Faculté des Sciences de Tunis

Département de Biologie

L'immunothérapie par la vaccination active

de la 2éme génération de CAD106 : réduit
l'accumulation de amyloïde chez les souris
transgéniques exprimant APP; ainsi que les
éventuelles effets secondaires.

Travail réalisé par:

DRAOUI Jihéne
SAIDI Nasreddine
1
Plan

2
 Introduction

Matériels et méthodes

Résultats

Discussion

Conclusion
3
Introduction

4
 Définition

• La maladie d’Alzheimer est une maladie

neuro-dégénérative irréversible du système
nerveux central associée à une perte
progressive de la mémoire et des fonction
cognitives.

5
 L’Alzheimer est appelé aussi la maladie des 4 A :

Amnésie Apraxie Agnosie Aphasie

• trouble de • trouble des • trouble de • trouble de

la mémoire gestes la langage
perception (mal parler
(les sens et ne
sont comprenne
perturbés) plus les
mots)

6
 Historique

1911: première
publication plus
détaillé sur la
1906:première maladie
observation
microscopique au
niveau du cortex
d’Aguste.D qui
1901:première était décédé
examination d’une
patiente (Auguste
Deter) atteinte par
une démence par
Alois Alzheimer

7
 Les signes histologiques

La maladie d’Alzheimer se caractérise par

différents types de lésions:
•Atrophie cérébrale : perte importante du
poids du cerveau avec atteinte précoce des
neurones dans l’hippocampe
•Les formations des plaques séniles: ce
sont des dépôts protéiques extracellulaires
d’une substance amyloïde
•Les dégénérescences neurofibrillaires:
dépôts de la protéine Tau anormalement

8
 Accumulation Accumulation
des plaques intracellulaire
Alzheimer amyloïdes à de la protéine
l’extérieur des Tau hyper
neurones phosphorylé

9
 Origine de la maladie

l’hypothèse la plus admise est celle de la

cascade amyloïde

Proviennent d’une accumulation des formes

oligomériques du peptides A 1-42

Suite à des mutation dans certains gènes

10
Au moins 4 gènes sont impliqués dans la régulation
du métabolisme du peptide Ab et qu’ils jouent un
rôles dans l’apparition de la maladie

APP PS1

PS2 ApoE

11
Mutation • Clivage préférentiel des g-
dans l’APP sécrétases

Mutation • Augmente l’affinité de

dans les celle-ci pour l’APP
protéines • Augmente la production
PS1 et PS2 du peptide A

Mutation de • Diminue l’élimination du

gène ApoE peptide A 1-42

12
 -amyloïde et APP

• Le peptide -amyloïde est constitué de 42

acides aminés et est produit par endoprotéolyse
de la protéine APP (Amyloid Precursor
Protein).

• L’APP est une protéine transmembranaire qui

subit des clivages protéolytiques par trois types
de sécrétases

13
 Formation de -amyloïde
La b-sécrétase coupe en position
99 de la partie C-terminale d ’APP.

Libération du fragment Le fragment C-terminal C99

sAPPb dans l’espace reste dans la membrane.
extracellulaire

Les γ-sécrétases coupent au

niveau de la partie C-terminale.

Formation des oligomères d’Ab et

qui ne sont pas dégradés.
14
15
 Evolution du vaccin
La vaccination
contre l'amyloïde β-
(Aß)

Peut réduire l'accumulation Considérer comme une

d'amyloïde in vivo approche thérapeutique
potentielle

Il a été associé à la méningo- Raison de l'utilisation de l'Aß

encéphalite pensé être médiée par
des lymphocytes T inflammatoires Contient des épitopes de
cellules T

Les essais ont été arrêtés 16

Objectif

17
 La mise au point d’une immunothérapie qui
permet une immunisation active destiné à
déclencher une défense immunitaire de
l’organisme contre les bêta-amyloïde sans le
risque d’engager des LTc à développer une
méningo-encéphalite

18
Matériels et méthodes

19
 Les Souris Transgéniques APP
L’Animal comprend

Une séquence d'acides nucléiques

codant pour tout ou une partie du
gène codant pour l'APP.

Développe des pathologies

similaires à la maladie d'Alzheimer

20
 Immunisation/ prélèvements de tissus de souris.

• Dans l’immunisation passive

Injection d’anticorps dans le
cerveau

• Dans l’immunisation active

Injection du peptide A afin
de stimuler la production
d’anticorps endogènes
dans le but d’éliminer les
plaques séniles dans le
cerveau

21
 Détermination des AC anti-Aβ
Dilution de sérum

Après dilution, on détecte la présence - d’anti Ig G de souris-Phosphatase Alcaline

23
Détermination des cytokine : IFN-γ par
ELISPOT

24
 Dosage des cytokines et chemokines dans le cerveau

Les taux de cytokines ou chemokines sont mesurées en utilisant

un cytométrie en flux AimPlex™ multiplex assay
Le principe est le même que celui de
l'ELISA sandwich

incubation avec
de la R-
phycoerythrine

intensité de la fluorescence de la R-
phycoerythrine présente sur les billes est
quantifiée par cytométrie en flux
25
Mise en évidence de l’Aβ dans le cerveau

26
Immuno histochimie

27
Résultat

28
 immunisation avec CAD106

Ils ont mis en évidence la présence des cellules T activées et spécifiques de Aβ

Ils ont effectués une immunisation par

Aβ1-42
+ l’adjuvant
de Freund CAD106
10
Jours
après

Tous les animaux développent des anticorps anti-Aß

Isolation des cellules splénique + stimulation avec des Aβ et des

cellules T sécrétrices de TNFγ. 29
Analysis of Aβ-specific T-cells in mice immunized with CAD106 or Aβ1–42.

Les AB1-40 et Aβ6-20 contiennent les épitopes des lymphocytes T

L’immunisation avec CAD 106 n’active pas les Aβ des cellules T

30
spécifiques in vivo
 La génération d'anticorps spécifiques de Aß chez les souris transgéniques APP

Le test Le contrôle
Immunisation par le CAD 106 Injection de PBS

Les souris immunisées par le CAD106 développent des IgG Aß spécifique

31
 Effet de l’ immunisation par CAD106 sur accumulation de
l’amyloide B

Immunisation par
CAD 106

Diminution du nombre des plaques, ainsi

que la surface couverte

32
Aucune différence de réponse des anticorps a été apparente entre les
souris transgéniques APP23 et APP24
Réduction des plaques amyloïdes accumulées
33
Réduction du nombre des
plaques amyloïde ainsi que les
zones de leur déposition au
niveau des quatre régions
examinées du cerveau.

Absence quasi-totale des

plaques amyloïde au niveau du
caudat et putamen .

Une réduction importante au

niveau de la totalité du cerveau.

34
 Effet de l’immunisation par le CAD 106 ou de QB sur le dépôt
des plaques amyloïde

Souris APP24 âgée de 9.5 mois a La même lignés de souris traitées mais
19.5 mois à un stade plus avancé, de 13.5 mois a
19.5 mois

juste après le début du dépôt Au moment où une quantité

amyloïde dans le néocortex considérable d'amyloïde a déjà été
déposé dans le cortex et l'hippocampe

QB a lui seul n’a aucun effet sur Chez les souris âgées le nombre de
l’accumulation des plaques plaques diminues mais des effets très
amyloïdes chez les souris jeunes puissants ont été de nouveau observé
35
 Effet de l’immunisation par CAD 106 sur l’accumulation des plaques amyloides

Numéro de plaque
du néocortex

Pourcentage de la
superficie totale du
cortex

• Une réduction de 92% de la surface de la plaque

• Une réduction de 94% du nombre de plaques

Les anticorps induit par le CAD 106 ne provoque pas l’altération du

métabolisme des souris transgéniques APP in vivo mais affecte la disposition
des plaques amyloïdes
36
 Dépôt de substance amyloïde dans le néocortex de souris APP24 après
immunisation par CAD106

Coloration d’amyloïde ß au niveau de sections de néocortex

de souris

PBS CAD106

Diminution de la diffusion des plaques Augmentation de l'amyloïde vasculaire

amyloïdes parenchymateuses

37
Effet répresseur du CAD106 contre l’amyloïde chez les
souris APP23

Après immunisation avec

CAD106

Diminution de 47% du
nombre des plaques amyloïdes .

Diminution des zone de

plaque de petite taille

Réduction sélective des plaques de petite taille

d’Aβ
38
L’effet du CAD106 sur l’amyloïde vasculaire

Elévation du nombre de Aß contenant les

profils des vaisseaux sanguins dans certaines
mais pas toutes les études avec des souris
APP24 immunisés par CAD106

La diminution des dépôts amyloïdes au

niveau cérébrale est proportionnelle à
l’augmentation de l’amyloïdes vasculaire.

Déposition préférentielle de l’Aβ42 par

rapport l’Aβ40  CAD106 augmente le dépôt
de AB42 mais pas de Aß40 dans le système
vasculaire

39
 CAD106 vs Microhémorragies

Immunisation active (CAD106)

APP24 : une seule Microhémorragie dans

Immunisation passive (Aβ) l’étude contrôle.
→ Apparition rare.
la cause majeur des APP23 (âgées) : plus de Microhémorragies
microhémorragies est l’amyloïde → CAD106 ne provoque pas l’augmentation
vasculaire. des microhémorragies.

40
 Evaluation de l’infiltration des cellules B et cellules T dans le cerveau

extraction du Analyse ce cerveau par des

cerveau de la souris. cellules B et des cellules T

Détection des lymphocytes péri

vasculaire occasionnellement
chez les souris âgées
L’immunisation par le CAD 106 n’a pas d’effet
sur l’infiltration des lymphocytes
41
 Etude de l’effet du CAD106 sur les singe rhésus : Ac / toxicité
singe rhésus
Les singes Rhésus ont la même séquence Aß
comme les humains et leur système
immunitaire peuvent être considérés comme
immunisés avec étroitement liés
CAD106

Absence de réactivité croisée entre les Ac des

singes avec les tissus murins et humains.
Production d’Ac Anti-Aβ de
différentes classes d’IgG.

Les AC anti Aß de singe ont été testés pour leur

capacité à reconnaître des oligomères
synthétiques par Western Blot
42
 CAD106 réagie contre les
oligomères d’Aβ et protège contre
la toxicité liée à l’Aβ.

les AC produit à partir de

l'immunisation avec CAD106 sont
était analysé pour un éventuelle
réactivité croisé vis à vis des Aβ
synthétiques (western blot).

A :Les anticorps induites par CAD106 réagissent avec les

monomères d'Aß (3,5 kDa) ainsi que des oligomères de taille
croissante

B :CAD106 antibodies from monkeys reverted the oligomer-

induced toxicity in a concentration-dependent manner
43
discussion

44
 Dans cette étude

Ils ont démontrés que les anticorps induits interférer avec

dépôts amyloïdes dans les régions corticales et sous-
corticales, se lient à des agrégats de Aß, et de bloquer
leur toxicité pour les cellules

Toutes les souris et les singes rhésus immunisés avec

CAD106 développent un titres d'anticorps Aß quel que
soit leur âge.

Aß1-6 est un auto antigène commun aux souris

transgéniques APP, les singes rhésus et les humains
45
La réduction de l'accumulation d'amyloïde ß après
immunothérapie avec CAD 106 est inversement lié au
niveau de Aß dans le cerveau

La plus forte diminution a été dans le noyau caudé-

putamen suivie par le thalamus, l'hippocampe et le
cortex cérébral

Diverses études de souris transgéniques APP ont

démontré l'augmentation des microhémorragies après
immunothérapie
46
Conclusion

47
CAD 106 induit des titres d'anticorps efficaces Aß chez les
animaux tout en évitant les effets secondaires

Les anticorps peuvent interférer avec l'accumulation d'amyloïde

dans le cerveau et protéger contre la toxicité Aß.

CAD 106 est actuellement testé chez des patients atteint la

maladie d’Alzheimer comme un agent potentiellement
modificateur de la maladie.

48
Ce vaccin peut provoquer des effets secondaires.

Vue que les cellules T peuvent induire un effet indésirables, ils

ont pensés à éliminer les régions qui interagissent avec ces
cellules.

Donc ils ont désignés un vaccin CAD106 compris entre 1-6 et

couplé a un virus like QB

Ce vaccin n’active pas les cellules T spécifiques

des AB, et induit des anticorps anti-AB qui
diminuent l’accumulation d’amyloîdes dans le
cerveau mais dépend du stade de l’accumulation
d’AB, ainsi que la région la plus atteinte par
l’accumulation.
49
Merci de votre
attention

50