lavables.

ENVOI DES ECHANTILLONS

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LES LOCAUX ET LE MOBILIER (2)

LES LOCAUX ET LE MOBILIER (3)

Petit vier au-dessus duquel est plac un jerrican d'eau

Mobilier :
Tables et chaises

filtre muni d'un robinet.

Armoire solide fermant clef

Centrifugeuse main et bec Bunsen.

Paillasse sous laquelle on rangera diffrents jerricans :

Partie de la pice rserve aux prlvements :

- eau distille.

fauteuil ( accoudoirs),

- les diffrentes poubelles.

Etagres pour stocker le matriel courant.

ncessaire prlvements (seringues, tubes, garrots, coton,

dsinfectants, anticoagulants, vaccinostyles, lames, gants).

Isoler cette partie de la pice par un paravent.

LES LOCAUX ET LE MOBILIER (4)

LES LOCAUX ET LE MOBILIER (5)

Gestion de l'espace :
Une zone PROPRE : comprenant l'armoire de
stockage, la filtration de l'eau et la table contenant les
cahiers d'enregistrement et de rendu de rsultat.
Une zone SALE : comprenant la paillasse et ses
poubelles, la table du microscope, l'vier et la partie
prlvements.

MATERIEL (1)
Un laboratoire peut fonctionner sans lectricit ni eau
courante.
Le matriel doit tre simple, solide et fiable.
quipement minimal en "gros" matriel :
Un microscope et ses objectifs en bon tat,
Une centrifugeuse main en bon tat,
Un bec Bunsen et une bouteille de gaz.

MATERIEL (2)
Autres matriels :
lames, lamelles, cnes, tubes, tubes VS, pipettes
Pasteur, oeses ...
blouses, Javel, gants, lunettes
livres, planches d'hmatologie
.

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CAS PARTICULIER DE LA CHANE DU

FROID
Rfrigrateur gaz dans presque tous les dispensaires
(logistique du PEV).

UTILISATION ET ENTRETIEN DU
MICROSCOPE (1)
Doit imprativement tre accompagn des objectifs 4, 10,
40 et 100 immersion.

Conservation des srums et des vaccins.

Peut galement servir conserver des ractifs ncessaires
au laboratoire.
Intrt dun petit conglateur pour congeler les contrles
de qualit, les srums expdier et les pains de glace
(enqutes sur le terrain).

UTILISATION ET ENTRETIEN DU
MICROSCOPE (2)
Utilisation :
Commencer par regarder la prparation faible
grossissement.
Utiliser l'objectif immersion pour les recherches de
paludisme, les formules leucocytaires, les dtails de
kystes de protozoaires.

UTILISATION ET ENTRETIEN DU
MICROSCOPE (3)
Entretien:
Protger le microscope de la poussire.
Protger les lentilles et les prismes du microscope
contre le dveloppement des moisissures.
Nettoyer tous les jours l'objectif immersion et les
oculaires
Rappeler le numro de rfrence du modle lors des
commandes de pices dtaches

UTILISATION ET ENTRETIEN DU
MICROSCOPE (4)
Ce qu'il ne faut pas faire :
Contaminer les objectifs sans immersion avec de l'huile.
Ne pas laisser vides les supports destins recevoir les
lentilles.
Ne pas intervertir les lentilles appartenant des
microscopes de fabrication diffrente.

UTILISATION DE LA
CENTRIFUGEUSE A MAIN (1)
Fixer la centrifugeuse bien droite sur une table stable et
lourde.
Bien quilibrer le poids des plots par rapport l'axe de la
centrifugeuse.
Boucher tous les tubes mis centrifuger.
Masque et lunettes de protection conseills.
Ne pas freiner le rotor en fin de centrifugation.

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UTILISATION DE LA CENTRIFUGEUSE A
MAIN (2)
viter d'abmer les cellules, bien sparer les lments

UTILISATION DU BEC BUNSEN (1)

Utilit du bec BUNSEN

Concentration de selles : 1 minute mi-vitesse (12001500 tours / minute)

Manipulation en atmosphre strile, dans un rayon de

20 cm autour du bec.

Culots en gnral : 3-5 minutes mi-vitesse

Strilisation rapide d'objets contamins (oeses).

Hmatocrite : 10 minutes pleine vitesse

Fixation d'une lame.

Srum ou du plasma :
premire centrifugation de 3 minutes pleine vitesse
dcantation du surnageant
deuxime centrifugation pleine vitesse.

UTILISATION DU BEC BUNSEN (2)

Consignes pour la manipulation du gaz :

Chauffage d'un ractif (coloration de Ziehl).

Chauffage d'un autoclave.
Fabrication des pipettes Pasteur.

HYGIENE ET SECURITE AU
LABORATOIRE
PROTECTION VACCINALE DU PERSONNEL

Ne jamais serrer les raccords avec une pince.

LAVAGE DES MAINS

Ne jamais fumer proximit.

PROTECTION PENDANT LES MANIPULATIONS

Ne pas poser le bec sur une table en bois.

Toujours fermer le robinet de la bouteille lors de non
utilisation du bec.
Ne jamais laisser de produits inflammables prs du
bec : ther, alcools, coton card ....

PROTECTION VACCINALE DU
PERSONNEL (1)

DEVENIR DES CONSOMMABLES JETABLES ET

REUTILISABLES
NETTOYAGE DU LABORATOIRE
ANNEXE : UTILISATION DE L'EAU DE JAVEL

PROTECTION VACCINALE DU
PERSONNEL (2)

Vaccins obligatoires en toute saison et en toute rgion :

Hpatite B et A
Tuberculose
Diphtrie
Ttanos
Poliomylite

Vaccins obligatoires suivant les pays, les pidmies ou

les saisons :
Fivre Jaune
Mningocoque A , C, Y et W135
Encphalite japonaise
Cholra (?)

Typhode

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PROTECTION VACCINALE DU
PERSONNEL (3)
Pour de nombreuses maladies il n'existe pas de vaccin :
RECOMMANDATIONS :
Pour le lavage des mains
Lors des manipulations
Pour llimination des dchets

LAVAGE DES MAINS (1)

Le lavage des mains est une opration effectuer
rgulirement :
Avant et aprs un prlvement.
Aprs une srie de manipulations biologiques.
Avant et aprs les repas.
Avant et aprs tre all aux toilettes.
En fin de journe aprs avoir nettoy le laboratoire.

Pour le nettoyage du laboratoire

LAVAGE DES MAINS (2)

Savon liquide de type Hibiscrub ou Btadine solution
moussante.
Il existe des solutions diode 2.5 % et des solutions de
chlorhexidine 5 % en gnrique :
La dilution de la chlorhexidine varie en fonction de
l'utilisation :
Antisepsie de la peau avant petite chirurgie : 0.5% dans de
l'alcool 70.

Nettoyage et antisepsie des plaies : 0.05% dans de l'eau distille.

Mode opratoire :

PROTECTION PENDANT LES

MANIPULATIONS (2)
Se laver les mains rgulirement.
Respecter au maximum les zones propres et sales du
laboratoire.
Laver le lieu de prlvement entre chaque patient.
Laver rgulirement les paillasses la Javel
(au moins 5-6 fois par jour).
Ne pas laisser traner de matriel contamin : le jeter s'il
est usage unique ou le dsinfecter s'il est rutilisable.

PROTECTION PENDANT LES

MANIPULATIONS (1)
Porter :
une blouse dans le laboratoire.
des gants en latex lors des manipulations de matriel
biologique.
des lunettes de protection si possible.
un masque lors de la recherche de BK.
des gants de type "manipulation d'acides" pour :
les reconstitutions de ractifs.
les strilisations,
les dsinfections,

DEVENIR DES CONSOMMABLES

JETABLES ET REUTILISABLES (1)
Les consommables jetables
(seringues, aiguilles, cotons souills, pansements, lames d'talement
dj lues, vaccinostyles, couvillons utiliss, pots crachats, pots
coproculture, pots CBU ...) :

Immersion dans une poubelle contenant de la javel

(jusquaux ).
Verss dans un trou pour y tre brls
Dans un Hpital, il est conseill de se doter d'un petit
incinrateur.

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DEVENIR DES CONSOMMABLES

JETABLES ET REUTILISABLES (2)
Les consommables rutilisables
(pipettes, pipettes de Potain, cellules de numration, tubes 15 ml
eau ou srum physiologique contamins ...)

Rinage leau
Immersion dans de la Javel dilue cet usage pendant
20 minutes.
Rinage l'eau puis schage soigneux.
Rangement l'abri de l'air dans une boite (pipettes) ou
strilisation l'autoclave par la suite (tubes).

NETTOYAGE DU LABORATOIRE
Doit tre un acte rgulier,
Utilisation systmatique de l'eau de Javel:
Aprs toute manipulation contaminante : Nettoyage de
la paillasse la Javel, rinage l'eau du matriel puis
dcontamination du matriel rutilisable.
Avant le repas de midi : nettoyage de la paillasse.
Le soir : nettoyage de la paillasse, du sol, de la table
des prlvements la Javel, nettoyage du microscope
ventuellement, vacuation puis incinration des
dchets.

ANNEXE : UTILISATION DE L'EAU DE

JAVEL (1)

ANNEXE : UTILISATION DE L'EAU DE

JAVEL (2)

Dsinfectant bactricide, sporicide, fongicide et virulicide

Prparation :

Fait partie des oxydants chlors.

ATTENTION : la Javel est un produit toxique qui
provoque des brlures sur la peau et les yeux.
En cas de projection, rincer longuement et abondamment
l'eau claire.
Ne jamais mlanger la Javel un autre produit (acides) car
dgagement gazeux de chlore.

ANNEXE : UTILISATION DE L'EAU DE

JAVEL (3)
Sols, viers et paillasses :
Diluer un grand verre (250 ml) de Javel 12 Cl dans
8 litres d'eau.
Laver la serpillire propre ou au chiffon avec la
dilution
Laisser agir 20 minutes puis rincer l'eau.
Consommables rutilisables :

Flacon de 250 ml de Javel concentre titrant 48 Cl.

Ce concentr est dilu au quart.
On obtient une eau de Javel titrant 12 Cl.
Conservation :
Le concentr : 3 mois aprs fabrication,
L'eau 12 Cl : 6-12 mois.
L'un comme l'autre se conservent :
l'abri de la lumire
si possible une temprature < 25C.

ANNEXE : UTILISATION DE L'EAU DE

JAVEL (4)
Instruments dsinfecter avant strilisation
(aiguilles PL, spculums..)
Diluer un verre (250 ml) de Javel 12 Cl dans 10
litres d'eau,
Immerger le matriel pendant 10 20 minutes
Rincer l'eau.

Diluer 1 litre de Javel 12 Cl dans 5 litres d'eau.

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REACTIFS
Les colorants et ractifs doivent tre stables, mme dans
des conditions de temprature et dhumidit extrmes.
Il doivent permettre deffectuer les colorations suivantes :
Ziehl
MGG
Gram
Bleu de mthylne
Bleu de lactophnol
Lugol
Vago

BIBLIOGRAPHIE (2)
"Guide pratique de l'antisepsie et de la dsinfection"
J. Fleurette, J. Freney, M.E. Reverdy et F. Tissot Guerraz,
dition ESKA.
"Bactriologie mdicale : Techniques usuelles
B. Carbonnelle, dition Simep
"Conduite des examens en parasitologie"
G. Mougeot, dition Masson
"Manuel de biochimie pratique"
J. Rodier et R. Mallein, dition Maloine
"Recherche, isolement et tude du bacille tuberculeux et
des autre mycobactries en pratique courante"
F. Tison et B.Carbonnelle, dition Crouan et Roques.

PRLVEMENT DE SANG CAPILLAIRE

Recherche de paludisme ou de trypanosomes.
Mesure de lhmatocrite.
Matriel ncessaire :
Un vaccinostyle, dsinfectant et coton.
Mode opratoire :

BIBLIOGRAPHIE (1)
"Techniques de base pour le laboratoire"
Organisation Mondiale de la Sant, Genve, ditions
OMS.
"Techniques de laboratoire lmentaires pour
mdecins isols
Agrgs du pharo, dition DGDL, diffusion Maloine.
"Guide pratique du laboratoire de mdecine tropicale"
C. Bourderioux, dition Doin.
"Examens de laboratoire en mdecine tropicale"
P. Bourre, dition Masson.

LES PRELEVEMENTS
PRELEVEMENT SANGUINS
SPHERE BRONCHO-PULMONAIRE
LIQUIDES DE PONCTIONS
SPHERE URO-GENITALE
PRELEVEMENTS PERIPHERIQUES
PRELEVEMENTS DE SELLES

FROTTIS SANGUIN
Le frottis sanguin consiste raliser un talement
monocellulaire des lments sanguins. Il ncessite
lutilisation de 2 lames.
Fixer le frottis avant coloration, (le plus souvent au
MGG).

Piquer d'un coup sec le bout du 3me doigt puis presser

le doigt.
Pour le paludisme, prlever pendant la monte de fivre.
Recueillir la goutte sur une lame.
Raliser ensuite un frottis ou une goutte paisse.

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PRLVEMENT DE SANG VEINEUX (1)

Matriel ncessaire :
Garrot, seringue et aiguille, dsinfectant, coton,
sparadrap, tubes avec ou sans anticoagulant, gants.
Mode opratoire :

PRLVEMENT DE SANG VEINEUX (2)

Aboucher la seringue l'aiguille et piquer la veine.
Tirer le piston.
Retirer l'aiguille et la jeter dans un rcipient destin
aux consommables jetables.

Prvoir les tubes ncessaires, mettre ventuellement

l'anticoagulant.

Remplir les tubes en commenant toujours par le tube

sec,

Prlvement pli du coude ou face dorsale de la main.

Garrotter le bras du patient, dsinfecter la zone cutane.

Boucher immdiatement tous les tubes et remuer ceux

contenant l'anticoagulant.

Dcoincer le piston de la seringue puis le remettre dans

sa position initiale.

ANNEXE : ANTICOAGULANTS UTILISES (1)

EDTA
Numration Globules rouges, Globules blancs, Plaquettes,
Hmatocrite
Etalement sanguin (formule sanguine, recherche dhmaties
anormales, identification de certains parasites : plasmodium,
microfilaires et trypanosomes).
Vitesse de sdimentation.

Formule
Sel dipotassique dEDTA 20 g
Eau distille frachement bouillie QSP 200 ml
Mettre 100 l de cette solution dans le tube destin recueillir
le sang (5ml).

Ne jamais remplir de tubes avec une seringue sur laquelle

on na pas enlev l'aiguille.

ANNEXE : ANTICOAGULANTS UTILISES (2)

CITRATE
Coagulation
Plaquettes agrgeant spontanment sur EDTA (5-10 % de
la population)

Formule
Citrate trisodique anhydre 3,8 g
Eau distille QSP 100 ml
A conserver au rfrigrateur pendant 2 mois.
A diluer au sang dans la proportion de 1 ml pour 4 ml de
sang
Dilution prendre en compte lors d'une numration de
plaquettes.

ANNEXE : ANTICOAGULANTS UTILISES (3)

TUBE SEC (sans anticoagulant)
Srologies
Transaminases : ASAT (GOT), ALAT (GPT)
Cratinine, ure, glucose, bilirubines
Protines, ionogramme

Tubes
AVEC ANTICOAGULANT
Plasma
SANS ANTICOAGULANT
Srum

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Avec anticoagulant

Plasma
Sang total

Sans anticoagulant

Bouchon rouge :
(sans gel)

Srum

Bouchon jaune :
(avec gel)

EDTA

Citrate de sodium

NFS Frottis sanguin

Groupage sanguin

VS

Parasitologie sanguine
Biologie molculaire
Hb glyque
Exploration de lHb

Conservation : T ambiante
Conservation : T ambiante

Dlai pranalytique : < 12 h

Dlai pranalytique : < 12 h

Citrate de sodium

Hparinate de Lithium

Hmostase

Biochimie

Numration plaquettaire

Toxicologie

Biologie molculaire

Conservation : T ambiante

Conservation : T ambiante

Dlai pranalytique : < 2 h

Dlai pranalytique : < 12 h (iono : 3 h)

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Tube sec
Immunologie - Srologies
RAI (bouchon rouge, pas de gel)
Hormones, marqueurs cardiaques et tumoraux

Ordre des tubes

TUBE

COULEUR BOUCHON

Sec

Rouge ou jaune

Citrat

Bleu clair

Hparin

Vert

Conservation : T ambiante

Fluorure oxalate

Gris

Dlai pranalytique : < 24 h

EDTA

Violet

Citrat

Noir

Ionogramme - Enzymes Substrats

PRLVEMENTS PULMONAIRES (1)

Recueil de crachats
Gnralement pratiqu pour la recherche de BK
Sert galement au diagnostic d'autres pathologies :
pneumonies, aspergilloses, pneumocystose ....
Matriel :
Pot crachats ou dfaut pliage en carton fort.
Mode opratoire :
Prfrer les crachats du matin au rveil.
Rinage bucco-dentaire leau distille
Faire tousser le patient et le faire cracher dans le pot
que l'on referme aussitt.

PRLVEMENTS PULMONAIRE (3)

Recueil dexpectorations induites
Utilis pour le diagnostic de parasitoses pulmonaires,
en particulier chez l'immunodprim
(pneumocystis, histoplasma).

Mode opratoire :
Inhalation d'une solution de NaCl 30 g/l pendant 15
minutes
Provocation des expectorations induites.

PRLVEMENTS PULMONAIRES (2)

Examen macroscopique du crachat :
La salive est claire, filante, incolore ( rejeter)
Le mucus est plus pais et plus consistant, il est grisverdtre, translucide et difficile dissocier
Le pus est pais et opaque, jaune verdtre, et traduit la
prsence de nombreux globules blancs plus ou moins
altrs.
Procder l'talement du crachat sur une lame :
valuer la quantit de cellules pithliales et de
polynuclaires par champ (X10).

PRLVEMENTS PULMONAIRE (4)

Recueil dexpectorations induites (suite)
Raliser un examen direct ainsi que plusieurs
talements de lames avec le culot obtenu.
Fixer les lames bien sches au mthanol pendant 2
minutes.
Les colorer au MGG.

Recueil des expectorations dans 2 flacons striles.

centrifugation du prlvement ( 5 minutes la vitesse
maximum)

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TECHNIQUES ELEMENTAIRES

EXAMEN DIRECT ENTRE LAME ET

LAMELLE (ETAT FRAIS) (1)
Pralable :

EXAMEN DIRECT ENTRE LAME ET LAMELLE

(ETAT FRAIS)

Pratiquer les ED sur des prlvements frais.

ETALEMENT D'UN LIQUIDE BIOLOGIQUE

Faire toujours en parallle un talement sur lame

destin la coloration.

FIXATION D'UNE LAME DEJA TALE

Attention lidentification des lames (marquage au

graveur ou au crayon).
Matriel :
lames, lamelles, pipette pasteur flambe ou oese.

EXAMEN DIRECT ENTRE LAME ET

LAMELLE (ETAT FRAIS) (2)

ETALEMENT D'UN LIQUIDE

BIOLOGIQUE (1)

Mode opratoire :
Si le prlvement est un couvillonnage, dcharger
lcouvillon dans 0.5 1 ml de srum physiologique
(NaCl 0.9 %) strile. Lorsque le prlvement est un
liquide, cette tape est supprime.
Dposer une goutte du liquide au milieu dune lame,
recouvrir d'une lamelle.
Observer au microscope en commenant par les
objectifs faible grossissement.
La coloration peut tre effectue sur la mme lame
aprs fixation.

ETALEMENT D'UN LIQUIDE BIOLOGIQUE (2)

Mode opratoire :
Si le prlvement est un couvillonnage, dcharger
lcouvillon dans 0.5 1 ml de srum physiologique
strile. Si le prlvement est un liquide, cette tape est
inutile.
Dposer une goutte de liquide lextrmit gauche
dune lame.
Avec une deuxime lame superposant la premire,
craser la goutte tout en tirant la deuxime lame vers la
droite. Scher lair.
Fixer puis colorer la lame par la technique adapte
ce que lon recherche.

Pralable :
Fait en parallle de lexamen direct ltat frais.
Il est conseill de toujours pratiquer au moins deux
talements.
Matriel :
3 lames, pipette pasteur flambe ou oese.

FIXATION D'UNE LAME DEJA

TALE (1)
Toujours aprs une phase de schage soigneux.
Fixation physique :
Fixation par la chaleur (bec Bunsen).
Fixation chimique :
thanol ou mthanol 95 : recouvrir la prparation
puis incliner la lame pour liminer l'excs de liquide.
Laisser scher compltement.

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FIXATION D'UNE LAME DEJA

TALE (2)

PRELEVEMENTS DE LIQUIDES DE
PONCTIONS

Combinaison des deux mthodes :

Verser l'alcool sur la lame puis lincliner pour vacuer
l'excs de liquide,
Enflammer la mince couche restante.

Ponction pleurale
Ponction dascite
Ponction lombaire
Ponction mdullaire (mylogramme)

NB : Toujours considrer une lame d'talement, mme

fixe et colore, comme un produit potentiellement
pathogne, surtout les lames de BK.

Ponction ganglionnaire

PONCTION PLEURALE (1)

But :

PONCTION PLEURALE (2)

Ralisation pratique :

Diagnostic des panchements pleuraux grce aux

examens chimiques, cytologiques et microbiologiques
du liquide de ponction.
Acte mdical.
Signaler :
lexistence dun traitement anticoagulant
une intolrance aux anesthsiques locaux
une contre indication latropine

Intrt +++ dobtenir des clichs radiologiques

(avant et aprs ponction).

PONCTION PLEURALE (3)

Remplir au moins 3 tubes qui seront traits immdiatement,
pour :
La cytologie (quelques dizaines de ml) :
Noter l'aspect du prlvement,
Raliser une numration des lments sur cellule,
Faire un talement et une coloration de MGG pour la
formule leucocytaire et la recherche de cellules tumorales.
La biochimie (quelques ml) :
Dosage des protines totales et du glucose sur le
surnageant.

Une prmdication (atropine) et/ou une anesthsie

locale (lidocane) sont habituelles.
La ponction pleurale est faite :
au niveau de la matit
sur le bord suprieur de la cote infrieure

L'aiguille aura un calibre d'autant plus important que

l'on suspecte un liquide pais (pleursie purulente,
hmothorax).

PONCTION PLEURALE (4)

La bactriologie (quelques ml) :
Examen direct entre lame et lamelle
talement sur au moins 2 lames pour coloration de
Gram et coloration de Ziehl-Nielsen.
Incidents et accidents :
Exceptionnellement graves : mort subite ou embolie
gazeuse.

Souvent de simples incidents : pneumothorax minime,

hmoptysie transitoire. Malaise vagal. Douleur thoracique
dans les heures qui suivent la ponction.

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PONCTION D'ASCITE (1)

But :

PONCTION D'ASCITE (2)

Sur le liquide dascite sont raliss :

Aide au diagnostic des causes d'un panchement

pritonal.
Ralisation pratique :
Pas de contre-indication au prlvement de liquide
d'ascite, mme en cas de traitement anticoagulant ou de
dficit en facteurs de la coagulation.
Dsinfection soigneuse de la peau.
Prlvement la seringue travers l'abdomen sans
anesthsie locale.

Un examen macroscopique :
couleur, aspect, prsence de coagulum
Une tude cytologique
numration des lments nucls sur cellule de
comptage (leucocytes, cellules endothliales)
recherche de cellules tumorales

PONCTION D'ASCITE (3)

Une centrifugation vitesse moyenne
A partir du culot de centrifugation :
Ralisation dun talement sur 3 lames
ED sans coloration
MGG pour la formule leucocytaire et laspect des cellules
Gram pour dcrire les bactries ventuellement prsentes

A partir du surnageant :
Dosage des protines et du glucose

PONCTION LOMBAIRE (2)

PONCTION LOMBAIRE (1)

But :
Aide au diagnostic d'une mningite.
Recherche des trypanosomes ( la phase mningoencphalitique)
Acte mdical.
Matriel ncessaire :
Un trocart ponction lombaire de prfrence usage
unique,
2 tubes coniques striles pour le recueil du LCR
Coton, dsinfectant

PONCTION LOMBAIRE (3)

L'examen d'une ponction lombaire est un geste
D'URGENCE.
Un relev de l'aspect macroscopique du liquide
(eau de roche, clair, trouble, purulent, hmorragique)
Une numration des leucocytes, des rythrocytes et des
autres lments sur le liquide PUR. Noter la prsence

Dans le premier tube : Recueillir les 4 5 premires

gouttes du LCR.

ventuelle de germes.
Une centrifugation du liquide.

Dans le deuxime tube : Recueillir le reste (une vingtaine

de gouttes). Sera utilis pour l'analyse.

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PONCTION LOMBAIRE (4)

Une centrifugation du liquide (suite).
Un dosage des protines et du glucose sur le
surnageant.
Deux lames ralises par crasement du culot,

PONCTION ARTICULARE
But :
Aide au diagnostic d'une arthrite infectieuse
Cest galement une urgence mdicale.
Un liquide synovial doit tre trait comme un liquide

une colore au MGG pour dterminer la formule

leucocytaire,

cphalorachidien.

l'autre colore au Gram pour observer d'ventuelles

bactries.

PONCTION DE MOELLE OSSEUSE

(MYELOGRAMME) (1)
But :
Etude cytologique quantitative et qualitative des frottis
raliss aprs ponction-aspiration de moelle osseuse.
Diagnostic des hmopathies maligne et de certaines
parasitoses (leishmanioses viscrales).
Matriel ncessaire :
Un trocart (trocart de Mallarm) et une seringue.
4 lames propres et dgraisses.
Compresses, dsinfectant.

MYELOGRAMME (3)

MYELOGRAMME (2)
Ralisation pratique :
Anesthsie locale prfrable
Ponction du sternum et aspiration rapide par une
seringue monte.
Etalement du suc sur plusieurs lames (frottis) qui sont
sches l'air. Obtenir des "grains" visibles l'il.
Coloration au MGG
Incidents et accidents :
Chez l'enfant : un autre lieu de ponction est souhaitable
(iliaque)
Chez le sujet g : sternums souvent ostoporotiques.

PONCTION GANGLIONNAIRE (1)

Lecture du mylogramme :
Seffectue schmatiquement en 3 ou 4
tapes successives :
Numration des mgacaryocytes

But :
Aide au diagnostic tiologique des adnopathies.
Avant la ponction, noter prcisment :

Dtermination de la richesse mdullaire

le sige du prlvement,

Formule des lments nucls et analyse

le caractre douloureux ou non du ganglion,

morphologique des lignes (rythroblastique,

sa consistance (dure, ferme, molle),

mylode, lymphode, monocytaire)

sa mobilit : fix ou non,

Recherche dlments exognes (leishmanies,

BAAR)

le caractre isol ou dissmin des adnopathies, leur

localisation uni ou bilatrale.

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PONCTION GANGLIONNAIRE (3)

PONCTION GANGLIONNAIRE (2)

Ralisation pratique :
Ponction directe du ganglion laiguille.
Tourner laiguille sur elle mme entre le pouce et
lindex
Retirer laiguille et chasser le suc avec la seringue.
Confectionner plusieurs frottis qui seront fixs et
colors (MGG, Gram..)
Incidents et accidents :
Incidents sans gravit :
Ecchymose au point de piqre, gonflement du ganglion
par hmorragie intraganglionnaire.

PONCTION GANGLIONNAIRE (4)

Les examens cytologiques et bactriologiques peuvent
permettre de retrouver une tiologie :
infectieuse (staphylococcies, streptococcies,
tuberculose...)
inflammatoire (infections virales, syphilis,
toxoplasmose...)
parasitaire (leishmanioses, filarioses,
trypanosomiases...)

PRELEVEMENTS DE LA SPHERE
URO-GENITALE
PRLVEMENT D'URINE
PRLVEMENT GENITAL CHEZ L'HOMME
PRLVEMENT GENITAL CHEZ LA FEMME
PRLVEMENTS POUR LA RECHERCHE DUNE
MST

maligne (mtastases, maladie de Hodgkin,

lymphome...)

PRLVEMENT D'URINE (1)

Il permet deffectuer :
une analyse cyto-bactriologique du culot urinaire
une analyse biochimique de l'urine (bandelettes).

PRLVEMENT D'URINE (2)

Mode opratoire :
Recueil des urines du matin avant tout traitement antiinfectieux
Toilette soigneuse du mat urinaire

Ce prlvement doit tre effectu avec soin.

Prlever les urines du 2me jet (plus proche de lurine

vsicale)

Matriel :

Numration des lments figurs (GB et GR)

Un flacon pour analyse d'urine ou dfaut un rcipient

ferm propre et sec.

Recherche de bactries sur le culot de centrifugation

(coloration de Gram).
Cas particulier de la recherche d'ufs de Schistosoma
haematobium :

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PRLVEMENT GENITAL CHEZ

L'HOMME (1)
Diagnostic tiologique des infections urtrales ou
prostatiques.
Le patient ne doit pas uriner pendant les 4 heures
prcdant le prlvement.
Matriel :
couvillons, lames, gants

PRLVEMENT GENITAL CHEZ

L'HOMME (2)
Prsence d'un coulement purulent :
recueillir cet coulement sur couvillon.
Pas ou peu d'coulement :
introduire l'couvillon humidifi dans lurtre sur 0.5
1 centimtre.
le tourner une fois sur lui-mme si possible
retirer dlicatement lcouvillon

Mode opratoire :

PRLVEMENT GENITAL CHEZ

L'HOMME (3)
Dcharger lcouvillon directement sur 3 ou 4 lames.
Procder ensuite :
un examen direct
un talement sur lame en vue d'une coloration
(Gram, MGG, Bleu de mthylne).

PRLVEMENT GENITAL CHEZ LA

FEMME (1)
Permet de diffrencier plusieurs types dinfections
gnitales : parasitaires, mycosiques ou bactriennes.
Aide au diagnostic de certaines MST.
Matriel :
Spculum en inox strilis,
2 couvillons striles,
lames, gants

PRLVEMENT GENITAL CHEZ LA

FEMME (2)
Mode opratoire :
Patiente allonge, de prfrence sur une table
gyncologique.
Passer le spculum sous de l'eau tide et propre.
Introduire le spculum verticalement et en position
ferme dans le vagin. Lorsquil est introduit au 3/4, le
retourner pour le mettre en position horizontale.
Reprer le col de l'utrus puis visser doucement afin
d'carter les mors.

PRLVEMENT GENITAL CHEZ LA

FEMME (3)
Noter l'aspect du col
Prlever :
autour du col avec le 1er couvillon (gonocoques,
trichomonas).
le col lui mme avec le 2me couvillon (chlamydiae).
Retirer le spculum et le placer dans un bac contenant de
la Javel.
Procder un examen direct et des talements sur lame
(coloration de Gram et de Giemsa)

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PRLVEMENTS POUR LA RECHERCHE

DE MST (1)
Prlvement de chancre syphilitique :
diagnostic de la syphilis
Utiliser des gants
Nettoyer le chancre (srum physiologique) et bien
scher avec une gaze strile
Si des srosits apparaissent spontanment, appliquer
directement la ou les lames sur le chancre.

PRLVEMENTS POUR LA RECHERCHE

DE MST (2)
Prlvement de chancre syphilitique (suite)
Ensuite, 2 possibilits :
Si microscope fond noir : dposer une lamelle sur la
goutte de srosit et observer
Sinon, scher la lame et colorer par la mthode de
Vago.

Sinon, pratiquer 2 ou 3 petites incisions sur les bords

du chancre et recueillir les srosits.

Dautres techniques (coloration de Fontana-Tribondeau,

technique d'immunofluorescence) sont ralises par les
laboratoires de rfrence (scher le prlvement sans le
colorer et l'envoyer).

PRLVEMENTS POUR LA RECHERCHE

DE MST (3)

PRLVEMENTS POUR LA RECHERCHE

DE MST (4)

Prlvement d'un chancre mou :

Prlvement douloureux pouvant faire saigner.
Nettoyer le pus abondant (gaze strile imbibe de
srum physiologique).
Prlever l'couvillon sur tout le pourtour de l'ulcre
(base de la paroi externe)
taler le prlvement sur deux lames.
Scher les lames et faire une coloration de MGG
Il est inutile de prlever l'adnopathie (pus crmeux trs
pauvre en bacilles).

AUTRE TREPONEMATOSE
Prlvement d'une lsion pianique : diagnostic du pian
Attention, les pianomes sont trs contagieux.
Dsinfecter le pianome avec de l'alcool 70, laisser
scher.
Soulever la crote avec une petite pince ou un
vaccinostyle puis prlever une petite quantit de srosit
avec le vaccinostyle ou une aiguille. L'taler sur une
lame.

Prlvement d'un ulcre de donovanose :

Choisir la partie la moins surinfecte de l'ulcre ( 4 ou
5 mm des bords) et nettoyer la surface prlever.
Prlever un granulome de 2 3 mm de diamtre
l'aide d'un petit scalpel
Prendre le granulome avec la pince et raliser
successivement :
Des frottis, des appositions et un crasement du granulome
sur plusieurs lames.

Scher les lames et faire une coloration de MGG

PRELEVEMENTS PERIPHERIQUES
PRLVEMENT DE GORGE
PRLVEMENT DE NEZ
PRLVEMENT D'OREILLE
PRLVEMENT DE PLAIE
PRLVEMENT A VISEE MYCOLOGIQUE

Les modalits diagnostiques sont les mmes que celles

de la syphilis

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PRLVEMENT DE GORGE
Effectu aprs l'chec d'une thrapeutique ou si suspicion
de diphtrie ou dangine de Vincent.
Matriel :
Abaisse-langue en bois usage unique, couvillons,
gants, lames.
Mode opratoire :
Appuyer la base de la langue pour dcouvrir la gorge.
Prlever au niveau des endroits inflammatoires (points
blancs) ou en priphrie des fausses membranes.
Raliser un examen direct puis un talement sur lame en
vue d'une coloration (Gram).

PRLVEMENT D'OREILLE
Matriel :
Adaptateur conique auriculaire en inox, auriculoscope
piles,
Gants, couvillon trs fin, pipette pasteur strile.
Mode opratoire :
Placer l'adaptateur dans le conduit auditif
L'observer grce l'auriculoscope
Prlever le pus sur couvillon (ou pipette pasteur si trs
liquide)
Faire un examen direct (filaments mycliens) et un
talement sur lame pour coloration de Gram.
Dsinfecter l'adaptateur dans la javel avant strilisation.

PRLVEMENT A VISEE MYCOLOGIQUE (1)

Risque contagieux ++.
Procder avec la plus grande hygine et bien dsinfecter le
matriel.
Matriel :
Rcipient propre et sec, curette, vaccinostyle, pince
piler.
Mode Opratoire :
Lsions sches de la peau glabre et des plis :
Prlever en grattant la priphrie de la zone atteinte
(vaccinostyle ou curette).
Recueillir les squames et les placer dans le rcipient.

PRLVEMENT DE NEZ
Gnralement effectu pour le diagnostic de la lpre.
Matriel :
1 ou 2 couvillons, lames, gants.
Mode opratoire :
Faire asseoir le patient, tte lgrement renverse en
arrire
Frotter soigneusement la cloison internasale en haut du
nez (attention au risque de perforation)
Faire un talement de l'couvillon et une coloration de
Ziehl pour rechercher le bacille de Hansen.

PRLVEMENT DE PLAIE
Les bactries responsables de l'infection sont situes en
profondeur de la plaie.
Matriel :
Compresses, eau distille ou srum physiologique,
couvillons, lames, lamelles.
Mode opratoire :
Laver la plaie et la frotter avec des compresses
Scher la plaie avec une compresse strile
Prlever avec un couvillon fermement appliqu
Faire un examen direct et un talement pour coloration de
Gram.

PRLVEMENT A VISEE MYCOLOGIQUE (2)

Mode Opratoire (suite)
Lsions unguales et pri-unguales
Gratter et recueillir les nombreuses particules (longle
atteint est en gnral friable)

Lsions du systme pileux (teignes, krions ou sycosis)

Les cheveux ou les poils atteints sont en gnral casss.
Prlever laide dune pince lensemble du poil ou cheveu
avec la racine.

Procder un examen direct aprs claircissement de

lchantillon par de la potasse (prsence de levures,
d'lments mycliens, de Pityriasis versicolor ...).

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PRLVEMENT DE SELLES (2)

PRLVEMENT DE SELLES (1)

Pralable :
A effectuer de prfrence au laboratoire.
Ne pas hsiter renouveler les prlvements.
Matriel ncessaire :
Pot coproculture
Ecouvillons
Papiers filtre

Classer la selle selon ses caractres macroscopiques : Elle

peut tre :
Moule, pteuse, molle, liquide.
Noter la prsence ventuelle de mucus, de sang, de pus.
On ne retrouve pas de formes vgtatives de protozoaires
dans les selles trop dures :
Mise en suspension pour rechercher les kystes et les
ufs.
Les selles trop liquides diluent les lments parasitaires :
centrifuger le liquide pour le concentrer.

PRLVEMENT DE SELLES (3)

Procder ensuite lexamen cytobactriologique et
parasitologique des selles :
ED (amibes, vibrions)
ED aprs coloration au lugol
Techniques denrichissement
Frottis pour colorations (Gram, Ziehl modifi...)
Dsinfection du matriel :
Jeter les selles et le matriel usage unique aprs
dcontamination leau de Javel.

CONSERVATION D'UNE PRPARATION (2)

CONSERVATION D'UNE PRPARATION (1)

Indispensable pour les examens diffrs ou pour les
envois (mylogramme ++)
Identifier les lames au moyen dune tiquette +++.
Joindre les renseignements cliniques.
Matriel :

Oese,
Paraffine, baume du Canada,
Lamelle de grande taille,
Chiffon.

CONSERVATION D'UNE PRPARATION (3)

Lame colore :

Lame d'examen direct :

Dposer une goutte de paraffine aux quatre coins de la
lamelle.
Laisser solidifier.
Dposer de la mme faon de la paraffine sur les
quatre bords de la lamelle.
La prparation est ainsi hermtiquement close.

Nettoyer la lame pour enlever l'ventuelle huile

immersion.
Dposer une goutte de baume du Canada sur la lame.
Poser dlicatement la grande lamelle sur la goutte
Chauffer la lame sans faire bouillir pour que le baume
diffuse partout sous la lamelle
Essuyer le surplus de baume avec le chiffon propre et
sec.
Bien laisser scher.

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ENVOIS DE PRLVEMENTS (1)

ENVOIS DE PRLVEMENTS (2)

REGLEMENTATION

2 IMPERATIFS
Les liquides et tissus biologiques expdis ne doivent
reprsenter aucun risque pour les personnes amenes
manipuler le colis.
Ils doivent galement parvenir dans les meilleures
conditions pour l'analyse venir.

3 textes rgissent le transport des chantillons biologiques

sur le territoire franais.
ADR (accords europens relatifs au transport des
marchandises dangereuses par la route) : arrt du 17/12/98.
GBEA (guide de bonne excution des analyses de biologie
mdicale) : arrt du 26/11/99.
Dcret du 30 avril 2002 relatif aux conditions de transmission
de prlvements biologiques aux laboratoires danalyses de
biologie mdicale.

ENVOIS DE PRLVEMENTS (3)

REGLEMENTATION (suite)
Les chantillons biologiques sont considrs, pour leur
transport, comme des matires dangereuses et, ce titre,
relvent de la lgislation de celle-ci.
Les matires dangereuses sont classes en 9 classes et
les chantillons biologiques appartiennent la classe 6.2 :

ENVOIS DE PRLVEMENTS (4)

la classe 6.2 comprend les matires dont on sait ou dont on a
des raisons de penser quelles contiennent des agents pathognes.
Les agents pathognes sont dfinis comme des micro-organismes
(y compris les bactries, les virus, les rickettsies, les parasites et
les champignons) ou comme des micro-organismes recombins
(hybrides ou mutants), dont on sait ou dont on a des raisons de
penser quils provoquent des maladies infectieuses chez lanimal
ou chez lhomme. Ces matires sont soumises aux prescriptions de
la prsente classe si elles peuvent, en cas dexposition,
transmettre des maladies lhomme ou aux animaux.

ENVOIS DE PRLVEMENTS (5)

Les diffrentes matires (chantillons biologiques) qui
composent la classe 6.2 sont rparties en 4 groupes de
risque (AFNOR) :
Groupe de risque 4 :
Risques importants pour le manipulateur comme pour
la communaut
Il nexiste pas de traitement
Risque lev en cas de propagation
Virus des fivres hmorragiques (Ebola, Lassa, CrimeCongo.)

ENVOIS DE PRLVEMENTS (6)

Groupe de risque 3 :
Risque grave pour le manipulateur, modr pour la
communaut
Lsions srieuses dues linfection
Il existe parfois un traitement ou une prophylaxie
VIH, Fivre jaune, Hpatite B
Mycobacterium tuberculosis, S. typhi, S. dysenteriae,
Brucella, Histoplasma

Les agents du groupe 3 sont classs 6.2 2.

Les agents du groupe 4 sont classs 6.2 1.

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ENVOIS DE PRLVEMENTS (7)

Groupe de risque 2 :
Risque modr pour le manipulateur, limit et faible
pour la communaut
Il existe toujours un traitement prventif (vaccination)
ou curatif
Staphylocoque dor, corynebacterium diphteriae,
N. meningitidis
Entamoeba histolytica, plasmodium, schistosoma...

ENVOIS DE PRLVEMENTS (8)

Groupe de risque 1 :
Micro-organismes peu susceptibles de provoquer des
maladies humaines ou animales.
Ex. : E.coli, B. subtilis

Tous les chantillons affects aux groupes de risque 4, 3

et 2 sont classs 6.2 avec le numro ONU 2814.

Candida albicans...

Les agents du groupe 2 sont classs 6.2 3.

ENVOIS DE PRLVEMENTS (9)

Les emballages des chantillons biologiques classs 6.2
doivent obligatoirement respecter le
principe du TRIPLE EMBALLAGE
et comprendre les lments suivants :

ENVOIS DE PRLVEMENTS (10)

Un emballage intrieur comprenant :
un rcipient primaire tanche contenant lchantillon
(flacon, tube, boite)
un emballage secondaire tanche destin recevoir le
rcipient primaire. Celui-ci doit :
tre ferm par un bouchon vissant.
tre quip dun joint en matriau absorbant plac entre le
rcipient primaire et lemballage secondaire (mousse,
coton, "chips" d'emballage..).

ENVOIS DE PRLVEMENTS (11)

Le rcipient primaire ou lemballage secondaire doivent
pouvoir rsister, sans fuite :
une pression interne qui donne une diffrence de
pression dau moins 95kPa (0,95 bar).
des tempratures de 40C +55C.
Les emballages intrieurs ne doivent pas tre consolids
dans des emballages extrieurs contenant dautres types de
marchandises.

ENVOIS DE PRLVEMENTS (12)

Un emballage intrieur
Un emballage extrieur suffisamment rsistant en
fonction :
de sa capacit,
de sa masse.
la plus petite dimension extrieure ne doit pas tre
infrieure 10 cm.

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EXIGENCES DE MARQUAGES ET
ETIQUETAGES (2)

EXIGENCES DE MARQUAGES ET
ETIQUETAGES (1)
Chaque colis doit porter de faon claire et durable :

A chaque colis, doit tre joint un document de

transport:

Le logo produit infectieux

Les coordonnes de lexpditeur

La norme ONU 2814, avec la rfrence de la classe 6.2

Le N ONU et la matire infectieuse transporte

Le N du fabricant et de lagrment

La dsignation de la marchandise doit tre suivie de

lindication de la classe
Les coordonnes du destinataire
Un double du document de transport doit tre conserv
par lexpditeur (traabilit).

Ladresse prcise du destinataire

Ladresse prcise de lexpditeur
Les coordonnes de la personne prvenir en cas
daccident lors du transport.

ENVOIS DE PRLVEMENTS (Fin)

RETOUR DES RESULTATS

E-mail

La personne, physique ou morale, qui produit et

a donc en charge lexpdition de lchantillon est

responsable juridiquement de son transport
jusqu son arrive chez le destinataire .

Fax
Tlphone
Courrier

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