Tech Micro Serologie

MANUEL TECHNIQUE
DE
MICROBIOLOGIE
ET
, SEROLOGIE
PAR
LE PROFESSEUR A. CALMETTE
S.-Directeur de I'Inslitul Pasteur,
L. NEGRE ET A. BOQUET
Chefs de Lahoraloire it !'Instilu t Pasteur.
DEUXIi::ME EDITION RIWUE
ET MISE A JOUR
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L'Ankylostomiase, maladie sociafe (anemie des mineurs). bio-
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tude des mycoses), pal' A. BOQuET et L. ~EGRE, 1 volume de
Iv-144 pages avec 3 planches hoI's texte (Paris, 1920).
TDus,droits',de repradu.ction.
de traductiolt et d' adaptation
:: reservts }Jour taus pays ::
COPyright 1026 by Masson_et C t,

,J>jll'js
PREFACE DE LA DEUXIEME EDITION
L' accueiL fait ci ce manuel en ayant epuise la premiere

edition im quelques semaines, nous avons dli. en composer
une nouvelle pour repondre au desir qui nous a eie
exprime. On trouvera dans celle-ci de ires nombreuses et
utiles additions qui, pour Ia plupart, nous ant ele sug-
ph'ies /)or nos £olleplJl!s de l'JnsJiil1i Pasteur ei par les
nombreux tmvailleurs fJ"am;ais ou etrangers qui fre-
quentent nos laboratoires.
Nalls souhaitons que, sous cefie forme essentiellement
pratique, notre petit livre continue ci eIre aussi favora-
blement appl'ecie et qu'en fa cilitant les 'recherches des
travailleurs de laboratoire il contriblle ci la diffusion des
methodes pastoriennes ainsi qu'aux progres des sciences
biologiques.
PROFESSEUR A. CALMETTE,
A. BOQUET, L. NEGRE.
(Institut Pasteur, janvier 1926.)
PREFACE DE LA PREMIERE EDI110N
Nous avons appris, par noire eXp'erience personnelle,

com bien les microbiologistes et les serologistes, surtout
quand ils sont livres a eux-meme~ et qu'ils ont la respon-
sabilite de diriger un laboratoire, eprouveni de difficul-
fes Ii trouver, au momerri OU ils en ont besoin, la'descrip-
tion de teUe methode de recherches, de tel pro cede techni~
que ou de tel disposilif d'experiences qu'ils se rappellent
imparfaitement. Les mieux dOlles et fes plus instrufts
savent bien qu'il est prudent de ne pas toujollrs s'en rap-
porter a leur memofre, sf fidele qu'elle puisse eire. II
peui donc leur eire commode d'avoir, sur leur table de
travail, un livre tel que celui que 110US leur offrons, qu'ils
pllissent feuilleter ou consulter a leur gre.
Ce (( Manuel» n'est ni un traite, ni lin Cours de
micl·obiologie. II n'a Ia pretention de rien enseigner. Il ne
s'adresse pas aux microbiologistes debutants, mais sell-
lement a ceux qui ont deja que/que habitude des' manipu-
lations de, [aboratoire.
NOllS ['avolls d'abord compose pour nOlls-memes, et si
nous nolZS decidons ,a le publier, c· est parce que plusieul's
de nos collegues et de nos eleves, auxquels nolZS avions
prele nos notes, ont fini pal' nOlls convaincre qu'il pOllr-
rail rendre service a beaucoup d'autres.
PROFESSEUR A. CALMETTE,
A. BOQUET, L. NEGJtE.
(Institut Pasteur, octobre 1924.)
MANUEL TECH:N"IQUE
Dil
MICROBIOLOGIE ET SEROLOGIE
PREMIERE PARTIE
TECHNIQUES GENERALES
DU LABOBi\TOIRE
CHAPITRE PREMIER
MICROSCOPE ET UL!RA-MICROSCOPE
Microscope.
Le microscope se compose d'un slali! et d'une partie
~~~. .
Pour ,un laboraloire de bacteriologie, Ie microscope doit
comprendre, sur 1e statif, une platine·mobile, avec ou sans
chariot, un condensateur Abbe avec diaphragme iris et un
miroir.
On fixe la preparation sur la platin~ du microscope a
I'aide des valets, Ceux-ci sont cOI1stitues pdt' deux petites
lames flexibles,implvntees'il angle droit BUrJlne lige rigide
qui s'enfonce dans un trou creuse dans la platine. Un
ressort 'a boudin, enroule autour de la tige et appuye sur
la platine, maintient chaque lanie flexible.
La platine mobile 'permet de centret exactement les prc-
10 TECHNIQUES GENERALES
paratio~s, mais elle n'a pas un deplaeement assez etendu

pour qu'on puisse examiner toute leur surface. Avec une
eertaine habitude, en saisissant la lame entre Ie pouce et
J'index de la main gauche, on peut, en otant les valets, la
deplacer a son gre .sur la platine.
Quand on veut faire des examens systematiques, on se
sert d'une platine a chariot. La preparation, fixee sur le·cha-
Fig. 1. - i\lnrche lies rflyons lumineux dans un microscope.
riot; peut ~tre promenee en tous sens, grace a un mouve-

ment antero-posterieur et a un mouvement lateral, comman-
des par deux vis.
Le condensateur Abbe, constitue par deux ou trois len-
tilles, re90it les rayons lumineux envoyes par Ie miroir
et augmente leur puissance en les condensant su~ In prepa-
ration.
Le diaphragme iris permet d'elargir ou de retrecir, :'\
MICROSCOPE ET ULTRA-MICROSCOPE 11
volonte, Ie diarpetre du cone eclairan't. II sert surtout dans

les examens a retat frais.
Le miroir a deux faces, .rune plane et l'autre concave.
La partie optique se compose des ob;ectifs et des ocu-
Zaires.
Les objectifs a sec sont employes pour les grossissements
moderes. Les constructeurs fran<;ais les designent par les
chiffres 0, 1, 2, 3, etc., jusqu'a 9, par ordre de grossisse-
ment croissant.
Pour les grossissements plus forts, on se sert des ob;ec-
tifs a immersion homogene qui ne peuvent 'Hre utilises
qu'en interposant, entre la preparation et l'objectif, un
liquide, rhuile de cedre, dont l'indice de refraction est
sensiblement egal a celui du verre de l'objectif. On
evite ainsi la perte des rayons lumineux qui se pioduit par
la refraction dans l'air.
Les objectifs a sec ou a immersion achIellement employes
sont dits achromatiques parce qu'ils sont construits pour
eviter la dispersion .d£;s, coulep.cs fondamentales du spectre.
La correction est encore plus com'piete avec les objectifs
dits apochromatiques, mais leur prix est tres eleve.
Les objectifs se fixent sur un revolver. Les revolvers a
trois objectifs sont tres suffisants dans la pratique cou-
rante.
On peut avoir deux objectifs a sec (un nO 4 et un nO 60u
7) et un objectif a immersion (1/12 ou 1/15).
Les oculaires de Huyghens sont numerotes en chiffres
romains de I a III. On les em ploie avec les objectifs achro-
matiques a sec. .
Les oculaires compensateurs sont fabriques specialement
pour corriger l'inegalite de grossissement pour les diffe-
rentes couleurs et ne conviennent theoriquement qu'aux,
objectifs a immersion (Langeron) .. Ces oculaires portent des
chiffres 2, 4, 6, 8, 12, qui indiquent leur grossissement,
propre. Ils sont capables de grossir autant de fois l"image
donnee p'ar l'objectif.
Les oculaires 4, 6 et 9 sont les plus employes.
Pour chaque objectif, la valeur du grossissement, avec
toute la serie des oculaires, calculee pour un ecartement des
deux' systemes de 160 millimetres, est indiquee par chaque
fabricant.
12 TECIlIYI9UES GENERAFES
Daqs }tjs PflYS a forte Juminosite, l'reil qui n'est .pas

occupe pendant l'observation au microscope monoculaire.
peut etre fatigue par la lumiere ambiante. Pour obvier a.cet
inconvebient, Ed. et Et. Sergent ont fait construire Pill'
Stiassnie un « cache-reil » qui se fixe sur l'extremite su-
perhmre du tube du microscope, -a la hautElUr de l'pcu-
Iaire, et qui protege l'un QU l'autre reil, it volonfe.
Mensllration des microbes. - Les dimensions des
ll}icr.obt:s so.nt !Jxp,rirp.ees en milliemes de millimetre ,par la
IeHre grecque v- (mu). -
~our: les mesurer. on se sert d'un o«ula1r.e mic~ometrique
et a'un mlcrometre objectif.
L'oculaire micrometrique porte. entre ~,es d~ux le'1tiUes,
un . verre, sur Iequel est gravee une echelle graduee Iln
dixiemes de millimetre.
Le.micrQmetre objectif est une lame de verre portant une
serie rectilig!1e de traits espaces q'un centieme de J1lilli-
mMre. -
. La mensuration se (ait de la fayon suivante :
On commence par placer Ie microm~tre objectif sur la
platine et'l'oculair.e micrometrig;ue ala place dl'l l'oculaire.
On fait tourner l'oculaire de fayon it rehdre ·p.aralleles les
deux echelles graduees et on superpose le~ deux zeros en
qeplaQant Ie micrometre objectif. Puis, en sui'\:ant des yeux
les deu'- echelles a partir du zero, on note les ~eu4 pre-
miers traits qui se confondent.
S~, par exemple, Ie trait 10 du micrometre oculaire tombe
sur Ie trait 4 de l'objectif micrometrique. 10 divis-ions ocu-
Iaires repr~sentent. sur la preparation, 4 fois 1/100, de milli-
m~tre ;,lli'1e division oculaire representera
o mm
10
04 : 0 mm. 004 =
4 v-
On enleve alors l'objectif micrometrique et on Ie remplace

p'ar la preparation porta'nt les microbes a mesurer.
Si la longueur d un microbe correspond a N divisions de
l'oculaire. sa longueur sera N X 4 fL.
Si N = 2, la longueur du microbe sera de 8' V-.
Reperage des )Joints interessants d'une prepara-
tion microscopique. - Si 1'0n ne dispose pas d'un mar....
queur a pointe de diamant, on peut reperer commode-

ment un point du champ d'un objectif a immersi_?n homo~
gene par Ie procede suivant 'de Edm. et Et. Sergent: Pla-
cer Ie point p. reperer au· centre du champ de l' objectif I!
immer.!)ion (oculaire faible). Remplacer I:objectif a immer-
sion par uil. objectif n° 4 Stiassnie. Mettre au point Abais-
ser Ie condensateur Abbe. Decouper dans du papier
gomme, qui entoure les timbres-poste, une minctdanguette
autour d'un des trous. Humecter la gomme et porter' oaUe
languette, gomme en dessus. a l'aide du doigt, sur la face
inferieure de la lame porte-objet, pendant que l'on observe
au microscope. Les trous !)u papier gomme ont a peu pres
Ies dimensions du champ de l'objectif nO 4 de Stiassnie,
avec un O'Cuiaire faible On peut ainsi guider avec Ie daigt
l'applicatioq, de Ia languette gommee sur la face infe--
rieure de la lame, de fa90n qU6 i'objet rep ere S6 trouve
bien au centre du cercle. ce que l'on vcrifie ensuite avec
l'ohjeCtif a immersion. Le papier hien cone ne se detache
pas.
•
Entretien du microscope - Le microscope demande
it etre entretenu avec beaucoup de soin.
II doit etre mis a l'abri des poussieres et de l'humidite en
Ie repla9ant, apres chaque examen, dans sa boite. On peut
aussi Ie recouvrir d'un linge ct Ie mettre sous une grande
cloche de verre.
Les objectifs a sec sont essuyes avec un papier de soie au
une peau' qe chamois.
Apres chaque examen, l'huile de cedre doit etre enlevee
de l'objectif a immersion avec un papier de soie ou un
linge fin Si l'huile s'est dessechee sur l'objectif, on nettoie
ce demier avec du papier fie soie ou un linge fin ifnbibe
legerement de xylol, puis on l'essuie avec du papier ou un
linge, sec. .
Le xylol ne doit pas etre mis en ex~es, car it pour.mit
di::;soudre Ie cimen! qui fixe Ies lentilles:' Po'ur la meme rl!i-
son,. ne pas laisser tremper l'objectif a immersion darts
l'huile de cedre deposee sur la preparlHion.
Les oculaires sont essuyes de temp~ en temps avec un
papier de soie ou un linge fin, sec. Si les grains de poussiere
persistent malgre un nettoyage exterieur, devisser les len·
tilles, nettoyer leurs faces interieures et les. rer.lettre en

place.
Le condensateur, Ie miroir, la platine, sont entretenus en
les essuyant, de temps en temps, avec un, tinge fin, sec ou
avec la p-eau de chamois.
Si de l'huile de cedre s'est repandue suda platine, frotter
celle-ci avec un papier imbibe de xylol, puis l'essuyer avec
du papier ou un linge s'ec.
II est bon de luhrefier de temps en temps les organes de
glissement avec un peu' d'huile de vaseline,
Ultra-microscope.
Le principe de l'ultra-microscope est base.~ur Ie pheno-
..mene de Tyndall: les poussier,es en suspensi,on dans l'ail'
d'une chaIhbre, qui sont en general invisibles, deviennent
visibles lorsque. les fenetres etant closes. un rayon de so-
leil filtre par une fente et vient se ref1~hir sur les grairls
de p!lussier~ qui s'illuminent.
Alors 'que, dans un microscope ordinai~,~ 11)s rayons
.lumineux penetr~nt directement dans l'appareU ftl'>ri!s avoir
traverse l'objet qui, ag,it: 'sur eux par absorption., ~traction
et diffraction, dans les appareils a fond noir ailellrt rayon
lumineux ne peJleire' dil'ecteme.nL daIis ie microscope, ils y
penetrent indireciement apres avoir ete refiechis, rer~ctes
ou diffractes par l'objet D (Langeron).
Comme let> grains de poussiere s'illuminent dans la ,Pt>ece
obscure,. les microbes, eclaires lateralement, apparalssent
lumineux sur un fond noir.
Tous les grands fabricants d'appareils optiques con§-
truisent des ultra-microscopes. Nous ne parlerons que
de celqi de Stiassnie, tres simple et tres repandu en
France.
L'examen it l'ultra-microscope necessite, en dehors de'
l'appareil lui-meme. un petit diaphragm'e coni que qui s'a-
dapte it l'objectifa immersion, et une source lumineuse spe-'
cia Ie (bee Auer, lampe it acetylene ou lampe electrique a,
verre depoli).
Ondoit, autant que possible, pratiquer les examens dans·
une piece obscure.
Pour opereI' un examen ultra-microscopique, on depose,
sur une lame' tres propre, une goutte d'eau con tenant les
microbes, et on la recouvre d'une lamelle. .
La prop rete des lam~s et des lamellcs, leur epaisseur
ainsi que celle- de la couche de liquide, sont autant de fae-
teurs qui ont leur importance.
Pour se servir de l'appareil, on doit retirer Ie conden-
Fig. 2. - Ultra-microscope de Stia.snie.
sateur Abbe du microscope et placer l'ultra-microscope

sur la platine du microscope en Ie fixant avec les valets.
On place Ie microscope a 25 centimetres environ du
foyer lumineux quand on interpose une lentille condensa-
trice entre la source de lumiere et Ie miroi'r, et a 15 ou
20 centimetres quand il n'y a pas de lentille. On de place
alors Ie miroir jusqu'a ce qu'on-ait obtenu Ie maximum d'in-
ten site lumineuse. "
Dans la cavite-superieure de la lentille de I'ultra-micros-
cope, on verse un peu d'huile de cedre. On pose sur I'ap-
pareil ~a lame qui a ete preparee et on la fixe l\vec les valets.
IG TECHNiQUES GENERALES
L 'huile de cedre de la cavite doit venir en "C~nlact avec Ia

partie inferieure de Ia lame. Avoir bien soin qu'aucune
bulle d'air ne reste entre Ia lame et l'huile de cedre de Ia
cavite.
Avant de proceder it l'examen, on centre Ia lentille de
l'ultra-microscope avec un objectif faible. On fait coincider
10 'cercle qui est au centre de l'appar~iI avec Ie centre du
champ
On peut alors deposer une goutte d'huile.de cedre sur la
lamelle et examiner avec l'objectif it immersion. ,-
CH4PITRE Il
STERILISATION. - FILTRATION.
Les instrumen ts, la verrerie, les milieux de cl)lture qui sop t

employes dans Ie:> recherches bacteriologiques doivent etre
parfaitemellt steriles. Tous les germ.es sont detrlJlts par une
temperature de 1150 -120 0 (chaleur humide) ; de 1800 (cha-
leur seche).
Les methodes de sterilisation par les agents physiques
peuvent etre rangees dans l'un des groupes suivants :
1" Chaleur seche ;
20 Chaleur bumide
30 Filtration.
1. - Sterilisation par la chaleur secbe.
A. Sterilisation dans La f/.amme, - Employee pour

les petits instruments en llerre ou en metal. On .se ~onte;nte
de les passer plusieur& fois dans la flamme d'un b.ec BUI}-
sen, d'une lampe a alco.ol ou d'nn bru!eur apetroLe. On l~s
laisse enspite refroidir, en eyitant qu'ils soient ~ouilles p.ar
Ie contact des objets voisins.
B. Sterilisation par Ie fOllr a fIamber. - Le four a

£lamber n'est utilise que pour steriliser la verrerie. Les
extremites des objets qui portent de rouate ou du papier
doivent etre tournees vers Ie haut. II faut eviter leur .contact
avec Ie fond au les parois de l'appareil qui sont toujours
b.eaucoup plus chauds. Eviter e.ussi que les bees brUlent.en
dedans. On en sera averti par ,une pe~ite explosi@fi ,qui t;e
produit au moment de l'allumage, par la hlancheur de la
flam me, par un bruit special et par l'oneur qui se repand.
Cbauffer jusqu'a 1800 • Eteindre une demi-heure tlpr~s
que cette temperature a eM attell1te.
MTCROBIOLOGIE 2
Laisser refroidir, puis ouvrir Ie four et attendre quelque

temps avant d'enlever les objets, pour eviter que la verre-
rie 'Se brise.
Le flambage a ete reussi si Ie coton et Ie papier ont pris
une teinte jaune clair. S'ils sont restes incolores, la tempe-
rature n'a pas ete suffisante. S'ils sont noircis, eUe a ete
trop elevee.
Le four Pasteur automatique de L. Marmier ne necessite
aucune surveillance. n fonctionne electriquement ~l la
temperature. choisie et pendant Ie temps voulu. L'air
chauffe sur des resistances est agite par un ventilateur, ce
qui permet une sterilisation uniformc de tous les objets
contenus dans l'appareil.
II. - Sterilisation par la chaleur humide.
A. Au-dessous de 100°. - Sterilisation par chauffage

discontinu ou tyndallisation. Employee pour les liquides
tels que Ie serum, l'ascite, etc., qui sont modifies par un
chauffage au-dessus de 60°. On les chauffe dans un bain-
marie regIe a 56-G8°, pend an tune heure, trois jours de
suite.
B. A 100 0 • _!_ La vapeur d' eau a 100° ne permet pas un~ ste-
rilisation complete en llne seule operation. II faut repeter Ie
chauffage trois jours de suite, chaque fois pendant 45 mi-
nutes a 1 heure, et meme une hem'e et demie pour les mi-
lieux epais '(bouillies de viande, de farine, empois d'ami-
don, etc.).
C. A 110 0 , 1150 , 120 0 par vapeur d'eau sous pret'-
sion dans l'autoclave de Chamberland. - Verser de
l'eau'dans la chaudiere. En pla~ant Ie couvercle, verifier si
Ie joint de caoutchouc 'est en place et ne pas trop serrerles
boulons, Allumer en observant les precautions indiquees
pour Ie four a flambeI'. Ne fermer Ie robinet de vapeur que
Iorsque la vapeur s'echappe en jet continuo A ce moment
seulement, l'appareil est entierement purge d'air. Lorsque
la sterilisation esl terminee (20 it 30 minutes de chauffage it
1150 ou a 120"), ne pas ouvrlr Ie robinet de vapeur et ne pas
desserrer les houlons avant que J'aiguillc duJmanometre
STERILISATION. - FILTRATION 19
soit revenue a 0'. Si on ouvre plus totl'autoclave, la brusque

decompression des liquides provoque, par leur ebullition,
la souillure et Ja. projection des cotons.
La temperature atteinte "dans la- sterilisation peut etre
controlee par l'emploi d'indicateurs. Ceux-ci, contenus
dans des petites ampbules scellees, sont places dans les
liquides a steriliseI'. Le soufre en poudre avec traces de
fuchsine fond a 1150 et se colore en rouge. L'antipyrine avec
trace de bIen de methylene fond vel'S 1200 et se colore en
bIen.
III. - Sterilisation par filtration sur bougies poreuses.
Les'bougies filtrantes, qui sont employees pour Ia sterili·

sation des eaux destinees a l'alimentation, servent, dans les
labnratoires de bacteriologie, a separer, des corps micro-
'biens, les toxines produites par la culture des microbes en
milieu liquide (toxine diphterique, toxine tetanique) ou it
steriliseI' les milieux de culture qui pourraient etre altcres
pa_r la chaleur.
Les bougies Chamberland sont de deux types: 10 les
grosses bougies marquees F ou B. Ces dernieres sont moins
permeables que les preceden tes. La marque F sert a filtrer les
cultures microbiennes pour en separer les toxines ; 2 0 les
bougies de tahoratoire S~IlS embase, numerotees LIt Ll his,
L2J L 3 , L 4 , L s, etc... Ls correspond, comme porosite, a
la grande bougie F ; L lo egale celle de B. Les bougies
marquees Ll et L2 sont les plus permeables. On peut s'en
servir pour la filtration des solutions diastasiferes telles
que les liquides de maceration de cultures d'Asper-
gilllls niger. Toutefois, il faut savoir qne beaucoup de
diastases sont partiellement retenues par la porcelaine
poreuse. surtout lorsqu'elles sont en solution acide.
II faut donc toujours neutraliser les liqtiides avant la filtra-
tion.
Les bougies, de Ll a L 3 , sont traversee~ par les microbes
dits virus filtrants.
La filtration peut s'operer par pression ou par aspira-
tion. Dans Ie premier cas, on se sert de la bougie Chamber-
land B ; dans Ie se~ofid de la bougie F.
D'autres filtres que les bougies Chamberland peuvent

etre utilises, telles que les bougies en terre d'infusoires (bou-
gies Berkefeld) et les hougies d'amiante qui sont tres per·
meables, mais offrent moins de securite paree qu'cUes pre.
sentent plus souvent des fissures.
Avant leur emploi, les bougies seront eprouvees avec
soin. Les immerger dans uue epl'ouvette l'emplie d'eau et y
insuffiel' de rail' au moyen d'une poire en caoutchouc. Si
,des buIles d'air,partant d'un meme point, s'echappent dans
l' eau, ]a bougie est fissur~e et doit etr() rejetee.
Dans la filtration, 1'emploi des tests microbiens permet-
tra de deceler la meme
c cause d'erreur. On em-
ploie genel'alement com-
me test Ie microbe du
Cholera des paules qui
est h'es petit et rap ide-
ment cultivable,
A La filtration ne doit
r=:Z:::::::3:r:::::::J pas .etre de trop longue
duree et la pr~ssiQn at-
teinte doit toujoul's etre
notee.
Appareil if filtra-
tion de R. Legroux.
- Cet appareil est cons-
titue par une tubulure
en bronze creusee de
deux canalisations dis-
D tinctes : L une AB (fig. 3)
Fig. 3. par Iaquelle on aspire
rail' des recipients au
moyen de l'appareil a vide, l'autre CD, d'ou se detache une
oranche E. L'orifice lateral E, en communication avec la
bougie, conduit Ie liquide filtre dans Ie recipient 'de re-
colte L'ol'ifice C re90it un tube de caoutchouc termine par
une effilure de verre. Un anneau de caoutcb.ouc en F permet
de fixer {'appareil sur tous les recipients en usage dans les
laboratoires,
A l'extremite superieu1'e d'un tube a thermGmetre I, long
STERILISATION. - FILTRATION 21
de 12 a 13 centimetres et enfonce jusqu'au fond J'une

petite bougie Chamberland L de 70 mm. de hauteur (ce
qui permet de {ilirer Ie liguide en ioialite), on ada pte un
bouchon de caoutchouc K perce, 'que ferm'e fa bougie.
L'extremite du tube de
verre est reliee par un
tube de caoutchouc it l'ori-
fice E de Ia tubulure de
bronze. Ce tube de caout-
chouc a vide doit etre assez
long pour que Ie recipient
con tenant Ie Iiquide a fil-
trer et Ie recipient de
recolte reposent sur un
meme plan, Le tube i de- D
passera Ie bouchon de quel-
ques centimetres. On fer-
mera l' orifice A par un
petit bourdonnet de coton
et on ligaturera au fil de
lin les raccords du tube de
caoutchouc (fig. 4).
L'appareil est facilement B
sterilisable a l'autoclave.
Pourassurerson etancheite
on paraffinera les joints. Fig. 4.
Appareil a vide, a chute d'eau (R. Legroux el M. Gory).

Sile liquide est peu abondant ou s'il filtre aisement, on pent
faire I'aspiration au moyen de Ia depression qu'entralne la
chute de l'eau d'un flacon de 5 a. 10 litres, a deux orifices.
L'orifice superieur est ferme par unbouchon de caoutchouc
traverse par un tube coude sur Iequel on ada pte un tube de
caoutchouc demi-vide, relie it l'autre extremite a l'appareil
a filtration. On ferme l'orifice inferieur avec un bouchon de
caoutchouc traverse par un tube de verre auquel on fixe tin
tube de caoutchouc demi-vide. On adapte & celui-ci une pi-
pette effiMe ouverte dont l'extremite plongera dans l'eau
d'un cristalliso ir.
On porte Ie flacon rempli d'eau a une certaine hauteur:
1 m. 50, 2 m. 50, on laisse couler l'eau par la pipette et
l'aspiration se produit. On I'arrete en pla!;ant une pince

sur Ie tuyan d'econlement. Lorsque Ie flacon est vide, on Ie
remplil en adaptant ie tuyau d'ecoulement a un robinet
d'ean en ayant soin de Iaisser ouvert Ie tube superieur.
Appareil de securite de R. Le[Jroux. - Lorsqu'on

filtre des Iiquides peu l1uides, on emploiela twmpe a eau, et
pour eviter les retonrs d'ean on interpose habitllellement
entre Ia trompe et J'appareii a filtration un flacon a deux
tubulures. L'appareil automatique de secllrite, de Legrou:r,
permet de mieux elJiler cel inconvenient. 11 est constitne par
deux tubes de "erre A et B (verre it
pipettes) traversant un bouehon de caout-
chouc E fixe a frottement dur sur un
gros tube de verre C (diametre 25 mm.,
hauteur 90 it 100 mm.) fig. 5).
Le tube A deborde de quelques milli-
metres Ie bonchon a I interieur du tube C.
Son extremitc superieure est reliee it la
trompe par un tube de caoutchouc demi-
E vide.
Le tuhe B descend un pen plus pro[on-
dement, 15 it 20 mm., dans ly tube C.
A son exlremite inferieure on adapte un
tuyan de gomme pure g, long de 60 a 70
mm., ferme it son extremite inferieure
n par un tube de verre plein D. Sa partie
superieure re!;oit un tube de caoutchouc
fixe it l'appareil it filtration.
Avant de l'adapter, on pratique, comme
il suit, dans Ie tube de gomme, un petit
orifice lineaire E: introduire un histouri
dans Ia Iumierc du tube; poser ceIui-ci a
plat sur une surface de bois lisse, du cote
ou se trouve Ie tranehant du bistouri et,
en appuyant legerement, faire une inc~sion
nette, de 2 a 3 mm. de longueur.
L'appareil en service doit toujollrs Nre
rempli d'eau jusqu'en n, pour empcchcr
la dessiecation dn tuhe de gomme.
Fig. 5. Lorsque 1a depression se fait dans
STERILISATION, - FILTRATION 23
l'appareil it filtration, et tant qu'elle est constante, Ie tube de

gomme reste cylindrique, l'orifice E demeure beant, l'air
s'echappe et la trompe l',aspire, Si l'aspiration par la trompe
eesse,l'eau reflue par Ie tube A. Immediatement, la pression
atmosph~rique aplatit Ie tube de gomme, les deux levres
de la fente E s 'aeeolent et toute communication entre l'eau
du tube C et l'appareil it filtration est supprimee. On evite
ainsi les retours d'eau. (M. Gory.)
Nettoyage, regeneration et sterilisation des bougies

Chamberland.
La calcination des bougies do it etre evitce, car elle pro-

voque la formation de sediments adherents, qui colorent
les bougies, les fendillent'Ct diminuent leur porosite.
II faut, aprcs usage, les tremper dans un recipient en
verre rempli d'eau chaude, additionnee de 1 it 2 p. 100 de
ehlorure de chaux en poudre.
Ce bain a pour effet de gonfIer et de ramollir Ie depOt
superficiel. On passe ensuite les bougies sous un filet
d'eau en les brossant avec une brosse en I:rin, puis on
les plonge dans un buin d'eau froide contenant 1.000 a
1.500 grammes Je chlornre de chaux pour 10 litres d'eau.
On les laisse ainsi immergces pendant 30 minutes. Le
chlore detruit les matieres organiques it l'interieur des
pores, Ensuite on rince de nouveau sous Ie robinet et on
plonge les bougies dans un autre bain d'eau froide contenant
1 000 a 1.500 grammes d'acide chlorhydrique dans 10 litres
d'eau. On les y,laisse pendant 30 minutes. Les sediments
exterieurs et Ie calcaire sonl ainsi solubilises. Il ne reste plus
qu'a rincer une derniere fois fortement sons Ie robinet at it
laisser tremper les bougies dans de l'eau distillee qu'on
change plusieurs fois jusqu'a ce qu'elle ne fournisse plus
aucune reaction acide au tournesol.
Si les bougies sont colorees, on peut les plonger dans
un bain concentre de bisulfite de soude avant Ie dernier
lavage. Lorsqu'elles sont bien propres, on les laisse secher
it l'air et on les conserve dans de larges flacons bouches it
l'emeri ou au liege.
On sterilise les bougies en les playant une a une dans un
24 TECHNIQUES GENERALJSS
grO$ tube a essai au fond duquel on a verse quelqu~s goutte&

d'EJau at qu'on bouche ~ l'ouate. Ort les porte albrS a I'auto-
elhEl et On chauffe it 116d pendant 20 minutM. ,Les'hcJUgiM
st~rileS peuVElht ensuiterester dans letubequi les l'enfel'me;
jusqu'au moment oil. ron doit Ies emplOyer.
CHAPITRE III
180LEMENT ET. PURIFICATION DES MICRO)3ES _

CONSERVATION DES SOUCHES MIGROBIENNES
A. lsolement a l'aide de milieux solides. - Sepa-

ration par dilution et ensemencement ~n Plaques
de{Jelatiil~ou de gelose. - Lorsqu'on se propose d'iso-
ler les germes d'une culture en milieu Iiquide, d'abondance
mOj'enhe, ou d'un pus aSSez riche en microbes, on preleve
une nnse d'environ un millimetre de diametre de Ces
produits at on la dilue dans lO.ccntimetres cubes d'eau phy.
t;iologique. Apres agitation j porter une gouUe de cette dilll-
;tmt;1,. .» J'.!lj.dt' .d '.!.1.t;1e p.ipNJe .P.»...".f.N.'T, ibms .!..')) J.t_,Pe .de geJatioe
fondue. Bien melanger en inclinant, puis en redresgltnt brus-
quement Ie tube et en Ie roulant rapidernent entre les deux
mains. Faire un prelevement dans ce premier tube de
gelatine avec une nouvelle pipette et porter troit; gouttes
dl1ns un second tube. Apres bra~snge, prendre llvec une
Qutre pipette quelques gouttes dans ce dernier tube at en
deposer six dans un troisieme tube da gelntine.
Chncun des tubes de gelntine est alors coule dans une
hoHe de Petri sterile. Pour cola, enlever Ie coton du tube
a assaij et flamber rapidement I'orifice, soulever· Ie cou~
verele de la bolte et y verser la gelatine en aynn\ soin de
la repartir sur toute la surface. Poser ensuite les bo!tes
horizontaletnent sur nne table froide, puis, quand Ia gela-
tine a fait prise, les porter a l'etuve a 220.
All lieu de gelatine, on peut~e servir de gelose. 11 est
alors necessaire de maintenir les tubes, qui contiElnnent In
gelose fondue, a une temperature de 40°, pour evit{\r q-q'elle
ne fasse prise avant la coulee dnns les boites .qe Petri.
Cdles-ci seront placees al'etuve a37° apres avoir tt-e retour-
nees. afin que l'eau de condensation ne souille les cultures.
Lorsqu' on veut proceder a la separation de microbes qui
ont pousse sur milieu <;olide, il faut emulsionner la culture
dans del'eausterilisee, puis on procede com me precedem-
ment.
B Separation par epuisement sur milieux solides

(gelose, serum). - Pro cede de Roux et Yersin. - La
semence est etalee a la surface de 3 ou 4 tubes de g~lose
inclines ou de serum" a l'aide d'un fil de platine ou d'une
spatule, sans les recharger. Eviter de touch~r l'eau de
condensation, La semence s'epuise peu a peu et, dans les
derniers tubes ensemences, Ie nombre des colonies est peu
eleve. CeUe methode est tres pratique dans Ie cas OU la se-
mence n'est pas tres riche en germes ou lorsqu'on se sert
d'un milieu electif, comme Ie serum pour Ie bacille diphte-
rique.
Au lieu de tubes de gelose ou de serum inclines, la sepa-
ration par epuisement peut etre faite en tubes a faces plates
de Legroux ou en boites de Roux remplis des memes
milieux prealablement ,coagules. L'ensemencement doit
alors etre fait avec une pipette coudee qu'on essuiera sur
Ie milieu sur toute sa longueur, ou avec un petit :couleau qui
sera prepare de la fa<;on suiyante :
On plie par Ie milieu, it angle aigu, un fil d'alumin\ulll,
,de fer ou de cuivre, deJO a 15 centimetres de long et de
2 millimetres de diametre environ ; on fait en suite un
conde a 10 ou 15 millimetres de chacune des extremit¢s et
on introduit ,un tube de verre de 2 centimetres de long sur
5 millimetres de diametre (tubes dont on fait les pipettes
Pasteur) a extremites mousses, entre les branches pliees.
Le tube ron)e doucement sur la surface de la gelatine sans
l' egratigner.
Pro cede de Veillon. -Epuiser successivement la semence
dans l'eau de condensation de plusienrs tubes de gelose ou
de serum. Incliner erisuite ces tubes pour que l'eau de con-
densation vienDe les ensemencer.
{ ......
-f"'" C. lsolement par ensemencementsur milieux elec-
tifs, - Exemple : Ensemencementsurserum coagule pourle
,/ .
ISOLEMENT ET PURIFICATION DES 'MICROBES 27
bacille diphterique, sur milieu de Dieudonne pour Ie vibrion

cholerique.
D. lsolement par divers mogens. - Chauffage a

900 , 100 0 • Seuls les microbes sporules resistent.
Inoculation a un animal sensible (Exemple : souris pour
Ie pneumocoque, cobaye pour Ie bacille tubercuIeux).
E. lsolement des anaerobies (voir chapitre XXXIX). -

Le procede Ie plus employe, f: cause de sa simplicite, est
ceIui de Veillon.
II faut se servir de tubes a essai de grande taiUe : 22 cen-
timMres de long sur 15 millimetres de diametre. Ils sont
remplis, sur une hauteur de 10 centimetres environ, avec
une gelose transparente, a 1 ou 2 p. 100, a laquelle on ajoute
1,5 p. 100 de glucose. On fait fondre une dizaine de tubes
en les pIa<;ant dans de l'eau qu'on porte a l'ebullition pendant
10 minutes ~de favon a bien chasser l'air). Ils sont ensuite
refroidis au bain-marie a 40 0 •
A l'aide d'une pipette sterilisee, verser une goutte de
semence dans un premier tube; a.pn!s avoir agite, prelever
avec une nouvelle pipette une goutte de gelose ensemencee
qu'on porte dans un second tube, et ainsi de suite jusqu 'a la_
fin de Ia serie.
On peut aussi, avec un fil de platine ou avec une pipette
effilee. non ouverte; toucher la 'semence et les laver succes~
sivement dans les tubes sans les recharger.
Lorsque l'ensemencement est termine, les tubes sont
plonges dans l'eau froide, puis portes a l'etuve a 37°.
Les tubes de cul~ure sont' examines tous les jours pen-
dant un temps prolonge, certains anaerobies ne poussant
qu'au bout de 8 a 10 jours.
Les colonies d'anaerobies s'arretent a 1 centimetre de la
surface, car'la partie superieure de la gelose a dissous de
l'airopendant.le refroidissement.
Si Ie pus ensemence contient des anaerobies facriltatifs
ou des aerobics stricts, on peut trouver. des colonies dans la
zoneaeree.
On preleve les colonies au moyen d'une pipette effilee ct
sterilisee qui joue Ie role d'emporte-piece. Pour les rep i-
quer, il suffit de soumer la colonie, qui a ete ainsiemportee,
28 TECHNIQUES GBNF;RALES
dans un tube de gelose glucosee. Le prelevement est plus

facile quand on adapte a la partie superieure de la pipette
un tube de caoutchouc souple de 0 m. 40 de longueur, dont
l'extremite libre, munie d'un embout, est re9ue dans la
bouche.
Lorsque Ie produit a ensemencer contient des formes
sporulees, on peut, comme les aerobies, les separer au
moyen de la chaleur.
L'inoculation aux animaux sensibles (cobayes) s'emploie
specialement pour l'isolement du bacille tetanique.
F. Purification des colonies isoU:es. - II est rare

qu'a la premiere separation une colonie isolee soit pure.
Les 'microbes d'impurete sont gen,eralement masques par
Ie developpement rapide du microbe principal. Dans les
repiquages ulterieurs, quand les tubes sont conserves un
certain temps. ces microbes peuvent prendre Ie dessus. II
est donc prudent de faire, a deux ou trois reprises, de
nouvelles separations par epuisement sur tubes de gelose
inclinee, ou par dilution et ensemencement sur plaques de
gelose.
Pour les anaerobies, faire une nouvelle sep~ration en
tubes de gelose glucosee, comme il a ete indique.
I
G. Conservation des souches microbiennes!
Conservation des cultures vivantes.
Les cultures de microbes conservent generalement assez
longtemps leurvitalite et leur virulence lorsqu'on les main-
tient a l'obscurite. a basse temperature et en tubes scelles,
a l'abri de l'air. Toutefois les conditions de conservation
sont tres variables suivant les especes, Certaines cultures en
milieux liquides doivent etre maintenues en tubes effiles et
scelles a une temperature inferieure a 0°, ou mieux it 7°, et
continue, obtenue par exemple au moyen de la machine
Audiffl'en-SingriiJ1, ,tres commode pour les laboratoires
qui disposent de force electrique, D'autres s'accommodent
mieux de reensemencements plus ou moins frequents par
simple piqure dans des tubes droits de gelose peptone on de
gelose glucosee ; d'antres encore ne se conserventbien que
dans Ie sang au dans les liquides albumineux. additionnes
au non de carbonate de chaux sterile.
CONSERVATION DES SOUCHES MICROBIlN:!NES 29
La formule suivante a ete recommandee.:

Serum formole.
Ajouter a 500 centimetres cubes de serum de ch Nal un
centimetre cube de formol du commerce, melanger.
quelques instants de contact, ajouter un centimetre be
d'ammoniaque (l! 22 0 Baume) pour neutraliser la form -
dehyde. Etendre de deux parties d'eau distillee et sterilise
quinze minutes a 1100 (Legroux).
PROCEDE n'UNGERMANN. - Ungermann conserve les mi-
crobes fragiles dans du serum de lapin pur ou dilue,
cliauffe nne demi-heure a 60°, recouvert d'une couche
d'huile de paraffine.
PR()CEDlfDE TRUCHE. - Truche a combine Ie procede de
Legroux et celui d'Ungermann.
Sa technique est la suivante: On repartit dans des tubes
l! essai ordinaires, steriles, 8 centimMres cubes environ de
serum formole ; on recouvre avec 2 a 3 centimetres cubes
d'huile de vaseline sterilisee a 1200 pp.ndant une demi-
heure. Touies les manipulations doivent etre faites sterile-
ment. On a ainsi une provision de tubes qui sont prets it
recevoir les divers germes qu'on veut garder.
Pour conserver un microbe, on l'ensemence sur un tube
de gelose inclinee (g6loseau sang ou.gelose-serum, si besoin
est). Apres 24 heures d'etuve, on preleve it la pipette ste-
rlle 2 centimetres cubes environ de serum formole qu'on
etalea la surface de la gelose ensemenc~e. On agite avec l'ex-
tremile de Ja pipette pour detacher Ie plus 'possible la couche
niicrobienne, et lorsque ~a surface du milieu solide parait
bien nette, on re~ueille toutle liquide charge de corps micro~
biens. On Ie porte ensuite dans Ie tube Oil on Jl puise Ie
serum neu£.
On garde les tubes, soit it la glaciere, soit a la cave, soit A
l'etUye., suivant les germes. II se forme au bout de quelques
fours un petit depot microbien au fond du tube.
PROCEDE DE THA¥sEN. - Pour couseryer les souches de
microbes asporogetles, Thaysen recommande d'addilion-
ner les cultures de atrbonate de calcium precipite, .ou de
biphosphate de calcium.. I
Le milieu de culture, distribue dans des tubes a essai,
sterilise el ense_menc.ej est .abandoDue a l'etuve pendant 24-
48 heures. Lorsque Ie developpement est assez vigouretl'X,
on introduit dans les tubes 0 gr. 2 environ de craie ou

de phosphate de calcium sterilises: on melange bien et on
scellea la flamme.
Conservation des champignons.
Pour les moisissures du groupe des Ascomycetes (Peni-
cillium, Aspergillus) il fant prendre soin de dessecher Ie
milieu de culture, apres la sporulation, sous une cloche a
acide sUlfurique, et de conserver les spores dans des tubes
hien sees, simplement bouches a rouate et non sceIles, pour
que I'air y penetre librement. Les spores restent ainsi
vivantes et peuvent germer apres plus d'un an.
Les Alucorincs se conservent mieus, au contraire, dans
des tubes de bouillon sucre alp. 100, sous une couche
d'huile de vaseline sterile. L'anaerobiose favorise la forma-
tion des chlamydospores qui sont tres resistantes et qui.
reensemencees apres plusieurs annees, sont capables de se
developper (Pinoy).
Milieu de culture pOllr consel'lJer les semellces de leIJures.
Maltopeptone dn commerce. 10 gr.
Saccharose. . . . . . . 20 gr.
Ean . . • • . . . . . 1. 000, cc.
A dMaut de maltopeptone I, on peut employer une

decoction de touraillons (radicelles d'orge germce. rcsidn
des malteries).
On fait houiIIir, pendant 15 minutes, 50 grammes de tou-
raillons dans un litre d'eau, on ujoQte sa('charose (ou glu-
cose) et on filtre.
COllscl'lJution et fixation des cultllre.~ mortes.
Pour fixer et conserver les cultures de demonstration, il
est recommande de se servir de tube!$ larges, de 16 milIi-
metres par exemple, et de milieux aussl sees et transparents
'que possible. On introduit, entre Ie bQuchon d'ouate et Ie
velTe, une languette de papiel' Imvard impregnee de formol
commercial pur et on coule de Ia paraffine fondue sur Ie
bouchon d'ouate, puis on obture Ie tubr avec un cupuchon
de caoutchouc paraffine ou avec un capuchon de cellulose.
On peut encore placer quelques fragments de trioxyme-
1. La maltopeptone est un extrait aqueux de tOllraillons, concentre SOllS pression

reduite. EUe est livree dans Ie commerce sous la forn1e <l'une poudre ou d'un e:stl'uit
sirupeux•
CONSERVATION DES SOUCHES MICROBIENNES 31
thylfme entre deux bouchons d'ouate et couler de la

paraffine sur Ie bouchon exterieur.
Les cultures doivent etre gardees dans une armoire, a
l'abri de la Inmiere. .
Pour fixer les cultures de moisissures aux divers stades
de leur 'developpement, on peut commodement employer Ie
liquide cOllservaleur de Pilloy :
Alcool :\ 800 . 300 cc.
Acide acetique • • . . . 20 gr.
Sublime. . . . . . . . 10 gr.
el monler des preparations (qn'on hordet'n:'t In paraffine)

dans Ie liquide suivant (Pinoy)
Hydrate de chloral. . . . . . 40 gr.
Glycerine . . . . . • . . . 20 gr.
Eau. . . . . . . . . . . 20 gr.
Sol. alco.olique d'acetate de plomb a 2 p. 100 : 10 cc, (Sltrer).
CeUe solution rend de grands services, surtout dans les

pays chauds, parce qll'elle ne s'evapore pas. L'acetate de
plomb diminue la trop grande transparence de I'hydrate de
chloral el a la propriete de conserver beaucoup de pig-
ments.
H. Expedition postale des cultures et matU:res

virulentes. - Les dispositions a prendre pour ces enyois
ont ete fixees en France par nne instruction du Ministere
de l'Intt~rieul' du 2 fevriel' 1912. En voici les prescriptions
essentielles :
10 Lei; cultures, matieres ou liquides virulents doivent
etre enfermes dans des tubes au flacon;; de verre epais, for-
tement bouches et cachetes a la eire.
2° Ces tubes ou flacons seront introduits dans une hoite
en . metal solide, apres avoir ete entoul'es d'ane cOllche
d'ouate sufIisamment cpaisse.
3~ La bolle metallique sera eUe-meme placee dans une
seconde boite en bois parfaitement close.
4 0 Chaque envoi devra porter d'une maniere tres appa-
rente, du cote de l'adresse, la men'tion ; Malieres desti/lees u
Ill! examen haclel'iologiqllc.
CHAPITRE IV
ALCALINISATION ET MESURE DE LA REACTION

DES MILIEUX DE CULTURE
A. - PROCEDE AU PAPIER DE TOURNESOL
Les bouillons prepares avec des peptones commercjales,

et surtout avec 1a peptone Martin, ont generale.rnent untl
reaction acide qui convient mal a Ia culture des bacMries.
Pour les amener ala neutralite au tournesol, on ajoute pen
a pen de petites quan'tites de, s01utio,n ,nqrmale ,de soude
(:).40 pDur 1.000), en melangeant intimement, par agitation
de la masse, avec nne baguette de verre. Apn!s chaque
addition de soude, on preleve une goutte de bouillon qu'on
porte sur duo papier de tournesol bleu et sur du papier de
tournesol rouge. La teinte lilas correspond a la neutralite.
Comme un grand nbmbre de bacteries se multiplient plus
activemcnt en milieu alcalin qu'en milieu acide, on ajoute,
a partir du point neutre,5 centimetres cuhes de solqtion
normale de soude par litre de bouillon.
B. - PROCEDE A LA PHENOLPHTALEINE
Ce procede n'est applicable qu'a des liquides froids. Ver-

ser 10 centimetres cubes de bou'i110n a alcaliniser dans )me
fiole de Fourneau. Ajouter un volume suffisant d'ea:q dis-
tillee pour que I.e liqujde apparaisse faiblement colore en
jaune: puis quelques gouttes de solution a 2 pour 100 de
phtaleine du phenol dans l'alcool et agiter. Neutraliser en
laissant tomber goutte it goutte de la solution deciPQrmale
de soude contenue dans une burette graduee, en melangeant
ires intimement, jusqu'a c,e qu'une faible teinte ropg!! orange
apparaisse. A ce moment, on note Ie volume de solutiop
sodique employe et on en ajoute deux nouvelles gouttes ql}.i
accentuent Ie virage. Pour neutraliser un litre de bouillon,
il suffira d'y ajouter une quantite de soude cent fois plus
grande que 1a quantite employee dans Ie precedent titrage.
ALCALINISAl'ION DES MILIEUX DE CULTURE 33
C.-METHODES ELEOTROMETRIQUE ET OOLORIMETRIQUE

POUR LA DETERMINATION DES CONOENTRATIONS
IONiQUES DES MILIEUX
Les methodes au tournesol et a la phenolphtaleine ont

l'inconvenient de ne pas indiquer l'acidite ou l'alcalinite
vraie. Elles sont actuellement remplacees, dans les Iabora.-
toires, par les methodes electrometrique et colorimetrique
qui permettent de mesurer exactement la concentration en
ionos H + et OH - libres des solutions.
Dans une solution aqueuse d'acide (chlorhydrique par
exemple), il existe a la fois des ions H + et Cl- libres, et
une fraction non dissociee de la molecule HCI d'acide. Le
rapport entre Ie produit des ions libres et la fraction non
dissociee exprimeen molecules-grammes. est constant pour
une temperature donnee H + ~l Cl- = K. Cette COllstanie de
dissociation est caracteristique de chaque acide. De meme
pour les'ions OH- des bases.
On choisit comme unite de concentration en ions H, la
solution normale d'un acide qui renferme, par litre,
1 gramme d'hydrogene susceptible de se combiner avec une
quantite equivalp,nte d'ions OR- o.
L'eau pure est neutre et renferme, a la temperature ordi-
naire, environ 1 X 10- 7 atomes-grammes d'ions H + et
1 X 10-7 molecules-grammes d'ions OH-. Le nombre de
molecules d'eau _non diss6ciees elant constant, Ie produi.t
ionique devi-ent Ko = H+ X OH-, soit 1 XJO-14.
Toute solution, quelle que soit son acidite ou son alcali-
nite, renferme nne certaine teneur en ions H + dont Ia
concentration sert de mesure dans les deux cas.
Pour eviter l'emploi de nQmbres trop infimes, Sorensen les
a remplaces par Ie logarithme du nombre inverse ,designe
par Ie symbole pH. La concentration des ions H + par litre
dans l'eau pure elant de 1 X 10-7 OU 10.0~O.UUU' l'inverse
de 10.000.000 a pour logarithme 7, pH = 7.
Une solution N d'acide completement ionisee a nne conl.
centration ep ions H+ de) X 1, pH"= O.
U ne solution ~ d'acide a une concentration en ions H de
1 X 10-1 pH = 1.
MICRODIOLOGIE 3
TECHNiQUES G~1vER.AtES
Vne solution l~O d'acide a une concentration en ions H

oe 1 X 10-2 pH =: 2.
Vne solution l.~OO d'acide a une coricenlrll.Hon eti i'tlns H
de 1 X 10-3~pH = 3.
Vile s'oIution N tl'alCali 'compI~ieln'ent iclnisee uurait urie
conceiitrillid1\ en ions k+ tie i X 10-14 pH = 14.
Diie solution ~ d;aleaii aura une coD.'centratioh en i'ohs
a+ de i X 10-13 pH = 13. ; .
Pour transformer en pH nne concentration H + de
{l X W-P, 0,0, additionnera Ie logar!thme nit - p. ~x.2 X i(j~7;
l'og, 2 = 0,3, on aura 0,3 + (-7) = - 6,7 pH = 6,7.
DETERMINATiON DE LA CONCENTRATION EN iONS H+
Deux m61hooes peuvent eire utilisees pour determiner

'c'Ctte
2dnceb.'tration: }(I. ine~hdd'e ~l~ctt'on\~tri(}'ti'e '~ fa
methode colorimetrique imagitte-e par Sorensen.
M'ethode ettlctrom,etTtqu'e.
Ln il1eth~d~ electtometriqU'e est ta }:lIu'l\ 'e"lftte, mais

11 est ificontesta:ble q'Il~elte est d'a~plicatiofi ~l't'ls -deircate
que fa rn-etb<fde c()lotim~frique. Elle 'exige 'tin a')Jpren\\ssage
t1i~riq\te e't ptatique pluS'lo'ng, Me'es~ire un '3p'psreii'tage
telativentent coMellX et n\!st pas toujOI1'rs ais-emenbp\,lt-
tic'trb1e. TOlltef6i!> 'etle don'rte nux meS'O.Tes tL't'l'e ~ec'Uri'l'e et
'une 'conMince auxqueUel:! lfe S'::tur!lit prer~mi'rl:l1a mellrmte
colorimetriq'Ue poiSque l'ex~ritU'de de c'eUe-ci 1d~J1e'tl9 'de
l'aP'Preciafion 'd~s tei'tlfes pll'r l'ope'1'atl!ttt.
Dans Men des 'ca!>, il est indli'spelYSaMe 'd1aV'Oir I"e~onts
a ~'a rrtetlldde'etectronre'triq'lie, par exemp'le 'paur preparE1r
des sQtt'Ltigns'-types de pH co'nnu, conk&Ier ~es resultals
obtenus it l'"aide des i'lldicate?-rs et, surtout, aJu'sieT'a uil pH
c}onne les m,ilieux mem'e troubles ou tres cC?Iores ('industries
Je fermentation, preparation industrielle des peptone!; ott
des diastases, etc ... ). On aura egalement interet it lui
'i!ciiirier la 'preference pour I'aJustage de 1a reaction des
grandes quantites de milieux destines it 'la ·pr~ara>tion des
ALCALINISArlON DES MILIEUX DE CULTURE 311
toxines microbienrtes, generalernent tres sensibles aux

variations du pH.
La determination de la con~ehtration en ions H par la
methode ~Iectrometrique consiste a mesurer la force elec-
trornotrice d'une pile constituee, Ie plus Sou vent, par
l'en1iemble d'uhe electrode it hydrogene (lame de pla-
tine, recouverte d'une couche de noir de platine sature
d'hydrogene, plongee dans la solution dont on veut me~
surer Ie pH), d'un electrolyte de liaison (solution de
KCI) et d'une electrode-etalon au calomel. L'electrode it
hydrogene est Ie pole negatif de la pile, l'electrode au
calomel Ie pole positif ; la difference de potentiel qui existe
entre eux est mesuree par la methode de compensation de
Poggendorf dans laqueUe la force electromotrice inconnue
de la pile est opposee it une farce electromotrice exacte-
ment connue. Un dispositif forme de rht\ostats it curseur,
d'un millivoltmetre, d'un galvanometre et d'un interrupteur
(clef de Morse)permet de faire varier et de mesurer la force
electromotrice d'opposition fournie par un accumulateur,
jusqu'it ce qu'eUe compense exactement la force electro,mo-
trice du systeme lame de platine platinee et hydrogenee
+ solution it analyser +
electrolyte de liaison elec- +
trode Itu calomel. Ce dispositif constitue ce qu'on nomme
un pofentiom~tte; ort peut Ie monter tres simplement,
qu.and (1n a sous la main l~s elements necessaires et nne
certaine pratiqtre des lDesl1res electriques, ou· bren se
procurer un des modeles qui ont ete construits specia-
let'nent.
L'un d'eux, tres simpHfie, a ete etabli, a l'intention des
laborntoires de bacteriologie et des industries biochi-
l'niqnes, par M. A. Arnomt, sur les donnees de M. Albert
Bel'thelot. 11 nollS parait utile de' Ie decrire sommaire-
ment, d'l1pres cet auteur 1, parce qu'il repond plus parti-
culierem~nt aux besoins des microbiologistes, notaml'nent
en Ce qui concetne I'ajustage des mi'lieux.
« Ce potehtiometre est contenu dans une boile, en bois
vetbi, l'n'Unie de \ris calantes. Le couvercle amovible abrite
1, Bulletin. d. la SocUtl! de Chl",l. biologique, nO 7, jUillet 1924, p. 683. Sur I~s

nvantages -duo contr6le electrontetrique de In reaction du milieu, voir du mems
nUteur : Reput .cfentlfique, ~1' mars 1922.
36 TECHNlfJOES GENJ5RALES
une tablette d'ebonite sur laquelle sont disposees cinq

+
bornes (fig. 6). Deux d'entre elles. marquees 2v - , doivent
etre reliees aux deux poles d'un accumulateur de 2 volts;
deux autres +E - sont mises respectivement en commu-
nication avec l'electrode au calomel (+) et l'electrode a H
(-). U ne borne interruptrice. montee sur une piece. de
laiton rectangulaire, permet de ne pas laisser l'accumula-
teur en circuit quand les mesures sont effectuees. Au
rr-'- Resistance
2V (8ccumu/atBiJr)
.-....O-:::c::::::==-~_ _ _ _-t
Borne 6 f'6Ul'ir
electrode hydrogene
Fig. 6.
centre de la platine d'ebonite est piace Ie cadran d'un

millivoltmeire aperiodique de precision, avec miroir sous
l'aiguille pour eviter les erreurs de parallaxe.- Sur un des
cOtes se trouvent deux curseurs dont l'un est dispose de
maniere a servir de vernier a l'autre. A l'une des e:lftremi-
t~s de l'appareil, est encastre un galvanoscope tr~s sensible
dont l'aiguille oscille entre deux fleches qui indiquent,
suivant Ie sens des deviatjons, comment on doit deplacer
les curseurs pour faire Ie zero. Un bouton interrupteur,
qui est en serie avec Ie galvanoscope" est place a gauche
de celui-ci. Un niveau a bulle d'air et un dispositif de
reglage permettent, avec les vis calantes placees sous l'ap-
pareil, de rendre celui-ci bien horizontal et de placer
convenablement l'aiguille du g·alvanoscope. Deux bornes,
reliees par une petite barrette de cuiv.re amovihle, donnent
la possibilite de substituer au galvanoscope un instrument
de zero plus sensible. d'une resistance ohmique plus
grande et presentant moins d'inertie.
« La graduation du Jllillivoltmetre est hahituellement de
1 volt diyise en 100; les divisions de 10 millivolts per-
ruettent la lecture facile a cinq millivolts et l'appreciation)
.tLCALINISATION DES MILIEUX DE CULTURE 37
aisee, a la loupe, de 2 millivolts. Ce meme millivoltmetre,

pourvu d'une table d'etalonnage, presente l'avantage d'etre
a une seule sensihilite; pendant toute la duree des mesures,
il indique constamment lao valeur de la forc:e electro-
motrice. L'appareil est d'un tres faible encombrement;
quand il ne sert pas, tous ses organes sont parfaitement a
l'abri dans une boite hermetiquement close. .
ee Le millivoltmetre est place en derivation sur les resis-
tances it curseur qui permettent de faire varier la force
electromotrice entre Ies bornes E reliees aux electrodes.
Le bouton interrupteur et Ie galvanoscope - ou eventuel-
lement un galvanometre a miroir - sont places en serie
sur une des bornes E; par Ie jeu des curseurs, on arrive
r~pidemeni it faire equilibre a la difference de potentiel
qui existe entre les electrodes, et a obtenir que l"aiguille o'u
Ie miroir du galvanometre reste immobile quand on appuie
un court instant sur Ie bouton interrupteur A ce moment,
iI suffit de lire la force electromotrice indiqu~e par Ie milli-
voltmeire; c'est celIe qu'on desirait mesurer.
« .Employe avec les electrodes a hydrogene de W-.-M.
CLARK, de BUNKER, de HILPEBRAND, de SORENSEN, de
WALPOLE, etc ... , ou avec I'electrode a quinhydrone, il
permet de determiner Ia concentration en ions H tres
facilement et avec un degre de precision parfaitement suf-
fisant pour les applications en vue desquelles il a ete cons-
truit. A l'aide de l'electrode a hydrogene de HILDEBRAND,
qui permet l'emploi d'un agitatenr mecanique vertical et
l'usage de burettes, on peut tres aisement ajuster a un pH
donne la reaction des milieux, etablir des courbes de satu-
ration, apprecier I'effet tampon de certains composes,
preparer des liqueurs titrees acides ou alcalines, deter-
miner avec precision Ie point final des titrages acidime-
triques ou alcalimetriques en solutions troubles ou colorees,
et titrer les acidites ou les alcalinites apparentes et reelles
des produits naturels complexes.
(i Le potentiometre simplifie permet egalement d'assurer
la formation ou ·Ia redissolution de precipites dans des

conditions de concentration en ions H determinees, d'ap-
precier la reaction des sols et de determiner l'action satu-
rante de certains engrais ou amendements. Enfin, avec des
electrodes appropriees, on peut l'employer pour effectuer
les me!iures de potentiels d'oxydation au de reduction qui

ant tant d'applications analytiques.
« Ainsi que I'ont recommande divers auteurs,_ notamment
M. W.-M. CLARK, at comme A. Berthelot I'a lllontre :;tvec
un exemple a l'appui, il faut n'employer que des appareils
bien adaptes au but que I'on poursuit, et c'est peut.etre
pour avail' voulu etre trop precis dans des applications.
qui ne Ie comportaient pas, que certains experhnentateqrs
se sont prives des grands services que la methode electro~
metrique peut rendre dans I'industrie et dans les labora.-
toires bacteriologiques ou agronomiques.
« Ainsi que A. Berthelot l'a fait remarquer, ce potentia.'
metre n'a pas ete etabli ell vue des mesl.\res tres pn~cises
que necessitent les recherches des physico.chi.mistes et
certains CflS partieuliers des recherches hiol()gique!i. mais
il suffit amplement pour les usages courants, surtout glland
on l'am~/iore en rempiac:anl Ie galvanoscope par un galva ..
nometre srnsible. a cadre asse,;; rcsistqnt avec lecture pal'
lunette ou spot lllminel1x. Les determinations sont plus
rllpides et plus !Hires, en raison de Ia. precision avec
laqueUe on fixe l~ ze~Q, c'~st-a-dire Ie pQint OU les deu~
forces electromotrices se compensent exactement. On peut
aussi, quand on doit travailler seulement avec dd cQn..
centrations en ions H assez grandes, faire reduire la portee
de l'echelle du millivoltmetre de maniere a diminuer la
valeur des divisions. I)
Pour les travaux de haute precision on pourra se servir
d'instruments plus sensibles permettant de faire des mc~
sures it un vingtieme de millivolt pres et meme moins,
tel que Ie grand potentiometre de Chauvin et Arnoux em·
ploye avec un galvanometre sensible a miroir, a cadre de
plus de 500 ohms.
Dans Ia pratique des mcsures eIectrometriques, Ie choix
des accessoires est au moins aussi important que ceIui dl.\
potentiometre. Nous allons enumerer ceux qui conviepnent
Ie mieux pour les usage& courants :
Electrodes a hydrogene : Pour Ie titrage des solntionli Oll •
I'ajustage des milieux, l'electrode Ia plus pra'tique est cella
de Hildebrand (fig. 6) ; mai&, pour Ies mesures precises <le
pH, quaJId on veut eviter I'entrainement, par Ie barbotaga
d'hydrogene, du C02 en dissolution dans Ie liquide qu'9Q
ALCALINISA.T1ON DES MILIEUX DB CULTURE a~
~nl;llyse, i1 f~"t opeJ;"c r avec lInc electrodll fflrmell C9wm~

Ie modele BirifoJ;"mtl de Mich~6Iis, Oll willij~ l'~lfilc\rodll l\
S~QQ",sses de W.-M; Clark. :Paul' l'et\l~e specitlle Qt}. ~~n,g
on peut recomroanoer l'electrode de Slilqn\~ at V\n~pt.
ElectrQd~$ a fJuil).nydrOne. - Qua.nq la liquBl~t dout ~"
veut mesur~r Ie pH renferme des substances Ijul\ceptibl~!i
Intre n~dllit6s Pill' l'hydrogene en prtsence dfl floil;" de!
Fig.7. Fig.8.
Electrode de Hildebrand: Electrode nu Cnlomel.
platine, I'electrode a hydrogene est inutilisable ; on la

remplacera alors, et meme dans bien des applications de
l' electrode a hydrogene, par l' electrode a quinhydrone de
Einart Billmann. Elle ne peut servir pour les solutions
dont Je pH est superieur a 9, et il faut tenir compte de ce
qu'elle est positive dans certains cas par rapport it l'tlectrode,
au calomel.
Electrode:; au calomel. - On le& preparer~ avec dl\
merCl,lre Pill', redistille, et du calomel it la Vapeur Codllx
1008 ; comme solution Qe KCI, q'Qi seryira egalelllent
d'(flectro1ytt:l de liai:ion. prendrll la liolutioll normale -
preparee avec dll chlorure de potassium !lieq pllr ~t ~o~~
40 TECIINIQUES GENERAiES
gneusement verifiee. - ~e vase 4 electrode avec borne

inferieure soudee (fig. 7) est tres commode, mais on peut se
conteriter d'un type mOlns codteux (mod. A. B. par exemple).
En outre, il est necessaire - sauf avec l'electrode a
quiJ?hydrone - de disposer d'une source d'hydrogene pur:
un tube d'hydrogene electrolytiquc constilue lao plus pra-
tique, a condition de la munir d'un 'robinet a pointeau, a
"is micrometrique permettant de regler bulle a bulle Ie
d'cbit gazeux. On se procurera aussi (de preference en
double exemplaire) un accumulateur de 2 volts, bien isole,
qu'on maintiendra toujours charge et qu'on entretiendra
soigneusement; une source de courant continu d~ 4 volts
est egalement indispensable pour hydrogener les elec-
trodes de pIa tine platinees.
II est bon d'avoir toUjOlll'S pretes deux electrodes de
Fig, 9. Fig. 10.

;\iont.ge de rele.trade it hydrogen. Difilpositif complet pour l'ajustnge d'un milieu
de Hildebrond. par la methode electromctrique.
Hildebrand et deux electrodes au calomel, afin de ne pas

etre oblige, en cas de panne d'electrodes, d'interrompre
un'e experience en cours. Enfin on devra preparer ou se
procurer tine solution-tampon rigoureusement exacte,
celie de Michaelis, par exemple, de maniere il verifier Ie
AtCALINISATION DES MILIEUX DE CULTURE 41
bon fonctionnement du potentiometre et des electrodes

avant de commencer chaque serie de mesures.
Nous ne donnerons pas la technique detaillee de la
determination du pH ou de I'ajustage des milieux par la
methode electrometrique, car on la trouvera, avec toutes les
indications pratiques utiles, dans la notice que M. J. Bar-
taudy 1 a redigee sur les applications du potentiometre a ,
cadran de A. Berthelot. On consultera egalement avec
profit I"excellent ouvrage de W. Mansfield Clark 2: The
..determination of hydrogen iOIlS, ainsi que Ie chapitre special
du Manuel de techniques phgsico-chimiques de Michaelis s.
Pour transformer en pH ou en concentration en ions H
les forces electromotrices mesurees au potentiometre les
biologistes prefereront sans doute eviter les calculs et se
servir d'abaques ou de tables. Celles qui ont ete puhliees
par Schmidt et Hoagland, a I'Universitg of" California Press,
de Berkeley, U. S. A., et qui ont ete calcnlees pour des
lectures it 2 millivolts pres, leur donneront to ute satis-
faction.
Methode colorimtHrique.
Elle ~st basee sur :les teintes differentes que presentent
les solutions d 'indicateurs colores, suivant la teneur en ions
H + des milieux. Avec une gamme suffisante de ces
indicateurs, virant a des concentrations differentes en
ions H+, on peut determiner l'aciditc vraie d'un liquide
quelconque en ]e comparant a une concentration egale
avec des tubes etalons de p~ connu.
Ces dernieres annees, l'Ecole americaine a repris la
question avec une grande precision. Elle propose l'emploi
d'une echelle d'indicateurs tres sensihles, dont la plupart
appartiennent it la serie des sulfones phtaleines.
Ces indicateurs sont en pratique hicolores, jaunes e,n
solution acide, rouges ou bleus en solution alcaline. L'un
d'eux, Ja thymolsulfonephtaleine, peut etre employe comme
indicateur tricolore: outre Ie virage bleu vers pH 9, elle
offre un virage rouge vets pH + 2.
1. Etahlissements Pouienc, editeurs, Paris.

2. "illiams and Wilkin., edit., Baltimore U. S. A. 2' edition. r,'emploi de.
ndicateurs est cgalement expo~e en detail dons celouvrage.
3. l\Jnsson et ele , wiL, Pads, trnduction rmn~nise.
42 TECIlNIQtIES GENERAL~S
s~rga
!;g
9 90"~O
'"=
~
-
9 = Hd
I~
]
,....9
ALCALINI8A,rJ0N DES MILIBU;c De CULTURE 43
TABLEAU II
Zone utile feH
Serie de Clark Limite (ulilisab e
Indicateurs de virage avec es milieux
virage colore. en joune)
pH
Thymol phlnleine suUonee
(hleu de thymol). • . • I'ouge it joune 1,2 - 2,11
Te Ir a hromophenolphlJl.-
Mine sulfoUl,e (bleu de pro-
mophcinol).. . . . . . jaune nu bleu 3,0 - 4,6 4,0 it 4,6
o rt b ocn r box, benzene
nzodimethylnniline. . • • rouge au jaune 4,4 - 6 4,4 it 6
DibromoortbQcresQI pbta.
leine sul£onee (pourpre de
bromocresol). . • • . . jnune au violet 5,2 - 6,8 5,4 it 6,6
D i bromotbr.mol pbta-
~ lejn6 suifoJ)el3 (!:ileu de bro-
mothymol).. . . . . . jaune au bleu 6 - 7,6 6, it 7,6
Phenolphto.leine sulfonee
(rouge de phenol). . • . jnune au rtlUge 6,8 - 8,0 6,8 it 8,0
Orlhocresolpbtaleine sul-
fomie (rouge q'l misol). , jnune aU rQugll 7,2 ~ Q 7,' a9
Thymol phtaleine sulfom\e
(bleu de thymol). . . jaune au bleu 8 - 9,6 8,6 i\ 9,6
Orllulcresolpblaleine .• tncolore a rouge &,2 - 9,8 9 a 9,6
Cette serie de 9 indicateurs permet 1a determination de

pH 1.~ i'I pE 9,8 avec llQe grande »ppro:J~j11latiQll, On
Qbtient. ):}QtJ.r chaqq.e lndi<;ateur, entre les de\lx poil;ltli
,6~tr~mes dll virllge indique:; dans Ie t<lbI~au ci-dessus, 'Vue
gamme df) coloratiQPI' asSez; differflnci¢ell; de pl\ls, les
intervaIIes de virage pour les differents ip<!icateurli CheVqll"
chent les uns sur les autres, ce -qui permet de n~ laisser
aucun point douteux sans controle.
La methode la plus simple de determination de pH dans
'une solution coqsistera a comparer la couleur obtenue avec
une meme concentratieln d'indioateur sur Ie liqui'de a exa-
miner et sur des tubes temoins de concentration pH
connue.
Preparations des $Qll,1tiQ(lS meres d'indicateurs.
a) Sulfones phtaleines. - 0 gr. 1 de matiere colorante

en poudre est mis en solution dans un peu d'eau (15 cc.
environ) additionu~e de n cc. (variable su,ivant l'indicateur)
de solution de soude Nj20; on opere dans un petit vas~
d'Erlenmeyer et on chauffe. Apres dissolution, on eten~
d'eau it 500 cc. dans une fiolejaugee I; On a, de la sorte, des

solutions d'indicateur it 0,02 %.
n = 5 CC. 7 pour Ie rouge de phenol;
= 5,3 rouge de cresol;
= 4.3 bleu de thymol;
= 3 bleu de bromophenol;
= 3,2 bleu de bromothymol;
- 3,7 pourpre de bromocresol.
bj Rouge ·dc· Methylc. - On Ie dissout a raison de

o gr. 1 dans 300 ce, d'alcool et on amene it 500 cc. avec de
l'equ = 0,02 %.
, c)Orthocresolphtaieinc. - Solution it 2 % dans l'al-
cool.
Preparation des etalons de concentration iortique.
10 Bchelle de pH 1 a pH 10 de 0,2 en 0.2: -

Pour etablir ceUe echelle, il faut tout d'abord preparer les
solutions suivantes :
a: Une solution de NaOH Nj5. Le mieux est de l'etalon-
ner sur une solution d'acioe sulfurique 'N(5 preparee par la
methode decrite dans tous les ouvrages de chimie analy-
tique, ou sur une solution de phtalate acide de p~tasse pre-
paree comme ci·dessous.
La solution de soude devra etre garantie contre l'action
de C02.
b. La solution Nj5 de phtalate acide de potassium. Dis-
soudre 40 gr. 828 de phtalate acide pu.r et amener iI.'11itre
avec de l'eau distillee dans une fiole jaugee,
c'. Solution Nj 5 de phosphate acide de potassium
PO'H2K, Dissoudre 27 gr. 231 de PO~H2K pur, recris-
taUise, seche it 1000 , et amener a un litre.
d. Solution double d'acide borique N/5 et de chlorure d~
1. Nousdirons une rois pour tOlltes que reau a employer dans tautes ces operations
doit etre de reau distillee Bussi pur~ que possible et bouillie avant remploi pour.,
chasser CO'. La verrerie it utiliser doit etre en vcrre neutre, e'est-:\-dire ne cednnt
pas d'alcall a reau.
ALCALINISATION DES MILIEUX DE CULTURE 45
potassium N/5. Dissoudre 12 gr. 405 d'acide borique secM

a rail', a poids constant, et 14 gr. 912 KCI pur; amener a un
litre.
e. Solution de chlorure de potassium N/5 14 gr .. 912 KCI
pur par litre.
f. Solution d'acide chlorhydrique N/5 Pl'eparee avec
HCI pur et titl'ee sur la solution de soude a.
A l'aide de ces solutions, on pOUl'l'a preparer l'echelle de
solutions sqivante de pH determine:
Tabledonnantla composition de melanges de pH connu

a des intervalles de 0,2 a temperature = 20· (Clark
et Lubs),
TABLEAU III
pH:
1.050 cc.KC1N/5 + 97,Occ.HC1N/5comp1.200cc.av. H'O:
1,2 » + 64,5 »
1,4 » ,+ 4 1 , 5 » »
1,6 » + 26,3 »
1,8 + 16,6 »
2,0 + 10,6» »
2,2 + 6,7 »
2,2 50 cc.Phtalate acide de K N/5 + 46 cc7 HCl N/5 completerit200ec.;
2,4» + 39,6 »
2,6» + 32,95 » »
2.8 » + 26,42
3,0» + 20,32
3,2 + 14,7
3 4» » + 9,9 »
3.6» )) + 5,97 »
3,8» » + 2,63 »
4,0 50 cc. Phtalate acide de K N/5 + Occ-t Soude N15 com pleter a200 ce. ;
4,2 » + 3,7 '" »
4,4.» » + 7,5 )). »
4,6 + 12,15 » »
4,8 » + 17,7 »
5,0 » + 23,85 »
5,2» » + 29,95 »
5~» » + U~5
5,6» » + 39,85 » »
5,8» » + 43.0 »
6,0» » + 45,45 ))
6,2 + 47,0 »
5,8 50cc.Phosphateac.deKN/5 + 3""72 'Soude N/5 eOl1lplet~r it 200cc. ;
6,0» »' + 5,70 » »
6,2» + 8,6 » })
6,4» + 12,6 » »
46 tEct:lNIQUES GltZI(ERALES
6,6 50 te. Phosphllte ac. de KNj5 -+' 17,8 Soude N/5 eompWer ii 200 ee.
68» ~ + 23,65 n »
,~» » + 29,M »
7,2» » + 35,0 » »
7,4 J) + 39,5
7,6» + 42.8 » »
7,8» » + 45,2 »
8,0» + 46,8 »
718 50 ce.Ac.Borique N/5 Kel N/5 + 2"61 Soude N/5 eomplCtllril 200ce.;
8,0» » + 3,97 » )'
8,2» » + 5,9 ),
. 8,4» » + 8,5 )l
8,6» » + 12,0 »
8,8» » + 16,~ » »
9.0» n J + 21,3 » )l
9,2») » + 26,7 » »
'9,4» » + 32,0 J)
9,6» » + 36,85 » »
11.8 + 4{),8
10,0» » + 43,90 »
Pour etablir l'echelle colorimetrique, mesurer exacte,

ment. dans des tubes en verre neutre, bien calibres, 10 cc.
de chaqtre solution et ajouter 1 cc. de solution d'indicateur
a 0,01 % (solutions meres diluees un~ fois). Faire une
serie pour chaque indicateut dans les Ii mites de son virage
indiquees au tableau 2. On opere en tubes prealablement
etires et on sceUe a la lampe apres remplissage.
Pour determiner Ie pH d'une solution quelconque, on
essayera la reaction de cette solution sur les huit in<Uca-
teurs. On mesure exactement 10 cc. de la solution aans
8 tubes differents ; a chaque tube on ajoute 1 cc. de solution
a 0,01 % d'un des indicateurs.
Pour des pH 1,2 a 9.8, Ie'S tubes seront hors serie avec
certains indicateurs, mais il en restera au moins un qui
presentera une teinte pouvant se classer dans une des
series de tubes etalons. On peut utiliser, pour finir 1a deter-
mination, Ie petit cu\Uparateur dont il sera'questiun a pro-
pos de l'~ustement des milieux a un pH donne. L'emploi
de cet appareil est indispensable dans Ie cas d'une solution
coloree par eUe-meme.
20 Ec"elles pH 6,6 a pH 8. - En general. en hio-

logie (determinatro,n de la concentration en ions H+ de
liquides organiques, ajustement d'un milieu de culture a pH
determine, etc.), on pourraoperer avec une echeUe d'etal'ons
ALCALINISATION nES MILiEUX DE CUL1'VRE 47
}ji~n ruoins etendue. La phenolsulfonephtalein~ sera Ie· senl
indicateur employe.
1l'e Fotmule. - Un mtflange simple de phosppates sett it
l>l'~pArer les etalons.
bh preplir'era :
a. Solution N/5 phosphate monopotassique
9 gr. 078 de sel recristaJlise, secM it 1000 it poids cons-
taM, !>O"nt dissbus dans 500 ec a'eau; on ajoute 45 ce. 5 de
solutlOIi d1iddicaleur (ph~b.olsulfortephtaleine) a 0,02 % et
on complete it 1.000 dans'une fiolejaugee, aVec ae l'eau 'dis-
tiil~e.
b. Solution Nt 5 phosphate disodique :
Le sel commercial pur est it 12 H20; on l'ellen-rit en cou"
che mince it temperature-ordinaire (1·8~20o) it poids constant;
l'operation demande 8 it 15 jours. On obtie_nt Ie sel
P04Na 2H+2H aO.
11 gr. 876 de ce sel sont dissous dans 500 cc. d'eau ; on
ajortte 45 cc. 5 de solution de phenolsulfonephtalcine it
0,02 % et on torrtplete it 1.000 cc. avec de l'eau.
A l'aide des deux solutions preccdentes, on prepare, dans
urte fiole jaugee de 100 ce., la serie suivante_ d'ctalons
(SORENSEN) :
C01111losition des melanges lie phos~hafus dondb.nt des

solutions de pH 6,6 a pH Rde 0, I en 0, t.
TABLEAU IV
B8 "c. FO~HNa2 N/15 amenes a 100 cc. avec la solntl<1n N/15 de- PO'HK' = 'pH 6,6
43,5» » » » = ,pH 6,7
49,5» » » » = pk-6,1!
55,5»» » =' pH 6,9
61;0» ,., pH 7,0
,66,5 » » = pH 7,1
'12,0» » » » = pH 7,2
76,1;.» » » » = pH 7,3
'110,5» » • ». = pH '7,4
84,<l» » » » = = PH 7,5
86,5» » » = pa ;,6
~ »=~~
91,3» » ,[ » = p1:J.17,8
93;0» » » » = pil7,9
!!4,5» " » ". =
'pH 8,0
~~e. -- Uue autre J01'mule permet 'd'obtenir -des

solutions etalons de meme ordre; on emploie alors seule·

ment Ie phosphate mono-potassique et la soude titree.
A. Solution de POjH~K N/5 : peser 13 gr. 613 de sel
recristallise, seche a 100° a poids constant, les dissoudre
dans 300 cc. d'eau chaude. Refroidir, ajouter 91 cc. de solu-
tion de phenoisulfonephtaleine a 0,02 %. Amener a 500 cc.
dans une fiole jaugee avec de l'eau.
B. Solution de soude N/lO exactement titree sur un aeide
de titre connu (conserver a l'abri de C02). On n'ajoute pas
d'indieateur it la solution B.
Avec ees deux solutions, on fait les melanges suivants
dans une fiole jaugee de 100 ce. :
Melanges de PO'H2K et de sou de donn ant des solutions

pH 6,6 a pH 8 de 0,2 en 0,2.
TABLEAU V
SOLUTION N/5 P04H2l{ SOUVE N/IO A~IENER AVEC DE L'EAU A pH
25 ce. 17 ce. 80 100 cc. 6,6
25 ce. 23,65 100 ce. 6,8
25 ee. 29,63 100 ee. 7,0
25 ee. 35,00 100 ee. 7,2
25 ee. 39,50 100 ce. 7,4
25 ee. 42,80 101) ee. 7,6
25 ee. 45,20 100 cc. 7.8
25 ee. 46,80 100 ce. 8,0
Que ron emploie l'une ou l'autre formule de phosphates,

les solutions etant faites, on remplit des divers melanges
une serie de tubes Mires, en verre neutre ; on les seeIIe a la
lampe et on indique sur chaque tube Ie pH correspondant.
Les gammes d'etalons se 'conservent longtemps si on les
garde a I'abri de la lumiere.
Pour la determination du pH dans une solution
quelconque dans les limites de 6,6 a 8, mesurer exaete-
ment 10 ce. de la solution et ajouter 1 ce. de solution a
0,01 %. de phenolsulfonephtaleine. Chereher sa place dans
I'eehelle etalon. OpereI' avec Ie eomparateur Merit ci-
dessous dans Ie cas d'un liquide dont la coloration propre.
peut masquer ou modifier 1a teinte de l'indieateur.
Ajustement de la reac;tion d'un milieu ~e c.ult~re.
ALCALINISATION DES MILIEUlf DE CULTURE 49
Pour l'ajustement de la reaction d'un milieu de culture

a un pH donne, on se trouve dans Ie cas d'un Iiquide 'd'Ont
la teinte plus ou moins jaune brun (bouillons, infusions, etc,)
peut modifier la teinte de l'indicateur.
On opererasur les milieux fraids et on utilisera Ie c'ompa-
rateur. Ce petit appareil est un simple bloc de bois percc,
a la face superieur~, de six trous en 3 rangs de deux, au
calibre des tubes a essai employes; les tubes a essai entrent
dc la moitie dc leur longueur dans Ie bloc de bois, comme
dans un porte-tube ordinaire. Deux des. faces laterales sont
pleincs, les deux autres sont percees de trois fenetres qui
elonnent Ia lumiqre au travers d~s trois rangs de deux tubes.
On dispose pour chaque essai les tubes dans l'ordre sui-
vant:
Fenetre
I II III
Elalon Eau pure Etalon
pH <pH Ii oblenir pH> pH it obtenir'
IV V VI
Milieu Milieu Milieu
sans illdicateur a ajuster sans indicateur
+ Indicateur
Ob .•ervaleur
Dans ces conditions, Ie changement de teinte propre u'la

coloration du milieu se trouve compense du fait de 1a
presence du milieu dans les trois champs de vision.
On ajoute au tube V, qui renferme 5 cc. de milieu exacte-
°
ment ,mesure, cc. 5 d'indicateur (pheno!sulfonephtaleinii)
a 0,01 %. ~vcc une microburette (pipette de 1 a 2 cc. divi-f'
sce en dixiemes et munie d'un petit tube de caoutchouc
avec une pince it pression), on laisse tomber, dans ce tube,
une solution de soude N/20 jusqu'a ce qu'on ohtienrie une
teinte intermediaire entre celles des deux etalons I etH vus
au travers des tubes de milieu IV et VI.
La solution de sou de N/20 a employer s'ohtient en melan-
g~ant 500 cc. de soude N/10 avec ,,91 cc .. de phencil~ulfo
nephtaleine it 0.01 % et completant a 1'.00(} avec de l'eau·
Connaissant Ie volume n de la solution de sou de N /20 neces-
saire pour amener n. cc. du milieu a la reaction·vou}1ie;.lc
MICROBIOLOGIE: 4
.50 TECHNIQUES GENERALES
nombre de·centimetteseubes x de solution N desoudea'ajou-

ter it ·1 litre de milieu pour l'amener au pH oherche sera
X = 10n
Par un petit dosage analogue, on pourra determiner la

.quantite d'acide produite par fermentation sur un milieu de
pH connu au depart de la culture. 11 sera bon de centrifu-
ger dans ce cas pour avoir un liquide clair.
Les sucres s'alterent au cours de la sterilisation des
milieux par chauffage, surtout lorsque leur reaction est
nIcaline, et ils modifient Ie pH. II convient de les steriliser
.it part, en solution aqueuse, et de ne les ajouter aux milieux
qu'apres Ie chauffage definitif a l'autoclave.
D. - METHODES OOLORIMETRIQUES SANS SOLUTIONS

SPECIALES
Ces methodes permettent de determiner Ie pH sans em-

ployer de solutions Malons.
Melhodede Michaelis. - Un indicateur monocolore comme
Ie nitrophenol developpe sa couleur avec Ie maximum d'in-
tensite au terIne du virage du cote alcalin ; a egale distance
entrece pointet Ie terme du -:irage du cOte acide,l'inten-
site totale est moitie moindre, et, par suite, on obtient la
mem~ t~inte qu~ si on e,?ployait moitie m.oins Id'i,ndicateur
a lit lImIte alcahne de vlrage. On constrmt une echelle en
:ajoutant a une lneme solution alcaline des quantites crois-
santes d'indicateur.
Methode de Barnett et Chapman. - A egale distance des
limites acide et alcaline de virage, Ia teinte obtenue avec les
indicateurs bicoiores de Clark et Lubs est un melange a
parties egales de la couleur acide et de Ia couleur aIcaline.
,De meme, lorsqu'on met la moilie de l'indicateur dans une
'solution acide et l'autre moitie dans une solution alcaline,
la nuance observee est mixte.
Technique d'apres Medalia - On met dans sept tubes
10 cc. de soude'N/20 et dans sept autres 10 cc. d'acide chlo-
·rhydrique aO,! %. Puis on ajoute it la premiere ~erieO, 1 0,2 ...
·0,7 de somtion d'indicateur; et dans la seconde 07,0,6 .. ,
0,1 de In meme solution. On forme ainsi sept paires de tubes
'dont chacune contjent 0,8 d'indicnteur. A 10 cc. du liquide
ALCALINISATION DES MILIEUX DE CULTURE 51
a examiner on ajoute egalement 0 cc. 8 d'indicateur. On '

compense Ia couleur propre du milieu a I'aide du compara-
teur a2 rangees de 3 trous. Dans la premiere ran gee 00 dis-
pose les tubes dans l'ordre suivant : tube. contenant Ie
milieu sans indicateur ; tube aeide et tube alealin ; dans la
seconde, tube contenant Ie milieu. additionne d'indicateur
et deux tubes d'eau distillee.
On' emploie les indieateurs de Clark et Lubsoen solution
a O,2p. 100, sauf'le rouge de phenol quidoit etre a 0,04%.
Pour Ie hleu de thymol, 10 zone aeide: onajoute 0,5 p. 100
d'RCI dans les tubes les plus acides et 0,001 p. 100 dans
les moins aci~es, qui representent la serie a'lcaline ; 20 zOne
alcaline : HCI a 0.001 p 100 dims Ies tubes acide's. Pour
Ie bleu de bromophenol, NaOHN/200 dans les tubes alca-
lins.
Le pH des couples s'etablit par comparaison de la teinte
obtenue avec celle des solutions etalons, Le point de demi-
'virage, c'est-a-dire Ie couple qui a la meme quantile d'indi-
cateurdans les deux series, a les pH suivants :
BIen de thymol • . . 2.0
Bien de bromophenol . 3,87
Rouge de methyle . . 5,01
Violet de bromocresol. 6,28
Bleu de bromothymol . 7.08
Rouge dB phenol. • 7,77
Rouge de cresol. . . 8,13
Bleu de thymol. • . 8,86
Ces chiffres doonent Ie pH de Is' 4 e paire'; pour la 3 e et Ia

6e on rettanche ou on ajoute- 0,2.; pour la 2 e et Ill. 6e , {),45 ;
pour la 1 re et la 7e , 0,80. Les resuitats sont exacts a 0,05
~u 0,1 pres.
CH!1P1TR!1 V
METH_ODES ,DE PREPARATION DE~ MlLIEUJa

DE CULTURE USUELS
NOTA. - Les milieux de culture destines aux inoculations

doivent, en general, etre prepares sans peptone.
A. - Preparation du bouillon de viande.

(Bouillon simple, non peptone) I,
500 grammes de viande de beeuf ou de veau, debarrassee

de graisse et de tendons, sont haches finement au hache-
viande. I
On met ce hachis dans un bocal dans Iequel on verse
1 litre d'eau du robinet, froide. On remue un instant avec
une cuiller de bois. On Iaisse en repos Ie,bocal couvert
d'un Iinge pendant quatre heures, temps suffisant pour la
dissolution de toutes les substances nutritives. On remue
encore it Ia cuiller et on verse Ie contehu du bocal Jans une
marmite emaillee qu'on porte sur Ie feu. On chauffe douce-
ment et on laisse bouillir lO'minutes en remuant 'constam-
ment avec la cuiller de bois. Les matieres albuminoides
sont ainsi coagulees.
On filtre ensuite Ie melange sur un Hnge de· toile et on
verse Ie liquide dans une autre marmite. On exprime la
viande cuite restee sur Ie linge. en tordant fortement ceIui-
ci, pour en faire sortir tout Ie jus On laisse refroidir et on
filtre sur papier mouille pour retenir les particules de
graisse entrainees mecaniquement.
On aicalinise ensuite avec une solution de soude pure it
1 Pour 1a preparation des bouillons destines II l'obtention des toxin.. diphte-

rique ou tetanique, voir respectivement les chapitres XXVI et XXXIX. La viande de che-
val ne doit pas eire employee pour la preparation des milieux de culture en general.
Beaucoup de microbes poussent tres bien dans Ie bouillon de cheval, mais certains de
leurs caracteres (chromogenie surtout) s'y trouvent modifies.
PREPARATION DES MILIEUX DE CULTURE 5q
1 p. 10 qU'OD verse goutte a gout~e, en agilanl forlemenl Ie
liquide dans lequel on a plonge un gros fragment ,de. papier
de tournesol bleu qui rougit aussitot et un autre fragment
de papier de tournesol rouge. Quand les deux papiers
prennent une teinte legerement violacee, la neutralite est
ohtenue. (Pour Ia culture de Ia plupart des microbes patho-,
genes, il convient de pousser l'alcalinisation .un peu plus
loin: on ajoute alors, par litre, 5 a 7 cc. 5 de lessive nor-
male de soude.) II se produit un trouble du it la precipita-
tion des phosphates alcalino-terreux.
On porte ensuite Ie marmite it l'autoclave, on chauffe sous
pression a 1200 pendant 20 minutes, puis on filtre sur papier
Chardin. Le bouillon fiItre est recueilli dans des ballous,
ou reparti en tubes qu'on bouche a l'ouate (non hydrophile)
et qu'on sterilise de nouveau a 115 0 seulement, pendant
20 minutes.
Le mem~ bouillon peptone et sale se prepare en :).joutant
au liquide, avant l'alcalinisaiion par la soude, 20 grammes
de peptone et 5. grammes de sel de cuisine par litre.
Dans les Iaboratoires de serotherapie, OU 1'0n peut dis-
poser des caillots de sang proven ant de la saignee des ani-
maux producteurs des serums therapeutiqucs, il est tres
recommandable et economique d'employer ces caillots, au
lieu de viande, ~ Ia preparation des bouillons de culture
destines aux analyses d'eaux d'alimentation, pat exemple.
Voici comment il convient de les utiliser :
On pese 1 kilogramme de caillots (fragmentes grossiere-
ment avec Ia main ou avec une cuiller de bois) et on y
ajoute 1 litre et demi d'eau. On laisse en contact pendant
24 heures a 18 temperature du laboratoire en remuant de
temps en temps la masse. On filtre celle-ci sur un Iinge de
toile et on porte Ie filtrat a l'autoclave a 1150 pendant une
demi-heure. On filtre ensuite, de nouveau, sur un linge
d'abord, puis sur uq entonnoir garni d'ouate hydrophile. Ce
liquide rem place la maceration de viande.
On pent, a Ia rigueur, rem placer la maceration de viande,
lorsque celle-ci fait defaut, par une maceration de levure de
brasserie on de distillerie, preparee de la fa\;on suivante:
On purifie d'abord la levure en la mett:mt en suspension
dans une grande quantite d'eau (20 litres par exemple pour
2 kg. 500 de Ievure pressee) dans laquelle on verse, par
54 TECHNIQUES GENII;.HALES
petites portions, 150 it 200 grammes d'acide chlorhydrique.

La levure se depose en flocons. On decante et on rejette Ie
liquide surnageant ; on recueille la levure sur un linge, on
l'essore et on en fait macerer 2 kg 500 dans 4 litres d'eau
de conduite. On porte sur Ie feu et on fait bouillir pendant
quelques instants en agitant constamment avec une cuiller
de bois. On ajoute encore 5 litres d'eau de conduite. On
lai8se la levure se deposer pendant 3 heures et on filtre. Au
liquide clair recueilli, on ajoute 10 grammes de peptone
et 5 grammes de chlorure de sodium par litre. On neutra-
lise, on sterilise it 1150 et on filtre.
Ce milieu peut servir it cultiver la plupart des microbes
de l'eau ou de I'air et beaucoup de microbes pathogenes.
On peut aussi employer Ie bouillon de legumes d' Albert
Berthelot:
Dans 41itres d'eau, on met 300 grammes de pommes de
terre de Hollande, it chair jaune, pelees et coupees en
morceaux menus, 150 grammes de caroites et 150 grammes
de navets. On fait bouillir 4 heures jusqu'a reduction a 3
litres. On passe sur toile fine et on ramene a 3 litres par
addition d'eau distillee. On alcalinise faible!uent (au tour-
nesol) avec de la soude. On sterilise a l'autoclave, on laisse
reposer 24 heures en glaciere et on filtre sur papier: On
repartit et on sterilise 20 minutes a 115°.
Ce bouillon sans peptone convient parfaitement pour la
culture des microbes-vaccins. On peut Ie gelatiniser ou Ie
geloser;
Les champignons y poussent bien, a la condition de ne
pas l'alcaliniser a la soude, d'y ajouter 2 a 5 p. 100 de malto·
peptone et, s'il ya lieu, 2 a 10 p. 100 d'un hydrate de Car-
bone.
On peut Ie peptoner en l'additionnant de son volume de
peptone de Martin ou de 15 a 20 grammes par litre d'une
peptone seche, convenablementchoisie.
B. - Preparation du bouillon a l'extrait

de viande Liebig.
Peser 5 grammes d'extrait de viande Liebig qu'on fait
dissoudre dans un litre d'ean tiMe a 500u 55°. Ajouter :
peptone 10 grammes et selmarin 5 grammes, Neutraliser
PR£PARATlON DES MILIEUX DE OUL"1'ORE 55
en suite, comme pour Ie bouillon ordinaire, jusqu'a ce que.

Ie papier de toursenol rouge vire nettement au bleu. Porter
a l'autqclave a 1200 ,20 minutes. Filtrer sur papier (:'hardin.
Repartir en ballons ou en tubes ·et steriliser a 115~. 20 mi-
nutes.
C. - Preparation de reau peptonee simple ...
Solution de 20 a 30 grammes d'une peptone seche (lans

un litre d'eau distillee. On fait bouilJir et on neutralise
a la soude pendant l'ebulJition. On filtre sur papier, on I
repartit en tubes a essai ou en matras et on sterilise ~,1l5o
pendant 20 minutes.
Nola. - Pour l'emploi des peptones commerciales dans
Ia preparation des milieux de culture, il importe,de savoir·
que ces substances presentent entre eUes de gran des diffe~
rences de composition. Celles qui sont obtenues par di·/
gestion pepsique, par exemple, renferment tantot une forte
proporti,on d' albumoses; tan tot ,une faible proportion de
celles-ci. avec beaucoup de peplollBs vraies ; tantO! des
polypeptides tres complexes. Dans les peptories panCrea-.
tiques, la degradation des proteiques est plus ayancee.
Aussi y trouve-t-an surtout de') melanges de polypeptides
de plus en plus simples, avec Ul)C proportion souvent.
elevee d'acidcs amines libres Enfin, a ces variations
resultant du mode de preparation, viennent s'ajouter
celles qui sont liees it Ia nature de Ia matiere premiere,
mise en reuvre: viande, poisson, foie, caseina, fibl1ine,
gelatine, sang, etc.
II n'est donc pas surprenant qu'avec un meme germe et
pour un meme pH, plusieurs peptones commerciales
donnent des resultats differents. les unes favorisant sur-
tout Ie developpement du microbe,les autres modifiant
les proprietes pathogenes ou toxigenes.
Dans les travaUx courants on aura donc interet a em-"
ployer la peptone Martin, si economique et si facile a pr.e:-
parer au laboratoire (voir plus loin). Lorsqu'on devra se
servir de peptones commerciales on .o.onnera la preference,
pour Ia preparation d~s milieux usuels, a une bonne peptone
pepsique de viarule. de breuf, saufpour l'etude speciale des
56 T_ECHNIQUES GENERALES
germes non proteolytiques des putr~factions ou de la

flore intestinale auxquels convient mieux, generalement,
llne peptone pancreatique de viande de hamf. C'est cette
derniere peptone que 1'0n choisim egalement dans les re-
cherches sur les proprietes biochimiques des microb~s.
Pour I'etude particuliere de certaines fonctions des bacte-
ries et pour Ia preparation de bonnes toxines ou de grandes
quantites de corps microhiens, ou encore pour Ia produc-
tion economique de virus destines a la destruction des
animaux nuisihIes, on aura avantage a essayer des peptones
d'origi'ne et de composition diverses Lorsqu'on aura fait
choix de la meilleure. on demandera au fabricant un bulle-
tin d'analyse et on exigera ens\lite un produit repondant
toujours aux caracteristiques de l'echantillon essaye.
D'une maniere generale, on ne devrait jamais designer
dans les publications scientifiques nne peptone par son
seul nom commercial. Mieux vaudrait indiquer son origine
et son mode de labrication, par exemple :
Peptone pepsique de viande de bamf, marqcze X.
Peptone pancreatique de caseine, marque Y.
CeUe precaution est d'autant plus indispensable que
certains fahricants de peptones qui, a l'orig-ine, n'en prepa-
raient qti'un senl type, meltent parfois en vente, sons la
meme marque, de nombrenses varietes obtenues llar des
procedes tres divers, a partir de tontes sortes de matieres
albuminoides. I
II serait encore plus rationnel d'indiquer, avec la nature de
la peptone employee, quelques caracteres physiques et chi-
miques faciles a determimer. Cette remarque s' applique egale-
ment aux peptones preparees au laboratoire (A. Berthelot).
D. - I1reparation du bouillon tviartin (pl'ocede

recommande).
1 Solution de peptone. - On prend cinq estomacs de
0
porc qu'on laye a grande cau et qu'on passe au hachoir,

~i'pres avoir enleve la graisse adherente.
On fait une maceration de ce produit hache, dans les pro-
portions suivantes :
Estomac de porc hache. 200 gr
Acide chlorhydrique pur 10 cc.
Eau tiede it 500 • . • 1 litre.
PREPARATION DES MILIEUX DE CULTURE 57
On laisse dans un bain-marie, a 500 environ, pendant

24 heures I, Ensuite on porte a l'autoclave (non boulonne) et
on chauffe a ] 00 0 pendant une demi-heure. On verse sur un
tamis recouvert de caton hydrophile.
On neutralise Ie liquide filtre et chaud en ajoutant de la
soude alp. 10 au du ~arbonate de soude alp 10, jusqu'a
ce que Ie papier rouge de tournesol bleuisse nettement.
On filtre sur papier et on nlpartit en ballons de 1 litre,
par 500 grammes On sterilise a'115° pendant une demi-
heure pour conserver.
2D Maceration de viande. - On fait macerer pendant 20 a
24 heures, a ret~ve II 37 0 , 500 grammes de viande hachce,
dans 1 litre d'eau.
On passe a travers un linge, on exprime Ie jus et on
ajoute 5 grammes de sel marin.
30 Melange {tnal. - On melange 500 grammes de solution
de peptone a 500 ·grammes de maceration de viande. On
chaufl'e a 70 0 et on alcalinise legerement avec de la soude.
Pouda culture du bacille de la diphterie, on neutralise d'a-
bard exactement avec la soude et, Iorsque Ie papier de tour-
nesol rouge commence a bleuir, on ajoute au liquide, par
litre, 7 centimetres cubes de lessive normale de soude (fl
40 p. 1.000).
Porter a l'au to clave a 1200 pendant 15 minutes~ Filtrer
sur papier Chardin, repartir en ballons au en tubes et steri-
liser a 1150 , pendant 20 minutes.
E. - Preparation de Ia gelatine nutritive.
On prepare du bouillon de viande ordinaire, au du

bouillon peptone a l'extrait de viande Liebig et, en meme
temps qu'on additionne celui-ci de peptone et de sel marin,
on ajoute 150 grammes (par litre) de gelatine en feuilles 2
que ron fait fondre.dans Ie liquide chaud en agitant avec
la cuiller, sans depasser la temperature de 800 •
1. Ou un temps moins long si I'on desireobtenir une peptone plus riche en albu-
mO'les.
2. On emploie Ie plus sQuvent, dansles laboratoires franc;ais, ]n gelatine marque Coi-
gnot (doree) qui est excellente. Cest une gelatine d'os.. Elle fond it 25". Dans 1••
pays chauds on peut avantageusement se servir de gelatine de poisson au colle de
po~son (prcparee avec les vessies natatoires d'esturgeons) et qui n'est fusible qu'a 30 0 •
58 2'ECHNIQUES GENERALES
an neutralise cnsuite (la gelatine est toujours t·res acidc)

ct on alcalinise legerement avec 5 centimetres cubes de
lcssive de soude .normale, de telle sorle' que Ie papier de
tournesol rouge bleuisse un peu.
On porte a l'autoclave et on chauffe 10 minutes a 110·
seulement, dans la marmite emaillee.
AU'sortir de l'autoclave, on laisse refroidir jusque vers
609, puis on colle la gelatine avec une solution de blanc
d'reuffaite en battaQt un blanc d'reuf dans un verre conique
avec 50 ou 100 centimetres cubes d'eau qu'on verse par
fractions, en agitant fortement, dans Ie bouillon gelatine.
On reporte de nouveau ul'autoclave. On chauffe 10 minutes
a 1150 et on filtre dans un entonnoir a chaud. Repartir en
ballons ou en tubes qu'on sterilise de nouveau 10 minutes
a 1150 et qu'on solidifie suivant les besoins, inclines ou
droits.
Certaines gelatines ne se solidifient plus lorsqu'on les a
chauffees sous pression a 1150. Mais cela est rare. II faut
al6rs steriliseI' seulemenT a 1000 par chauffage discontinu,
nne heure chaque fois, trois jours de suite, dans rautoclave·
non boulonne.
F. - Preparation de la gelose nutritIve.
On prepare du bouillon de viande normal, ou du bouillon

Martin, ou du bouillon a l'extrait Liebig et, apres lieulralisa-
lion et alcalimsation Legere on ajoute par litre, 15 grammes
de gelose 1 qu'on a prealablement coupee 'en fragments,
lavee et fait gonfIer pendant quelques heures dans un peu
d'eau. Cetto gelose, exprimee, se disso~lt dans Ie bouillon
chaud qu'on maintient auxenvironsde 1000 , en agitantavec
la cuiller.
Lorsque la dissolution est achevee, on veri fie la reaction'
qui doit etre toujours un peu alcaline. Sinon, on ajoute:
quelques gouttos de solution au 1/10 de carbonate de soude,.
jusqu'a ce que Ie papier de tournesol bleuisse, et on ajoute
1. La gelose au agar-agar cst ournie par diverses algues particulierement aban'"

dantes dans les mersde Chine. Ce sont : Gelidtum cartilagmeum au ('0 ntUm. Graci..
laria Itchenolde8, b.ucIlema 8pino8um, etc Elle n'est fusible qu'au-dessus de 40° Elle a
un pouvoir f'ixateur considerable, par exemple "is-a·vis de l'alexine des serums frais ...
PREPARATION DES MILIEUX DE CULTURE 51)
encore 5.cc. de lessive normale de soude. On laisse refroi-

dir aux environs de 60 0 et on colle h gelose au blanc
d'reuf, en melangeant a toute la masse de bouillon gelose
(par petites portions et en agitant fortement, un blanc
d'reuf qu'on a bauu a part dans un verre conique avec
50 ou 100 cc" d'eau.
On porte alors la marmite contenant Ie bouillon gelose a
l'auloclave ; on chauffe a 120 pendant 15 II}inutes, puis, au
0
sortir de l'autoclave, on verse sur un filtre en papier Char-

din mouilIe, dans un entonnoir a bain-marie. (A defaut d'en-
tonnoir:) baln-marie, on peut filtrer ilire'ttement dans l'au-
toclave qu'on maintient a 'fa tempGrature de 80 0 environ,
non boulonne:) .
On reC:oit la gelose filtree, soit dans des ballons, soit dans
de~ tubes qu'on sterilise de nouveau a 1150 pendant
20 minutes et qu'on laisse solidifier droits ou inclines, sui-
yant· les besoins.
Gelose glycerinee. - Preparee comme il vient d'etre
dit.
En meme temps que Ie blanc d'reuf pour Ie collage, ou
nussitOt apres, on ajoute 40 a 60 grammes de glycerine pure
par litre.
Gelose sacl'ee. Preparee comme il vient d'etJ::e dit. On
substitue a la glycerine 20 grammes par litre (2 p. 100) de
sucre (glucose, ou saccharose, ou lacto~e, ou maltose).
Nota. - Pour su~rer les milieux de culture peptones 'et
alcalins, il y a inten~t a steriliser a part, dans des ampoules
de verre 'neutre, des solutions concentrees, de titre connu,
des divers sucres dans l'eau distillee. On ajoute aseptique-
ment, avec une pipette graduee, sterile, un volume de-
termine de ces solutions dans un volume constant de
bouillon sterile ou de gelose liquefiee par la chaleur. On
evite ainsi la formation des produits nuisibles qui resultent
de l'action des alcalis et des peptones sur les glucides a
haute temperature. Ces produits sont egalement la cause du
brunissement des milieux sucres sterilises a l'autoclave.
Gelose au serum (de Joos). On verse dans un ballon de
2 litres de capacite :
300 cc. de serum de cheval.
150 cc. de bouillon ordinaire.
50 cc. de solution not'mule de soude Ii 40 p. 1.000.
60 TECIINIQUES GENERALES
Porter ce ballon pendant 2 it 3 heures dans un hain-

marie entre 600 et 70 0 , puis 30 minutes it l'autoclave it 1000
(autoclave non boulonne). Ajouter en suite 500 cc. de
bouillon chaud sterile" dans lequel on a fait dissoudre
20 grammes de gelose.
Repartir et steriliser 15 minutes it 120°.
G. - Preparation du lait comme milieu de culture.
Le Jait du commerce doit etre d'abord ecreme par

centrifugation, puis Jegerement alcalinise par quelques
goultes de solution de carbonate de soude a 1 p. 10
jusqu'a ce qu'il bleuisse legerement Ie papier de tour-
neso1.
Repartir en tubes. Steriliser par 3 chauffages successifs
de 30 minutes chacun, it 1000, a 24 heures d'intervalle. La
sterilisation it 115 0 altere Ie lait en peptonisant la caseine et
caramelisant Ie lactose.
Lait tournesole. - Meme preparation. On ajoute au lait
legerement alcalinise, de la teinture de tournesol en quantite
suffisante pour donner une 'teinte nettement violette. On
peut, plus commodement, avoir de la teinture de tournesol
tonte sterilisee a parf et l'ajouter, avec une pipette ;terile,
au fur et it mesure des besoins.
Petil lail. - On determine, par une epreuve prealable~
pour Ie lait dont on dispose, la quantite de HCI (au dixieme)
en centimetres cubes qu'il faut pour provoquer la coagula-
tion de 100 cc. de lait porte a 1000 • Cette determination
faite, on porte a l'ebullition Ie lait tolal et on ajoute Ie
volume d'HCl reconnu necessair:e, puis un leger supple-
ment, goutte it goutte, jllsqu'a ce que la coagulation soit
complete. On laisse refroidir pendant quelques heures;
on filtre sur un entonnoir garni d'ouate hydrophile, puis
sur papier Chardin mouille. Entre ces deux filtrations, on
alcalinise au carbonate de soude au dixieme. jusqu'a bleuis-
sement net du papier de tournesol rouge. On ajoute, s'il y
a lieu, la quantite de teinture de tourne.sol necessaire pour
teinter Ie liquide en violet pale: on repartit en tubes et
on sterilise, comme pour Ie lait, 8100 0 , troisjours de suite,
30 minutes chaque fois.
PREPARATION DES MILIEUX DE CULTURE '61
H. - Preparation des pommes de terre pour cultures.
Les tranch~s de pommes de terre, ~nlevees et coupees it

l'emporte-piece. doivent etre 'immediatement immergees
• dans un cristallisoir contenant une solution de bicarbonate
de soude a 10 p. 1000 1. A'}Jres une ou deux ·heures. on les
cssuie dans un linge, puis on les rcpartit en lubes elrangles
de Roux et on sterilise a l':tutoclave maintenu pendant
20 minutes a 120°. Au sartiI' de l'autoclave, on ctale les
tubes a plat, de telle sorte que la face plane de chaque
fragment de pomme de terre so it dirigee en bas. On evite
ainsi !'incurvation des fragments et l'adherence de leur face
convexe it la paroi du verre. Apres quelques heures dans
cette position, on reI eve les tub~s et on les maintient
droits.
Pommes de terre glgcerin.~es. - Preparees comme ci-
dessus, mais, au lieu d.e,les tremper dans Ie bain de bicar-
bonate de soudll" on les immerge pendant 48,heures dans
de l'eau glycerinee if 5 a 6 p. 100. On remplit ensuite, avec
la meme eau glycerinee, ou du bouillon glycerine, les
tllbes de ROllx jusqu'fI l'etranglement. et on les garnit de
leur fragment ~e pomme de terre. Steriliser comme il est
dit precedemment.
I. - Serum coagule.
Repartir Ie serum dans des tubes stefiles jusqu'a une

hauteur de 5 a 6 centimetres. Incliner les tubes dans l'etuve
a coagulation en evitant de mouilier les cotons, Chauffer
jusqli'a coagulation complete de tous les tubes, sans depas-
ser 70-7~o. Eteindre, et' quand l'etuve est refroidie, retirer
,les, tubes', flamber et enfoncer les cotons ; capuchonner.
On coagule de meme Ie serum glycerine a 6 p. 100.
1. Cette immersion dans la solution de bicarbonate de sOude est surtout indispen-

suble lorsqu'on emploie des pommes de terre un peu anciennes, qui sont generalement
ires acides Les pommes de terre nouvelles Ie sont beaucoup moins. On peut les utili-
her sans "utre precaution.
J. - Gelose au sang de lap,in.

a) Gelose seche 7 grammes. Laver dans un courant d'eau
pendant environ 12 heures. Egoutter.
Peser dans une.capsule tan\e. Ajouter:
NaCI. 3 gr.
Eau. . . • .. Q. S. pour·450 gr. !Ie poids total,
plus In tare de la capsule.
Verser'le tout dans un ballon. Steriliser a l'autoclave' et

repartir par 3 cc. dans des tubes a e'ssai (droits).
Dans chaque tube prealablement liquefie a 45 0 au bain-
marie, on repartit ensuite environ 1 cc. de sang preleve
dans Ie creur d'un lapin avec une seringue sterile (voir
pour cette technique, chap. XIV, C). Avant la ponc-
tion, la peau du lapin doit etre soigneusement aseptisee a
l'iode Apres la ponction aspiratrice, changer l'aiguille et
la remplacer, pour la repartition du sang, par une autre
'niguille sortant de l'eau bouillante ; ou bien repartir direc-
tement avec Ie bec de la seringue debarrassee de son
aiguille, en evitant de Ie toucher avec les doigts.
b) Milieu de Navy-Neal, Ch. Nicolle.
(POUR LEISHMANIA ET TRYPANOSOMES).
Gelose. 14 gr.
NaC!. . . . . . . . . . . . . . 6 gr.
Eau. ........... 900 cc.
Faire macerer, dans un cr.istallisoir tres propre, la gelose

dans l'eau' distillee. Apres 5 a 6 heures, on renouvelle reau
distillee et on rejette celle-ci apres 24 heures de maceration
totale. On porte alors la gelose gonflee dans un vase
d'Erlenmeyer tare, et on ajoute la quantite d'eau distillt\e
necessaire pour arriver au poids de 914 grammes, puis
6 grammes de chlorure de sodium. On fait fondre a l'auto-
clave en sterilisant. a 120 0 pendant 30 minutes, puis on
filtre sur ouate hydrophile et on repartit par 8 centimetres
cubes, dans des tubes a essai de 15 centimetres de longueur
sup 16 millimetres de diametre, qU'on sterilise et maintient
droits pour la solidification.
Conserver des provisions de ces tubes bien bouches avec
un capuchon de caoutcho!lc.
PREPARATION DES MILIEUX DE CULTURE '63
Faire [ondre au bain-marie cette gelose a 55 0 , em~i'ron et

introduire dans chaque tube 4 centimetres cubes de sang
preleve aseptiquement a la seringue dans Ie cmur du lapin.
Melanger sang et gelose fondue en agitant legerement sans
former de huIles, et laisser faire prise, les tubes etant incli-
nes.
On garde ces tubes inclines a l'etuve a 37 0 pendant 2 ou
3 jours, puis· on les redresse, on les houche au caoutchouc
et on les consei've it l'obscuritejusqu'it usage.
K. - Plasma coagule de Gessard.

On recueillc aseptiquement"au sortir de la veinc du che-
val. du bmuf, du mouton ou du pore, 300 cc. de sang dans
]00 cc. d'eau distiIlec sterile contenant 20 grammes de chlo-
rure dt sodium. Apres depot das hematies, Ie liquide sur-
nageant est apte a se coagulcr par son melange al'eau, dans
1a proportion d'un dixieme en volume. Le coagulum ne se
retracte que faihIement ttt apres un long temps, meme a 'la
-temperature de l'etuve.
On peut reincorporer des hematies au taux originel et
realiser ainsi un equivalent du caillot sanguin, sous Ie
degre de dilution susdit. Pour ceia, les hematies sont
·mises dans 1'eau physiologique. La dose coaguIante est
cnsuite meIangee.
On peut introduire. dans ce milieu coagulable, du glu-
cose, de la gly<,:erine, des sels, etc ... en solution sterile. En
cas de retard darts la coagulation, ajoutera 1:1 dose primitiye
quelques gouttes de solution au dixieme de chlorure de
calcium. .
Ce milieu est utile pour les recheFches qui reclament
l'integrite des principes animaux et des proprietes humo-
rales.
'L. - Bouillon-reuf de Besredka-Jupille.
Reunir les jallnes de vingt mufs (350 centimetres cubes)

dans un grand verre a pied et,gjouter un litre' d'eau distillee.
L'eau do it etre pure et avoir une reaction neutre : dans Ie
cas ou elle serait acide, tln commence par la neutraliser.
Le temps Ie plus delicat de la preparation ~st lao clttrifi-
cation de l'emulsion au moyen de la solution de soude a

1 p. 100 : !'exces de soude rend Ie milieu impropre ala ('.ul:'
ture, Ie dMaut de soude nuit a la transparence du milieu.
On evite ces ecueilS' en versant d'abord une quantite de
sonde egale ala moitrede la quantite de jaunes reunis. Ainsi.•
a 350 centimetres cubes de jaune on ajoute, par petites por-
tions, 175 c()ntimetres cubes de solution de soude alp HlO.
On s'arrete un moment po'Ur s'assurer du degre de la
solubilisation en aspirant chaque fGis Ie jfiune dans une
pipette: On suit de la sorte la clarification; celJe-ci est arri-
vee au point optimumlorsque Ie liquide apparait transpa-
rent en couche mince, dans la pipette par exemple, et qu'il
reste legerement opaque en couche epaisse, ou a travers
les parois du verre a pied. U ne dizaine de centimetres
cubes, ajoutes a 175 centimetres cunes precedemment ver-
ses, suffisent generale~ment.
On complete avec de l'eau distillee, jusqu'a obtenir, dans
Ie cas particulier, sept litres de liquide qui renferme ainsi
un vingtieme de .iaune d'muf:Le DJilieu est reparti en boites
de Roux (50 a 150 centimetres cubes) e! sterilise a 110 0 pen-
dant vingt minutes.
II est bon de savoir que la quantite de soude 'necessaire
pour dissoudre Ie jaune d'muf n'est pas toujours_la meme.
Le milieu a l'muf convient a beaucoup d'especes micro-
biennes a vitalite breve, particulierement au pneumocoque,
au meningocoque, au streplocoque, au gonocoqlle, au micr'obc
de la coqlleluche et au melitensis. ;
1;e bacille tuberculeux s y developpe tres rapidement,
en voile tres mince et en poussiere fine dans la profondeur.
M. - Milieux additionnes d'hemoglooine.

10 grammes d'hemoglobine du commerce sont dissous
dans 90 centimetres cubes d'eau distillee additionnee de
10 centimetres cubes de solution de soude a 10 p. 100.
On sterilise it I'autoelave. On ajoute 1 centimetre cube
de ce melange a 9 centimetres cubes environ de milieu
nutritif (gelose fondue, etc ... ),
On peut preparer soi-meme l'hemoglobine en recueillant
aseptiquement du sang de cheval 'oli de bmuf dans un
.bocal contenant 2 volumes d' ean salee 'physiologique'pour
PREpARATION DES MILIEUX 1)E CULtURE 65.
} volume de sang. On Iaisse repos.er a la glftciere pendant

24 heures et on decante pour separer le..s g lobules rouges..
Ceux~ci sont additionnes d'une petite quantite d'elher. Par
ag)tat.ion l'hemolyse se produit tres rapideroent. On evapQr.e
r ether dans Ie vide et on filtre, a trave:rs un~ bougie. Cham-
berland (marque F), Ia solution d'hemoglobine qui peut etre
employee telle quelle en melange, en proportions va-
riables, avec les milieux de culture.
N. - Milieux additionnes d'exsudats ou d'extrait d'or-

ganes (AscHe, liquide d'hydrocele ou ce kyste oya-
rien, exsudats leucoc:ytaires).
Les liquides exsudatiques doivent avoir ete recueiUis

aseptiCluement. On les melange en proportions variables
avec les milieux de culture sterilises. Les exsudats leuco-
cytaires, pleuraux. peritoneaux, etc., dont la steritite n'e!)1;
pas certaine, peuvent etre melanges aVec parties egales de
glycerine a 30· Be ; on les conserve ainsi pendant plu-
sieurs semaines avant de les utilis,eF. pour s'en servir,
on les melange dans la proportion de 0,5 aLp. 100 aux
milieux tie cultRre liquides ou pFealablemcut liquefies et
ollles waintieut a l'etuve a 37~ pendant 48 heuPes avant
de les ensemencer
Milieux a extrail aleQoliCJue de tDie.
~ foie de cheval est rapidelu,ent lave a l'eau du Jlabine!.
dli~upe Ill} pet~ts mere~aux et hro:ye linemen!; au martier.
de porphyre j,llsqu'a obtention d'une pUFee. Olll aj<Ult.tl·
en5t)ite au fQie lion poids d'akool a 90 0 et Fon continoo de"
broyer pendant un quart d'heure La puree, alcoolt~e\est>
placee dans des bocaux a large goulot, o.U elle est agitee
deux fois par jour. Au bout de trois jours, on filtre s.ur,
papier. '
Cet extrait alcoolique de· foie se conserve tras longtemps
a la temperature ordin·~i~e a l'abri de fa lumiere. On
l'ajoute au bouillon ordinaire en voie de preparation;
imm~diatem~nt avant sa stevilisatioo. Le milieu ainsi
(J?btenu ne renfe:rn;lc pa-s d,'alcoo.l. qui s.'e"\1Ap.Qr6 pendant Ie
~u\f~g~. Si ron "\tellt 9bt~oill des mili.eull te.u.l1 a fait lim-
pid,es, sans pr.ecipitt. il sqffit d'ajQuter l:extfiaihv.anJ! la ill-
)IlCROBIOLOGIE 5
66 TECHNIQUES GENERAtES
lration du bouillon. Les meilleurs resultats ont ete opUmus
avec Ie bouillon renfermant 10 a 12 p. 100 d'extrait..
L'extrait alcoolique de foie de cheval renferme
0,885 gramtnes de glucose par litre; son acidite totale est
de 0 gr. 390 p. 1000; l'extrait sec est de 0,475 grammes
p.100.
O. '7 Milieux vitamines.
Recevoir du, sang dans un flacon siCrile. con tenant d~s

perles,de verre; agiter pour defibriner; mesurer la quantite
de sang defibrine et etendre de trois-a quatre foi~ Ie volume
avec de l'eau physiologigue ; chauffer a 800 pendant
15 minutes. Filtrer sur papler pour retenir les substan<{es
precipitees et steriliser par filtration a la bougie.
Ajouter ce liquide aux milieux de culture dans la pro-
portion de 5 a 10 % (XX gou'ttes dans un tube de bouillon
et X gouttes dans un tube de gelose en culot).
P.·_ Milieux de cultures anaerobies.
a) Le procede Ie plus pratique pour cultiver les microbes

anaerobies en milieux liquides consiste a repartii ces
milieux (bouillon par exemple) en tubes ou en ballons et a
recouvrir leur surface d'une couche epaisse de 10 a 15 mlIli-
metres environ d'huile de vaseline. On sterilise et 'on laisse
refroidir dans l'autoclave ferme. On ensemence a la pipette,
aprcs refroidissement, a travers la couche d'huile.
O'est Ie procede de choix pour Ie b. du tetanos (voir cha-
pitre XXXIX).
b) Pour les cultures sous cloche, on peut, soit faire Ie
vide. soit absorber l'oxygene par Ie melange suivant :
Acide pyrogallique. 10 gr.
Polnsse caustique. . • • . . 10 gr.
Eau distillee. •••.•. 100 ce.
Ce melange doit Cire prepare et verse dans les vases

immediatement avant la fermeture de ceux-ci.
II est commode d·avoir,·toutes preparees, deux solutions:
l'une de potasse caustique a 20 p. 100, l'autre d'acide pyro-
PREPARATlON DES MILIEUX DE CULTURE 67
a
gallique 20 p. 100. On les melange en parties egales dans
Ie tecipient dont il s'agit d'absorber l'oxygene.
On peut aussi, tres simplement, faire des cultures anae-
robies en se servant de deux tubes concentriques : l'un,
interieur, bouche ~ rouate, contient Ie milieu de culture
ensemence (liquide ou solide) ; dans Ie tube exterieur on a
verse 1 gramme d'acide pyrogallique en poudre. On y
ajoute, avec une pipette, 1 centimetre cube de solution a
10 p. ]00 de soude caustique et on bouche aussitot avec un
bon bouchon de caoutchouc qu'on recouvre de cire Golaz
ou de paraffine fondue.
c) Substances reduclrices sllsceptiDles d' eire incorporees aNX
milieux liquides ou solides (indicateurs de {'absence d'oxy-
gene)
Glucose. • • • 0,5 0. 1,5 p. 100 (Liborius.
San Felice, Vei1lon).
Sulfo-indigotate de sonde it 0,1 p. 100 Salomonsen).
Formiate de soude.. . . 0,3 it 0.5 p. 100 (Kitasato-
Weil)
Bleu. de methylene, sol. alcool. it 1 p. 100 qq. gil.
jusqu 0. faible coloration bleue.
Le s[tlfu]'e de calcium en poudre, sterilise it sec, introduit

en tres faible quantite (ce qU,i adhere it l'anse de platine)
dans des tubes de bouillon sterile, permet de cultiver, sans
autres precautiqns, un grand nombre de microbes anaero-
bies (M. Nicolle).
d) Tubes de Veillon (procede de choix pour les anaero-
bies intestinaux) :
On prepare de la gelose additionnee de 5 it 15 p. 1.000 de
glucose et de 1 p. 1.000 de nitrate de potasse I, que ron
repartit dans de gros tubes it essai (tubes de 2 centimetres
de diametre X 20· sur 10 a 12 centimetres de hauteur. On
sterilise al'autoclave, sans depasser 120', pendant20 minutes
(pour eviter la caramelisation 'du glucose) et on solidifie
rapidement en position verticale dans un courant d'eau
froide.
1. Le nitr:.te de potnsse empeche la p"oduction dc bulles de ga. hydrogene 'lui frag-

mcnteraient In gelose et gencraient }'isolentent ultedeur des colonies (Veillon el lIJa:e)~
On peut ajouter au .nitrate, co mIlle mntii~re azotce animale, 1 centimetre cube de
.erum sterile de cheval ou de lapin, par tube. Cetto addition de serum doit a)ors etre
raite apres la sterilisation de Ia gelose glum•••• lorsque cclI...ci cst refroidi. nux envi-
rons de'50·. .
68 TECHNIQUJ:$S GENERALES
On ensemence pal' piqure profonde. La c01\che de gelose

est assez epaisse Rour empecher Pacces de )''air au milieu
et au fond du tube.
Le prelevement des colonies s'effectue en piquant ceJles-
oi aveo une pipette it eflilure tres fine.
e) Bocal pour la culture 4-es microbes anaerobies,

Cet appaveil permet la culture des J;lJ.icrohes anaerohi~s
a 1a surface des milieux solides.
Les milieux ensemenC6S SO.11t places it l'interieur d\m bu.
cal clos special, dont l'oxygene est elimine pal' oOlnbinaiy
son avec l'hydrogen~ eQ. Ilre~~!1ce d'u.n ~a~al:x~eur ~e~on Ie
principe l?ro:{lolle par Laidlow.
Les appareils initiaux de Mac Intosh et de Fildes ~lllt ete
heureusement modifies par Brown qui a propose Ie dispo~
sitif suivant 'lui comprerid :
10 Le hC,lcal ttuae,robiqQ.e,
20 L'appareil de chauffage electr.ique destine it elever la
temperat\l.re d.u catalys.eur,
3 0 Le gellerateur d'hydrogeue.
l O 'Bocal anajrob.ique. - II est consti~u~ pa,r qn recjpient
cyli~<\riq\).e en verre, <\e 30 centim¢tres. de haut ~r 1~ CJ;lJ.. 5
de dhlmetJ;e. Le cou.vercl,<, eQ.
verre, s'ad~pte s-qr 1e :Q9cal I?~r
l'intermediaire d'un ~oint <i.e pl~s,
tiline; il est fixe solidement ~u
moyen d'W.l e\riel' roetalliq~' lV-lJni
d'une vis de serrfi.$ ~\).\ s.'ap.pJ:i"t
que &\\r 1e S~~UI~t du. cQu\',ercle
(tig· H)·
~e C9,wv6rcle e~t perce d'un 01'i ...
JFig. 11.
~c~ oirc\11~ira d'eo\'iroB, 3. CUI. de
d.~\\ll}.~tr~, ~tt,lf~ PAP un b.O,\l,Ch_o,u
d~ CflQo.\phOl}C (fig. 12). L.e boo. ...
chnn est tfav~rs.e p,a~ un tube d.~
verre dont l'extremite infed~
est garnie d'un tnbe de caoutchouc
qui descend j\lsqu'i1u, f01)(1 du l>.ocal i rextr¢,u;lite s.uper~~qre
du tube porte un l'obinet de verre roqe. La cata..lYl?e e~t
a.~so.J;ee Bar qe l'al\li.~nte platinee QU palladinee (A) qui es\
appliquee et maintenue sur un tube de verre (D) d'eJivh;oo
PREPARATION DES MiLIEUX DE CULTUR1£ 69
4 <:ifi. de' Jong·, au moyen d'an fil d~ re~istnnce fin~ len 01-
chrom~ enroul-e autOU): .au tube. Les extremites du tube
stmt munies de bouchtlos de 'OOou\chQut Ct et G 2' Le tube
et les bouchons torment une bobine autour de laquelle on
I
Fig. 12,
enroule une toile metallique a mailles fines qui est fixee

par des boucles de fil de' cuivre serrees sur les bouchons.
Dans Iii cavite comprise entre les parois de la hobintl ~t I'll
toile m'Ctallique, Ia ctltalyse peut se poursuivre sans d-an~
ger -d'explusiun grace 11, l'interposition, enke Ie tnmlyseuT
et Ie melange -expi'Otiif d'J:!ydrogene et d"O'ltygene de Ia toile
meta1lique qui joue Ie mi!mll r~le de protection que dans
la lampe de Davy. A leur sbrtie de In bobine, les fiI~ -de
.resistance sont mis ~n 'Connection avec deux fib electri.que'S
isoles, (diametre 1 mm.) qui trn~e:rsent Ie honchon du cOu~
vercle. Pour ns"Surer l"etancMite des joint~ (tube et fils
.eIectriques), les fates .supeneure et in~rieure au hou~
chon soot tecDUverte'!> d'une ctmche epa.isse..,de ci.te (Wbz,
puis noyees ·dans Un capuchon de p'nstiline dont ies fils
electriq'utls emergent pout pennetU'e les conne~tions,
avea l'appateil de -chauffage.
20 Appareil de chauffag'e electrique. - Pour Ie., chauffage.

on peut utiliser Ie courant urbain (110 volts), en interca-
lant sur Ie circuit une lampe a filament de charbon de
16 bougies.
30 Genera/eur d'hydrogene. - On peut utiliser, it cet effet,
un appareil de Kipp ou mieux une bouche a hydrogene. Le
gaz est recueiIli dans des bocaux de 5 a 10 litres, par·depla-
cement d'eau, disposes selon Ie schema de la fig. 13 pro-
pose par F. Gates. Le remplissage du bocal de reserve
Fig. 13.
(C) est assure au moyen du robinet it 3 voies B. L'hydrogene

rcfoule l'ea_u du bocal C dans Ie bocal B Le barbottage du
gaz dans Ie flacon A permet dc controler la marche de
l'operation. L'admission de l'hydrogtme dans Ie bocal
anaerobique se fait egalement au moyen du robinet B.
40 Fonctionnemenl. - Le bocal contenant les milieux
de culture et muni de son couvercle hermetique est mis en
relation avec Ie tubc F de l'appareil a hydrogene.
En meme temps que les milieux de culture, .on place
dans Ie bocal un tube servant de test de reduction et con-
tenant 10 cc. de bouillon sterile, dextrose it 2 % et additionne
de O. 1 cc. d'une solution aqueuse a 1 %de bleu de methy-
lene. La decoloration du bleu de methylene indiquera quc
les conditions d'anaerohiose sont correctement realisecs.
,
PREPARATION DES MILIEUX DE CULTURE 71
Le bocal hermetiquement clos est mis en relation avec

Ie tube F de l'appareiJ a hydrogene.
La manamvre s'execute dans l'ordre suivant :
1 0 Mettre en connection des fils de chauffage. L' allumage
de la lampe indique Ie passage du courant.
20 Ouvrir Ie robinet d'admission de l'hydrogene adapte
au couvercle du bocal. Le gaz traverse Ie flacon E bulle it
bulle. Apres quelques minutes, en raison de la contrepres-
sion du bocal, Ie degagement de gaz s'arrete et reprend
apres 5 it 10 minutes. lorsque commence la catalyse qui
reduit Ie volume du melange gazeux a l'interieur du bocal.
Pendant l'operation, Ia combinaison de l'hydrogene et
de'l'oxygene donne naissance a de la vapeur d'eau qui se
conqense et ruisselle Ie long des parois du bocal.
L'operation est terminee lorque l'eau s'est formee et
que Ie degagement gazeux cesse dans Ie flacon E. On ferme
Ie robinet du couvercle du bocal et Ie robinet d'adduction
d'hydrogene. On interrompt Ie courant electrique. Le bo-
cal est mis it l'etude.
Si la reduction est complete, Ie bleu de methylene du
tube indicateur doit se decolorer apres 24 heures de sejour
it l'etuve.
r) Milieux l'enfermant de l'acide pyruvique SOllS forme de
pyruvates aicalills .
.Les anaerobies stricts se developpent bien, en milieux
liquides contenus dans des tubes simplement bouches a
]'ouate, qunnd on ajoute· a ces milieux du pyruvate dc
sodium a la dose de 2 a 20 pour 1000, variable aVlfc l'espece
microbienne et la nature du liquide nutritif.
L'acide pyruvique et les pyruvates alcalins sont des corps
spontanement alterables; pour cette raison leur emploi
necessite les precautions suivantes :
10 Ne pas employer l'acide pyruvique du commerce a
moins qu'il vienne d'etre rectifie dans Ie vide et qu'il titre
au minimum 95 % d'acide pyruvique reel. Ce titre doit,
bien entendu, etre determine par distiilation dans Ie vide
et non par titrage volumetrique, certains acides' commer-
ciaux de preparation ancienne accusen>t en effetplus de 75 %
d'acide par dosage volumetrique alors qu'en realite iis con-
tiennent 30 % d'acide pyruvique distillable.
20 Comme pyruvate, employer de preference le sel de SQ-
dium .qui cristaUise hien et qui e.st ass'ez stable quand il

a ete prepare avec certaines precautions, lorsqu'il est par~
faitement sec et qu'il est bien exempt de bases ou de carbo-
nates alcalins libres. II se presente «Iors sou.s I'aspect d'une
poudre parfaitement blanche, sans trace de teintejaune, forr
mee de paiUettes fines et briIlantes.
3°Au moment de l'emploi, en preparerune solution concen~
tree, a 25 %. dans reau distillee ; la sMriliser par filtratron
sur bougie LG bien neuire at l'utiliser pour introduire asep-
tiquement la dose de pyruvate necessaire dans des milieux
fraicherilent prepares ou venant d' etre sterilises apres a\'toir
ete s'Oigneusement ajust~s au pH optimum. Ces milieux rloi~
vent etrecontenusdans des tubes ou recipients asse£ etroits;
il est commode d'employer des tubes de Pyrex ou de "\Terre
vert de 30 cm. de haut et de 18 miUimetres de diametre OU
l'on intt()duit du bouillon jusqu'amoiti'8 de 1a hauteur.
L~ solution-mere de pyruvate doit toujours etre prepacec
extemporanement et tres concentree. Les solutiol1s de
pyruvate se conservent d'autant moins qu'elles sont plus
diluMs. Elies s'alterentet s'alcalinisentspontnnementn froid
et beallcoup plus vile it chaud ; c'est pour cette raioon qu'il
ne faut pas les preparer a l'avance et encore moins les con~
server en ampoules sterilisees par lachaleur. On...pcllt dans
certains cas Ies tyndalliser; on peut aussi, pour les especes
ires strictement anaerobies, introduire Ia solution-ll}{;re
dans les milieux avant de les regenerer quelques instants a
l'ebullition, mais il faut ne pas perdrE? de vue que cas chauf~
fages ainsi que I action des constituants des milieux sur Ie
pyruvate transforment on alterent celui-ci. II faut done en
tenir compte et elever notablement Ies doses ajol1tees {tux
milieux.
4° Quand on prepare une solution-mere de pyruvate, soit
par dissolution du sel pur, soit en neutralisant l'acide pur,
il raul ioujo'lrs, avant sterilzsation. ajuster Ie la Bolution
Ii pH = 6,5 a 6,7 car c'est en milieu alcalin que la stabi~
lite est la plus faible. En raison de la concentration de la so-
lution-mere. ceUe tres legere acidite n'est pas genante si Ie
pH du milieu a bien ete amene a I optimum de l'espece que
l'on desirecultiver. II faut remarquerqu'en tubes,ouverts les
germes anaerobies sont plus sensibles qu'a l'abri de l'oxy"
gene aux variations de la r~actiop du mjlieu.
PRgPARATION.DBS'M1LlEUX DB CULTURE ,3
L'lIcUon favorisante '<tn pyruvate de 60dium 00 lh~nifest~

aussi bien, et meme pour des d'()~es moindr-es, quand on cul~
u'\le Iesanaerobies en vasesclos ou ~n milieux solides SYlvant
les techniques. uSlteUes EDlin il est bon de ntl\er que raoCid~
py.ruvique sous forme ue pyruvates nlcalins et, vrai~mbla.
blement, de plusieurs <leses prodo.its de t:ol'loensatmn, n'ae.
ti~e pas seulementle ut\veloppemen\ des anaerobies, mRis
egalement celui des aerobics. II favorise ailssi In cttlture de!!
ISpirochete!;. celIe des vegetaux inferieurs et certaines pro~
priet6s biologiques' on bioehitniques des bllcteries t.
Q. - Milieux voyageurs pour hemocul~ures.
L'hemocuitnre oucultnre du sang dans des milieux ap).:>ro-

pries n'est possible que si Ie transport du sang du lit du
malade au laboratolce peut etre fait sans risque de Ro-ail-
lure
Pour faice des hemocuitures« distance, Delater e\ Merle
ont prepare Jes milieux ge1atines ,suivanis qui pellveht etre
transportes eh uhemin de fer datl& n'importe queUI) position,
S¥lS se con.taruiner. et q'lti fournissent autant d-e resultats
positifs que les milieux a houilloh si.mple.
10 Pour les gennes du groupe coli·typhique :
nnll de hOltif' . 2{) 'Ce.
GlUI:OS(l. 0,20 ~r.
Peptone .. 0.20 «r.
Gelatine • . 2,50 gr.
2" Pour les autres germes :

Eon . . '200 Cc.
Glucose 0,59 gr.
Peptone • 6 Itl'.
set • . 1 gr.
Gelatine 25 gr.
Pour cultiver Ie meningocoque, Ie pneumocoque' et Ie

gonocoque, il stlffit de rem placer l' eau par une maceration
de viande bouillie et filtree, d'ajoutet 1/5 de blanc d'reuf al-
1. Pour la preparatlon de I'acide pyruvi'fue pur, employer la techniqu~ de lit L.-J.

SIMON These de Doctorat es sciences, ParIS, 189':', page 27); au sujetde!; applications
de l'acide pyruvique et des pyruvates en microbiologie, consulter ALBERT Bli=RTHELOT,
pulletin de La Societe d~ chiptie bioLogiqde, avri11924, tbmt! VI. h' 4.
calin dt( SacquepeEj-Delater ou 1/4 d'ascite et de modifier en

consequence la teneur en gelatine.
Ces additi(Jns sont faites apres alcalinisation et sans fil-
tration dans des flacons de differente capacit~, bouches par
un tampon de coton et recouverts par une fermeture ca-
neUe f celle-ci n'est rabattue qu'apJ;eS la sterilisation.
On rechauffe les milieux au bain-marie entre 3()O et 40 0
jusqu'a liquefaction complete. On les ensemence ensuite
et on les laisse refroidir en portant au besoin les ballons
dans de I 'eau fraiche. Au laboratoire, ces derniers seront
places dans l'etuve OU la liquefaction permettra la culture
comme daris du bouillon.
R. ~Cultures en milieu a ecoulement constant.
Pour eviter l'epuisement du milieu ou sa saturation par

les produits vitaux, Berednikov se sert de grands bal-
Ions de 1 a 2 litres de capacite, faisant office de reser-
voir de substances alimentaires et places a une certaine
hauteur Ce ballon a un orifice d'ecoulement forme par une
pipette effilee I laissant passer VI a X gouttes de liquiJIe
a Ia minute. L'extremite de Ia pipette efIilee est enfermee
dans un tube bouche au coton. L'extn!mite inferieure de ce
tube effilee et recourbee forme siphon pour maiptenir un
niveau constant. Pour eviter que !'ouverture du siphon
ne soit bouchee par les corps microbiens, on place au fond
du tube une petite quantite de coton. Un recipient conte-
nant un antiseptique rec;oit Ie Iiquide qui s'ecoule 'du
siphon goutte a goutte.
On sterilise separemcnt Ie ballon avec Ie tube de caout-
chouc et Ie tube avec Ie siphon ferme it Ia soufflerie. Apres
sterilisation, on ensemence Ie tube. La pipette en verre est
placee extemporanement et flambee; on Ia reunit au tube en
caoutchouc dOune part et au tube d'autre part.
On peut conserver, dans ces conditions, des cultures
pures. La contamination par l'air ne se produit pas, car l'ori-
fice capillaire du siphon se trouve constamment obstrue
par un ,courant de fiquide allant du dedans \iU dehors.
t. VQiI' c, R. Soc. de Riologi•• 1923, page 886.

CHAPITRE VI
MILIEUX DE CULTURE PARTICULIERS' A QUELQUES

ESPECES MICROBIENNES
A. - Milieux synthHiques sans rnatieres

albOrninoitles.
a) Liquide Raulin pour La culture des Aspergillus:
N° 1 Enu . . • • • . . • . 1 500 cc.
2 Sucre cnndi. . . • • . 70 gr.
3 Acide tnrlrique. . • .. . 4 gr.
4- Azolate d'ammoninque. • 4 gr.
5 Phosphale d'ammoniaque. o gr. 60
6 Cnrbonate de polnsse. . o gr. 40
7 Carbonate de magnesie. o gr. 25
8 Sulfate d·ammoniaque .• o gr. 07
!J Sulfate de zinc. . O. gr. 07
- 10 Sulfate de fer. . o gr. 07
-.11 Silicate de polnsse. d gr. 07
Steriliser par filtration sur bougie Chamberland, a froid,

pour ne pas intervertir Ie saccharose.
On peut avoir, stcrilisee d'avance a l'autoclave dans un
baIlon, l}ne solutjon de toutes les substances minerales
(nO 3 a nO 11) dans 500 centimetres cubes d'eau distillee, et
faire dissoudre, au moment de l'usagel 70 grammes de
sucre candi dans un litre d'eau qu'on vient de faire bouillip.
On melange a cette solution de sucre,la solution minerale
sterile et on verse dans une cuvette a photographie en verre
ou en porcelaine. Pour Ia culture de I'Aspe/'gilius niger, qui
s'effectue a la temperature de 35° environ, on recouvre Ia
cuvette d'une plaque de verre afin de reduire I'evaporation.
L'Aspergilills /llmigallls se cultive a Ia temperature de
33 0 a ~5° dans Ie meme liquide, qu'on repartit, sterile et en
couche peu epaisse, dans des hallom, a fond plat.
b) Milieu mineral'de PusEeUl':
Tnrtrate d'ammoninque. 1 gr.
SUcre cnndi. . , . . 10 gr.
Cendres de levures. . 1 gr.
Eou . . . . • . . . lOG cc..
76 TECHNIQUES GJ5NERALES
c) Milieu de Cohn:
Phosphate monobasiquede potassium. 1 ou 2 gr.
Sulfate de magnesie crist. pur. • . 1 gr.
Phospbate tribasique de calcium. o gr. 1
Tartrate d'ammoniaque. 2 gr.
Eau distillee,. . . • '. 200 ce.
d) Milieu d' Us-chinsky :

Eau . • • . • • • 1.000 cc.
Glycerine.. • . • • . 30 a 40 gr.
Chlorure de sodium pur. ,5 a 7 gr.
C~I~rQre -de calcium pur. o gr. 1
Sulfate de magnesium. . • . • 0.2 a 0,4
Phosphate bibasiqne tie pota~!;iult1. 2,0 a 2.5
Lactate d·ammoniaque. . • • • 6.0 a 7,0
AS'(lllrll.'gine: • , . • . . . . B.t>
e) Milieux ~ynthetiqlles de Ph. Lttsseur pour liI 'Culture des

microbes flu'Orescents et parliculierement du Bacillus chlorora-
phis et du Bacillus Le Monnieri
Milieu I.
Eau • . . . 100 ce.
A"paragine. . o gt. 700
Glyceriue . . • . '. 2 gr. 500
Phosphate dipotassique. o gr. 100
SuUate de magnesie. . o gr. 500
Chlorure de calcium. () 'gr._.t)40
Sulfate ferreux. o gi-. 1)10
Milieu II.
Hau • • . . • • . lOD cc.
Asparagine. . . . . '0 gr. 9bo
Suecillate d'ammonium G gr, 100
Glycerine . , . . . 2 gr. 000
Glucose . . • • . . 1 gr. 000
f>hosphotll dipotos!;ique. o gr. 2'50
Sulfate tie magnesium . o gr. 5l:lO
Chlorure de calcium. . o gr. 400
Sultate ferreux. . . • o gr. 010
f) Milieu de A. Ber.the1ot pOllr l'isolemenl des bacUries
aci~aminolyliques .
Eou 'de source. . , . . • • . . . 1.000 ce.
Phosphate dipotassique pur et sec . •. 1 gr. 50
Sulfate de magnesium cristallise. . .. 0 gr. 75
Acide amine. . . . . • • . . ., 1 a 2 gr.
Chauffer 5' a 1200, flltrer au papier et st<lriliser 20' a 1150.
Ce ~iIieu ne donne de bons 'resultats lIue si Ie phosphate

est bien dipot:l'Ssique, se metIer des produits commerciaux.
MILIEUX DEJ CU:piU'l/.E: 77
II est ~on de rappder que les bacteries acidaHiinolgtiq.l1es
vraies snnt celles qni se developpent abondamment qans.le
milieu ci-dessus et qui, par cops.equent, utilisent a la foi:s.
'Ie carbone et l'azote uniquement fournis p~l' l'acide amin'e,
Ces hacterifls sont ~pables,. suivant les conditioJ;ls d.e
milieu, soit de desa\Dinel' et d~Clarboxyler, voire meme dislo-
quer completem.ent, les moleoules amin.oiq:ues, soit d'aHa. ..
'1 ue l' separeple.tlt Fun au l'autre d-es groupes Nm oU C00R
en donnant dans Ie premieu Cas un aoide, dalls Ie s~on.d.
une amine.
On ne doit donc pas les confondre ltvecles espcoos, heau-,
voup plus nombreuses, .qui. dans les conditions d:e milioo ai . .
dessus inctiquees, ne pcuvent donner un niWlbre illimite
de p~.ssages successifs, ni foumer d':;l.Inines par de.carhoxy ..
lation de I'acide amine et qui sootsimplement tres des.ami.,
nantes. Ces s;:ermes quisont it lllaoor: al~ suite des. mioro.bes
proteolytiques et peptolytiques ~ ont deS' aminolytiqJlCS, mais
non des acidaminolytiques vrais.
Les acides amimlS a essayer sont pratiquement AU nom-
bre de quatre : q, alanine. ~ryptop.hane, tyuosine. et 'histi-
dine; ils do;vent provenir ae'~'hydrqlyse des prottiiques
et etre, bien entendu, completement exempts de Ba, Ag. Cu,
Hg, Bi ou Pb ain&i que d.'~mpu.retes awtee,g (l'histidine
s'emploie ~ous forme de monochlorhydrate}.
Distri.1.lUer les ll,lilieux pa' 10 cm.. d.am .' es. tub.eaa essais en
Pyrex ou eJ.l,verre vert. Ensemeneer avec la plu6peJi~ quan-
tile poss.iblt; de matiere (feces. exsudat de plaies <Ie 'uerre,
terre, suhstances en putrefaction). Par e'X-emple. avec les
matieres fecales y tremper simplement la pointe dufil de pla-
tine et ellsemencel' de manh!r~ ~ De prodw,r-e Ql:l,J:lS l~ w.ij.~eu
qu'l,l,J;l h es ~geli QQage b~t;¢fiieq ne &' C;te\l<,t:;t;D.t q~' ~ q~)q~~
millime.1a'es Qe 1'ex~ ..emi\e ql\ fil qe pll!tiJl~. ~ u,pres ~ ...
,lQura37°=-en.gelle J;al24 heures-r- en pal' l\l{lt ~ ~ qql,~ll;~
obtenue.eo.seqlencer UJ) Q.Quvea\1 tube ~ miti.eu eJecijf'~v~
lI.1)eMse deplatined!lH.2mm. dedia~l'e in~r~t\{. Wl'~
deux ou trois. aub1es.repiquages suc;cessif~et I;}C~'l(lr. ~ ~~pa.
ration sur p}a.ques de amtine onlinauc, ou. ep«q~e. ~*r lq
milieuobtenuen solidifiant par la gelose ou la gelatine Ie li-
quide nuttitif d'isolt-ment. Quand on opere'". avet:: tWill, dans
c~J;tl1i.n!? eM p<;lr\i<;w\en~m.ent favo.rI;}Qle.s~ oQ,qqti~nt p<Jrfoi,s,
des Ie 49 pas.sage, u.ne culture d'nne seule.espece bacteriesaCo
i8 TECHNIQUES GENERALES
C' est avec la tyrosine et 1'histidine qu!on obtient genera~

lement les rcsultats les plus interesfants; avec I'alanine
el. Ie tryptophane ne pas depasser 1 gramme pour 1.000 cc.
de milieu. Quel que soit l'acide amine employe', on ne peut
arriver'a_ selectionner les especes acidaminolytiques vraies
si ron ensemellce avec une trop gmnde quantite de matiere.
Enlin il y a des gerrnes, comme Ie B. pyocyanique, qui
n'etant pas des acidaminolytiques vrais, decarboxylants, mais
de puissants aminolytiques, envahiss~nt tous les milieux
amines qui ont ete chauffes, acause de la presence de com-
poses ammoniacaux p1'oduits par 1'action des alcalis sur les
amino-acides; dans ce cas, il faudrait steriliser, d'une part,
dans des tubes de verre vert, la solution aqueuse de
PO'Na 2 H et de SO, Mg, d'autre part, dans des tubes de Pyrex,
la solution saturee dans l'eau distiZlee de l'acide amine choisi,
puis iritroduire aseptiquement 'dans Ie milieu salin une
quantite calculee de cette solution d'acide amine inaltere 1.
B. - Milieu de culture pour les microbes

phosphorescen ts.
Poisson de mel' (harengs Crais ou maqne-

reaux). • . . . . _. . . . . . . 50tr gr.
Glucose. 10 gr.
Peptone. . . . 10 gr.
Asparagine. . . 5' gr.
Glycerme.. . . • 10 gr.
NaC!. .... 30 gr:
Enu q. s. pour . . 1 lit.
Faire bouillir d'abord it feu doux une heure, ou it rau~

toclave (non boulonne), {luis jeter sur un linge, s'assurer
que Ie liq\lide est alcalin au papier de tourhesol, filtrer
au papier Chardin, repar\ir en tubes ou en ballons et
steriliser it 120 0 pendant ~5 minutes. On peut gelatiner
ce bouillon en y ajoutant 1Q p. 100 de gelatine. La sterilisa~
tion sera alors faite de pref¢rence par chauffage discontinu,
1 heure par jour it 100 0 , 'pendant 3 jours consecutifs.
1. Avec In tyrosine opereI' avec la solution suluree houillantc (20 0/00), cur ,\ froid
1a s61ubilite de eet amino-acide dans]' ellu distillee est .culement dc 0 gr. 5 pa~ lill·e.
MILIEU.x. DE CULTURE 79
C. - Milieux de culture du B. Cyariogenus.

(Lail bleu).
Lai!.. • • . . • . • . • , 100 gr.
Glucose. . . . . . . 2 gr.
Lactate de chaux ou d'nmmon'iaque, steri-
lise Ii part dans 10 cc. d'enu. . . • . 1 gr.
Cultiver it 22°. Ou bien:

Bouillon de veau sans peptone. 100 cc.
Glucos~. • • . • . • • . ·2 gr.
Le meme bouillon gelose constitue Ie reactif des diverses

races de bacilles. Ensemence avec Ie B. Cyanogenlls, il
devient bleuatre.
D. - Milieux speciaux divers.

a) Milieux pour la cullure des ferments Ilceliques :
Vin rouge ou blanc. . . . . . . . 1 partie
Villaigre de vin filtre au Chamberland. 1 partie
Eau. . . • . . • • . . . . . 2 parties
au bien (Beyerinclc) :
Eau du robinet. . . . .
.
100 cc.
Alcool Ii 95-. . • . • • 3 ce.
Phosphate d'ammoniaque .. o gr. 05
Chlorure de potassium.. . o gr. 01
au encore
Alcool a 10-120 • • • • • • • • • • 1 litre
Vinaigre . . . , • . • . • . . • 100 cc·
Y ajouter 100 ce. d'eau dans laquelle on aura dissous it I ebullition
2 grammes de bitartrale de potasse et 2 g~ammes de maltopeptone.
b) Milieux pOllr la culture des ferments lactiques "

Maltopeptone. • . • 5 gr.
Glucose. . . . • . . • . . 10 gr:
Carbonate de calcium. • . . . 10 gr.
Ean. • . . . • • . . . . . 200 cc.
Milieu gelaline pour l'isolement des rel·menls. lacliglles

Petit-lait. . . • . 100 cc.
Chlorure de sodium. o gr. 0;;
Peptone . • " 1 gr.
Gelatine . . 10 gr.
c) Milieu de G. Bertrand el P. J)llchal<ek POIlI' la culture du

$0 1'ECJJN1UVES GENJJRALES
ferment lqcti9ue bu.lgare en milieu. non sucre (pour les I"I.sages

therapeutiques) :
Faire bouillir 30 grammes de touraillons (radicelles
d'orge dessechees) pelldant 15 minutes dans un litre d'eau
additionnee de 1 p. lQO de peptone Chapoteaut et de 3 p. 100
de carbonate de calcium precipite.
Repartir en tubes ou ballons et st~'riliser a l'autoclave a
115°. Dans ce milieu, ]a bacterie conserve toutes ses pro-
prietes biochimiques.
dl Milieu:¥( llQur la culture all..CJ.e[!obit; du Iel'llv:nt bu(y·

rique ~
Saccharose. . . . . . . Ii gr.
Phosphate d'ammoniaque . . 0,1 it 0,2
Carbonate de calcium. • • 5
Ean. . ..... . ~ •. 20.0 cc.
ou bien:
Ean qi&tillee. wg. cs:.
GI.~e. ou saccharose. 5,'gl'.
Callbqnate de .calcium. • 3 gt.
Phosphate de soude .. o gr. 05
Sulfate de magnesie.. . o I:fl". (),5
Chlorure de potassium .• o gr. 05
Pour l'isQI~ment qu ferment lJutyri.que. ou s~ sert de ce
milieu additionne de.15 p. 100. de .gelatine eb coule en tubes
inclines Les tubes sont maintenus sous une cloche a vi~e a
la temperature de 20 a 22°.
e) Mi1.i,eTJ, q,e Beg.er:iJ),Ck p"oW' la culture de&feI;IJI,cJ)Js de l'tlJ:ee

(Micrococcus ul'ere principa.lemenl) :
Haq d.e J;opin~ . . . .
Uree. • • . • • • • •
Acetate de soude. . • • .
., 1 litre
50 gr .
W 81'.
Phosphate neutre de potasse.. ().~, 25
f) Milieu de Delden pour la culture des ferments reducleurs

des sulfates :
ElJu de robinet. ....." .' .' '100 ce.
Phosphate acide 'de' potasse: o gr. 0&
Lacta'" de soude , . , • . • (» gr 0&
Asparogine., .' • . • . • o gr 0'"
Sulfatjl de magnesie ou de chaux. o gr, Q1
, Sulfate de fer. . , • • • • .::. • traces.
MILIEU~ DE CULTURE 81
g) Milieu d'Omeliansky pour la culture anaerobie des fer-

ments de fa cellulose:
Eau distillee. • 1.000 cc.
Phosphate de potasse. • I gr.
Sulfate de magnesie.. . o gr'. 05
Phosphate d'ammoniaque. 1 gr.
Chlorure de sodium . • . . • • . • traces
Cellulose sous la forme de papier Berzelius,
lave et sache.
'Repartir en tubes ou en ba1l6ns, Verser sur.la surface du

liquide une couche d'huile de vaseline et steriliser a rauto-
clave. .
h) Milieu de culture pour les teignes :
Peptone. 20 gr.
Gelose. 13 gr.
Eau. 1 litre
Fondre a 120 0
1 heure, retirer de l'autoclave et ajou·
ter:
Acide acetiqtyl cristallisable. • • . • . V gouttes
Glycerine. . . • • . . . • . . . 20 gr.
Remuer, porter a 1000 pendant 20 minutes a l'autoclave

non boulonn6 ; filtrer et repartir en tubes inclines.
i) Miliel1 de culll1re de Sabouraud pour les bacilles sebor-
rheiques: .
Ensemencer des comedons sur:
Eau de robinet. . . . . 1 litre
Peptone granulee Chassaing. 10 gr.
Glycerine neutre. . . • . 40 gr.
Acide acetique cristallisable. V gouttes
Gelose. . . • . . • . 10 gr.
Vne culture sur dix environ est pure d'emblee. Les autres
sont melangees de cocci polymorphes qui meurent en un
mois, tandis que Ie micro-baciUe sous-jacent survit.
II faut reensemencer assez abondamment.
j) Miliw de cullure pour les champignons inferieul's :
Eau. . . • • • • • . . . 1.000 cc.
Phosphate bipotassique pur et sec 1 gr.
Sulfate de magnesium cristnllise.. 0 gr. 50
Maltopeptone . • . . • • • " 5 cc.
Bitnrtrate de potasse. . . . • 0 gr. 50
Glucose masse blanc. . . . . . 25 gr.
Saccharose (sucre cristallise blanc).. 25 gr.
MICROBIOLOGIE 6
k) Milieu a l'extrait de malt pour les champignons infe~

l:ieurs ou les leuures :
Eau. • . . • . . . . . . • . 1. 000 ce.
Extr.ait de malt sirupeux "Progi~)) pour
bacteriologie N. L. . . . . . .. 100 gr.
Steriliser tel quel, ou apres addition de gelatine ou de gelose, par
3 chauflages d'une heure a 100 degres.
1) Milieux a la maltopeptone pour la culture en grand des

leuures pures :
10 Eau. : • • • . . 1.000 ce.
Maltopeptone. • . • 10 gr.
Bitartrate de potasse • 1 gr. 5
Sucre cristallise blanc. 100 gr.
Steriliser II 1150 •
20 Eau • . . • • • . 1.000 cc.
Maltopeptone. 10 gr.
Bitartrllte de potasse. . 1 gr.
Phosphate d'ammoniaque 1 gr.
Sucre cristallise blanc. . 100 gr.
Steriliser 111150 •
30 Ean . • • . . . • • 1.000 ce.
Nitrate d'ammoniaque. . o gr. 5
Phosphate d'ammoniaque {) gr. 8
Phosphate de potasse . o gr. 3
Sulfate de magnesie . o gr. 1
Bitartrate de potasse / • 1 gr.
Acide tarlrique • . . 1 gr.
Maltopeptone. 10 gr.
I Sucre cristallise blanc. 120 gr.
Steriliser II 1150 • (FernbaclL)
m) Milieu pour /'elude el l'z'solemenl des bacteries pheno.

[ogenes :
Eau • • • • . . . • . • 1.000 cc.
Sulfate de potassium. . . . o gr. 20
Sulfate de magnesium cristallise o gr. 20
Phosphate bipotassique . . . o gr. 50
Azotate de potassium. . • • o gr. 25
Chlorure de calcium . • . . . o gr. 02
Tyrosine en exces (exempte de Ua, Cu,
Ag, Pb. Bi, Hg). 2 gr.
Steriliser 20' II 115' . (.A. Hert'he10t.)
CHAPITRE VII
PRINCIPALES MATIERES COLORANTES EMP[,OYEES

EN TECHNIQUE MICROBIOLOGIQUE. - METHODES
USUELLES DE COLORATION DES MICROBES ET DES
PRO TOZOAIRES.
La coloration des microbes s'effectue <raprel; les memes

principes que celle des fibres vegetales et des tissus ani-
maux, c'est-a.-dire conformement auxlois physjco-chimiques
q)1i regissent les phenor.nimes d'adhesion moleculaire (ou
adsorpfion) et les phenomenes d'osmose.
Tantot les substances tres complexes, qui constituent les
corps microbiens, fixent les matieres colorantes par ~imple
adhesio!l ou « adsorption », comme Ie fait Ie charbon animal,
par exemple : tantOt ~lles se comportent comme des membra-
nes dialysanles qui laissent diffuser les colorants vers les
colloides intracellulaires (albumine, ca~eine, gelatine ou
collagenes, mucine, etc.), sur lesquels ils exercent des
actions chimiq.rles 4 extremement variables: coagulation, in-
solubilisation ou laquage, precipitation. etc.
Et comme, parmi les matieres colorantes, les unes sont
acides, les autres basiques, on con\toit que les substances
basiques ,par exemple tendent a s'uniraux substances acid,es
(sero-albumines, nucleines, ·.a.cide nucfeique. acide meta-
phosphorique) qui sont, les principaux constituants des
albuminoides, tandis qu'au contraire les couleurs acides
satureront leur acidit,e ''aux depens des sels alcalino-terreux
ou ammoniacaux qui entrent pour une large part dans la
composition de "certains tissus (fibrine. stroma globu-
laire. etc.).
Les coulcurs basiques, en raison de leur affinite elective
pour les protoplasmas microbiens riches en nucIeine et en
aci4~ 'metaphosphorique, sont donc les plus utiles en micro-
biologie.
! Cependant les couleurs acides rendent aussi beaucoup de
services comme colorants,de contraste, ou de fond, permet-
tant de meUre en valeur les,colorations electives.
8'4 TECHNIQUES GENERALES
Les couleurs d'aniline employees en technique microbiolo-

gique portent les noms indiques sur les c~talogues de leurs
fabricants et il arrive souvent que Ie meme produit, chimi-
quement defini, suivant qu'il est vendu par telle ou telle
maison, porte une denomination differente 1.
I. - Couleurs d'aniline.
A. - COLORANTS BASIQUES
a) Fuchsine (chlorhydrate. acetate ou sulfate de rosani-
line, derive du triphenylmethane). Divers noms commer-
ciaux : ruhine, roseine, fuchsine-diamant, rouge magenta,
rouge solferino. .
Excellent colorant nucleaire. Tres soluble dans l'alcool.
L'eau n'en dissout que 0,3 plOD.
Solution de Ziehl. - Triturer dans un mortier:
Fuchsine • • • • 1· gr.
Acide pbenique cristallise • 5 gr.
Aleool ii 950. • .10 ce.
Reprendre dans Ie mortier par :

Eau distillee. • 90 ce.
Filtrer apres 48 heures de repos.

Apres coloration par Ie Ziehl, on peut differencier, c'esh\-
dire eli miner l'exces de colorant qui n'est pas fixe sur les ele-
m~nts electifs, soit par l'alcool a 95", soit par l'alcool aniline
(10 volumes d'aniline pour 90 volumes d'alcool absolu), soit
par Ie gaiacol (solution a 10 p. 100 dans l'alcool it 90 0 ) .
h) Safral1ine (chlorhydrate de tolusafranine ou rose d'ani-,
line). Peu soluble dans l'eau (0,6 p. 100), tres soluble dans
l'alcool. Excellent colorant nucleaire. II est avantageux de
1. Toutes les t'natieres colorantes necessaires ;\ !'industrie et au Iaboratoire sont ~\

present fabriquees par des firllles franc;aises: Societe anonyme des Math!res colorantes
de Saint-Denis; Compagnie fram;nise de Matieres colorantes de &iint-Clail'-du-Rhone ;
Compagnie nationale des matieres colorantes (Etablissements Kuhlmann). CeUe der-
niere societe fabrique les prodmts RAL specialement etudies pour les recherches de
laboratoire. Us ont ete mis au point n l'Institut Pasteur qui continue it les contr6"
ler. On peut s'adresser pour ces prodults~ soit directement aux Etablissements
J{uhlmann, section des produits organiqueR, 134, boulevard Haussmann, it Paris, soit
aux Etahlissements PouJenc freres, 122, houlevard Saint-Germain, chez Cogit, chez
Jouan au n'importe quel fournisseur de produils de laboratoire, en exigeant la
marque RAt. garantie de l'origine et du control.. .
PRINGIPALES MATIBRES GOLORANTES 85
la conserver en solution alcoolique saturee et de diluer quel-

ques gouttes dans I'eau saturee d'aniline au moment de s'en
servir. On differencie avec l'a~cool it 95 0 ou avec l'alcool
acidule par 0,5 p. 100 d'acide chlorh),drique.
FormuZe de Babes (recommandee) : preparer d'avance,
dans un grand _flacon, de I'eau d'aniline saturee (une eau
d'aniline ancienne donne, en effet. de meiIleurs resultats
qu'une eau preparee extemporanement). Au moment de
l'emploi, on la filtre sur un filtre mouille et on la sature
de safranine.
c) BZeu de methylene (thiazine, chlorhydrate ou chlorozin-
cate de tetramethyl-thioninel. Marque RAL specialement
recommandee. C'est un colorant puissant, non toxique pour
les elements ceIIulaires vivants, a forte action elective sur
les noyaux, les granulations basophiles du sang, la substance
protoplasmique basophile des leuc09ytes, des hematies, des
plaquettes, la mucine et les granules de Nissl des ceIIules
nerveuses.
II est tres soluble dans l'eau et l'alcooI. Les solutions
meres alcooliques saturees se conservent bien Son pouvoir
tinctorial est plus considerable en solutjon legerement
alcaline.
BZell de LanZer:
Solution alcoolique saturee de bleu . 1 vol.
Solution aqueuse de potnsse a 1 p. 10.000. 2 vol.
Oubien, aulieu dela solution de potasse, eau saturee d'ani-

line et filtree (I 'aniline est soluble a3 p.100dans l'eau). Les
preparations colorees au bleu de Loffierdoivent etredifferen-
ciees par lavage rapide it I'eau acidulee·parO,5 p.100 d'acide
acetique, puis par une solution aqueuse de 10 grammes de
tanin (prepare it l'ether) dans lOOcc. d'eau (8 it 10 sec~>udesi.
Le bleu de methylene pur n'est pas polychromatique. Un
traitement chimique en milieu alcalin l.f transforme tres
facilement en derives d'oxydation (azur et violet de me-
thylene). Ces deux colorants, ou leur melange avec du bleu
de methylene inattaque, permettent d'obtenir des reactions
metachromatiques tres belles et des differenciations par-
faites entre les elements cellulaires.
Ce proceSSllS d'oxydation en milieu alcalin intervient
dans la preparation des bleus Borrel a l'argent, de Lr,ffler it
86 TECHNIQUES G~N~RALES
la potasse, des bleus borates. des azurs de Giemsa, des pre-

parations de Tribondeau a l'ammoniaque, etc.
Preparation du bieu Barrel:
Dans une fiole de 150 cc. environ, on met 3 ou 4 grammes
de cristaux d'azotate d'argent et 50 a 60 cc. d'eau distilIee.
Quand les cristaux sont dissous, on remplit la fiol~ avec une
solution de soude a 10 P" 100 et on agite: II se forme un pre-
cipite d'oxyde d'argent qu'on decante et lave a plusieurs
reprises a 1'enu distillee, jusqu'a ce que Ie liquide qui s'ecoule
ne bleuisse plus Ie papier de tournesol. On verse alors, sur
l'oxyde d'argent, une solution aqueuse alp. 100 de bIen
medicinal RAL. Le bIeu de methylene ainsi oxyde forme
un melange d'azurde methylene et de violet de methylene. On
laisse en contact pendant trois semaines au moins, en agi-
tant a plusieurs reprises, et on Eltre ; ou bien, si 1'on est
presse, on murit immediatement la solution en la chauffant
pendant 45 minutes, 'aU moins, it 1200 , it l'autoclave. Ce
liquide colorant est tres stable. 11 convient particulierement
a la coloration du sang et de ses parasites.
Azur Il (de Giemsa) :
Melange de chlorhydrate d'azur de methylene (azur Il et
de chlorhydrate de bIen methylene. Excellent colorant qu'on
peut substituer avantageusement au bleu de Lomer :
Solutions meres:
A. - AzurII • . . . • . . . . . 1 gr.
Eau pheniquee a 5 p. 1000 • • • 100 CC.
B. - Carbonate de sodinm a 1 p. 100.
On dilue, au moment de s'en servir, 1 cc. de solution A

dans 10 ou20 cc. d'eaudistillee(jusqu'it obtention d·un~solu·
tion transparente). A 10 cc. de ceUe solution on ajoute 5 it 10
gouttes de B. Colorer 10 a 15 secondes. Laver a reau et
seeher.
Pour les usages courants du laboratoire, on emploie gene-
ralement les solutions de bleu pheniqlle de Kuhne ou bomte
de Kolle, qui se conservent bien:
Blell pheniqlle de Kuhne:
On broie dans un mortier :
Bleu de methyMue medicinnl . 2 gr.
Acide phenique cristallise . . 2 gr.
AI cool a 95 0 • • • • • • • 10 cc.
On verse dans un fl~con bouche. a l'emeri et on laisse In

,.-
PRINGIPALES' MATIERES GOLORANTES 87
couleur se dissoudre lentement. Apres 24 heures. on ajoute :

Eau distillee . • • 100 ce.
On agite et on filtre.
Bleu borate de Kolle:
Solution de 2 grammes de bleu medicinal dans une solu-
tion aqueuse de borax it 5 p. 100. Les colorations sont meil-
leures, avec un liquide prepare depuis quelques jours.
d) Le bleu polychrome de Unna (marque RAL) est une pre-

paration speciale tres metachromatique, c'est-a-dire qui
permet de colorer en nuances caracteristiques les .difTerents
elements chromotropes des celluies ou des tissus (par
exemple la substance amyloide en violet. la mucine et les
tissus cartilagineux en rouge). Apres son empIoi, OIl aoit
laver rapidement et differencier par l'ether glycerique de
Unna etendu de 5 parties d'eau, puis laver a fond a rea\!
distillee et deshydrater it l'alcool absolu.
e) La thionine (violet de Laulh) possede des proprietes
metachromatiques analogues. Son emploi est tres.commode
avec Ia formule de Maurice Nicolle:
Thionine . • . . • • . o gr. 5
Alcool absolu. . • . . • 10 ce.
Acide pbenique crislallise • S gr.
Triturer et laisser dissoudre 24 heures dans un flacon,

puis ajouter :
Eau dislillee . 90 ce.
et filtrer.
Les coloratious sout meilleures avec les solutions vieilles
d'au moins 3 semaines. Pour differencier, on lave a l'alcool
a 800 ou 90°.
Le vieillissement etant assez inconstant, nous recomman-
dons Ie mode operatoire suivant, qui permet d'obtenir une
solution parfaite, immediatement utili sable :
Dissoudre la thionine a saturation dans l'eau distillee.
Precipiter parune solution de soudecaustique a 10 p. 100.
Recueillir Ie precipite sur un filtre et Ie laver it l'eau distillee
jusqu'a ce que Ie liquide sortant du mtre ne soit plus alcalin.
Reporter Ie precipite dans un flacon et l'y dissoudre a
saturation dans de l'eau pheniquee it 2 p. 100. Laisser

reposer 24 heures. Filtrer.
La solution est des lors prete it l'usage.
f) Le bleu de toluidille (chlorozincate de dimethyltolu-
thionine) est egalement tres utilise et offre sensiblement les
memes avantages que la thionine. On peut l'employer pour
les colorations vitales, comme Ie bleu de methylene, parce
qu'il n'est pas toxique. Pour les preparations de frottis
fixes ou de coupes, on se sert de solutions it 1 ou 2 p. 100
dans l'eau pheniquee,.ou bor-atee it 1 p. 100. On differencie
aveC une. solution aqueuse de tanin a 10 p. 100 ou avec
l'alcool absolu additionne de 1 p. 100 d'acide oxalique.
g) Violet de methyle ou violet de Paris, violet 5 ou 6 B, me-
lange de chlorhydrates de tetra, penta et hexamethylpararo.
saniline. Tres soluble dans l'eau, l'alcool, Ie chloroforme.
Employe en solution dans l'eau saturee d'aniline (10 ce.
de solution alcoolique saturl\e, dans 100 cc.) avec diffe-
renciation par l'alcool au par l'iode (solution de Lugol) et
I'alcool. Ou bien en solution acMique :
Solution saturee dans l'alcool it 96°. 10 cc.
Eau distillee. . . . . . • . . 20 cc.
Acide acetique crislallisable. . • • 2 cc. 5
Colore Ie protoplasma cellulaire en bleu, la s'p.bstance

amyloJde en rouge.
h) Violet de gentiane.
Melange de violet de methyle et de violet cristallise
(chlorhydrate d'hexamethyl-pararosaniline avec un peu de
dextrine).
Pour les frottis, exsudats, cultures et pour la reaction de
Gram, on emploie la solution suivante, qui se conserve bien:
Solution alcoolique saturee de violet de
gentiane. . • . ....... 10 ce.
Ea';! phimiquee II 1 p. 100.. . • • • . 100 cc.
Pour les coupes it differencier par Ie Gram, la formule

d'Ehrlich est meil1eure :
Violet de genliane. 1 gr.
Alcoo!. . . . . . 15 cc.
Eau saturee d'oniline. 85 cc.
/
PRINCIPALES MATIERES COLORANTES 89
i) Violet benzyle (ou violet methyl5B,6B, 7B, violet 6B).

Memes techniques. Coloration plus bleue qu'avec Ie violet
de methyle.
j) Violet cristallise (chlorhydrate d'hexamethyl-pararo-
saniline). Tres soluble dans I eau et l'alcoo1.
On pent employer une solution it 1 p. 30 dans l'alcool it
950 pour colorer Ie bacil1e tuberculeux par exemple, et diffe-
rencicr par l'acide azotique it 0,1 p. 100, puis rapidement
par l'alcool
On I'utilise aussi pour la preparation du milieu de Dri-
galski-Conradi qui sert Ii isoler Je bacille typhique (voir
chap, XXXII).
k) Veri de methyle (vert it l'iode),
Soluble dans l'alcool et I'eau, insoluble dans l'alcool amy-
lique et Ie chloroforme.
Excellent colorant pour la chromatine nucleaire; colore
faiblement les microbes. On l'emploie en solution saturee
dans l'alcool absolu. a laquelle on ajoute 0.5 p. 100 d'acide
acetique cristallisable. II faut ensuite differencier et des-
hydrater les preparations par l'alcool absolu, additionne de
1 p. 100 d'acide acetique.
I) Le vert malachite (chlorozincate, oxalate ou sulfate de
tetramethyldiamidotriphel?yl-carbinol, vert de Chine, vert
diamant, malachite) est d'un usage courant, On l'emploie
it l' etat de chlorozincate pour la differenciation du bacille
typhique selon la methode de Lofiler.
m) La pyronine est souvent utilisee comme conleur ba-
sique pour la preparation de melanges neutres. Ses solu
tions aqueuses sont rouges et fluorescentes.
On l'associe parfois an vert methyle (Pappenheim) pour
colorer les elements basophiles.
n) Ve.mvine (colorant azoique, brun de phenylene ou de
cresylene, brun de Bismarck). Colorant brun qu'on dqit dis-
sondre dans l'eau it l'ebullition et qu'on filtre apres refroi-
dissement. S'emploie en solution aqueuslt alp. 100 ponr
teindre en,brun les noyaux, les cartilages, la mucine' et aussi
les microbes. On diflerencie par l'alcool absolu. Surtout
90 TECHNIQUES 6ENERALES
employe pour les doubles colorations et parfois pour 'le5

colorations vitales.
0) Rouge neuire (marque RAL). Tres soluble dans reau
qu'il teinte en rose legerement violace. Avec une faible trace
d'acide organique, il devient rouge fuchsine et, avec les
alcalis, jaune bruno La faihle teneur en alcali des eaux de
source suffit a Ie faire virer au jaune bruno
Ce reactif entre dans la composition de beau coup de
milieux de culture speciaux. II.colore, comme les couleurs
basiques, les noyaux et les substances basophiles. II teint
en rouge Ie protoplasma des leucocytes et des lymphocytes,
Jes granules basophiles des mononucleaires, les granules de
Nissl, la mucine.
On l'emploie egalement en solution a 0,5 p. 100 dans l'eau
salee physiologique pour les colorations vitales du sang. II
colore en rouge Ie.:; cellules et tissus vivants. II n'est pas
toxique, de sorte qu' on peut l'injecter dans l' organisme des
petits animaux.
B. - COLORANTS DIRECTS
Rouge Congo. Azoique (benzidine tetrazotee\sur 2 mole-

cules de naphtionate de sodium).
Employe pour les celluloses et les colorations vitales.
Solution a 0,5 p. 100 dans l'eau. Tres sensible aux acides
mineraux qui Ie font virer au bleu.
Benzo-bleu bl:illant 6 B ou bleu pur direct 6 B (dianisidine
tetrazotee sur 2 molecules aeide SS).
Non toxique. Employe pour les colorations vitales. Tres
soluble dans l'eau.
C. - COLORANTS DES GRAISSES
Electifs en raison de leur solubilite dans les corps gras :

a) Soudan III ouecarlate au grasA (amidoazobenzene dia-
zote sur betanaphto 1).
Colorant diazoique, insoluble dans l'eau, soluble dans
PRINCIPALES MATIlmES COLORANTES 91
I'alcool et les corps gras. Est utilise pour colorer les parti-
cules graisseuses. (Soudan III BX et ecarlate R pour gtais-
ses ; marque RAL recommandee.)
Utilise aussi pour la coloration du liege en histologie
vegetale.
b) Blea d'indophenol (par action de la nitrosodimetyla-
niline sur alpha-naphtol). Produit insoluble dans reau,
soluble dans I'alcool et les graisses .
.. ..
\
D. - COLORANTS ACIDES
(Sels a base in colore. ncide colore, colorants de fond electifs.)
a) Eosine. Il en exist~ plusieurs varietes, qui toutes sont

des sels alcalins d~ la tetrabromo-fluoresceine. La meilleure
est,l'eosine marque RAL nO 225 pour histol~gie, soluble dans
J'eau et dans 1'alcool. C'est une couleur acide bibasique qui
teint fortement en rouge vermillon les elements oxyphi-
les des cellules des tissus. On l'emploie en solution aqueusa
a 0,5 p. 100 dans I'alcool a 70 0 • Son action est rapide. On
elimine I'exces de couleurpar lavages plus ou moins prolon.
ges a I'eau ou a l'alcool faible. L'eosine est d'un usage cou-
rant pour les doubles colorations et eritre dans la composi-
tion de plusieurs melanges d'une utilisation tres commode
pour la coloration du sang etdes parasites sanguicoles (eosi-
ne-bleu, eosine-vert, Giemsa. Romanowsky, etc.); dans
ce dernier cas, employer l' eosine dite extra cristallisee
RAL.
b) L'erylhrosille ou eosine bleuatre est Ie sel sodique
de la tetraiodofluoresceine. On I'emploie comme I'eosine.
Les tons obtenus sont plus violets.
c) Orange G (aniline diazoiee sur sel G). C'est un des
meilleurs colorants plasmatiques. OI1l'emploie -en solution
aqueuse a 0,5 p. 100 ou meme en solution plus faible. Son
action est tres rapide. ,
D'autres azolques sont aussi employes comme colorants
de fond: chomotrope 2 R. teint en rouge fuchsine; eear-
late de Biebrict ; pomeall S, SS, 6R, etc.
d) Fuchsine acide (scI de sodium de la fuchsine trisl1l-

fonee, rubine S ou amaranthe G; rubine S). - Tres soluble
dans l'eau (20 p.l00) ; beaucoup moins dans l'alcooL Bon
colorant plasmatique et de contraste en solution aqueuse a
0,1 p.100 dans l'alcool dilue. Son action est intense et rapide.
On differencie avec l'eau picriquee saturee ou avec l'alcool
acidule par l'acide acetique.'
On peut employer de meme les vert et violet acides.
e) Acide picrique (trinitrophenol, colorant nitre). S'em-
ploie en solution aquel1se ou alcoolique saturee.
,. .
E. - COLORANTTS COMPOSES
Ces colorants, en melanges plus ou moins neutralises, de

telle sorte que chaque couleur garde pourtant ses proprietes
electives, sont d'un emploi commode. surtout pour l'etude
du sang. Leur preparation est assez delicate. II est avanta-
geux de les acheter tout faits. Les solutions sont inaltera-
bles, pourvu qu'on les tienne en flacons bien fermes, a l'a-
bri de la lumiere.
a) Melange d'Ehrlich-Biondi-Heidenhain. I
On prepare separement des solutions aqueuses saturees
de fuchsine acide (Rubine S.), orange G. et veri melhyle. On
les melange dans les proportions suivantes. pour faire la
solution mere :
Fuchsine acide 4 cc.
Orange G . . 7 cc.
Vert methyle • 8 CC.
Pour l'usage, on verse 1 centimetre cube de cette solution

mere dans 50 centimetres cubes d'eau distillee. _
L'action est lente (24 heures). On porte ensuite les pre-
parations pendant 2 heures dans de l'alcool additionne de
2 p. 100 d'acide acetique, puis on deshydrate par l'alcool
absolu acetique (acide acetique 1 centimetre cube p. 100
centimetres cubes d'alcool absolu), enlin on passe au xylol.
La chromatine est ainsi coloree en bleu, Ie protoplasma en
rouge.
PRINGIPALES MATIERES GOLORANTES 93
b) Triacide d'Ehrlich. Compose des memes colorants que

Ie precedent, mais en proportions differentes :
Solution saturee d'orange G. • . 30 ee.
Solution saturee de fuchsine aeide. 6 ee.
Eau distillee • 15 ee.
Aleoo!. • . • 15 ec.
On agite, puis on ajoute :

Solution snturee de vert methylene 12 ec.
Alcool • . 10 cc.
Glycerine • . 10 ce.
Meme differen?iation par l"alcool iode acetique.

c) Colorant de Leishman. Sur la lame sechee, non fixee,
verser un nombre de gouttes (8 a 10) suffisant pour recou-
"rir Ie frottis. Couvrir la lame, pour eviter l'evaporation
de l'alcool, avec Ie couvercled'uneboite de Petri, ou la placer
dans une boite de Laveran. Faire agir 30 secondes a 1 mi-
nute. Ajouter sur la lame un nombre de gouttes d'eau dis-
tillee neutralisee 1 double du nombre de gouttes de colorant.
Agiter pour melanger. Laisser colorer 5 a 10 minutes.
Rineer a l'eau de source ou a l'eau distillee.
Le colorant (marque RAL) est livre en solution toute
prete ou en poudre. Pour preparer Ie colorant avec la
poudre, mettre cette derniere en solution dans l'alcool
meLhyliqne a 990 5 (pur et neutre) a raison de 2 gr. 5 par
litre. Faire la solution a froid ou a l'etuve a 37 0 en agitant
de temps en temps. FiItrer apres 48 heures.
9-) Colorant de May Grunwald (marque RAL). (Eosinate de

bleu de methylene.) Verser sur Ie frottis non fixe 10 gouttes
de liquide de May Grunwald, couvrir comme dans la techni-
que de Leishman. Apres 2 ou 3 minutes, ajoutcr 40 gouttes
I
1. La mnuuu;se qualite de l'eal! distillee est la cause fa plus friquente d'insucre. dans
tau. lesproced" de coloration derir!is d_la methode de Romanowsky. Elle doit ctre par·
faitcmentneutrt, c'est-a-dire avoir nne concentration en ions hydrogene de pH7. Or,
reau distillee est generalement acide. Voici un procede simple de neutralisation indique
par POl1selle : un tube it essai d'environ 16 millimetres de diamelre. tres propre et
l'ince it reau distillee, porte un trait au diamant au au crayon gras a 10 centimetre$
cubes. On verse de reau distillee jusqu'au trait. on y fait tomber 4 gouUes de bromo-
cresol pom'pre en solution aqueuse it 0,04 p. 100 et on ag\te. Le liquide prend generalc..
ment une teinte vert jnune; on verse alors goutte a goutle. avec tme~plpette effiIee, en
agitnnt apr". cha'lue goutte, un. solution 1/100 normale de carbonate de soude jus-
qu'D. ce qu'on obhenne une teinte violette. Cette eau est employee pour diluer les colo-
rants nvec rindicateur qu'elle contient.
d'eau distillee neutralisee. Bien melanger, laisser agir '1 ou
2 minutes, puis laver a l'eau distillee.
Ce colorant D;'est pas p'ropre it donJ;ler seul une coloration
convenable des frottis. Il est destine a servir de premier
temps a Ia methode panoptique' de PaP1?enheim. 11 fixe
Ia preparation et met en evidence les 'elements acidophiles
et les granulations neutrophiles.
II est vendu en solution prete pourl'emploi, ou en poudre.
Dissoudre cette poudre dans l'alcool methylique pur, ala
dose de 2 gr. 5 par litre.
e) Colorant de Wright (marque RAL). Meme technique

que pour Ie colorant de Leishman.
f) Colorant de Giemsa. 10 Methode classique avec fixation

prealable. Fixer la lame prealablement avec de l'alcool
methylique ou avec Ie colorant de May. Grunwald (indique'
ci-dessus). Preparer dans une largeeprouvette, oudans une
boite de Laveran, une dilution de colorant de Giemsa danS'
l'eau distillee; neutralisee, a raison de:
Eau distillee. • • • . . • • 10 cc.
Colorant de Giemsa. . • • • . o cc. 5
Plonger la lame, sans l'avoir sechee, dans Ia solution de

Giemsa diluee, laisser colorer 10 minutes al). minimum,
I'aver a l'eau.
La fixation prealable de la lame peut eire faite en se ser-
vant du colorant de Leishman. On fixe 30 secondes a 1 mi-
nute par quelques gouttes de colorant de Leishman pur. Au
bout de ee temps, on egolltte l' exces de colorant et, sans laver.
Q.A plonge dans Ia solution diluee. Cette methode remplaee
Ia nouvelle methode rapide de Giemsa, et la solution de
Leishman est employee Comme Ie « Farbfixierenlosung )l.
Elle donne d'excellents resultats avec les pretozoaires.
2 0 Methode rapide. Verser sur Ie frottis, non fixe, 20
gouttes du colorant. COllvrir la lame pour eviter l'evapo-
ration de l'alcool. Laisser agir exactement 30 sect'lndes.
Ajouter ensuite 20 cc. d'cau distillee neutralisee. :Agiter
p,our hien melanger et laisser agir au mains une demi-
heure.
PRINCIPALES MATIERES COLORANTES 95
Lavedl.l'eaudistillee et secher.
Le colorant de Giemsa se vend sous deux marques :
MarqueR, donne des colorations intenses, recommandee
pour les colorations rapides.
Marque L, recommalJdee pour les colorations lentes; il
pn\cipite rilOins rapidement que Ie colorant marque R.
Le colorant marque Lest aussi vendu en poudre, ce qui
est avantageux pour les transports; cette poudre est mise
en solution a raison de 0 gr. 76 dans un melange de:
Alcool metbylique. . • . • . . •• 75 gr.
Glyceyine. . . • • . . • • . .. 25 gr.
Le melange est mis a retuve it 370 et agite frequemment .

.Filtrer apres 48 heures.
g) Panchrome de Laveran (hieu de methylene, bieu de

toluidine, azur et violet de methylene, eosine). Ce colorant
peut etre employe en dilution de 1/2 centimetre cube dans
10 centimetres cubes d'eau distillee neutralisee, de la mem.e
fa!(on que Ie colorant de Giemsa, apres fixation du frottis par
un des procedes decrits.
II peut a'Ussi etre employe seul. realisant a la fois la 'fixa-
tion et la coloration de la lame.
Dans ce dernier cas, placer la lame a plat dans une boite
ae Laveran, versc~ sur Ie frottis 1/2 centimetre cube au
colorant, recouvrir, laisser agir comme fixateur pendant '3
minutes, ajouter 10 centimetres cubes d'eau disti'llee, me-
langer, laisser colorerlO a 20 minutes au mOIDs (1/4 d'heure
pour les protozoaires).
h) Panchrome de Pappenheim.
10 Fixer Ie frottis :it l' alcool methylique ou a'Vec Ie coloran t
de May Grunwald.
2 0 Egoutter la lame et la plonger, sans la secher, dans une
dilution <iu panchrome de Pappenheim prealablement pre-
puree a raison de :
Pancbrome ~e Pappenh eim. . . . • . 1/2 cc.
Eau distillee neutralisee. • . • • • • 10 ce.
Laisser colorer 15 a 20 minutes. Laver et seeher.

..
II. - Colorants non anilines, electifs
des noyaux cellulaires.
A. - HEMATEINE ET HEMATOXYLINE
a) Himateine alanee de 'Mayer (colorant nucleaire).

Eau . . . . . • • • • • • • . . 1.000 cc.
Alun de potasse. • • . • . . . • • 50 gr.
Chauffer jusqu'a dissolution de 1'alun, puis ajouter :

Hemateine. • • . • . • . 1 gr. dissoute dans:
Alcool absolu. . • • . • . 50 cc.
Melanger, laisser refroidir, filtrer. Laisser vieillir avant

1'usage, mais pas plus d'un mois, car Ie melange rougit a la
longue et colore bien moins. On peut garder separement
les deux solutions.
b) Hematoxyline Delafield.
A 400 grammes d'eau satureed'alun ammoniacal, on ajoute
4 grammesd'hematoxyline cristallisee, dissoute dans 25 cen-
timetres cubes d'alcool absolu. On laisSe reposer a la lu-
miere et a 1'air pendanttrois jours dans une capsule. On filtre
et on ajoute 100 grammes de glycerine et 100 grammes d'al-
cool methylique. On ahandonne au repos pendant plusieurs
jours dans un flacon bouche. Quand la solution est devenue
tres foncee, on filtre de nouveau et on repartit en plusi"eurs
flacons bouches.
c) Hematoxyline de Weigert (laque cuprique).
On mordance les coupes par immersion pendant 30 mi-
nutes dans une solution d'acetate de cuivre alp. 100. On
colore par:
Hematoxyline de Heidenhain. . • ., 0 gr. 50
Eau. • • . . . • . • . . . . . 100 cc.
Puis on differencie par la solution' suivante :

Borate de soude. • . • • 2 gr.
Ferrocyanure de potassium. 2 gr. 50
Ellu distillee. • • . • • • 200 cc.
PRINCIPALES MATIERES COLORAN'J'ES 97
Si les coupes sont surcolorees, on les passe rapidement

dans l'alcool chlorhydrique:
Alcool a 70·. • . • . . • . • • . 1 Ii tre
Hel pur.. • . . . . . • . . • . XXXIII gU.
Puis on lave a l'eau distillee, deshydrate, etc.

d) Hematoxyline au fer (Jaque ferrique).
Mordancer les coupes sur lame pendant 30 minutes it 24'
heures dans Ia solution suivante :
Alun de fer ammouiacal (sulCate double
d'lImmoniaque et de sesquioxyde de ter). 1 a 3 gr.
Eau distillee. • • . . . . • • " 100 ce.
Laver rapidement, puis colorer pendant24 heures par une

solution a 0, 5 p.lOO d'hematoxyline de Heidenhain. Quand
la teinte est uniformement noire, on. rince a reau et on
differencie doucement et plus ou moins longtemps par Ja
solution d'alun de fer ammoniacal, jusqu'a ce que les
noyaux et centrosomes apparaissent au microscope en
hleu noir. On arrete la decoloration par lavage a l'eau
lorsqu'on Ja juge suffisante.
n. - CARM IN (colorant .nucleaire. reactif de la chromntine).
a) Carmin chlorhydrique. MeUre dans une capsule de por-

celaine 1 gramme de carmin. Ajouter peu ii. peu Ie melange:
Acide chlorhydrique. . . . • . . • I
Eau dislillee. . • . . . • . . . .) ii1l 2 cc.
en agitant avec une 'baguette de verre, jusqu'a formation

d'une bouillie homogene, violacee. Laisser au repos 1 a 2
heures, puis ajouter :
Alcool a 95 0 • • • • • • • • • • • 200 cc.
Verser dans un ballon it fond rond, bouche a1'0uate, tare,

puis eyaporer au bain-marie jusqu'a reduction de moltie.
Eviter l'inflammation des vapeurs sortant du ballon. R~paI"
tir ensuite en flacous
, bouches a l'emeri pour conserver.
~
b) Carmin de Orlh.
Sol. saturee a froid de carbonate de lithine. 100 ce.
Carmin • • • • • . . . . . . . • 2 gr. 50
lfICROBIOLOGIE 'J
Pour donner relection, traiter Ia coupe (apres coloration)

15 it 30 secondes par:
Acide chlorhydrique o ce. 5
Eau . • . . . . 50 ee.
Picrocarmin de Orth.
Carmin de Orth, Ii thine 1 vol.
On melange;
Eau picriquee satllrce . . . . . . . . 1 a 2 vol.
Apnis coloration, Jes coupes sont portees dans Ie fixateur
suivant:
Alcool absolll. . • . 70 ce.
Eau picriquee saturee . 30 cc.
He! pur. . . . , . o gr, 5
c) Picl'ocQl'min de Ranuier. Dissoudre du carmin a satu-

ration dans de l'ammoniaque et verser dans une solution
aqueuse d'acide picrique saturee.
Chauffer doucement au bain-marie dans une capsule pour
evaporer jusqu'a reduction aux 4/5du volume primitif(don~
evaporation 1/5 en poids). Apres refroidissement, fiJtrer sur
papier et evaporer a siccite. Le residu _est Ie picrocarmin
qu'on peut conserver en poudre et utiliseI' ensuite en solu-
tion aqueuse it 1 p. 100. Colore en rouge les noyaux, en
orange Ie protoplasma. '
d) Picrocarmin de Jensen,
10 Carminate de magnesium (P. Mayer): dissoudre 1 gram-
me de carmin et 0 gr. 1 d'oxyde de magnesium dans
50 centimetres cubes d'eau distillee, faire bouillir pendant
5 minutes. Apres refroidissement, filtration, addition de
o cc. 5 d'acide phenique.
2 0 Picrate de magnesium (P. Mayer) : verser 0 gr. 5 d'a-
cide picrique et 0 gr. 5 d'oxyde de magnesium dans 50 cen-
timetres cubes d'euu distillee Faire bouillir pendant
5 minutes, laisser refroidir et filtrer.
3 0 Solution alp. 100 d'acide picrique dans l'eau dis-
tillce, On mele alors 1 avec 2' et on ajoute Ienlement 10 cen-
timetres cubes de la solution d'acide picrique en agitant Ie
melange. II se forme nn liquide colorant tout it fait limpide,
d'nn rouge [once, qui se conserve pendant des mois,
PRINCIPALES MATISRES COLORANTES 99
Les noyaux sont colo res en rouge, Ie protoplasma en

orange, les muscles et Ie sang en jaune et Ie tissu conjonc-
tif en rose,
C. - ENCRE DE CHINE"
au DE BURRI (marque RAL)
Encre de Chine speciale, tres commode pour rechercher
les treponemes et les spirilles sans coloration (voir plus
loin, meme chapitre G).
Au lieu de l'encre RAL on peut employer dans les memes
conditions l'encre americaine de Higgins.
.*,.
III. - Methodes usuelles de coloration des microbes.
A. - FIXATION
On fixe habituellement les cultures eta lees sur lame ou
les frottis d'organes en passant la preparation; lentement
comme si on coupait du pain, a trois reprises, dans ]a partje
chaude d'une flamme de bec Bunsen, frottis en dessus. II
est preferable de secher d'abord les preparations douce-
ment sur la platine chauffante ou a l'etuve et de fixer
cnsuite avec l'alcool-ether ou l'alcool methylique pur.
B. - METHODES DE COLORATION SIMPLE

DE MAURICE NICOLLE
Fixer.
Colorer 1 minute avec la solution alcaline de bleu de
methylene (bleu de Loffie,r).
Ne pas laver. Differencier par lavage rapide avec une
solution a 0 gr. 5 d'acide acetique cristallisable pour ~OO
d'eau distillee. Verser sur la preparation quelques gouttes
d'unesolution aqueuse a 10% de tanin a l'ether, laisser en
contact 8 a 10 secondes.
Laver a l'eau distillee, essorer, secher, eclaircir avec
une goutte de xylol et monter au baume de Canada. On
examine directement la preparation secnee dans une goutte
d'huile a immersion. Ou bien, colorer 1 minute avec:
Solution alcoolique saturee de thionine. . 10 ce.
Sdlution d'ncide phenique it 1 p. 100. • . 100 ce.
Laver a l'eau distill(\e 1/2 a 1 minute. Essorer, passedl

l'alcool absolu tres rapidement pour deshydrater, eclaircir,
etc.
C. - COLORATION DIFFERENTIELLE
DES MICROBES
a) Methode de Gram.
1 0 Pour les frottis, exsudats ou cultures.
Fixer, puis colorer 2 minutes par la solution de violet de
gen!iane pheniquee (ou par les violets 5 ou' 6 B, penta em
hexamethyles, ou par Ie bleu Victoria, a l'exclusion de
tout autre colorant).
Sans laver, verser sur la preparation la solution suivantlf
(solution de Lugol-M. Nicolle.) qu'on renouvelle 2 ou 3 fois
en 2 minutes :
Solution de Lugol (forte) :
lode • . • , . • 1 gr.
Iodure de potassium. 2 gr.
Eau distillee • . . 200 CC.
II se forme avec certains elemen.ts chromatiques une

combinaison (iodopararosaniline) insoluble dans l'alcool.
Decolorer a l'alcool a 95 0 , 10 secondes ~nviron, laver a
l'eau. Recolorer 30 secondes par la safranine. Laver a
l'eau; essorer; secher; xylol. Examiner dans une goutte
d'huile a immersion ou monter au baume de Canada au
xylol. .
20 Pour les coupes:
Colorer 5 a 30 minutes dans la solution de violet de gen-
tiane pheniquee.
Traiter 2 minutes (sans laver) par la solution de Lugol :J.
l'iode, qu'on renouvelle jusqu'a ce que la decoloration soit
complete. Laver a I'eau. Recolorer a la vesuvine (solution
aqueuse a 1 p. 100) ou par Ie picrocarmin de Ranvier
(solution aqueuse a 1 p. 100). Passer dans l'alcool faihle il
60 p. 100. Laver a l'eau. Secher. Xylol.. Baume.
b) Methode de Gram-Nicolle (recommandee).
10 Pour les frottis, exsudats, cultures: I
Fixer, puis colorer 1 a 5 minutes dans la solution sui-
PRINGIPALES MATIERES COLORANTES 101
vante, en chauffant doucement au-dessus de Ia veilleuse

d'gn bec Bunsen:
Solution alcoolique de violet de gentiane. • 10 cc.
Eau pheniquee alp. 100. • . • • • . 100 cc.
Snns laver, verser sur la preparation quelques gouttes

1e solution de LugoI, qu'on renouvelle 2 ou 3 fois en 40u
5 secondes. Decolorer 8 a 10 secondes par l'alcool-acetone :
Alcool absolu . . . . ..... 3 vol.
Acetone • . . . • . • . . . . . • 1 vol.
Laver a l'eau. Recolorer 30 secondes par la solution

aqueuse de safranine ou par Ie Ziehl dilue. Laver it l'eau.
Essorer, secher, etc.
20 Pour les coupes:
Colorer d'abord pendant 30 it 60 secondes par Ia solution
suivante;
Carmin lithine de Drlh. . . . . • .• 5 vol.
Alcool it 950 • • • • • • • • • • •• 1 vol.
Sans laver, traiter 5 minutes par la solution de violet de

gentiane pheniquee (comme en q), puis solution iodee de
Lugol 4 it 6 secondes. Decolorer 8 a 10 secondes par alcool-
acetone (1 partie d'acetone pour 2 d'aicool absolu). Traiter
1 a 5 secondes par l'alcool absolu picrique (sature) jusqu'a
ce que la couleur devienne jaune verd~Hre. Laver a l'alcool
absolu. Secher, etc.
c) Methode de Gram-Claudius.
Colorer les coupes pendant 10 it 15 minutes par Ie car-
min de Orth alcoolise. comme ci-dessus, puis laver a l'eau
distillee. .
Colorer 1 it 2 minutes dans une solution aqueuse 'de
violet de methyle it 1 p. 100, ou de violet de gentlp.ne pbe-
nique.
Laver it l'eau, essorer.
Decolorer par Ie chioroforme, puis par l'essence de gi-
roBe, jusqu'it ce que Ia coupe prenne une teinte rose.
Eclaircir au xylol et monter au baume. Ou bien, pour les
frottis: secher au papier buvard, puis a l'etuve, examiner
dans une goutte d'huile a immersiorr. (Outre les microbes
qui prennent Ie Gram, on pent colorer ainsi Ie bacille du
charbon symptomat~que ct Ie vibrion septique).
d) Methode de Romanowsky (modifiee par A. Ple111l).

On laisse murir quelques semaines une solution aqueuse
a 2 p. 100 de bleu de methylene medicinal (exempt de
ZnCI9) a laquelle on a ajoule 5 'po 100 de borate de soude.
Melanger 2 parties de cette solution avec une partie de
solution aqueuse d'eosine alp. 100. Quinze a trente
secondes apres que Ie melange bien homogene a ete fait, et
qu'il s'est forme une pellicule irisee a la surface, on pre-
leve du liquide en introduisant l'extremite d'une pipette
sous la pellicule, et on Ie transporte dans une boite de
Petri ou un godet con tenant, face retournee en dessous, Ia
preparation a colorer. Au bout de 2 minutes, 1a coloration
est terminee.
On lave a l'eau. On passe quelques secondes dans l'alcool
a 90 0 et on revient rapidement a l'eau. Enfin on seche au
huvard et on monte dans l'huile de cedre.
Pour les coupes, ce procede est bon, mais seulemen! si
elles n'ont pas plus de 5 microns d'epaisseur. II faut les
laisser secher a l'air avant de monter dans Ie baume, au
lieu de passer a 1'alcool et au xylol.
e) Melhode'de Giemsa (pour les coupes et pour les frottis
d'organes).
Plonger Ia coupe pendant 10 minutes dans la solution
suivante : I
Iodure de potassium. 2 gr.
Solution de Lugol. . 3 ce·
Eau distilIee. • • . 100 ce.
Laver a l'eau rapidement. Traiter pendant 10 minutes

par Ul)e solution aqueuse d'hyposulfite de soude a
0,5 p. 100. Laver 5 minutes dans l'eau courante.
Colorer 2 a 12 minutes a la temperature de 37 0 a l'etuve
par:
Solution de Giemsa • . • • • '. . • . 10 gouttes
Eau distillee • • . . • • . . • • • 10 cc.
Placer la coupe inclinec, la face tournee en bas pour

eviter les depots. Laver rapidement a l'eau distillee, puis
passer successivement quelques minutes dans chacun des
bains suivants :
a) Acetone. 95 CC.
Xylol. . 5 ce.
PRINCIPALES MATIE'RES COLORANTES 10:'1'
b) Acetone. . 70 cc.
Xylol . . . 30 cc.
c) Acetone. . 30 cc.
Xylol. . . 70 cc.
d) Xylol pur.
Monter a l'huile de cedre ou au haume.
f) Colorations des coupes de tissus par fhCmalcine-eosine.

On doit avoir it sa disposition une batterie de tubes
Borrel contenant :
10 Hemateine alunee de Mayer;
2 0 Solution aqueuse alp. 100 d'eosine, ou bien Ie
melange de Mann pour l'etude des protozoaires ou pour la
recherche des corps de Negri dans la rage:
Bleu de methylene alp. 100, sol. aq. 35 ce.
Eosine a 1 p.100, solution aqueuse. . 45 cc.
Eau distillee . • • • . . . . . 100 cc.
40 Alcool it 70 0 ;
5c Alcool it 90 0 ;
60 Alcool absolu;
70 Xylol pur.
Les coupes fixees, deparallinces, deshydratees, puis
repalisees it l'eau, sont d'abord plongees 5 a 20 minutes
dans l'hemateine.
Laver abondamment dans reau, Examiner it un faible
grossissement pour voir si la coloration est suffisante. Si
elle est trop intense, differencier par l'alcool chlorhy-
drique, plus ou moins longtemps. Si elle est bonne, difl'e-
rencier seulement quelques secondes par l'alcool chlo-
rhydrique et laver abondamment. On laisse les lames dans
l'eau courante ou mieux dans l'eau additionn'ee de 1 p. 100
de carbonate de lithium pendant 10 a 20 minutes.
Colorer ensuite 1 minute dans l'eosine (ou bien de
10 minutes a 24 heures dans Ie Mann). Laver abondamment
a reau.
Differencier par l'alcool a 70°, puis dans l'alcool a 90 0
jusqu'u disparition de la teinte rouge diffuse. Dcshydrater
rapidement par l'alcool absolu. Essuyer Ie dessolls de III
-lame pour enlever l'exces d'alcool et plonger dans Ie xylol
pur pendant 15 a 20 secondes, puis monter dans Ie baume
de Canada ou dans l'huile a immersion.
104 TECHNIQUE::) GENElIALli:S
.;
g) Coloration au safran de Pierre Masson (methode excel-

lente).
Pour preparer la solution de safran, on fait bouiUir dans
100 centimetres cubes d'eau distillee 1 gramme de stig-
mates aussi frais que possible. Apres une heure d'ebulli-
tion on filtre sur papier et on ajoute au liquide 1 <?enti-
metre cube de solution de tanin it 5 p. 100 et 1 centimetre
cube de solution commerciale de formol!.
Les coupes, fixees et hydratees par immersion dans l'eau
apres deparaffinage, sont colorees a 1'hemateine alunee de
Mayer comme cipdessus, differenciees it l'alcool chlorhy-
drique, bleuies dans Ia solution de carboll<tte de lithium it
1 p. 100, lavees et colort~es 1 heure dans la !,olution
d'eosine it 1 p, 100, lavees et immergees pendant 10 minutes
dans la solution de safran, puis finalement lavaes, deshy-
dratees et montees.
Les noyaux apparaissent en bleu fonce, Ie protoplasma
en rose saumon, les granulations eosinophiles en rouge
vir, les fibres nerveuses, elastiques et musculaires en rose
vif,les fibres conjonctives, l'osseine et la chondrine en
jaune d'or.
h) Methode au bleu polychrome de Unna (frottis et coupes).
Colorer dans Ie bleu polychrome -"pur (5 minutes a
12 heures it froid). Laver rapidement it 1'eau. Differencier a
l'ether glycerique de Unna etendu de 3 it 5 parties d'eau.
Laver abondamment plusieurs minutes. Deshydrater it
1'alcool ahsolu, rapidement. Passer au xylol et eclaircir a
l'huile de cedre avant montage'.
D. - COLORATION DES SPORES
Methode de Moller. Fixer 2 minutes par 1'alcool absolu,

pUis 2 minutes par Ie chloroforme. Sans laver, faire agir sUr
la preparation: acide chromique it 5 p 100. 3 a 5 lpinutes.
Colorer a chaud par la solution de fuchsine de Ziehl,
5 minutes (ou it froid 5 heures). Decolorer par l'acide sul-
1. On peut eviter cetle manipulatlo~ en employant la ?,ali~re ":,,tr~ite prcalablement

du safran Ipolychroite RAL) que Ion met en solutIOn a ra150n d. 0 gr. 2 dan&
100 centimetres cubes d'eau et 1 centImetre cube de formol La polychroite, tres
hygroscopique, est livree en tubes scelles d. 0 gr. 2,
PRINGIPALES MATIERES COLORANTES lOG
furique a 5 p. 100, 5 secondes, ou par Ie chlorhydrllte

d"aniline (solution aqueuse a 2 p. 100) 1 minute, puis par
l'aICoo1 absolu.
Laver a l'eau. Reeolorer avee la solution aqueuse it
1 p. 100 ~e bleu de methylene I/.2 mio~te, ou p~r Ie hleu de
KullJH),dilue a 1 p. 3. Laver a reau. Egoutter, seeber:
f
E. - COLORATION DES eILS

a) Methode de Lo/ller-Ni"cQlle-Morax. - Pour la colo-
ration des cils, il importe de ne faire usage que de lamelles
au de lames bien propies qU:on lave a l'alcool, puis a l'ether,
et sur lesquelles on laisse tomber avec une anse de pIa tine
une goutte de culture jeune, diluee dans l'eau s.terile. Apres
dessiccatiQll a l'etuve. Sans passer sur Ia flamme, on verse
sur la pfep~ration une grosse goutte du mordant ci-apres,
en chauffant jusqu'il, emission de vapeurs; on lave aussitOt
al'eau distillee et on recomUlence de meme 3 ou 4 fois.
Mordant (encre de fuchsine):
Tanin (ii. l'ether) sol. IIq. q. 25 p. lOO. " 10 cc.
Sol. sat. iI. froid de sulfate ferreux. • . , 5 cc.
Sol. alcoo!. saturee de fuchsine. . . . ' 1 ce.
Colorer ensuite par la fuchsine de Ziehl a chaud iusqu'a
emission de vapeurs, pendant 10 a 15 secondes. Laver
aussitOt a l'eau distillee, secher, monter.
b) Methode de van Ermengem (tres elegante, recnmman-
dee).
10 Fixateur: Faire agir pendant Une demi-he:ure a froid
ou 5 a 10 minutes a chaud, sur pia tine chauffante:
Acide osmique iI. 2 % . . . . . . . 1 ce.
Tanin it 20 % . . . . . . . . . . . 2 cc,
Acide acetique . . . • • . • . . . IV gu.
Laver soigneusement a l'eau distillee.

211 Semibi{isaleur: solution aqueuse de nitrate ~'argent
de 0,5 a 2 p. 100. Faire agir pendant 2 a 3 minutes ju~q~'a ce
que les gouttes prennent une teinte grisiHre. Ne pa's laver.
Plonger 1 a 2 minut~s dans:
30 Reducteur: \
Acide gallique.. . • . 5 gr.
Tanin . . . . . . . 3 gr.
Acetate de soude fondu. 10 gr.
E;au distillee. • • • . 350 gr.
106 !ECHNIQUES GENERALES
Apres lavage, secher rapidement; examiner. Si la colora-

tion n'est pas suflisante, on recommence, apres lavage, 1a
sensibilisation et la reduction. Renouveler la solution argen-
tique des qu'elle commence a noircir.
c) Methode de Pit field, modifiee par Benignetli el Gino.
Solution coloranle : A 3 centimetres cubes de solution
alcoolique saturee de violet de gentiane, on ajoute 5 centi-
metres cubes d'une solution aqueuse saturee d'alun et 5 cen-
timetres cubes de la solution suivante :
Sulfate de zinc. • • • . • . . 1 gr.
Tanin . . . • . . . . . . . . 10 gr.
Eau . • . . . • . . . . . • . 100 cc.
On depose sur la lamelle une gouttelette de l'emulsion

microbienne, on fixe par la chaleur et on verse quelques
gouttes de la solution colorante. On chauffe directement ala
veilleuse d'un bec Bunsen jusqu'a emission de vapeurs ; on
lave soigneusement a l'eau et on seche a l'air, puis on monte
dans Ie baume.
Cette methode, tres simple, donne de bons resultats.
d) Methode d'Edgar Lancercaux.
1 0 Mordant:
Chlorure d'antimoine. ~ gr.
Tanin . . . • .) gr.
Formo\. . . . 10 Ce.
Eau dislillce. . 100 Ce.
2 0 Sensibilisaleur :
Nitrate d'argenl. 1 gr.
Eau distillee. 20 ce.
30 Reducteur :
MetoI (pnramethyIaminophenol). 1 gr.
Eau dislilhie. . • . .•. 20 cc.
(On peut Ie stabiliser en .ajoutant 5 grammes de sulfite de

soude.)
Utiliser des lames propres, lavees a l'alcooL Verser des
gouttes separees d'une ,dilution de culture de 24 heures
.dans de l'eau ordinaire (l'eau physiologique precipiterait
les sels d'argent et rendrait la preparation opaque); secher
a l'etuve.
10 Verser ]e mordant sur 1a preparation a colorer; chauf-
PRINC/PALES MATIE:RES COLORANTES 107
fer au Bunsen vers 60 0 ;'Iaisser 'refroidir 10 mihutes. Laver

a l'eau courante, pui~ a l'eau distillee.
20 Faire agir Ie nitrate d'argent ammoniacal. On 'peut
obtenir un noircissement de la preparation immediatement.
On chauffe legerement sur la flamme du Bunsen jusqu'a ce
qu'on obtienne une teinte metallique, laver Iargemel\t a l'eau
ordinaire ou a I'eau distillee.
30 Faire agir I'e reducteur au metol pendant une minute.
Laver a l'eau ordinaire, secher et examiner a l'immer-
sion.
e) Methode de.Kiyoshi Yokota.
10 Culture. Fixation par addition de formol. - II est neces-
saire, pour le~ bacteries aerobies ciliees, d'employer des
cultures dans l'eau. de condensation de tubes de gelose in-
clinee a 2 p. 100, faiblement alcaline et fraichement prepa-
ree, maintenues a 33-35° de 18 a 24 heures.
L'eau de condensation prelevee est soigneusement centri-
fugee pendant 30 minutes environ; Ie eulot de centrifugation
contenanv les germes a etudier est ensuite emulsionne dans
une certaine quantite d'eau physiologique. En ajoutant du
formol a cette emulsion (0,5-1 p. 100), on obtient une
emulsion stabilisee en meme temps que 1'0n rend plus
facile l'action des maticres eolorantes.
20 Colorants. a) Mordant, - A une solution de tanin aeide
a 5 p. 100 on ajoute, goutt~ a gouttc, jusqu'a environ 10 p.
100 <lh volume primitif, une solution de tartre stibie saturee;
a ce mtlment la solution devient trouble et laiteuse Ainsi
preparee, ceUe solution pourra etre utilisee pendant un
mois environ.
b) Colorant. - On emploie Ie meI;lUge suivant :
Eau d'aniline. • • . . . . • • . • 30 ce.
Solution de fuchsine concentree. . . . • 1 cc.
3 0 Techniqlle de coloration. - On etaie sur une lame soi-

gneusement nettoyee une goutte de l'emulsion en couche
mince; on laisse secher a l'air; on fixe par la chaleur.
On mordance en chauffant fortement et pendant un court
instant, a la flamme du bec Bunsen, dans la solution de tanin
acide-tartre stibie jusqu'a ebullition et eclaircissement de la
solution. On lave largement a l'eau de conduite et la lame
recouverte de la solution de fuchsine anilinee est portee a
nouveau sm' la Hamme, jusqu'a ebullition. Lavage a l'eau.

Sechen entre 2 feuillcs de papier buvard. Examen micros-
copique.
Pendant Ia coloration, il est necessaire de chauffer it deux
reprises differentes et a une temperature tres elevee.
F. - COLORATION DES CAPSULES
a) lIfellzode de Johne : Colorer 1 ou 2 minutes avec une

solution aqueuse a 2 p. 100 de viowt de methyle ou de viole!
de gentiane tiede.
Laver a l'eau 2 secondes. Traiter par solution alp. 100
ou a 2 p. 100 d'acide acetique,10 secondes. Laver it l'eau.
Examiner dans l'eau (methode excellente po,ur l'etude des
capsules de la bactcridie charbonneuse) ..
b) MetllOde de Klett: Colorer a chaud,jusqu'a tiliullition,.par
solution hydro-alcoolique de bleu de methylene (1 gramme
de bleu, 10 grammes d'alcool, 100 grammes d'eau). Laver a
1'eau. Traiter parune solution de fuchsine de men~ concen-
tration que celIe de bleu de methylene, 5 secondes. Laver a
l'eau, examiner dans l'eau.
c) Methode de Friedlander: Laver d'abord Ia preparation
pendant 2 minutes (apres fixation) dans une solution it
1 p. 100 d'acide acetique. Egoutter. Secher.
Colorer quelques secondes par une solulion de violet de
gentiane dans l'eau saturee d'aniline. Laver a l'eau, secher.
Pour les coupes, colorer pendant 24 heures a 37 0 dans :
Solution concenlree alcoolique de violet de
gentiane. • 50 ce.
Acide acetique. • . . • . . . • 10 gr.
Eau distillee. • . . . . . • • 100 ce.
Differencier pal' solution d'acide acetique alp. 100.

Laver it l'ezm, egoutter, etc.
G. - EXAMEN DES CAPSULES ET DES ClLS SANS

COLORATION
a) Methode de Gins Ii l' encrede Burri (tres simple et reCOl1l-

mande-e):
On depose, au centre d'une lame, une gouttelette d'encre
PRINCIP'ALES MATI1~RES COLORANTES 109
de Burri et on melange en suite a celle-d, avec un fil de

platine, une trace de la culture a etudier, delayee dans
une goutteleUe d'eau de volume egal a celui de la goutte-
lette d'encre. On etale Ie melange avec Ie bord d'une
lamelle couvre-ohjet, on laisse secher un instant et on exa-
mine dans une goutte d'huile a immersion. Les haciIles, les
capsules, les cils apparaissent nettement incolores sur Ie
fond noir. Bien avant Burri. et des 1884, Leo Errera (de
Bruxelles) avait propose l'emploi de l'encre de Chine pour
l'etude des infusoires.
b) Methode de Borin (pour la mise en evidence des cap-

sules microbiennes) : ' .
Les lames sont lavees au bichromate de potassium et a
I'acide sulful'ique) sbigneusetpent .rincees a reau distillee et
secheesa I'etuve. On depose alors sur l'une,d'elles nne goutt~
d'un serum quelconque (serum humain, serum de cheval ou
de toute autre espece animal e) . Au moyen d'une lamelle on
etale en couche mince Ie serum, a la fa~on d'une goutte de
sang, e1,on Ie desseche au-des sus d'une veilleuse de bec Bun-
sen. Lorsque la dessiccation est parfaite, on laisse refroidir.
On melange alors sur Ia lame une goutte d'encre de Chine a
Ia culture (une 'goutte de culture Iiquide ou une goutte d'une
(~muision en eau:physiologique de culture solide ). Avec l'anse
de platine (et non avec une lamelle) on Male la preparation'
sans s'inquieter de l'irregularite de I'epaisseur du frottis.
Celui-ci etant toujours humide, on inonde Ie tout avec du
xylol. On renverse Ia lame pour eliminer la plus grande
partie de ce liquide et on laisse tomber sur Ia preparation,
d'une hauteur d'un centimetre environ, une goutte d'huile
de cedre. Puis on porte sur la pIa tine du microscope et on
examine a l'immersion, sans interposer de lamelle. mais en
ayant soin de ne jamais meitre en;contact avec la lame la
lentille frontale de l'ohjectif. II cst necessaire de diaphrag-
mer. Pour des raisons d'optique, il ne faut examiner que
les germes fixes contre la lame; les germes en suspension
ne montrent pas de capsules apparentes, mais seulement
parfois une aureole. Les capsules ainsi fixees et aplaties sur
une face, par contact, apparaissent en 'gris clair sur Ie fond
noil' de la preparation.
11.0 TECHNIQUES GeNERALES
H. - COLORATIONS DES VIRUS fILTRANTS

(Peripnenmonie. Chlamydo~oaires. Strongyloplasmas, etc.)
II est indispensable de diluer les virus ou les emulsions

/' de tissus (molluscum contagiosnm, lymphe vaccinale ou va-
riolique, etc.) avec de l' eau distillee ou de l' eau salee, phy-
siologique, sterile. Fixer par alcool absolu', ou par melange
en parties egales d'alcool methylique et d'ether, ou par l'al-
cool au sublime (Schaudinn) : 2 parties de solution aqueuse
saturee de sublime ou, mieux, d'apres la methode de Borrel,
par Ie melange suivant :
Acide osmique . . . 2 gr.
Acide chromiqne. • • 3 gr.
Chlorure de platine. • 2 gr.
Acide acetique glacial . 20 gr.
Ean distillee. . • • '350 cc.
Colorer (Bqrl'e1) avec une solution aqueuse de rouge Ma-

genta a la temperature de 5° pendant 10 a 15 minlttes ; trai-
ter pendant 5 minutes par une solution de picro-in~igo-car
min (indigo-carlVin ou sulfo-indigotate de soude, I\sr. 75,
dissous dans 100 c.entimetres cubes d'eau distillee ; ~ltrer;
ajouter eau distillee, saturee d'acide picrique, 100 centi-
metres cubes). Laver rapidement a l'eau, passer a l'aIcool it
95°, eclaircir ap xyl~1 et monter au baume', ou examiner
dans une goutte d'hu\le it immersion.
On peut aussi employer la methode de Halbel'stadtel' et
V. Pl'owazek qui est une modification de celIe de Giemsa.
Le reactif colorant est a10rs compose comme suit:
Solution d' eosine (2 cc. 5 de solution d' posine
alp. 100 dans 500 cc. d'eau) . . 12 p.
Aznr I. sol. alp. 1.000 aqueuse • 3 p.
Azur I~, sol. a 0,8 p. 1. 000 aqneuse. 3 p.
ou bien encore (Lindner) ;
Ean distillee. . . • 10 cc.
Colorant de Giemsa glycerine . V gtt.
Acide acetique pur. . . • . 1 gil.
,
I. -COLORATIONS VITALES
Certaines couleurs basiques d'aniline sont absorbables

par les cellules vivantes lorsqu'elles sont solubles dans les
lipoi'des qui entrent dans la constitution du protoplasma.
PRINCIPALES MATIERES COLORANTES III
Les plus interessanles a ce point de vue sont : Ie bleu de

methylene et Ie rouge neutre.
Bleu de methylene. II faut employer Ie bleu medicinal pur
frahc;ais RAL, en solution a 0,5 p. 1000u 1 p. 100 dansl'eau
salee physiologique.
Rouge neutre. Prend une couleur rouge ecarlate en
milieu_ acide, jaune ou rouge orange en milieu alcalin. On
l'emploie en solution tres diluee 0/2 it 1 centimetre cube de
solu~ion aqueuse, saturee, dans 100 centimetres cubes d'eau
salee physiologique)
Beaucoup de' petits animaux aquatiques, et meme des
poissons, vivent tresbien dans des solution!? de rougeneutre
alp. 10.000 ou it 1 P 100.000. Leurs tissus se colo rent en
rouge. Le protoplasm a et Ie nayau des cellules restent inco-
lores. Le pigment est fixe par les granulations protoplas-
mi<Iues.
a) Colorations des microbes vivants (pour etudier leur

structure) .
Methode de Neisser : Colorer quelques secondes avec un
melange de 2 parties de 1a solution a et 1 partie de Ia solu-
tion·b ci-apres :
Solution a:
Bleu medicinal en poudre. 1 gr.
Alcool Ii 96 0 • • • • • • 20 cc.
Eau distillee . . . . . . 1.000 cc .
Acide ncetique crist allis able • . 50 cc.
Solution h :
Alcool II 96 0 10 cc.
Eau dislillee 300 cc.
Laver a l'eau. Recolorer pendant 3 secondes avec une

solution de chrysoidine (colorant azoique, chlorhydrate de
diaminoazobenzene) : 2 grammes de chrysoidine dissoute
dans 300 centimetres cubes d'eau bouillante filtree et refroi-
die. Laver encore it l'eau. secher a l'etuve a 37 0 et exami-'
nero Ou bien, employer Ie bleu azur de Giemsa (1 gautte
de solution glycerinee de bleu de Giemsa pour 1 centimetre
cube d'eau distillee). LaisseragirlO it 30 minutes laprepa-
ration tournee face en dessous, a la surface du bain colorant,
pour eviter les depots, laver it l'eau, secher etexaminer.
J. - COLORATION POST-VITALE
Methode de J. Sa brazes au bleu de toluidine phenique,
pour la cytologie et Ia bacterioscopie des crachats, du
lait centrifuge, des depots d'urines, des residus gastriques,
des mucosites fecaJes, des exsudats fibrineux et purulents.
Le titre de la solUtion colorante peut varier d.{} 1 p. 50lJ'a
1 p. 100. La formule est la suivante :
BIeu de toluidine. . • • . . . o gr. 50
, Alcool j; 950. • • •
Acide pMnique . . .
.
•
• . • •
• . .
10 j;15 ce.
3 gr.
Eau distillee sterilisee q. s. pour. 100 Ce.
Le reactif est stahle: il se conserve indefinitnent asep-

tique. Le flacon a poste fixe se sedimente constamment. On
y puise par capillarite, avec une effilure de pipette plongee
dans Ie liquide sans toucher Ie !fond. Sur Ie frottis rec~t,
etale en couche mince, sans asperites, bien seche, on ren-
verse Ia lamelle chargee de la gouttelette de bleu ; elle doit
s'appliquer hermetiquement sur la lame. La solution colo-
rante impregne tres vite Ies elements desseches du frottis.
Le bleu de toluidine colore en bleu plus ou mo_ins pale
Ie cytoplasme, en violet rouge:Hre les noyaux, en viqiet
les nucleoles, en rouge Ie mucus, en rouge violatre l'atI)y-
lorde, en bleu pur la substance col1oide, en bleu terne cer-
taines substances Fpoides, la fibrine en bleu, les fibres
elastiques en vert pale, les grains d'amidon en bleu pule
verdatre. . .
J<. - COLORATION DES CHA_MPIGNONS

(Hyphomyceles, Teignes, etc., voir cpapitre xxxvnr.)
Degraisser d'abord soigneusement par l'alcool·ether.

Colorer pendant i) a 10 minutes dans une solution de bleu
alcalin de LoftIer ou de thionine pheniquee.
Laver a l'ean. Passer rapidement a l'alcool absoln, secher
et examiner dans une goutte d'bnile de cedre.
L. -- MONTAGE DES PREPARATIONS MICROSCOPIQUES

POUR L'EXAMEN APRES COLORATION,
Les preparations colorees s'abiment assez rapidement et

se decolorent. II importe de pouvoir les recolorer si c'est
PRINCIPALES MATIERES CdLORANTES 113
necessaire. II ne faut done pas, surtout lorsqu'il s'agit de

preparations de sang 9onten~nt des' parasites. les monter
dans Ie baume de Canada. comme on Ie fait habituellement
pour les coupes histolcigiques. II est preferable de se
servir d'huile it immersion, ou, mieux encore, de paraffine
Iiquide, bien transpareQte (huile de paraffine).
NOTA. - Pour les transports au loin et la conservation
indefinie, on protegera tres simplement )es preparations
seches et fixees de sang ou de frottis, colorees ou non colo-
rees, en les recouvrant d'une mince couche de paraffine
fusible a 45 0 , dissoute dans dll xylol (parties egales de
paraffine et de xylol) qu'on laisse evaporer a l'air libre,
;1 l'abri des poussicres. Lorsqu'on veut Mudier et recolorer
ces preparations, rien n'est plus facile que de dissoudre
dans du xylol pur la mince couche de paraffine qui les
recoll\'rait.
~nCR0B10LOGIE 8
CHAPfTRE VHf
TECHNIQUE DE FIXATION ET DE COLORATION DU SANG

ET DES PROTOZOAIRES SANGUICOLES
A. - Methodes de fixation des frottis de Sl;1·itg:
1° Par l'alcool absolu (Ia plus pratique. mais l'alMol ddit

etre rigoureusement absolu) ; Ie conserver en petits flttc6'ns
bouches a l'emeri et contenant. dans un sachet de toite, 'quel-
ques cristaux de sulfate de cuivre deshydrate (paJ.' c~Icina
tion).
Temps: une demi-heure d'immersion (20 minutes au
moins).
2 0 Par l'alcool-ether (parties egales): 10 minutes. Bon
pour I'emploi du Giemsa, mais inferieur au precedenP.
30 Par l'alcool methylique seul, 5 minutes (procede recom-
mande).
40 Par l'alcool methylique-acetone (pqrties egales) : 2 a
5 minutes.
50 Par Ie chloroforme: quelques secondes sufli~ent.
60 Par l'acide chromique (Malassez), solution alp. 100 :
5 a 10 minutes, laver en suite it l'eau distillee. tres bon fixa-
teur. ..
70 Sublime iode (Dominici et Lenoble). On prepare Ie
bain sllivant :
Teinture d'iode fra!cbe. . . . . • . . 10 cc.
Solution aquense saturee de snblime. . . 90 cc.
II se forme un precipite. On filtre, et c'est dans Ie filtrat

jaune clair qu'on plonge les lames pendant 25 secondes.
Laver a l' eau courante. Le melange ne se garde pas au
dela de quelques heures.
8 0 Par les vapeurs osmiques : 10 secondes.
1. Verifier au moyen d'un papier de tournesol mouille que le melange :lleDol-ether

est bien neutre et ne laisse pas de residu acide par evaporation.
"
FDMTION ET COLORATION DU SANG 115
9° Par Ie formol. Vapeu_rs ou immersion dans solution

alcoolique de formol it 1 p. 100. Duree d'nction : 1 minute.
100 Par Ie Flemming (Jolly). Le liquide de Flemming!;e
compose de:
Acide chromique a 1 p.·1oo 15 vol.
Acide osmique it 2 p. 100 • 4 vol.
Acide acHique cristallisable 1 vol.
10 minutes en plongee. Laver en suite it reau courante.

Tres bon fixateur pour la coloration de la chtomatine des
noyaux.
11 0 Par la chaleur (pour la coloration au triacide d 'Ehr-
l~ch).
B, - Coloration du sang.
Les methodes de coloration des frottis de sang les plus
employees it l'heure actuelle sont celles qui ont 6te decrites
au chapitre VII, E;c a h. Colorants de Leishman, de Wright,
de Giemga rapide, de Laveran, de Papp_enheim. Elles ont
a peu pres partout rem place les methodes anciennes dont
nous croyons ~canmoins devbir dcctite ci·dessous un cer-
tain .nombre. Les methodes nouvelles oifrent l'avantage
d'une rapidite tres grande et colorent avec nettetc tous les
details des parasites: hematozoaires, trypanosomes, etc.,
qui peuvent se trouver dans les sangs pathologiques.
a) Methode ali ttiacide d' 8hrlich.
Le triacide d'Ehrlich est compoSe de deux colorants
acides 'et d'lin neutre' (vert de methyle). On peut se Ie pro-
curer tout prepare chez Cogit, it Paris, ou Ie preparer soi-
meme, cotnme il a etc dit au chapitre vlJ, E.
Duree d'action : 30 minutes sur lames fixces par In cha-
leur.
Resultats : hematies couleur brique.
Noyaux bleu pale. peu 'Visibles.
Granulations neutrophiles tres nettes, sous forme de pain-
tilles violets.
Granulations cosinophiles oranges.
Hcmatoblastes gris violet: a peine visibles.
b) Methode de Dominici: Bleu de toluidine, eosine, orange.
Tr~iter d'abord pitt 'Une solution en parties cgales it
1 p. 100 d' eosine et d'orange pendant 2 a 5 minutes'. Laver.

Faire agir nne solution aqueuse alp. 200 de bIen de
toluidine pendant 2 a 5 minutes.
Sans laver, passer dans l'alcool a 60° rapidement. puis
dans l'alcool a 90 0 et dans l' alcool abs'olu. Secher et exami-
ner. CeUe coloration met en evidence: noyaux, proto-
plasma et granulations :
Hematies. roses ou oranges.
Noyaux, bleus.
Granulations eosinophiles, roses ou orangees.
Granulations neutrophiles, violet rose.
Hematoblastes, bleu pale.
c) Methode de Romanowskg.
Fixation it la chaleur a 105-110°. Coloration 1 ou 2 heures
uans
Sol. aqueuse saturee tie bleu de methylene. 2 parties
Solution aqueuse d'eosine Ii 1 p. 100. . . 5 parties
Ne se conserve pas... Laver a l'eau courante. secllCr.
d) Methode de Laveran au bleu Borrel.
On prepare separement :
Une solution aqueuse d'eosine i\ 1 p. 1.000.
Une solution aqueuse de tanin it 5 p .•100.
Pour colorer, on melange au moment de s'e~ servir, en fil-

trant les deux premieres sur un petit entopnOir :
'Solution aquense d' eosine it 1 p. 1.000. 4 cc.
Bleu Borrel. . . • . . . . 1 ce.
Enn distillee. . • . . • . . -6 cc,
On place la lame dans Ie bain en position verticale pour
climiner Ie precipite qui se forme. Colorer 20 minutes;
laver a grande Ilau. Faire agir 1a solution de tanin 1 minute.·
Laver a l'eau distillce, secher.
Laveran emploie aussi l'azur II au lie"\]. duo Men Borrel.
Solution aqueuse saturee d'azur II, 1 centimetre cube
(filtrer au moment de s'en servir), verser dans.;
Solution aqueus!l d' eosine it 1 p. 1.000
(filtree). . . . . . . . . • . , 2 cc.
Enu distillee. • . • . • • • • . • 8 cc.
Colorer 10 minutes, laver,. passer au tanin, laver, secher.

FIXATION ET COLORATION DU SANG 117
e) Methode de Giemsa.
Fixer par l'alcool absolll 30 minutes.
Au &Ortir de l'alcool, les lames etant encore un peu humi-
des, les plonger dans Ie bain colorant, inclinees, de telle sorte
que les precipites ne sl:l deposent pas sur la preparation:
Solution de Giemsa (1). • .'. • . . 1 partie
Ean ordinaire (prealablement additionnee
de 2 gouttes d 'un melange a parties egales
d'alcool methyliqne et de glycerine pure
par cent. cube. . • • . • . • • • 9 parties
Colorer 20 a 30 minutes, laver a grande eau et secher.

Eclaircir, s'il y a lieu" par lavage rapide de quelques se-
condes a une minute dans une solution alp. 100 d'acide
borique et laver a l' eau.
La dilution du Giemsa dbit etre faite au moment del'usage,
car elle perd tres vite sa puissance colorante. Pour l'etude
des filaires, il faut employer une dilution faible, alp. 40.
f) Methode de R. Ross et Rllge. (Pour la recherche ~es
hematoioaires et des embryons de filaires.)
Au lieu d'etaler Ie sang en couche mince, on en depose
une grosse goutte au milieu d'une lame et on laisse secher
a l:etuve pendant environ deux heures, a l'abri des mouches.
Lorsqu'elle est seche, on la traite pendant 5 a 10 minutes
par un melange de :
Formol. . • . 2 cc.
At;ide ncelique • " lee.
Eau. . • • . 100 ce.
Ce melange fixe Ie sang et dissout en meme temps l'hemo-

globine.
On lave a l' eau.
On colore en suite par Ie Giemsa (1/2 heme a 1 heme) au
par la methode de Laveran a l'eosine-bleu Barrel, au encore
par l'hematoxyline (filaires).
Lorsque les hematozoa ires sont rares dans Ie sang, cette,
technique permet de les decouvrir avec plus de faciliM.
g) Coloration vitale dll sang. Methode de Pappenlzeil1t.
SUI' un porte-objet on depose, avec l'ex,tremite d'une
1. La solution de Giemsa, marque RAL concentree et glycerinee, se conserve pendant

tres longtemps.
118 TECHNiQUES GENERALES
. pipette, une gouttelette de. solution alcoolique alp. 100 de

l'un des colorants ci·apres :
Brillant Cresylbleu ou Azur II,
ou Soudan.
On laisse secher, puis, immediatement it cote, on depose

une gouttelette de sang frais qu'on recouvre d'u,pe lamelle.
Le sang s'etale sous celle-ci jusqu'f\ atteindre Ie depot sec
de matiere colorante, qu'il dissout .de proche en proche. On
peut aussi se ser.vir d'une solution de violet de mcthyle
dans l'eau salee physiologique a 8,5 p. 1.QOO- et dont on
melange une gouttelette a une goutte de sang frais, directe-
ment sur lame.
C. - Coloration des protozoaires et parasites

indus dans des cellules.
a) Pour les {roitis d'organes on peul employer les memes

techniques que pOllr les {rottis de sang (colorant de Giem~a, el~.).
b) Fixation au Bouin :
Solution aqueuse saturee d'aciqe pierique. 75 Ill'.
Formol. . . • . . . . • '. . . . 20 ce.
Acide acetique glacial. . . . . . . . 5 cc.
\
Pour les frottis, amibes, etc., 30 minutes d'immersion ;
laver a l'eau 5 minutes.
c) Coloration.
Mordan\(age des frpttis (amibes, protozoaires) peJ;ldant
15 minutes.dans une solution d'alun de fer ammoniacal a
3 p. 100.
Poser la lamelle sur une lame recouverte de la solution
et maintenir celle-ci sur platine <;hauffante a 40° au plus,
pendant 15 minutes .
. Passer a reau. Colorer pendant 15 minutes en chauffant
encore a 40 0 avec la solution d'hematoxyline a5 p. 100. Les
preparations deviennent noires. DecQlorer tres progressi-
vement a froid, sous Ie microscope. avec une solutiond'~lun
de fer alp. 100. Laver a l'eau. Monter. A aucun moment
ne laisser la preparation se dessecher.
FIXATION ET C(JLORATIO" uu i).L'LNG 119
d) Coloration des coupes d'intestin ·pour la -recherche des

.atnibes ou in/usoires.
Colorer les coupes par la technique ci~dessus, a l'hema-
toxyline au f~r. Apre!! 'd,ecoloration et lavage a reau, colorer
1/4 d'heure dans sblution eosine-vert·lumiere. La prepara-
tion est rouge. DifIetencier a l'alcool absolu-acetique, a 10
p. 100 jusqu'a l'apparition des teintes vertes dq tisllU (jon-
jonctif et du mucus. Les muscles et les epitheliums demeu-
rent roses. Substituer directernent Ie xylol a l'alcqol absQlu
acetique et monter au baume.
D. - Coloration 4es coupes de tumelira QancetCI.I$es.

a) Methode de 8Qrr~1 (modifiee P41r Coca) &ur C9ul'lt;~ de
5 microns d'epaisseur, provenant de fragments fixes au
Zenker (voir cpap. l~) et enrobes en pilrf\ffiIW,
Immersion pendant 10 minutes dans U41~ soliltipu fllc9q~
lique d'iode 4 1 p. 100.
Lavage rapide avec alGool a 90 0 pour enlever l'e~ce!l'
d'iode.
Lavage a reau.
Immersion pendant une heure dans urte sqJution aq"euse,
saturee de Magenta.
Lavage a l'eau.
Immersion peJ?dant 5 minutes dans la solution suivantlf:
Indigo carmin (ou sulfo-indigotate de
soude). . . . 0 gr. 75
Eau distillee . • • . • . . . . . 100 ce.
Filtrer et ajouter :
Eau distillce saturee d' aeide pierique. 100 ce.
Differencier par lavage a l'alcool a 95 0 (avec Ie flacon

compte-gouttes), sans lavage prealable a l'eau.
b) Methode a ['eosine bleu.
Immersion pendant 10 minutes dans la solution alcoo-
liqued'iodea 1 p. 100.
Lavage rapide a l'alcool a 95° pour eliminer l'iode.
Lavage a l'eau. "
Immersion pendant 45 minutes, ala temperature de 55 0
,
dans une solution agueuse d'eosine a 5 p. 100.

120 TECHNIQ UES: GENERALES
Lavage a·r eau.

Immersion pendant 20 minutes dans la solution suivante,
diluee a raison de 5 p. 100 dans l'eau distillee :
Carbonate de potasse . . . . 1 gr.
BIen de methylene medicinal • 1 gr.
Ean . . . . . • . • • . • 100 ce.
Differencier par l'alcool a 95 0

•
E. - Fixation et coloration des frottis de tumeurs :

Epithelioses, Clavelee, Vaccine, etc. (d'apres Borre!).
Etaler Ie frottis en couche mince et, avant toute dessiecn-
tion, passer rapidement la lame dans une solution de tanin
a 5 p. 100 'qui produit instantanement l'adherenee de In
pellicule.
On verse en suite Ie fixnteur sur In lame (fixateur aceto-
osmochromique de preference) (voir chap. IX, A, e.)
II se produit un leger precipite de tannate d'osmium que
ron entraine par un execs de fixateur.
Fixer environ 1 heure.
Laver a l'eau.
Colorer par la methode Rouge mngenta·picro-indigo-
carmin, indiquee ci-dessus, en D.
CHAPITRE IX
FIXATION ET INCLUSION DES FRAGMENTS DE'TISSUS

OU D'ORGANES DESTINES A-FOURNIR DES COUPES
Les fragments doivent etre ,coupes au rasoir,- jamais

aux ciseaux, Bien que l'on puisse faire des coupes larges,
pour la bacteriologie, nous conseillerons de prelever de
petits fragments: 2 a 3 mm. d'epaisseur sur 1 a 2 cm. de
largeur. Les temps que nous indiquons conviennent pour
des fragments de cette taille.
Pour fixer et inclure dans la parniline les fragments d'or-
ganes ou Jes petits anirhaux destines aux coupes microsco-
piques, il est tres commode, comme l'ont indique M. Calli-
lery et A, Chapelier, de se servir de tubes I de verrc dont
l'extremite inferieure, d'un diametre de 10 millimclres
environ, est fermee par une toile maintenue par une liga-
ture On y introduit Ies objets a couper. Ii suffit alors de
porter Ie tube et son contenu dans les liquides successifs,
jusque et y compris la paraffine fondue.
A chaque changement, Ie liquide filtre a travers la toile.
On peut naturellement effectuer des lavages aussi soignes
que l'on veut. La paraffine de la derniere operation, main-
tenue dans Ie tube et refroidie rapidement, fournit, grace it
la forme du tube, un bloc immediatement utilisable sur Ie
microtome, sans rognures. On Ie demonte en chauffant
Iegerement Ie bas du lube et en poussant.
Ce procede tres simple evite toute perle de materiel.
A, - Liquides fixateurs pourlesfraglllents d'organes.

a) Formol.
Formol du commerce, II 40 %, neutre 4 II 10 ce.
Eau de conduite, . , • . • , q s. p. 100 c::.
(ou mieux eau, salee physiologique).
Ce procede, tres simple, est pratiquel~ent suffisant pour

la recherche des microbes dans les tissus, lorsqu'on ne tient

pas a obtenir des details histologiques fins.
La fixation est obtenue apres 24 heures. Elle peut durer
heaucoup plus longtemps.
b) Alcool formol
Formol i\4Q %, neutre • H> c:~.
Aleool a 950 . . • . 90 ee.
Mcme technique que ci-dessus.

Ce procede est aussi simple que Ie precedent et donne de
meilleuJ;s resultats.
c) Liquide de Carnoy.
Bichlorure de mercure a saturatiou dans
l'eau distilIee chaude, puis refroidie et
qecan1ee . . • .' . • • . • . . . 100 cc.
;\cidll acetique cristallisable. . . . . • o cc.
Fixation de 3 a 6 heures. Laver 24 heures it l'eau cou-
rante avant inclusion.
d) Liquide de Zenker.
Bichlorure de mercure sec. 5 gr.
Bichromate de potasse. . 2 gr. 50
Eau.distillee . . • " . 100 gr,
Au mQment de l'emploi, ajouter 10 it 201% de formol d,u

commerce. Fixation 6 heures.
Laver 24 heures a l'eau courante avant d'inclure.
e) Liquides de Flemming (conserver it l'obscurite en fla-

cons noirs ; it n'employer que pour de tres petits fragment:;
de tissus de 2 a 3 millillletres d'epaisseur).
1) Solution forte a I pour 100 15 cc.
Acide osmique a 2 pour 100 4 ce.
Acide acetique eristallisable 1 ee.
2) Solution faihle.
Acide chromique It 1 pour 100 25 ec.
Aeide O<Imique U 1 pour 100 . 10 ce.
Acide acetique a 1 pour 100 • 10 cc.
Ean distillee . • . . . • 55 cc.
Fixation 24 heures. (Toutes les colorations ne sont pas

possibles apres celte fixation, notamment l'hemalun.)
PREPARATION DES COUPES 123
f) Liquide de van Gehuchten (surtout pour les fragments

de tissu renal).
Alcool absolu. \ • . . . . 60 ce.
Chloroforme • . • • • • 30 cc.
Acide acetique cristallisable • 10,cc.
Fixation: 4 heures ; 'ne pas laver avant la deshydratation

par l'alcool.
g) Liquide de Borrel (pour la fixation a basse ;temperature
des org~nes glandulaires 'en tres.petits fragmepts).
Eau . . . . • • . • . • 350 cc.
Acide chromique. • • • • 3 gr.
Chlorure de pia tine . . . . ,2 gr.
Acide bsmillu~. . . , . . 2 gr.
Acide acetique cristallisable . 20 gr.
Fixation ala glaciere 12 a 24 heures. Lavage a l'eau cou-

rante 24 heures. .
h) Liquide de Dominici.
Solution aqueuse saturee de sublime a 60·
centigrades. . . • . . • • . . , 90 ce.
Formol du commerce . • • . . . . , 10 cc.
Au moment de l'emploi. ajouter goutte a goutte de la

teinture d'iode jusqu'a couleul' de vin de Porto. Fixation:
3 heures a l'etuve entre 400 et 500 •
i)Liquide. de Perenyi.
Pour la fixation des mousliques et des arthropodes en
general. '....
Solution aqueuse d'acide chromique a 0,5
p, 1QO • • • , • • . . • . • • • so cc.
Solution d'acide azotique pur it 10 p. 100 . 40 cc,
Alcool absolu .. . . . . • . . . . • 30 cc.
Immersion 6 it 24 heures, puis alcoQI a 70°, alcool it 90°,

alcool absolu, xylol. paraffine.
j) Liquide de Bouin (modifie par P. Masson).
Fqrmol du commerce , . 10 cc.
Eau • . . . • . . . , . . • • • 30 cc.
Al;ide lU:etique glacial.. . . • . • . • '2 cc.
Acide picrique a saturation.
Cetta solution peut se conserver indefiniment. II doit y

avoil' un exces d'acide picrique dans Ie fond uu ·flacon.

Fixation: 2 jours. Les pieces peuvent sejournel' dans ce
liquide jusqu'a 6 ou 8 jours sans s'alterel'. C'est un excel-
lent fixateul', tres recommandable pour toutes les recher-
ches hacteriologiques et particulierement pour celles qui
portent sur les protozoaires.
k) Liquide de Dubosc-Bra:il (recommande par Chatton
pour les amibes).
Alcool it 80 0 • • • • • • 150 ce.
Formol commercial . . . 60 cc.
Acide ace Ii que glacial . . 15 cc.
Acide pieri que eristallisable' 1 gr.
Fixation: c'est Ie procede Ie plus rapiue ; 1/2 heme

pour uneepaisseur de' 1 mm.; 2 heures pour2 mm. ; opti-
mum: 24 heures.
I) Fixalellr de Stamm (recommande pour les arthropo-
des).
Melange bouillant a pnrties egnles de formol au quart et de sublime
sature.
Nota. - Les fixateurs it base d'acide osmique, d'acide

chromique, de bichromates, de chlorure d',or et Ie mela'nge
de Flemming genent plus ou moins les colorations bac-
teriologiques i les fixateurs osmiques ne genentl que les
colorations histologiques. Les alcools,l'ether,)e sublime,'
l'acide picrique, Ie formC?1 et Ie liquide de Bouig n'ont
aucune influence nuisible.
B. - Inclusion des fragments d'organes destines

a la microtomie.
\
a) Deslzydralaiioll de la piece. - Au sortir du fixateur,
plonger directement dans l'alcool absolu, Ie lavage n'etant
requis que dans les cas indiques ci-dessus.
Le volume d'alcool doit etre 15 it 20 fois celui de la picce.
On emploiera 4 bains successifs, chac.un d'une duree mi.
nima de 3 heures. Pour des raisons d'economie, Ie premier
et Ie deuxieme baill pourront etre dOIlJles avec des alcools
absolus ayant deja servi respectivement deuxet une fois.
/"
h) Pelletration par Uil solvant de la paraffine. - Apres Ie

4e bain d'alcool absolu, 1a piece sera portee dans dix fois
son volume de' toluene (meilleUJ." marche que Ie xylol et don-
nant de meilleures inclusiorts): 3 bains successifs de 3 heures,
au moins, chacun. Pour· des raisons d'economie, Ie' 1er et Ie
28 bain pourront etre donnes avec des toluenes ayant deja
servi respectivement deux e.t une rois.
c) Inclllsion. - Apres Ie 3 e bilin de toluene, porter la piece
dans la paraffine fusible a 540 • fondue a l'etuve reglee a 56°.
(On ameliore beaucoup la paraffine en y ajoutant environ
:") % de eire a parquet.) Utiliser 3 bains, snccessifs de
paraffine d'une duree minima de 3 heures.
Les paraffines des ler et 2 e bains peuvent servir illde-
finimen·t. Le 3e bain necessite de la paraffine neuve. H
servira aincIure.la piece.
Pour cette operation, I'ustensile Ie plus commode consiste
en l~ne petite bolte metallique it paroi mince ou, a deEaut,
une boite de carton.
Collage des cOllpes. - Le mban de coupes etant obtenn,
on sep:ue une coupe avec un scalpel et on la porte,ta face
brillante elt dessolls, sur une lame propre, recouverte d'eau
gelatinee.
Eall gelatinee. - Dans une feuiIle de p;elatine blanche,
decouper un carre de 1/2 cm. de cote; Ie faire dissondre en
chauffant dans quelques. centimetres cubes d'eau distiIIee,.
dans un tube a essai; apres dissolution, remplir Ie tube
d'eau distillee froide, agiter et filtrer.
Le collage des coupes sur lames peut egalement se faire
par l'albllminc de Maycr :
Albumine d'oouf . 30 cc.
Eau distilIee '. . . . . 5 c~·.
Glycerine it 300 Bo • . • ]0 cc,
ou par Ie blanc tf'reuf de DeJ1ige,~ :

Blanc d'reu£. . nO 1
Eau dislillee , . . • . . . 150 ce.
~cide acetique. • . . . . . 3 gr.
Dissoudre l"acide acetique dans la solution Illbumineuse. Fillrer.
'-
La lame' est portee sur une pl~tine chauffante. L'etale-
ment doit etre obten~ ires rapidemellt, en l'aidant avec deux
aiguilles montees. mais fa paraffine ne doit pas fondre.

Egoutter reau gelatinee ; essorer au papier Joseph; laisser
secher a l'abri des poussieres entre 400 et 500 • Les coupes
sont collees en une 1/2 heure si elles sechent dans une
atmosphere de vapeurs de formol. Sinon il sera prudent
de les laisser de 12 a 24 heures.
Trailement des coupes avant la coloration. - Porter suc-
cessivement la coupe collee dans des cylindres de verre
(tubes de Borrel) contenant les liquides suivants :
10 Toluene I. une minute;
2 0 Toluene II. une minute; egoutter; essuyer Ie dos et
les bords, laver Ia lame a l'aicool absolu contenu dans un
flacon compte-gouttes;
3 0 Alcool a 95° formole a 10 %, deux minutes;
4 0 Alcool a 800 , deux minutes;
50 Eau distillee.
A partir de ce moment, jusqu'au montage, la coupe ne
doit plus se dessecher.
Si l'on a employe un fixateur au sublime, il seranecessaire,
a la sortie de l'eau distillee et avant la coloration, de laver
1a coupe pendant une 1/2 beure dans la solution de Lugol,
puis, jusqu'a decoloration, dans l'hyposulfite de soude a 5 %.
Nouveau lavage a l'eau distillee.
d) Deshydratation continue. _.- Pour ~deshydrater les
pieces destinees aux coupes histologiques, Limousin
emploie une technique simplifiee qui lui donne de tres
bons resultats.
Les fragments de tissus sont fixes pendant 24 heures dans
Ie liquide suivant:
Acetone. . . . 150 gr.
Formol. . . • 60 gr.
Acide pieri que •. 1 gr.
Acide aeetique. 15 gr.
Si l'on a affaire a des organes tres mous, comme Ie foie,

Ie rein, Ie poumon, il est avantageux d'en immerger un frag-
ment assez gros, pendant 3 heures, dans ce fixateur: Ie
fragment deviendra assez ferme pour etre ensuite taille a
l'epaisseur voulue, a I'aide d'un rasoir.
Les fragments ainsi obtenus sont alors replaces dans Ie
fixateur jusqu'au lendetnain.
Au sortir du fixateur, les morceaux de tissus sejournent

24 heures dans un appareil a deshydratation continue par
l'acetone anhydre. L'acetone elant miscible a l'eau et a la
paraffine, des traces de ce produit ne peuvent . gener rin-
elusion a la paraffine, comme cela a lieu avec 1'alcoo1. Au
sortir de l'acetone il suffira done d'c,~claircir les pieces du-
Fig. 14. - A gauche l"appareil construit par « Pyrex ». A droite, appareil

qu'il est facile de construire soi-meme.
rant quelques heures dans un seul flacon de toluene ou

d'nuile de cedre, puis de faire l'inelusion a la paraffine sui-
vant la technique habituelle.
128 TECHNIQUES GEN/~RALES
L'nppal'eil a deshydl'atalion continue est essentieHement

compose d'un flacon a large goulot, eontenant du earblll'e'
de calcium cone~sse, et rempli d'acCtone. A travers un bon
bouehon hermelique, penetre une eprouvette, dont Ie fond
est perce de trous. Vne autre petite Ol1vertnre est menagec
dans Ie haut, au-dessous dll bouchon dll flacon et au-dessus
du niveau de l'acetone, de fa~on a maintenir l'equilibre des
deux liquides, qui ponrrait etre modifie pm' un degagement
Fig, 1:>. - r;"PP,"'cil ou\'ert POIII' chungcr la pil'ce pal" "implc rCl1\'erscment
<II' l'eproLl\'elte.
degaz. L'eprouvette est fermee par un bouchon muni d'une

soupape, simple tube etrangle, et dont l'ctranglement re-
tient nne biUe de verre. On place les pieces dans l'eprou-
vette centrale et on les retire au bout de 24 hem'es a I'aide
d'nne pinee. Si Ie bouchage est convenable, l'appareiI pellt
servir plusieurs mois Sans etre recharge.
L'acetone usage sert a la confection du fixateur. mais il

est necessaire de filtrer apres Ie melange des difl'erents
produits.
C. - Digestion artificieUe des tis sus et decalcification.

a) Digestion artificielle des coupes de tissus cartiiagineux, de
lo nucUine, de id gelatine et dll tissll conjonctif reticule :
Trypsine.. . o gr. 20
Eau distillee. 100 ce.
Soude.. • . o gr. 30
ChlQ[·oforme. qu.e[q. gouttes.
A l'etuve a 370 pendant 12' au 24 heures au au bain-marie.

Cette digestion peut se faire directement sur lames. On
13 suit uu microscope et on l'arrete par lavage a reau aci-
dulee, puis a l'eau courante.
b) Decalcification des tissus osseux par ia solution de Hang.
Acide nilrique de densite 1,4.. . . . • 10 gr.
Phloroglucine. • . , •..• 1 gl'.
Faire dissoudre a chaud, ajouter ensuite

Eau dislillee. . . . • . . . 100 ce.
Acide Ilitrique de den site 1,4.. . . . . 10 gr.
Laver ensuite a l'eau courante pendant 48 heures.
MICROBJOJ.OGlE 9
CHAPITRE X
MARCHS A SUIVRE POUR LA DETERMINATION DES

MICROBES D'APRBS LEUR MORPHOLOGIE ET LEURS
FONCTIONS BIOLOGIQUES ..
1. - Examen microscopique.
a) San$coloration en goutte pendanteCsur culturesjeunes):

mobiHte, forme et rapidit~ des mouvements.
b) Avec coloration (fuchsine, violet de gentiane, thionine,
Giemsa) : forme des elements, isoles ou groupes, dimension,
arrangement en chaines oU.en amas, absence ou existence
de spores.
c) Methode de Gram: resistance ou decoloration au Gram-
Lugo!.
II. - Culture dans les milieux us~els.
a) Bouillon simple et eau peptonee.

Trouble ou limpidite apres 24 heures, ou plus, a l'etuV€
a 370 et apres 48 heures, ou davantage, a la temperature du
laboratoire; aspect du trouble: uniforme, grumeleux, ondes
soyeuses. anneau muqueux adherent au verre, etc., for-
mation de voiles et aspect de ceux-ci (irises, epais ou
'minces, muqueux ou sees, plisses ou lisses, etc.), formation
d'un d~pOt (pulverulent, muqueux, caseeux, etc.), reaction
alcaline ou acide apres developpement de la culture,
odeur de Ia culture.
b) Gelatine enplaqlles, ida temperature de 20-22°. I
Date de I'apparition des colonies apres ensemencement.
Leur aspect, leur coloration, leur developpement. Date et
marche de Ia liquefaction si elle se produit. Aspect et
DJ1TERMINATION DES MICROBES 131
forme- des colonies de surface et des colonies de profon-
deur. Odeur de la culture.
c) Gelatine en piqi1l'e.
Aspect de la trace d'jnoculation (invisible, granuleuse,
arborescente, etc.). Marche de la liquefaction (en form£'
d'entonnoir, de cupule, de bulle d'air, etc.).
d) ·Glllose incliRf!e; en surface.
e) S~rum gelatine incline.
f) Pommes de terre,
g) Gelose glucosee at nitl'atee de Veillon (culture anaerobic).
Avec ces divers milieux, on determinera si Ie microbe es~
anaerobie ou a~robie, oU anaerobie facultatif. On precis era
la temperature optimum de sa culture surles milieux; les
plus favorables, sa resistance it la chaleur et son aptitude
it former des pigments colores sur les divers milieux.
III. ~ Action sur les matieres azotees.
a) Eau peplonee simple: formation d'indol.

b) Albumine Guile: tube de Mette pour la recherche des
ferments proteolytiques.
c) Lait : coagul::,ttion pl!r ?cidifjcption ou par production
de presure, _peptonisation de Ia caseine.
Epreuve sur lait additionne de carbonate de Ghaux (pur
et precipile) pour eviter la coagulation PfJr les acides.
Epreuve sur bit colore au bleu de tournesol avec 2.
p. 1.000 de chlorure de calcium (temperature de 370) pour
determiner s'il s'agH d'une presure.
d) Uree ; transformation en cllfPonate d'ammoniaque pal'
secr6tio(l d'ur6asB,
e) Nitrate : eall peptance alp. 1QO additionn~e de 1
p. 100 cie nitrate de potasse pur, stMilisee, 48 hellres aprea
ensemencemept, rechercher la presence des pitrites par Ie.
reactif de Tromsdorf et noter sur les cultures:
si Ie nitrate est decompose avec deg~gement gazeux ou

sans formation de nitrites;
si Ie nitrate donne des nitrites sans degagement gazeux ;
si Ie nitrate n'est pas reduit.
qn repetera les reactions sur les tubes temoins non ense-
menees.
IV. - Action sur les hydrates de carbone.
En raison de Ia production de composes basiques par les·

microbes, on ne peut etre certain de l'action de ceux-ci
sur un hydrate de carbone donne qu'en introduisant dans
un milieu convenable une quantite connue de' ce corps,
pese au milligramme pres, aussi pur qu'il est possible de
l'obtenir, et en dosant cequ'il en reste dans la culture apres
un certain temps de sejour a Ia temperature optima.
A cause de l'action des constituap.ts des milieux sur les
glucides pendant la sterilisation, avoir soin de toujours
prepareI.' un ou deux temoins avec Ie meme volume de mi-
lieu, Ie meme poids de glucide et un recipient identique ;
on les sterilise en meme temps que les tubes ou ballons
d 'essai, mais on ne Ies ensemence pas. Temoins et cultures
sont places cote a cOte a l'etuve, d'ou on les sort ensemble
pour les analyser simultanement.
Comme milieu de culture on emploie gen¢ralement:
Eau. • . • . . 0 • • 0 0 • • • ° 100 CC.
Peptone seche verifitie exempte dOhydrates de
carbone. • . . . . . . . • . . • 1 gr.
ajuster Ie milieu a pH = 7,2 a 7,5, mettre en ballons, ajouter

une quantite de glucide (hydrate de carbone) exactement
pesce et calculee de telle fa~on que Ie milieu renferme de 2
i13% du corps etudie. SteriliseI' de preference par trois chauf-
fages de 1 heure a 100 degres, sinon 20 minutes a 115 degres.
Pour que l'attague des glucides ne soit pas gence par
l'acidification des cultures, on ajoute au milieu un exces de
carbonate de calcium. Ce compose, meme Ie plus pur, en
agissant a chaud sur les peptones augmente notablement
l'aIcaIinite des milieux et accroit l'alteration des glucides ;
il est facile d'eviter cet inconvenient en introduisant asepti-
quement. avant l' ensemencement, dans les tubes ou ballons
DETERMINATION DES MICROBES 133
renfermant Ie milieu sucre, une certaine quantite d'un lait

assez cpais, prepare a l'avance, en sterilisant; dans de reau
distillee, du carbonate de' calcium precipite, leger, chimi-
quement pur (les carbonates'lourds sont mbins facilement
attaquables dans les solutions diluees d'acides faibles).
Au lieu de carbonate de calcium on peut introduire it
l'avance dans reau peptonee un melange de phosphates
alcalins qui constituent d'exceIIents tampons.
La quantitedephosphatesdoit eire d'environlOpourlOOO
et la proportion respective du P04Na 2 H et de PO' KHZ
doit etre calculee et essayee de maniere que Ie milieu,
apres sterilisation, soit a pH = 7,2,a 7,4.
Quand on ne disposera pas du temps ou des moyens ne-
cessaires pour analyser les cultures, on pourra determiner
approximativement l'action des hacteries sur les glucides
it l'aide de la technique suivante :
10 Preparer la solution suivante:
• Eau. . . . . • . . • . . . . . . 1.000 CC.

Peptone pancn\atique de viande Defresne
exempte d'hydrates ue carbone. • • . , 20 gr.
Ajuster cette solution de maniere que sa reaction aprfs

sterilisation a 1150 soit bien neutre, c'est-a-dire corresponde
a pH =,7. La repartir par 10 cc. dans des tubes a essai de
Pyrex ou it deraut en verre vert. Steriliser 20minutes a 115°.
20 Preparer d'autre part (en avoir toujours en stock) des
sQlutions concentrees, titrees, des glucides aessayer, conser-
vees steriles en ampoules de Pyrex ou de verre neutre.
30 Disposer sur des supports aut~nt de tubes d'eau de
peptone, plus deux, que ron veut examiner de sucres. Con-
server deux tubes comme temoins; introduire aseptiquement
dans chacun des autres la dose de glucide convenable
(1 a 3 %). Preparer 2 series de tubes pour chaque microbe
etudie: placer une nuit a l'etuve it 37 0 pour s'assurer
qu'aucun tube n'a cultive. Preparer une emulsion bien
homogene de corps micro biens provenant d'une culture
de 24 heures sur gelose et, avec la JIleme dose dc celle-
ci, ensemencer tous les tubes, sauf un des deux temoins.
Maintenir les tubes a 37 0 et, au bout d'un ou trois jours
par exemple) introduire, dans tous les tuhes, Ie meme
nombre de gouttes d'une bonne tointure de tournesol lIen-

sible f; noter les resultats par comparaison avec les temQins.
Du quatrieme au dixieme jour, faire la meme operation
avec Ia 2e serie de tubes. Pour chaqRe microbe on pourrait
avantageusement preparer deux autres series de tubes
qu'on examinerait en meme temps que les autres, mais
avec un indicateur polyvalent comme Ie B. D. H. Universal
Indicator, prepare par The British Drug Houses Ltd,
qui permet d'apprecier approximativement les variatidns
dupH.
Quant a Ia maniere d'exprimer les resultals. cUe dbit
varier avec la technique employee, Lorsqu'on aura pratique
des dosages, et dans ce cas seulement, on pourra dite qu'un
microbe attaque ou n'attaque pas tel ou tel glucide, mais
quand on aura simplement appre(:ie ave!; les indlcateurs la
variation dela reaction des milieux sucres, on devra S6 Ma-
tenter d'ecrire: Ie Bacille x determine OU ne determine
pas, apres de tant de jours, l'acidification de I'eau peptonee
neutre additionnee de tel ou tel sucre, Bien entendu, quand
il ya acidification on peul dire que Ie sucre est attaque ;
par contre Ia persistance de la Lutralite, ou a plus fortc
raison l'alcalinisation d'un milieu, ne permet nullement
d'affirmer qu'il n'y a pas eu formation d'acide aux depens
du glucide. La reaction finale d'une culture en milieu pep-
tone Sucre resulte en effet du balancement de deux pheno-
menes: production d'elements basiques (amnloniaque ou
corps azotes complexes) et production d'acides, ph~nomenes
dont )e premier peut masquer completement Ie secon.d
quand il s'agit, par exemple, d'un sucr.~ peu atta.quable par
un microbe grand producteur d'ammoniaque. C'est I?eme
pour cette raison qu'on doit faire des essais multiples,
avec des temps de developpement variables, quand on se
contente d'examiner les variations de la reaction. II est hon
de remarquer, toutefois, que to utes ces precautions ne
concernent que 1es recherco:hes ayant pour but de decrire
des especes nouvelles, ou de completer des descriptions
anciennes, et que, pour les diagnostics bacterlologiques, il
1. La technique qni conaist. a introduire Ie tournesol dad. Ie nlIUeu ftvltnt ense-

mencement n-est pAS it reeorllmander a Mlllse des phenoll'letIes de teductiO'll qui at! pro-
duisent '1U cOllrs du developpement microbien ot qui Bonvent decolorent Ie milieu.
faut s'en tenir aux methodes couramment appliquees

dans les laboratoires cliniques (geloses sucrees, tourneso-
lees, etc.). (A. Berthelot.)
Les hydrates de carbone'a etudier seront :
a) A.lcools potgalomiques (que les microbes oxydants trans-
forIpent en une aldose .cotrespondallte, par exemple ~ mal1-
nite en levulose, sorbite en sorbose; etc .•. :
Glycerine •
. Mnnnite.
Dulcite.
Erythrite.
b) Sucres ea Co :
Arabinose.
Xylose.
C) Sucre$ t!n Co :
Glucose.
Levulose {cristallise, solution sterilisee it froid).
Galactose .
. d) Sucres en C12:
Saccharosll (l'echetehllr s'illlll ~roduit une inV'ertrne).
Maltose.
tactose.
e} Aulres hydrates de carbone :

Dexlrine. lnuline. Reehercher s'\1 M prodllit dll 111. de~\ti~
nase et de l'inulase, par la liqueur dll Feh1fng.
Amidon. Preciser si I'cmpois d'amidon est seulement
liquefie ou s'il est saccharifie. On prepare a cet eft'et
,un milieu special avec 5 p. 100 d'amidon et 1 p. 100
de pepto,ne. On sterilise 45 minutes a 115 0 CIa masse
etant·trtl~ peu cb'nduclrice).
V. - Formation d 'hydrogelle slllfUte,
Beaucoup de microbes reduiseut les sulfates et produi~

sent une plus ou moins grande quantite d'hydrogcne sul~
fure dans les milieux pept.oncs, ce 'Corps se forme, souvent
en abondance, nux depens des constiluants sulfures des ma"
tieres albumiuoldes (cystine). CeUe production est mise en
~vidence en ajoutant au milieu de cullure soli de {eau pepto ..
1'36 TECHNIQUES GENERALES
ne.e gelosee, par exemple). avant sterilisation, une quantite

de carbonate de plomb telle, que les particules insolubles de
cctte substance soient assez rapprochees pour donner it la
masse une teinte blanchatre homogene. Les colonies reduc-
trices qui~s'y developpent prennent une teinte brune (sul-
{ure de plomb) tres caracteristique.
On peut aussi incorporer au milieu 1 gramme d'acetate
de plomb par litre, toujours avant sterilisation. Le
bouillon ne convient pas pour cet usage, car Ie plomb s'y
precipite. ,
Il faut eviter de boucher les tubes ou vases de culture
avec du caautchouc lorsqu'on se propose de rechercher
HIS, car les bouchons et capuchons contiennent presque
toujours du soufre.
S.\T. Darling a propose de remplacer l'acetate de plomb
par Ie sous-nitrate de bismuth, dont 1 it 2 grammes p. 100,
ajoutes aux~milieux de culture, decelent avec plus de sensibi-
lite l'hydrogene sulfure ou les composes sulfures cap abIes
d~ former des sulfures metalli1:fues. Tantot c'est Ie milieu
qui se colore apres diffusion de l'hydrogene sulfure, tan tot
c'est Ie metal qui penetre dans les corps microbiens, s'y
transforme en sulfure, et alors les microbes sont colores en· ,
noir, soit en masse, soit par depOt de granules places it la
peripherie ou aux extremites des corps microbiens. Le
bacille' typhique. Ies paratyphiques, Ie bacille dip~terique,
la bacteridie charbonneuse, ne donnent aucune reaction
dans les milieux bismuthes.
VI. - Action ~ur les animaux.
Etude ~u pouvoir pathogene, de Ia propr!ete toxigene, de

la virulence.
Tout microbe est pathogene quand il se montre capable
d'engendrer des troubles morbides.
Tout microbe est loxique quand il secrete ou contient un
poison specifique.
Tout microbe·est virulent quand il se multiplie dans 1'0::--
ganism~ attaque et qu'ill'envahit plus ou mains vite et plus
ou moins completement.
VlI. - Recherche des caracteres antigene S

. a I'aide d'un serum specifique.
Agglutination, precipitation (extraits bacteriens), fixation
du complement ou de l'alexine (methode de Bord~t·Gen
gou).
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140 TECHNIQUES VENERALES
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142 TEOHNIgUES GENERALES
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DETERMINATION DES MICROBlis 1'48
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MlCROBIOLOGIE 10
1,46- TECHNIQUES GENERALES
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IX. - Tableau type pour· la determination
d'un microbe.
Designation :
Origine:
Mode d'i,olement :
Forme et disposition des elements :
Motilit~ : • Cils:
Capsule: Spores:
Formes a"involution :
Caracteres de coloration :
Gram: Acido~resi8tance :
Dimensions des elements
Action de r oxygene :
T. Optimum: T. martelle:
Caractere,v des cultures. Bouillon ordinnire :
Bouillon Martin:
Bouillon glucose :
Bouillon ascite :
Bouillon serum :
Bouillon lactique 2 %. : Bouillon laclique 5 %., glucose 5 %. ,:
Lait: of
Lait tournesole : Presllre :
Gelatine. - Colonies sur plaques :
Gelatine. - Piqure :
Gelose ordinaire. - Colonies sur plaques:
Gelose ordinaire. - Strie :
Gelose ol'dinaire. - Piqure :
Gelose glucosee. - Colonies et strie :
Gelose glucoseo (Veillon). Tubes proronds. - Colonies:
Gelose glucoseo nitratee. - Colonies:
Gelose ascite inclinee :
Gelose au sang inclinee :
Serum coagule :
Pomme de terre:
Pomme de terre glycednee :
Gelose do Sabouraud :
Carotte :
Navet:
Bouillon de haricots (Maze) :
Eau de malt:
Gelatine it la maltopeptone (glucose, acide) :
Sol. de maltopeptone 10 % 0 + Saccbarose 10 % :
Sang delibrine :
Urine:
Gelose de Conradi-Drigalski :
Eau peptonee (p. pancreatique Defresne) : reaction:
Enu peptonee glucosee 10 %0: reactioll.limite en SO'H' ou NoOH par litre:
Lactoserum (presure) :
Gelose glycednee :
Gelatine au bouillon de harengs, sale 30 0/00 :
Empois d'amidon : Malta.. Glucose.
lUilieu de Gessard (Succinate NH4) :
Gelee de silice (Beyerinck) :
Liquide de Uscbinsky :
Liquide d'Omeliansky avec cellulose:
Liquide Rnulin :
Gelose: PO'K'H + SO'Mg+
Ascite :maerobie fNoguchi \ :
C03Ca: Gelose + PO'K'H + SO'Mg + CO'Mn:
C'aracleres biochimiques : Pouvorr proteolytique :

Gelatine: Blanc d'reuf coaguJe Serum co"guM Caseine
Pouvoir acidaminolytique: Developpement sur milieux d'isolement (A, Berthelot),
4e passage, culture de 48 heul'es.
Tyrosine Tryptopbane Ac. Glutamique Proline
Histidine Leucine Ac. Aspartique Arginine
Alanine Glycocolle Phenylalanine l..vsine
Solution de peptone de soie (H. La Rocbe) it 1 %.
Solution d'ereptone (Hoecbst) " 1 0/0
pH optimum: pour Ie developpemellt . pour la toxicite au la virulence
pour la conservation
Develol'pement ~n solution saline (PO'K'H, SO'Mg CaCI·) dans laquelle N et C sont
fournis par 2 0/00 d'une des substances suivantes :
Uroe : Allantoine : Cafeine : Creatine:
Action sur Ies hydrates de carbone: Reaction au tournesol des cultures (4 jours) en
eau peplance additionnee d'un des corps suivants :
Glucose 1\{annite Arabinose Glucosamine
Levulose Dulcite Xylose Salicine.
Galactose Erythrite Mannos. Amygdaline
Saccharose Dextrine Raffinose Arbutine
Lactose Amidon Rhamnose Esculine
Maltose Inulin. Sorbit. Methylglucoside a
Glycerine Glycogene Inosite Methylglucoside ~.
Remarques sur les cultures ci-dessus :
Action sur I'acide laetique (C fourni par un laclate)
Action sur les nitrates: Nitrites: Ammoniaque:
Action sur Ie rouge neutre (eall peptonee) :
Pigments:
Corps microbiens en masse(methode de Maurice Nicolle) (culture de 24 h.). - Aspect:
Rendement : H'O %.
:Action de la bile ou des sels bilioires :
Action de la piperidine :
Action sur les graisses : Gelose ordinaire + beuITe (plaques) :
Gelatine ordinaire + beurre (plaques) :
Produits formes nux dcpens des proteiques OU de leurs constituants :

Milieux au tryptophane :
I ndol : Scatol : A c. Indolacellque :
Mil. a In tyrosine : Phenol:
p. Cresol OxyaCid" : P. ozyphenylt!thylamtne :
Mil .•iI l'histidine :
ImidazoIethglamine I
Milieux Ii I'arginine: Putrescine
Sol. de peptone panereatique (Defresne) : H'S I Mercaptan.: NB'
Amine. volatile. Aeides vola til. Uree :
Mil. au blanc d'reuf caaguIe, a la gelatine, au serum au a Ia cascHne :
Produits formes nux depens des hydrates de carbone ou de leurs derives :
(Ean de peptone glueosee) Aleool ethylique : Aldehydes:
Acetone: .A Ie. propylique : Ale. butylique nornfel
A Ie. isobutgllque : Ale. omylique: Ale. methylique:
Dioxyact!./one : Acetylmethylcarbinol: Butyl'ne·glycol :
Acide formique : Ac. acitique : ..le. proplonique :
Ac. butgriqae : Ac. vaIerianique: .de. caproique: : Ac. Buccinique
Ac. laetique droit: Ae. lacllque gauche: Ac. oxalique :
CO': H: CHi;
Aclde pyruvique Acid. ~ oxybuty,ique:
Pou.oir pathogene. - Cultures totales en bouillon (24 h.) :

Souris: Inj. sous-cut. Inj. int .. periton.
Cobaye : lnj. sous-cut. Inj. int.-periton. lnj. int.-veineuse
Lapin: Inj. sous-cut. Inj. int.-periton. Inj, int.-veineuse
Corps mlcrobiens (24 h ).
Poisons solubles (Cult. en bouillon Martin, 10 jours). - Toxine.
Subst. alcnloldiques (sol. alcool).
Endotoxine (corps microbien. 24 h ..l.
Hemolysine (bouillon + globules 24 h.).
Cdtures en milieux speciaux.
Ob.;;ervations :
Notes c~iniques :
Date:
D'upres A. Berthelot (Institut Pasteur).
CHAPITRE XI
R:(IJOE'l'T]JJS UTILf)S DANS LES LABORATOIRf)S
A. - Fermeture et etiquetage des vases ou flacons.
10 Mastic pour luter les flacons con tenant des pieces anato.
/.
mlques.
Caoutchouc (fragments de vieux lubes). 200 gr.
Suif ou paraffine fusihle it 40-500 • • • 125 gr.
Talc de V.enise. .•...... 200 gr.
Faire fondr~ Ie suif a une douce ehaleuret y jet~r les frag.

ments de caoutchouc. Agiter de temps en temps, puis
ajouter Ie talc. Le melange refroidi se conserve indefini·
ment. II faut Ie chauffer pour s'en servir et Ie porter avec
une baguette chaude sur les joints qu'on desire Iuter.
Ce mastic est inattaquable par 1'alcoo1.
Ou bien:
Glu marine.
Faire macerer pendan~ 3 au 4 jours 1 pattie de caout-
chouc et 3 parties d'huile de goudron. Decanter Ie liquide
e1 y mire fondre it chaud 3 parties de gomme Iaque Couler
dans des moules. La masse se solidifie a froid Cctte glu est
tres recommandable pour luter les flacons bouches au
liege. Elle forme un enduit tres soli de et impermeable a
l'humidite.
On peut aussi luler les flacons qui renferment de petites
pieces anatomiques ou d'autres pieces de collection (in sec-
tes, vers, etc.), en recouvrant Ie bouchon avec l'un des luts
suivants:
a) On fait une bouillie avec du silicate de soude commer-
cial et du kaolin pulverise. On l'applique sur les' houchons
et on laisse seeher.
b) On gache du platre avec de l'eau contenant 5 p. 100 de
RECETTES UTILES DANS LES LABORATOIRES '153
gomme arabique. La 'bouillie devient solide en une demi-

.
heure et tres adherente .
c) On melange :.
Silicate nentre de soude. 1 partie.
Magntlsie calcinee. 1 partie.
Oxyde de :tine.. • • • 1 partie.
Appliquer et laisser secher. Ce lut constitue un mastic

lVec lequel on peut coller les objets de porcelaines et qui
sup porte Ia cuisson, au four.
Lul de Kronig. (Pour border les preparations en milieux
liquides) :
Faire fondre 20 grammes de eire jaune dans une capsule
de porcelaine. Y ajouter peu a peu 80 grammes de colo-
phane en agitant avec une baguette de verre. Lorsque Ia
masse est bien homogene, couler dans de petites boites
metalliques. Ce lut fond au contact d'un fer chaud. II est
adherent au verre s~ et durcit tres rapidement.
2 0 Encre pour ecrire sur Ie verre:
A 100 centimetres cubes d'encre ordinaire ou d'encre de
Chine liquide, on melange 20 centimetres cubes de solution
commerciale de silicate de soude.
Avec cette e.ncre silicatee. on ecrit, comme on Ie ferait
sur du papier, au moyen d'une plume ordinaire qu'on
prendra soin de laver chaque fois dans l' eau, car, ap'res des-
siccation. les becs ne se separeraient plus.
30 Impermeabilisation des etiquettes,
On la realise tres simplement en les recouvrant au pinp
ceau d'une couche de paraffine fondue.
4 0 Gelatine ge/osee pour polycopie:
Ean. • . • . • . . . . • . . 400 cc.
Gelose.. . . . . . • . . . . . 8 gr.
Laisser tremper 24 heures. Passer a l'autoclave a 1200 ,

puis ajouter au melange fondu:
Gelatine . . 80 gr.
Glycerine. . • • . . • . 600 gr.
Glucose. . . . . . . . . 100 gr.
Talc. . . . • . . . . . 25 gr.
Couler dans une large cuvette a photographie en passant

sur tarlatane ou sur un tamis fin.
50 Encre a polygraphie sur gelatine:
Violet de Paris. • . . . . . . • 1 gr.
Aleoo!.. • • • • . • . • • • . 2 ee.
Eau. • . • . • . . . • • • • 7 ee.
Pour effacer, laver la gelatine avec un tampon d'ouate

hydrophile imprtgne. d'eau ac}dulee d'un dixieme d'acide
chlorhydrique. Faire suivre d'un lavage it l' eau et secher.
B. - Nettoyage des lames porte-objets usagees.

Su~ la table du laboratoire, les lames eUes lamelles sont
conservees dans de petits vases a recouvrement, remplis
d'alcool a 95". On les'sort de ce liquide au fur et a me sure
des besoins et on les essuie avec un linge fin.
Les lames et les lamelles usagees sont reunies dans un
bocal contenant une solution de carbonate de soude a
5 p. 100. Lorsqu'elles sont assez nQ,mbreuses, on les fait
bouillir .pendant une demi-heure dans une capsule remplie
egalement de solution de carbonate de soude. On les egoutte
ensuite et on les reporte dans une autre capsule OU I'on
verse une solution acide bichromatee, preparee comme
suit:
Bichromate de potnsse. 5Q.gr.
Enu, . . . . • . . • ' . ' 1 litre.
Acide sulfurique ordinnire. 100 gr.
On fait bouillir de nouveau pendant 30 minutes, puts on
sort les lames ou lamelles, on les lave a grande eau cou-
rante, oh les egoutte et on les essuie une it une. Elles sont
alors de nouveau pretes it servir.
C. - Obturation des tubes pU vases de culture.

CeUe obturation se fait Ie plus commodement avec des
capuchons de caoutchouc qu'on peut steriliser it I'autoclave
et conserver dans une solution de sublime 'au milJieme.
Mai~, comme ils coutent ass,ez. cher, on,peut treshien les
remplacer par l'obturation au moyen d'un melange de
10 par~es <I.e vaseliI_1e ,fusil?le a 400 et de) p~rtie de paraf-
fine fusible.a 55°, qu'on coule sur Ie bouchon d'ouate lege- ,
rement enfonce dans Ie tube ou Ie goulot du vase et qu'on
recouvre d'un capuchon de papier ou d'etain.
RECETTES UTILES DANS LES LABORATOIRES 155
D. - Conservation et e-ntretien des seringues

et aiguilles it injection.
Les seringues a injection, sterilisables par la chaleur, it
piston de caoutchouc ou de fibre, doivent etre maintenues
constamment immergees dans un bocal a large ouverture,
bouche it I'emeri et contenant une solution saturee 'it froid
de borate de soude.
On prendra soin de talquer et de faire jouer de temps en
temps les pistons,
Les aiguilles a injection en acier seront conservees inde-
finiment a l'abri de la rouille si, aussitOt apres qu'on en a
fait usage, on les plonge dans Un flacon con tenant la meme
solution de borate de soude saturee a froid et filtree, Chaque
aiguille doit toujours etre pourvue d'un fil d'argent ou de
nicke),' afin d'empecher l'obturation de son canal par de
petits cristaux de sel.
II est toujours recommandable d'a'jouter un peu de borate
de soude a reau dans laquelle on fait bouillir seringues,
aiguilles, bistouris, instruments nickeles divers. C'est un
excellent moyen d'e,'iter les taches de rouille. .
On trouve maintenant dans Ie commerce des aiguilles et
instruments enacier renfermant 13 a 15 pour 100 de chrome
au en divers autres alliages completement inoxyda'bles.
E. - Sterilisation des aiguilles d'acier

au cbloroforme paraffine.
La sterilisation est obtenue par l'immersion dans du
chloroforme paraffine (paraffine 3 grammes, chloroforme
100 centimetres cubes) ; on taille en copeaux la paraffine et on
la fait dissoudre dans du chloroforme commercial ou
anesthesique.
Aprcs une heure de sejour dans ce liquide, I'aiguille peut
etre consideree comme sterile, mais on peut l'y laisserinde-
finiment sans dommage.
Avec une pince flamhec, on la retire du tube contenant le
chloroforme paraffine. On l'introduit, pointe en bas, dans un
pet,it tube sterile bouche avec de I'ouate, On renverse Ie
tube ferme et on l'abandonne sens dessus dessous durant
quelques minutes : l'aiguille tombe et vient s'accoler au
bouchon ; son embout deverse sur Ie caton tout Ie chIoro-
forme contenu dans sa cavite. On redresse Ie tube et on Ie
porte a J'etuve a 37°. Cette temperature accelere l'evapora-
tion du liquide volatil. Deux heurcs suffisent pour assecher
les aiguilles.
La sterilisation ne s'accompague d'aucune oxydation de
racier. En s'evaporant, Ie chloroforme abandonne un enduit
minuscule de paraffine sur la paroi interieure de l'aiguille,
qui s'oppose a la coagulation du sang.
F. - Conservation des tubes et bouchons

de caoutchouc.
Les objets de caoutchouc dont on fait rarement usage, se

durcissent et se fendillent a l'air et a la lumiere. II faut,
pour assurer leur conservation en bon etat, -les tenir it 1'obs-
curite, noyes dans du talc eh poudre fine. Ils gardent ainsi
leur elasticite et leur souplesse.
Pour les tubes a gaz ou a vide dont on se sert de temps
en temps seulement, il est plus simple de les tenir immer-
ges dans un large bocal rempli d'une solution de carbo-
nate de soude it 10 p. 1.000 qu'on change tous le~ aeux ou
trois mois.
G. - Destruction des mouches et des mo~stiques

dans les laboratoires, les logements, les ecuries, etc.
a) Lavage des planchers, carrelages et eviers au cresyl a

5 p. 100.
b) Lail formoIe. - Dans des cu~ettes photographiques,
on verse, en couche mince, du lait additionne de 10 centi.-
metres cubes de solution commerciale (a 40 p. 100) de for-
mol. par litre. Les mouches qui s'abrenvent a ce liquide
ne tardent pas a succomber. .
On peut preparer de la meme maniere de la biere formo-
lee. Les mouches en sont tres ·friandes.
c) Papiers tue-mouches.
On peut en fabriquer tres facilement soi-melIl;e avec du
RECETTES UTILES DANS LES LABORATOIRI6 15?
papier buvard ou du papier d'emballage 'etale ell carres

sur des assiettes ou dans des cuvettes photdgraphiques et
imbibe de la liqueur preparee comme suit:
Faire bouillir 10 grammes de bois de quass.ia amara dans
250 centimetres cubes d'eau. Passer et ajouter 135 gnimmes
de melasse ou de miel et 10 grammes d'emetique (tartrate
de potasse et d'antimoine).
d) Cobolt (arsenic metallique reduit en poudre fine et qui,
par son contact avec l'air, subit rapidement un commence·
ment d'oxydation).
On etale cette poudre en couche mince dans des assiettes
ou des cuvettes photographiques sur un papier buvard que
I'on maintient mouille avec une tres petite quantite d'eau.
Elle est tres toxique pour les mouches.
(On trouve Ie cO'bolt chez Poulenc freres.}
e) Vapeurs de cresgl chauffe (methode de Bouet et Roubaud,
recommandee pour les ecuries, salles d'anitnaux, etc.).
Dans un recipient metallique un peu profond, une vieille
marmite par exemple, on fait houillir, sur une lampe a
petro Ie ou a alcool, une quantite de cresyl pur corr~spon
dant it 5r grammes de cresyl par metre cube d'espace a trai-
ter.
f) Tabac (methode preconisee par Simond et par Thiroux),
Soufre, Pyrethre, Quinoleine.
On detruit facilement les moustiques d~une case indigene
en enveloppant celle-ci d'une vaste bache en toire et en fai-
sant bruler a l'interieur, sur un petit rechaud contenant du
charbon de bois bien allume, 20 grammes. de tabac en
feuilles (ou de tabac a fumer) par metre cube. Apres une
heure de contact, tous les moustiques sont tues.
On obtient Ie meme resultat avec 5 grammes de soufre
en canons ou en fleur par me~re cube, 'ou 10 grammes de
poudre de pyrethre, ou mieux avec un melange de
10 grammes de tabac et de 10 grammes de poudre de pyre-
thre ..
La poudre de pyretlire seule donne, par sa combustion,
des vapeurs qui stupefient les moustiques," mais ne les
tuent ql).e difficilement.
Les vapeurs de quirroleine a la dose de 0 gr. 50 par
15'8 TECHNIQUES GENltRALES
metre cube tuent egalement bien les mouches et les mous-

tiques dans leslocaux mal fermes, apres 2 heures de contact.
(J. Legendreet G. Bourret.)
g) Huile de schisie, recommandable pour In destruction
des larves de mouehes dans les fumiers et fosses d'ai-
sances.
On l'utilise en emulsion it 5 p. 100 dans l'eau, projetee
avec u'n balai de brindilles ou avee une pompe it pulveri-
sation.
Pour les fosses it purin ou d'aisanees, il faut employel'
10 litres de schiste par metre cube de fumier ou d'or~
dures.
Nota. - Pour Ia defense contre Ies pOUX, puces,
punaises, tiques, etc., voir Ie chap. XLVll.
H. - Teintur~ noire lavable pour les tables en bois

des laboratoires.
Cette teinture doit etre appliquee, autant que possible,
sur Ie bois neuf bien uni, ou apres degraissage soigneux it
l'essence de petrole.
On effectue un premier et abondant badigeonnage avec
une solution nqueuse it 10 p. 100 de chlorhydrate d'ani-
line tiede. On renouvelle Ie badigeonnage apres qqelques
·heures.
On laisse seeher. Le lendemain, on applique une couche
de solution de 100 grammes d'aeide .ehromique dans un litre
d'eau tiede. A deraut d'acide chromique, on peut employer
un melange de 120 graIl\mes de bichromate de potnsse 1
241 grammes d'acide sulfurique it 66° Be et 1 litre d'eau.
Il se produit du sulfate de potasse avec mise en liberte
d'acide chromique.
Le bois est ninsi teint dans sa profondeur en noir d'ani-
line qui n!siste it In plupart des agents decolorants.
Apres un ou deux jours, on lave it l'eau chaude, on laisse
bien secher et on impermeabilise Ie bois en Ie frottant avec
des dechets de coton impregnes de paraffine chaude, fon-
due. '
CRAPITRE XII
DOCOMENTS CHIMIQUES. - REACTIFS UTILES DANS

LES LABORATOIRES.
A.-Solutions norm ales et decinormales d'alcalis

et de divers sels.
Les solutions dites norm ales contiennent, par unite de
volume du dissolvant, un p<?ids de substance active egal it
l'equivalent chimique de celle-ci, pa.r exemple : 40 grammes
par litre d'eau distilIee pour la'soude caustique; 56 gr. 100
pour la potasse caustique; 53 'granimes pour Ie carbonate
de sodium anhydre.
La solution decinormale de sozzde est preparee en dissol-
vant 4 grammes (exactement 3 gr. 97) de soude caustique
pure dans 1 litre d'eau distillee. 1 centimetre cube de cette
solution decinormale doit eire exactement neutralise par
1 centimetre cube de solution decinormale d'acide oxalique;
il contient 0 gr. 004 d'hydrate de soude.
La solution decinormale de potasse est prePflree en dis sol-
vant 5 gr. 61 de potasse cau.stjql,le .pure dans 1 litre d'eau
distillee. 1 centimetre cube de cette solution doit etre neu-
tralise par 1 centimetre cube de solution decinormale
d'acide oxalique, il contie'llt 0 gr. 0065 de potasse caus-
tique.
La solution normale de carbonate de sodium est preparee
en dissolvant 53 grammes de carbonate de sodium pur
dans 1 litre d' eau distillee.
La solution normale d'ammoniaque = 16 gr. 93 par
Ii tre.
'Solution decinormale de permal19anate de potasse = 3 gr. 5
par litre (conserver en flacon jaune).
Solution decinormale de nitrate d'argent = 16 gr. 868 par
litre. 1 centimetre cube de ceUe solution = 0 gl'. 003518 de
chI ore ou 0 gr. 0058 de chiorure de sodium.
160 TECHNIQUES GENlSRALES
B. - Solutions acides normales :

Acide chlorhydrique. 36 gr. 18 par litre.
» sulfurique. 48 gr. 67» )J
» azotique.. . 63 gr. )) »
» oxalique.. • . . • • 62 gr. 55» ))
(Conserver 11 l'abri de Ia lumiere.)
C. - Reactifs divers d 'usage courant.

Acide chlorhydrique pur Be 1,2.
» » diIue.. 200 gr. pour800d'eau distiIMe.
)l azotique pur, B 0 1,39.
» » dilue. • . • 200 gr. II 800 »
sulfurique pur Bo 1.83.
» dilue. 100 gr. » 900 » »
"
» acetique wIue : acide
cristallisable. . • 300 gr. » 700 »
Hydrate de soude. . • • 10 gr. 90 »
» de /t0tasse. .. 10 gr. » 90 » »
" de aryte • . . 10 gr. » 190 )) »
Ferricyauure de potassium. 10 gr. » 190 »
Ferro » » 10 gr. » 90 »
Chlorure de calcium. 10 gr. » 90 »
Chromate de potassium. . 10 gr. • 190 »
Sulfocyauure de potassium. 10 gr. » 90 »
Sulfate de cuivre. ••. 10 gr. » 90
» de magnesium .• 10 gr. » 90 II
Acetate de sodium. . 10 gr. » 90 » »
Carbonate de sodium. 20 gr. )) 80 » »
Phosphate de sodium. 10 gr. » 190 »
Chlorure de fer. . . 10 gr. :D 100 » ))
Nitrate d'argent • ' . 10 gr. » 190 » »

Bichlorure de mercure. 10 gr. » 190 » »
Acetate plombique. 10 gr. » 190 ), »
Eau de chaux. - Deliter 10 grammes de chaux vive avec

,environ 50 centimetres cubes d'eau distillee. Delayer dans
300 a 400 centimetres cubes d'eau en agitant. Laisser ,epo-
ser 12 heures et decanter Ie liquide surnageant qu'on rem-
place par 1 litre d' eau distiUee. Conserver en flacon bien
bouche.
Eau iodee. - Eau distillee saturee d'iode en paillettes.
D. - Indicat~urs colores des reactions. chimiques.

Phenolphtaliine. - Solution it 1 p. 100 dans l'alcool a
95<' incolore en milieu acide ; rouge vir en milieu alcalin):
Ne doit pas etre.employee en- presence d'ammoniaque.
RECETTES UTILES DANS LES LABORAT'OIRES 161
Teinlure de iournesol. - On peut la preparer soi-meme

avec du tournesol en pains dont on prend 100 gtammes
qu'on pulverise ftnement. On fait houillir ceUe poudre avec
de l'alcool a ·S5· qu'on jette ensuite. La poudre, recueillie sur
une toile, est p1elangee it 600 ou 800 centimetres cubes
d'eau. On chauffe a l'ebuUition dans une capsule, puis on
filtre au papier. On ajoute. au liquid.e filtre son volume d'al-
cool a 850 et on divise en deux·parties.
A la moitie de cette teiritu're' on ajotJ.te, goutte it goutte, de
l'acide chlorhydrique jusqu'a ce que la coloration so it pres-
que rouge, et on reunit a_l'autre moitie pour'avoir la teinte
sensible. On y trempe Ie papier pour l'avoir bleu. Pour
l'avoir rouge. on Ie trempe dans une solution tres faible
d'acide chlorhydrique, et on fait secher.
Papier d'amidon.
Amidon. . . . . . . . . . • • • 1 gr.
Enu distillee. . . • • . • . . .• 100 cc.
Faire bouillir; decanter apres refroid~sseme'nt. Tremper
dans ceUe solntiC!n des feuilles de papier a fiItrer qu'on
fait secher et qu'on decoupe en bandelettes.
Papier Ii ['acetate de plorrib.
Tremper des feuilles de papier a filtrer dans une soJution
a 1 p. 10 d'aceLate neutre de plomb. Faire secher et decou~
per en bandelettes. Ce papier est noirci par les sulfures et
par l'hydrogene sulfure.
Solution de m'elhylorange (helianthine, orange III ou
dimethylorange).
Solution aqueuse alp. 1.000. J aune en milieu alcalin ;
rouge en milieu aciae. Ne doit pas etre employee en pre-
sence des acides organiques .
. Solution de nitroprussiate de sodium a 1 gramme p. 20
d'eau distillee.
Coloration violette par les sulfures. Pas de coloration par
l'hydrogene sulfure.
E. - Principaux dissolvants des matieres

grasses, cires et resiDes.
'points d't!bullilion
a Ia pression barome-
J , trique de 760 rom.
Ether sulfurique .. 35·
Sulfure 'de carbone. 46·
llucnOlllOI.OGIE
162 TECHNIQues. a£N.E.1t:t!LES
lager~ <lft plilroJ.El· SQ· a. 7&~
acetQ.qe.. . . . 56·
f.:hlorororme. 6-}o.
Alcoal methyliqUI!._ . , . fi6 0Q " 64·
,{rqtr""hlo.rure q(ol <;arbol)o.• 76 1
Alcoql ethylique. . 78 0 4
Benzol (Benzene).. . . . 8693
Tolwj\lJ:.. . , • . • • 111·
Alc,ool amylique. . . . . 137'
Xylol (Xylene). . . • . . . . • 142<>.
Essence de terebeptbillllo (terebe,nth.cl\lll). l60'
~&seQ.ce de cedre. • • . . • • • 2370
R ~ Q.eactif d.e 1& celluloStt (chlaroiodure de £w.c) .
.It 25 11\\ 5.0. c(lI\tim~tr~s cubes do s.Qlu.tio,n sirlijlcus.e de

chlorure de zinc dlJ. cQmmerc~ (45 0 .6 e ), on ajpute'l fI
2 grammes d'iodure de potassium cristqIlj,s4 et q.uelques
paillette~ d,'iode. 'f
On chattffe dans une capsuk, a feu nu, en agitant, pour
cone.entrer la solution. De temps eu temps OJ) preleve une
8,Q1l1te qU:O{l depose sqr une fcnille de papier a filtrer.
Lorsque 1a conce.ntration est suffisante, il se produit rapi-
dement une taohe blene intense.
Si l.a coloration. tarde it se manifester, on prolonge un
PElU r~vt\pora.tion, mais it ne faut pas qne ctllle-ci soit pous-
s~e tl:QI} lQin" car Ie reactif perdrait son aCtion colorante
et, pour la lui restituer, il serait necessaire de Ie dil'uer
d'l,ln pen <l'~an. La reaction est plus intetlse ~ ch:1ll,.d qu'a
froid.
G.. ...,.,.. R_.eac.t\fs 4~s. mat;.ieres ~ra.sfie.s.
SOl\lti-Qil d'adde osmique alp. 100 (colore les gouttelcttes

huileuses en noir intense: reduction de Facide o&ulique par
l'QI,~in~.
Pour les matieres grasses d'origine vegetale, Ie reactif de
choix est l'orcanette acetique qu'on prepare comme suit:
On e~ui~.~ 10 gramllles de ra,cin.e d'orcanett~ pulvcrisee
au moyen d'alcool a 90 0 jusqu'a <:e qu'on ait obtenu 50 cen-
timetres cubes de teinture. 1\ celIe-ci, on ajoute 5 ceati-
metr~ c..lWe,:?' d'l\cid~ acetique cristallisable et 32 grammes
d'hydrate de «hloral dissous dans 32 centimetres cubes
d'eau. On lais~e deposljr 24 heures et on filtrfil.
REACTIFS UTILES DANS LES LABORAtOlRES 163
Les glohules gras ou les gouttelettes d'essence se colo-
rent en rouge. Si ron traite la preparation par l'alcool a
90 0 qui dissout et eli mine les essences, la coloration ne
'Porte plus que sur les corps gras.
H. - Caracteres et reactions colorees des

albumoses et des peptones.
Les alhumoses et les pepiones sont solnhles dans l'ean et
non coagulahles par Ia chaleur. Les hetero-albumoses ne
se dissolvent qu'en presence d'une petite quantite de sels
neutres.
Les albumoses se precipitent de leurs solutions aqueuses,
acidiflees par l'acide acetique, par saturation avec Ie sul-
fate d'ammonium. Les peptones.ne precipitent pas dans cas
conditions.
Pour determiner Ie degre de purete d'une peptone com-
merciale, on en dissout 5 a 10 grammes dans 50 centimetres
cubes d'eau, on acidule avec deux gouttes d'acide acetique
eton ajoute, dans Ie Iiquide, du sulfate d'ammonium pulve-
rise, err agitant pour favoriser la dissolution. Quand iI reste
llll petit exccs de sel non'dissous, Ia saturation est com-
plete et la presque totaIite des albumoses est precipitee. On
filtre et, dans Ie Iiquide, on recherche Ia presence des pepto-
nes vraies par la reaction du hiuret (indiquec plus loin).
Le precipite reste sur Ie fiItre est lave avec une solution
:s~tun!e de sulfate d'ammonium, puis egouttc et essore entre
des feuilles de papier a flltrer. On Ie redissout ensuite
-dans qnelques centimetres cuhes d'eau. On y retrouve les
-earacteres des aIhumoses primaires ou secondaires. (Voir
,le tableau ci-apres d'apres Gab. Bertrand et P. Thomas.)
Le serum du sang de cheval ou de hreuf renferme de 7 .a
:s p. 100 de proteines, dont 4,5 p. 100 de globuline ct
-8 p. tOO d'alhumine environ. On pent separer Ia giohuline
'Cn additionnant Ie serum (en agitant constamment) d'un
,",olume egal de solution de sulfate d'ammonium satu-
ree, it Ia temperature de 50 a 60 0 , puis filtree et abandonnee
llU refroidissement. Le precipite de Slohuline peut etre
tecueilli sur un filtre, Jave avec Ia meme solution et essore.
ta globuline, redissoute dans la plus petite quantite pos-
sible d'eau tiede, peut etre isolee par dialyse.
164 TECHNIQUES G'&NERALES
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REACTIFS UTILES DANS LES LABORATOIRES 165
Le liqtiide dont on a precipite la globuline, additionne
de sulfate d'ammonium pulverise, jusqu'a. saturation, donne
Ufil nouveau precipite blanc qu'on peut recueillir et laver
comme la globuline : c' est Ia 'serum-albumine.
J. - R,eactions colorees des substances proteiques.
a) Reaction xCf-nlhoproUique. - A 5 centimetres cubes de

solution (1 partie de blanc d'reuf par exemple et 9 parties
d'eau), on :;tjoute 0 cc. 5 a. 1 centimetre cube d'acide nitrique
a 36 Btl, II se forme, en general, un precipite qui se redis-
0
sout en partie par chauffage. ·On fait bouillir pendant 1 ou

2 minutes environ. Le liquide et Ie precipite se colorent en
jaune. L'addition d'ammoniaque it ce liquide prealable-
ment refroidi, ou de soude caustique, fait virer la teinte a
I'orange.
Cette reaction est due a la presence de noyaux aroma-
tiques dont les derives nitres sont colores en jaune.
b) Reaction de Millon. - A 5 centimetres cubes de la solu-
tion 'proteique, on ajoute 1 a 2 centimetres cubes de reactif
de Millon et on fait bouiIIir doucement. Un precipite appa-
rait, qui se colore en rouge, du rouge carmin au rouge
brique. Si on continue a chauffer, Ie precipite peut se deco-
Iorer et se redissoudre partiellement. On doit donc.chauffer
avec beaucoup de precaution au debut. Cette reaction est
attribuable it la tYI:osine. Le phenoIla donne avec intensite.
La gelatine ne la donne habituellement pas. La liqueur de
Millon non diluee colore a froid, en moins d'une minute, la
peau et les angles .(matieres cornees) en rouge fonce.
On prepare Ie reactif de Millon en faisant dissoudre
1 partie de mer cure dans 2 parties d'acide nitrique a 360 Btl
et chauffant Iegerement a Ia fin, 's'il est necessaire. Apres
dissolution complete, on etend Ie liquide vert de 2 volumes
d'eau. On agite et on decante.
c) Reaction du biuret. - A quelques centimetres cubes de
la solution proteique. on ajoute 1 centimetre cube de soude
a 10 p. 100 pour alcaliniser forteme;t, puis nne solution
de sulfate cup rique alp. 100, goutte a goutte, avec une
pipette. La premiere goutte donne une teinte rose violacee,
1&6 "TECHNIQUES GENERALES
qui vire au violet blen par addition ulterienre de sulfate
de cni.vre. Gatta coloration est due it la formation d'un
compose cupro~pot~ssique. Elle est donnce par toutes les
substances proteiques, Inais est surtout intense avec les
albumoses, et encore plus avec les peptones.
J. - Reactifs urologiques.
a) Liquide d'Esbach (dosage de l'albumine).
Acide picl'ique. .,. . 10 gr.
Acide citrique.. . • . ' . ' . 20 gr.
Eau distillee. . • • • . • . q. s. pour 1 litre.
hJ Liqueur de Fehling (dosage de sucre).

Sulfate de cuivre pur 'It cristallise. M gr. 65.
Sel de Seignette (tartrate dE! potasse
et de soud~),. . . • . . . 173 gr,
Lessive de soude. • . • . . . 300 gr.
Eau distillee. . • . . • • . q. s. pour 1 litre.
On fait dissoudre separement Ie sulfate de cuivre dans

200 centimetres cubes environ d'eau distillee, puis Ie sel
de Seigllette et Ia lessive de soude dans une autte portion
d'eau distillee. On mele, on porte it I'ebullition pendant
10 minutes, on laisse refroidir et on complete Ie volume it
1 litre. (Conserver it l'abl'i de l'air, de la lllmiel'e, et en plu-
sieurs fla~ons remplis et soigneusement. bouches).
Chaque centimetre cube de cette liqueur dOitletre reduit
par 0 gr. 005 de glucose.
c) Diazo·reaction d'Ehrlich (reaction xanthoprateique).
Dimethylaminobenzoaldehyde. • 1 gr.
Acide chlorhydrique.. : • . • 25 gr.
EaD distillee. . • . . . • • 25 cc.
On verse quelques gouttes de ce reactif dans 4 a 5 centi-
metres cubes d'urine. Dans les cas positifs il se produit
une coIoration rouge.
K. - Dosage de l'uree dans Ie sang d 'apres

la . methode de Fosse.
(Combittaison de l'u/'ee avec Ie Xdfllhydrol : dixanthgluree.)
On 'prend, avec une pipette graduee, 10 centi'metres
cubes de serum que l'on verse dans 100 centimetres cubes
RECETTES TJtILES DANS HIS LABfJllATOIRES 167,
d'alCool ii ~5". On ajol1re qttehJl't~s gouttes d'ucifie acetiqul!

fJOur acroifier le melange. n se forme un eoagullim 'qui est
C'O'mplet aptes 4 heures de repo'S -a Ia temperature du I~ho
ratoire. Ce coagulum esl l'ecUeilli sut un filtre" ess6re.
puis lave a 2 reprises avec 10 a 20 centimetres cubes
d'alcool.
Les fiItrats, reunis dans une ~'apsul~ de verI"e de 150 cen-
timetres cubes enviro'n de c9pacite, sont evapores dou-
cement sur un bain-marie jusqu'a reduction du volume
a. 5 cc. environ. On ajoute a1ors, dans Ia capsule, 50 centi-
l1'l1!tres cubes de solution alcoolique 'a I) ou 8 p. lOt> ile
xanthydrol , puis 50 centimetres cubes d'acide acetiqub
cristallisable.
On recouvre la capsule d'un disque de verre et Gn )aisse
en contact pendant 4 heures (au mobs) a 1a temperature
du laboratoire. II ne faut pas depasser Ie delaide 15 heures,
Apres quoi on recueiIle Ie precipite de xanthydrol S'CLr 'un
petit filtre exactetllent tare. Le meilleur filtre est Un
petit entonnoir cylindrique, a aouille capi)laire, qu~on a
prealablementgarni d'un tampon d'ouate hydrophile et se-
eM a 1050 avant de 1e porter a la balance de precisibn.
La filtration aehevee, on seche de nouveau l~ finre a 105'>
et (In pcse. La diff~rence de poids, divisee par', donne 16
poids d'uree contenu dans 10 centimcttes cubes de serum
mis en ceuvre.
Pour Ie serum humain normal, ce poids varie entre 15 e\
30 milligrammes. II s'e1eve a 100 dans certains elats patho-
logiques.
t. - Preparation de III teinture de gai'ac.

(Pour la recherche des oxydases.)
On fait dissoudre a chaud 5 grammes de resine de

gaiae dans 70 centimetres cubes d'alcooI a 950, pUIS 6n
filtl'e et bn ajbute (m~iron 30 centimetres cubes d' eau.
G~tte tcinture doit toujours etre employee fraiche, car
elle se peroxyde ires rapidement. ,II faut Ia teni~ rigou-
reusement a l'abri de l'air.
En choisissantun bloc de resine, on en ecartera les parties
superficielles,. deja oxydees. Si la resine est impure, on la
dissout d'abord dans Ie chloroforme; puis on filtre et on

chasse Ie chloroforme par evaporation dans Ie vide. La
poudre jaune restant est alors dissoute dans l'alcool. On
obtient ainsi une solution tres limpide.
M. - PrepaTation de la pectine.
(G. Bertrand et Mall~vre.)
2 k. 500 de carottes nouvelles, finement broyees, sont

delayees dans environ 2 litres d'alcool a 950 • On chauffe
au bain-marie vers 60° pendant environ 1 heure pour dis-
soudre les matieres colorantes, les graisses, etc. On
decante I'alcool. On passe a la presse dans un linge pour
obtenir un gateau de carottes bien sec .
. Ce gateau est dissocie en menus morceaux et mis it ma-
cerer dans environ 1 litre d'acide chlorhydrique it 2 p. 100,
pendant 24 heures, en ayant,soin de melanger de temps 'Cn
temps. On reporte .sous Ia 'presse et on retire un liquide
duquel on precipite la pectine par 2 volumes d 'alcool it 95 0 •
Les flocons gel~tineux de pectine decantes sont pas-
ses it travers une etoffe de laine, puis exprimes a l,a main.
11 reste sur Ie tissu une masse blanche amorphe, qu'on
~nleve avec une spatule en corne et qu'on dissout dans une
tres petite quantite d'eau tiede it 50°. Cette solut\on .t>rute
de pectine est mise it dialyser dans des sacs de collodion
pendant trois jours en changeant trois fois par jour l'eau
exterieure. La p~ctine est alors purifiee. On peut la
°
concentrer dans Ie vide it basse temperature. 2'k. 500 de
carottes donnent environ gr. 9 a 1 gr. 7 de pectine. Les
solutions de cette substance, traitees par la soude caustique
a 33 0/0, donnent un precipite insoluble dans l'eau,
gelatineux, qu'on peut recueillir par centrifugation et laver
a plusieurs reprises jusqu'a reaction neutre des eaux de
lavage.
Cette pectine gelatineuse a Ia propriete de fixer l'alexine
des serums frais. Elle ne renferme aucune trace de matiere
azotee (W. Kopaczewski et S. Mutermilch).
•
REACTIFS UTILES DANS LES LABORATOlRES 169
N. - Bain-marie. Points d'ebullition

de diverses solutions salines saturees.
TEMPERATURE QUANTITE J}E SEL
n'iBULLl'rION. DISSOUS A 100' DANS 100
p. n'EAu.
Sulfate de cuivre crist.. . 102- 203 gr. 3
,Chlorure de potassium. . 103· 57
Alun d'ammoniaque crist. 104" 422
Borax crist. . . : . 105. 201,4
Chlorure de sodium. . 106· 39,6
Chlorul'e d'ammonium. 112· 73
Nitrate de potasse. . . 113· 247
Nitrate de soude.. • . 117" 180
Acetate de soude.. . • . • 122· 204
Chlorure de calcium anhydre. 141 0 156
O. - Melanges refrigerants de liquides et de sels

a 100 • +
Chlorhydrate d'ammoniaque pulv. 5 parties ~
Azotate de potassium plilv. 5 parties - 120
Eau •• • , • • . . . 16 parties
Azolale d'ammonium pulv. 1 partie ) _ 16.
Eau •. . • . . . • • 1 partie I
Sulfate,de sodium pulverise, 8 parties ) _ 18.
Acide chlorhydl'ique. 5 parties 5
P. - Melanges refrigerants de neige et de sels a 0°.

Neige (011 glace pilee). 1 partie ~ _ 180
Sel marin . . . 1 partie 1
Neige. ' .•. 2 part~es ~ _ 51.
Chlorure de calcium crist. plilv. 3 parlles I'
Q. - Alliages fusibles pour tests de sterilisation.

Bismuth.
Plomb •. g3 ~:~:l::
parties)
, fusibl? a + 100 Pression 1 kgr.
(alhage de Darcet).
0
•
Etain • •
parties ~ {:US)' be l 'a

Bismuth.
Plomb •.
88 parties + 113•.
3 P resslOn
.
Etain •• 4 parties 1 kgr. 5.
Bismuth.. 8 parties ~ ,
Plomb .. 8 parties )' fusible it + 1230. Pression 2 kgr.
Etain . • 3 parties .
170
On fond dans une coupelle, d'abord Ie plomb sous une
couche de charbon de bois en .poudre., puis on ajoute Ie
bismuth et fetnin. On melange et 'On coule ($n disques ou
en crayons dans un moule metallique.
On pentainsi preparerJ:espastilles qu'on emploie comme
tests de sterilisation. Ineluses dans un tube a essai ou dans
une bolte de Petri, on les place .dans l'autbchwe aU milieu
des objets qu'on veut porter surement, dans toute leur
masse, a une'temperatul."e determin!!e.
En melangeant a CMu.d 9 parties d'a1liage de Darcet et
1 partie de metcure, on obtient un amalgame fusible a 530 •
R. - Solu"bilite des prihcipaux corps chimiq'Ues

employes en microbiologie.
1° COMPOSES MINERAUX.
pOln~ DU CORPS SoT.t1Bl.F! EN GRAMMES:
dans reau il. 15' dans l'a\~oo!.
Alun d'ammoniaqae crist. 10 gr. insoluble
Carbonate d'ammonium. 25 »
Nitrate d'argent. 215 10
Acide arsenieux .. 1,2. 0,7~
Acide arsenique.. . 16,7 tres soluble
Acide borique cri~t. • 3 25 bb\\iUant.
Acide chromique. • • 166 ~sblublll
Carbonate de lithium .. 0.77 insoluble
Carbonate de magnesium: 0,01 »
Phosphate de magnesium. 0,3
Sulfate de magnesium 33 »"
Chlorure mercureux. insoluble
lodure mercureu:r;. 0,04 )}
Chlorure mercuriqu:. : 7 33
Cganure mercurique. . 12 5
lodure mercurique. • 0,6 U,S
Chlorure de potassium. 33 '0,5
Bromure de potassium. . 64,5 0,5
Carbonate de potassium
anhydre. .. . . . 90 insoluble
Bicarbonate de potassium. 25 »
Iodure de potassium. . • 140 1.5
Nitrate de potassium. . . 25 insolnble
Permariganate de pota$- decompose
sium .• 6,3 1,8
Arseniate d~ s~di~m:
Arsenite de sodium.
Borate de sodium.
. 28
tres soluble.
7
insoluble
,.
Carbonate de sodium crist. 88 »"
Bicarbonate de sodium. 10,5
Chlorure de sodium. 95 "
»
Nitrate de soqium. . 8~ ~
REACTIFS UTILHS DANS LES LABQRATOIRES 171
Phosp_hate bibusique de
sodium.. . . . 15 insoluble
Phosphate tribasique. . . 20 »
Sulfate de sodil1m anhydre. 25-
Sulfite de sodium. • • . 25 ..."
Bisulfite de sodium. • • tres soluble »
Hyposulfite. • • • • • 60 »
2° COMPOSES ORGANIQUEs.
a) Serie grasse.
SOLUBIUT' DAN'S POINT
100 p. D'EAU. D~EnULL1TloN.
Serie methyl. Chloroforme. . . . . traces ~1,2

Tetrachlorure de carbone. insolUble 8.1
Iodoforme. . . » vap.
Trimethylamine. » 9.3
Uree . . . . . . 100 decompose
Serie ethyl. Acide acetique .• tres soluble 117,3
Acide oxalique .. 170 deCOMpose
Alcool ethylique. tres soluble 78.05
Chloral (hydrate de), » 98 (dec.)
Glycocolle. • . 23 decompose
Serie propyl. Acetone. tres soluble 56.4
Acroleine. . . 2,5 52
Monochlorhydriue. tres soluble 227
Dichlorhydrine. peu soluble 185
Glycerine. .. tres soluble 290,4
Serie butyl. Acide butyrique. ,. 160
Acide malique .. »• decompose
Acide succinique. 5,2 235 (dec.)
Acide tartrique. 170 decompose
Asparagine. . 1,8 ))
SucciQirqide.. , . soluble 287

Serie amyl. Furfurol •. 9 162
Serie hexy 1. Leucine... 3,7 decompose
Series superieures.Acide oleique. . insoluble
Acide. palmitique. J) 348
Acide stearique. » :]87
Paraffine.. . . » 300
b) Serie aromalique el divers.

SOLUBlLITE DANS POINT
100 p. D'ALCOOr.. n'EBuLLITION.
Benzine. tres soluble 80,5
Phenol. • l) 183
Aniline. · t. sol. (3 % dans
reau) 182
Hydroquinone. · tres soluble sublimee
Phloroglucine. · t. sol. (40 d'eau) 210
Toluene . . · peu soluble 182
Xylol. . . . · solhhle 218
Acide tannique. · t~sol. (40 d'eau) decompose
Acide gallique .. »
Napthaline. "
· peu soluble 218
Thymol. . • t. sol. (0,3 eall) 23Q
Mentho!. • (peu soluble
eau) 212
Camphre .. soluble 209
Indo!. • tres soluble 245 dec.
c) Sels d' acides organiques.

SOI~UDlLI'l.'I:: DANS
100 p. U·EAtJ.
Acetate d'ammonium. tres soluble
Acetate de plomb. . 66
Acetate de potassium. 190
Acetate de sodium. . 28
Benzoate de sodium. . Ires soluble
Citrate de sodium. 40
Lactate de zinc. 2
Oxalate d·ammonium. 33
Oxalate de potassium. 33
Tartrate de potassium. 150
d) Sucres.
En C5H 1005 Arabinose. soluble
En CGH 14 06 Mannite. 16
Dulcite .. 4
Sorbite •. soluble
En C6H1206 Reduisant lllliq. de Fehling

Glucose .. 81
Levulose. tres soluble
Galactose. »
En 02H 22 0l1
Saccbarose. 300 \
Lactose. 20 '
Maltose. tres soluble
S. - Table de diluti0'"3-s de l'alcool..

(en par/anl de l'alcool a 90 0 .)
TITRE AT.COOMETRIQUE. VOl.UME D'EAU A AJOUTRn A 100

VOr..VMF.S D'ALCOOI~ A 000
80 0 14 cc.
75 0 22 ce.
70 0 31 cc.
65 0 42 cc.
60 0 54 cc.
50 0 85 cc.
40 0 131 cc.
30 0 206 ee.
DEUXIEME PARTIE
EXPERIMENTATION SUR LES ANIMAUX
CHAPITRE XIII
ELEVAGE DES PETITS ANIMAUX DE LABORATOIRE
A. - Lapins et cobayes.
Le local destine a l'elevage des lapins et des cobayes
doit etre pourvu d'eau, convenablement eclaire et facile-
ment acrable. Les fenetres seront largement ouvertes en ete.
Mais, en hiver, il convientde chauffer pendant les journees
froides pour entretenir une temperature moyenne de 10 a
12°.
On repartira les animaux dans de petits boxes en ciment
anne, de 1 m. 20 a 1 m. 50 de long, sur 0 m. 60 a 0 m. 80 de
profondeur et 0 m. 60 de haut,.reposant sur un sol cimente,
legerement incline vers une rigole- exterieure. A la rigueur,
de simples caisses de bois, munies d'un fond perce de trous
et posees sur des supports de 1 m. a 1 m. 20'de haut, peuvent
convenir. Boxes et caisses doivent .etre fermes par des cadres
de bois grillages, assez lourds pour qu'ils ne puissent eire
souleves, surtout par les lapins. On les garnira toujours
d'une abondante litiere de paille.
La meilleure ,disposition consiste a placer les cages en
une seulefilele long des murs, et en double file sur la ligne
mediane. On,menage ainsi deux aIIees laterales, assez larges
pour permettre Ie nettoyage et l'enJevement des fumier~.
Lapins et cobayes re90ivent les memes aliments: en ete
fourrage vert (luzerne, trefle, sainfoin), des feuilles de choux·,
des epluchures de salade, des fanes de carottes ou de navet,
des grains (avotne de preference au son, dont les proprie-
174 E~PERIMENTATioN SUR LES ANIMAU){i
tes nutritives sont maintenant a peu pres nulles). En

hiver, les aliments seront remplaces par des hetteraves,
ou mieux par des carottes fourrageres, du foin sec, des
grains ou des restes de pain. II est inutile de faire hoire les
animaux quand on Ies alimente avec des fourrages verts.
On De leur donnera un peu d'eau que dans Ie cas de
regime sec.
Poureviter la souillure et.la'perte des aliments, Ie fourrage
sera place dans un petit ratelier en fil de fer galvanise, sus-
pendu par deux clous a l'une des parois de la cage. Une
mangeoire metallique, accrochec a la paroi opposee, rece-
vra les grains.
Un lapin consomme chaque jour 600 a 800 grammes d'ali-
ments verts et 200 a 25{)" grammes de hetteraves ou de
carottes ; un cohaye, 200 a 300 grammes de fourrage vert
ou 70 a 80 grammes de hetteraves remplayables par 40 a 50
grammes de carottes. Ces aliments sont distrihues en
deux repas, Ie premier Ie maun, ioomooiatement apres Ie
nettoyage des cages, Ie second Ie soil'. Les beUer.aves et les
carottes doivent etre, au prealabJ.e, soigneu~eluent grattees.
et cou.pees en qRartiers.
L' errtretien des animaux com porte l' enlevemen t quotidien
des Iitieres souillees, Ie raclage des boxes ou des cages et Ie
lal'age a grande eau -du sol.
Les lapines destinees a la reproduction doivept eire iso-
lees. Des l'age de 6 a 9 mois, elles sont aptes a t-ep.rodu1J>e.
Au m<lment du rut on les trlilnsporte dans la cage d'un
male O'u on les laisse une heure <m deux.
Une holl.lle lapine pe!!t donner 4 it I) p@rrees par an. La
dunie de la gestation est en rnoyenne de 35 jours. Vel's la
floll, quand les femelles commencent a s'arracher les poils
du ventre pour en faire un nid, il faut augmenter les aliments
et donner un peu d'eau dans un abreuvoir metaJJ.ique. Le
nombre des petits est ordinairement de 5 .ou 6, parfoi~, il
s'eleve jusqu'a dix.Du 20· au 25" _jpur, les jeunes Iapel'eauiX
sortent du nid et commencent a b.r.outer. Us peuvent et~e
sevres it 6 semaines et separes de leur mere. Celle-oi entre
de nouveau en chaleur deux mois -et ,derni apres la mise has
et peut, des lors. etre representee a.u male.
On Re conserve, pout' 1a reproduction, que les lapines
agees de moins de deux MS, Ie no.mbre des PQrfl~es an-
ELEVAGE DES PETITS ANIMAY~ DlJ l.ABaRA.TOIRE 175
nuelles et des petits dlminuant par la suite. Un male su.fJ,it
pour 8- ou 10 femelles.
Des qu'on reconnalt qu'elles sont pleines, on s.epan,le&
cobayes femeHes des males et on les reunit par gJ.:O,u:pe.s de
5 ou, 6 dans une meme cag!}. EUes donnent 2. ou 3 petits,
rarement 4, et la periode de gestation clure 60 a. 6,5. jt)lolrs,.
Les cobayes naissent couverts de poils, marchent et s'es,"I
saient a manger des leur naissance.
Lorsqu'elles ont atteint Ie 4~ mois, les femelles peuvent
~tre fecondees. Elles produisent 3 it 4 p_ortees par an p.en·
dant 2 ans. :Passe ce temps, eIles ne conviennent plm: a la
repl'oduction.
On conservera un male pour une vingt:;tine de femelles .
Les animaux inocules doivent etre entretenus dans un.
local distinct du local d'elevage et aussi eloigue que pos-
sible de celui-ci. On les rt!partira, suivant les necessites. du
tre.vai1, par groupes de 5 a 6. dans des cages metalliques
grillagees, munies d'un plateau mobile Qn, de preference,
dans d~s cages en ciment arme, parfaitement etantyhes, fer·
mees lateralement par une porte metalliqne basculant sur
deux axes. Ces cages se.ront ouvartes a 1 metre environ du
sol pour faciliter Ie nettoyage. Un trou, creuse au centre de
leur paroi inferieure inclinee, facilitera l'ecoulement des
urines v~rs un tuyau qui deboueheradam; un cenduit ~tG\n«he,
comrnUD.
Immediatement apres l.'inoculation, lapios et cobayea.
s€vont marques a l'oreille au mQyen d'une petite medaiUe
metallique chiffree, ou avec des couleurs vaI1iees disSDutes..
dans l'ean pheniquee a 5 p. 1.000 et additionnees d'une
petite quantite d'albumine P,Qur assurer leur adhesion.
Toutes les cages porteront un numero et une plaque a glis-
siere sur Ia.queUe on fixera un carton iudiq.uant la dp.te des
inoculations, Ie nombre et Ia marque des anilllaux inQcu16s,
etc.
B. - R.ats et s~uris.
Ces animaux, dont Ia variete aIbin!)s fiSt Ia plult rechor""'

chee, sont tres faciles a elever dans des caisses de bQil! dQu-
blees de metal et ferlllees par un couvercle· grilla.ge, -ou dans
des bocaux de verre. Da·ns les caisses, separees par une cloi-
176 EXPERIMENTATION SUR LES ANIMAUX;
son mobile, on dispose de petites boites-abris percees d'un

trou, dans lesquelles les rongeurs peuvent se refugier et
elever leurs petits.
Le foin, la paille, la sciure de bois, du papier coupe en
morceaux, constituent d'excellentes litieres, mais la laine,
les etoffes, Ie coton, les chiffons ne conviennent pas (Mou-
quet).
Rats et souris mangent beaucoup. 30 a 40 grammes d'ali-
ments par jour sont necessaires pour entretenir un rat;
lOa 12 pour une souris: debris de pain. viande, grains
(sauf I'orge) pour les rats, epluchures de legumes ou de
fruits. Un regime compose uniquement d'avoine provoque
un deperissement rapide par carence; un peu de verdure
est indispensable comme rafraichissant.
On ne manquera pas de mettre constamment a la dispo·
sition des petits rongeurs de l'eau dans une soucoupe, OU,
mieux, dans un tube de verre ,perce a son extremite infe-
rieure d'une ouverture tres etroite, bouche avec un bou-
chon de caoutchouc et suspendu it une des parois de la cage
(Ponsel1e).
La gestation dure 21 jours chez l.es rats et les souris qui
peuvent reproduire vel'S l'age de 2 a 3 mois. On peut obte-
nil' chaque annee I) ou 6 portees de 5 a 8 petits. Ceux-ci
sont nus a leur naissance ; leurs yeux restent clos jusqu'au
13" jour. lls sortent du nid du 15" au 20e jour et p~uvent etre
sevres Ie 20· jour pour les rats, Ie 30· pour les souris. Les
femelles pleines doivent eire sepan!es des males dont un
seul suffit pour 8 it 10·reproductrices.
C. - Maladies des lapins.

Pasleurellose (maladie du nez). - Tres contagieuse. Elle
se traduit p.ar de l'inappetence, de la prostration, dujetage,
parfois de Ia toux et de la diarrhee. La mort survient rapi-
deme'llt.
Pneumococcie. - 1;{.are chez les lapins neufs, cette affec-
tion est frequente chez les animaux inocuIes. Le pseudo.
pneumocoque qui en est Ia cause est Un microbe de sortie
(M. Nicolle).
Necrobacillose. - Due au bacil1e de Ia necrose,ou bacille
de Schmor!. Se traduit par de la dermite, des abces sous-
ELEVAGE DES PETITS ANIMAUX. DE LABORATOIRE 177
cutanes et pulmonaires, du coryza et des collections des
sinijs.
Pseudo-tuberculose. - Relativement rare chez Ie lapin,
elle est causee par Ie cocco-haciIle de Malassez et Vignal.
Son evolution est lente. :A I'autopsie on trouve des lesions
I)oqulaires du foie, de la rate et des intestins.
Coccidiose. - Elle revet la forme intestinale ou Ia forme
hepatiqu~ et se traduit par un amaigrissement progressif.
l'aspect terne des poils, l'enflure du ventre, de la diarrhee
et des copvplsions. La mort survient en quelquesjours chez
les jeunes, ell quelques semaines ehez les adultes. A,l'autop-
sie on trou'\'e, dans Ie cas de coccidiose hepatique, des
masses blanchatres au jaunatres, echelonnees Ie long des
canaux biliaires. Ces masses contiennent une enorme quan-
tite d' oocystes ovalaires a double paroi, tres refringents.
Dans la coccidiose intestinale, des plaques hlanchatres
sont disseminees sur !'intestin grele.
La diffusion de ces maladies tres contagieuses sera evi-
tee en surveillant attentivement les lapins at en separant
immediatement ceux qui paraissent tristes ou ne mangent
pas. Les cages infecMes seront evacuees, puis ahondamment
lavees avec une solution cresylee forte. On rcpartira les ani-
maux contamines par petits lots, dans des cages spc<!.iales, et
on incinerera les cadavres au on les enfouira profondement
en 'Ies saupoudrant de chaux vive.
D'flutres affections parasitaires dues a des strangles, des
tamias au des cenures, peuvent egalement survenir. La cenu-
rose, provoquee ~ar la forme cystique du Trenia serialis
du chien, se manifeste par des kystes plus ou moins volu-
mineux au cou, a l'epaule ou sur la nuque et dans les
serel,lses.
(rale des oreilles. - La gale psoroptique des oreilles, due
a Psoroptes commllnis, debute par Ie conduit auditif
e~terne et envahit parfois l'oreille moyenne, determinant
des troubles de l'attitude, des accidents epileptiformes et Ia
mort. Cette affection se traduit Iocalement par des croutes
epaisses et adherentes, obstruimt Ie conduit auditif. Elle
doit etre attentivement surveillee par l'examen systema-
tique des oreilles Des son apparition,'les lapins en contact
avec les malades seront separcs et on soumettra les galeux
au traitement suivant : enlever les croutes avec de reau
lIfCROBlOLOGlE 12
1:78 ExpERIMENTATION SUR·LES ANJMAUX!
.savonneuse tiede et un ecouvillon de coton, rincer a l'eau

tiede, puis secher, et introduire dans l'oreille une petite
quantite de baume de Perou, en massa,nt legerement la~base
.de l'organe. Des insufflations de fleur de soufre et des
lavages. ah polysulfure de sodium a 5 p. 1.000 reussissent
egalement bien.
Gale de La tete el des palles. - Due a Sarcoptes scabiei,
cuniculi, ou it Notoedres cali. Envahit l'extremite des
pattes et du nez qu'elle couvre de squames. Moins fre-
quente que la,precedente, elle presente cependant Ia meme
contagiosite. On peut la traiter au moyen de frictions avec
la pomniade d'Helmerich, mais iI est preferable de sacrifier
les mala des et de desinfecter les locaux.
D. - Maladies des cobayes.
Pneumonie et broncho-pneumonie. - Tres frequentes et

~res contagi~uses, ces affections sont provoquees par des
pasteurella. Les symptomes observes sont peu nets. Les
malades se mettent en boule, les poils herisses, s'immobi-
Hsent et maigrissent. Souvent du jetage apparait en meme
temps que de la dyspnee. La mort survient en quelques
jours. A l'autopsie on trouve des epanchements cavitaires
et des lesions inflammatoires pulmonaires et ple~rales.
MaLadie dll nez. - Elle a souvent pour cause la\« sortie l)
d'un pseudo-pneumocoque chez des animaux sensibilises
par des inoculations diverses : microbes vivants ou morts,
toxines (M. Nicolle). Ses symptomes consistent en unjetage
sereux, puis purulent, qui obstrue peu it peu les cavites
nasales, de l'amaigrissement et une dyspnee accentuee. La
mort' se produit apres un temps variable qui peut atteindre
plusieurs semaines. Dans la forme nasale pure, on observe
seulement de Ia degenerescence graisseuse du foie ; dans 1a
forme broncho-pulmonaire, Ie poumon enflamme est carnifie.
-La peritonite avec epanchement est frequente, Ia pleuro-
pericardite aS5ez rare.
Pseudo-tuberculose. - Provoquee par Ie cocco-baciIle de
Malassez et Vignal. CeUe affection peut eire aigue au chro-
·nique (Ramon). Le type septicemique evolue en 24-48 heu-
res'etne determine pas d'autre symptome caracteristique
ELEVAGEDES PETITS ANIMAUX DE LABdRATOIRE 179
qu'une dyspnee croissante. Dans Ia forme ganglionnaire. on

observe des adenopathies sous-glossiennes. cervicales ou
inguinales s'accompagnant de suppuration. Le type cIas-
sique se traduit par une cachexie progressive, qui amene Ia
mort en nne ou plusieufs semaines. 11 n'existe de lesions
typiques que dans ceUe derniere forme: nodules blancs,
plus ou moins volumineux, dissemines a Ia surface de Ia
rate ou envahissant Ie parenchyme hepatique hypertrophie ;
-abcedation des ganglions mesenteriques. Les poumons sont
parfoisenvahis par un' semis de petits tubercules de dimen-
sions variables.
Peste. - Due a un virus filtrant. Assez rarement obser-
vee.
Paralysie'. - Assez rare. Decrite en Autriche par Romer,
eUe existe egalement dans Ies elevages de Ia region pari-
sienne. Le train posterieur des cobayes devient mou puis
se paralyse tout a fait et l'animal traine Ies membres en
,extension quand il se deplace, Mort en 15 a 20 jours.
E. - Maladies des rats et souris.
Seplicemie des souris. - Due a un bacille d6crit par Koch.

Somnolence, dyspnee, mort rapide.
Typhose. - Due a des bacilles paratyphiques, dont B
Typhi murium.
Sarcosporidiose. - Determine un,e degell(!resc~nce parti-
culiere du tissu musculaire et se traduit par de fines trai-
nees bIancnatres Ie long des fibres.
Teiglles. - Frequen'tes.
CHAP ITRE XIV
CONTENTION ET ANESTHESIE DES ANIMAUX! D'EXFE-

RIENCES. _, DIFFERENTS MODES D'INFECTION EXPE·
RIMENTALE. - PONCTION DU CmUR. - P.ONCTION
DU FOIE, DE LA RATE ET DES OS LONGS. -
EPILATION. - AUTOPSIES. - ENFOUISSEMENT ET
INCINERATION DES CADAVRES. - TEMPERATURES
NORMALES
A. - Contention.
Les moyens de contention varient avec les differentes
especes animales employees.
Les souris et les rats peuvent etre manipules avec des
pinces a mors de dimensions variables. On les saisit par la
peau de la nuque e1 par la base de la queue, de favon ales.
immobiliser completement.
Les cobayes et les lapins sont main tenus avec les mains
par un aide pour les operations courantes. I
S'il s'agit d'interventions delicates (ponction intracar-
diaque, denudation de la veine jugulaire, mise en place d'lln
sac de collodion dans Ie peritoine" ils doivent etre fixes sur
un plateau en zinc. dont les bords releves sont perces ae .
trous. Aux quatre pattes, on attache des nreuds coulants
dont les extremites sont fixees aux bords du plateau par
l'un des trous. Les dimensions de ces plateaux sont :
pour les lapins de 0 m. 66 X 0 m. 40 ; pour les cobayes de
Om. 46 X 0 m. 27.
Si une immobilisation plus complete est necessaire. on
peut avoir recours au mors de Malassez qui maintient la
tete dans la position qu'on veut lui donner, ou it .l'appa-
reil de Latapie. Ce dernier est combine pour s'adapter it
tous les petits animaux de laboratoire.
Pour les plus gros animaux, employer la gouttiere de Ver-
din.
ANE8THESIE. - INFECTION. - PPNCTION 181
B. - Technique pour r~pilatiod des animaux

d' experiences.
Lorsqu'il est impossible, ou contre-indique, de se servit

du rasoir pour epiler' les animaux d'experiences en vue
d'inoculations transcutanees (par exemple : vaccine, tuber-
culose), il est recommandable d'employer une solution
epilatoire ne contenanf pas d'arsenic. La meilleure est une
solution aqueuse de monosulfure de sodium it 36 p. 100.
On badigeonne fortement Ia region it epiler avec un tam-
pon d'ouate monte sur une tige de bois ef impregne de
mO,nasulfure, on laisse agir quelques instants et on hIve
rapidement a grande eau pour arreter raction caustiqtte du
liquide epilatoire. On essuie avec soin la pe:tu, on la seche,
et on y etale aussitOt, avec un pinceau ou une spatule, Ia
substance virulente.
C. - Anesthesia.
Toutes les {ois qu'une inoculation ou une operation peut
entrafner de la douleur, on doit recouril' a l'allesthesie.
L'e!llpioi du chlorofo:rme est souvent dangereux chez les
animaux, particulierement chez Ie lapin et chez Ie chien. II
faut done eviter de s'en servir, sauf pour Ie cobaye et Ie
chat qui Ie supportent assez bien.
On l'utilisera &ous forme d'eau chlol'o(ormee paur l'in-
sensibilisation des petits animaux a sang froid (vers, mol-
lusques, grenouilles, etc.).
Les vapeurs degagees par une petite quantite de chloro-
forme ou d'ethersous nne cloche conviennent tres bien pour
insensibiliser les souris, les rats, les tortues, les lezards et
les reptiles.
On pent aussi insensibiliser les reptiles, particuliere-
ment les serpents venimeux, ell leur pulverisant de l'ether
sur Ie crane au niveau des hemispheres cerebraux.
On endort Ie cobaye (prealablement fixe sur J'appareil a
contention) en lui faisant inhaler des vapeurs de chloro-
forme ou d'ether degagees d'un petit tampon d'ouate place
au fond d'un cornet de papier dont gn coiffe la tete de l'ani-
mal. L'ex(remite du cornet doit etre ouverte, de teUe sorte
182 EXPERIMENTATION SUR LES ANIMAUx<
que l'air exterieur vienne aiseme.nt se meIer aux vapeurs de

chloroforme.
Si 1'0n doit operer sur Ie chat, il est plus commode de Ie
placer d'abord so us une cloche a tubulu.re dans laquelle on
introduit un tampon d'ouate hydrophile impregne de chIo-
roforme. Mais pour cet animal, comme pour Ie lapin, iI est
plus recomman.dable de se servir de cliloralose qu'on admi-
nistre par ingestion melange a un peu de lait par exemple.
a Ia dose de 0 gr. 10 a 0 gr. 15, une demi-heur-e avant I'ope-
ration.
Chez Ie cobaye, Ie lapin et Ie singe de petite taille, on
peut faire ingerer Ie chloralose a. la sonde oosophagienne.
- toujours une demi-heure d'avance, - a. la dose 'de
ogr. 15 pour Ie premier, de 0 gr. 30 a 0 gr. 40 pour les
autres.
Le chloralose p~ut encore etre injecte par voie intravei-
neuse chez Ie lapin dans la veine marginale de l'oreille.
chez Ie singe et chez Ie chien dans la saphene externe, a la
dose de 0 gr. 15 par kilogramme d'animal. Cette substance
doit alors etre dissoute dans de l'eau salee physiologique
(it 7 gr 5 de NaCI par litre). Sa solubilite est faible, - de
7 gr. 5 seulement par litre, - de sorte que la quantite it.
injecter 'est toujours assez considerable : 20 centimetres
cubes de solution par kilogramme d'animal. C'est Ie seul
inconvenient de cette methode.
Lorsqu'il s'agit d'effectuer une laparotomie chezlJ cobaye,
Ie lapin ou Ie singe, il vaut mieux recourir '3. l'injection
intraperitoneale d'un melange d'hydrate de chloral ct de
morphine:
Hy;drate de chloral. . • • 10 gr. 0
Chlorhydrate de morphine. o gr, 05
Eau distilIee, • . 100 cc.
(Sterilisation inutile it cause du pouvoir antiseptique du
chloral.)
On en injecte 2 centimetres cubes au plus par kilo-
gramme d'animal chez Ie cob aye ou chez Ie lapin, - gene-
ralement 1 centimetre cube est une dose suffisante ; - 3 a
4 centimetres cubes (suivant la taille) par kilogramme chez
Ie chien.
La meme solution, injectee dans Ie muscle pectoral chez
les oiseaux, peut parfaitement etre employee.
ANESTHBSIE. - INFECTION. - PoNCTIONS 183
L'anesthesic ohtenue par ce _procede est tout it fait inof-

fensive et complete. Elle est seulement un peu lente a s'eta-
hlir : 10 a 20 minutes . .Mais elle persiste assez longtemps et
permet' de pratiquer tres commodement les operations les
plus deli cates sur les organes de l'abdomen. On evite les
accidents d'asphyxie,.qui viendraient it se produire, alb
moyen de la respiration artificielle et des inhalations d'oxy-
gene.
Chez Ie cheval, on emploie les inhalations de chloroforme
(animal solidement entrave, couche sur un lit de paille
recouvert d'une bache impermeable), mais on doit, 3 ou
4 heures avant l'anesth~sie, administrer it l'animal 0 gr. 50
de chlorhydrate de morphine en injection sous-cutanee.
Dehenedetti a recemment preconise Ie somnifene pour
les anesthesies de longue duree chez les petits animaux de·
labdratoire.
Chez les rats hlancs de 130 a 150 gr., on ohtient une
anesthesie complete de 4 it 5 heures, sans choc consecutif,
en pratiquant des injections sous-cutanees de somnifene
(solution pour injections intramusculaires) it raison de
o cc. 043 pour 100 gr. de rat, so it pour un rat de 140 gr.
o cc. 06 a,O cc. 07. II est necessaire d'employer une serin-
gue it graduation precise. Le sommeil se produit ad- bout
d'une 1/2 heure it 3/4 d'heure. Une heure apres l'injection,
Ie sommeil et l'insensibilite sont completes. Ils durent 4 it
5 heures. Aucun choc au reveil.
La dose anesthesique est assez voisine de la dose toxique
(0 tc. 06 pour 100 gr.). A la dose de 0 cc. 03, l'insensibili-
sation est incomplete. Un dosage precis est donc neces-
saire.
N0la. - Les animaux it sang chaud qui ont ete anes-
thesies par l'ether ou par Ie chloralose doivent toujours etre
main tenus dans 'un endroit chaud et sec, - au voisinage
d'une etuve par exemple, - pendant quelques heures apr~s
l'operation, car leur temperature est constamment abaissee
et il faut en favoriser Ie relevement progressif. Sans ceUe
precaution il arrive souvent qu'ils succombent a des acci-
dents pneumoniques.
184 EXPERIMENTATION 8UR LES ANIMAU,&
D. ~ Differents modes d'inf~ction

experimentate.
Lorsqu'on etudie experimentalement lao virulence d'U11e
culture microbicnne, il est souvent neeessaire de precis-er
Ie poids des ge:rmes employes.
Pour peser des microbes, on preleve, avec une anse au
une spatule sterilisee, une petite quan tite de culture qu' on
porte a la balance de precision, sur un petit carre de papier
a fiItrer sterile, prealablement tare dans un verre de mon-
tre. On en prend ainsi 10 milligrammes pat exemple. .
ees microbes, essores sur Ie papier-filtre, sont alors depo-
SeS dans nIl verre conique, sterile, et on les emulsionne so i-
gneusement avec de l'ean physiologique sterile, ajoutee
d'abord, goutte a goutte, a la pipette effilee. On evite de
faire des grul11ea ux.
On doit tablet, pour les calculs de dilution, sur Ie I10mbre
moyen de microbes con tenus daJ1s 1 milligramme de cul-
ture. Avec Ie bacille tuberculeux (sur bouillon glycerine ou
patnme de terre glycerinee), ce nombre moyen est de
40 millions par milligramme. Done 0 mgr. 000.000.1 de
culture = 4 bacilles ef chaqtte baeille pese environ 25 cent-
'millioniemes de milligram me.
L'il1fection esperimentale des petits animaux generale-
ment utilises dans les laboratoires, en particulie~ Ie cobaye
et Ie lapin, est Ie plus souvent realisee par simple inocu-
lation SOlls-cutanee en plongeant l'aiguille a injection, s11r
Ia moitie de sa longueur environ, dans Ie tissu tellulaire, it,
la base d'un pli fait a la peau entre deux doigts, ou entr~
l.es mors d'une pince. ,
II est toujours necessaire de couper les poils aussi ras
que possible et d'aseptiser la peau, soit par lavage al'alcooI,
soit par badigeonnage a la teinture d'iode (effe'ctue quelques
minutes avant l'injecti<'ln).
Les autres voies d'infectiou Ie plus commodement utili-
sees sont :
a) Voie intraperitoneale.
Ne doit etre employee que pour les emulsions d'organes
frais ou pour les cultures pures. Il ne faut j'amais en faire
ANESTHBSIE. - INFECTION. - PONCTIONS 185
usage pOut eprouver la virulence de crachats, de matieres

fMales, d'urines, de pus ou de prodnits de broyage d'organes
provenant de cadavres putrefies, car il en resulterait lille
peritonite mortelle, due aux microbes de Itt putrefaction.
b) Voie inlravasclllaire.
La veine marginale de l'oreille est tres fnciletnent
accessible chez Ie lapin.
Chez Ie cobaye, il faut pratiquer l'injectioh dans la veine
jugulaire qu'on met a nu par une incision et une dissection
Fig. lG. - !noculation intravcineuse chez Ie lapin (dans In veine marginal. d.!'!·oreiIJe),
prealables. Ati~sitot apres, on pratique l'hemostase, soit

·au moyen d'une ligature, soit a l'aide d'une petite pince
qu'on laisse en place pendant quelques minutes avant de
refermeI'la plaie avec 2 ou 3 agrafes de Michel (Fig. 16 et 17).
L'illfection du rat et celIe de la souris par voie s~nguine
peut etre aisement realisee grace a l'existence, chez ces
petits rongeurs, de deux veines superficielles qui sont
visibles lateralement a la base de la queue. 11 faut faire
usage de tees fines aiguilles analogues a celles <}u'em-
ploiellt les delltistes pour les injections de liquides anes-
thesiques dans la gencive. On peut introduire dans Ia
186 EXPERIMENTATION SUR LES ANIMAUX
veine d'une souris jusqu'a 1 centimetre cube de liquide.

L'animal etant immohilise par un aide, l'operateur saisit,
avec la main gauche, la queue dont il appuie Ia hase
A~,"-__
~o::::"...,~~~.?
:-<:: #;;-~
--_,:7l>
--:_.-=-
I ~------== - -~ ,......~
Fig. 17. - Inoculation illtravcineuse chez Ie cobaye (dans Ia vein. juguIair. mise
a nu).
sur son index et pique parallelement au vaisseau. En reti-

rant lentement la pointe de I'aiguilIe, on evite la sortie du
sang.
c) Voie intl'acranienne el voie inil'aracilidienne. I
On injecte Ies Iiquides so us Ia dure-mere, ou dans I'Ul~
des hemispheres cerehraux qu'on atteint aisement en prati-
quant sur Ie vertex, sur line ligne transversale passant par
la commissure posterieure des deux yeux, une petite inci-
sion de la peau et un minuscule trou a la hoite cranienne,
au moyen d'un foret pourvu d'un curseur de reglage. Par
cet orifice, qu'on a soin de percer un peu a droite ou a gau-
che de la ligne mediane (pour ne pas atteindre Ie sinus vei-
neux longitudinal superieur), on plonge l'extremite de l'ai-
guille a 40u 5 mjIlimetres de profondeur et on pousse tres
doucement l'injection, dont 1e volume ne doit pas depasser
4 a 5 ~outtes.
Une autre methode, beaucoup p~us inoffensive et plus
elegante, est l'injeclion post-orbitale. En voici Ia technique:
L'animal, cobaye ou lapin. ayant la tete b,ien immobi-
,.-
ANESTHEsIE. - INFECTION. - PONCTlONS 187
lisee horizontalement, Qn glisse, par un mouvement s~mi
circulaire; la pointe d'une aiguille de seringue it injection,
tenue par son pavilIon, de dehors en dedans et d'avant en
arriere, Ie long de la cavite orbitaire, en suivant la face
interne du globe de 1'00iI et sans piquer celui-ci. Lorsque
Ia pointe arrive tout it fait a la partie PQsterieure de l'orbite,
un Ieger mouvement de bascule de bas en haut fait penetrer
l'aiguiIle par Ie trou orbitaire jusque sous Ie chiasma des
nerfs optiqpes et sans que ceux-ci puissent etre leges. L'ai-
guilIe est en bonne place lorsqu'elle joue librement da,ns
Ie trou orbitaire, sans buter contre une paroi osseuse.
On pousse alors l'injection qui, penetrant entre la dure-
mere et la pie-mere, se melange au liquide cephalo'-raehi-
dien. L'aiguille brusquement retiree ne laisse aucune plaie
et l'operation ne cause aueun trouble it l'animal.
Les injections iransorbitaires (trou optique ou fente sphe-
noidale) ont ete egalement preconisees par Remlinger et
Bel, chez Ies grands animaux.
Le chien peut servir de type pour la description. Chez
cet animal, l'orbite forme une sorte de cone dont la hau-
teur, dans les races moyennes, est d'environ 5 centimetres.
Vers Ie sommet, se trouvent rassemhles, sur une ligne
oblique d'avant en arriere et de haut en bas, 3 orifices:
irou oplique, grande rente sphenoidale s'ouvrant run et l'au-
tre dans la cavite cranienne, irou grand rond conduisant
dans Ie canal pterygoldien. Le chien etant fixe sur un
plateau, et sa tete reposant soli~ement sur celui-ci, une
aiguille de 5 a 7 centimetres est introduite Ie long du bord
inferieur du corps clignotant, sous Ie globe oculaire. et
dirigee un peu en bas et en dedans. Apres quelques taton-
nements on sent son extremite s'engager dans l'un des
2 premiers orifices precites Vne seringue chargee est
adaptee a l'aiguille et l'injection poussee dans la cavite
cranienne. Chez Ie chat. Ie cheval, Ie boouf, Ie mouton, Ia
chevre, Ie pore, Ies injections transorbitaires s'effectuent
de fa~on presque identique.
, L'inoculation inil'al'achidienlle se fait par ponction lom-
baire en i,ntroduisant une aiguille d'acier d'arriere en..avant,
entre tes lames vertebrales de l'av,ant-derniere v~rtebre
Iombaire, jus que dans Ia cavite medullaire dans Iaquelle
'" floUe Ia queue' de cheval. II est indispensable d'inciser
188 EXpERIMENTATION SUR LES ANIMAUX!
prealablement Ia peau sur une longueur d'environ 1 centi-

metre, au niveau de l'apophyse epineuse de la 4· vertebre
lombaire. Avec l'ongle de I'index de Ia mltin gauche, on
determine exactement celle-ci et, immediatement en avant,
on plonge d'arriere en avant l'aiguille dont Ie pavillon doh
rester libre pour permetire l' ecoulement au dehors de quel-
ques gouttes de liquide cephalo-rachidien. Cet ecoule~~!1t
atteste que l'aiguille est bien en place. II ne reste plu,S 'Iu'a
y adapter Ie bee de la seringue chargee de suhstftqce iniec-
tante et a pousser doucement l'injection dont Ie volume ne
doit pas depasser 0 cc. 5 pour Ie (whaye, 1 centimetre cube
pour Ie lapin. torsque celle-ci est terminee, on retire brus-
quemel1t l'aiguille, on ferme la petite plaie cutanee aveC'_une
agrafe de Michel et on touche a la teinture d'iode.
d) Voie oculail'e.
L'inoculation par cette voie se realise, so it en introoui-
sant directement Ie virus daI1s ]a chambre anterieure .de
fail, soit par simple instillation Sllr la conjonctive. '
L'inoculation dans la ~hambre anterieure' de t'rei! se (ait
Ie plus cornmodement chez Ie lapin. •
On fixe Ie globe ocu1aire en enserrant, au mqyen d'une-
Fig. 18. - Instillation snr r reil d' un cob.ye.
a
pince dents de souris, un pH de fa conjonctive un peu en
dehors du bord superieur de la cornee, et, avec la pointe
ANESTHESIE. - INFECTION. - PONCTIONS 189
d'une aiguiIle fine, on pique celle-ci tres obliquement, de

manier~ it ne pas blesser l'iris, On laisse eeouler libreinent
quelques gouttes d'humeuraqueuse, puis on adapte la serin-
gue sur Ie pavilIon de l'aiguille et ()n pousse doucement 1'e-
mulsion microbienne' dans la chambre ant~rjeure de l'ceil,
en ayant spin de n'injecter qu'une quantite de liquide assez
faible pOllr n~ pas produire de s~rpression.
Si 1'0n retire brusquement l'aiguille, la petite plaie cor-
-neenne s'e referme aussitOt et il ne reste plu$ qu'a laver la
surface de I'ceil avec un peu d'eau sterile ou une solution
boriquee a 3 p. 100.
L'instillation simple se fait en laissant tomber, avec la
pointe d'une pipette effilee, une goutte d'emulsion micro-
bienne a la surface du globe oculaire, un aide tenant les
paupieres de l'animal ecartees. On attend quelques InS-
tants et on remet l'animal dans sa cage (Fig. IS,.
e) Voies digestives.
L'infeetion par les voies digestives est, a proprement
parler, Ia plus naturelle.
Sa technique consiste, so it a faire, dans la cavite buccale
ouverte, un simplebadigeonnage de Ia face interne des joues
avec un pinceau impregne de substance virulente, soit it
faire absorber les microbes en les introduisant directement
dans l'estOlpac au moyen dOune seringue et'd'une sonde
cesophagienne qui, pour Ie cobaye, est une sonde urethrale
de petit calibre, en gomme. Pour en;Ipecher que celle-ci
soit coupee par les incisives de l'animaI, on tient les
machoires convenabl~ment ecartces au moyen de deux
lacets plats et, la tete etant dirigee en hllut, on glisse dou-
cement Ie bee de la sonde Ie long du voile du palais. On est
sur d'avoir penetre dans l'cesophage si les mouvements res-
piratoires restent bien reguliers et soil ne se produit pas
d'efforts de toux.
On peut egalement administrer per os les ,emulsions
microbiennes, au moyel1 dOune pipette graduee .dont l'extre-
mite effilee est introduite dans Ja bouche de I'animal, contre
une des joues. vers la base de la langue. En ouvrant et
fermant Ia pipette, a l'aide du doigt pose sur son extremite
superieure, on fait couler Ie liquide lentement, goutte it
goutte. L'animal sera solidement maintenu, les pattes' et la
190 .EXPERIMENTATION SUR LES ANIMAUX!
tete immobilisees, mais fa m€ichoire inferieure doit rester
libre pour faciliter la deglutition.
Quantites maxima a faire ingerer : () ceo 2 a 0 ce. 3 pour Ie
cobaye; 1 cc. pour le lapin. .
f) Voie reciale.
Pour eviter l'expulsion immediate des emulsions micro-
biennes injectees dans Ie rectum, il convient de porter cel-
les-ci aussi haut que possible (a 5 centimetres environ chez
les cobayes) avec une petite sonde tres fine et tres flexible
en caoutchouc rouge.
g) Voie vesicale.
On realise ee mode d'infection en introduisant sans vio-
lence dans l'urethre, jusqu'a une profondeur de 3 centime-
tres chez Ie cobaye, une petite sonde moUe de Gaillard du
modele Ie plus fin. La sonde doit avoir ete prealablement.
sterilisee par Ie formol, puis trempee dans de l'huile asep-
tique. On aUend I'ect'lulement de l'urine et on injecte, sous
Ie plus faible volume possible. l'emulsion microbienne.
h) Voie respiratoire.
L'infection par inhalation peut se realiser dans chacun
des segments de l'appareil respiratoire : nez, bouche, pha-
rynx, larynx, bronches, alveoles pulrnonaires. et il est tres
difficile, - on peut meme dire impossible, - de la locali-
ser dans l'un quelconqve de ces segments. IOn parvient
cependant a eviter les premiers (nez, bouche, pharynx,
larynx) en injectant directement, au moyen d'une seringue.
Ie virus dans la trachee, o~ en pulverisant l'emulsion micro-
bienne dans l'arbre br<;)llc~ique, apres tracheotomie.
L'inoculation intratracheale se fait en incisantla peau sur
la ligne mediane du cou, puis en denudant la trachee avec
une sonde cannelee. On pousse alors l'injection en enfon-
~ant l'aiguille de la seringue entre deux anneaux. Chez les
petits animaux, il est plus pratique de 'Passer un fil sous la
trachee et de l'attirer au dehors.
L'inhalation simple peut etre realisee en immobilisant
l'animal, cobaye ou lapin, sur une planche, de telle sorte
que sa fete penetre a travers la fente etroite d'une mem-
brane de caoutchouc ten due sur l'ouverture la plus
large d'une allonge en verre pourvue de deux tubulures.
ANESTHESIE. - INFECTION. - PONCTIONS 191
Par l'une de celles .. ci, situee en f~ce de Ia tete, on fait pene-
trer, dans les conditions que l'on desire, les poussieres.infec-
hintes melangees a de l'air.comprime. L'exces d'air et de
poussieres est entraine au dehors par l'antre tubulure pIa-
cee en haut de I'allonge, apres avoir barbotte dans de
l'acide sulfurique contenu dans un flacon Iaveur.
i) Voie transcu(anee.
On rase ou on epile soigneusement (voir ce chapitre, B)
une etendue variahle de la partie superieure et posterieure
du cou, de teUe sorte que l'animal ne puisse se lecher,
et on etend l'emulsion microbienne, avec une spatule sterile
'Ou un tampon de coton sterile fixe it l'extremite d'une
baguette de verre, sur la surface fraichement rasee ou epilee.
j) Voie inlra-mammazre.
Chez Un cobaye femelle en lactation, on plonge l'aiguille
de la seringue dans Ie tissu glandulaire, it Ia base de la
mamelle.
Chez la vache ou la chcvre, on se sert d'un tube trayeur
ou d'nne sonde flexible en caoutchouc qu'on introduit dans
les canaux galactophores, de te11e sorte qu'avec une serin-
gue on puisse injecter directement la substance infectante
.dans les acini glandulaires.
k) Voie inlrauesiculaire ou intra-inteslinale, apres laparo-

lomie.
Chez Ie cobaye, et plus facilement chez Ie lapin, on peut
introduire directement Ie virus dans la vesicule biliaire
prealablement mise it nu, ou dans une anse intestinale. II
est alors essen tiel d'anesthesier completement l'animal (par
injecti\)n intraperitoneale de chloral-morphine, comme il
a ete uit plus haut dans ee meme chapitre, en C) avant de
.proceder a Ia Iaparotomie, afin d'eviter les efforts qui
entraineraient Ia propulsion des intestins hors de la ca,vite
abdominale.
L'animal etant attache sur un plateau, Ia region it operer
est rasee, puis aseptisee a l'alcool et a Ia teinture d'iode.
On incise d'abord les teguments, _puis la ligne blanche. On
deehire avec Ie bee d'une sonde eannelee Ie peritoine, et Ie
foie apparaiL On l'attire en bas et on Ie renverse de has en
192 EXPERIMENTATION SUR LES ANIMAU~
haut et d'arriere en avant: sa face posterieure (par rapport

(l. l'animal) est ainsi mise ajour (technique de VioUe).
En interppsal1t des tampons de ,gaze entre la coupole
diaphragmatique et.le fole, puis en bourrant l'espace inter-
mediaire entre Ie foie et les infestins, on « cale » Ia masse
hepatique: On passe, sous Ie col de la vesicule ainsi degage,
un fil de soie monte sur une aiguille de Reverdin et on
lie Ie canal choledogue.
A l'aide d'une seringue sterile de 5 cc. on ponctionne la
'vesictile it son pole libre, on aspire Ie contenu qui, dans
beaucoup de cas, est un'liquide cpais et visqueux. En
diluant ce liquide et en lavant la poche a plusieurs reprises
avec de l'eau physiologique jusqu'a ce qu'elle sorte complc-
tement incolore, on a un reservoir de 1/2 a 1 ce. 1/2 de
capacite, pret a recevoir l'emulsion microbienne.
Celle-ci est aspiree d;m~ une seconde seringue. L'aiguille
de la premiere etant toujours en place, on pousse I'injection
doucement. On passe un £II de soie comprenant dans sa
boucle l'ai.guille et la paroi vcsiculaire Iegerement SQulevee'
et tendue par une pince. Tout en degageant l'aiguil1e on
serre Ie fil, de telle sorte que, celle-ci etant completement
retiree, aucune goutte du liquide ne puisse sortir. Enfin, pour
plus de surete, on met une pointe 4_e feu sur l'orifice avec
t:lne tige de platine rougie a la flarnme. On enleve les tam-
pons, on suture la ligne blanche a l'aide cle trois o? quatre
points de catgut. Les teguments sont reuniJ ensuite par quel-
ques agra£es de Michel: On bildigeonne a la t~inture d'iode
la plaie suturee et on recouvre ~elle-ci d'un peu de collodion.
On opere de la meme maniere pour l'injection directe
dans une anse intestinale.
m) Voies intrapl(!urqle, intra-articlIlaire, etc.

On peut etre amene a varier les conditions d'infection en
s'adressant a d'autres modes d'inoculation exception nelle-
ment usites. C'est ainsi qu'il est parfois utile d'introduire
une emulsion de culture directement dans la cavite pleu-
rale ou dans une articulation. Le lieu d'election pour Ja
ponction de la pl~vre, effectuee avec l'aiguille Jibre ou mon-
te~ sur 1a seringue, est Ie 'fuatrieme espace intercostal dlJOit.
Les eavites articulaires s'atteignent facilemeht en 'plat;ant
Ie membre en extension forcee.
,
ANEStfll!§IE. ,___. INF'P.ctl0lV. - PO'lVC1'lONs 19Z
A"Vec' urt'pE!u d'exetclce, on aI'tive tres facilerttent a efroo-

taet, chez Ie ~<1baJe et l-e lapin', Iii pO'nction iIiftl1catdi§qae
sa'rts> que ees' aItitttaux err sdtiffrent. C' est un pf(1C'ede tr'e~
C'Ot'n'tttode poUr'se procurer, sal1s opet'ation S1iI1glanM et
sans' sacrifief les arlirnaox, du sang fntis, aseptique, soir
pM't' en separer' le serum pal' centrifugation imm~dittte et.:
o"l>ti!I1ir' airtsi de l'alexine fl'aichEl, soit pot'll' 1e i1lelarlg~'t a
divers miliertx de culfiIre (par' exetnple Ie rtiilieu de No(ffJ-
Nt!al-eh. Ni'cdllf!).
L'arritllal e,{grtt fille SUI' Ie dos, brert hdrizonta:lemeiH, dn
a~'eptise' ta te$iorl steI'nale p:lr un badigeonhage r(J& atpl'es>
nt'S"l1ge. C)i1 plollge d'un COl'lP brusque, et 1111 pen fYbliqu~t
Fig. 19. - Ponelion du emu.. du cobaye au lieu d"eleeti6rt.
mtfit de bag. en l1aut et d'a~a'nt en atrfere, dans l'tnt ails

ve'rttric'O.lesl du creur', ,la p~itrre dlutic aiguiUe dd'l1t Ie' prrvit·
Ion e~t libre. Si Ie sang sort aussitot par ceoJt~ei e'd s':r!X}t.
des, on y' a'd«PM r'apid~meltt Ie bee' d'ur1e'gei'ingtte' sterile-de
10 a 20 centimetres cubes et on ~s}lir'e' a~ee len.t~u1"le"san.s
jUS'CfQ'a'ce qud le' CD'rp-s de' pompa soit rempli, puis ml' Fettre
brusqU!ement l'aiguiUe.
Le meiUeUli' point de rcrpaire- poor 131 pO'l'l'c\ion ibtra.-
cardiaque est, chez le lapin, dans Ie 30 espace intercostaJ
lIICROBIOLOf,UE 13
194 EXPERIME!'lTATION SUR LES ANIMAUXJ
~auche, a 3 millimetres en dehors du bord du sternum:

l'aiguille plonge, it ce niveau, dans Ie ventricule droit.
Chez Ie cobaye, Ie lieu d'election se trouve sur Ie bord
gauche du sternum, de 8 a 10 millimetres au-dessusdu som-
met de l'angle forme par la base de l'appendice xyphoide
et Ie dernier cartilage costal articule avec Ie sternum. L'ai-
guilIe, - qui doit etre enfoncee a 15 ou 17 millimetres de
profondeur, - penHre ainsi au-dessus de l'avant-derniere
articulation chondro-sternale et va piquer Ie ventricule
gauche. Plus haut, elle atteintI'oreillette. Plus bas, elle tra-
verse Ie diaphragme et va piquer Ie foie.II faut incliner l'ai-
guille Iegerementen dedans vers Ia ligne mediane (Fig. 19).
Cette petite operation est tout a fait inofIensive lorsque la
quantite de sang prelevee ne depasse pas 10 centimetres
cubes pour les cobayes de 500 grammes et 25 a 30 centimetres
cubes pour les lapins adultes. Si I'on emploie des aiguilles
dont Ie biseau n'est pas' trop allonge ni trop coupant, on
peut la repMer plusieurs fois, a quelques jours d!intervalle,
chez les memes animaux, sans qu'il en resulte d'hemor-
ragie intra-pericardique.
F. - Ponction du foie, de la rate et des os \longs.
a) Ponclion du {oie. PROCEDE DONATIEN ET LESToQuAHn
de l'Institut Pasteur d'AIgcrie. - Point d'clection chez les
bovides : avant-dernier espace intercostal droit, sur la ligne
horizontale passant par repine iliaque. Riser la peau. Tou-
cher a la teinture d'iode. Percer la peau avec un bistouri
court. Enfoncer une grosse aiguille longue de douze centi-
metres environ, en avant, en dedans et en bas. Lorsqu'on
I'a retiree, chasser avec un mandrin la pulpe hepatique
qu'elle contient.
PROCEDE CHARLES NICOLLE (chap. XLII, B).
b) POllction de fa rate. Chez les ruminants, procede ana-
logue au precedent. Point d'election : avant-dernier espace
intercostal gauche.
Pour la ponction de la rate chez l'homme, voir Ie procede
de Charles Nicolle (chap. XLII, B).
c) P011ction des os 1011gS.- PO!lr Ie diagnostic de la 1eishma-
niose canine, par exemple: ponctionner 1'08 avec un foret de
Borrel, prelever de la moelle osseuse avec une seringue
sterile.
ANESTlfESIE. - INFECTION. - PONCTIONS 195
G. - Autopsies animales.
,
Eiles doivent etre faites Ie plus tot possible apres la mort.
Avant tout examen, les' cadavres des animaux sont fixes
dans une immobilite aussi absolue, que possible.
Les souris sont placees ventre en l'air, sur une plaque de
liege a laquelle on les fixe par les pattes et par Ie museau, a
l'aide d'epillgles.
Les cobayes et les lapins sont attaches par les patte~ aux
bords des plateaux de zinc dont nous avons deja indiquc
les dimensions. Les poules et les pigeons sont maintenus
de la meme fa90n par Ie cou et les deux pnttes.
Les animaux une fois fixes, les poils des parois thoraci- •
que et ventrale ou. doit porter l'incision, sont coupes aux
ciseaux ou les plumes arrachees. Les poils ou les plumes
des regions voisines sont imbibes d'eau de falton ales ren-
dre adherents et a les empecher de s'envoler ou de se fixer
sur les instruments et les organes au cours de l'autopsie.
On explore alors les diverses parties du corps en obser-
vant specialement Ie point d'inoculation et ses alentours.
Puis on fait une incision cutanee mediane, du cou au
pubis, qu'on complete par quatre incisions laterales jus-
qu'aux membres. On detache alors lapeau des parties sous-
jacentes et on la rabat exterieurement.
La paroi musculaire du thorax et de l'abdomen etant
ainsi mise a nu, ouvrir Ie venLre avec des ciseaux, exami-
ner retat du peritoine et en recueillir tout de suite l'epan-
chement si cela est necessaire.
Apres Ie peritoine, to us les organes de la cavite abdomi-
nale (foie, rate, reins, capsules surrenalcs, intestins, vessie,
organes genitaux) doivent etre passes en revue. Noter l'etat
des ganglions mesenteriques.
LOautopsie de l"abdomen elant terminee, Ie thorax est
ouvert en sectio.nnant, de chaque cOte, la cage osseuse.
(Pour la poule, Ie lapin et les plus gros animaux, employer
Ie costotome.) On observe l'etat des plevres, des poumons,
du pericarde, des ganglions mCdiastinaux.
Pour prelever sterilement du sang du creur, on en saisit
l'extremite avec une pince, on brule sa paroi anterieure avec
une tige chaude ou avec une large spatule, on introduit par
19(1 EXPERIMENTATION SUR LES ANIMAUX!
Ie-meme point une pipette dans Ia cavite cardiaque et on

aspire doucemenHesang en donnant a la pipette un Ieger
m.ouvement de va et vient, puis on la retire.
Les prelevements dans Ie foie, la rate, 113 rein, etc., sont
faits de la mfune fa90n.·Pour prelever Ia moelte 0sseuse.
sectionner un os long transversalement, cauteriser l'unede&
surfaces de section, introduire dans Ie canal medullaire
¥extremite d'une pipette sterilisee et aspirer.
Pour les prelevements des centres ner-veux, voir Rage.
(chap. XL, A).
L'autopsie terminee, on detruira les cadavres par UI1' des
procedes ci-apres et on sterilisera les pl-ateaux qui les. oot'
contenus, soit en les portant a l'autDcIave a 120<>, sDit eales.
immergeant pendant nne heure dans nne solution cresylee
a 5 gour 100.
H. Technique pour l'enfouissement et pour

l'incineration, sans f.our cremetoire, des cadavres-
d'animaux d'experiences.
a) L'enfouissement des cadavres des petits anima-wI: d'ex-

periences dDit tDujDurs etre effectue a.vec les precautions.
suivantes : .on creuse dans Ie sol un trou de dimensions
convenables, a 0 m. 50 de profondeur au m9ins, et on en'
garnit Ie fond d'un lit de chaux vive de 0 m. 02 d'epaisseur
environ. Sur ce lit, .on dispDse les cadavres (qu'on aura pu
accumuler depuis quelques jours dans une poubelle metal-
lique fermee, remplie de solutiDn de cresyI'a 5 p.l00), et .on'
'les,recouvre d'une nDuvelle quantite de chaux vive, puis de
t-erre meuble.
La quantite de chaux vive a emplDyer est, au tofal,
1 kilogramme par 10 kilogrammes de cadavres,
S'il s'agit de cadavres d'animaux morts' de maladies tres
contagieuses (peste, charbon, etc.), il est indique de melan-
gel' a la chaux vive envirDn 10 p. 10c) de chlorure de chaux
sec du commerce.
b) On pratique tres commodement l'incineranon· des

cadavres d'animauX' d/experiences, PaFtDut au ron,. ne dis-
pose pas d'un four crematoire, en creusant dans Ie sol une
A'NESTH-ESIE. ..._ INFECTYON. - P(}NCTUlNS 197
c.aJ/lte rectan'galaire.a bords .evases, au fond de laquelle on

Mend Ulle rouche de branchages aU-5si sees que possible, ou
de copeaux de bois, sur 15 a 20 centimetres d'epaisseur, et
de telle sorte que l'air ait un facile acces sous ce petit
bucher. Sur ce lit combustible on etale les cadavres. On les
arrose ensuite. d'abord d'une petite -quantite de goudron (300
grammes environ pour 10 ki~ogrammes de cadavres), puis
de 20 centilitres environ de pctroIe, et on enflamme. La
combustion est rapide et totale.
1. - Tempchatures normales des animaux

d'experiences.
Les oscillations de temperature autour de Ia moyenne

normale obeissent a un rythme variable pour chaque espece
et meme pour ehaque animal. D'ou la necessite d'etabIir
ees variations avant chaque experience.
La temperature rectalc moycnne pour les di vers animaux
est, d'apres Gh. Richel :
Mammiferes. Pore.
Boouf. .
Cobaye. 39 0 2 Cheval. •
Lapin . . 39 0 5
Chien • . 39 0 2 Oisea'ux.
Singe. • 38 0 3
Chat. 38 0 8 Poules et pigeons.
Mouton. 38 0 6 Canards. . • .
J. - Poids moyen des cobayes sux divers ages.
A In naissance, poids moyen .• 74 gr.

1 e< jour » •. 72 gr.
5· » » 98 gr.
10· 137 gr.
15 e » 173 gr.
20· » 196 gr.
25· » 221 gr.
1 mois 240-250 gr.
2 » 350·400 gr.
3 " » 450-500 gr.
4 » 550·600 gr.
"
6 » » 650-700 gr.
Les cobayes uniquement nourns du lait de Ia mere ne

198 EXPERIMENTATION SUR LES ANIMAU~
tardent pas it mourir. Les cobayes non allaites Se deve-

loppent moins hien pendant Ie ler mois. II leur faut done
un regime mixte.
K. - Rapport du sang au poids du corps chez

diverses especes anlmales.
Bovides. 1 p. 30
Solipedes. 1 p. 18
Mouton. 1 p. 24,5
Chien. 1 p. 18
Chat . • 1 p. 35
Oiseaux. 1 p. 29
Rat. • 1 p. 29
Cobaye. 1 p. '30
Lapin .. 1 p. 31,5
CHAPITRE XV
MBTH_ODES DE CULTURE IN VIVO
(ProeM!} des sacs de collodion ou de moelle de roseau.)
A. - Preparation des sacs de collodion pour

cultures in vivo.
La meilleure techniqhe pour preparer les sacs de collo-
dion consiste a utiliser comme moules soit, comme l'a fait
Maurice Nicolle, des cylindres en sucre candi fondu, bien
secs et lisses. auxquels il est facile de donner les formes et
les dimensions les plus variables, soit des .tubes a essai ou
des tubes fermes en cul-de-sac a l'une de leurs extremites,
puis perfores de dehors en tiedans, au milieu de cette extre-
mite, d'uD. senl orifice de 1 a 2 millimetres de diametre.
On bouche ce trou du verre avec une solution epaisse de
gelatine. On laisse secher a l'etuve a 37°.
Lorsque la gelatine est bien seche, on plonge Ie tube dans
un bain de collodion, en evitant avec soin de faire des bulles
d'air, on Ie retire aussitot pour l'egoutter et on lui imprime
un mouvement de rotation trflnsversale entre les doigts,
pour que l'evaporation de l'ether s'effectue rapidement et
regulierement.
Des que Ie ,collodion est sec, on plonge Ie tube dans de
l'eau tiede, a 40 0 environ, et on en remplit l'interieur. L'eau
dissout peu a peu la gelatine et on attend que Ie sac de collo-
dion apparaisse libre a·la surface du verre. En souillant
lege-rement par l'extremite ouverte du tube, on Ie de)TIouie
avec Ia plus grande facilite.
II ne reste plus qu'a fixer Ie sac sur un support forme, par
exemple, d'un tube-de verre de meme diametre, etrangle et
pouvant etre sceBe au obture par un bouchon, avec une
couche de collodion appliquee a sec, au pinceau, au' avec
une ligature au fil de lin au de soie. On Ie sterilise ensuite
dans un tube a essai oontenant un peu d'eau.
200 EXPERIMENTATION SUR LES ANIMAU1G
ProcedtJ d'Auguste Lumiere el Jean Chevrolier :

Pour eviter les ruptures qui se produisent au moment du
decollementdu sac, ces auteurs ont modele. au moyen d'une
pate plastique, consistante et soluble dans l'eau, de petits
mouies ayant laforme,etle~ gimens,ions quel'ondesire don-
ner aux sacs. Le melange est constitue par 1 partie de sirop
de glucose I'),t 2 pa,r~ie~ de ,5\lc,re en pop.prtl dii!<.sucre glace ».
La manipulati,on et Ie modelage de ces moules doivent
s'effectueravee ~es «!oigts, legerement impregnes d'eall, ou
des instruments mouilles, pour eviter l'adherence de la pate
aux m#/M d.~ J'.op~.rat~J1r o,lJ. au/{ .outj,ls 4.e mQ~lage,
Ces mouies sont fixes _a r~x!r~mjte d'agitateurs en verre
ou de tiges "metalliques et immerges dans un collodion a
1 p .. 1QO q,epjtTJ;l-~HlJ)P.se. O)J. impriw.e a la.1i,ge dtl soutien
I1n ll1Plwt m?nt i).~ r.otatipn pOUT rep.~r#r 1,Illj,£orm.eAJent Ia
Fm:j.C)t~ d~ c,q]}R•.diQn ; .on )a~~e :;~.cher, puj!;> ,:)n :;usp,end Je
q.i.spp~i#f ainl>~ prepare #. If! p.arti~ sJlP~ritlp..re d'up recipient
reIppU d'e.a\l
~ liqp.iqp trfJ.?l~rsf;! l'jepv.e!oppe pf;!rm.eable. cJiS!i9ut la
1J1.l}~s.e ~pW'e,e e~, U\l bQ»tq,e 2 h.eur,es f»v~ron, le§ac ~e tr.ouye
lib~r~.
L'orip<;e ap ~es s:).~s pel)t etr.e ,tres pt:t)t, per,mettre ~eule
ment Ie passage d'une a,iguilltl creus,e. de 'sQrttl q\le wur
qFplu.:j>~RP est .ai~e1Ptlnt realise#! pt l~\1r ~t.an.cheit~ pent etre
.a)?~\1r~ef
B. - PreparatIon du ~oUl>dioJ1 pour dillques

et sacs dialyseurs.
Pour uq litre:
.caton azotiqup (bien echarde, .sal)s gru-
. rneaux ni }lrnas). . . . • . • . . 40 gr.
~lC9P) aRsoh,l, . . • . • . . . . , 3J)0~,
Laisser tremper au minimum 24 hellrps, aait!)r pe temp:;

1:;,..,. temp:i. 4jout~r;
Efber. . . . . , . . . . . . . • ~oo CI!.
La .dis&pluti(m s~ fait ell une dpmi-n.eure envirop. R~l}nj.er

IlY~C une bag}lett~ 4e vel're. AjQJlte r :
Glycerine
. , 3 3.{)0 -a~. , .
, , ...,~ .
METHODES DE CULTV.J(8 IN ¥IVI) .201
~gile,r ay.e.c W}.e baguette.. P<m.r hien m.eltloger. Comple1e.r

~n ;ljoutant :
Alcool absolu. . . • , . . . , . . 4ll0~.
Laisser ensui~e m.urir 8 jours.

Les ,Pro,P.ortjons ci-dessl,ls so~t les plus favor.ables p.our les
membranes Ires pernuEables.
Pour diminuer la permeabilite, on augmente la quantite
d'ether jusqu'a 800 centimetres cubes d'ether pour 200
d'alcool.
Pour avoir des membranes minces, on peut rcduire jus-
gu'a 20 grammes ia quantHe de coton azotique par litre.
La permeabilite des membranes est en raison directe de
Ia quantite d'alcool et t;n raison inverse deJa quantite d'ether
que renferme i.e collodion.
C. - Sacs .de collodion 'filtrants de L. Michel.
L. Michel aPIlPl'eparl3r des sacsdecollodiop susceptihI.es

de resister a une pression interieure de 20 a 30 centim.etrel>
de mercqr.e.et de se,rvir a l'ultra-filtrfltio,l). microscopiqu.e.
On emploie a cet eifet un collodion obtenu en disilolvant
2 gr. 5 de coton azotique dans 100 centimetres cubes d'un
melange a parties egales d'ether a 66 0 et d'acide acetique
cristallisable.
Les toxines microbiennes ne sont pas retenues par ces
membranes, tandis qu 'elles Ie sont en partie ou en totalite
par les bougies Chamberland et Berkefeld.
D. - Denitrification des sacs de collodion.
On peut, comme 1'0nt montre J. Duclaux et A. Hamelin,

denitrer les sacs en collodion et les rendre ainsi plus com-
modement sterilisables par la chaleu.r sans trop diminuer
leurpermeabilite, au moyen du sulfhydrate d'ammoniaque
du commerce Hendu de 4 volumes d'eau et tiedi a 40 0 • On
remplit Ie man chon filtrant de ceUe solution tiede et on Ie
plonge dans un tube contenant Ia meme substance, de teIle
sorte que la denitrification se fasse simultanement sur les
4e~x faces. L'operation est achevee en une demi-heure. On
202 EXPERIMENTATION SUR LES ANIMAUXJ
rince ensuite Ie filtre avec de l'eau ammoniacale (pour em-

pecher Ie depOt de sOl1fre qui pourrait se produire par oxy·
dation), puis avec de I'eau distUIee.
Les filtres ainsi denitres ne sont pas modifies par l'ebulli-
tion. lIs peuvent et~e sterilises a l'autoclave et conserves
sees. Des qu'on Ies plonge dans I'eau, ils redeviennent ins-
tantanement permeables.
E. - Sacs en moelle de roseau.

Au lieu d'employer Ie collodion pour Ia preparation des
'sacs dialyseurs, on peut utiliser parfois tres commodement,
comme l'a propose MetchnikofJ, les tubes de moelle de
roseau commun (Phragmites communis), qu'on ferme a leurs
extremites avec un fil impregne de gomme-Iaque. Ces tubes
,de cellulose presque pure peuvent etre sterilises a l'auto-
clave aussi facilement que les sacs de collodion. '
Ils sont plus resistants, plus minces et plus souples, par
suite souvent preferables pour les inclusions intra peri to-
neales.
Ils ont servi, en particulier, a Ia culture in vivo du microbe
de Ia peripneumonie.
CHAPITRE" XVI
LIQUIDES" PHYSIOLOGIQUES ET LIQUJDES

CONSERV;ATEURS DES PIECES ANATOMIQUES
A. - Liquides physiologiques (employes pour Ie lavage

et la conservation des organes frais) :
1 0 Liqllide de Ringer·Locke :
Eau distillee. .. . . . 1 litre
NaCI. . " . . . . • 8 gr.
Chlorure de potassium. . 0 gr. 2
Chlorure de calcium. . 0 gr. 2
Glucose pure. ", . . . 1 gr.
Steriliser a froid par filtration au Chamberland.
2 0 Solation trichlorllree de Carrel:
Chlorure de sodium. . 9 gr.
Chlurure de calcium .• o gr. 25
Chlorure de potassium. o gr. 42
Eau distillee. . . . 1.000 gr.
3 0 Eall sa/ee physiologique (serum artificiel simple).
NaCI pur. • • . . . • . • • . . 8 gr. 1
Eat!. distilJee. .. ..
. . . . . ~. . 1.000 cc.
Steriliser a 120 0 a l'autoclave, 20 minutes.
4 0 Semm saM et SllCre (Ch. Richel).

NaC!. . . . . . 7 gr.
Lactose ou glucose. . . . . . . .- 5 gr.
Eau distiIli:e. . • 1.000 cc.
50 Eall de mer arlificielle CE. Perrier).

Cblorure de sodium. . . 18 gr.
Chlorure de magnesium. 11 »
Chlorure de potassium. 3 »
Sulfate de magnesium. • 5 »
Sulfate de calcium. • . 3 »
Eau. ., •.... 3.000 cc.
Steriliser a froid par filtration au Chamberland.

204 EXPERIMENTATION SUR LES ANIMAUX>
6 0 Serum de Trunecelc (hypertonique, medicamenteux).

Sulfate de soude. . o gr. 44
'Chlorure de sodium. 4 gr. 92
Phosphate de soude. o gr. 15
Carbonate de soude. o gr. 21
Sulfate de potasse .. o gr. 40
Eau distillee.. • . 100 cc.
St6riliser a l'autoclave a 115 0 , 20 minutes.
7 $erafl1. artificiel de Hayem.
0
Chlorure de sodium pur. . 5 gr.

Sulfate de soude. . . . . 10 gr.
Eau distillee. • . . . . 1.000 re.
Filtrer et ~teriliser it rauto.clave.
8 Liql1ide physiologiql1e de DeIbel.
0
Chlorure de magnesium. . . . . 12 gr.

Eau distillee.. . . . . . . . . 1.000 cc.
9 0 Vernis de Carrelpollr Ie pansement des greffescutanees.
ParalIine fusible a 52 0 • 189 gr.
Paraffine fusible a 40 0 • 6 gr.
Cire blanche. • • . 2 gr.
Hulle de ricin. . . . 1 gr.
B. - Liquides .conservateurs des pieces

anatomiques.
a) Liquides de !{ayserling, modifies par Be1l1er (pour les
pieces frlliches) :
10 Jer bain. Immerger allssjt6t que possible In piece et l'y
noyer tout entiere en s'assurant qu'eHe est 'bien couverte
d'ouate hydrophile:
Azolate de potas~e. 45 gr.
Acetate de· potasse. 90 gr.
Eau. . •.•. 3.000 cc.
Formol. • . • . 600 (l.C.
Sejour 1 a 3 jours suivant volume, retirer, laver rapide-

ment it l'eau et plonger dans:
2 0 Alcool it 90 0 , 3 ou 4 fois Ie volume. de Ia piece.
Sejour 1 a3 jours, suivant voIume,puis passage direct dans:
3 0 Liquide conservateur :
(a) E{lu distilIee. . • '. 1,000 ce.
Glyc,:;rine pure.". . 1.000 cc.
Alcool a 90 0
• 250 cc.
Acetate de potllsse. 250 ce.
./
LIQUlDES PliYSIOLOGIQUES ET CONSERVATEURS 20'&
Lorsque la piece ~ des coute1l'l's ~res delic:rles qu' on desire

bien conserver, a'll lieu de 3 0 (a) 0l1' les immerge dans 3 0
(b) 7
(b) 6l'yc6rine. 0 0 • 0 1.600 ee.
Eau distillee. 800 CCo
A':cetate de potasse. 800 gr.
,
Enfin. si l'on desire garder la piece dans un liquide qui
I?ermettl'a d'y pratiquer ulterieurement des coupes micros-
copiques parfaites et colOJ;ables, on les immerge dans 30
(c)
(c). Aleoal. it 95 0 • • • 2.6000 ce.
Eau distillee. . 4.000 ce.
Glycerine.. . . • 80d ce.
A.cetilte de' potllsse. 40() gr:-.
Mai's ce d'epn,ier liquide conserve malles couteurs.
b) Liquides de J. Binot (Institut Pasteu~).
10 Ac~tale de soude fondu .. 40 gr.
Cblorate de potnsse. 5 gr.
Azotate de potasse. 100u 20 gr.
Formol it 40 %. 0 100 ce.
Eau. • ..•. 1.000,ce.
plus:
ou bien: Sulfale de· soude et azotate de
potusse.. , . . . . . , . . . 20 it 30 gl·.
ou bien : Sulfate de soudel senr. . •0 2U it 30 gr.
Les Rieces sont imm'ergees dans Ie liquide et recouvertes
d'ouate hydrophiie.
Agi'ter de temps en temps Ie liquide.
11 est necessaire de sttpprimer dansla piece hmt ce qui
It'esb pas utile a conserver; en p::!rtieulier, de vider
les'intestins si possible (i,isrepandent ulterieUFement, dans
Ies liq.uides, des, matieres cO'lorantes genantes): :Be merne
pour la -vesicule biliaire.
Si la piece est volumineuse, on injectera ce memeli'luidc
da-ns Ie systeme vascnlaire.
L,a duree de l'immersion est un tempg;deiicm. II £'aut qoe'
la piece soit compfetement penetree, mais· qu' eUe reste aus:si
pen que possible dans Ie bain, sans quoi, 13. cOllleuJ.1 D6
reviendrait pas bien.
De toutes petites pieces"'Seront laissees immergees qu_el-
ques heures. Un rat par ex:emple. 24 ou 18 heures. Enfin, de
206 EXPERIMENTATION SUR LES ANIMAUXJ
plus grosses pieces,48 heures ou 3 jours, mais il ne faut

guere de passer cette duree. (La piece se dec%re dans 10.)
2 0 La piece est egouttee, puis immergee dans l'aIcool a'
90 0 ou elle reprend sa couleur. A cet alcool on ajoute :
Acetate de soude fondu.. . . . . . 20 gr.
Sulfate de soude. . • • . • . . . 20 au 10 gr.
par litre.
(Mieux vaut cependant commencer par l'alcool a 60 0 , puis
alcool a 90 0 .)
Duree de l'immersion dans Ie ou les aIcooIs : a peu pres
Ia meme que dans 10. Cependant, tant que Ia cou]eur aug-
mente en intensite, on peut, en suryeillant, y laisser la piece
plus longtemps. Par contre,. - et c'est important, - si
la picce baisse de couleur, arreter, bien egoutter et plonger
sans laver .dans: .
i:!0 Liquide difinili(:
Acetate de potasse .. " . 150 gr.
Glycerine neutre. . 250- ce.
Formol it 40 ,,/... . 2 a if cc.
Eau. . ...• I :000 cc.
Les pieces sont definitivement conservees dans ce liquide

Oll Ie' formal a pour elfet d'empeche.r les contaminations
par les moisisst\res, en particulier,
Si la piece ~eut etre recoupee, on ffra une coupe
fraiche, car la surface :est toujours plus decoloree. 11 suffit
d'enlever 2 ou 3 millimetres avec un couteau a c'erveau,
Remarques sur 10 :
Le chlorate de potasse avive Ia conleur, mais tend a
ternides pieces. Ppur les muscles, en particulier, on pent
en diminuer la dos~ ou mieux Ie supprimer.
Pour les visceres, et principalement pour Ie foie, on ajoute
it la solution 1 0 , telle queUe, 2 gr. 50 a 10 grammes d'eau
oxygenee fraiche.
Pour Ie foieon se trouve hien d'ajouter, par litre, 10 a 20
grammes d'hydroqllinone prealablement dissoute dans un'
peu d'eau chaude (bocal plein et aussitot ferme, poureviter
une rapide reduction).
c) Methode de Sheridan Deiepine,
Particulierement recommandabIe pour conserver les
LIQUIDES PHYSIOLOGIQUES ET CONsERVATEURS 207
pieces entieres coupees en tranches de 1 a 2 centimetres

d'epaisseur, avec leurs couleurs.
On commence par fixer les pieces en les laissant immer-
gees pendant ~ jours a 2 semaines (scIon leur epaisseur)
dans la, solution suivante :
Formol (sol. commercinle it 40 ·/0). 100 cc.
Enu . . . . . . . . . . . . . 900 cc.
Sulfate de soude. • . . . . • . 20 go'.
On porte en suite pendant quelques hellres dans un bain

d'alcool a 90 0 , jusqu'ace que la teinte initialesoit recuperee.
Puis on immerge pendant au moins 2jours (il n'y a aucun
inconvenient a prolanger davantage, jusqu'a 2 ou 3 semai-
nes) dans:
Solution d'acide arsenieux (sat. it l'ebullition
et prepnree depuis nu moins 12 heures). . 400 cc.
Glycerine pure.. . • . . . . . . • 600 cc.
On prepare finalement une gelatine glyeerinee, arsenicale

en faisant sepa!;,cment les deux solution.s suivantes :
1) Gelntine Coignet (etiquette doree). • . . 425 gr.
Solution saturee it chaud d'acide nrsenieux. 1,500 gr.
On fait dissoudre la gelatine dans la solution chaude d'acide

arscnieux.
2) Solution 1. . . . . . . . . . 1 925 cc.
Glycerine pure. chaude.. . . . . 5.760 cc.
Les deux solutiQns s.ont melangees, puis refroidi~s aux

environs de 20 0 • On y verse alors, en agitant fortement avec
nne baguette en verre, 6 blanes d'reufs battns et leurs .co-
qui lIes broyees a part. On reporte sur Ie feu et on chauffe
jusqu'au voisinage du point d'ebullition pour eoaguler l'al-
bumine et on maintient a la temperature d'environ tOOopen-
dant 2 heures. Le liqllide chand est filtre a travers une fla-
nelle, puis surun papier Chardin •.a l'interieur d'un autoclave
dans lequel on entretient une temperature d'environ 50 0 •
CeUe filtration est assez longue.
Le milieu ainsi prepare est parfaitement transparent.
On en remplit Ie vase dans lequel on a dispose la piece ef
on obture Ie bouchon avec de la colle adhesive an caout-
chouc (voir chapitrevll, 10 ) qu'on recouvre d'une bande de
papier d'etain.
Ce procede de Sheridan Delepine derive de celui propose
,
20& EXPERIMENTAT!ON SUR l.:ftS ANIMAUX
ell:' 189& par Nicolas pour rirtcfusi6n des pteparatiarts alfa-

tomiques, lequel consiste a: irt1m~I'ger r~s pMces, d'~.Botd
pertdimt 2'4· a 4'~ heureS' dans uM soPution aqueuse dt! gelk-
tine a 4p. 100, maiI1tenuea25o, puis, pendantle II1eItte temps.
dans une solution it 10 p. 100, et finalernent da~s une solu-
tion it 2() on 25 p. 100 additionnee de 8 it 10 p. 1{)0 de glyce-
rine et maintenue it 35 0 • A pres 48 heures on laisse refroidir
clans un moule et on conserve la piece dans du formol it 10
[I. 120' d'eau distillee.
c. - ~evivification des aouleurs par la methode

de Fornario pour les petites pieces anatomiques
conservees depuis longtemps dans Ie formol.
Ces piece'S reprennent une couleur vive en les traitant

camme suit:
Bain de 48 heures dans une solution de formol it 4 p.l00.
Bain de 24 heures (au plus) dans l'alcool it 90 0 (douze
heures seulement pour les organes de petits animaux ou les
fragments d'organj:.\s).
Reporter l'a pi(!ce dans I'aIcool it 900, neuf (3 on 4 lois Ie
volume de la piece), auquelon ajoute, goutte it goutte, une
quantite vatrable de la solution suivante (pas plus de 10 cen-
timetres cubes par litre) :
Acide' pierique (sol. aq. slI.turee·).. • lOa cc.
Acid~ acetiq).le glacial. • . . . . 4 cc.
ta couleur reapparalt en quelques minutes. Laisser les

PIe'Ce's' darrs'cette soliftion.pendant quelques jours-, puis les
reporter dans l'al'cool a 90 0 • La coulenr ne s'y modifie plus.
Orr pent avnntageusement aj,outer a I'a solution picrd-llcc'-
tique nne tres petite quantire d'hemoglobi.ne.
D. - Conservation des cada'Vr'eS' de's petits anlimau,,"

entie'lfS' 00 '(1uver.1fS', ow de' grt>slS'eSl1iece'S aR'atomique'S.
a.) Mi-xlure de Goadby:. Dans 10 lrtres d.'eau, on ajoute' Ies

doses S'l.i1.vantes de :
Sel de cuisine. . . 1.250 '~r'.
Aiun. ordinahe.. . v 60 gr.
Bichlorure de mercure. 2 gr.
LIQUIDES PHYSIOLOGIQUES ET CONSERVATEURS 209
On peut rem placer lebichlorure de mercure par 1 gramme

d'acide arsenieux ; on supprime ulors I'alun.
!h) Liquide de Miiller.
Bichromate de potasse. 20 gr.
Sulfate de soude. . . 10 gr.
Eau distillee. 1.000 cc.
c) Preparation desyieces anatomiquesvolumineuses deslinees

a eire conserVlies ulterieurement a Niai
sec.
Le liquide d'impregnation se prepare comme suit:
Eau. . .•.. 18 litres.
Alun . • . . . . 600 gr.
Nne!. . . . . . 150 gr.
Nitrate de potnsse .• 72 gr.
Potasse. . . . . 360 gr.
Acide nrsenieux. 60 gr.
Faire bouillir jusqu'a dissolution complete, fiItrer .it

froid, puis ajouter :
Glycerine . . . 8 litre •.
Alcool a 95 0 • • 2 litres.
Conserver en bonbonnes. Vne grosse piece (comme une

tete entiere) doit etre immergee pendant 15 jours dans ce
liquide. Vne piec~ moyenne, de 5 a 8 jours, On l'egoutte
ensuite et on peut la conserver a I'etut sec, a I'abri des pous~
sieres, sous vitrine par exemple.
E. - Injections intravasculaires de nlatieres

solidiiiables:
Blell de PrusseglHaiine. Solution aqueuse saturee de bIeu,
additionnee d'une solution a 4 p. 100 de gelatine fondue,
tiede. On filtre a travers une flanelle au moment de l'usage.
Carmin gelatine. Solution de carmin dans I'ammoniaque,
a saturation. Pour bien colorer. on en verse une quantite
con venable dans une solution un peu plus concentree
(a 6 ou 8 p. 100) de gelatine fondue, tiede. On filtre a tra-
vers nne flaneIIe au moment de l'nsage, apres avoil' pris soin
de nentraliser I'exces d'ammoniaque par addition de quel-
ques gouttes d'acide acetique. Mais il faut qu'il reste encore
un peu d'ammoniaque libre, sans quoi Ie carmin se pl'eci-
piterait.
MICROBIOLOGIE 14;
TROISIEME PARTIE
MICROBES DE L'EAU, DE VAIR

ET DU SOL
CHAPITRE .xVII
ANALYSE ET PURIF1C4TION DES EAUX, POT.tl.BLES
A. ~ Attttly!e. ~ Prelevert'lE!nt des ecl'il1f1ti1loM

degtinc;g aUK analyses:
2 flacons de 150 centimetres (lubes chacun t>our 1'unalyse

ba~teriologiqlle (flacons prenlaDlemellt sterilises et cnve-
JDppM de pilpjer steJ'j]e),
1 touria de 10 litr~s pour I'analyse c!himiquc complete
pat un lab6ratoire special de chimie analytique.
(Tottrie bi~n propre, lavee a l'cau acidnlee, puis rincM a
I'Mu bouillie plusieurs fois et fermce avec un b()uchon
neuf bietl ctanchf!) j I "
Ou bien d0UX litre!! pour analyse' chimique partielle

(analyse sattitaire), faite au laboratoite de microbiologie.
PO\lr l'analyse bacMriologique, transport aussi rapide
qUE! possible des fl::tccms dans une caisse farmant a clef, gar-
nie de sciure de bois et de glace concassee en meum; m'or-
ceaux. Les eehantillons doillent rester dans la glate jllsql1'au
{IUJmellrde 1'I1nalyse pour eviler la multiplication des germes
ttlicT'tJbien~ •
Lorsqu'il s'agit d'nne captation nouvelle d'eau destinee a
l'alirt'lerttatiOrt; l' envoi des echantillons devra toujours ~tre
tlceompagne d'Ul1e fiche de renseignemenfs d'ordre geolo-
giqrte et geographiquo, indiqu:1nt le mode de captage, la
nature du sol et du sous-sol, la nature et I'etendue pro-
bable du pl!tim~tre d'alimentation de la source ou de la
212 MICROBES DE L'EAU, DE L'AIR ET DU SOL
nappe aquifere envisagee, Ia situation du captage par rap-

port aux habitations, aux cimetieres, aux depOts de fumiers
ou d'immondices, aux Iavoirs publics ou prives, aux puits
perdus, etc., qui peuvent se trouver dans .le voisinage plus
ou moins immediat.
B. - Analyse chimique.
Elle doit porter, au point de vue sanitaire, sur la recher-
che et Ie dosage de la matiere organique, de l'ammoniaquc,
des nitrites, des chlorures et sur la determination du degr~
hydrotimetrique '(total et permanent). Les methodes indi-
quees ci-apres sont celles adoptees par Ie laboratoire du
Conseil superieur d'hygicne publique de France.
1 Evaluation de La matiere organique par Ie per-

0
manganate de potassium. - Certaines matieres orga-

niques enlevent plus d'oxygene au permanganate en solu-
tion acide qu'en. solution alcaline. Le sucre cristallise, Ie
glucose, la dextrine, l'acide tartrique, l'acide' oxaliql1e,Jes
macerations de substances vegetales en absorbent davan-
tage en solution acide. L'urine, les matieres fecales, les pro-
duits de putrefaction des alburriinoides en absorbent au
contraire davantage en solution alcaUne. L'albumine non
desintegree et l'uree n'ont que peu d'action. LI'! proc.ede
dont il s'agit ne fournit done que des indical\ions compara-
tives et non des chiffres exacts. Quandon dit qu'une eauren-
ferme x milligrammes de matieres organiques par litre, cela
s~gnifie qU,e l'ensemble des matieres organiques d'origines
diverses, contenues dans un litre de cette eau, est exprime
par x milligrammes d'oxygene emprunte au pertnanganate
soit en solution acide, soil en solution alcaUne.
La reaction est basee sur les donnees suivantes :
1 gramme de permanganate de potassium peut fournir
o gr. 253d'oxygene capabled'oxyder, par exemple, 1 gr. 994
d'acide oxalique cristallise.
Pra,tiquement on emploie une solution a 0 gr. 5 de per-
manganate par litre. 1 centimetre cube de cette solution
correspond a 0 gr. 125 d'oxygene et a 0 gr. 997 d:acide
oxalique cristallise, pur.
On introduit respectivement 100 et 50 centimetres cubes
ANALYSE ET PURIFICATION DES EAU~ POTABLES 213
de l'eau a essayer dans deux floles coniques d'Erlenmayer.

On ajoute 10 centimetres cubes d'acide sulfurique au
quart dans la preIIJ.iere fiole et 5 centimetres cubes dans la
seconde.
On introduit, d'autre part, respectivement 100 et 50 cen-
timetres cubes de la meme eau a essayer dans deux fioles
coniques. On les alcalinise, la premiere par 10 centimetres
cubes, la seconde par 5 centimetres cubes d'une solution
saturee de bicarbonate de soude.
On verse dans chacune des 4 fioles exactement 10 centi-
metres cubes de la solution de permanganate de potassium
a 0,5 p. l. 000.
Les 4 fioles sont alors portees doucement a l'ebullition
pendant 10 minutes. On laisse refroidir. Les deux epreuves
alcalines sont .rendues acides, en vue du titrage, par 20 cen-
timetres cubes et 10 centimetres cubes d'acide sulfurique
dilue volume a volume.
Chaqile epreuve cst alors successivement additionnee
exactement de 10 centimetres cubes de sulfate ferreux.am-
+
moniacal (solution a lOgrammes par litre 10 grammes d'a-
cide sulfurique).
On revient immediatement a la teinte rose faible en lais-
sant tomber du permanganate a 0 gr. 5 p. 1000 contenu dans
une burette graduee.
La' difference volumetrique de permanganate trou,:ce
entre une epreuve. de 100 cc. et celle de 50 centimetres
cubes qui lui correspond, represente I'oxygene consomme
par la matiere organique dans 50 centimetres cubes d'eau.
On exprime les resultats en ox.ygene et en acide oxalique par
litre. Toute cau qui consomme plus de 2 a 3 milligrammes
d'oxygene par litre doit etre cansideree camme suspecte .
•
20 Azote ammoniacal. - La seule presence de l'ammo-
niaque dans I'eau est Ie plus souvent suffisante pour faire
rejeter celle-ci de la consommation. On la :recherchera done
simplement avec Ie reactif de Nessler.
AMMONIAQUE. REACTIF DE NESSLER POUR LA RECHER-

CHE DE L' AMMONIAQUE. - Dissoudre 5 grammes
d'iodure de potassium dans 5 grammes d'eau distilIee
chaude. Ajouter une solution chaude concentree de bi-
214 MICROBES DB L'EAU, DE L'AIR ET DU saL
chlorure de mercure jusqu'a ce que Ie precipite rouge

qui se forme cesse de se dissoudre par agitation. Filtrer.
Ajouter une solution de 15 grammes d'~ydrate de potasse
dans 30 grammes d'eau distillee et diluer a 100 centimetres
cubes par addition d'eau distillee. Ajouter encore 0 ·ce. 5
de la solution de bichlorure dt( mercure. Laisser repo'Ser.
Decanter soigneusement et verser Ie liquide dans un flacon
bouche a l'emeri.
Quelques gouttes de ce reactif donnent une coloration
jaune ou jaune rougeatre dans les eaux qui contiennent de
I' ammoniaque.
On acidule au moyen de 5 a 6 gouttes d'aeide sulfurique
par 250 centimetres cubes d'eau a essayer. On can centre a
environ 30 centimetres cubes en chauffant a l'ebullition
dans une fiole a fond plat. On laisse refroidir. Certaines
eaux donnent un depOt cristaIIise de sulfate de chaux.
On alcalinise a I'aide de potasse caustique pure: il se
forme souvent un pnicipite de chaux e. de magnesie qu'il
n'est pas necessaire de separer. On ajoute 2 centimetres
cubes du reactif de Nessler qui praduit un precipiM ou
une coloration jaune bruno d'autant plus foncee qu'il y a une
quantite d'ammoniaque plus grande. Dans les eaux calcai-
res et magnesiennes, il se forme un preejpire blanc lorsqu'il
n'y a pas d'ammoniaque, et colore par l'entrainement du
sel de mercure-ammonium lorsqu'il y en a. \
On fait un temoin dans les memes conditionsnvee de l'eau
distillee pure.·
Si la 'reaction est accentuee, on dose l'ammoniaque en
utilisant les deux solutions titrees snivllntes:
Acide sUlfLl1:ique a 0 gr. 98 de SO~H~ par litre. Un centi·
metre cube correspond a 0 mgr. 98 de SO'H'il ou a
o mgr. 28 d'azote. •
Soude a 0 gr. 80 de NI;lOH par litre, ~'eat·a~dire ~quiva
lent~ a la solution acide r;i·dessus.
Vappareil se C0\11pOSe d'un ballQu QU d'Que fiQl~ a fond
plat de 2 litres, ferme par un bouchon de caoutchQuc p~fce
de deux trous ; dans l'un passe la tige d'un entonnoir a robi-
net; dans l'autre un tube a degagement relic it un refrige-
rant. On fixe a l'extremite du refrigerant un tube a bQut
effilQ. On introduit dans Ie recipient L500centime.tr(ls cuhes
d'eau et un lait de 10 grammes de magnesie calcinet) que
ANALYSE>ET, PURIFICA:rION DES EAPX PQ'l(ABhE$ 215"
l'on a ell; Ie. soin,de. faire' prealablement._ bouillir. On PQr,te1

ens)lite douceme~t1d'ebullition, eton,dil>till~ IepteJIleIlt t'lp-,
viron 100 a 150,oentimetres cubes. On rej:!U(:lille,le liq»j.de.
distille dans une fiole coni que renfermant 20 centime-
tres cubes de solution d'acide sulfurique. a. 0,98, par
litre, additionnes de quelques gouttes de, solution alcooli·
que de phenolphtaleilJe dans laquelle plong~, d~s l~.debut,
l'e:JStremite efIilee du refrigerant.
On prepare un temoin avec les memes quanti'i:es d'eau
distillee purC',. diacid-e e1: de pltenolphtalein_e"
On dose. avec la solution de soude a O. 80 par litre, le
temoin e.t: l'epreu ve, en p,reof}nilla pl;'ecaut-ion de (ai,r~ ~quilJir
et re.froidir les. solutio,ns acide:; aVqnt Ie. t~tI:ag~ .. ~g d.itrk.
renee: dOJllue.. la q,uantite d'acide suJ{ur~qu.e sp.-,t,q.ree l?ax
l'ammo.n.iaque.de l'ef,ltu. On en.deduit la quql}.ht.e cQJ:J;es1?on,~
dante. d'awte ammoniacal par litre.
3° Nitrites. - On l'es, reda.~I1(}~ Jil.ar leo F~~til4e, 'I):qllhS....

dorff ou par la reaction a la naphtylamine.
a) Reaclij de Tromsdor/f, Ie plus sensible ~
Chlorure de zine pur. . 20, gr.
lodure de zinc pur. . • . • • . . . :!!i gr.
Amidon soluble,. . . , • . . . . . 4 gr.
Eau d'i"liUee. q. s. pour. . . • • . • un libe.~
Dissoudre d'abord Ie.chiorure de zinc dans 100 centi-

metres cubes d'eau, y ajouter l'amidon, puis faire houi'llir l
ajoater l'iodure de zinc, completer a 1 Htre et :flltrer sur
coton de verre. Conserver dans un Racon en verre br-un.
A 10 centimetres cubes d'ean on ajoute 0 cc. ~ de ee- ~ae~
tif et V gouttes d'acide sulfurique. Si }'eau conHent des ni-
trites, on observe tres rapiclement une coloration bleue
plus ou moins intense.
Preparation de ['amidon soluble:
Pour preparer l'amidon soluble ou amylodt)J.trin~, Ull
fait macerer pendant 6 a.8 semain{)s 100 graqllnefl de f~cule
de pommes de terre dans 600 centimetres cubes d'acide
chlorhydrique etendu, de denslte l,op.
Au bout de ce temps, les grains qui semblen!: inalten!!!
ne se colorevt plus en bleu par node, me.ii? e,n iaune. On
les recueille par centrifugation ou sur un filtre Q\ on l(!s
216 MICROBES DE L'EAU, DE L'AIR ET DU so1.
fait secher. Apres dissolution dans l'eau chaude. ces grnins,
donnent urie coloration violette. L'amidon soluble a'insi
obtenu peut se conserver sec pendant tres Iongtemps.
b) Reaction a la naphlylamine.
On verse dans un tube:
Sol. de naphtylamine B it 1 % filtree et
acidifiee par 10 % d'acidc acetique. 5 ce.
Solution it 1 " d' Beide suIranilique • 5 ce.
Coloration rose en presence de traces de nitrites.
40 Nitrates. - La recherche des nitrates

interet au point de vue sanitaire. La pres!'
qui peuvent n'etre que les temoins de r
cation tres anciens, est frequente dar

ment parfaitement filtn\es ou dan~ •• les.
On peut determiner leur presence, par les
reactions it h diphenylamine ou a la brL~ •.
a) Rea,ction d la diphenylamine.
Acide sulfurique pur it 660 Be. . . . . 100 ce.
Sol. a I) % de sulfate de diphenylamine. . 5 cc.
Acide chlorhydrique pur it 10 %. . . . 5 ce.
Coloration bleu fonce sur Ie resid~ de l'cvaporation
dans une capsule de porcelaine.
b) Reaction de la brucine:
On delaye Ie residu de l'evaporation dans une ou deux
gouttes d'acide sulfurique concentre et on ajoute quelques
milligrammes de brucine. S'il ya des nitrates, il se proquif
une coloration rouge, virant it i'orange, puis au jaune.
5° ChZore des chlorures. - On en effectue]e dosage

volumetrique avec les deux solutions suivantes, bien exacte-
ment titrees :
a) Solution de nitrate d'argent a 2 gr. 9075 par litre. CI:JU-
que centimetre cube correspond it 1 milligramme deNaCl
ou a 0 mgr. 607 de chI ore .
b) S~lution de chromate -de potassium neutre et pur a
10 p. 100.
ANALYSE ET PURIFICATION DES EAUX POTABLES 217
On verse dans une fiole coni que 250 centimetres cubes
de l'eau a analyser, que l'on additionne de 0 cc. 5 de la solu-
tion de chromate de potassium. On titre a la burette, au
moyen de la solution d'argent, jusqu'au virage du jaune
vert au jaune orange (lres deiica t, mais tres net et sensible
pour un reil exerce). On deduit du volume de la solution
titree d'argent ainsi'ajoute, Ie volume de la meme liqueur,
employe pour obtenir Is meme teinte dans une solution de
chromah~ jaune de meme concentration dans reau disti11ee.
Si I'eau etait alcaline, on la rendrait neutre en ajoutant la
quantite d'acide sulfurique necessaire, determinee par Ie
titrage alcalimetrique.
Si I'eau eta it tres riche en chlorures, on emploierait la
solution a 29 gr. 075 de nitrate d'argent, correspo.ndant a 10
milligrammes de NaCI ou6 mgr. 07 de chI ore par centimetre
cube.
6 0 Titrages hydrotimetriques. - Ne sont utiles que

pour determiner la richesse de l'eau en sels calcaires si ron
suppose que ceux-ci, se trouvant en exces, peuvent pre-
senter des inconvenients On deterJ?1ine alors les degres
hydrotimetriques avant et apres ebullition. C'est ce que ron
appelle _Ie degre hydrotimetrique total et Ie degre hydroti-
metrique permanent.
Cette determination s'eITectue avec une liqueur titree de
savon qu'on prepare en saponifiant 30 centimetres cubes
d 'huile d'amandes douces par 10 centimetres cubes de les-
sive de soude:i 360 en presence de 10 centimetre$ cubes d'al-
cool a 95°, enchauITant aU bain-marie et agilant la masse.
Lorsque la reaction est terminee, on complete a 1 litre
avecdel'akool a 00° en -remnant constammenL On filt-re.
L~ titrage de la liqueurs'effectue au moyen d'une solution
de chlorure de baryum a 0 gr. 55 de BaCl~ 2H2 0 par litre.
On mesure exactement 40 centimetres cubes de cette
solution, que l'on introduit dans un flacon de 100 centi-
metres cubes bouchant a l'emeri. On fait tomber Ia: li-
queqr de savon contenue dans la burette speciale jusqu'a
ce que ron obtienne par l'agitatign une mousse qui doit
occuper tout l'espace libre du fla'con au debut, et persis-
ter avec une epaisseur dOun centimetre au moins pendant
4 a, 5 minutes, tout _en imprimant des mouvements de
!!18 MIC1WhES DE L'EAU, DE L'AIR ET DU Sol.,
rotation a l'eau du flacon. Dans ces conditions, on doit

obtenir 22 degres, sinon on corrige la liqueur titnSe de
savon. II est plus simple de noter Ie titre trouve et d'en
teDir compte dans l' evaluation des degres hydrotimetriques.
Degre hydrolimetrique lotal. - On determine de la ma-
hi~re qui precede Ie degre hydrotimetrique de .reau, sans
dilution, Iorsque Ie degre ne dcpasse pas 25, ou hien sur
des fractions de 20 centimetres cubes, 15 ceptimetres
cubes, 10 centimetres cubes, 5 centimetres cubes, ·de l'eau
a essayer, en completant chaque fois it 40 centimetres
cubes avec de l'eau distilIee, fraichement bouillie, suivant
que cette eau accuse un degre de plus en plus- cleve. 0n
tient compte, bien entendu, ou volume d'eau distmee
ajoute.
Deyre hydrotimerrique permanent. C'est eelui de l'eau
apres ebullition et separation du precipite.
100 centimetres cubes de l'eau sont portes a l'ebulli.:
tion pendant 10 minutes. On refroidit; on compl~te a 100
centimetres 'cuDes avec de l'ea" distiJlee boui-llie,.on agite et
on filtre. On prend Ie degre hydrotimetrique dit perf11u-
neffl du liquide filtre.
Un degn hydrotimetrique equivaut, pour un litre d'eau, 0..::
MiHigr.
Chaux en CaO. . . . • . . . 5.••7
Carbonate de chaux en CaC03. . 10,3
Sulfate de· chaux en CaSO·. . . . n,o'
Magnesie en MgO. " . . . . " 3(6,
Carbonate. de magnesie en MgC03. 7.5
Sulfate de magnesie en MgSO·. • . 10,8
Nitrate de chaux (AZ03) 2Ca. . . 17,0
Au-dessus de 360 hydrotimetrique (total).l"usage de'l'eau

devie-nt difl!.ciIe pour les emplois domestiques.
C. - Analyse microbiologique.
EIle a pour ohjet la numeration et Ia s.peej,£i~ation des
germes microhiens. contenus: dans les eam\. C'est dle qui
fom"nit les renseignements les plus utiles. sur la valeur
:bygienique d'nne caD snpposee potable. alb moment §)U dIe
a eM recueiHie.
Mais, pour que les resultats ahte-Jilus soient comparable.s,
il est necessai:l'e d'employer des. m,ethodes toujours iden-
ANALYSE ET PURIFICA.TlON DES EAUxi POTABLES 219
tiques. Celles indiquees par l'instruction du service de sante

militaire du 13 janvier 1909 paraissent encore actuellement
les plus recommandables I
P"O\lf la numeration des microbes. elles prescrivent rem-
plqi d'un milieu simple, facile a preparer: la gelatine-pep-
tone Ii ['eau, sans bouillon, composee comme suit:
G~latine extr~ (I?oulel\c freres), 100 gr. en France
(180 gr. dans jes pays chauds)
Peptone sache (Poulenc fd)res). 20 gr.
N!\Cl. • . • . . . . . . . 5 gr.
Eau . • • . . • . • . • . 1.000 gr.
Neutraliser, puis alcgIiniser tres faiblement, repartir en

tubes par 10 centimetres cubes et steriliser.
On peut egalement employer un milieu a I'eau de levure
aUlolysee de P. Dienert el A. Guil/erd, qui fournit, pour les
numera.tiQns totales des gcrmes, des resultats equivalents
a ceux que donne la geilltine peptonee.
Un kilo de levure de distillerie pressee est mis a sec dans
un cristaUisoir et porte pendant 24 heures a l'etuve a 50°.
Apres ce &ejour, Ie bloc de levure s'est resolu en un liquide
epais que I'on reprenu par l'eau, environ trois litres ; on
fait bouillir une ] /2 heure, on neutralise jusqu'a alcalinite
legere. On colle la preparation avec un blanc d'reuf, comme
pour Ia preparation de Ia gelatine ou de la gelose, pour faci-
liter les filtrations ulterieures qui, sans cette precaution.
seraient longues et diffidles. Porter a l'autoclave If2 heure
a 105·, filtrer sur Chardin, filtrer une deuxieme fOls, Sf
cela est necessaire, sur filtre Laurent.
Les filtrations sont rllpides et Ie magma s'essore seul et
completement. On verine definitlvement Ia reaction du
milieu que ron aluste au pH = 7,5. On ~mpl.at~a Ii litt'es.
Les auteurs appellent ceUe concentration : dilution nor-
male.
A 10 grammes de peptone du milieu gelatine-pep tone-
sel, on substitue 100 centimetres cubes de dilution normale
d'eau de levure.
On ensemence trois tubes de cette gelatine fondue:l
30 degres avee respeetivement, I, a,et·3 gouttes de l'eau a
analyser (ou, s'il y a liett, avec 1,2,3 gouttes d'nne dilutiolll
de 1 centimetre cube de cette eau dans 9 centimetres
cubes d'eau sterile) et on coule dans des boites de'
Petri steriles, de 14 centimetres de diametre. Des que la

gelatine s'est solidifiee, - ce qu'on peut nater en pla~ant
les boltes sur une surface refroid~e, on les porte dans une
etuve reglee a 18- 20 0 e-t on les examine taus les jours a
partir du 2" jour et ce, pendant 15 jours, pour faire la
numeration apres ce del ai, ou des que Ie developpement des
colonies liquefiantes menace d'envahir une partie du milieu.
Le tableau ci-apres represente Ie coefficient par lequel
doit etre multiplie Ie nomhre des colonies constatees, si l'on
veut evaluer la teneur approximative de reau en microbes
apres 2, 3, 4, etc., jours jusqu'a 15jours :
Coefficient.
2 jours HI,6
3 8,82
4 5,61
5 3,86
6 3,05
7 2,40
II 1,82
9 1,52
10 1,33
11 1,19
12 1.10
13 1,06
14 104
15 1,00
Par exemple, si la numeration des colonies a (Ill etre in-

terrompue au 4e jour et si ron a compte a ce moment
2.000 colonies, Ie chiffre approximatif des colonies q\Ji se
seraient developpees dans les cultures est de: 2.000 X 5 61 =
11.220.
Les moisissures sont comptees a part.
La numeration des colonies se fait aisement au moyen
d'un numerateur a secteur, quadrille en centimetres carres,
place sur un fond noir et sur lequel on pose la plaque
a examiner.
On compte successivement les colonies visibles dans un
secteur qu'on delimite sur Ie verre avec un trait de plume,
puis celle d'un second secteur. et ainsi de suite jusqu'a
ce que toutes les colonies developpees sur la plaque
aient ete denombrees. On en fait Ie total et celui-ci corres-
pond au nombre de germes cultivables en gelatine qui se
trouvaient dans la quantite d'eau ensemencee. Par un cal-
cui tres simple, on evalue des lors Ie nombre de microbes
ANALYSE ET PURIFICATION DES EAUX R6TABLES 221
contenus dans un centimetre cube ou dans un litre de l'eau

etudiee.
La specifiwlion des germes ne peut se faire avec quelque
precision qu'apres l'isolement de ceux-ci sur les plaques' de
gelatine et leur reensemencement sur milieux appropries.
Toutefois, par l'examen microscopique direct de prepa-
rations non colon~es et colorees, on ·peut souvent determi-
ner les especes bien cQnnues par leurs caracteres morpho-
logiques (cocci, sarcines, spirillt~s, levures, moisissures,
etc.).
Oli devra mentionner ainsi, dans les rapports d'analfse,
certains microorganismes qui proviennent des matieres en
putrefaction: Bac. fluorescens liquefaciens, Bac. pyocyanique,
Proteus vulgaris, Bac. megalherium, Bac. prodigiosus et les
especes spirillaires qu'il y aura souvent intenH a isoler par
ensemencement dans l'eau gelatinee peptonee, salee (voir
vibrions choleriques, chap. XXXIV) pour les mieux etudier.
La determination du bacille typhique, du Bacterium coli
et des paratyphiques, des bacilles dysenteriques, etc., sera
faite d'apres les methodes indiquees, pour chacune de ces
especes, aux chapitres XXXII et XXXIII.
Pour la recherche du Bacterium coli, l'instruction du
servi~e de sante militaire prescrit ~e l'effectuer, non seule-
ment sur des quantites minimes d'eau (I a XXX gouttes),
mais encpre sur 2,5, 10,20,50, !QO, 150 cenpmctres cubes
et davantage. C'est pourquoi il est necessaire que les prises
d'echantillons portent sur deux flacons de 150 centimetres
cubes pour chaque eau a analyser.
On ensemence successivement d'abord I, II, V, XX, XXX
gouttes d'eau dans des tubes d'eau peptonee alp. 100,
salee a 0, 5 p. 100. On ensemence de meme 2 et 10 centime-
tres Cttbes dans des ballons contenant 50 et 100 centimetres
cubes d'eau peptonee.
Pour les volumes plus considerables, on repartit l'eau
(20, 50, 100, 150 centimetres cubes) dans des ballons ste-
riles et on la rend directement nutritive en l'additionnant
de proportions variables d'une solution concentree de
pepto-sel :
Peptone seche I'oulenc. 50 gr.
Nne!. • • ... 25 gr.
Eau dislillee. . . . . 100 gr.
222 MICROBES DE I.'HAU , DE L'AIR ET DU SOL
Cette solution doit avoir eM sterilisee d'avance en tubes

fractionnes contenant chacun 5 centimetres cubes. EIle est
trol1ble, mais il est inutile de la filtrer.
A Ia place d'eau peptonee, on pertt sO setvir d'eau de
lev-ure autolysee, scIon Ie procede de Dienert at Guillerd
precedemment indique.
On etnploie :
Eall d6 ll!l'lIre (dilution tlOrrtUtlll) •• 20 (ie.
Edu sterile.. • . • • • • . . 3() cc.
Eau d'ensemencement.. . . . . 50 ce.
L'eau de lavure, comme ort Ie voit, est employee au 1/5

pour Ie B. coli.
En cas d'autolyse defectueuse, qui proviaflt sul'tout de la
temperature inconstartte de l'etuve dans les laboratoires oft
la pression est variable, on. a toujours Ia latitude d 'augmen-
ter la quantite indiquee de le~ure.
Le melange d'eau it analyser at de milieu J.1utritif doit
etre tel que Ie tllUX; de peptone qu'il renferme soit ega.l it
1 p. 100. Par exemple. pour 20 centimetres cubes d'eab.,:il
faut ajouter 0 co. 4 de solution concentree ; pour 50 centi·
metres cubes, 1 centiqll!tre cube. Pout 100 centimetres
cubes, 2 centiItletres cubes, etc.
La proportion d'acide phenique qu'il convient d'incorpo-
rer Itu melange d' eau et de solution peptonee-est de 0 gr. 85
p. 1.000,
Pratiqueme'nt, on obtient un melange phenique cpnforme
en bissant tomber, it l'aide d'uue pipette jaugeant 30 goutUs
au centimetre cube, une goulle de solution pheniquee a
5 p. 100 poUr deux centimetres culJes du melange eau it ana-
lyser +Mu peptonce ; done, par exemple, 25 gouttes pour
50 centimetres cubes. On agite et on porte a l'etuve it
41°5.
II ne faut pas ajouter l'acide phcnique aux milieux de
culture avant de sMriliser ceux-ci, car Ia teneur en acide
varierait heaucoup par suite de l'evaporati6I1 it l'autoclave.
Les pretnieres culthres faites it 41 0 5 sont verifiees 14 it
16 heures apres. D'apres leurs rcsultats, on peut deja con-
clure, so it it l'absence du Bacterium coli dans l'ean experti-
see, soit a sa presence dans 1/20,1/10, 1/5 ou 1 centimetre
cube de l'eau, ou bien dans une quantite plus elevee.
(Pour les eaux tres souillees, ort opere aU prealable une
ANALYSE ET PURIFICATION DES EAU» P6TABLES 228
I
di'l.ution 'plus au mains forte de reau, afin de fixer lllur
teneur en B. 'Coli).
Des qu'un au 'plusieurs tubes on flacons renfermant Ie
melange phenique d'eau a llnalsser et de solution peptonee
s'est trouble, On proce!le it un secoml et~ au besoio, a un
troisieme passage en eau peptonee pheniquee it 41°5.
Quatre ou cinq heures apres, m~me 5i cetlc deuxieme ou
troi5ieme culture est encore limpide, on en fait un preleve-
ment avec l'extremite du fil de phttine et on identifie Ie
microbe en reensemengant :
en bouillon simple,
en bouillon lactose carbonate,
en bouillon au rouge neutre.
en lait tournesole,
La culture en bouillon simple, qui est' elle~m~me trouble
aU bout de 4 a 5 heures, sern reportee sur pomme de terre,
sur gelose et sur gelatine inclinee.
L'examen microscopique, la non-coloration parle Gram
et la recherche de l'indol completeront les moyens d'iden-
tification du B. coli.
On peut faire Ie diagnostic rapide de la Soumute des
eaux de boisson par Ie B. coli, en employant la technique
tres simple de A. ,Braun. Celle-ci utilise Ie milieu de cul-
ture de Savage que l'on prepare comme suit:
Dans un demi-litre d'eau, on fait cuire 125 grammes de
vi~nde de brnuf. Apres cuisson et tefroidissement, on fil-
tre pour separer les graisses et on ajoute :
.Peptone \Defresne). 10 gr.
Sel . • . . . • . . 10 gI'.
Glucose. • . . . . . 2 gr. 50
On ramene au volume de 500 centimetres cubes avec de

reau. On fait bouillir de nouveau. Oil decante apn3s refroi-
dissement, puis on ajoute 5 centimetres cubes de la solu-
tion suivante :
Rouge neutre. • . • . . . . . • •. 5 gr.
Euu. . • . • • . . • • . . . • • 100 cc.
On repartit par fractions de 6 centimetres cubes dans des

tubes it essai qu'on sterilise a l'autoclave a 115° pendant
30 minutes.
Le bouillon a une couleur rouge rubis. Le developpe-

ment du Bacterium coli lui donne une belle fluorescence
verte ou, s'il est tres abonda"nt, jaune canari avec reflets
fluorescents. sur fond sombre. Le bacille d'Eberth ne pro-
duit aucune modification de la couleur du milieu.
Deux tubes de 6 centimetres cubes de bouillon au rouge
neutre ainsi prepare sont ensemences respectivement avec
1 et 10 centimetres cubes de I eau a Mudier. On porte a
l'etuve 24 heures a 37 0 . Si l'eau ensemencee renferme du
B. coli, il se forme des buIles gazeuses a la partie superieure
du bouillon qui devient fluorescent ou jaune canari, sui-
vant l'abondance de ces germes.
Si la coloration n'a pas vire apres 48 heures d'etuve, on
peut affirmer que l'eau ne renferme pas de B. coli en
quantite appreciable.
Quelques autres microbes peuvent determiner la colora-
tion vert fluorescent, mais pas Ie jaune canari. Ce sont
d'ailleurs des microbes intestinaux : Bacillus mesenlericus,
B. ellieritidis Gaertner, Bacillus cloacre, certaines urobac-
teries; les bacilles du tetanos et de 1'redeme malin, en cul-
ture anaerobie, la determinent aussi.
Cette methode est sensible et tres pratique.
Anaerobies. - La determination de l'indis;.e unaerobique,
c'est-a·dire du rapport entre Ie chitTre des anaerobies vrais
et celui des aerobies, est utile a faire, surtout pour les
eaux de puits, de citernes, de reservoirs et de rivieres.
Le milieu nutritif ado pte pour la culture des anaerobies
est Ie suivant :
Gelatine. . 100 U 200 gr.
(suivant la temp. exterieure).
Glucose. · . .• 10 gr.
Nael. . 5 gr.
Glycerine. · . ., 5 gr.
Eau . . • • . . • 1.000 gr.
On neutralise en alcalinisant ires legeremeni et on steri-

lise en tubes droits qu'on fait fondre a 30 0 au moment d'en-
semencer et apres avoir aj()'ute a chacun d'eux quelques
gouttes de solution ste'rile de sulfo-indigotate de soude.
Chaque tube contenant 10 ou 20 centin:etres cubes de
milieu de culture rec;oit 0 cc. 1, 0 cc. Q, 0 cc. 5, 1 centime-
tre cube et 2 centimetres cubes de l'eau a analy.ser. On
ANALYSE ET PURIFICATION DES EAU~ POTABLES 225
incorpore l'eau au milieu de culture sans trop agiter, pour

eviter les huIles d'air, et on aspire Ie contenu de chaque
tube dans de longs tubes-pipettes (pipettes de Vignal) pre-
pares et flamhes it l'avance, d'un diametre interieur de 3 it
4 millimetres et d'une longueur de 0 m. 50 environ. Ces
tuhes-pipettes son t en suite scelles it leurs deux extremites et
portes sous un rohinet d' eau froide pour solidifier la gela-
tine. On les maintient ensuite dans une etuve reglee it 18-20°.
Apres 3 it 6 jours, on peut compter les colonies anaero-
hies, qui apparaissent sous forme de petites masses flocon-
neuses ou granuleuses, avec ou sans huIles de gaz, au
milieu de la gelatine decoloree.
Les anaerohies facultatifs donnent des colonies ramas-
sees, denses, opaques, qui n'offrent pas l'aspect caracte-
ristique des anaerohies vrais. 11s ne doivent pas etre com-
pris dans Ia numeration.
..
D. - Interpretation des resultats d'analyse.
L'analyse chimique fournit d'utiles indications sur la pre-
sence et la proportion de certains elements qui peuvent
resulter de souillures permanentes ou accidentel1es, ou qui
dependent de la provenance geologique de l'eau it exami-
ner ; mais l'analyse hacteriologique est indispensable pour
permettre de conclure si une eau est, au peint de vue
sanitaire, bonne, mauvaise ou suspecte.
La numeration des germes conteftus dans cette eau
fournit surtout d'utiles renseignements pour la surveillance
des appareils de filtration et pour savoir si une eau est plus
ou moins parfaitement epuree dans son parcours souter-'
rain. Mais certaines eaux de fleuves ou de rivieres peuvent
vehiculer un grand nomhre de germes inoffensifs provenant
des couches superficielles du sol, tandis que d'autres,
surtout celles de puits ou de sources, se montrent parfois
tres pquvres en germes saprophytes etabritent cependantcer-
taines especes microhiennes particulierement dangereuses.
La specification des especes est done' de louie premiere
importance. Les souillures provenant de fumiers, d'infil-
trations de fosses d'aisances, etc" sont revelees par
MICROBIOLOGIE 15
~~ MIellOiiss DE L'EAU, DB VAIR ET DU SOL
t'&bond~nce des mitcrobes de ta pntrefactl'On, bacilles iique-
till.ots, B. mega!hel'ium, Pf-Ofeas, ·etc., et par la ,proportion
~ &reterltll1'1.>coii.
Lllrsqu\me ean renfurme 100, MO, 1.000 B. roli 'Par
litre 'el, l! fortiori. un cbiffre .ptus eleve encore, on doit
ge~\"Ia.~ruent in conside1'er comme.tre:s suspecle et dange-
re\1l'ire iJ'OUl' l'.a1imcntation.
Le ta'U.x de 1.6 a roo BaoJerium coli par litre indiqne que
l~n:\l est en pe'ri'Ode d'infe-ction iegere, peut--'Ctre au debut
0'0. '~n d~lin d'nne oO'ntaminati'On plus .grave. Etro d.'Oit etr<!
consid\!ree comme sQspeci-e.
La presence de quelques B. coli par litre ne suffira
j1l.~i'S a mire classer une eau comme a.angereuse, car
<ils tp'eQ'Ve'nt !p'l'Ovcnir de contaminati<ms accideatelles, pal'
~ excrements d'oiseaux, par exemple. Mais Sl ces
ge1'mes sont accompagnes de nombreux micl'()bes de 'Ia
putrefaction,la suspicion est alo1's fondee et l'eau doit etre
etroitement surveillee.
Du reste, pour 'juger de la valeur alimentaire d'une eau,
il est t(1u~urs indispensable de 'faire port-er les analyses
sur des echantillons preleves a des intervalles variables, en
-di"gerses saisons -et en periodes de secheresse ou de pJ..uies
\}....oiongees.
Us di'Vel's<cs ·echeUes qui ont ete proposees pour ·etablir fa
. pm-et:e chim.ique 'et bacteriologique d'une eau pOlable a'ont
'd.>Ohe, d'apl'l~s ce qui vient d'etre'lilt, qu'une valeur toute
l't!ltJ.ii~e. V'Oici neanmoins eelle qu'on peut cOflsiderer
comme la meilleure.
'Ecltelle d'appr-eciation de la pUTere chimique
~t miaobiolQ,gi.que <i'une ~au poiabte.
Non{bTe Nombre Chlorures

de germes Degr'; Nitrates
de hydroti- en NaCI.
'Cultivables en h. coli mgr. mgr.
gelatin" metrique par
en 15 jours 'Imr total par
11 t r e
htr.!! lit ,."
. ---
(paT litre)
-
~ '~f'es Jpul'e. tl a 1(')1l {) 5 a 1'50 max. 27 mgr. 0
~po1trble.. 1{)() it 1.000 1 ~ M, 15 it .30 0 rna". 66 mgr 0(} it 15-
&.u ·....pect~ . . 1.eOO il 10000,10 a 50/+ de 80· 85a 165 mgr. 15 a 30
Ellll11l'alt'l1alSe. + ae lo.oool~de 50: + aetOO· +de'l1l5blgr. + ae-3U
E. - Agents chimiques recommandables pour la

purification extempo.ranee des eaux potables.
a) Nitrate d'ar_gent et Fluorur{;l d'argent (ou

Tachiol). - () gr. 1 de run Q.e ces deux sels suffit pour
detruire en une demi-heure la plupart des microbes conte-
nus dans 5 'litres d'eau de riviere ou d'etang. Le vibrion
\cholerique .est tue en 5 minutes, Ie Bacterium coli et Ie sta-
phylgcoque .d.ore en 30 minutes ; les chlorures et les
matieres organiques en exce~ dans reau a steriliseI' retar-
nent l'effet du seI d'argent, mais on peut corriger ce retard
en ajoutant prealablement a l'eau quelques gouttes d'ammo-
niaque (2 a 5 gouttes pour 5 litres) qui dissout Ie precipite
forme par les sels .d'.argent.
b~ lode. - Ajouter, par litre .a'eau, 8 a 16 gouttes de tein-

ture d'iode du Codex. Agiter. Laisser en contact 30 minutes.
Neutraliser l'iode restant par infusion de the, de cafe ou par
addition de vin, ou par l'hyposulfite de soude. (Ii se f9rme
dans ce dernier cas une petite quantite de tetrathionate de
soude, sel inoffensif.)
c) Chlore. Chlorure de chaux. - Normalement, Ie

chlorure de chaux du ,commerce doit avoir une teneur en
chlore actif de 100 litres ou 321 gr. 5 (Ie poids d'un litre de
.chlore est de 3 gr. 125) par kilogramme. 10 grammes de
chiol'ure du commerce suffisent donc pour degager 1 litre
de chlore.
Pour steriliser l'eau potable, il faut, suivant la teneur de
celle-ci en matieres organiques, de 0 mgr. 3 a I milIi-
gramme de chlore actif par litre, c'est-a-dire 0 gr. 3 a
1 gramme par metre cube avec trois heures de contact;
ou bien 4 a 8 milligrammes par litre avec 15 minutes de
contact. On peut detruire l'exces de chI ore par addition
d'une petite quantite de bisulfite de soude ..
Pratiquement, on emploiera 1 a 3 gJ,'ammes de ,chlorure
de chaux du commerce "Par metre cube, avec un conlact d'au-
mains 15 minutes. En voyage, on peut commodement
employer nne soLution de chlorure de chaux it 1 p. 100.
dont 10 centimetres cubes suffisent pour steriliser en

10 minutes 10 litres d'eau.
d) Bau de Javel (hypochlorite de soude). - Si l'eau
de Javel contient 100 grammes de chlore actif par litre, on
en emploiera au plus 10 centimetres cubes par metre cube
ou 0 cc. 01 par litre (1 milligramme de chlore actif). soit
10 litres d'eau de Javel par 1.000 metres cubes d'eau
(1 kilogramme de cblore actif).
Le produit ordinaire du commerce ne renferme habi-
tuellement guere plus de 60 grammes de chlore actif par
litre, quelquefois beaucoup moins. 11 faut alors compter, en
moyenne, sur une depense de 18 litres d'eau de Javel
(1 k. 800 de chlore actif) par 1.000 ·metres cubes et, pour
'assurer une sterilisation efficace dans les grands reservoirs
d'eau d'alimentation, un contact de 1 a 2 heures (0 cc. 018
pour 1 litre, ou pratiquement 2 centimetres cubes d'une
dilution d'eau de Javel a f p. 100 p6ur 1 litre d'eau a st~ri
liser) .
e) Chlore liquide comprime, Tres employe en
Amerique depuis quelques annees. On assure son conta~t
suffisamment prolonge avec l'eau dans une sorle de colonne
de Gay-Lussac contenant du coke. La. dose moyenn~ neces-
saire pour reduire de 98 p. 100 Ie nombre des microbes de
l'eau de riviere est de 0 gr. 2 de chlore parlmetre cube, soit
orriiUigr. 2 par litre.
f) Reactif decelant 4!> presen.ce de traces de chlore
libre dans les-eaux po'i<,.bles sterilisees par les com-
poses chlores.
Solution d'amidon it 1 p. 100.
Solution d'iodure de potassium it 10 p. 100.
Quelques gouttes de ce reactif ajoutees £1 l'eau slerilisee

dans un verre a experiences developpent une coloration
bleue lorsqu' eUe renferme des traces de chiore Iibre.
". .
F. - Desinfection de reau des puits.
Apres avoir etabli Ie volume d'eau contenu dans Ie plli ls,
on y \rersera environ 10 litres d'eau dans laquelle on aura

delaye Ie melange suivant (dose par metre cube) :
Permanganate de chaux.. . • . o gr. 5 it 1 gr.
on, a derant: permanganate de potasse. 5 gr.
Sulfate d'alumine. . • • • • . 50 gr.
Kaolin lave. . . • • • • • • 14,5 gr.
Ne pas pomper d'eau pendant 4 jours, puis pomper jus-

qu'a ce que l'eau d~vienne incolore.
Ou bien:
Enu de Javel. . • . • • . • 50 gr. par mHre cube.
On peut encore, plus simplement, eteindre 10 kilogrammes

de chaux vive dans 40 litres d' eau et projeter ce' melange
dans Ie puits, en agitant avec une longue perche. On attend
3 jours et on pompe jusqu'a ce que l'eau sorte claire, La
chaux restant dans Ie puits est inoffensive. II faut pomper
rieanmoins jusqu'u ce que toute saveur styptique ait dis-
paru.
Nota.: La desinfection des puits ne peut etre efficace que
si ces,puits ont ete prealablement cures et debarrasses de
boues. Sans cette precaution, elle serait illus.oire.
CHAPITRE XVIJI
ANALYSE MICROBIOLOGIQUE DE L'AIR ET D'U SOL,

,
A. - Analyse. ~icropiol~gi!lue de-l'air.
Les deux procedes de choix pour I'analyse bacleriolo-

gique de l'air sont la methode de Miquel hasee sur l'emploi
des hourres solubles, et la methode de Laveran bas{!e sur
l'emploi du harhotage.
Methode des bourrt!s solubles de Miquel.
Miguel utilise comrne bonrre Ie sulfate de soude desse-
che. Ce sel est chauffe it 200 0 • II se dissout d'abord dans son
eau de condensation, puis se solidifie a noU'veau et se
desseche. Le sulfate desseche est pulverise grossierement
au mortier et tamise.
On etrangle.un tube de verre ouvert aux deux extremi-
tes ; on tasse sur l'etranglement un tampon de coton et on
verse au-dessus 1 ou 2 grammes de sulfate prepare comme
ii vient d'etre dit. Boucher aux deux bouts av~c du coton et
steriliser a sec.
Pour se servir de l'appatt!il ainsi prepare, on place Ie
tube verticalement, en ayant soin que Ie sable soit en haut.
On dehouche l'extremite inferieure et on la relie a un aspi-
rateur. On ate Ie bouchon de coton qui obture l'extremite
superieure et on met en marche l'aspirateur. On fait passer
un certain nombre de Jitres d'air, 10 litres habituel1ement.
Lorsque l'operation est terminee, on verse la bourre so-
luble dans 10 centimetres cubes d'eau sterile et on fait des
plaques de gelatine ou de gelose.
Cette methode est la seule pratique lorsque l'analyse

bacteriologique ne peut pas etre faite sur place.
Methode de Laveran basee sur l'emploi du barbotage.
L'appareil de Laveran est forme de deux tubes a essai de
;-
ANALYSE M.ICR:OBlOLOGIQUE. DE L'AtH ET F>TJ SOL 23\
grande dimension, verticaux, reunis au niveau de leur tiers

superieur par une hranche horizontale. Us sEmt obtures par
un bouchon de caoutchouc portant une pipette qui plonge
au fond. L 'un des tubeS' pOYte un trait de jauge a'10 centi-
metres cubes. On y verse 10 centimetres cubes dleau. Dans
l'autre tube, la pipette est graduee en dixiemes de centi-
metres. oubes. On garnit d'ouat~ les. extremi.h~s &Uil~.e\lies
des pipettes e\ on sterilise l'appareil a l'auto.cl~ve.
Pour s'en servir, on debouche la pipette. gfadu~e. et on la
relie a un aspirateur. On enleve'le coton <\e }"autre pipette
et on fait fonctionner I'aspirateur. L'air pa&.s.e ~\' 4l.pipette
non graduee, barbote-,dans l'eau et s'eehappe par l~ pipette
graduee. Quand 10 litres d'air ant traverse l'l;lp.p,areil,_ on
arrete l'aspirateur, on rinee avec l'eau la p.ipette par laquclle
rail' est arrive et Ie tube correspondant, puis par la branehe
horizontale on la fait passer dans Ie tube qui contient 11,1,
pipette graduee. Avec cotte derniere, on aspire I'eau et en
In. repartit dans les milieux de culture.
Le nombre de gerI\les eS,t rapporte aU metre cube. Con~
naissantle volume d'air qui a passe dans l'appareU, la quan-
tite d'eau ensemencee et Ie nombre de colonies obtenues
sur les plaques, il est facile d'en deduire 1~ nombre de gor-
mes par metre cube d' air.
B. - Analyse bacteriologiq\le du sol.
Pour les prelevements faits a la surface du sol, recpeillir

I'echantillon de terre avec une cuiller au une spatule stc-
riles.
Pour les prelevements a faire en profon4eur, se servir
d'une sonde a cuiller pourvue d'une fermeture a,utoq1a-
tique, telle que la sonde de Fraenkel.
Quand l'echantillon de terre aura etc recueilli, Ie broyer
finement dans un mortier sterile et Ie diluer dans une
grande quantite d'eau sterile. Agiler fortement et, avec cette
emulsion, ensemencer des plaques de gelatine <lou de
gelose.
Connaissant.Ie poid~ de terre .dilu¢e dans un volume
d'eau determine, la numeration se fait pOIIlme PQur une
analyse d'eau.
C. - Milieux de culture pourles ferments du sol.
FERMENTS NITREUX, NITRIQUES, DEN.ITRIFICATEURS

ET FIXATEURS DE L'AZOTE ATMOSPHERIQUE
a) Milieux d' Omefiansky pour fa culture des ferments nilreux

Eau distillee. . . . 1.000 ce.
Sulfate d'ammoniaque. 2 gr.
Chlorure de sodium .. 2 gr.
Phosphate de polasse. 1 gr.
Sulfate de magnesie. . o gr. 50
Sulfate ferreux.. . . O.gr. 40
On met 50 centimetres cubes de ce liquide dans un vase

d'Erlenmeyer de 250 centimetres cubes, ii. moitie rempli de
scories concassees (Boullanger el L. M(1sso1). On ajoute
ogr. 5 de carbonate de magnesie sOU's forme d'rm lait sterilb
et on ensemence avec un peu de delayure de terre de jardin.
On fait des passages successifs tres nombreux et on elimine
~insi les microbes etrangers. On isole finarement sur pla-
ques de silice gelatineuse.
Pour preparer celle-ci, ajouter lentement a 125 centi-
metres cubes d'acide chlorhydrique a 130 Baume, un volume
egal d'une solution ii. 80 Baume de silicate de potasse bien
pur. Verser Ie melange sur un dialyseur en parchemin •
animal, bien debarrasse de chaux par lavqges.ii. l'acide
chlorhydrique etendu, puis ii. l'eau distillee. La aialyse doit
se ·faire dans un courant tres lent d'eau distillee, jusqu'a
ce que Ie liquide ne donne plus qu'une reaction imper-
ceptible a l'azotate d'argent.
Apres 48 heures de dialys~, on preleve toutes les 3 ou 4
heures un petit echantillon qu'on chauffe a 120· jusqu'a ce
qu'on n'observe plus de coagulation. On arrete alors la dia-
lyse, on sterilise a 1200 , on repartit en tubes steriles, par
fractions de 10 centimetres cubes, et on ajoute a chaque
tube:
Sulfate d'ammoniaque a 4 p. 100. • o ee. 5
puis, 0 cc. 5 de :
r Chlorure de sodium. . . 4 gr.
Sol. de ) Phosphate de potassium. 2 gr.
I Sulfate de magnesie.. . 1 gr.
( Enu distillce. . . . • 100 ee.
ANALYSE MICROBIOLOGIQUE DE L'AIR ET DU SOL 233
puis encore :
o cc. 5 d'une solution de sulfate Cerreux ii 0,8 p. 100
et enfin :
Lait de carbonate de mag[lesie ii 10 p. 100, 1 cc. (tres Ieger et bien
tarnise).
On coule en 'boites de Petri apris auoir ensemence

chaque tuhe avec une gouttelette de ferment nitreux puri-
fie comme il a et6dit ci-dessus. La silicefaitprise enquinze
a quarante;cinq minutes. On maintient les boites dans' une
cloche humide pour eviter la dessiccation de la silice, a la
temperature de 30 0 , et on voit apparaitre, au bout de 8 a
10 jours, des petites colonies refringentes qu'on prelcve
avec un fil de verre 'Sterile pour les ensemencer dans Ie
milieu d'Omeliansky. Le bouillon de viande ensemence
avec ces colonies doit rester sterile: les ferments nitreux
ne s'y deyeloppent pas.
Dans Ie milieu d'OmeIiansky, les cultures pures donnent
In reaction des nit'rites (Tromsdor/f. voir chap. XVII, 30)
du 3e au 5e jour.
b) Milieu d~ Winogradsky pour la culture du ferment

nitrique. (Nitrobacterie.) Isoler d'ahord par Ie milieu d'Ome-
liansky ci-dessus, en rempla<,;ant Ie sulfate d'ammoniaque
par du nitrite de soude, tous les autres sels restant les
memes; puis par Ia silice g6latineuse, dans laquelle on
remplace egalement la solution a 4 p. 100 de sulfate d'am-
moniaque par une solution a 4 p. 100 de nitrite de soude.
Les colonies sont ensuite ensemencees dans I'un des
milieux suivants :
~
Nitrite de potasse. . . • 1 gr.
Sulfate de magnesie. • • o gr. 3
Milieu
Phosphate de potasse. . . o gr. [I
Carbonate de soude calcine. 1 gr.
]iquide. Chlorure de sodium. o 'gr. 5
( Sulfate de fer.. . . o gr. 4
Eau qistil!ee. . • • 1.000 cc.
~
Nitrite de soude. . . 2 gr.
Carbonate de soude .. 1 gr.
Milietf Sulfate de magnesia • traces
solide. Phosphate de potasse. traces
Gelose. . . . . • 15 gr.
Eou·du robinet. • • 1.000 ce.
'
~4 MI'CROBES.DE L'EAU, »E L'Am EX DU SQL
Ensemencer d'ahord des scories sterilisees (en.vase d'Er-

lenmeYeI:') ct mouillees de liquide d'OmeIiansky avec un
peu d'eau de delayure de terre ou, mieux, avec Ie produitde
lavage d'un fragment de scorie de Ia surface d'un lit b.acterieu..
On opere ensuite, comme pour les ferments nitreux, l'isole-
ment sur plaques de silice gelatine use.
Les colonies ne se developpent qu'apres '2 semaines,
sous. forme de peti tSo corps ronds ou ovales, hriUants, hlju-
n~ltres it l'air. On peut augmenter lev.( grosseur en depo-
sant.dans leur voisinOlge, une.goutte de solution a.2p.l00 de
llitrite de soude. Les repiquer et les :reenseme.lJcer en
tubes ou en mat:ras en milieu liquide ou soli de.
c) Milieux de culture pour les ferments denitriticateurs.
Enu. . . . . . . 1.000 ee.
Nitrate de potasse. • 10 gr.
Aoide eitrique.. . . 7 gr.
Asparagine.. • . . ~ gr.
Liquide Phosphate de potasse. 5 gr.
de Sulfate de magnesie. 5 gr.
Gayon, Cblorure de calcium. 0 gr, Ii
Sulfate d'alurnine. • 0 gr. 02
Silicate de soude.. . 0 gr. 02
Sulfate de fer.. . . . . • 0 gr. 05
Arnmoniaque q. s. pour faihle reaction alcaline.
,
Repartir en couche epaisse dans des tubes ou des matras
et recouvrir Ie liquide d'une mince couche ~'huile dc vase-
line., Ensemencer avec un peu de fumier, de c~eval et por-
ter a 35°. La culture se den once par un degagement gazeux
abondant. Or fait une serie de passages dans ce milieu
liquide et on isole en suite sur Ie meme milieu, gelose it
15 p. tOO, en anaerobiose.
d) Milieux de culture pour les microbes fixateurs de I'azote
atmospherique.
Milieu ~ Ean. • . • . • . . • . 1.000 cc.
de Bredemann Asparagine.. . . . . . . 10 gr.
pour Clostridium Sacchar!>se.. . . . . . • 20 gr.
et Amylobactcr. Gluc,?se.. . • . . . • . 16 gr.
Filtrer apres dissolution et ajouter :

Phosphate d~ potaase. . 1 gr.
Chlorure $Ie cllicium. . o gr. 1
Sulfate de magnesium •• o gr. 3
Chlorure de sodium. . o gr. 1
Perchlorute c;1e fer. . . o gr. 01
/'
ANALYSE MICROBIOLOGIQUE DE £lAIR ET DU SOL 235
Neutraliser par carbonate de soude.
Milieu ~ Eau distillee. . . • . • 100 cc.

de Beyerinck Mannite........ 2 gr.
pour Phosphate monopotassique. o gr. 02
Azotobacter Gelose........ 1 gr. 5
Ensemencer avec terre de jardin.

Milieu de Zikes ( Phosphate tripotassique. • . o gr. 25
pour les algues , Sulfate de magnesie. . . • o gr. 37
fixatrices , Chlorure de sodium. . • . o gr. 20
de l'azote, type I Traces de sulfate de calcium et
Chlorella vulgaris \ de phosphate de fer. . . . o gr. 20
Impregner de milieu liquide du sable siliceux reparti en

couche mince dans des vases d'Erlenmeyer. Suivant les
conditions de l'experience, ajouter un peu de sucre avec
ou sans nitrates.
e) Milieux pour la culture des microbes des nodosites des
Legumineuses.
Milieu de Beyerillck (modifie par Maze).
Infusion de haricots blancs (sans nller jusqu's In
cuisson complete). .' . . • 100 gr. p. 1.000 cc.
Filtrer, ajouter :
Chlornre de sodium. 10 gr.
Bicarbonate de soude. traces
Saccharose. . . • . 20 gr.
Gelose. • • . . . . 15 gr.
Repartir en couche mince dans des vases d'Erlenmeyer.

Ensemencer Ie contenu d'une nodosite. On obtient de
petites colonies ressemblant a une goutte de stearine.
QUATRIEME PARTIE
REACTIONS HUMORA.LES
ET HEMATIMETRIE
CHAPITRE XIX
TECHNIQUE POUR LA PREPARATION ET LE TITRAGE

DES SERUMS AGGLUTINANTS, BACTERIOLYTIQUES,
PRECIPITANTS ET HEMOLYTIQUES
A. - Serum agglutinant et. bacteriolytique pour Ie

bacille typhique.
(Pour Ie titrage des serums agglutinant Ie bacille typhique,
voir chap. XXXII e~ XLIV.)
10 Preparation au moyen des cultures (uees par 1 heure de

chauflage a 59 0 •
On peut vacciner une chevre par deux injections intravei-
neuses chacune de 1 culture en tube incline, sur gelose, .de
24: heures, raelee et emulsionnee dans l'eau physiologique
(environ 5 centimetres cubes), puischauffeeentubesscelles,
1 heure it 58 0 au bain-marie. Les deux injections sont faites
a dix jours d'intervalle.
Pour Ie lapin, injecter par voie intraveineuse, d'abord
environ un cinquantieme de culture chauffee a 58°, puis 8
a 10 jours apres, un vingtieme et, 8 ou 10 jours plus
tard, un dixieme. Saignee 8 jours apres la derniere injec-
tion.
On peut aussi preparer les lapins .par injections sous-
cutanees suivies d injections intraperitoneales: 2 injections
sous-cutanees de 1/2 culture d':ibord. puis d'une culture
sur gelose, raelee, emulsionnee dans reau physiol,ogique
238 REACTIONS HUMORALES ET HEMATIMETRIE
et chauffee 1 heure a 58', en fin deux injections intraperito-

neales de 1 et 2 cultures sur gelose, respectivement it
10 jours d'intervalle.
Pour les cobayes, injecter 4 fois a 12 jours d'intervalle:
1/4 et 1/2 culture par voie sous-cutanee, 1/4 et 1/2 culture
par voie intraperi!f:one'aie.
2 0 Au moyen des cultures vivantes.
On vaccine ies cohayes en leur injectant dans Ie peri-
toine, d'abord 0 cc. 1 d'une emulsion faite avec une culture
sur gelose de 24 ~euTes dans 1'{} centimetres cubes d'eau
salee physiologique; puis, 8 jours apres, et de 8 jours en
8 jours, successivement 0 cc. 2 et 0 cc. 5 d'une emulsion
semblable.
B. - Serum antiparatyph.ique B.
Inoculer Ie lapin par voie intraveineuse avec 0 cc. 1 d'une
cul:iuTe sor gelose de 20 it 24 heures, raclee et ennrlsionnee
dans 10 centimetres cubes d'eau saMe physiologique, puis
cllituffee 1 heure a 56·.
5 a 7 jours apres, on inocu1e de nouveau, par la meme
voie intraveineuse, 0 cc. 2 et 5 a 7 jours apn3s, 0 cc. 5
d'emulsion chauffee. I
Pour obtenir un serum agglutinant et bacteriolytique, il
faut injecter au lapin, apres les cultures tuees par la cha-
leur. ulle ou deux fois, par voie peritoneale, des cultures
vlvantes (1/2 centimetre cube d'une culture emulsion-
nee dans 10 centimetres cubes d'H 20 physiologique), a
8 jours d'intervalle. On attend dix jours et on saigne rani ..
mal. .
For-net, Muller et TSU=llki ont obtenu un serum aggluti-
nant Ie para B au 30.GOGe en soumeUant un lapin a 3 series
d'injections intraveineuses de cultures vivantes, reparties
comme suit:
-Premiere serie :
2 jain. . . 1(1:0 culture lIur gelose
3 juin. • . 1/.10)) »
4 juin. . . 1/5 » »
ar.e saignee Ie 13 juin. Le serlUll.agglutine il. 1 p. 100.
PREpARATION ET TITRAGE DES S1!:npMS 239
Dearieme serle:
23 juin. . • 1/5 culture sur gelose
24 juin. . • 1'2 » »
25 jnin. ~ . 2/3 » »
'2csaigneele 4 juillet. Le serum agglutine alp. 20.MO.

'liroisieme serie :
13 jui1let. . 2,3 culture sur gelose
14 juillet . . 1 ~ »
15 juillet . . 2 » »
3e .saignee Ie 24 juillet. Le serum agglutine alp. 30.000.
C. - Serum antiparatyphique A.
Meme methode que pour Ie Paratyphique B, malS oen
employant d'emblee les cultures vivantes.
D. - Serum agglutinant les bacilles dysenteriques.
Lapins: Injection intraveineuse, it 5 ou 6 jours d'inter-

valle, de cultures vivantes, soit du bacille Shiga, seit.Qu
bacll1e Flexller, pour obtenir un serum specifique<lnti-S.higa
ou anti-Flexne!".
Repeter les injections au moills 6 fois. Dose initiale:
o cc. 01 d'une emulsion d'une culture sur gelose de
24 heures d.ans 10 ceRtimetres cubes d'eau salce physiolo-
gique. Doses ulterieures: 0 cc. 02. 0 ce. 05, 0 ee. 1 et
o ce. 2. Saigner 10 jours apres la derniere injection.
E:-Serum agg1utinantet "acMrioly-tique aI1'ti..cholet<a.
f.npins: I'l1jecter une premiere fois dans res vellreS
-0 'Ce.:01 d'une emulsioll de culture sur gelose t1gee de
'2i4 heures (lans 10 centimetpe~ cubes d'eau physiologiquel
'Chauffee 1 heure it 56°.
Renouveler l'injection tous les 7 jours avec, successive-
ment : 0 cc. 02, 0 cc. 1 puis, dans Ie peritoine, 1/2 et 1 yen-
timetre cube.
Saigner 7 a. 10 jours apres la derniere injection.
D'apres Fornet et Miiller, on peut obtenir en 13 jours un
serum anti-cholera agglutinant au 10.000e en inoculant, par
voie intraveineuse au lapin, Ie 1 er jour, '1:/3 de cultlJre sur
gelose, Ie 2e jour, 1 culture, et Ie 3e jour, 1 culture et demie.
On saigne l'animal Ie 10 e jour apres la de~niere injection .
. ....
F. - Serums precipitants.
On injecte par voie veineuse ou intraperitoneale, par
kilogramme d'animal, environ 1 centimetre cube au liquide
antigene. On renouvelle l'injection to us les 5 a. 6 jours.
Apres 3 ou 4 injections, on a~tend 8 jours et on saigne.
Fornel et Miiller ont indique une methode encore plus
rapide. Elle consiste a. injecter, par voie peritoneale, 5 cen-
timetres cubes du serum ou de la solution albumineuse anti-
gene, puis, Ie jour suivant, 10 centimetres cubes, et Ie jour
suivant encore 15 centimetres cubes. On attend 12 jours et
on saigne.
Mesure du pouDoir precipitant. - La mesure du pouvoir
precipitant d'un serum anti s'effectue, soit vis-a.-vis d'une
dilution de microbes (de titre connu et legerement opales-
cente), soit vis-a.-vis d'une dilution d'antigene albumineux
quelconque. de la maniere suivante:
On repartit dans une serie de tubes a. essai steriles, de
preference dans des tubes de petit diametre a. fond rond
(0 cent. 5 X 10 cent.), 10 meme quantite (1 centimetre cube)
d'emulsion microbienne ou albUJ;nineuse bien homogene.
A chacun de ces tubes, - sauf dans Ie premier qui sert
de temoin, - on ajoute une quantite variable et pro-
gressivement croissante, par exemple 0 cc. 1, 0 cc. 2,
occ. 3 ... 1 cc. du serum actif pur ou du meme serum prea-
lablementdilue a. 1/10, ou a. 1/100 (s'il est tres ~ctif), dans
l'eau salee physiologique. On porte les tubes a. l'etuve a.. 37 0
et on les observe aprcs 2 heures, 6 heures, 12 heures et
24 heures. On note chaque fois les tubes dans lesquels la
clarification du Ii quide est complete.
PREPARATION ET TITRAGE DES SERUMS 241
G. - Propriete$ bactericides et bacteriolytiques de~

serums. Leur determination et leur mesure.
Les proprietes bactericides et bucteriolytiques d'un
serum d'animal vaccine, ou naturellement immun, sont
dues a la presence, dans ce serum, d'une sensibilisatrice
specifique dont l'action vient s'ajouter a celle de I'alexine
normale.
Lorsqu'on se propose de rechercher ou de mesurer Ie
pouvoir bactericide ou Ie pouvoir bacteriolytique d'un
serum, on doit se servir de ce serum prealablemenl ,:hauffe
30 minutes a 560 en tube scelle. On Ie diJue generalemcllt
au dixieme dans l'eau salee p~ysiologique. Supposons qu'il
s'agisse de mesurer Ie pouvoir bactericide in vitro d'qo
serum de convalescent typhique, par exemple, vis-it-vis dl.l
hacille typhique.
On doit disposer d'une culture de ce bacille, sur gelose
inclinee, et agee de 24 heures. On introduit un centimetre
cube d'eau salee pbysiologique dans Ie tube qui renferme
cette culture dans laquelle Ie poids des bacilles (essorl3sj
correspond a environ 0 gr. 10 et on delaye celle-ci avec
soin au moyen d'un fil de platinc. On transvase ensuitc,
uu moyen d'une pipette sterile, ce centimetre cube
d'emulsion a 1/10 dans un autre tube a essai contenaot
9 centimetres cubes d'eau salce physiologique sterile. Ou
agite avec soin et on transvase, avec une autre pipette ste-
rile, 1 centimetre cube de cette premiere dilution dans un
second tube contenant cgalemen t 9 centimetres cubes d:eo\l
salee physiologique sterile. On agite de nouveau, et c'est Sur
cette-dilution au milliemc de la culture sur gelose que pon-
tera I'experience.
Celle-ci doit etre conduitc de la maniere suivante :
Dans une serie de tubes it essai steriles, bouches a l'ouate
et con tenant chacun 1 centimetre cube d'eau salce physioll)-
gique sterile, 00 verse une meme dose de dilution de cuI,..
ture, par exemple un dixieme de centimetre cube, ou 2 Bout-
tes de Ia dilution au millieme, preparee comme il a etc diJ
ci-dessus. On introduit ensuite, dans chacun de ces tubes
une meme quantite de serum frais de cobaye (alexine):
generalement un dixieme de centimetre cllbe au 2 goultes, pui<s
MICROBIOLOGIll 16
242 REACT IONS HUMORALES ET HEMAT IMETRI E
(sauf dans Ie premier tube qui sert de temoin) une quantite

progressivement"croissante de la dilution au, dixieme du
serum a etudier, par exemple 0 cc. 1, 0 cc. 2, 0 cc. 5, 0 cc. 8 et
1 centimetre cube. On complete partout avec de reau phy-
6iologique pour que Ie volume 'soit de 2 centImetres cubes
ou 2 cc. 5 dans tous les tubes; on agite legerement et on
porte a l'etuve a 37°, ou mieux dans un bain-marie a tempe-
rature con stante, egalement a 37°.
Apres des temps variables, 1 heure,2 heures ou plus,
generalement 3 heures (avec Ie bacille typhique 5 heures),
on fait un prelevement a la pipette dans chaque tube, et on
laisse tomber une goutte de chaque echantillon au centre
d'une boite de Roux d'un tube plat de Legroux contenant de
Ia gelose nutritive solide. Cette goutte est immediatement
etalee sur toute la surface de la gelose, au moyen d'un
petit cat:re de papier glace sterile tenu entre les mol'S
d'une pince flambee. (On doit avoir plusieurs de ces petits
carres de papier, prepares d'avance, dans un flacon a large
ouverture, bonche a 1'0uate ct sterilise it l'autoclave.)
Les boites de Roux, de Petri ou les tubes de Legroux, ainsi
ensemences chacun avec nne goutte de dilution de culture
ayant subi, pendant des temps variables. Ie contact du
serum, sont laisses a l'etuve a 37 0 pendant 24 ou 48 heures,
apres quoi on les examine et on compte les colonies de
bacilIe typhique qui se sont developpees sur chaqne tube
ou boite. 11 ne reste plus qu'a etablir la proportion du nom-
bre de ces colonies par rapport au volume de dilution
microbienne ensemence et au temps de contact de cette
dilution avec Ie serum.
Le pouvoir baclerio/yliqllc pent, dans certains cas, etre
. observe directement so us Ie microscope. On fait alors deux
preparations: rune avec du serum normal; l'aut're avec
Ie serum frais non chauffe ou avec du serum chauffe active
par addition d'alexine fralche de cobaye. Au centre de deux
lames. on depose une gouttelette de dilution de culture et, a
cote de celIe-ci, une gouttelette de serum actif. On recou-
'vre d'une lamelIe ; les deux gouttelettes se melangent. On
porte les lames a l'etuve pendant 5 ou 10 minutes et on les
.examine comparativement l'une apres l'autre.
A vec Ie bacille typhique, et aussi avec plusieurs autres
microbes pathogenes, la determination et la mesure du
PREpARATION ET TITRAGE DES SERUMS 243
pouvoir bactericide d'un serum anti peut eire faite in vivo.

On effectue alors, dans des tubes a essai steriles, des
melanges d'une quantite fixe de dilution microbienne
avec des .proportions variables du serum aetif. On laisse en
contact, a l'etuve a 37°, pendant un temps fixe, - pal'
ilxemple 3 heures, - et on inocule 1 centimetre cube de
chacun de ces melanges sous la peau ou dans Ie peritoine
d'une serie d'animaux sensibles, de meme poids .
..
H. - Titrage du pouvoir bactericide des serums
antimicrobiens.
(TECHNIQUES DE JOUAN ET STAUB, M. NICOLLE, FIlASEY,

DEBAINS ET NICOLAS.)
Premier procede. - On cultive les germes sur gelose,

pendant 6 heures a 37°. On les emulsionne dans l'eau phy-
siologique additionnee de bouillon Martin au vingtieme, it
raison de 1 centigram me de microbes pour 20 centimetres
cubes de liquide. On fait alors, en partant de cette premiere
emulsion, une dilution telle qu'elle contienne de 400 a
1.500 germes vivants par 1/20 de centimetre cube. Pourcela
on etend d'abord au quart la premiere emulsion avec l'eau
physiologique + bouillon Martin et on porte ensuite 1/20 de
centimetre cube de la seconde dilution ainsi obtenue dans
100 centimetres cubes d'eau physiologique + bouillon Mar-
tin. On repartit en tubes d'apres Ie schema suivant :
10 Emulsions ie/les queUes,
Pour ensemencement immediat ;
Pour ensemencement apres 2 heures it ~J70.
°+
2 0 Emulsions
° ° °
serum (rais de cobaye (alexine)
Selon les cas cc. 01, cc. 02, cc. 05, ee. 1.
3 0 Emulsions + serum (rais de cobaye + serum normal non
chauffe,. .
0,01,0,001,0,0001, 0,00001,,0,000001.
On fait autanl de series qu'on a ehoisi de doses d'alexine.
4 0 Emulsions + Sel'Um (rais de cobaye + serllm anti, non
challffe :
0,01, 0,001, 0,0001, 0,00001, ,0;000001, 0,0000001,
0,00000001, 0,000000001.
~44 Rl1Mi'T/'GJNS nUMORALBS B'r H.eMATIM_gTIUE
On fait autlmt de series 'qu'on a choisi de doses d'ille~iti(l'.
Bien agittlr. Ensement:er 1/00 de centim'etre cube de 1A
premiere des en'iul'sions telltls queUes. Porter les bU'ttN;
pendant 2 hehtes a 3'7 0 , agiter ehsnite et ens'ehlencer.l/20
de centimetre cube de chaque tube dans uh lube 'de gelose
Martin fohduc, que COIl conle eh bolte. L.a repartitioh
homogene des germes est assuree par llgitation de Ia Seluse
dans Ia bolte I Apres 24 heures, oh lit a Ia loupe. Si Ie n6mbi'e
des colonies ne depasse pas Ia centaine, on les compte indi-
viduellement. Lorsqu'elles sont plus nombreuses, on pra-
tique Ia numeration qe plusieurs centimetres carres, au
moyen 'd'un carton perfote. On fait h\ thoyenne et on tnul-
tiplie par Ia valeur de In surface, l:)valuee egalement en cen-
. timetres carres.
Deuxieme procede. - bans cett~ methode, on se propose
d'operer sur un nbmbre de germes constant. Pour main-
tenir ce nombre invariabIe~ iJ convient d'operer a la tem-
perature de 440 qu'i arrete tout developpement mi'Crobien,
et de faire usage tie houillon Martin rcgMl:ire par l'ebul~
lititln, milie\i qui empeche Ia diminution numerique des
bacteries.
Ort cultive les germes pendant 6 a 24 heures it 0.7\ sur
gelose Martin. Oh Ie§! emulsionne dans Ie bouillon M!i.tlih
prealablement bouilli pendant un quart d'htmteJo puis
refrGidi, it raisort de 1 centigmmme par 20 centimetres cubes
de liquide, etc., comme plus huut, mais on opere a 21:40. On
aj'Oute immeui'atem-ent Ie serum, normal ou anli, et Ie com-
plement apres une demi-heure. On ensemehce apres une
heure, sauf la premiere des emulsions.
La dose d'alexine est consid'e.ree comme bonne l'OI"SqUc'la
quantite de ge.rmes obtenu'e apres 24 heures avec h~ premier
procede, ou une heure avec l-e seC'Ond, dans Jes emuisibns
additionnees'de serum d~ cohaycl represehte au moins Ie
tiers de 'CelIe que contiennent les -emulsions temoins, aph~s
Ie meme temps.
Un serum normal bu 'anti 'e'si lCohsider.e cofil1'l1e btzt(l(!ri-
cide .z'OTsque fa quanWe de games obtenue eh fin d' e±pe-
rience IIlvec les emulsions addifionnies d'alexine ci de 'serum
represente, all plus, Ie cinquieme de celle que contiennent~
aP'fes Ie medII! l~fup~, l~ t!JnU'lsion's temoins ttdditirJI'lh-ees
d'ane dose identique d'alexine.
CHAPITRE XX
SERUMS HEMOLYTIQU~S. - TITRAGE DE L'ALEXINE·

DES ANTI GENES ET DES ANTIOORPS,
A. - S~rUmlj l\~m~lytjqq~s.
10 Pr~par~tion. - On ilJ.ocul~ 4: QU 5 fpi~l A 6 jPllfs

d'interv;lJl(}, sous la p~aq, a un Iflp\n pijf e:ll.e!ll'Pl~, 2 QU
3 centimetres cub~s d'h~m~tiei:i de rooutpn QP'- AI') op~vn~,
pr¢al!!blemen't lflvees au lPoillS dans trois el}m~ physiplQ-
giques 15uccessives.
Ppur faire ce laY?ge, 011 centrif\lge }e sang d~fi.brin~;
on dei:ante Ie serum, on rem place C~lui-~i Pill' H. 2 0 phy~jo~
logique; on remet l~s pematies en suspfm~iQn, QI1 oentri-
fqg~ de n<m"e~\}., ~m <l~c\\~te e\ ~i\}'l>i M suite.
Le serp,m pptppu par slilign~1l (S joP,fs apr~s If! peVllierll
injection d'hematies) d'un animal ainsi trait6 est ina~tiye
par chautrage un~ demi-h(}lJre a J55°.
2Q Titrffg e . ~ Dans une :;erie q!l 10 tll-htl~ ~ ~!j:;fli, q1.)

iptrQdllit, a\l moyen .d'IJ.l)~ pipettl} gl'a9.u¢jl, ~ ceMirpMr~
yube d'ilroul~ip,l} all vipgtiilWll A'ht'wJ.at!flS l!!ye~!j 9.jl mqll-tol}
ou qe ~.hevr~ I et ensJ.lit~, dilPS phaqqe tuqe, d~" gl~ilQ.tHes
VFlrial;>lcs de serum hemoJytig:ue pl'~alapleJIl~nt dHJl4 fJq
1/100, ~;oit par ~4emple 0 cc. 1, 0 ~c. 2, 0 ~c. 3, etc, I ju~qlJ.'A
1 Ctlntim¢trc cul;>e.
:puil) ot} iptroduit dans tOUl> lei? tp.be~, sa\l.f df1J1s fe der~
nier, nne quantite fixe d'al~xine ; 46l+i} Q,QS!!S ll1inilPa q,'a-
lexine prealablement titr~e ,a:vep 1111 &erum ¢tpl.on.
On egalise dans tous les tubes (2,5 centimetres cubes) par
addition d'eau salce physiologique et on porte a I'etuve a
37 0 pendant une demi-heure;
1. On peut stabiliser les hematies de u1ammifer.es .et ies cons,crver penda,nt au nloi.ns
deux semaines it. Ia temperature dtJ_ labor~toire en les Il)ett;tnt el). ~lJspenslQn da.ns de
l'eau physiologique additionnee de 2 p, 1.000 de formol (Armand-D.tille et Launoy).
246 REACTIONS HUMORALES ET;_HEMATIMETRIE
Apres ce delai, on note a partir de quel taux de serum

hcmolytique l'hemolyse est totale.
Pour les reactions de Wassermann ou les titrages d'anti-
corps et d'alexine, on utilisera toujours, comme dose nor-
male de serum hemolylique, une dose egafe d 10 {ois fa dose
minima hemolytique.
Le seru\ll hemolytique chauffe sera reparti en fla,cons ou
en ampoufes, et conserve a Ia glaciere. II garde pendant
tres longtemps Ie meme pouvoir hemolytique. 11 n'est done
pas necessaire de Ie titrer avant chaque serie d'experiences,
mais seulement chaque mois environ.
On peut ohtenir plus rapidement des serums hemoIy-
tiques lapin anti-chevra ou anti-mouton par exemple, en
inoculant au lapin. par voie veineuse, 3 a 5 centimetres
cubes d'emulsion d'hematies de chevre ou de mouton lavees,
puis, 6 a 8 jours apres, encore par ,voie intraveilleuse,la meme
dose, et enfin, 6 a 8 jours apres, 5 centimetres cubes de Ia
meme emulsion, ceUe fois par voie peritoneale. On attend
8 jours et on saigne l'animal.
H. Sachs injecte deux fois, a 8 jours d'intervalle, 30 centi-
metres cubes de sang defihrine et lave dans Ie peritoine.
9 a 10 jours apres la seconde injection l'animal peut etre
saigne.
Pour preparer a la fois de grosses quantites de serum
hemolytique, on a recours, dans les granqs lahoratoires,
au cheval, qu'on charge avec des globules d~ mouton. Il est
necessaire de pratiquer 5 a 7 injections sous-cutanees de 10
a 15 centimetres cubes de globules, tous les 6 jours environ.
On saigne Ie cheval 8 jours apres Ia derniere injection.
Pour avoir Ia plus grande quantite possible de serum sans
recharger Ie cheval, on peut lui faire une premiere saignee
de 6Iitres, puis deux saignees de 4 litres a 4 jours d'inter-
valle. Les serums des deux premieres saignees presentent a
peu pres Ie meme pouvoir hemolytique. Celui de la troi-
sieme saignee est legerement inferieur.
B. - Titrage de l'alexine.
On dispose d'un serum hemolytique inactive de puis-
sance hemolytique exactement connue.
TITRAGE DE L'ALEXINE ET DES ANTIGENES' 247
L'alexine est fournie par Ie serum frais de cobaye .. Nous

avons deja indique comment on pouvait se Ie pro'curer:
L'activite de cette alexine doit etre titree avant chaque
reaction, car sa valeur varie d'un cobaye a l'autre. Par cetle
operation, on determine la dose minima, variable avec
chaque alexine, qui permettra de deceler les plus faibles
traces d'anticorps ou d'hemolysine.
Pour titrer l'alex.ine, on fait une dilution au 1/15 du
serum de cobaye dans de l'eau salee physiologique a 8,5 de
i?el marin p. 1.000. On introduit, dans une serie'de tubes,
occ. 05, 0 cc. 1,0 cc. 2, jusqu'a 0 cc. 5 de cette dilution. On
ramene, dans chaque tube, Ie volume total a 2 cc. 5 en com-
pletant avec de l'eau salee physiologique. On agite chaque
tube pour assurer Ie melange et on porte les supports a
l'etuve pendant 1 heure 1.
On ajoute :1lors partout 10 doses minima de sensibilisa-
trice hemolytique et une goutte de l'emulsion de globules.
Au bout d'une demi-heure de sejour a l'etuve a 370, on lit
les resultats. La dose d'alexine active est indiquee par Ie
premier tube de la serie OU l'on constate l'hemolyse. On
prend cette dose comme dose minima dans les experiences
de fixation.
Si on conserve une provision d'alexine pendant plusieurs·
jours it la glaciere, il est indispensable de la titrer avant
chaque operation.
••*
C. - • Titrage des antigenes.
Tout anti gene doit eire titre aU point de vue de. son pouvoir
anlicompiemenlaire et au point de vue de sa valelll' antigene.
a) Titrage du pouvoir anticomplementaire (absor-
bant ou empechanl). - Avant de pratiquer toule reaction de
deviation, il faut determiner la dose a laquelle l'antigene
fixe a lui seulla quantite d'alexine employee pour produire
l'hemolyse.
1. It est neccssairc de procedcr ainsi, Calmclle, Massol et Gryse::. ayant monfni que
falexine dll"ee. conservee d l'eluvc pendant une heure (temps exige pour In fixation du~
comple..'(e : anticorps-alexine, dans In reaction de deviation du complement), pel'd enui ..
ron la moitie de son activite.
24~ REACTIONS HUMORALES ET HEMATIMETRIE
Pour operer ce titrage, on dilue l'antigenc (extrait ou

emulsion concentree de microbes) avec des quantites crois-
santes d'eau physiologique : 1/5, 1/10, 1/20, 1/30, 1/40,
1/50/ etc. On prend une quantite fixe de chacune de ces
dilutions, soit 1 centimetre cube, qu'ou met en presence de
doses croissantes d'alexine a partir de la dose minima. On
complete au volume total de 2 cc. 5 avec de l'eau sah\e phy-
siologique et, apres avoir agite les tubes, on les porte a
l'Huve a 37 0 OU on les laisse une heure. Au bout de ce
temps de contact, on ajoute Ie systeme hemolytique :
1 goutte d'emulsion de globules et 10 doses mipima de sen-
sibilisatrice hemolytique. On agite chaque tube et on reporte
les supports a l'etuve it 37 0 • Apres un sejouf d'une demi-
heure, on les retire et on lit les resultats.
On prend, pour effectucr les reactions de deviation, la
dilution d'antigene qui n'a pas exerce de pouvoir empechallt
a partir de la dose minima d'alexine.
Les extraits (alcooliques, glyceriniques, etc.) peuvent
Mre titres une fnis pour toutes au point de vuede leur pou-
voir anticomplementaire. Cependant, il est prudent' de
recommencer Ie titrage de temps en temps, car, pour les
extraits alcooliques, Ie pouvoir empeehant peut legerement
augmenter apres un certain delai de conservation.
b) Titrage de la valeur d'un antigene. - Pour mesu-

rer la valeur d'un antigene, il faut dispose~ d'un serum type
dont on connait la richesse en anticorps. De deux antigenes,
Ie meilleur sera celui qui permettra ..de deceler la plus
grande quantite d'anticorps dans un serum,donne. Le titrage
de la valeur d'un antigene peut se faire par deux methodes
i:lifferentes :
1 0 En faisant croitre les doses d'alexine en presence d'une
dose fixe d'antigene ;
!.!o En faisant decroitre les quantites d'antigene en pre-
sence d'une dose fixe d'alexine.
10 bose fixe d' anligene, doses croissanles d' alexine. - Pour
ne pas etre oblige d'cmploycr de trop grandes quantites
d'alexine, il est prudent de prendre une dilution d'antigenc
assez ¢tendue, sinon on risquerait de ne pas arriver a la
limite du pouvoir deviant de l'antigene.
On fait agir une quantite fixe de la dilution de l'antigene,
;-
T1TRAGE, DE L'ALEXINE ET DES AN1'lGENES 24!)
par exemple 1 centimetre cupe de la dilution au 1/100, et

une quantite fixe, par exemple 0 cc. 5 d'uu serum connu,
chauffe 30 minutes a 56 0 , en presence de doses croissantes
d'alexine, a partir de la dose minima. Des tubes temoins
revoivent separement l'antigt'me seul et Ie serum seul avec
les memes doses d'alexine. On complete partout au volume
total de 2 cc. 5 avec de l'eim salee physiologique ; on place
les tubes a l'efuve a 37 0 pendant une heure. On les en retire
pour ajouter Ie systeme hemolytique ; on les replace a
l'etuve pendant une demi-heure, puis on lit Jes resultats.
La valeur de l'antigene s'apprecie par Ie rapport
N nombre de doses d'alexine deviees.
V = volume de l'anligene employe.
Si 0 cc. 01 d'antigene a devie 8 doses minima d'alexine,

l'unite de volume de cet antigene devie 800 unites d'ale-
Xlne.
Si Ie systeme hemolytique reste constant, la valeur d'un
antigene, determinee en presence d'un serum type, reste
constante.
2 Do~es dicroissanies d'antigene ; doses fixes d'alexine.-
0
Dans une serie de 10 tubesl on introduit des doses variables,

0,1,0,2,O,3,0,4,0,5,0,6,0,7,0,8,0,9,lcentimetrecubede
la dilution d'antigene dont on veut determiner la valeur.
Chaque tube revoit en suite la meme dose d'un serum a anti-
corps, inactive par un chauffage de 30 minutes a 56°, et Itt
meme dose d'alexine de cobaye, prealablement titree, soit
deux doses minima. On fait des tubes temoins avec Ia dose
fixe de serum et avec les doses decroissantes d'antigene
employees, puis on procede comme il a ete dit plus haut.
.,. * ,.
D. - Titrage des anticorps ou sensibilisatrices

dans un serum anti.
(TECHNIQUE DE CALMETTE ET MASSOL.)
A. - Un~ premiere serie comprend trois tubes qui

revoivent chacun une dose fixe d'antigene titre (par exemple
1 centimetre cupe de dilution au 1/20 d'antigene tubercu-
leux).
B. - Vne deuxieme serie de trois tubes dont chacun

re<;oit 0 cc. 5 du serum a anticorps a etudier.
C. - Uoc troisieme serie comprend cioq tubes .au moins.
Chacun re<;oit la dose d'antigene de la serie A, plus la dose
de serum a anticorps (0 cc. 5) de la serie B.
Dans chacun des tubes des trois series on ajonte des
doses d'alexine allant en croissant de tube en tub~, en pre-
nant pour dose initiale la dose minima active, c'est-iJ.-dirc
celie qui permet l'hemolyse du complexe hematies plus
serum ,hemolytique inactive (10 doses minima de ce
dernier) ; par exemple 0 cc 1, 0 cc. 2, 0 cc. 3, ..... 0 cc. 5.
On complete partout au volume de 2 cc. 5 avec H20
physiologique a 8 gr. 5 de NaCI pour 1.000, en ayant soin de
faire tourner les tubes entre les doigts, de maniere a entrai-
ner toute l'alexine dont une partie ,aurait pu rester adherente
ala paroi.
Le support con tenant ainsi les trois series de tubes est
porte a l'etuve a 37 0 pendant une heure, puis on ajoute, dans
chaque tube, une goutte de l'emulsion d'hematies lavees de
mouton et ensuite une quantite de serum hemolytique
inactive anti-mouton representant 10 fois la dose minima
hemolytique (par exemple 0 cc. 1 d'un serum dont 0 cc. 01
est la dose minima hemolytique). '
On reporte a l'etuve a 37 0 pendant une demi-heute. On
lit alors les resultats. I
La reaction de fixation est posilive, - donc demontrant
la presence d'anticorps, - si l'alexine deviee par Ie melange
antigene plus serum a etudier (serie C) est superieute aux
volumes d'alexine devies respectivement par l'antigene et
par l'anticorps (series A et B).
Si un volume VduserumetudiedevieN doses minima d'a-
lexine, Ie rapport ~ represente Ie nombre de doses minima
d'alexine que peut devier 1 centimetre cube de serum anti.
E. - Conglutination globulaire"
BOl'del et Gay ont montre la presence, dans Ie serum de
bamf, d'une substance capable d'agglutiner divers globules
rouges prealablement soumis a l'action d'une sensibilisatrice
TITRAGE DE L'ALEXINE ET DES ANTIGENES 251
hemolytique et d'une alexine. Ils I'ont appelee conglutinine
et Ie pbenomene a pris Ie nom de conglutination. Ce dernier
constitue un procede de sero-diagnostic au meme titre que
l'hcmolyse dans Ia fixation du complement.
D'apres Brocq-Roqsseu, Urbain et Cauchemez, la technique
de la reaction est la suivante : on met en presence Ie serum
suspect, challffe 30 minutes a 550 (serum humain) ou 60-
(serum animal), un extrait ba<:illaire, du serum frais de
cheval, du serum de beeuf chauffe 30 minutes a 60 0 et des
globules de mouton.
Le serum de beeuf conglutine les globules de mouton it
condition que ceux-ci aient cte sensibiIises et alexines; Ie
serum frais de cheval remplit ce double office.
Le mecanisme de la reaction est Ie meme que celui de la
deviation du complement; Ie serum a examiner 'renferme
une sensibilisatrice; celle-cise fixe surl'antigene utilise, qui
fixe a son tour I'alexine. Si on ajoute ensuite Ie serum de
beeuf et les globules de mouton, la conglutination ne se pro~
duit pas, l'alexine n'etant plus libre pouragir sur les globules
de mouton. Cctte absence de conglutination signifie donc
que Ie serum provient d'un sujet infecte. Dans Ie cas con-
traire, si Ie sujet est sain, son serum ne renferme pas de
sensibilisatrice, l'alexine reste Iibre et eUe peut se fixer sur
les globules, en meme temps que l'ambocepteur heniolytique
du serum de cheval normal. Les globules ainsi sensibilises
et alexines sont conglutines par Ie serum de beeuf. Le phe-
nomene de conglutination signifie donc que Ie serum pro-
vient d'un sujet sain.
On dispose les divers elements selon Ie tableau de
la page suivante.
La conglutination apparaU quelquefois au sortir de
l'etuve, mais, orqinairement, il faut un temps de sejour
de quelques heures a Ia tempe"rature du laboratoire, pour
qu'elIe se manifeste. Elle doit toujours apparaitre dans les
tubes 2, 3, et quelquefois 4 de Ia reaction type, et dans
6, 7, et parfois 8, des temoins antigcnes; elIe ne doit
pas exister dans les tubes 1 (temoin alexine seule) et
1 bis (temoin serum seul) (Brocq-Roll.,sseu, A. Urbain et
Cauchemez) .
Cette reaction a ete appliquee avec de bons resultats au
diagnostic de la morve.
252 REACTIoNS HUMORALES BT HEMATIMETRIE
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Temoiu 1\-
lexine ..•.. 1 0,1 0,9 0,1
Temoin se
rum seIl1 .... lbis 0,01 0,99 O,l
Tem()in rEi-) 2 0,1 0,9 0,01 0,1
action de 3 0,1 0,9 0,02 0,1
•c.ong1 utina - 4 0,1 0,9 0,03 0,1
lion type .. 5 0,1 0,9 O,O~ 0,1
6 0,01 0,1 0,89 0,01 0,1
Temoins an'\ 7 0,02 0.1 0,88 0.02 0,1
ti_gene ..••. ( 8 0,03 0,1 0,87 0,03 0,1
9 0,01 0,01 0,1 0,88 0,01 0,1
ItEiac t i"u 10 0,02 0,02 0,1 0,86 0,02 0,1
propremenl 11 0,03 0,03 0,1 0.84 0,03 0,1
dile._ ..... 12 0,04 0,1)4 0,1 0.82 O,o~ 0,1
CHAPITim XXI
REAC'T1tJN bE BOhbET-WASSERMANN Et PREPARATION
- DES ANTI'G,:P;NES SYPHlLITIQUES.
A. - Preparation de l'nntigene syphilitique.

a) Extrail alcQoliq'l1e de ./oie de nouveau-nes syphiiitiques•
._ On triture soigneusement au hache-viande d'ahord, pui~
,au hroyEtur Latapie 1, des fragm,ents de foie. On etale cette
pulpe en couche mince. dans des cuvettes en verre ou en
'porcelalne pt;ealabiement sterilisees par flambage rapide, e't
on les porte dans 1a cloche a vide sulfurique pour les desse-
,cher dans Ie.plus bref deIai possible.
On recolte 1a _pulpe seche qu'on reduit en poudre par
hroyage au mortier. ~tte poudre est traitee par l'alcool
absolu a raison de lOsrammes de poudre pour 100 grammes
d'alcool. '
On Jais-se macerer au moins 24 heures dans un flacoQ.
houche qu'on agite . de temps en temps, puis on filtre. 01]
abtient ainsi nne solution mere qu'on repartit en flacons et
.gu'on peut conserver pendant tres Iongtemps.
Pour s'en setvlr, on l'etend d'eau physiologique dans 1a
p,roportioR de 1 partie de solution mery pour 3 ou 4 parties
d'eau salee. 11 faut, eu general, 0 ce. 2 a 0 ee. 25 de eeUe di...
lution pour chaque reaction, mais on doit s'assurer, par un
titrage prealable (voir cbapitre xx, pouvoiF fixateur des
antigenes), que cet~e -dose ne fixe pas a eUe seule nne trop
grande quantite d'aJexine. Si c~est lH~cessaire, on dilue
davantage 1a solution mere.
b) Extrail alcoolique de camr de veau. Methode de Bordel
et Ruelens. - Ces auteurs traitent d'abord 1e creur de v~au
par l'acetone, rejettent ce prem~er !xtrait et epuisent ensuit~
254 R£ACTIONS HUMORALES fT H£MATIM£TRIE
Ie meme organe par de l'alcool; ce second extrait est uti-

lise pour les serodiagnostics.
On commence par hacher Ie tissu musculaire cardiaque,
en prenant soin de ne pas en exprimer Ie suc. On ajoute
125 centimetres cubes d'alcool a 95 0 a 100 grammes de
cceur hache, et on agite. Cet alcool, ajoute en proportion re-
lativement faible, n'a pas de pouvoir dissolvant sensible sur
les lipoides; il coagule les albuminoides. Apres quelques
jours de contact a la temperature ordinaire, on jette Ie tout
sur un filtre. Apres egouttage, on enleve du filtre Ie tissu; on
I'etale sur un cristallisoir qu'on porte a l'etuve a 37 pendant
0
un jour: Ie tissu, coagule et antiseptise par l'alcool, se desse-

che tres vite sans subir aucune alteration. Le tissu sec est
mis dans un flacon dans lequel on introduit 200 centimetres
cubes d'acetone; il y sejourne environ une semaine a une
temperature de 18 a 20 0 • On elimine alors l'acetone, on
laisse egoutter, on ajoute encore un peu d'acetone, on
maintient un jour dans ce reactif qui, rin~ant Ie tissu,
enleve les dernieres traces des substances solubles. On
jette de nouveau sur un fiItre; Ie tissu egoutte est deharrasse
completement de l'acetone'par un sejour de quelques heures
a l'etuve, puis transporte en flacon dans lequel on verse
200 ~entimetres cubes d'aicool a 95 0 • On maintient pendant
8 a 10 jours a la temperature de 200 environ. Le liquide
ainsi obteI1U, filtre, est l'antigene. II a une teintejaune d'or.
Au moment de l'emploi, cet antigene doit ~tre emuisionne
dans de l'eau physiologique, determine par Ie titrage:
entre Ie 1/20 et Ie 1/40.
Avoir soin d'ajouter l'eau physiologique ~ l'extrait alcoo"-
lique, d'ab6rd goutte a goutte en agitant constamment,
puis, plus rapidelJlent, quand Ie precipite louche apparait,
en agitant toujours Ie melange.
Le liquide n'a aucun pouvoir -anticomplementaire. Cet
antigene est considerablement plus actif que l'extrait alcoo-
lique total.
c) Ext/'ait afcoolique de cam/' hllmain additionne de chofes-

tiI·ine. - On peut aussi, selon Ie procede de Walke/' et
Swift, preparer un antigene avec du cceur humain addi-
tionne de cholesterine, en operant de la maniere suivante':
Le creur, soigneusement deharrasse de graisse, estdecoupe
PREPARATION DES ANTIGENES SYPHILITIQUES 255
en mince~ fragments, pese et immerge dans de l'alcool

absolu. La proportion doit etre de 1 gramme de tissu car-
diaque pour 10 centimetres cubes d'aicool. On Iaisse mace-
rer pendant deux semaines a 37°, dans un bocai bouche
a l'emeri qu'on agite piusieurs fois chaque jour. Apres ce
deIai, on sort Ie bocal de l'Ctuve et on Ie conserve 'jusqn'a
refroidissement a Ia temperature du Iaboratoire. On filtre
sur papier Berzelius et on ajoute au liquide nne quantite
de cholesterine pure, correspondant a 0 gr. 4 pour 100 cen-
timetres cubes d'extrait alcoolique.
Cet extrait s'emploie dilue au dixi~me dans l'eau salee
physioIogique a 9 gr. 50 de NaCI par litre, a la dose de
occ. 25 pour chaque reaction.
B. - Technique de Calmette et Massol pour la reaction

de Bordet-Wassermann.
La reaction de Bordet-Wassermann, pratiquee selon la

technique de Calmette et Massol, necessite la preparation
et Ie titrage des divers elements suivants : hematies lavees,
serum hcmolytique, alexine de cobaye et antigene (au point
de vue de son pouvoir anticomplementaireet de son pouvoir
antigene)~ Pour ces diverses operations, se reporter aux
techniques precedemment indiquees.
Pour avoir 4 ou 5 centimetres cubes de serum, il faut pre-
lever 10 a 12 centimetres cubes de sang. On chauffe Ie serum
a 56 0 pendant ·30 minutes pour l'inactiyer. II est inutile de
chauffer Ie liquide cephalo-rachidien, a moins qu'il ne con-
tienne du sang. Si on dispose d'une quantite de serum suf:
fisante, il y a avantage a employer 0 cc. 5 de serum par tube
pour conipenser les alterations qui peuvent etre causees
par Ie chauffage, sinon on prend 0 cc. 3 ou 0 cc. 2.
Comme nous l'avons deja expose, Ie principe de la
methode consiste a meUre une dose fixe de serum a ctndier,
accOl;npagnee d'nne dose fixe d'antigene syphilitique, en
presence de quantites croissantes d'alexine.
La reaction se fait de la maniere suivante :
Le serum inactive a etudier ou Ie liqnide cephalo-rachi-
251l IU5AC1'loNS HUMORALES ET HEMf11'IMETRIE
g = :: PI! A ...... ""' .

1"""4~""....-4"'"'
00000"
...............
J PI: ::: ::: =

"
~C'I":)C't....-l
,....; rl""'-';"-;''I""'l
J A ~ ~ ~
"
..... e-.O'o-!l'1.ti>
00000
U A A ::::; ~
"
tt:I'-OlC~~
00000
d :: ~ ~ A
"
~\OlO\.!)tn
0000(;:)"
\
~
«<
....
DILUTION GLOBULAIRE FRAICHEMENT FAITE OU AGITEE
Int acte. H emolysee.

Liqu ide opaque. Liquide la que tra nspare nt.
DILUTION GLOBULAIRE
APRES SEDIMENTATION OU CENTRIFUGATION
,.
.....'
H emo lyse nulle. H emolyse legere. H emolyse inco mplete. H emolyse tot ale.
Deviation co mpl et e. Deviation part iell e. Deviation legere. Deviation null e.
+++ ++ +
Pl anc he extr ai te de : A IL\1.\;,\D- L) ELlLLE ET ='J E(j RE .

T cc1l1Jiq ll c d e J.l rC.lclioJl d e! dCl'i Jtio ll dll {'u mp lcm eIlL
dien a la dose constante de 0 cc. 5 et l'antigene it Ia dose
°
constante de 0 cc. 5 de la dilution, determim!e par Ie titrage
prealable, sont mis ~n presence de 0 ce. 1, cc. 2, 0 cc. 3,
o cc. 4, 0 cc. 5 d'alexine diluee (0 cc. 1 Mant la dose
minima). On fait trois tubes temoins serum et trois ,tubes
temoins antigene avec 0,1, 0,2 et 0,3 d'alexine. On com-
plete dan!) chaque tube, avec de l'eau salee physiologique,
au volume total de 2 ce. 5. On agite chaque tube et op.
porte it l'etuve a 37 0 pendant une heure.
On ajoute ensuite Ie systeme hemolytique (1 goutte -de
globules et Hfdoses de sensibilisatriee hemolytique) et on
porte a l'etuve a 37 0 pendant une demi-heure.
La lecture· des resultats est faite a ce moment. Elle inai-
que Ie nombre d'unites d'alexine deviees separement par l,e
serum et par l'antigene d'une part (tubes temoins) et par
Ie melange serum-antigene d'autre part; en cas de reaction
positive, elle donne Ie nombre d'unites d'alexine deviees.
La quantite d'anticor.ps contenus dans Ie serum s'exprime
par Ie rappor t N .,
V qm represente Ie nom Bre _dOd "
e oses nllmma
d'alexine que ,peut devier 1 centimetre cube de serum anti.
C. - Technique de l'Institut Pasteur par Ie procede

rapide, Hecht, Levaditi, Latapie, remanie par
Weinberg et Mutermilch.
I. Reactifs. - 10 Anligene de Bordet ,et Ruelf;ns. -

Avant ~on emploi, cel antigene sera emulsionne dan~ de
l'eau physioIogique, dans des proportions variant de 1/20 a
1/40. Toutefois, avant de mettre un nouvel antigene en
~irculationl il est preferable de Ie titrer et de Ie comparer
avec un antigene deja eprouve.
Ce titrage sera fait comme il a ete indique (chap. xx, C).
Un bon antigeqe ne doit pas posseder de proprietes
anticomplementaires meme en solutions concentrees; il doit
etre suffisamment sensible pour fixer l'alexine en presence
des serums syphilitiques, meme quand il est tres dilue-.
Pour preparer une emulsion de l'antigene dans de l'eau
MJCROBIOLOGIE 17
physiologique, iI faut ajouter de l'eau it l'antigene (et non

!'antigene it l'eau), d'ahord tres lentement, par gouttes, en
agitant constamment l'emulsion. Quand la quantite d'eau
ajoutee a deja. atteint 2 a. 3 {ois Ie volume de l'antigene, on
peut continuer avec moins de precaution, un peu plus
rapidement. mais en agitant toujours Ie melange.
2 0 Les serumshumains soumisa l'examen seront emproyes
a 1'etat actif, c'est-a-dire frais.
30 Emp~oyer nne emulsion a 5%, dans l'eau physiolo-
gique. de globules de mouton laves.
II. Reaction de fixation de I'alexine. - Six tubes a

hemolyse sont necessaires pour chaque'reaction : la serie
des trois premiers tubes servira pour Ia reaction de fixation' ;
celle des trois autres tubes, qu'on disposera de preferenqe
derriere la premiere serie, servira pour Ia determination
de I'index hemolytique.
Les deux premiers tuhes de Ia premiere serie re~oivent
respeetivement 0 ce. 1 et 0 cc. 2 d'antigene, 0 cc. 2 et 0 cc. 1
d'eau physiologique et 0 cc. 1 de serum a examiner; Ie troi-
sieme tube, qui sert de temOln, re~oitO cc. 1 de serum humain
et 0 cc. 3 d'eau salee. chacun des trois tubes de la seconde
serie, qui servira pour 1a determination de l'index hemoly-
tique, re~oit tout d'abord 0 ce. 1 de serum a,examiner. Puis on
ajouteachaquetube respeetivemcl?t Oee. 3,0 ce. ~ etOce. ~
de globules de mouton a. 5%; Ie tout est agite et mis a l' etuve
a 37 0 pendant une heure et demie. On ajoutera ensuite aux
trois t.ubes de la premiere serie des quantites de globules de
mouton variables seion que l'index hemoIytiqu!l est fort ou
faible : en effet, si 0 ce. 1 de serum humain n'hemolyse que
oce. 3 de globules de mouton au maximum, op ajoutera, a
ia fin de la reaction, it chacun des trois premiers tubes, 0 c~. 1
de sang de mouton; si 0 ce. 1 de serum humain est capable
d'hemolyser 0 cc. 6 de globules, c'est-a.-dire si l'index hemo-
lytique du serum est egal a. 6, on ajoutera 0 cc. 2 de globules
de mouton ; si enlin l'index hemolytique est egal a. 9, on
ajoutera toujours un tiers du maximum, c'est-a-dire 0,3
d'emulsion globuIaire.
Si !'index hemolytique du serum soumis a l'exam()n est
egal a zero, cela signifie que ce serum ne renferme pas
d'alexine normals (cas Ie plus frequent), ou de sensibi-
lisatrice anti-mouton, ou enfin ces deux substances a la

fois.
Dans ce cas, on est oblige de recourir aux methodes basees
sur la reaction classique de Bordet-Wassermann (methode
Calmette et Massol) OU l'on se sert d'alexine de cobaye et de
sensibilisatri~e anti-mouton. On peut aussi employer l'a-
lexine et l'hemolysine normales contenues dans un serum
humain negatif, frais.
Reaction de fixation de l'alexine par Ie procede

dit rapide.
_Eau physiologiq:ue Antigen. Serum a exa"miner Globules de mouton a 5 %
0,2 0,1 0,1 0,1 ou 0,2 ou 0,3

0,1 0,2 0.1 0.1 on 0,2 au 0,3
0,3 0.1 0,1 on 0.2 on 0,3
1 h. 1/2 a 37· selon qllO I'jndexhtlmoly.
ti<Jue est egal a 0.3·0.6
on a 0,7
30' :i 40' ii. 370.
Tableau d'une determination de l'index hemolytique.
SerLJUl it exalPiner Globules de mouton it 5 %
0,1 0,3
0,1 0,6.
0,1 0.9
CHAPITRE XXII
RECHERCHE ET TITRAGE DES ANTICORPS

TUBERCULEUX,
A. - Preparation des anti genes tuberculeux.
a) Extrait peptone B2 de Calmelle el Massol. - On fait

macerer, penda,nt 48 heures, au bain-marie a 65 0 , 5 grammcs
de baeilles sees, prealablement laves, dans 100 centimetres
cubes d'une solution de peptone de Witte a 10 p. 100 dans
l'eau distillee (Ia teneur en peptone dela tunerculine brute de
Koch est de 10 p. 100), On separe ensuite Ie liquide des mi-
crobes par filtration, et on Ie repartit en flacons ou en am-
poules,
Cet antigene est un veritable extra it de bacilles de Koch,
depourvu des substances complexes inactives ou empechan-
tes que renferme la tuberculine, II decele les moindres quan-
tites d'anticorps contenues dans les divets serums de sujets
tuberculeux, I
Pour l'emploi, on Ie dilue au 1/10 dans l'eau physiologique

et on ajoute, a chaque tube de reaction,l centimetre cube
de ceUe dilution.
b) Anligble a ['amf de Besredka, - La culture en profon-
deur du bacille tuberculeux, dans un milieu liquide a l'amf. a
permis a Besredka de preparer un an tigene doue d'une gra nde
sensibilite. On emploie, a cet effet,une culture de quatre jours
de bacilles tuberculeux humains dans Ie bouillon a l'reuf
reparti a raison de 50 centimetres cubes par boitede Roux.
Apres sterilisation par un chauffage de trente minutes a
1000 , on laisse pendant vingt-quatre heures les bacilles se
deposer au fond de'la boite, puis on decante et on centrifuge
Ie depOt; Ie culot ainsi obtenu est dilue dans 4 centimetres
cubes d'eau physiologique. La suspension nllcrobienne est
ensuite sou mise, au moins pendant deux heures, a une agi-
TITFlAGE DES ANTICORPS TUBERCULEUX 261
tation mecanique dans un tube de verre muni de billes de

verre. Finalement, ttIle est diluee dans trente fois son volume
d'eau physiologique a 9 p. 1.000.
D'apres Urbain, la partie active de l'antigene a l'reuf
recemment prepare avec une culture de quatre jours, est
constituee par les corps microbiens emulsionnes. Au con-
traire, dans une emulsion ancienne, c'est Ie liquide separe
par centrifugation qui devient seul actif, comme nous
l'avons constate: les bacilles tuberculeux, remis en emulsion
dans l'cau physiologique, ne devient plus que tres faible-
ment l'alexine.
L'antigene de'Besredka prepare depuis 2 ou 3 mois se
comporte donc comme un extra it bacillaire. Sa sensibilite
se conserverait intacte pendant au minimum 15 mois.
c) Anligene melhylique de Boqp.el et Negre. - Des ba-
cilles humains et bovins provenant 'de cultures sur bouil-
lon glycerine, agees de 6 semaines, sont sterilises par
un chauffage de trente.minutes a 120 0 , filtres sur papier
et melanges en parties egales. Les corps bacillaires sont
en suite laves a l'eau distillee sur Ie filtre, puis desse-
ches. a l'etuve ou dans la cloche a vide.
Les microbes secs sont traites par de l'acetone pendant
24 heures (1 centimetre cube d'acetone par centigram me
de bacilles), desseches de nouveau et, finalement, mis a
macerer dans l'alcool methylique a 99 0 (1 centimetre cube
d'alcool par centigramme de bacilIes) I.
On laisse en contact pendant dix a douze jours a 37 0 -38 0 ,
en agitant frequemment. Le liquide, separe du depOt micro-
bien par filtration, constitue l'antigene tuberculeux qui doit
eire employe a la dose d'un vingtieme de centimetre cube,
soit 1 centimetre cube de la dilution au vingtieme dans l'eau
pbysiologique. Le pouvoir anticomplementaire de ceUe dilu-
tion est a pen pres equivalent a celui de l'antigene de Bes-
redka. Comme pour ce dernier, il disparait en presence du
serum normal.
Les extraits methyliques doivent etre conserves a l'abride
la lumiere et de l'air, it cause de leurpouvoir hygroscopique.
11s fournissent, a froid, un precipite assez abondant qui se
1. II est indispensable d'employer de l'alcool methylique a 99', l'action dissolvante

des alcools it titre plu .. faible etant presque nulle.
262 REACTIONS HUMORA'LES ET HEMATIMETRIE
d6pose sous la forme de peti tes masses blanches; et se redis-

sout entierement lorsque Ie Iiquide est porte it 45°-:50 0 1 '
Au moment de l' emploi, 1'arttigene methylique, rerldu lim-
pide par un sejour dt\ quelques minutes al'etuve ou au l!ain-
marie a 50 0 , est preleve avec une pipette seche et verse dans
un verre sec. II est additionne, d'ahord goutte a gouue, puis
plus rapidement; d'eau physiologique; dans les proportions
indiquees. L'emulsion doitetretrouB}e et opalescente. Pour
eviter les echecs. il est indispensable de se conformer it cette
technique.
Les extraits ainsi prepares ont une flctivite pluS grande
que-les extraits tnethyliques directs tels que'Petrof les avait
realises. Leur sensibilite est equivalente·a celle de l'extrait
peptone de Calmelie et Massol et de l'antigene a l'mat de Bes-
redka. lIs f()urnissent une reaction positive avec les serums
des trtberculeux, 1:1ler1J.e en presence de tres faibles quantites
d'ahticorps. lIs offrent I'd vantage d'une prepatll.tidt1 facil~ et
<t'une cohServatioh indefinie. On pertt se les procurer ti
l'Irtstitut Pasteur.
.. ....
B. - Technique de Calmette et Massot pour la recherche
. des anticorps tuberculeux.
I
La methode de Calmetle el Ma~sol, appliquee au Wrage des
anticorps tuberculeax darts ie serum des rnaiades, C()tnpotte
trois sMies de tubes: In premiere, de 5 tube!; ou davahfage,
l'c«;Dit une quantile fixe, soit 0 cc. 2 du serum a eptouver,
iMctive par chautfage pendant II'}. heute a 55 0 et une quan-
tite fixe de l'antiget1e methylique, soit 1 centimetre cube de
Ia dilution au 1/20; Ia 26 serie de trois tUbes (temoins Serultl)'
r~<;-oitlatheme quarltite de serUlit queles tubes de In 11'11 serie,
soit 0 ce. 2. La 3" serie de 3 tubes (temoins antigene) tec;oif
ld meme quantile d'antigene que les -tubes de la 1ra setie,
soit 1 centimetre cube.
Dans chaque tube des trois seties, on ajoute ensuite d~s
doses croissantes d'alexine:1 partir de fa dose minima.
On complete partout aU volume total de 2 cc. 5 avec' de
l' cau salee physiologique a 8,5 p. 1.000 et on agite soigneu-
sement chaque tube pour assurer l'homogeneite du melange.
TITRAGE DES ANTICORPS TUBERCULEUX 263
e• A" " • " A
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1"""11"""11"""11"""11"""1
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Wn.IllS 'W\lJj Im\JS!luu ·WllJ.
• Les supports contenant les trois series de tubes son_t pla-

ces a l'etuve a 37 0 pendant une hel4re. puis on ajoute. dans
chaque tube, une goutte d'emulsion d'hematies lavees et une
quantite de serum hemolytique, representant 10 fois la dose
minima active, Les tubes sont de nouveau agites, reportes
a l'etnve a 37 0 et examines au bout d'nne demi-heure.
Le pouvoir anticomplementaire de l'antigene methylique
est pratiquement negligeable, puisqu'il disparait SOllS la
seule action du ser,um normal chauf}"e (serums negatifs), II
n'y a donc pas lieu d'en. tenir compte. Les seuls serums
consideres comme pCtlsitifs sont ceux qui fixent nettement
une quantite d'alexine superieure it Ja quantite d'alexine
deviee dans les tubes temoins ne contenant que du serum.
Si un volume V du serum it etud-ier devie N doses minima
d'alexine, Ie rapport ~ exprime Ie nombrc de doses d'a-
Iexine fixees par l'llnite de volume du serum, en l'cspecc Ie
centimetre cube: soit, par exemple, un seru~ fixant 3 doses
minima, Ie rapport ~ = 0~5 = 6 represente Ie nombre de
doses minima d'alexine fixees par 1 cc. de serum:
Les divers serums, titres avec un meme antigene et un
meme systeme hemolytique, peuvent etre ainsi compares
entre ellX d'apres Ie nombre d'unites d' alexine qu'ils devient.
Temoin" Serum Temoins Antigene

_,_____ ~-----
Fig. 20. - Di~Eositif pour Ia reaction de deviation du complement par In methode de

CalmeUe et Massol. Le melange Serum + Antigime n dcvie 4 doses minima d'u-
lexine. Toll'S les tubes temoins sont hemolyses.
TlTRAGE DES ANTICOflPS TUBERCULP;UX 265
C. - Application de la technique de I'lnstitut Pasteur

pour Ia reactioh de Bordet-Wassermann par Ie pro-
cede rapide 'au diagnostic de Ia tubercuIose.
Valtis a adapte Ie procede rapide de Hecht-Levaditi-Lata-

pie, remanie par Weinberg et Mutermilch, au diagnostic de
la tuberculose.
II prend pour chaque reaction six tubes a hemolyse, divi-
ses en deux series de trois.
La premiere sert pour la reaction de fixation et la seconde,
qu'on dispose de preference derriere la pr«miere serie, est
destinee a deternliner l'index hemolytique du serum a exa-
miner (Weinberg). Vne troisieme serie de trois tubes est
reservee a la reaction de Bordet-Wassermann, selon la me-
thode de Mutermilch.
Les dcux premiers tubes de la premiere serie re90ivent rcs-
pectivement 0,5 et 1 ccnt. cube d'antigene methylique dilue
au 1/20 avec de l'eau physiologique et 0,1 du serum a exa-
miner,.11011 inactive par chauffage, et ne datant pas de plus de
quarante-huit heur·es. On complete Ie volume du premier
tube a 1 cc. 1 en ajoutant 0,5 d'eau physiologique.
Le, troisieme tube, qui sert de temoin, re90it 0,1 de serum
frais a examiner et 1 cent. cube d'eau physiologique.
Chacun des trois tubes dela 'seconde serie, qui servira pour
la determinat~on de l'index hemolytique, re90it tout d'abord
0,1 de serum frais a examiner. Puis on ajoutedans chacun de
ces derniers tubes, respectivementO,3, 0:6 etO,9 d'emulsion
d'hematies de mouton a 5 p. 100.
On agite et on porte a l'etuve a 37 0 pendant une heure et
demie. On ajoute ensuite aux trois premiers tubes des quan-
tites d'hematies de mouton plus ou moins grandes, selon
que l'index hemolytique est fort ou faible.
Si 0,1 de serum humain frais n'hemolyse que 0,3 d'hema-
ties de mouton, au maximum, on ajoutera, a la fin de la
reaction, a chacun des trois premiers tubes, 0,1 d'hematies
de mouton au 1}20.
Si 0,1 du meme serum h~molyse 0,6 de globules (index
hemolytique egale 6), on ajoutera 0,2 d'hematies aux trois
premiers tubes.
Si enfin 0,1 du serum humain hemolyse 0,9 de globules,
266 REACnONS HUMORALES ET HEMA1'lMETRIE
on ajoutera aux tubes de la reaction Ie tiers, soit 0 cc. 3

d'hematies de mouton.
Apres avoir agite les tubes additionnes de la quantite con-
venable de globules rouges1 on les porte a l'etuve ~ 370,
pendant une demi-heure.
Au bout de ce temps, si Ie contenu -des deux premiers
tuhes n'est pas hemolyse, htDdis que Ie ttoisieme (tube te-
moin) est hemolyse, la reaction doit elre consideree comme
fo1'lement pasitive.
Elle doit etre consideree C01ume positive s'il y a hemo-
lyse dans Ie premier et Ie troisieine tube, et don dans Ie
deuxieme.
Enfin, elle est negative si 1'11emolyse s'est produite dans
les trois tubes.
II arrive parfoi5 (dans 12 p. 100 des cas) que l'hemolyse
ne se produise dans aucun des tubes de la deuxicmc serie.
Cela signifit! que l'index hemolytique eSt inferieur it 3, c'est-
a-dire qile Ie serum ne renferme pas asseztl'ale:!d-ne normale
(cas assez frequent), oU de sensibilisatrice normale ahti-
mouton. soit de l'une et de 1'autre, pour la quantite de glo-
bules rouges employee.
Cette proportion peut etre ramentie a 5 p. 100, selon Mu-
termilch, elant donM que In plus grande partip des serums
qui n'ont aucun pouvoir hemolytique v,is-a-\,is de 0,3 de
globules de moutol1 sont cepel1dant doues d'un pouvoir !:e-
molyHque !;uffisant pour dissoudre au moins 0,1 des memes
herul1ties.
On tontinrlEl done l'exan1en M ajOl1taht 0,1 de globules
rouges dans les trois tubes dllla reaction.
I;orsque Ie pvuvoir ltemolytitJ:ue.du serum ~st ndl, 011 est
oblige de tecbul'ir it ht ~aciiotl de fixation au moyen du 56-
ru.tb inactive d~ Ctl.l1t1lm~ et Masso!.
CHAPITRE XXIII
SERO-REACTION DE L'ECHINOCOCCOSE-
On emploie, comme antigene, Ie liquide de kyste hyda-

tique recdeilli aseptiquement. On utilise de preference des
kystes du foie ou des poum<ms de breuf ou de mouton que
I'on peut se procurer facilemenf dans les abattoirs.
On prcleve ascptiquement Ie liguide hydaHque par ponc-
tion du kyste, en steritisant la paroi au moyen d'un fer porte
au rouge. Le liquide est reparti en tubes scelles qui sont
conserves a la glaciere.11 peut lservir pendant plusieurs
anii~es, {ant qu'il consi'!rve sa Ii!i1pidite. Les tribes sduilIes
se tt-oublen!, degagertt une mauvaise odeur et doivent etre
rejetes.
Les extraits alcooliqdes ott etheres de liguide hydatique,
moins constants que les Hquides purs, sont abandonnes.
Mais comme les liquides hydatiques ont un pouvoir anti-
g~ne trfls vrtt-ianie, il est indispensable d'ett faire tin titt-age
prealable en presence d'un_serum connn pout ne edrlstlrver
que les plus actifs.
Les liquides hydatiques d'origine animale ne sont jamais
spontanement _eIDPechants au-dessous de Ia- dose de 0 cc. 8.
II faut donc toujours se tenir au-dessous de ceUe dose.
Au contraire. les liquides d'origine humaine ne peuvent
ctre 'emIHoyes que dans des !imites tres rcstreintes, en rai-
son de l'ecart minime elHre leur pouvoir antidomplemen-
taiN~ ptc:>pre (fl la dose de 0 cc. 1) et leur pouvoir fixateur
specifique (a la dose de 0 cc. 05).
Methode de Weinberg.
Weinbt!I'9 recommaI1de de faire toujours paraiIelement Ia
reaction avec Ie serum a eprodver non chauffe et chauffe,
car Ie sHum chauffe it 56 0 perd une partie de ses anti-
corps: la moitie et meme les deux tiers.
268 REACTIONS HUMORALES ET HEMATIME:rRIE
Serum non chauffe.

On utilise deux doses ,d'antigene, 0 cc. 1 et 0 cc. 2, en
'presence d'une dose fixe de serum, 0 cc. 1. Un troisieme
tube de serum sert de temoin.
a) Methode de Weinberg all serum non chauffe.
,Tubes -----------
1 : 1 heure It i'etuve it 37.
Serum
non
chauffe
r Eau
Antigene )hy.~io-
oglque
II : 30 minutes d'etuve it 37'
Globules de mouton Ii 5 p. 100
- - - --- - - - - -
I 1 ' 0,1 cc. 0,1 cc. 0.2 cc. dans 1: 0,1 cc. dans 1': 0,2 cc
2 2' 0,1 .. 0,2 " 0,1 » », 2 : 0,1 » )) 2': 0 2 »
T,ST'S' 0,1 » 0,3 T. S: 0,1 » » T' S'; 0,2 ..
" »
Ayec Ie meme serum, op fait 2 rangees de 3 tubes, car

on interprHe les resultats d'apres la force hemoly'tique des
serums.
Apn':s un contact d'une heure a l'etuve a 370 , on ajoute
o cc. 1 de globules dilues it 5 p. 100 dans la 1re rangee et
o cc. 2 'dans la 2e rangee.
En meme temps, on determine.- l'index hemolytique du
serum a eprouver, c'est·a-dire sa teneur en sensibilisatrice
hemolytique naturelle, de la fayon suivantte :
Index bemol'ytique du serum.
Tubes
a
Serum
eprouver
Globules de mou'ton
il5 p. 100
I E,w
physiologique
I
1 0,1 cc. 0,1 cc. cc.
2 0,1 » 0,2 » 09 »
3 0,1 » 0,3 » 0,8 »
4 0.,1 » 0,4 » 0,7 »
5 0.1 » 05 " 0,6 )J
6 0,1 » 0,6 0,5 )J
7 0,1 » 0,7 ") 0,4 ))
'8 0,1 )J 0,8 )J 0,:-1 )J
9 0,1 » 0,9 )J 0.2 )J
10 0,1 » I,D ) 0,1 »
/'
SERO-REACTION DE L'ECHINOCOCCOSE 269
On lit les resultats apres r heure d'etuve a 37 0 • Si la

teneur du serum en hemolysine est faible, c'est-a-dire si
o cc. 1 de serum hemolyse. une quantite de globules
inferieure a 0 cc. 5, on ne tient compte que des resultats
donnes p.ar la Ire rangee de tubes (0 cc. 1 de globules).
Si la teneur du serum en h~molysipe est elevee, c'est-a-
dire si 0 .cc. 1 de serum est capable d'h~molyser 0 cc. 5 et
plus de globules, on neglige les resultats donnes par la
1re rangee (0 cc. 1 de globules) et on lit Jes resuJtats donnes
par la 2e rangee (0 ee. 2 de globules).
b) Methode de Weinberg all serum challffe.

Dans ,cette methode, qui complete la preeedente, on
emploie une dose fixe : 0 cc. 3 de serum a eprouver,
chaufTe 30 minutes a 56, et une dose fixe d'alexine diluce de
moitie': 0 ee. 1 en presence de doses croissantes d'antigene,
o cc. 2,0 cc. 3, 0 ce. 4. .
II: 30 minutes ctu\'e
--
I: 1 heul'c etuve it 37- il 37°
Tubes Serum a Antigen. Alexine

-------- -
Enu
----~-
. eprouver,
chauffe
hydatique diluee
it 1/2
physio-
logique
Globules dilues
:\ 5 % bensihilises
- - - --- ---
I 0,3 cc 0,2 CC. 0,1 cc: 1,4 ec. I cC.
2 0,3 }) 0,3 0,1 » 1,3 » I »
.
I)
3 0,3 » 0,4 » 0,1 » 1,2 » 1 »

Temoin serum. 0,3 » 0,1 » 1,6 » 1
Temoin nnt. A 0,4 » 0,1 » 1,5 » 1 »
A 2 0,6 » 0,1 » 1,3 » 1 )'
A3 0,8 » 0,1 » 1,1 » 1 »
Temoin alexine. 0,1 » 1.9 » 1 »
On double les doses d'antigene : 0 cc. 4, 0 ce. 6, 0 ec. 8,

pour les tubes temoins antigene, afin d'climiner Ie pouvoir
antieomplementaire.
Le systeme hemoly,tique est constitue par des globules
de mouton et un serum hemolytique lapin-mouton.
On sensibilise prealablement les globules en ajoutant, Ii
la dilution 3e globules au 1/20, la quantite de serum
hemolytique suffisante pour produire une hemolyse rapide;
puis on complete avec]a quantite d'alexine indiquee.
270 REACTIONS HUMORALES ET H&MATIMETRIE
Les rea!!tions positives faibles avec Ie serum chauffe ne

sont a retenir que si Ia reaction se montre franchement
positive avec Ie serum non chauffe.
Si les resultats des deux reactions sont completement
opposes. il vaut mieux conclure pans Ie sens negatif. it
tuoins qu'on n'obtiltnne des resultats diiferents avec l10
autre antigene.
CH;1fITR1j1 XXIV
REACTIONS DE FLOCULATION POUR LE DIAGNOSTIC
DE LA SYPHILIS
A. - Methode de Sachs et Georgi.

On emploie, co~me 'antigene, u'n: extrait de creur de
breuf cholesterine, de c<cur de cobaye ou de foie syphi-
Iitique.
Cet antigene· peut etre prepare de If! fa!;on suivante :
a) 1 gra,mme de coour frais +5 centimetres cubes
d'alcool ;
b) 100 centimetres cubes d'extrait· + 200 centimetres
cubes d'1l1cooI ;
c) 13 cc. 5 de cholesterine ~ 1 %.
bet c varient suivant les echantillons.
Technique. - 1 centimetre cube de Ia dilqtion au 1/10,
dans I' eau physioIogique, du serum chauffe 30 minutes !I 56 0
est mis eO'presence sie 0 cc. 5·d'antigene djIue 6 fois.

Tubes temoins: serqm positif, serum negatjf, antigeqe +
eau.
Les tubes sont laisses 2 heures a 37 0 et 18-20 heures it la
temperature de Ia chambre, ou 18-20 heur~s a l'etp.ve.
La fl~culation est observee a l'agglutjnoscope de Kuhn
+ + ; + +;
et W oithe et appreciee suivanJ: Ies degres : -f
+;+;-.
B. - Methode de Dreyer et Ward (Reaction Sigma).

Ces auteurs ont publie en 1921 une methode de sero-
reaction pour Ie diagnostic de Ia syphilis qui est hasee
272 'REA'CTIONS HUMORALES ET HEMATIMETRIE
comine ceIle de Sachs et Georgi, sur la floculation, Leur

but a ete d'et~blir une methode simple n'exigeant ni alexine
ni systeme hemolytique. PQuvant s'effectuer toujours
dans les memes conditions, et permettant d'apprecier la
quantite d'anticorps et de I' exprimer en unites par centi-
metre cube, lIs ont, depuis lors, legerement modi fie leur
technique en prolongeant Ie sejour des tubes au bain-marie,
mais Ie principe de la methode n'a pas change.
ANTIGENE, - C'est un extrait cholesterine de creur de

veau mis en suspension -dans l'eau physioI.ogique, it deux
concentrations differentes.
a) L'extrait alcoolique de creur de vean est prepare sui-

vant la methode de Borde! et Ruelens :
100' g~a~mes de ~reur' de veau depouiIle de sa graisse
sont coupes en petits' morceaux et mis en contact avec
125 centimetres cubes d'aI~ocil ordinaire it 94, 96 p, 100,
Ce melange est abandonne pendant cinq jours it la tem-
perature du Iaboratoite', puis l'alcool est filtre. Le residu
est desseche it 37° pendant 24 heures. On ajoute 200 centi-
metres cubes d'acetone pur et .on,laisse Ie melange pen-
dant sept joms it 20 0 • L'acetone est alors filtre et Ie residu
est de nouveau traite p';Jr 100 cent,i'inetres cubes d'acetone
pend~nt une journee., On elimi~e l'acetqne par filtration et
on desseche Ie resi(lu a ;200 pend\int deux heures. Qn
aJoute 200 centimetres cubes d'alcool it 96°. Le melange est
laisse it 20· pendant dix jOUl;S, puis filtre sur papier.
Le filtrat limpide et jaune d'or est pret a etre employe, II
contient les substances du creur de veau insolubles dans
l'acetone, solubles dans l'alcool.
Conserve it l'abri de la lumiere et a la temperature du
Iaboratoire, en flacon bl)uche it l'emeri, il reste limpide pen-
dant longtemps.
byLa solution alcoolique de cholesterine est preparee en

di~solvant 1 gramme de cholesterine pure dans 100 centi-
metres cubes·d'alcool absolu. ,
c) L'euu physioIogique est preparee ,en dissolvant

9 grammes de chlorure de sodium dans un litre d'eau
REACTION DE FLOCULATION BT SYPHILIS 273
distillee, recemment preparee et sterilisee immediatement

it l'auto'clave.
Les auteurs utilisent comme anti gene deux suspension~
es eau physiologique~ a des concentrations differentes, de
cet extrait de creur choiesterine, preparees de Ia fac;on sui""
vanIe :
A 5 centimetres cubes d'extrait alcoolique de creur de
veau, ajouter dans un verre bien sec, 0 cc. 25 de solutiorl
cholesterinee. Pour Ia suspension a, prendre 1 centimetre
cube de ce melange et 10 centimetres cubes d'eau physiolo-
gique; pour Ia suspension b : 1 centimetre cube de ce
melange et 34 centimetres cubes d' eau physiologique.
Dreyer et Ward attachent une tres grande importance
a Ia fac;on dont Ie melange (extrail: alcaalique-choles-
tcrine) est incorporc a l'eau physiologique. lls ant cons-
truit un appareil a siphon qui permet de faire cduler
goutte a goutte I' eau physiologiqoe dans Ie cyIibdre de verre
qui contient Ie centimetre cube d'extra:it alcaaIique de cteur
de veau cholesterine. Pour avoir des resultats toujouts coriJ-
parables, l'eau physiologique doit tomber dans Ie recIpient
d'une hauteur de 36 centirnetres dans un temps co'bstarft. Pour
Ia suspension d,les 10 centimetres cubes d' eau physio}ogique
doivent s'ecouler en 1 minute 25 secondes ; pour Ia suspen-
sion b, Ies 34 centimetres cubes d'eau physiologique doivent
s'ecouler en 4 minutes 30 secondes.
SERUM. - Les serums a eprouver sont chaoffes it. 550,

au bain-marie, pendant une heure et demie.
DISPOSITIF DE LA REACTION. - On utilise 9' tubes

serums + antigene et 2 tubes temoins antigenes. Les
quantites de serum et d'antigene sont mesurees a I'aide
d'une pipette compte-gouttes a tetine, de n"reyer. Oans Ie
tableau ci-dessous, Ies quantites respectives de serum,
d'antigene et d'eau physiologique, qui entrent dans Ia r~ac
tion, sont exprimces en gouttes :
MICROBIOLOGIE 18
274 [lEACTJONS HUMORALES ET HEMATIMETRIE
Numeros Gouttes Gouttes Dilution finnJe

d'eau Gouttes de suspension
des It I"quell.
tubes physiologique de serum d'"ntigene "Sit Ie serum
1 0 20 pur 6 suspension a 1( 1,25

2 0 10 » 15 suspension b, 1( 2,5
:l 5 5 » 15 - 1/ 52
4 8 2 » 15 -- 1/13,1
5 9 1 » 15 - 1(264
6 0 10 dil. 1/20 15 - 1/46
7
8
5
8
5
2
»
»
15
15 -
- 1(92
1(232
9 9 1 » 15 - 1/462
Le tube temoin antigime a contient 20 gouttes d'eau phy-'

siologique et 6 gOllttes de Ia suspension a.
Le tube temoin antigene b contient 10 gouttes d'eau phy-
sioIogique et 15 gouttes de la suspension b,
Apr~s chaque prei(wement, Ia pipette est Iavee a l'eau
dis\iUee et sechee soit avec l'acetonc, soit avec I'alcool
suivi de l'ether.
Les portoirs contenant les tubes sont places au bain-
. marie a 37 0 OU ils doivent sejourner pendant 20-22 heures,
Les deux tiers de la colonne liquide des tubes doivent eire
immerges dans l'eau. Apres ce sejour de 20-22 heures au
bain-marie a 37 les tubes sont Iaisses une dizaine de
Q
,
minutes a la temperature du laboratoire, On \ procede alors

a)a lecture en disposant un ecran sombre derriere les tubes.
EXPRESSION DES RESULTATS EN UNITES. - Les termes
employes par les auteurs pour exprimer' les ditIerents
degres de floculation sont :
Fioculation totale ;
Stand'ard-floculation ;
Trace de floculalion ct tloculation nulle,
Dans la floculation totale, Ie liquide est devcnu clair: de
gros floculats tombent au fond du tube,
Dans la floculation standard, la floculation peut etre
constatee a l'~il nu : les petits floculats sont reglllierement
distribues dans la masse du liquide, tous de meme dimen-
sion et bien separes les uns des antres.
Quand il y a trace de floculation, les floculats sont tres
fins et ne peuvent etre aper~us qu'a la loupe.
· ,.-
REACTION DE FLOCULATION ET SYPHILIS 275
Pour exprimer les degres de floculation entre ces quatre

termes, on peut leur accoler les segnes + ou - .
Le calcul de la teneur en unites d'un serum est base sur
Ie principe suivant : « La quantite d'un serum qui, ramene
au volume de 1 <-:entimetre cube avec de l'eau physiolo-
gique, determine la floculatio,n « standa_rd » avec Ia suspen-
sion d'antigene b, apres un sejour de 7 heures a 37°, est con-
sideree comme rtmfermant 4 unites. ))
Comme souvent aucun tube, dans lesseries examinees, ne
prt!sente la floculation « standard I), Ie cal cuI des unites doit
etre fait d'apres les tubes OU Ia floculation s'est produite
a d'autres degres. On se sert, pour cela, d'unl;' table qui
exprime les relations numeriques existant entre les autres
degres de floculation et la floculation « standard ».
Comme la sensibilite des extraits de c<eur peut Ivarier.
1a valeur de chaque extrait est exprimee par un coefficient
qui represente sa sensibilite par rapport a celIe d'un extrait
de cccur etnIon.
Enfin la duree du sejour des tubes au bain-marie eiant
portee de 20 a 22 henres et meme, si eel a est necessaire, de
40 a 44 heures, Ie coefficient de chaque extrait sera corrige
par un coefficient de temp~ ~ 1,56 pour un sejour de 20 a
22 heures au bain-marie et 2,6 pour un sejo'ur de 40 a 44
heures...
Pour ]a pratique courante, une table numerique a ete
dressee, qui tient compte de tous ces coefficients, a l'excep-
tion du coefficient de suspension qui. naturellement, varic
avec l'extrait de crnur employe.
Le cal cuI des unites d'anticorps par centimetre cube se
fait immediatement, grace a Ia tabl~ suivante. On prend
Ie nombre se rapportant au degre de floc~Iation observe
dans Ia colonne du tube correspondant et on Ie muitiplie
par Ie coefficient de sllspensiq'n de l'extrait de crnur
employe.
'276 REACTIONS !J,UMORALES E1' ilEMA1'IME:1'hIE
Table pour 20-22 heures de sejour au 'bam-marie.
N umeros du tube
Degf"
d. £loculation
1 :l 3 4 5 6 7 8 9
-- - -- -'_ -- -- -- --' --
Total. ..•••. 1,60 3,20 6,7 1&,8 33,9 59, 118 298 592
'rotl1l- .•.. 1,29 2,58 5,4 135 27,2 47,5 9"5 24(1 477
Stand.lt- .... 1,01 2,02 4,2 10,6 21,3 37,2 7( 187 373
Sta'nd ....... 0,80 1,60 3,3 8.4 16,9 29,5 59 149 ~96
Stand- .•.. 0,61 1,3'5 28 7,1 14,2 24,8 49~5 125 248
Trac'e + .... 0,57 1,14 2,37 6,0 12.6 20,9 42 1&6- 210
Tl'ace .•..... 0,4& 0,96 2,00 5,0 lO,2 17,7 35,4 89 178
Trace- .... 0,42 0.83 1,73 4,4 8,8 15,3 30,7 77 154
Trace ......• 0,33 0,66 0,37 3,4 6;9 12,1 24,2 6f i:t1
Si, au bont de 20 a 2'2 heures, nn setUill bl'! cl1ttftenf que

1,5 unites ou moins, il est remis au bain-marie pour une
trt}ITveUe pe'l'iode de 20' it 22 heutes. On lit ~ddt!; les t'esul-
fats sur les deux pretnier's f(l'bes et les unites qu'i1s co'rt..
fiennent sont calculees d'aprbs la table sUIvante, en Se rap--
pelant que les chiffres doivent etre multiplies par Ie coeffi ..
dent de suspension de l'extrait de Cc;l!ut elhplOj"e,
.
I
,
N um"ros des! tubes
;1
:
Degr"
de floculatioll - 1 2 3
1
i
I
Totale ................ 0,83 1,65 3,44
Totale- .....••....•.. 0.70 1,40 2,9:l
Stand -I'- ............. 0,58 1,15 2,4u
: Stann. ............... 0,48 0,.96 2,aO
Stand - .............. O,4~ 0,85 1,76
i Tra'Ce + ............. 0,3 0,75 1,5'6
,
PRECAUTIONS A OBSERVER. - Si un serum infecte donne

'une reaction negative, Ie resultat peut etre considere comme
'exact, car un serum a reaction positive qui s'infecte ne
'donne jamais une reaction negative. Au contraire, si/un
'serum infecte donne une reaction positive,l'experience doit
l etre recommencee avec un nO,uvel echantillon.
/'
REACTION DE FLOCUJ-ATJON'IBT SYpHILIS v,n
II ne flJl}.t p~s qjOijter au serum des antisl'lptiques, comme
l'qs::iqe ,pij¢nique, Ie fonpol, etc" qui p~uvent fnusser Jes
resJlltats.
TOlls les tubes .cJoivent etre tres minutiellsement laves a
l'eau distiliee, car une trqce q'acide peut provoqUl'lr une flo-
culation OilU& le m.elange serum-antigene.
INTERPRETATLoN DES RESULTATS. - Les serums eonte-
nant moin"s d'une unite sont consideres comme negatifs.
Les serums con tenant plus de 1,5 unite sont consideres
comm{) positifs. Les serums eontenant de 1 a 1,5 unite ne
sont consideres eomme positifs que dans les cas reconnus
de syphilis.
Avec Ie Iiquide cephalo-raehidien, la reaction est consi-
deree comme positive avec plus de 4 unites et negative avec
moins de 1 unite.
D'une fa<;qn generale, les auteurs ont trouv!! que les cas
non traites de syphilis congenitale presentent dans leur
SerUIl! une teneur clevee en anticQrps de 50 a 1.000 unites.
Au contraire, les cas non traitcs a Ia periode primaire, 0].1
les cas traites aux periodes primaire, secondaire et tertiaire
ont un SeFUm p~u riche en unites d'al1ticorps ou donnent
une reaction negative. Le liquide cephalo-rachidien contient
peu d'unites d'anticorps comparativement au serum.
••*
C. - Methode de Dujarric de la R.iviere et GalleFRlHI.
Ces autflurs ant penEle que la flooulation qui se prodl1it

Jorsqu'Qn melange un !1erum syphilitique avec d~s el'traits
alcooHqnes d'organes deviendrait phl& apparente si ron
ajoutait flU melal1ge upe SUQstflnce qui jQu'erait Ie role de
sensibilisatellr. Ils ont choi!1i la teinture de benjoin prepartie
suivilnt Ill- teohniqne d,e Guillllin, LarQche et Lechelle :
1 gramme qe res\ne de henjoin de Sum~tra pans 10 c. c.
d'alcool absolll; lais~e]l macerer 48 heur~s i filtrflr Sl1r papi~r
(6t non decanter) pour avoir un liquidfl absolument limpide,
Dilns un tube a e!lsai 'parfa'itement propre, on melange
1 partie de solution lllcoolique de benjoin de Sumatra pre.,
paree comme il vient d'etre dit. avec 5 parties d'antigene de
Bordet et Ruelens, on agite : Ie melange est tres homogene.

Dans un tube a hemolyse plus grand que les tubes ordi-
nairement en usage (12 cm. hauteur X 12 mm. diametre) et
parfaitement propre, on verse' 5 cc. d'eau physiologique
a 9 p. 1000, puis 1/10 de cc. ciu melange initial, on agite;
la suspension est homogenc, on ajoute alors 0,8 cc. ou
1 cc. du serum a examiner prealahlement chauffe pendant
30 minutes a 55°. On meIf ll1ge soigneusement, on lit les rt\-
sultats apres 3 heures d'etuve it 37°. La floculation est tres
apparente, visible facilement sans l'aide d'un appareil d'op-
tique. D ne autre emulsion, faite dans les memes- conditions,
mais sans serum, servira de temoin .
..
D. - Methode syphilimetrique de Vernes.
Lc point de depart physique de la methode est Ie sui-
vant :
I. - Dne suspension de granules tres petits (de l'ordre
du millionieme de millimetre), dans un liquide approprie,
possede des proprietes qui varient suivant Ie poids de la
matiere ,en suspension et son degre de division.
II. - Le melange d'une suspeg_sion de granules tres
petits avec du serum humain peut produire un trouble; ce
trouble augmente au diminue selon qu'on1fait varier; a) la
proportion du serum dans Ie melange; b) Ie nombre et ]a
dimension des granules en suspension '; c) les conditions de
temperature.
La suspension e~t faite avec un extrait alcoolique de coour
de cheval prepare de la fac:;on suivante (perethynol) :
Prendre un coour frais. Hacher ce qui est muscle; mettre
Ie hachis dans l'aicool absolu et laisser en contact nne heure
en agitant de temps en temps: exprimer, mettre en couche
mince et dessecher a 37°. Broyer finement au moulin.
Epuiser al'appareil de Soxhlet 30 grammes de cette poudre
(melee a 60 grammes de sable lave et epuise a I'alcool) avec
250 centimetres cubes de perchlorure d'Mhylcne (distille
entre 115 0 et 121°) et dans les condition)s suivantes ; Ie
ballon qui contient Ie perchlorure est chauffe au bain-marie;
la douille de l'appareil est surmontee d'un refrigerant de
Vigreux relie a une pompe :i vide (boucher au liege, luter it
REACTION DE FLOCULATION 'ET SYPHILIS 279
la paraffine, etc.). Distiller Ie perchlorure sans depasser

350, et de fa<;on it produire 40 siphonnements en 6 heures et
demie (bain-marie 60 0 it 65 0 , pression 4 centimetres cubes).
Seeher la poudre ainsi traitee it 37°, puis l'epui~er de nou-
. veau it l"appareq de Soxhlet avec 200 centimetres cubes
d'alcool absol u dans les conditions suivantes : distiller au
bain.marie sans depasser 30 0 et de fa<;on a avoir 30 siphon-
nements en 5 heures (bain-marie 60° it 65 0 , pression 5 it 6
centimetres de 'mercure). Recueillir Ie liquide du baIlon,
laisser reposer 24 heures, filtrer sur papier. Determiner
l'extrait sec en portant 10 centimetres cubes de liquide it
60 0 pendant 8 it 9 heures jusqu'au point constant. Ramener
au titre de 15 grammes d'extrait sec par litre, soit par addi-
tion d'alcool, soit par evaporation dans Ie vide au-dessous
de 30°.
Technique de la reaction, - Le serum it eprouver doit
.etre chauffe it 55 0 pendant 15 it 20 minutes. La temperature
doit etre rigoureusement contr6lee. .
Les manipulations doivent se faire it une temperature
d'environ 200 , les variations de temperature pouvant avoir
un effet sur les resultats de l"experience.
Le perethynol est dilue it 1 pour 6,5 (1 + fi,5) dans l'eau
distillee au moyen de l'appareil melangeur (Leune, cons-
tructeur). Cett'e dilution se fait en deux temps;
1° Dilution au tiers (1 de perethynol + 2 d'eau). Dans un
verre cylindrique it fond plat (30 millimetres de diametre
interieur) introduire 6 cen.timetres cubes d'eau bidistilIee,
descendre l'helice (15 millimeires de diametre) dansleverre,
de maniere qu'elle soit entierement recouverte d'eau sans
toutefois qu'elle touche Ie fond. Mettre en marche Ie
~oteur et, en suivapt les indications du tachymetre fixe
sur l'appareiJ, agir sur Je rheostat, jusqu'it ce que la vitesse
de rotation de l'heJice soit de deux cents tours it la minute,
puis au moyen de la pipette de 3 centimetres c,!-!bes, dont
l'ecoulement est regIe par un robinet special it un centimetre
cube par minute, laisser couler la dose de perethyiiol. La
position de la pipette doit etre telle que les gouttes tombent
dans l'eau d'une hauteur de 3 it 4 centimetres, que Ie
capillaire inferieur soit vertical et qu'il ne touche ni les
parois du verre, ni la tige de I'helice.
2" Pour amener la suspensioll it sa dihltion definilivt)
280 REACTIONS HUMORALEB ET HEMATIMETRIE
(1 p. 6,5) enlever In pipette et verser en filet mince 10,5

centimetres cubes d'eau bidistillee ; alors seulement, arre-
ter l'agitateur. '
Pour ia preparation de cette suspension, on peut
employer )-me pipette de 6 centimetres cubes (doubler les
quaI}tites d'ean et se servir d'un verre de 40 millimetres de
diapHHre et d'une helice de 35 millimetres), mais on ne peut
oper~r avec moins de 3 centimetres cuhes de perethynol,
car au debut de Ia dilution l'eau ne couvrirait pas I'helice ;
4e pIps, ~ela entrainerait une augmentation d'opalescence_ de
la suspension obtenue, et par suite fausserlj.it les resultats.
L,a suspension doit etre employee dans les deux heures
qui suive'nt s~ prep aration ~t seulement apFeS avoir repris
la temperature du laboratoire, Ia dilutioJl ayant produit un
echauffement .
. Apres avoir retire les serums du bain-marie a 55°, les
laisser refroidir dans Ie laboratoire pendant cinq a dix
minutes. Pour chaque examen, deux tubes seulement sont
indi'spensables : un tube a perethynol et un tube tcmnin;
cependan t il est preferable, toutes les fois que Ia quaRtit~ de
serlf)ll sera s,?-ffisante, de preparer des tubes en double,
com me controle.
Avec un rheometre regIe a 0,4 centimetre. <mbe, distri-
buer 0,8 centiIlletre cube de serum E-2-cylindrees) dans Ies
quatre f)lbes. Ces distributions doivent etre faites dans Ie
laboratojre a teIllpera~ure con stante (200) ou, ~out au moins,
les tubes deyront y eire portes aussitOt apres.
-Trente minutes apres la fin ~u chauffage, ajouter, dans
deux des tubes 0,4 'centimetre cube de la suspension de
perethynol e~ dans les deux autres (temoins) 0,4 centime-
tre cube d'eau hidistillee alcoolisee f;\ 1 pour 6,5 d'alcool
absolu.
Agiter soigneusement les porte-tubes plusieurs fois s'il
est h'e~oin pour assurer Ie melange intime des deux Iiquides
(a ce moment de l'experience ne pas boucher les tubes avec
Ie dqigt pour les agiter par renversement).
Boucher les tubes au caoutchouc et les placer pendant
qU,atre heures a 25° dans un bain-marie.
Les lectures des result,ats se font dans Ie laboratoire a
telllperature con stante ; on qetermine en densite optique, a
l'aide du photometre, l'absorption du tube a perethynol et
REACTION DE FLOCULATION ET SYEHILIS 281
celIe du tube temoin ; Ie temoin parmettantdl' tenir compte

de Fopalescence propve du s€rum at de sa coq.leur (presence.
des pigments biliai);'es ou d'hemoglobine), la difference des
deux lectures mesure bien Ie trouble forme par Ie melange
du serum et du per.ethynol (absoq~tion du precipite en SUSr
pensiop). Cette differellli:e, exprimee ~n centiemes, est ins,..
crite sur Ie dossier du malade. Les mesures repetees avec
les tubes dt) cOI1troie doivent donner Ie meme vesultat (ii
trois centiemes pres). Pour les serums normaux, Ia diffe-
rence est nuUe pp. au plus egale a 6 .
..
E. - :geaction de Gate et Papacostas.
Formol-gelification des serums syphilitiques.
Ajouter :) 1 centimetre c!J.P~ de S~rUl1J tref) ~Iair deux
ou trois goultes de formol du commerce, et abandonner Ie
tout 24-30 heures a la temperature du ]aboratoire. Les
senj"ms a Wassermann positif forment une gelee, alors que
]es SeFUmS a Wassermann neg!ltif restent ]iquidhs. Cette
reaction concorde avec celIe de WasseFmann dans 85 %
des cas.
La Feaation est independan~e de l'ina.clivatjon des serumll
pap Ia chaleur. Les serums peuveOt etre anciens de 48 heures
ou meme plus slils ne sont pas contamines.
F. - Re~ction de la meiostagmine.
Lorsqu'on ajoute a un serum dilue un extrait alcooIique
de microbes, la tension superficielle cst abaissee comparati-
vement a un melange SCTum dilue et eau pnysiologique. La
diminution de ]a tension superficielle, faible ou peu mar-
quee pour les serums normaux, cst d'autant plus intense que
les serums aontiennent plus d'anticorps vis-ii-vis de Fextrait
alcoolique antigene. On ]a mesure par l'augmentation du
nombre de gouttes compte au stalagmomBire de Traube.
Pour Ie diagnostic de la fievre typholde. par exemple, on
emploie une serie de tubes contenant 9 centimetres cubes
de serum dilue au 1/20; dans Ie Ifr tube on ajoute 1 centi-
metre cube d'eau physiologique a 8,5 p. 1.000 (temoin) ;
dans Ie 28 , on ajoute 1 centimetre cube d'extrait aicooIique de

lmcilles lyphiques dilue au 1/10; dans Ie 3", 1 'Centimetre
cube uu mime exlrait dilue au 1[100 ; dans Ie 4", 1 centi-
metre cube du meme extrait diIue au 1/] .000 et dans Ie 5",
1 centimetre cube du meme extrait dilue au 1/10.000. On
melange intimement par agitation. On compte les gouttcs
immediatement au stalagmorpetre ou apres 2 heures a 37°.
Suivant Ia dilution d'antigene, Ie nombre de gouttes aug-
mente de 1,8 it 3,7.
La reaction de la meiostagmine a ete appliquee au dia-
gnostic d'un grand nombre de maladies : tuberculose,
syphilis, echinococcose, cancer, etc., mais ses resuitats
sont discutabies.
..
G. - Reaction du benjoin colloidal.
Cette reaction ne peut etre recherchce qu'avec Ie liquide
cephalo-rachidien. N' employer que de la verrerie tres propre,
lavec dans l'acide chlorhydrique a 2 % dans reau, puis
rincee deux fois it 1'eau distillee.
Les reactifs sont : 1 0 une solution de NaCl chimiquement
pur a 0 gr. 10 p. 1.000; 2 0 1 gramme de benjoin (resine de
benjoin pure dans 10 centimetres cubes d'alcool absolu) ;
laisser en contact 48 heures jusqu'a dissolution, decanter.
Pour la reaction, prelever 0 cc. 3 de la solution alcoolique
claire. qui sont verses lentement dans 20 centimetres cubes
d'eau distillee tiedie it 35°.
Avoir soin de n'employer que de l'eau recemment dis-
tillee et une suspensiol1' de benjoin fraichement prepa-
ree.
Technique originale : 16 tubes.
1 0 Tube 1 ; 0,25 centimetre cube de la solution de NaCl ;
tube 2 : 0,5 centimetre cube de la solution de NaCl ; tube
3 : 1,5 centimetre cube de la solution de NaCI ; tubes 4 a
16 : 1 centimetre cube de la solution de Nae!.
2° Ajouter Ie liquide cephalo-rachi.dien dans la propor-
tio!). suivante: tube 1 ! 0,75 centimetre cube; tube 2 :
0,5 centimetre cube; tubc 3 : 0,5 centimetre cube.
Prelever dans Ie tube 3 (1,5 centimetre cube de solution
NaCI + 0,5 centimetre cube de liquide cephalo-rachidien)
REACTION DE FLOCUL:ATJON ET SYPHILIS 283
1 centimetre cube du melange,. que I'on reporte dans Ie

tube 4 en brassant, et ainsi de suite jusqu'au tube 15. Reje-
ter Ie centimetre cube provenant du tube 15. Le tube 16 ne
re~oit pas de Iiquide cephalo-rachidien.
30 Dans chacun des 16 tubes, verser 1 centimetre cube de
Ia suspension aqueuse de benjoin. Le tube 16 sert de temoin.
Laisser a Ia temperature du Iaboratoire et lire les resultats
aprcs 12·heures.
Technique simpli{z¢e : 5 tubes, pas d'eau chloruree, de
l'eau distillee :
10 Tube 1.: 0,5 centimetre cube d'eau distilIee ; tube 2:
1,5 d'eau distiIIee; tubes. 3 a 5 : 1 centimetre cube d'eau
distillee.
2 0 Ajouter Ie Iiquide cenhalo-rachidien. Tubes 1 et 2 :
0,5 centimetre cube.
Dans Ie tube 2 prelever 1 centimetre cube du melange et
porter dans Ie tube 3 ; proceder de meme pour Ies tubes
3 et 4, mais rejeter Ie centimetre cube preleve dans Ie tube
4. Le tube 5 ne re90it pas de liquide cephalo-rachidien.
Les dilutions du.Iiquide cephalo-rachidien sont les sui-
vantes : 1/2, 1/4, 1/8, 1/16.
3 0 Verser dans chacun des 5 tubes 1 centimetre cube de
·Ia suspension aqueuse de benjoin. Lc tube 5 sert de temoin.
Laisser it la temperature du.laboratoire et lire les resultats
apres 12 heures. .
Resuilais. - Dans les tubes positifs, la precipitation d u
benjoin est totale, Ie liquide Cflt clair. La resine est sedi-
mentee au fond du tube. Dalls les tubes negatifs, Ie liquide
reste trouble. II n'y a pas de precipite.
Dans les reactions positives. la precipitation s'observe
dans les 5 premiers tubes (d' Oll l'emploi de la technique sim-
ptifiee pour un diagnostic rapide) et peut meme s'6tendre
aux tubes \) et 10.
Le liquide cephalo-rachidien normal donne souvent une
precipitation dans les tubes 6, 7, 8, jamais <h"tns les tubes
1a 5.
La reaction ne peut etre pratiquee avec des liquides
xanthochrorriiques ou hemoglobiniques qui precipitent Ie
benjoin dans la zone syphilitique.
CHAP ITRE XXV
RECHERCHE ET TITRAGE DES LIPOIDES Lll3RES ET

DES FERMENTS SPECIFIQUES DE DEFENSE DAJ'iS J..BS
HUMBURS ET DANS LES OR GANES.
A. - R.eaction d'activation du venin de cobra.

( Calmeite).
,
Cette reaction a pour objet la recherche et 1.6 titJJage des
lipo/des li"bres dans les humeurs (serum, liquide caphalo-
rachidien, etc.), Ie venin de cobra n'Hant susceptible d'he-
molysell les globules rouges de mammiferes qu'en pr~senc~
de quantites variables de ces lipoides.
On doit avoir it sa disposition:
l o U ne solution mere de venin de cobra au centieme,
chauffee SO minutes a 75 et filtree sur papier (0 gr. 1 de
0
venin sec dans 10 centimetres cubes d'eau sale8 physiolo~

giqne), fraichement preparee et ne datant pas de plus de 10
jours (conservee it la glaciere);
2 0 Une diIution au 1/500 de venin, faitel au moment de
s'en servir en diluant 1 czell'timetre cube de solution mere
qui contient 0 gr. 01 de venin sec, dans 4 centimetres cubes
d'eau salee physiologique (3. 8,5 de NaCI par litre) ;
30 Une solution de lecithine au dix- millieme, preparce en
dissolvant 1 gramme de lecithine .pure dans 100 grammes
d'alcool methylique pur. On pr.end 1 centimetre cube de
cette solution qu'on porte dans 99 centim~tres cubes d'eau
salee physiologique ;
40 Une emulsion an 1/20 d'hematies de cheval debarras-r
sees de serum par trois centrifugations et lavages a l'eau
physiologique successifs.
Dans une serie de tqbes it essai, on 'vers~ 1 centimetre
cube d'nne solution de venin de cobra au 1/500, soit 2 mill;,
grammes, puis 1 centimetre cube d'emulsion au vingtie~e
d'hematies de cheval soigneusement lavees.
LlPOIDES LlliRES El' FERMiNTS DE DEFENSE 285
Chaque tube, sauf Ie premier, qui sert au controle,
te\:Uit enStIite respectivement 0 cc~ 01, 0 cc. 05, 0 cc. 1,
o cc. 5 et 1 centimetre cube du serum it etudier (prealable-
mell1 ihactive par 30 minutes de chauffage il. 580 au bain-
marie).
On complete partout it 3 centimetres cubes avec H20
physiologique.
On porte a l'etuve a 37 0 pendant 30 minutes et on lit les
resuHatl;.
Darts une autre serie de tubes temoins, on verse }a meme
quantite de venin de cobra (2 tnilligrammes), la meme
qmtntHe d'efilulsiun d'hematies de cheval lavee's et (sauf
dans Ie premier tube qui sert au cohtri'ile) des proportions
.,ariables de lao sdlution de lecithine pure au dix-millieme,
p'ar exe-mple: (} cc, 03, 0 cc, 05, 0 cc, 08, 0 cc, 1 ,.etc, On cl:1m-
p'lete partOl1t it 3 centimetres cubes ct on porte egalentent it
l'Muve' pendant 30 minutes it 370, On lit les resultats.
8i}e tube de }g premiere serie, cantellant () CC: 1 du
serum:l etudier, donne une hemalY'se complete daps Ie
meme temps que Ie tube de la seconde serie qui contient
occ, 05 de solution de lecilhine au dbi-millieme, par ex~tn
pl~, on en dMnit que'1 centimetre cube de ce serum ren-
ferme'O gr. 000'05 de }e<iithiIie ou d'autTes lipoides snscep-
}iDles d'activer Ie venin. La part de la 'lecithine dans ceUe
activation peut MFe sep-aree par l'additian de quelques gottttes
de solution au dix-millieme de :chiorure de calcium qui
etnpl!che l'action activante de's acides gras et des savons.
On t:rmtve de la lecitlIine libre dans Ie serum des tuber-
tu}e'ux.~ parfbis des syphilitiques, ties dements, des paraly-
tiques gen(mtux (ps!Jcho~reactian, dite de Much), etc., et
dans- celui des s·ujets ariesthes-ies par Ie chloroforme OU par
rether.
Le- serum (ru~e inactive par chauffage a 5&» de certaines-
eSp"ec~s animales (chevali chien, tat, chevre, mbuton,
lapin) est actr"9"ant pour Ie venin de cobra. I.e serum
d'homme1 lie singe, de bumf, de pore, ne l'es-t ~ne lol'sqi.l'tl
n'a pas ete ina-ctive par Ie chauffage.
B. -Methodes d'Abd$!rhalde~l et de Wollman .pour Ia

mise en evidence'dela proteolyse.
a) REACTION D'ABDERHALDEN
La reaction d' Abderhalden permet, d'apres son auteur, de

deceIer, dans Ie serum, des ferments speci/iques, ferments
protecleurs, au ferments de defense qui attaquent les pro-
teines deversees dans la circulation. C'est ainsi que, pendant
Ia grossesse, des ferments apparaissent dans I~ sang mater-
nel, qui attaquent les albumines et les peptones d'origine pIa-
centaire. Lorsqu'on met en contact, dans un dialyseur place
dans l'eau distillee,le serum contenant un ferment specifique
et l'aIbumine correspond ante, la molecule aIbuminoide de-
gradee donne naissance a des produits diaIysables qui pas-
sent .dans l'eau distillee, OU ils sont decelables par les
reactifs des peptones. des polypeptides et des acides amines,
la ninhydrine en particulier. Les albumines non· attaquees
ne dialysent pas.
On opere sur une petite quantite de matiere aIbuminoide :
tis sus prives eTe sang, corps microbiens prives des peptol'!es
du milieu et degraisses. On fait bouillir pendant 5 minutes,
on filtre. et a. 5 centimetres cubes de filtrat, on ajoute 1 cen-
timetre cube de ninhydrine alp. 100. On fait bouil1ir de
nouveau pendant une minute. Si, apres 30\ minutes, il ne se
produit aucune coloration violette, on essore les fragments
de tis sus ou les microbes entre plusieurs epaisseurs de pa-
pier filtre, sans les toucher avec les doigts. Dans Ie fond
d'un dial:yseur dont la permeapiljte a,ux peptones et l'im-
permeabilite aux albumines Ol1t ete prealablement eprou-
vees, Qn depose 0 cc. 25 du tis~u au des microbes, essores
comme il vient d'etre indique, et 1 centimetre cube du serum
a eprouver non chauffe ; dans un second dialyseur temoin,
on verse 1 centimetre cube de serum seulement et dans un
troisieme, 1 centimetre cube de serum chauffe 60 minutes a
580, et on couvre Ie tout de toluene. Les trois dialyseurs
sont introduits dans trois flacons d'Erlenmeyer contennnt
20 centimetres cubes d'eau distillee sterile qu'on co~vre
ensuite d'une mince couchede toluene (1/2 centimetre cube).
On bouche sterilement les flacons et on les porte it l'etuve
LlPOIDES LIBRES ET FERMENTS DE DEFENSE 287
a 37 OU on Iaisse Ia dialyse se poursuivre pendant 16

0
heures. Apres ce temps, on enleve les dialyseurs avec une

pince £lamMe, en agitant Ie dialysat. On preleve ensuite
dans chaque flacon 10 centimetres cubes de Iiquide qu'on
verse d'abord -dans des verres steriles, sees, OU Ie toluene
entraine s'evapore, puis dans des tubes a essai contenant
o ce. 2 d'une solution de ninhydrine a 1 p. 100. On intro-
duit dans cliaque tube une petite baguette de verre bien
seche,lpour obtenir une ebullition reguliere, et on fait bouil-
, IiI' pendant une minute dans Ia flamme d'un bec Bunsen.
On laisse refroidir ; apres une demi-heure on lit les resul-
tats. La reaction est positive guand les temoins-serum res/enl
incolores et gue Ie dialysat du melange Serllm tissu ou microbes'
pl'esenle une leinte bleu violet pIlls au mains intense.
eeUe technique com porte tant de causes d'erreur et les
renseigl)ements qu'elle fournit sont d'une imprecision telle,
qu'il est preferable dans la pratique de rechercher les pro-
duits de la prot~olyse par la methode suivante :
b) REACTiON DE WOLLMAN AU BAG TERIUM COLl
Le principe de Ia methode est Ie suivant :

Ensemence dans divers milieux albuminoldes : blanc
d'reuf, caseinate ou albuminate de sou de, serum sanguin
(dans certaines conditions), Ie Bacterium coli se multiplie
sans produire d'indol. Mais lorsque les pro.teines des milieux
ensemences avec Ie B. coli ont subi auparavant une action
proteolytique quelcpnque et qu'elles contiennent du trypto-
phane, l'indol apparait dans Ie liquide de culture. II suffit
done de rechercher l'indol avec Ie reactil d'Ehrlich au para-
dimethylamidobenzaldehyde, apres extraction au moyen de
I'ether, pour deceler la protoolyse.
Technique. - Le milieu dans lequel on veut rechercher
l'indol est ensemence de B. coli et place a l'etuve a 37 0 pen-
dant 36 a 48 heures. On en preleve une partie qu'on me-
lange en agitant legerement avec un volume egal d'ether;
on decante ensuite 1'other ot on ajoute Ie quart environ de
son volume d'une solution a 4 p. 100 de paradimcthylami-
dobenzaldehyde ; on fait arriver doucement, au fond du
tube contenant ce II?-elange, 1 a 2 centimetres cubes d'acide
ehlorhydrique a I'aide d'une pipette effilee. Lorsqu'il existe
de l'indoI I un anneau rouge vio'let se forme it la limite lle~

liquides (voir la technique {Ie A. Berthelot pour la recher-
che de l'inddl, chaIt. xxxn).
Avant d'app1iql.ler cette reactiO'n it l'etude d'une proted-
lyse donnee, on doit s'assurer que l'albumine employee
tontientdu trJ ptophane, acide amine generateur de l'indol.
Pour cela, on soumet cefte albumine a la digestion tryp-
siqde, a l'hydrolyse acide bu a l'attaqtte par un microbe
proteolytique. Dans Ie milieu ainsi digere (et neutralise iii
. ron a en recours it l'hydrolyse acide) on ensemence un B.·
cali tres indologene et on techerche, suivant 1a techniqd~
precedenle, s'il y a formation d'indol.
La presence de tryptophane dans l'alhnmirre elant eta-
hlie, on procede a l'experrence prO'prement dite : on ajoute
eette albnmine au milieu qu'on Suppose contenir des fer-
ments proteolytiques. Apres quelques jours, on y ense-
mence dn B. co'li, puis on fait la reaction de l'indol. Un
tube contenant l'albumine seule dans l'ea'u physiolog.iqrre
et un autre contenant Ie milieu seul servent de temoins~
CHAPITRE XXVI
HEMATIMETRIE ET HliMATOLOGIE.- CYTOLOGIE ET'

CYTODIAGNOSTlC. - VITESSE DE l:OAGULATlON. - '
INDIeE OPSONIQUE. ~ MESURE DE LA RESISTANCE
GLOBULAIRE.
A. - Solutions conservatrices des bematies.

,
~
Solution de sulfate de·soude de den-
Liquide site 1.020. • . . . . . • . 100 ce,
de Marcano. Formol du 'commerce (it ~o %). . Icc,
( Eau distilled. . • • • 200 gr,
l.iquides I NaCI chimiquement pur. I gr,
deHayem.- Sulfate de soude pur. . 5 gr.
a) ( Bichlorure de mercure. o gr. i)
200 gr.
~I
Eau distilJee. . • . .
a) his NaCl pur . . • • • . 1 gr.
modijie. Sulfate de soude pur. • 5 £r,
Sol. iodo-ioduree (b). • a CC, 5
b) Sol. Eou distilIee. • • . . • . 100 gr,
iodo-ioduree 5 gr,
(de Hayem). ( }o~~ e~ p;i1iett~s,' Ii ~at~r~tio·n.
Le nombre moyen des hemalies chez l'homme adulle esl de
5 millions par millimetre cube. de 4.500.000 chez /0 femme
el de 6.900.000 chez le notiveau.-ne.
B. _ Emploi de l'bematlmetre 1.
Cet appareil se compose:
10 D'un tube melangeur-aspirateur gradue (de P.olairi)
pourVll d'un ajutage en caoutchouc, avec JequeJ on re-
cueille, par piqure au lobule de l'oreille ou au do\gt, une
goutte de sang qn'on aspire jusqu'a la division 1. On es-
suie la pointe du melangeut:· avec un papier buvard et,
1. COl'ltptc-gldbulc(; de Mnlasacz; conslruit par Stinssnic j 204, houle"al"\l nnspnit.

Pnris.
lucnORIOLOG1" HI
290 RSACTIONS HUMORALES ET HSMATIMSTRiE
aussitot, on aspire Ie liquide conservateur jusqu'a ce que Ie

melange de sang et deliquide, remplis~ant Ia petite ampoule
qui contient une perle de verre, arrive au trait 101. On
agite pour que la masse de liquide, soit bien homogene; on
expulse, en souffiapt ~Quceme:pt par l'ajutage de caout-
chouc. ce qui restait dans la partie capillaire du melangeur
et on ver!?e nne goutte du liquide·de I'ampoule slir lil partie
~entrale dll porte·opjet qUlldrille form<lnt c1}ambre hu-
wi.de;
2° D'un porte-objet chambre humide constitue par une
cellule creuse it rigole et portant une lamelle couvre-
objet it n'.s!'lOJ;t. Lfl goutte de !'lang dilu~ au 1)100 a
examiner se trouve ainsi tres egalement etalee enite la
partie centrale du porte.objet et 1a lamelle CQuvre-
objet.
La partie centrale du porte-objet presepte un quadrillage
gradue it A. Chaque re~tangle de ce quadrillage correspon'd
it un dix-millieme de'millimetre cube de sang, On compte
les hematies con!eQues ,d~ns l}n nQmbre x de c~rrfs, 20
par exemple, On additionne les chiffres ainsi obtenus, en
comptaQt pour urie demie les hematies qui sont a .cheval
sur les traits limites. On multiplie ensu,ite ce chitrre l~ par
10.000 et on divise par Ie nombl'fr x de carres examines. Le
nombre n d'hematies par millimetre cube de sang est alors
fourni par Ja formule :
N = n X 10.?OO.
x carres
Si, au lieu de diluer Ie sang au 1/100, on veut Ie dilu~r au

1/200•. au au 1/300, au au 1/500, on aspire seulement jus-
qu'a la gradqatiQU 2, 3 ou5 dans la pipettt:. capillaire avant
d'aspirer Ie liquide dilueur jusqu'au trait 10l.
Pour la dilution ,au 1/200 au 1/300. la formule. devient
a.lors :
n X 20.000 n x 30.000 l
~ = '" (carr<~s) ~u ~ = x (carres) • ~ c.
Avee I'hema\in1etre de Thomas-Ze~s, chaque carre de

quadrillage, recouvert de 1a lam ell e) 'correspond a 1/40000
de millimetre cube.
CY'f(JI.Q.GIE. VI'JEf?Slj; J){E C(J.JlGllLJj.TIQ)V ~~l
Si fl r~pr~~IJie Ie nptQ.l>j:'e .d'.hAnwties cQ.lJJ"pt#1l (It $! Ie

p~hJ,"~ ~,carres", Ja fprtnule ,~~t qlon; :
J)T F .40.000_1>< '10.0 !X n
~
......
j:.. -.,Numerati()ll et determin.at:ion deli leucocytes.
Cytodj~&,nosti,.;. •
1
.L9rsqp'oq etudie les ieucocytes viv.ants provenant d'exsu·

~t;>, IPflT exelP,ple,.en VU(l de. r\lcherch~s relatives au pou-
voir-phagocytaire, il est a1lantageuK, pour .eviter la 'coagu-
htion'de la fi~~ine, de mettre ces elements en suspension
dans Ie liquide suivant, prealablernent sterilise par la
chaleur:
Chlorure de sodium pur. o gr. 63
Citrate de soude. • . . 1 gr.
~ll' dl$~il!ee. • . . , '}.QO ,"c.
,
, )pour fa Qumeration des qlobllies blqncs, au lieu du liquide
oe Haye'm on emploie :
Acide aclltiqlle. . I • 2 gr.
• • • • • •
J:;all di~tillee. , . . . • . . • . . 100 cc.

~ol. aid. sllturee de bleu cle metbyltlne. • ice.
L'acideacetique Mtruit les hematies et ttl hieu colo.r~ les

noyaux des ltmcocytes, de soyte que,ees rl.erniers s'o411 bien
visibles.
O~ peue egalement employerle liquUle.de Toisson :
Ellu distillee. . J . . . . 260 ce.
rny~eri{je pure a 300 H'. . 3D gr.
SllJ{jlt'1' #e .soupe. . . f • . , ·6 IU.
Chlorure . de &odium. . • I gr.
Molet'de methyle 5 ou 6 B. ·0 gr. 0~5
La proportion normale des leuClJlJyte:; aux Mfll{f;li~s d{1J1{J Ie

'sallg humaiti.e$l de ,1 p. 1130 ; 5,oit :
is.OOO leucocytes '11"_' ....
"(I(J 1 pll,r JDIM)Ul,dre cu ... e.
5 :000 ''''" g. rouges
~
Polyd'uc!eaiI'es. • 66 ~
l!of[!'ule leucocp- Monon'hcleaiI;e~. • ,33 pour
talre norll!al.. Eosinophilcs...' .1 100 leucocytes
Chez Ie chien, Ie nombre moyen des leucocytes est de

7.500; chez Ie hamf, de 1l.000; chez le lapin, de 11.300 ;
chez la grenouille, de 180 seuletnent.
Chez l'homme Ie nomhre moyen s'eleve souvelft a 7.200.
Le pourcentage des diverses varietes de globules blancs dans
Ie sang Ilormal hurilain est Ie suivallt :
1
•
P,lynn"""M ""',o,hil"
(10 a 15 micf<!ns). • • 2 a 4 %
Moyenne.
3 p. roo
a) formes Mastzellen ( basophiles )
myeloides. (8 a 12 microns).. . . o it 1 % 0,5 p. 100
Polynucleaires neutrophiles
(10 it 14 microns).. • . 42 a 75 % 67.0 p. 100
~ Lymphocytes(5it8micronsl. 21 it 25 % 23,0 p. 100
b) Formes Grands mononucleaires (10
lympholdes. a 25 microns). . • . . 411 8% 6,0 p. 100
••
Cylodiagllostic. '- Po~r efIectuer Ie ~ytodiagnostic ou
sang ou d'un exsudat, on eta Ie sur trois lames Ie culot de
centrifugation, en couche mince. On laisse secher un instant
et on fixe:
Une lame par l'alcool-ether, 4 a 5 secondes.
Une lame par l'alcool absolu, [5 minutes; ou par racide
chromique alp. 100 une a deux minutes\.XAptes ce Jemier,
lavage in:tmediat a l'eau courante.)'
Une lame par Ie sublime iode, 1 a 2 secondes. (Lavage
immediat a l' eau cOUl'ante.)
On seche en position verticale pour ~viter les poussieres
et Oil colore:
La premiere 'lame par hi'!mateine-eosine qui decele les
granulations eosinophiles : bemateine filtree, 4 it 5 minutes;
lavage a 1'eau, puis :solution aq'ueuse d'eosine alp. 200,
1 minute; laver a l'eau, essorer, secher et examiner direc-
teruent dans une goutte, d'huile de cedre.
La deuxieme lame par .la thionine pheniquee ou par l~
bleu polychrome de U nna qui colore les granulations haso-
philes et metachromatiques (colorati<:m 1 minute, puis la-
vage a l'eau). ;; J
Lp tJ'oisieme lame par Ie trjacide j Ehrlich qui colore it
la fois les granulations eosinophile'S et neulrophiles.
CYTOLOGIE. VITESSE DE COAGULATION 293
..
*
Pour Ie cytod"iagnostic des exsudats pleuretiques ou des

liquides cephalo-rachidiens, dans lesquels il s'agit surtout
de rechercheI'. la proportion des lymphocytes, il suffit de
prepareI' une seule lame que I'on fixe a l'alcool absoln ct
qu'on colore a la thionine ou au bIeu p01ychrome de Dnna,
ou mieux au Giemsa dilue ~) 1 centimetre cube de colorant
pur pour 9 centim~tres cubes d'eau distillee, 30 minutes, puis
lavage a l'eau: les hematies sont colorees en rouge brique.
les cellules endotheliales en bleu fOl\ce violace, les granu-
lations neutrophiles en brun fonce, les eosinophiJes en
rouge brun, les basophiles en violet.
D. - Numeration des leuGocytes et de~ parasites du

sang par Ie procede de la pipette d~ Thompson.
Les pipettes Thompson 1 se font en deux modeles : l'un

de 1/8 de.millimetre cube, l'autre de 1/4 de millimetre cube
entre chaque division. Le second est plus commode pour
les debutants. 1:e premier est plus approprie au travail ra-
pide et precis
Piquer avec une aiguille Ie lobule de l'oreille ou la puIpe
du doigt ; laisser exsuder un~ goutteIette de sang sans com-
primer les tissus, car la compression force la Iymphe et les
lymphocytes a sortir des vaisseaux Iymphatiques.
AspireI' Ie sang dans la pipette. En expulser aussitOt une
partie jusqu'a ce que la colonne coincide avec l'une des
lignes de Ia ghduation.
Essuyer la pointe de Ia pipette et expulser 1/8 ou 1;4 de
millimetre cube de sang sur une lame tres propre. Expulser
.aussitot, dans un verre contenant un peu d'eau distillee, Ie
reste du sang contenu dans la pipette et laisser tremper la
pointe de celle-ci dans l'eau, afin d'empecher qu'eJIe se
bouche par suite de la formation d'un caillot.
Expirer la bouche ouverte sur la gouttelette de sang de-
posee sur la lame, afin d'empecher qu'elle se desseche sur
les bords, et l'etaler a,:ec la pointe d'une aiguille (posee a
1. Chez C. Bakel'. opticien, 244, High Holbarn, Landre. W, C.

M4 RltACrJoNS ilUMOI1AtES itt H£MATIME'tRIE
plat) en un petit earrt~ d'environ 4 millimetres de cote:. Ce
carre doit etre aussi net et uniforme que possible. Si ron
utilise la pipette de 1/4 de millimetre cuhe, Ie carre dQit
avoir 5 milIimMres de cote. (On en deIimite, au prealable,
lletendue par un trac~ a l'enore ou au crayon gras, sous la
lame porte-objet.) .
S~cher Ie carre i'l. l'air pendant quelques secondes. Fixer
deux minut~s a {'aleool absolu (20 minutes pour les para-
sites malariques) et coh>rer par exemple pendant !20 a gO
minutes avec Ie Giemsa au 1/20), Laver et secher sut un.
papier buvard.
Sll'tm desire c<?mpter les paras~tes malariques, Ie earrt~
sera (aIt un peu plus petit et plus epais, puis on fixera It
1'alcool abs01u acMique (5 eentim~tres cubes d'acide aeetique
dans 95 centimetres cubes d'alcoo1 absolu). Les hematies
sont aiiHli dMoldrees ·et r~hdMt les parA~ite!! p1u~ visibles.
P{J'ur ctltflpfet leI> I~Ucocytes, les, tI'ypanosOlties et les
corps en croissants, la decoloration des hematies n'est pas
hMessai~.
Netloyer et s~d1er inlffiedil1~h1ertt la pipette eh aspitaht
Ili feftmla:nt cil! l'etltl plusilluts (ois dans Ie, tubl:! eapilfail'e.
rtJpetet ce lavage avec de l'aftdol absolu et de fetber, puis
aspirer de l'air et essuyer I' extremitc avec soin.
Si ht pipeH~ "VtUil1it a ~tte obstrtlee, rill\merger, port!' dis-
soudre Ie cai11ot, darts dlt tube a clisi1! cot'ltefIfit1t de l'!rCide
nitl'iqa:e. Placer 1e tUbe art hrti11-trtatie, Ie porter a l'ebUlIi-
tion et reftditlil' plttsieu!'li t6i~.
L6l'st]u~ 1a pipt!tte est en usage constant, il est bon d'y
a!;pitM un peu d'l1~ide tlittique fott et de 1'1 \aisSllr route Ia
nuit. Avant de s'en servir de nouveau Ie lendetnain, on 1a
lave ~n ~ouff1a11l dans l'tilcdttl poul' s'i1sSurer que 1M; huIles
d'ai!' s'M:happettt HbreftIMt.
POUt ~tltrtptet les leucbCytes tiu les parasites, il faut dis-
a
poser d'tln microscope phttitl.e gtadU~e et d;un o~ulaite a
diaphtaghle cart6.
On depose tlfte gouhe d'hrtile a imnlersi6rl ditectemeht
stir ll:! sllHg seche et colortl, sllns lamelle. et od examine
aVec l'objettif i'l. immersion. Ort chetche 1e bord supenetlt
dtl carte de sang ct, aU thoyen de la graduation de ra
platine, on compte combien il y a de champs jusqu'au cin-
quieme, it partir drt Mtd §b.}Jetiel1J.'. Stu' eette ligne, on pm!se
CY'/OLOGIE. VITESSE DE COAGULATION 29!i
en reVUe ch:1que champ transvers:11 d'Un hard tl l'autre.
On revieht a la, bande verticale et, au dixietne champ a
partir du nord superieur, on examine une nou~lle banda
horizontale. On repete Ia meme manreuvre au quatric)me
champ a partir du bard superieur et\ finalement, on revient
it la bande verticale jusqu'au bord inferieur.
Snpposons que ie nombre de champs microscopique&
entre les bords superieur et inferieur soit de 30 et que 1e
nambre moyen de leucocytes au de parasites' dans les troi"
bandes completes soit de 40, on en deduit que Ie nombre
total dans Ie carre de sang est de 30 X ~o = 1 2001 Mais 1~
carre de sang represente 1/8 de millimetre cube (ou 1/4
sllivttnt Ia pipette employee). DoHc Ie naI11brtl, par mllli-
metre cube, est de 8 X 1.200 = 09.600. ,
Si Ie carre de sang est de 1/4 de miliimette cube, alors
Ie nombre sera de 4 X 1.200 = 4. SOD.
II va de soi que, plus Ie nombre de leucocytes ou de pa-
rasites est petit, plus grand sera Ie nombre de bandes trans-
versales a examiner.
Mais, ell tegle g~Mrale, il ~uffit de comptet l~s ll':lU~ocytes
sur 3 bandes transversales seulemon t, si Ie sang est bien
uniformement etale. Si l'on veut compter toutes les bandes
transl'ersales, il ~aut environ 10 minutes.
L'erreur ne depasse pas 5 p. 100 sur 200leucocytes com-
ptes. .
Gette meth<1de evite la dilution du sang et l'emploi de
lames quadrillees speciales. Elle rend possible la mise en
reserve de preparations de sang sechees et coloree,;, que
ron peut gnrder par devers soi pour faire les numerations
plus tard. Elle permet de conserver les preparations pour
efTectuer ulterieurement des nutnerations cOI~paratives.
Elle permet enfin de faire la numeration des diverses es-
peces de leucocytes.
.
'"'"
E. - CMgulatloIt du satt~.
Reactifs empechanl la coagulation:
Oxaldte de sodium. 1 gr. p. 1,000 ce, de ~ang.
Fluoruredesodium. 3 gr. p.l.OOO .....
Citrate de soude. • 4- gr. p. 1.000 cc. de sang.
Hirudine' (extrait
de teles de sang-
sues). o gr. 040 mgr. p. 1.000
On re\(oit, par exemple, directement Ie sang dans un
vase contenant, pour 100 centimetres cubes de sang, 5 cen-
time,tres cubes d'une solution d'oxalate de sodium a 2 p. 100
ou 10 centimetres cubes d'une solution de fluorure de
&odium U 3 p. 100. Le chlorure de calcium (5 centimetres
cuhes de solution a 10 p. 100 pour 100 centimetres. cubes
du sang oxalate) coagule Ie plasma oxalate. II ne cOMu]e
'pas Ie plasma fluore.
A la dose de 2.600' Ie sulfate de zinc empeche comple-
tement Ia coagulation sanguin in vitro. In vivo, il suffit d'in-
jecter 2 mgr. de sulfate de zinc dans la circulation du
cobaye pour que Ie sang ne se coagule pas (Augu.~{c
Lumiere et Henri Couturier).
METHODE DE WRIGHT POUR MESURER LA. VITESSE DE

COAGULATION DU SANG
L'instrumentation necessaire consiste en

- Plusieurs ~ubes capillaires de 30 centimetres de lon-
'gueur, dont une extremite, effilee en pone et ouverte, est
tlx~e au moyen d'un peu de eire dans l'extremite, egalement
effilee en cone, d'un bout de tube it essai formant enton-
noir;
- Plusieurs tetines it soupapes de Wright;
- Vn bain-marie regIe it 37 0 et assez profond pour que
'les tubes puissent y etre entierement plonges en po~ition
-oblique, Ia tetine seule depassant a ]'ext~rieur ;
- Vne petite quantite de mercure bien propre.
1 On peut prepUl'er soi-mem.e un extrait de tetes de sangsues de Ia maniere sui-

vante : On coupe avec des ciseaux et, dans un flacon contenant 100 centimHres cubes
a'alcool absolu, on fait tomber Ie segment anterieur (Iete ot cou) d'une dizaine de
snng"ues. On bouche Ie flacon et on agile it pln"ieurs reprises. Apres 24 heures on
recueille les tetes de sangsues sur un flltre, on Ies seehe clans Ie vide et on ]es hroie.
On obtient ainsi une! poudre, que ron pcut conserver it l'abri de l'air et de In. lumiere,
pour en preparer une maceration aqueuse pal' trituration avec quelques centimetres cubes
d'eau physiolol,(ique au fur et It mesure des besoins. L'exl"'it oblonu avec .trois.tetes de
sangsues par kllogramme de lapin sumt a empecher la coagulation du sang pendant
.plusieurs heures quand on rinjecte dans les veines. In vitro; une tete par 30 it 50
centimetres cubes de sang represente, ell general, nne dose con venable. En presence
de cet extrait, )c sang l:e.ste inuefiniment fluide.
CYTOLOGIE. VITESSE DE COAGULATION 29-7
Les·tubes capillaires etant fixes par l'une de leurs extre-

mites, au moyen d'un peu de cire Golaz, sut Ie bout" du
tube qui porte'la tHine a soupape, on les marqul'!, avec de
I'encre a ecri"re sur Ie verre, de deux traits bien vlsibles a
-5 centimetres de chacune des ouvertures.
On prend un premier tube ainsi monte. On en presse Ia
tHine pour chasser l'air, on plonge l'extremite libl'e du
tube dans du mercure et on en aspire, a l'aide de la tetine,
juste la quantite suffisante pour remplir Ie premier espace
de 5 centimetres de longueur. .
On plonge, aussitot aprils, la meme extremite du tube dans
nne goutte de sang frais prlHeve par piqure (an doigt on
au lobule de l'oreille chez l'homme). On prend soin de
laisser Ie moins de temps possible cette g.outte au, contact
; de I'air.
On aspire Ie sang dans Ie tube capillaire, de telle sorte
qu'il occupe tout l' espace compris entre les deux traits.
L'intervalle compris entre l'ouverture libre et Ie premier
trait sera donc occupe par de l'air, et l'intervalle compris
entre Ja tetine et Ie second trait sera' occupe par Ie mer-'
cure.
Immediatement apres, on plonge Ie tube dans Ie bain-
marie, en position oblique, pour eviter la projection brus-
que du mercure (s~us l'effort de dilatation) dans Ie petit
entonnoir porte-tetine. On l'y laisse un temps determine
(Ie te~ps de coagulation moyen est de 2'30 pour Ie sang de
l'homme adulte, de l' a 1'20 pour Ie sang de cobaye),
compte par un indicateur a secondes Le delai qu'on s'etait
fixe (1, 2, 3 minutes ou fractions de minutes) etant, expire,
on sort Ie tube du bain-marie, on en essuie rapidement
l'extremite libre avec Ie doigt et, par pression sur la !etine,
on projette tout son contenu, mercure et sang, sur un carre
de papier a filtrer blanc.
Si Ie sang n'est pas coaguIe, il forme sur Ie papier buvard
nne large tache rouge.
S'il est coaguIe partiellement, on trouve sur Ia tacbe des
filaments de fibrine plus ou moins volumineux.
Si Ia coagulation est ~omplete, Ie bloc de sang projete
s'etale en un petit tube de meme diametre que Ie diametre
interieur du tube capiIlaire et tache a peine Ie papier-
filtl'c.
298 R:SA01'tONS HUMORALES ET HEMA1'IMEtRIE
Si In coagulation est trop complete (ce qu'il fant e'Viter),

Ie satlg ne peut plus etre projete par pression sur la teHtte
hors du tube. capill~ire et on est altlrs oblige de cObper
celuiAci.
II est toujours avurttageux de faire ceUe epreuve avec au
'moifiS deux tubes, pour preciseI' Ie Mlai de coagulation.
Lrt tnesure, aifisi effeciUee, de hi. coagdlabilite du sang,
Mt t6ute relative, ntais elle fdtirnit des resultats aSsez eltac-
tern ant compa~ables entre eUx .
.
....
F. - Potivoit l>hagocytaire des leucooytes.
Mesure de l'indice opsonique.
Pour effectuel' In mesure de I'indice opsonique d'tln

serum, il faut meitre el1 presence:
1d Des letlcot~ytes ;
20 Une emulsion microhienrie cOfiVElnablemertt preparee;
30 Le serum a Mudier.
Cas trois elements Mant melanges en patties egales. on
1es pol'te dal1s tine pipette, it I'MuV'e a 37°, pendant quinze
ott -vingt minutes. On fait en suite des preparations colo-
rees. Ort compte Ies elements microbienb COtHenus dans
un certain l10mbre de leucocytes et on etablit In moyentle
du IHHnbte de microbes phagocytes par leucocyte. On
dbticnt ninsi un chi.£1re qui indique Ie pouvoir op!wnitjue 'tIq
serum c()nsider~. Mait;, cornme les conditions (concentI'd~
tiott de la susp~nsion de leucocytes I'll de I' emutsit:Jn micto-
bienne) chnngetlt d'une experiertce a l'autre, les resuHats
obtehuS ne sont comparables et 'ne ptennenf une valeur cftle
si on les rapporte a un facteur constant, toujours Ie tneitle
dans loutel:1 serie-des experiences. C~ facteur constant
est represente par un SCI'um normal, celui de l'observateur,
pal' exemple. Au pbuvoit opsonique de cEl setum ietl1oin;
on compare Ie pduvoit opsonique du serum pathologiqtle
Mudic.
Le chiffre tepreseI'ltaflt Ie pouvoir opsonique d'Un de ces
serums, divise par Ie chiffre representant Ie podvoir opso-
nique du serum normal temoin donne l'indice opsoniql1e.
CYTOLOGIE. VI'fESM's DE COAGrJLA1'IDN 299
a) Prepatatlort d~s leuco';!Jtes . ..... L~!l Iertcocytes
habituellement elilployes sont empruntes so it au sang
humain, soit a 1'exsudat peritoneal du c9baye. L'experi-
mentateur utilise gen#al~n1tmt s~s propl'es hmcocytes.
Il lui stillt de se piquer avec 1m vaccihbstyle la face
dorsale d'un doigt, pres de 1'bI1g1e, apres avoit ligature Ie
doigt a sa hMe. 'Environ :20 gonttes de sl1ng sortt recueiIlies
dans Ull petit tUbe cehtrifugeur a forid eftH~, ptealable-
ment garni d~ Itt solUtion anticoagulante dOtH voiti la
formuIe:
Epu distill<l'e. • • • • 1.000 cc.
Chlornre de sodium.. . 8 gr. 5
Cittate de Mude. • . . 15 gr.
If faut 8 ()u 10 patties de cette s6IutiM, au miftimmh,

potu' une pal:'tie d~ saIig.
ali fait Ie melaflgll en rel1vetsant et redrt:lssaf1fpli.Isie'urs
fois Ie tube dMt bn a bbtllr61'orifictnl.vec Ia pulpe du pcltlce'.
n tatU avoir 80in d'evitei' de secoUel' btustt\ien1~nt, pour ne
pas alter'el:' les leucocytes.
On cehtt'ifuge, pUis on lave Ie cuiOt. Porti' MIa ()f1 aspire
avec bIte pipette a houle Ie IiqUide qui surtulge. On verse
duns III lube 10 ceriti1tl~tres cubes d' eart saMe physiolo.
giqUe que 1'on h1elaI'lge au culot en relivel'saht Ie tube
comme precedemment, et l'on centrifuge de noUveau.
Cette operation est i'Cpetee trois fois. Prtis 011 enI~ve tout
Ie lieruiae. La partie la plus superficielle du culot contiedt
les glbhules bhlIics. Aflt1 de la sepatet de la couche plus
In'dfoucic fothlee des globules rouges, on incline Ie tube.
Les leuCocytM de la sUrface s'elalent. Ils sont reclleillis
par hspiratitm dans une pipette effilee gal'nie de Ia tetine
speciale de Wright. et portes dans un tube a essai Cburt,
de tres petit calibre (60 millimetres de longueur, 6 ou
7 mmi1nHr~s de dial11etre).
OIi petit encore se procurer des Ietlcocytes ell prcl-
voquant, chez Ie cobaye; la formatiot1 d'Uh 'Elxsudat
peritoneal par injection d'eau salee, de bouillon, etc.
UM ou de"\iX herltes api'es, en piquant 1'abdomen au cobaye
teriU par t111 aide, Ie ventre tendu dirige en bas, on pteleve,
a l'alde d'um! pipette ctrlIdee, a pclinte elllee, utI peu de
l'exsudat tiehe t\I1 leuMcytes; Oli tetUeille celrti·ci dan!';
1'eau citratee et on Ie traite comme il a Me dit ci-dessous

pour Ie sang.
b) Preparation" de Z'emulsion micl1obienne. - On

prend une jeune culture en milieu solide de 12 a 24 heu-
res. On en emulsionne une anse de pIa tine avec une
baguette de verre dans un tube dans lequel on verse
goutte a goutte quelques centimetres cubes d' eau salee
physiologique. de telle sorte que I'emulsion soit hien
homogene et lcgerement opalescenle.
S'il s'agit de bacilles tuberculeux, on prend une jeune
culture en bouillon glycerine agee de 10 a 14 jours. On la
sterilise Jt l'autocrave a 100() pendant 20 minutes. On jette
sur un filtre en papier et on lave les bacilles en versant sur
Ie filtre de l'eau sa lee physiologique jusqu'a ce que celle-ci
s'ecoule incolore., Une petite quantite de hacilles ,(environ
1 centigramme) est alors prelevee sur Ie filtre et deposee
dans un mortier d'agate. On hroie doucement et on emul-
sionne en versant goutte a gouttc (tout en continuant Ie
broyage) dc l'eau physiologique a l'aide d'une pipette
effiIee. On obtient ainsi une emulsion laiteuse que l' on
rend encore plus homogene en l'agitant dans un flacon
sterile avec des perles de verre. On la centrifuge ensuite
(pendant quelques minute'S seulement) pour la debarrasser
des grumeaux. \
Cette emulsion homogene est diluee avec de l'eau salee
hypertonique it'1 gr. 5 de NaCl pour 100 (c'~st Ie taux Ie
plus favorable), jusqu'a l'obtention d'une concentration
microbienne determince qu'on apprecie d'apres son opales-
cence, laquelle doit, etre tres legere. II faut pour cela envi-
ron 50 cen~imetres eubes d'eau salee pour 1 centigramme
de bacilles.
L'cl}1ulsion ainsi preparce peut etre sterilisee Ii ]050 et
conservee en tubes seelles qu'on aura soin de bien secouer
avant chaque experience, pour mettre les. baciJIes en sus-
pension aussi fine que possible.
c) Preparation du serum a etudier. - On se pro-

cure Ie sang chez l'homme par piqure de la face dorsale du
pouce ou du bord posterieur du lobule de l'oreille. Le
sang est aspire par capillarite dans un petit tube a extre-
mites effilees dont I'une est recourbee. Quelques gouttes

suffisent. pn laisse pendant deux ou trois heures Ie serum
se separer du caillot et on sectionne Ie tube au couteau a
verre au mom~nt de l'usage. Chez Ies animaux de Iabora-
toire ;(Iapins, cobayes) et aussi chez le bomf, c'est par
piqtire de l'oreille qu'on preleve Ie sang, en piqual,lt au
niveau d'une des veinules que l'on voit par transparence.
Chez-Ia souris et Ie rat, c'est par section au ciseau du
segment terminal de la queue.
II faut que Ie serum soit clair, pal'faitement exempt de
globules r;ouges, car Ia presence de ceux-ci fausse comple-
tement les resultats. II peut Ctre conserve II Ia glaciere
pendant 6 a 7 jours, ce qui permet d'utiliser en une
seule seance les serums recueillis pendant toute une
semaine, par exemple, chez Ie meme sujet ou chez divers
malades.
d) Technique de la reaction. - Possedant les trois

elements necessaires, leucocyles, emulsion microbienn~
Se/'l[nt, il reste ales mettre en presence.
·On prepare un certain nombre de pipettes capillaires. II
est commode et economique d'employer pour cela des
segments de tube de verre de 10 a 12 centimetres de lon-
gueur, tels que ceux qui servent a fabriquer les pipettes dans
les laboratoires. On les etire en leur milieu, en prenant soin
que l'effilure soit bien regulierement calibree. On sectionne
au milieu de la partie effilee et on obtient ainsi deux pipetles·
de calibre ega!.
A deux centimetres de Ia pointe ouverte, on marque un
trait au crayon bleu. On ada pte a Ia pipette une tetine a
soupape (de ·Wright) qui sert a I'aspiration et au refouIe-
mcnt. On aspire une petite colonne d'cmulsion bacillaire
jusqu'a ce qu:elle afileure au trait de crayon bleu. On
laisse alol's penetrer une bulle d'air. On aspire ensuite une
egale quantite d'emulsion de Ieucocytes et on Iaisse pene-
trer une nouvelle bulle d'air. On aspire enfin une egale
quantite de serum.
Le tout est aIoI's refoule sur pne lame de verre et melange
pat une serie d'aspirations et de refoulements successifs
et, la pipetteetant tenue bien vertical,e, on y reintroduit Ia
totalite du melange. On scelle l'extremite du tube ~ Ia veil-
302' REAG'I'IONS HUMORALES ET nE.MATIMETRIE
lelise d'un bec ·Bunsen et oU'I101'te a l'e\,uve a 370, eN. p'osi-

tion'inclinee, pendant '20 minutes 1, . '
Au sortir de l'etuve, on brise la ,pointe de Ill. pipette, on
refoule son contenu sur une lame de verre bien propr;e en.
hrassant de. nouveau" et on fait des etalements sur lames
avec Je bord d'une autre lame rodee.
Les preparations, sechees pendant quelques minutes:it.
l'etuve, sont alors fixees pal"l'alcool absolu, puis lors.qu'il
s'agit du bacille, tuberculeux, colort~es a froid, pendant demt
heures a 37'1, par une solution de Ziehl -oontenant seu-
lem~nt 3 p. 100 d'acid~ phenique. On deoolore ensuite
par l'alcool acetique, on lave ~ l'eau, on reoolore pendflnt
30 secondes au blen de methylene ou a l'hematoxy}ine.
S'il s'agit d'autres microbe.s facilement colQrobles, on
se sert du bIen Borrd a l'oxyde d'argent au, simp!ement,
de la thionine ou du bleu de toluidine. On lave a l'eau 6t on
evite la decoloration par l'alcool.
La preparation lavee et sechee (lentement a l'etuve) est
pOI'tee en fin sous 1e microsco"pe. On passe en revue 100
leucocytes polynucleaires 6t on noJe au craY()Jl Ie nombre
de bacilles contenus dans chaque leucocyte, en iuscrivant
o pour ohaque leucocyte qui n'a rien phagocyte.
Si l'emulsion miorobienne n'a pas Me faite a use dilution
convenable, la phagocytose est tro.p ab9ndante ou 11e 1'esj:
pas assez, c'est alors une cause d'erreur dans la nume-
ration. II faudra done recommencer' l'experien~e en cher-
tt:hant a ohtenir une emulsion qui dQnae en moyenl).e de 2
a 4 microbes phagocytes par leucocyte, en ,presence d\lU
serum de.sujet normal.
Dans la numeration, il ne faut pas tenir co.mpte des
amas de microbes. On ne devra noter que les leueo.c'y~es
bien distincts et bien colort~s·.
Certains p.olynucleaires renferment une grande quantite
de microbes qu'il est impossible de compter. Dans ce cas,
Wright et ses eleves ant adopte Ie chiffre 9 invariable·
ment.
1. Si l'on .. sOil-vent it eff~ctuer des deterlIjinations d'indices. op"llniques, il est

recomm,,-udablc de se servir de la p.,etite etuve speciale construite pour cet 'Objet, sur
leo indicatiQ,IlS, de Sir A. .•\Vright, par l:unaison Hearson, de L.Qnql)eS <~35, Reges>t
Street). On l"eut se procurer ceUe etuve, ~ins~ gue les tetines a soupapcs pour pipettes
de 'W"ight, chez Cogit, 86, boulevard Saint-Michel, a Paris.
C,¥TOLOOIS. VItESSE De CO~GULA'l'ION a03
OJ,1 f;)taplit Ie pouuoir pp~()lliQ1,le Qll qllotient leQcocgt(1ire
de chl,lq\le serum, en divisant p~r WO Ie l10mbre de micro-
bes co~nptes daps 100 polynucleail~&. L'illdice opscmique est
I;lnsuit~ d~ten~in~ ~n divi~ant Ie pouvoir 0Plionique ·d'\ln
slirqrn patholDgiquc, ou Sl,lPPOlie tel, par Cf,.llui d'un liefllm
normal temoin qu'on l,ltilise dans toute la serie des expe-
riences.
Soit Ie serum temoill T, dont Ie pouvoir opsonique est,
par .c"emple, d~termine ainsi :
200 microbes _ _ 2
100 polynucleaires -
at les Serums iI. eludier A et B. Si nous avons :

400 Qa.~illes
Pouvoir opsonique de A :
100 polynucleaires
= 4,
1 00 bacilles
Bonvoir opsouique de B : = 1
100 polynucleaires
Les indices opsoniques seront :

Ppuvoir opsonique de A _ ! _ 2 00
pour Ie serum de A : Pouvoi,r opsonique de T - 2 - •
Pouvoir opsonique <ie B _ ~ = 0 "
POl1r Ie serum de B : Pouvoir op'l,onique de T - 2 ,0
Nota. - Vis-a.-vis du bacille tuherculeux, l'indic(l opSO-

nique des serums normaux varie de 0,80 a 1,20. Chez les
malades il s'abaisse au-dessous de 0,80.
La determination d'un indice pris isolement n'offre aucun
interet. C'est seulement l'.etude de la courbe opsoni,que
d'un. malade ou d'un animal qui peut permettrede tirer des
conclusions utiles au diagnostic, au pronostic ou a1,lx dIets
d'une medication.
••
G. - Mesure de la resistance globulair~. H~molyse.
La mesure de la resistance globulaire a pour objet de

determiner la fragilite propre des hematies soit vis-ii-vis
des solutions salines ou n1edicamenteuSeSj ~iOit vis-il...vis
.des serums normaux ou pathologiques.
3M REACTIONS HUMORALES ET HEMATIMETRIE
a) Resistance des hematies aux solutions salines.

- Pour determi'n~r la fragilite propre des hematies
provenant du sang' d'un malade vis-a.-vis du chlorure de
sodium par exemple, on preleve, par ponction aseptique it
]a seringue, 10 centimetres cubes de sang dansune veine du
pli, du bras et on defibrine aussitot ce sang par agitation
dans un petit flacon sterile contenant des perles de verre.
LOIlsque'la defibrination est achevee, - ce qui ne demande
que quelques minutes, - on aspire 5 centimetres cubes du
liquide avec une pipette graduee sterile et on les verse dans
un ,tube centrifugeur'prealablement tare. On marque id'ex-
terieur du verre, par un trait de crayon gras, Ie volume
ainsi occu.p~ par Ie sang defibrine et on centrifuge jusqu'a
separation complete du serum.
On decante alors celui-ci; on remplit Ie tube avec de l'eau
salee physiologique a 9 p. 1.000 ; on agite pour remettre
les hematies en suspension et on centrifuge de nouveau.
On repete trois fois ceUe operation qut a pour but de
laver les hematies et de les debarrasser completement du
serum.
Apres la troisieme centrifugation etdecantation du ]ictuide
de lavage, on verse dans Ie tube une nouvelle quantite d'eau
salee physiologique correspondant, aussi exactement que
possible, au volume primitif du sang m\s en ceuvre (5 centi-
metres cubes), jusqu'au trait de.crayon gras marque a l'exte-
rieur du tube. On agite une derniere fois pour remettre les
hematies en suspension bien homogen~, et c'est cette emul-
sion d'hematies lavees dans l'eau physiologique qui sert a
efl'ectuer la mesure de la resistallce globulaire.
On aura prepare d'avance :
1 .serie de 12 petits tubes centrifugeurs de 10 centimetres
cubes de capacite sur un porte-tubes; .
1 solution de chlorure de sodium pur, rondu, a lOp. 1.000,
sterilisee a l'autoclave ;
2 pipettes. effiIees steriles permettant de repartir I~s
liqu·ides par gouttes egales.
Dans chacun des 12 tubes, on versera d'abord un nombre
progressi vement croissant de gouttes d' eau dis'till~e en 'C9m-
men<;ant par 10 gouttes dans leler tube eten augmentant de
2 gouttes d'un tube a l'autre. Le 12" tube Tecevra' ainsi
32 gouttes.
Avec Ia meme pipette, on versera ensuite dans 'chaque

tube un nombre progressivement decroissanl de gouttes de
solution salee a 10 p. 1.000, en comment;ant par 40 gouttes
dans Ie ler tube et en diminuant de 2 gauttes d'un tube a
I'autre. Le 126 tube recevra ainsi 18 gouttes.
La propor:tion de chlorure de sodium pur contenue dans
chaque tube se trouve etre ainsi de 0,80 p. 100 dans Ie
Ier tube, puis successivement 0,76. 0,72, 0,68,0,64,0,60,
0,56,0,52, 0,48, 0,44, 0,40, et enfin 0,36 p. 100 dans le dou-
zieme.
On agite Iegerement Ie support pour melanger les liquides,
puis. avec fa seconde pipette. on aspire l'emulsion de sang
defibrine lave et on en laisse tomber une gontte dans chaque
tube. Une petite secousse assure Ie melange des liquides.
On laisse en contact 30 minutes it la temperature de 370,
puis on centrifuge rapidement taus Ies tubes et on lit Ies
resultats.
Suivant que l'hemolyse est nulle, partielle, intense au
totale, on la note par les chiffres 0, 1, 2 et 3, au par 1 a
3signes+.
A 1'etat normal, I'hemolyse se produit a partir de Ja con-
centration moyenne de 0.44 a 0,48 p. 100 de NaCI.
Dans certaines maladies, principalement dans les icteres
hCtnolytiques, Ia fievre bilieuse hemoglobinurique, Ja chlo-
rose, etc., les hematies sont particulierement fragiles. L'he-
molyse se produit alors parfois avec des concentrations
salines supericures mcme a 0,80 p. 100.
On pent mesurcr par la meme methode Ia fragilite ou
Ia resistance des hematies en presence de differents sels
au de substances medicamenteuses, par exemple de In qui~
mne.
Lorsqu'on effectlle Ia mesure de Ia resistance globulaire,
if y a toujours interet a eludier separemenlies hemalies et Ie
serum d'un meme sang pathologique ; fes hemaltes vis-a.-vis du
chlorure de sodium; fe'serum vis-a-vis d'hCmaties d'un sang
lmmain normal.
b) Resistance des hematies a faction hemoly-

tique des serums. - Les serums normaux sont toujours
anli-hemolgtiques. Au cours de certains etats pathologiques
ils deviennent, au contraire, himolytiques.
MICROBIOLOGIE 20
Pour mesurer Ie pouvoir hemolytique d'un serum, on se

sert d'une methode tout a fait semblable a celIe qui a ete
decrite ci-dessus. Mais il est indispensable que les hematies
lavees dont on doil faire usage proviennent d'un sujet normal.
C'est sur ces hematies lavees et emulsionnees dans l'eau
salee physiologique qu'on fera agir des quantites progressi-
.vement decroissantes du serum pathologique it etudier.
Ce serum sera employe soit frais, non chauffe, soit apres
inactivation par 30 minutes de chauffage au bain·marie
a 56 0 ; mais, dans ce dernier cas, il faudra l'activer par
addition d'une quantite constante de serum frais de cobaye
.(alexine), par exemple 2 gouttes pour chaque tube.
Cette derniere maniere de proceder est la plus precise,
tar si ron fait usage du serum pathoIogique frais, Ia quan-
tite d'alexine qu'il contient varie pour chaque tube.
On operera done de la maniere suivante :
Dans chacun des douze petits tubes on verse d'abord un
nombre progressivement croissant de gouttes d'eau salee
phgs,iologique a 9 p. 1.000, en commenc;ant par 10 gouttes
dans Ie 1 er tube et en augmentant de 2 gouttes d'un tube :\.
l'autre. Le 12e tube recevra ainsi 32 gouttes.
Avec la meme pipette, on versera ensuite dans chaque
tube un nombre progressivement decroissallt de gouttes du
serum pathologique a etudier I serum inactive par chauffage
a 56o }, en commenc;ailt par 40 gouttes dans Ie 1er tube et en
diminuant de 2 gouttes d'un tube a l'autre. Le 12" tube rece-
vra ainsi 18 gouttes.
La proportion de serum contenue dans chaque tube se
.trouve etre ainsi de 8 p. 100 dans Ie ler tube, puis success i-
.vement de 7,6,7,2,.6,8,6,4, 6,0,5,6,5,2, 4,8, 4,4,4,0, et
entin de 3,6 p. 100 dans Ie 12".
I Avec nne seconde pipette, on laisse ensuite tomber dans
chaque tube 2 gouttes de serum frais de cobaye (alexine).
On agite legerement pour assurer Ie melange. Puis, avec
llile troisieme pipette, on introduit dans chaque tube une
goutte d'emulsion homogene d'hematies normales, Iavees,
preparees comme il a ete dit ci-dessus. .
Vne petite secouss'e assure Ie melange des liquides. On
laisse en contact penda.nt 30 minutes a la temperature de
37 0 et on lit les resultats qui sont generalement deja assez
apparents pour .qu'il ne soit pas necessaire de centrifuger.
Suivant que l'hemolyse est nulle, partieiIe, assez i!1tense

ou totale, on Ia note par les chiffres 0, I, 2 et 3 ou par 1 a
3 signes +.
CeUe methode peut etre egalement employee pour la
mesure du pouvoir hemolytique des serums hemolytiques
specifiques (voir chapitre xx), - mais il faut alors operer
sur des dilutions au dixiimre (dans l'eausalee physiologique)
de ces derniers, - et aussi pour l'etude des hemolysines
produites par certains microbes pathogenes da.,,!!s les
humeurs de l'organisme ou dans les milieux artificiels de
culture.
CINQUIEME PARTIE
TECHNIQUES .SPECIALES
POUR
L~ETUDE D;ES MALADIES INFECTIEUSES

DR L'HOMME ET DES ANIMAUX
CHAPITRE XXVll
RECOLTE DE PRODUITS V1RULENTS POUR LE DIAGNOS-

TIC DES MALADIES INFECTIEUSES DE L'HOMME ET
DES ANIMAUX.
A. - Maladies des animaux.
10 Pdievemeni de sarlg pour ensem~ncemenl, inoculation

experimentaie ou sero-diaynostic.
Le sang est recolte dans la jugulaire (Equides, Bovins.
Ovins et Caprins) ou dans la saphene (Chiens).
Couper les poils dans Ia zone d'election de la saignee.
Laver a I'eau bouillie, puis a 1'alcool; toucher avec la tein-
ture d'iode, operer avec des,instruments et de la verrerie,
steriles. Ponctionner Ia veinc avec un~ aiguille un peu
fort~, adaptee a une seringue de 10 ou de 20 centimetres
cp.hes, recueillir Ie sang dans un flacon sterile. Boilcher
solidement Ie flacon; etiqueter, emballer, expedier.
2 0 Prelevemeni de sallY pour exam en microscopique. -
Essuyer avec un linge fin et proprc ou un tampon d'ouate
la region choisie (levres pour -Ie cheval, pointe ct face
interne de l'oreille pour les aut res an,irnaux); puis, avec Ia
pointe d'une lancette, piquer une veine superficielle, ou,
avec les ciseaux, entamer Ie bord de l'oreille. Toucher avec
310 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
l'extremite·d'une lame porte-objet propre Ia goutte de sang

qui sourd. Appuyer Ie bord d'une lamelle ou d'une carte de
visite sur Ia gouttelette qui s'etend sur toute In Inrgeur de
Ia lame. Incliner la lamelle sur In lame en l'appuyant ·lege-
rement et etaler la goutte de sang jusqu'a l'autre extremite.
Secher immediatement la lame par agitation, l'envelop-
per en suite dans une feuille de papier etiquetee comme il
est indique plus haut.
30 Exsudats. - Pratiquer les prelevements avec la seringue
ou l'aspirateur Potain, en observant les me'mes precautions
que pour Ie sang.
4 0 Pus. - Cauteriser superficiellement au fer rouge un
abces clos, ou, a defaut, laver aI' eau savonneuse apres avoir
coupe les poils. rincer a reau bouillie, puis a l'alcool, tou-
cher a la teinture d'iode qu'on Iaisse seeher. Ponctionner
avec une seringue sterile. AspireI' une certaine quantite
de pus que 1'0n introduit ensuite dans un flacon sterile.
Etiqueter, etc.
. 50 Fragments d'organes pour ensem'i!ncements et inocula·
tions. - Prelever avec des pinces et des ciseaux bouillis,
au niveau de Ia lesion, un fragment du volume d'une noisette
qu' on introduit dans un flacon sterile ou (pour Ie -diagnostic
de Ia rage) dans un flacon contenant de la glycerine neutre.
Pour Ie diagnostic post mortem des xvaladies septi-cc-
miques, on preleve, chez les gros ani'maux, un os long, de
preference un metacarpien ou un metatarsien et, chez les
volaiIles, rextrcmite de Ia patte coupee au-dessus de I'articu-
lation tibio-tarsienne.
{)o Frotlis d'organes pour examen microscopique. - Le
fragment d'organe tenu entre les mors d'une pince est ccrase
sur la lame et froue une senle fois sur la moitie de In
surface de Ia lame. Sceher par agitation a l'air. Etique-
tel', etc.
7 0 Secretions purulentes de la pituilaire et de la conjonclive.
- NeUoyer la region avec un tampon de coton imbibe d'eau
bouiIlie et fixe a l'extremitc d'une baguette de bois. Attendre
In formation d'une secretion nouvelle (apres toux provoquee
pour Ie jetage) qu'on preleve avec l'ecouvillon du flacon
special. A defaut de ce flacon, preleverle produit avec une
cuiller ou une spatule bouillie et refroidie, et recueillir
dans une fiole sterile.
RECOLTE D'ES PRODUITS VIRULENt'S 311
8° Expectorations. - Les expectorations sont recueillies

de preference le,matin, Technique : attirer et immobiliser
la langue du sujet hoI'S de la cavite buccale, exercer une
pression sur les premiers anneaux de la tracbee, et, apres
la toux, recueillir avec I'ecouvillon ou la spatule les muco-
sites deposees sur la base de la langue.
9 0 Lail . ..:;_ Savonner Ie trayon et Ie quartier malades,
rincer a l' eau bouillie tiede ; traire avec les mains aseptisees
ou pratiquer Ie catheterisme. Recueillir directement
10 a 50 centimetres cubes de lait dans des fioles steriles
maintenues a 10 centimetres de l'extremite du trayon. Bou-
cher, etc.
10 Urine. - Recueillir l'urine au moment Qes mictions,
0
ou pratiquer Ie catheterisme.
11 0 Squames et croiites cula/U!es. - A l'aide du bistouri
sterile, gratter la lesion jusqu'au sang. Recueillir dans un
flacon sterile les croutes et les poils adherents.
12 0 Ecoulemenl vaginal et malieres excremenlielles. -
Recueillir une petite quantite de ces matieres dans un flacon
sterile.
B. - Maladies de l'homme.
10 Prelevemenl de sang pOllr ensemencemenl, reaction de
fixation ou inoculation experimeniale. - L'operation ne-
cessite : 10 Ie milieu de cuI ture ou un tube sterile
dans lequelle sang sera recolte ; 2 une seringue en verre
0
graduee de 20 centimetres cubes avec em bout de metal,

sterilisee prealablement a l'autoclave dans un gros tube;
3° une aiguille en platine de 8/10 a 11/10 de millimetre, ste-
rilisee a I'autoclave dans un tube; 40 un tube de caoutchouc
qui sert de lien.
Pour prelever Ie sang, on serre Ie bras avec Ie lien de
caoutchouc un peu au-dessus du pli du coude. On desin-
fecte Ia region du pli avec de Ia teinture d'iode,
Si la veine n' est pa,s saillante, on prie Ie sujet de saisir
un objet et de Ie serreI' fortement,
On monte I'aiguille sur Ia seringue en Ia saisissant par
sa base avec une pince flambee ; on l'enfonce fortement,
puis, apres ajustage, on la passe rapidement dans' la'
flamme.
31~ MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
Avec Ia main gauche. on fixe la peau, et avec la seringue

tenue dans la main droite, on pique Ia veine de bas en haut.
Des que l'aiguille a penetre dans Ia veine, Ie sang coule
dans Ia seringue et refoule Ie piston. On recolte Ia quantite
de sang voulue (10 ~ 15 centimetres cubes en general). On
desserre Ie lien de caoutchouc et on retire I'aiguille de Ia
veine. On l'enleve ensuite de l'embout metallique qu'on
flambe Iegerement et on verse Ie sang dans Ie recipient.
(Tube a essai sterile ou flacon con tenant des perles de verre
pour defibtiner.) Eviter soigneusement de toucher l'embout
avec les doigts.
2· Prelevement de sang pour sero-diagnostic ou examen
microscopique. - Choisir, pour prelever Ie sang, la face
dorsale de la phalangette, region peu sensible et bien irri-
guce. On peut piquer aussi Ie lobule de l'oreillc. Laver it
l'alcool Ie point choisi. Flamber une cpingle ordinaire ou
un vaccinostyle. Des que l'instrument. est refroidi, piquer
d'un coup sec. Si Ie sang ne sourd pas de lui-meme, com-
primer Ie doigt pique par une pression partant de sa base,
tandis que de l'autre main on fait flechir la phalangette sur
Ie reste du doigt.
Si Ie sang est recueilli pour un ser~-diagnostic, faire cou-
leI' les gouttes dans un petit tube sterile.
Si Ie sang doit etre examine au microscope, toucher
Une goutte avec I'cxtrcmite d'nne lame., Appuyer Ie bord
d'nne 1amelle snr 1a gouttelette qui s'etend sur toute 1a
Iargeur de la lame. Incliner la lamelle sur la lame en
l'appuyant legerement et elaler la goutte de sang jusqu'a
l'autre extremile. Secher immediatemenl Ia lame par
agitation.
3 0 Prelevemenis pour analyse de liquides retires pal' ponc-
tion (liquide cephalo-l'achidien, serosites pleurale, perical'-
dique, peritoneale). - Les recneillir dans des tubes ordi-
naires au dans des tubes it centrifugation sterilises et
bouches it l'ouate. A deraut, se servir de petits flacons soi-
gneusement nettoyes, laves, rinces, essuyes. puis sterilises
dans de I'eau 1egerement salCe maintenue 10 minutes it
l'6bullition.
Seringue et aiguille passees a l'autoclave au au mains
sterilisees dans de l'eau salee portee a l'ebullition pendant
1b minutes.
RECOLTE DES PRobuITS Vli:WLENTS 31~.
Laisser s'ecouler les premieresgouttes du Iiquide cephalo-

rachidien qui peuvent contenir du sang.
Recueillir dinktement Ie liquide qui s'ccoule ensuite
dans Ie tube, ou bien l'aspirer dans Ia seringue que ron
videra en suite dans Ie.tube.
4 0 Prelevemenis pour analyse de fausses membr.anes, de
mucosi/es. - On se sert d'un fil de fer dont l'extremite
inferieure, Icgcrement recourbce, est entouree d'ouate de
maniere a former un tampon ctroit et allonge (fig. 21).
Fig. 21. - Ecou.illon de colon monte ~ur Ii! .te rer p<>ur Ie pr<Hcvemenl du mucus
rhinopharynge.
L'extremite superieure esttordue en boucleet forme mahche.

Le fit de fer ainsi prepare est introduit par son extremite
inferieure dans un tube a cssai qU'OD bouche a l'ounte et
qu'on sterilise au four a tlamber.
Ne toucher avec l'ecouvillon que Ie produit pathoIogique
a prclever. .
Pour une angine diphtcrique, prelever avec l'ccouvillon
Fig. 22. - Schema de Dopter, pour monlrer 13 region au Ie prelevement du mucus

doit etre pratique.
un fragment de fausse membrane typique ; pour les autres

angines, prelever I'enduit Ie plus epais.
Pour la recherche du meningocoque, faire Ie prelevement
Ie plus loin et 'Ie pI us hau t possible dans Ie rhinopharynx:
(fig. 22) .
. Des que Ie prel~vement a ete fait, remettre l'ecouvillon
dans son tube en evitant de souiller l'ouverture du tube
a essai.
5°·Prelevemenl de crac1zals. - Choisir de preference les
crachats expulses Ie matin au reveil.
Faire cracher dans une boite de ·verre sterilisee qu'on
fermera aussitot. Chez l'enfant ou les personnes qui n'ex-
pectorent pas, prelever les mucosites de l'arriere-gorge avec
l' ecouvillon.
Si les era chats doivent etre envoyes par la poste, les
recueillir dans un flacon sterilise par ebullition de 10 minu-
tes dans I'eau sa lee et bouche avec un bouchon de liege ou
de caoutchouc.
6 0 Prelevemeni de pus. - Le pus est preleve par aspira-
tion avec une pipette dans Ie cas d'un ahces ouvert.
Si la collection est fermee, desinfecter la peau a la tein-
lure d'iode, Jl'onctionner et aspirer Ie pus avec une setingue
sterile.
Si Ie pus doit etre expedie a un Iaborat6ire. Ie transvaser
dans une pipette fermee ou dans un tub~ ou flacon steriles.
7 0 Prelevemenl de malieres fecales. - 'Se servir, pour les
recueillir, de flacons sterilises, fermes au liege et dont Ie
bouchon est muni d'une petite cuiller. A dMaut de ces fla-
cons, employer des flacons a large ouverture fermes par un
bouchon de liege, et sterilises par ebullition de 10 minutes
dans l'eau salee.
Recueillir les selles du malade dans un vase lave a reau
salee bouillante puis refroidi.
Si Ie malade est constipe, lui donner un lavemeni a l'eau
bouillie -av~ un injecteur sterilise dans l'eau sa tee
bouillante. La petite cuiller sert au prelevement. Sur Ie
cadavre, ouvrir avec precaution nne anse intestinale, prele-
vel' avec la cuiller. Si l'autops~e n'est pas possible, on peut
preJever les feces dans Ie rectum avec la cniller. Les opera-
- tions sur les cadavres doivent, si possible, etre pratiquees
avec des gants de caoutchouc.
RECOLTE DES PRODUrfs VIRULENTS 315
Ne pas salir les bord ... du flacon. II sl.lffit d'envoyer Ie

volume d'un de it coudre de matieres f~cales. Vne plus
grande quantite serait inutile et meme daqgereuse it cause
des fermentations qui produisent des gaz ~t font sauter Ie
bouchon.
Prelever de preference, quand il y en a, des grains riz;-
formes, des pqrlies sanguinoientes, des parcell,s contenanl du
mucus. Bien bO-llcher Ie flacon. Attacher Ie bouchon au gou-
lot avec de la ficelle par un nreud de caviste.
8 0 Prelevements d'urine. - Recueillir rurine dans un fla-
con de 50 centimetres cubes ou plus grand (sterilise dans
de I'eau salee b'duillante), avec des sondes sterilisees.
Laver1e meat urinaire a l'eau bouillie ; ne pas recueiIIir
la premiere partie de la miction, mais seulement la fin, ou
bien se procurer J'urine par un catheterisme aseptique.
CHAPITRE XXVIII
ANALYSE MIGROBIOLOGIQUE\ DU SANG, DU LiQUIDE

CEPHALO-liACHIDIEN, DES SEROSITES, DU LAITI
DES URINES ET DES SELLES.
A. - Analyse microbiologique du sang.

L' examen Ii [' etat fruis d'une goutteleHe de sang ecrasce
entre lame 6t lamelle est surtout indique pour la recherche
de la hacteridie charbonneuse, des trypanosomes et des
spirilles de la fievre recurrente. Pour l'examen apres colo-
ration, se reporter a la technique generale des colorations'
(chap. III).
Disposilif pour l'hemoculture anael'Obie en milieu solide. -
Le dispositif utilise par Boez comporte deux cuvettes de
24 cm. de diametre, s'emboitant l'une dans l'autre, mcna-
geant entre elIes une cavite d'environ 130 cc., dont Ie volume
est regIe par trois nervures disposees en rayon et faisant
saillie sur la face concave du verre inferieur (modele realise
par la maison Leune). L'intervalle qui ~epare les deux verres
est de 3,5 mm. au centre et s'aUenue vers la peripherie. Le
milieu de culture employe est constitue par de la gelose a
2 p. 100, glucosee it 1 p. 100 et repartie en ballons a raison
de llOcc.
Avant d'etre incorpore it la gelose, Ie sang recueilli dans
un tube it essai contenant 1 cc. d'une solution de citrate de
soude a 5 p.100 (pour un preh~vement de 10 cc.) doit etre
hemolyse de maniere it conserver au milieu sa transparence.
Dans ce but Ie sang est tran~vase dans un tube contenant
20 cc. d' eau di stillee sterile, puis de la, des que Ie laquage
cst total, dans Ie ballon de gelose prealablement fondue et
maintenue au hain-marie it 45 0 • La gelose est en suite intro-
duite dans la boite et s'insinue entre les deux surfac~s, for-
mant un disque regulier qui s'etale au dela de l'angle.externe
des rainures du verre inferieur.
ANALYSES MICROBIOLOGIQUES 317
Apres quelques minutes, la gelose fait prise. Pour eviter

Ia dessiccation et Iii contamination du milieu ainsi que pour
assurer des conditio.ns, favorables a l'anaerobiose, l'inter;-,
stice circulaire Iib~e entre les deux 'verres est rempli avec
un melange de deux pa rties de paraffine ordinaire a 550
pour une partie de vaseline.
Les coloni~s apparaissent Ie plus souvent apn!s 24 heures
d'etuve, mais tl est indispensable de prolonger l'observation
pendant une semaine.
Recher.che des bacilles tuberculeux dans Ie sang. - La
technique Ia plus conveuabIe consiste a extraire a Ia serin-
gue, d'une veine du pIi du bras, 10 ou 20 centimetres cubes
de sang qu'on projette aussitot dan,S u~ tube contenant
10 ou 12 centimetres cubes' de solution de citrate de soude
a 2 p. 100 dans l'eau salee physiologique. On ferme Ie tube
avec un houchon de caoutchouc sterile, on Ie retourne 30u
4 fois et on Ie porte a Ia glaciere pendant 24 heures. On
decante en suite Ie Iiquide avec precaution et on recueille
Ie sediment a Ia pipette pour en faire des preparations
colorees, ou pour l'inoculer :i des animaux.
L. Bernard, R. Debre et Baron preferent traiLer imme-
diatement Ie sang., au sortir du vaisseau, par 20 centime-
tres cuhes d'alcool a 300 (pour 10 centimetres cubes de sang).
Le laquage des globules est ensuite complete par addition
progressive de 30 centimetres c~bes d'alcoo.l pur a 40°. On
agite vigoureusement et on centrifuge pendant une demi-
heure. Apres decantation, on reprend Ie culot par 40 centi-
metres cubes d'alcool a 40°, on agite, puis on ajoute. une ou
deux gouttes d'une solution alcoolique de soude au 1/10.
On centrifuge de nouveau. Le cuI at minime ainsi obtenu
est etale sur lmne et colore.
Homogeneisation. - Inoscopie (Joussel). On recueille-Ie
cailIot en filtrant sur une compresse b6uillie dans l'eau
alcaline, puis on lave a reau distillee et on fait digerer la
fibrine au moyen d'un sue gastrique artificiel. _.
Pep sine en pailleltes (titre 50 du Codex). 1 it 2 gr.
Glycerine pure. . . • . . . • { aa 10 gr.
Acide chlorhydrique it 22 0 Bauroe. 5 •
Fluorure de sodium. • . '. . • . , 3 gr.
'Eau distilJee... •...• f • 1 litre.
On melange 10 a 20 volumes de ce liquide a un volume

-318 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
de caillot, on porte a l'etuve a 37 0 pendant 3 heures et on

centrifuge.
Technique de Bezan!:on, Griffon et Philibert. - On broie
Ie caillot dans un mortier; on ajoute 20 centimetres cubes'
a'ean. et Va VI gouttes de Iessive de soude, on fait bouillir.
orr centrifuge et on examine le-culot e.tale sur. des- hones de
verre.
Technique de Gustave Marlin et Lebamf pour la recherche
des trypanosomes et des spirilles. - Recueillir Ie sang dans
un tube a sedimentation contenant 1 centimetre cube de
solution citratee. On centrifuge pendant 8 a 12 minutes en
verifiant frequemment l'etat du tube a partir de la 7e miuute
et on arrete la centrifugation des que la mass~ est nette-
ment separee en deux couches. On recueille toute la cou-
che superieure que l'on verse dans un deuxieme tube a cen-
trifugation et on centrifuge de nouveau pendant 10 minutes.
On decante Ie liquide et on centrifuge une lroisieme fois
pendant 20 minutes. Le sediment renferme quelques leu-
cocytes, quelques hematies, les gloDulins et les trypano-
somes. L~s filaires sont generalement retrouvees dans Ie
deuxieme s,ediment.
B. - A.nalyse microbiologique du liquide

cephalo-rachidien.
Les germes I~s plus frequemmentl rencontres dans les
liquides ccphalo.rachidiens pathologiques sont : les menil1-
gocoque5 A, E, C, D, agents de la meningitecerebro-spinale
epidernique ; Ie pl1eumocoque, Ie bacille 'tuberculeux, 1e
bacille de Pfeiffer; Ie streptocoque et Ie staphylocoque. Plus
rares sont Ie Diplofocclls crassus, Ie pl1eumo-bacille de Fried-
lander, Ie tetragelJe, l'el1lerocoque, Ies bacilles typhiques et
paratyphiques, Ie Bacterium coli. Exceptionnellement Ie
bacille pyocyaniquc, Ie bacille diphterique, Ie gonocoque et Ie
bacille de La peste. La recherche de ces germes s'effectue
selon -1a techniqlle suivante, simple et rapide, qui donne
des resultats tres generalement exacts.
Technique d'O. Jupille.et R. Legroux. - II est

necessaire d!operer Sur 5 ce';,1ti:metres' cubes de Iiquide,
quantile moyenne des ponctions lombaires
') ,
:
ANALYSES MICROB(OLOGIQUES 319
1· Le liquide est. Ie plus tot possible apres la ponction,

cel}trifuge (10- minutes a 5.000 tours, centrifugeur Juuan).
Les tubes de centrifugeur sont sterilises it l'avance.
20 Le liquide clair, decante est mis en tube sterile et place
au frais (glaciere si possible), en attendant qu'il puisse etre
examine.
3 0 ' U ne partie du culot de centrifugation prelevee asepti-
quement est etalee sur lame, ~xee a l'alcool methylique, puis
examinee au \llicroscope, apres colorations superposees :
methode de Gram, puis fuchsine en solution aqueuse (cette
derniere solution doit etre faible et son action prolongee
pendant 3 if 4 minutes, pour faciliter l'identifica tion des
variete~ de reucocytes). Si ce premier examen ne montre
pas Ia predominance des polynucleaires, ou si les lym-
phocytes semblent plus abondants, il est indispensable
de faire un deuxieme etalement de peu d' etendue, au centre
de Ia lame, afin de rechercher les bacilles acido-resistants ;
ceUe recherche etant de grande importance, on doit Ia faire
patiemment. EIle est plus souvent positive qu'on pourrait Ie
/
penseI'.
4 0 L'ensemencement sur gelose-serum. fait avec Ie res'te
du culot de centrifugation preleve au moyen de l'anse de
platine, sera Iargement pratique en tube plat qu'on porte
~137°.
5° Avec Ic Iiquide clair mis de cote au debut des opera-
tions, on recherche, sur 4 centimetres cubes exactement
mesun~s, Ie poids d'extrait sec de cendres d'apres Ia
tcchnique suivante (lV. Mestrezat): tarer it vide une
capsule de nickel ou mieux de platine, y verser les
4 centimetres cubes mesures, evaporer Ie liquide au bain-
marie bouillant jusqu'a ce que Ie poids de la capsule reste
constant lors de deux pesees successives. Le poids trouve est
multiplie par 250, et Ie produit obtenu indique Ie poids
en grammes de I'extrait sec par litre: liquide normal,
10 gr. 50 a 11 grammes ; liquide tuberculeux, 11 grammes
it 13 grammes ; liquide de menin9ile ai9ue non tuberculcuse,
13 gr. 50 a 16 grammes.
Ensuite l'extrait sec est incine£e dans une flamme. jusqu'a
ce que la capsule prenne une- teinte voisine du rouge
cerise; laisser refroidir sous. une cloche en presence
d'acide sulfurique, peser les cendre~, multiplier Ie poids
..
320 MALADIES INFECTIEVSES. TECHNIQUES SPECIALES
.
par 250 pour avoir Ie poids--.par litre: liquide normal,
8 gr. 60 a' 8 gr. 80, liquide' lubeI:culeux; 7 gramlVes
it 7 gr. 50; ligulde de meniI]gile'ui.gue nO{l lubercu{cuse,
8 grammes a 8gr. 90.
60 Examiner apn!s 15 a 1~eurcs a 370 les tubes de ge-
lose ensemences. Prele"X~e trace des colonies suspectes
pour en faire I'exar~n~icroscopique sans coloratio'n et
aprcs coloration; suivant les donnees de cet examen on
identifiera, par l'agglutination rapide au moyen des serums
specifiques, soit les differentes races de meningocoques,
soit les pneumocoques des races I, II on III. S'il Ya des
streptocoques dans Ie liquide de ponction, les bacteries
pour~ont eire agglutinees par Ie serum antipneumococcique
type II. Les indications therapeutiques n'en seraient pa~
faussees, puisque Ie serum antipneumococcique II est
valable dans ces cas.
..
C. - Analyse cytologique du liquide cephalo-rachtdien.
10 Exdmen a fa cellule de Nageolle du liguide non centri-
fuge. - La cellule de Nageotle se compose d'une cellule de
verred'une capacite de 50 millimetrcscubes, divisee par des
traits espaces de 250 iL • Sa hauteur est de 500 fL et chaque
division correspond a 1,25 millimetre 'cube. Pour denom~
hrer les elements cellulaires qu'il contient, on depose une
au deux gouttes de liquide cephalo-rachidien frais dans Iq
cellule. on couvre d'une lamelle, on porte sous l'objectif et
on laisse reposer pendant 10 a 15 minutes. On examine
avec 1'0bjectifna4 au nO 5 et all compte les leucocytes dans
un certain nombre de rectangles. On divisc Ie nombre de
ces leucocytes par Ie nombre de rectangles et Ie quotient
obtenu par 1,25. On determine ainsi Ie nombre de leuco-
cytcs par centimetre cube de liquide.
Pour faciliter Ia recherche des globules blancs, on add i-
tionnc au prealable Ie liquide cephalo-rachidien d'un me-
lange a volum~s egaux de, violet de methyle a 5 p. 100 et
d'acide acetique pur, dans Ia proportion d'une gouttelefte
(1/30 de centimetre cube environ) pour 10 goutte~ de liquide.
On attend quelques minutes, puis on depose une ou deux
ANALYSES MIC!WBIOLOGIQUES 321
gouLles du liquide colore dans la cellule de Nageotte et on

opere comme precedemment.
Le liquide cephalo-rachidien normal contient 1 a 3 elc·
ments, generalement des lymphocytes. par millimetre cube.
20 Examen du liquide centrifuge. - Centrifuger a grande
vitesse (5.000 tours) pendant 10 minutes dans des tubes
stcriles a extremite efIil~e et bouches avec des capsules
d'Main. Decanter. Maintenir Ie tube incline, Ia pointe en
haut. Introduire une pipette effilee dans laquelle Ie culot
encore humecte monte par capillarite. Repartir Ie culot
sur des lames de verre, a raison d'une gouttelette par lame.
Etaler Iegerement, sauf sur la lame destinee a la recherche
du bacille de Koch. Secher a l'etuve. Fixer a l'alcool ab-
solu pour la coloration ulterieure au bleu ou a la thioninc,
a l'alcool:ether pour l'hemateine-eosine. Colorer et exa-
miner suivant les techniques habitueIIes .
..
1). - Disposition generale d'un examen de \iquide
cephalo-rachidien (d'apres Mestrezat).
ler cas: L'examen est fait d~s les 2 heures qui suivent
la ponctiol1.
A faire sur 1 0 Noter raspect (limpide, opalescent, purulent. forte-
Ie liquid. comment purulent. la presence ou l'nbsence de voile fibrineult
plet. et de flocons en suspension).
20 Numeration, it l'eta! frais, des leucocytes (X goulles
C.-R. 1 gouttelette violet methyl-acetique: violet addi-
tionn'" de son volume d'acide actHique. Numeration it In
cellule de Nageo1le Le pn\hivemenl des X goulles sera
fait avec les precautions d'asepsie habituelles et opres
avoir longuement agite Ie lube.·
Centrifl1ga ler tube. le r cas. Liquides l r • lame.
tion duliql1ide: (Exa men d'appaI'ence 1I0r- Gram·Nicolle avec re-
.Centrifuga- microsco· male .anseu/otim- coloration 0: Ia fuch"ine-
tion dllns des pique di- portall!. Ziehl diluee (examen mi-
tubes SI<\riles reot et for- (Decanter it fond crobien direct: indications
sans epaule- mule cylo- et prclever Ie culot premieres sur la formule
ment, de Ra· logique.) a I aide d'une pi- cytologique);
vaul (.deux lu- pelte efSlee, letube Desire-t-ob une colora-
bes de prHe· etant maintenu lion plus differenciee des
rence). 10 min. renverse. Reparlir noyaux, apnis lecture du
it 5 000 tours it sur 3 lames. Se- Gram, on decolorc q!1el-
la min. Les cher. Fixer 3 mi· ques ihstants it 1'alcool, on
tubes mUllis nutes it I'alcool lave ct on fait agir 3 a 4
d'une capsule methylique.) secondes un bleu basique
d'clain ont ele (Legroux).
lllcnOBIOLOGIE 21
322' MALADIES IN.FECTIEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
stecilises.'ir au- 2'" cas. Liquiaes 2" lame.
toclave (1/2 h. purulents. Ziehl (b. tuberculeu;x}-ou
a 120·/. (MelangeI' Ie cu- coloration speciale ..
rot a la pipette; (Giemsll'dans re cas de
en deposer une 'parasites).
gouttelette &U1' 3
lames. Sur 2 lames
Mater avec un peu
d'eau.)
3' lame.
Hemateine, eosine ou
Giemsa (formule cytologi-
que) et. accessoirement,
parasites.
2. tube. Cultures.
(Cultures, On cltnserve, -On ensemence aussit6t
i·n (} e ul a - dans Ie tube,. 2.ir 3 que possible et ausstlarge-
tionSo). millimetres de li- ment. que possible (liZ du
quiae dans. les- culot) Ie eulot sur deux
q.uels on emul- tubes gelose nutritiv~ (ge-
Slonne Ie tulot.. lose-serum - formoM Oil'
gelose-ascite) sur laquelle
poussent to Us les hotes
habituels du C.-R. Le·b.
de Koch ne pousse pas; Ie
b. de Pfeiffer peu (utiliseI'
pour lui un; milieu .au
sang) (1.),
Aprils culture, les colo-
nies seront etudiees pour
I'identification . (caracleres
extt~riE"urs, examen micros ..
eopique, essais d'aggluti-
nation, repiquage. sur mi-
!jeux speciaux).
Inoculations.
Inoculation eventnelle
au cobaye, a la souris, nu
lapin, selon les renseigne-
ments fournis par les l'e-
cherches prm:edentes.
R,!lmion de. liquides decantc.. Examen chimique ..
0Examen-chimique6'a 10 cc.) Albumine. . 1 a 2- cc.
Chlorure~. • 2 ye.
SUClle. •• 2 cc. 5.
Gendres (mc-
ningite t11.-
be1'euleuse). <1 cc.
1.. lJ.a demonstration du caract"re aseptique d'un liquide C.-R. comporlermt,:

1 0 La-prise du liquide a l'aiguille de_ponction a raide·d'une seringue sterile;
2" nes essais de culture en bouillon Martin glucose (2 p. C.-R. pour 1 p. bouillon,
Ie melange ctant fait au lit du malade), et l'ens.mencement de tubes de gelose
Veillon.
ANALYSES MICROBIOLO(};lQVES 323
Urea (~ote'
mie). . 2 cc.
Reactions colioidales.
B(l'njoin colloi-
dal.
Bord-e·f-Wns-
sermaIt.. # 1 cc .
. 2 8 cas: L'examen du liq,llide est differe ou ne peut cfre

fait que loin du lieu de son prefevemeI1t. On aevra prevoir,
dans ces circonstances, les difficultes d'lnterp:cetation q,ui
entouren.t les e:xamens oacfe.riologi.que et cyto1ogfque (fra-
gilite. des germes" culture d'elements etranger.s,. d'igesfion
des elements cellulaires). L"axamen chimi'q.ue sur res
liquides clairs conserve, par contre, toute sa valeur.
N, B. - A tout rensei'gnement d.lagnm~tique demande.(m
fera- jeiridre d-es l'enseigllemenls' cliniques. s-Ul' la date au
debut de l'affection, l'e'vo~uti()fl dlt eas et lesdraittlments
intr:t-Fachi:di:e1lS pratiql1es.
La liquId'e dh l er culot. "e punnel! (!ulol ~, ebl:l'il' ..ot dllUll.ludft'ls
ponction lom- a l'nid'e d'l1l'le pipette eflile6. OIl sccbe a I'air
baire est centri- 'et on fixe a fa flamme. L'envoi sera fitif, fes deux
fuge 15 minutes frottis se regardant, une languetLe de papier
a la mainou 10 separant Ies deux lames.
dans un cen- l ro lame:. Examen microbien direct el
trifugeur clec- formule cytologique.
trique. si pos-. 2- lame:. Zi-ehl ou recherehe speciale.
sible dans Jes 2~ eulOt. O"n .recaute parlieltement, de maniere a
tubes de Ra- laisser 2 cc. de Ii qui de environ au conlact du
vaul sterffises-. ·cul~t. On ferme tg tube a ct!lJCvifttg.er .. la
lamve et on, Ie joint. a l'en1'oi pr{!ce3ent '.
(Culture!>. Inoculations.)
30 Les liqu'i.des d'ecantes sonf, ..ennis darts un,
Licplides tjlbe- a.
~ai prollre. On ferme Joe. tube ii la
decantes, lamJle 1ft on !'immerge lq
minutes da~s. ('OOU
- bouillanflf. Sa conservabon mlt assuree' JYOu't
plusieu'l:s.semaines (Suere examcn ohimique);
N. B. - A d'Uaut de materiel sterile, Ie premier culo!
et les liquides decantes seront seuls utifise-s.
*
E. - Analyse mi~:a:obiolo&fque des.serosites.
()n e"amine Ie'S exsud'ats- nun- coagl.'danles., purrrl~ents· ou
1>. Dans Ie ells d'un Iiquid~ suspe,,!'de Ulenil'lgpcoccie; on' aj"utera avec avnnfll'ge au
2' eulot, avant de fermer Ie tube, 1 ce. d·une. solution .f...ile de glucose 1\ 5 p. 100
(Legron,.).
324 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPBCIALES
non, apres etalement, fixation et coloration du culot de cen-

trifugation, par Ia thionine, Ia methode'de Gram ou la me-
thode de Ziehl-Nielsen. ~our les exsudats fibrineux coagu-
lables, iI est necessaire de dissocier, au prealable, Ie caiIIot
dans un ballon sterile contenant des biIIes de verre, ou de
l'homogeneiser avec de Ia lessive de soude (methode de
Bezan<;on, Griffon et Philibert, methode de Petrof) ou en-
core de Ie mettre a digerer avec du sue gastrique artificiel
(voir analyse du sang, homogeneisation).
Les serosites seront ensemencees directement ou apres
homogeneisation dans les milieux nutritifs ou dans les
milieux speciaux : gelose ascite pour Ie gonocoque, milieu
T pour Ie pneumocoque, milieux de Petrof pour la tuber-
culose.
On inoculera les produits morbides au cobaye, dans Ia
cavite peritoneale s'ils sont pui's, sous'la peau s'ils sont
contamines par des microbes etrangers.
La recherche des anticorps et des antigenes sera effectuee
par les methodes habituelles de la serologie: deviation dli
complement, precipitation, floculation.
F. - Analyse microbiologique du lait.

\
QueUes que soient les precautions prises, tous les laits
frais destines a la consommation contiennent un grand
nombrede microorganismes: bacteries, moisissures,levures.
La plup!lrt de ces germes sont des microbes saprophytes,
mais il en est un certain nombre, comme Ie bacille tuber-
culeux, Ie Bacterium coli, des streptocoques, Ie Micrococcus
melitensis qui sont pathogenes pour l'homme et qu'il im-
porte de mettre en evidence par les techniques du Iabora-
toire.
10 Recherche qualitative des microbes du rait.-

a) Bacille tube/"culeux. -On centrifuge pendant 1/4 d'heure
a 5.000 tours25 centimetres cubes, de lait, additionnes de 50
centimetres cubes d'eau sterile, on recneiUe la creme et on
decante. On etaIe separement Ie culot et la creme, sur des
lames de verre. On fixe en plongeant la lame pendant. quel-
ANALYSES M1CROBIOLOGIQUES 325
ques minutes dans l'alcool methylique absolu.apres dessic-

cation a l'etuve, puis on colore suivant la methode de
Ziehl-Nielsen. On peut egalement employer nne des me-
thodes d'ensemencement indiquees au chapitre de la tuber-
culose et l'inoculation au cobaye.
b) Bacterium coli.- Memes techniques que pour la recher-
che du Bacterium coli dans l'eau.
c) Micrococcus mtilitensis. - On recueille Ie lait asepti-
quement dans des tubes steriles debouches sous Ie jet de
traite. Trois gouttes de lait sont ensuite ensemencees par
tube de gelose inclinee qu'on porte it l'etuve et qu'on ob-
serve pendant 10 a 15 jours: On dilue une goutte du memc
lait chauffe 1/2 heure a 56 0 dans IX 'ou XIX gouttes d'eau
distillee sterile contenues .dans un verre de montre flambe,
on ajoute IX gouttes d'une emufsion, dans l' eau distillec ste-
rile, d'une culture jeune d'un M. melitensis d'origine hu-
maine, ce qui donne une dilution du lait au 1/20 ou au 1/30.
On repartit dans des tubes de 6 millimetres de diametre et
apres6 heures a l'etuve, 24-48 heures a la temperature du la-
boratoire, on observe les resultats macroscopiquement et
microscopiquement (Sergent, Gillot et Lemaire, Sejollrnanl).
2 0 Recherche quantitative des microbes du lait.

a) Numeration paries cultures. - On fait une serie de dilu-
tions au 1/100, 1/1.000, 1/10.000,1/100.000 dans l'eau ste-
rile, de lait bien homogeneise par agitation et on incorpore
1 centimetre cube de ces dilutions dans un tube de gelose
nutritive, liquefieea 45 0 • On melange intimement en roulant
les tubes entre les doigts et on coule rapidement dans une
boitede Petri qu'on porte al'etuve it 37 0 • Apres48 heures, on
compte les colonies qui se sont developpees a Ia surface des
milieux et on rapporte a 1 centimetre cube. Certains auteurs
preferent cultiver les germes du lait a 20° en boites de ge-
lose ou de gelatine nutritives. On compte alors les colonies
apres 4 joms.
b) Numeration directe des germes au microscope. - La
methode preconisee par Prescott et Breed consiste a etaler
o cc. 01 de lait sur une surface de 1 centimetre carre d'une
lame de verre. On sechc a rair par agitation ou a l'etuve et
.326 MALADIES INFECTJEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
on fixe ,en plongeant Ia lame pendant quelques m-inutes:dans

i'alcool methyliqa-e absol~ On colore ensuite a:v,eC une so~
Jution a-queuse de bkll.de methylene. II fant eyiter d',em··
ploy.er un colorant alcalin qui.a I'inconvenient d'.a1tCrer la
pellicule de caseine. On compte les bacterie.s au micrGs-
cope avec l'objectif a immersion.ll est indique de combiner
objectif et oculaire de maniere que Ie diametre du champ'
microscopique soit exactement de 0 cm. 0016, correspon-
dant a une sm:face de 0 cm 2 .o05. Chaque champ microsco-
pique correspond ainsi a 5~O~00 de .centimetre cube
de l'echantillon de lai.t,
On compte les bacteries de 8 a 10 ~hamps et on prend la
moyeQne" qu'il suffit de multiplier. par 500.000 pour deter-
miner Ie nombre des bacteries contenues dans 1 centimetre
cuhe.de lait.
Bien qu'elle ne permette de deceler que les ba.cteries
coIc)fables par Ie bleu de methylene aqueux, ceUe methode
tn)sprecise et tres simple donne, dans la pratique, d',excel-
lents resultats.
~ .
"
G. - AnalY"se micr..ohiologiqlle des mines.
L~s urines destinees aux ensemqncemeIlts .et aux inocu-

lations doivent etre recueillies aseptlquement par sandage
de la vessie.
On recherchera directement les elements cellulaires
anormaux par l'.examen" a l'etat frais, d'une goutte de liquide
_entre lame et lamelle, .ou apres coloration du.culot de cen-
triJugation eta1e et fixe sur des lames de verre. Une .de ces
preparations sera coloree a J.a thionine, une deuxieme par
la methode de Gram et une troisieme par la methode de
Ziehl-Nielsen pour la recherche des bacilles tuherculeux.
I.e culot de centrifugation se'rvira egalement a!'inoculation
sous-cutanee au cobaye et a l'ensemencement sur Ie milieu
de Petrof apres traitement par Ia soude (voir 1:uber.cui()se,
chap. X'Xxvn).
Recherche.du B. Doli. - Ensemenoer 1 !Centimetr.e cub.e
d'urine ft'al:ohe .da.ns.9 ,centimmr.es cubes d'eau.peptonee,
ANALYSES MIOROBIObOGIQUES a~7
1\jouter ensuite une quantile suffisante ,d'.eau .pheui.quee..a

-5 %llour que 1e titre de 'Ia solution soit de 0;85,a:t -p.
1.000. Porter it J'etuve. Si. ~pres 24 heures, la .cu.I.ture..est
devenue trouble, on la reensemence dags un nou,v.eau
tube d'eau peptonee pheniquee. Huit heures a,p,res,
reensemencer .en bouillon ordinaire. Identifier .Ie
microbe suivant les techniques habituelles (voir B. coli,
chap. XXXII).
1:echnique speciale POllT la recherche dll Sp. iclerohemor-
,·agire. - Recueillir aseptiquement 250' it 300 centimetres
cubes .d'urine. Centrifuger dans plusieurs tu.bes .dont on
vecu.eiIIe les culots. Examiner pa,r Ie procede a 1'encr.e ,d.e
Burri ou.apres -coloration par les methodes de Fontana .et
Tribondeau ou de .Ravaut et Ponselle . .A defautde cenm-
fugeur,ou emploiera Ie procede de P. P. Levy el Liobar-
dy : Additionner l'urine fraiche de'5 it 6 centimetres .cubes
pour lOB de formol -3. 40 pour 100. Agi:ter. Ver.ser dans
de grands tubes.6 centimetres cubes d'aleool it 950 let
40 it 50 centimetres cubes d'urine formolee. Melan_gex.
Couvrir de ligroine sur une epaisseur de 2 a.3 milJimeu-es,
boucher au liege . .Agiter violemment pendant une minute.
Laisser reposer en position verticale pendant 30 :minutes.
Px:elever.a.vee une pipeUe et "erser dans nn vel're.de man-
tre la masse emulsionnee, sans aspirer Ie liquide sous~a
cent. Deposer III gouttes de I'emulsion sur des lames de
verre bien flambees et refroidies. Ajou,ter II it III gouttes
d'alcool absolu, melanger et etaler en couche minee ; secher
it l'etuve et colorer par Ie procede de Fontana- Tribondeau.
H .. - Analyse microbiologique des selles.

Examiner directement, entre lame et lamelle, une-goutte
de dilution de selle dans l'eau sterile, ou apres coloration:
thionine, Gram, Ziehl-Nielsen.
Pour la recherche des baeilles typhique et paratyphique,
dysenterique, du vibrion cholerique et de l'amibe dysen-
terique, voir les chapitres relatifs a ces microbes. ,
Technique de Calmette et Guerin pOllr la recherche du ba-
rille tllberClllellx. - On pese dans un flacon d'Erlenme;yer
328 MALADIES INFECTJEUSES, TECHNIQUES SPECIALES
30'grammes de matiere que l'on meiange en suite avec 55

centimetres cubes d'eau sterile et 15 centimetres cubes
d'antiformine. On agite a plusieurs reprises et on laisse en
contact pendant 3 ou 4 heures, puis on centrifuge, on de-
cante, on recueille Ie depot dans un vase sterile et on Ie
dilue dans 8 a 10 centimetres cubes d'eau sa lee physiolo-
gique. On Ie filtre ii. travers 2 ou '3 doubles de gaze sterile
et on J'inocule a la dose de 2 iJ. 3 centimetres cubes sous ]a
peau, it 3 ou 4 cobayes, au voisinage de la region ingui-
nale
Technique de Moreau. - Broyer dans un v.erre ou un
mortier steriles 50 grammes environ de matieres, en ajou-
tant peu a peu de la solution de chlorure de sodium a 25 p.
100, jusqu'a ce que la masse devienne semi-liquide. On
filtre sur gaze et on repartit Ie filtrat dans des tubes a cen-
trifugerqu'on remplitjusqu'aux deux tiers.. Chacun de ces
tubes reyoit ensuite 2 centimetres cubes d'un melange d'e-
ther sulfurique et de ligroYne a parties egales. On agite et
on centrifuge pendant 10 minutes a 4.000 ou 5.000 tours. Les
micro-organismes etrangers sont en grande partie detruits
par l'ether. et les bacilles tuberculeux sont rassembles a In
limite de separation des liquides. On les recueille avec
l'anse de platine pour les etaler sur lames et les inoculer au
cobaye.
CHAPITRE XXIX
TECHNIQUES SPECIALES AUX MICROBES PATHOGENES.

- BACTERIDIE CHARBONNEUSE. - COCCO-BACILLE
DU CHOLERA DES paULES. PASTEURELLlE. - BACILLE
DU ROUGET DU PORCo
A. _:_ Bact~ridie charbonneuse.

EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - BMonnet immobile, non cilie,
formes en bambou. Capsule seulement dans les humeurs de
I'organisme ou dans les cultures en serum liquide, eniiquide
cerebro-spinal ou autres milieux riches en albumines.
Spores refringentes hors de I'organisme vivant.
COLORATION. - Toutes les couleurs basiques. Prend Ie
Gram. Coloration des capsules par la safranine, par la
methode de Friedlander, ou bien par la methode de Jones
(chap. VII, III, E).
On peut encore faire la double coloration des bacilles et
des capsules d'apres Ie pro cede de Kaufmann: traiter la
preparation pendant quelques minutes par Ie )lIeu de
methylene alcalin de Laffier, laver rapidement a I'eau et
plonger pendant 4 minutes dans une solution a 0,25 p. 100
de protargol. La preparation ainsi differenciee est en suite
coloree pendant 5 a 10 secondes par un bain de fucbsine de
Ziehl diluee alp. 20 dans I'eau. Apres un dernier lavage
on examine. Les bacilles apparaissent colores en bleu fonce,
les capsules en rouge.
La coloration du sang se fait Ie mieux par Ie Gram-eosine;
celle des spores dans les cultures, par les methodes indi-
quees au chapitre VII (C).
CULTURE. - Aerobiose stricte. Elle s'obtienf sur tous les
milieux usuels legerement alcalins; pH limites = 6,0-8,5.
pH optimum = 7,0-7,4.
Temperature optimum.30 a 40°, mais Ie developpement
s'effectue a partir de 15°, jusqu'a 43 0 • La sporulation n'a
plus lieu entre 42 et 43',. Le bouillon reste limpide. Les
::30 MALADIES INFECT lEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
bacteridies y poussent en flocorls formant de legeres houp-

pes qui tombent au fond des vases et se dissocient facile-
ment par agitation.
Gelatine; liquefaction, developpement en meduse ou en
branche de sapin.
Serum coagule : lentement liquefie.
Lait: coagwe, puis digere.
Ne forme ,pas d'indol.
Les cultures en bouillon cQntiennent une hemolysine qui
dissout les hematies de lapin ou de mouton et aussi, muis
un peu moins vite', celles des autres mammiferes.
Detruit Ie .,glycogene in·vilJD at in vitro. Saccharifie lege-
rement l'amidon et attaque Ie glucose en formant des acides
lac.tique 'et acetiq.ue.
P£oduit «lans des milieux ·de -culture un ferment proteo-
lytiqu'e tres 2ctif qu'on -se.pare en tuant les bacterid-ies
,par Ie toluol at en centrifugeant Ie liquide (s~ns filtrer~.
Les bacilles non sporules sont tues par 40 minutes d.e
.chauffage it ,55 0 dans les cultures; par 1 heure de chauffage
]l 5O-§5 o .da.o.s Je sang frais.
Les spores sont ,tuees -seulemeut apres 10 minutes a '95 0
ou 3 minutes it 100· dans la vapeur d'eau.
RECHE,RCHE DE LA 'BACTERIDIE CHARBONNEUSE .DANS
LES :PllODUITS ORGANI<QUES. - Les prelevements de sang
et de f:ragmen{s ;visce.raux doivent etre ,effectuM .Ie plus ·tOt
po,ssih1e ap~s Ia mort p<9ur eviter l.es infect\oDs secondair.es,
par -Ie vibnion septiq:ue Dotamment. 00 examinera ,Ies
fn0;t.tis.colores s-uivant une des methodes indiquees ci-dessus
d!9;u cllerchera a identifier Ia bacteridie(Jar les cultures en
,gel~se et 'bouillon et par inoculation sous-cutanee ou intra-
cutane.e au coh.aye.
Pour l'envoi de produits charbonneux, il est recem-
·m~~,de.de prelev.er un metacarpe ou un metatarse dont la
-w.:o,eIle osseuse renferme des bacteridies .a reta·t de parcle,
meme lorsque les cadavres dont jls proviennent sont en
'V.oi.e .doC.putrefaction: 11 t>ufiitell'suite de scier.l'os perpcudi-
.cu{a'iTemeu,t a t>a longueur. de cauMriser a la flamme ()u an
fer rouge la surface de section et d'asp'irer avec une pipette
s-tc:rjle unc petite quantite de moeIle qu'-on ensemence
~n~ un tube de bouillon ou qu'on ¢tale a la surface d'im
tube de gel.ose,
PASY'EV-RE,+-'LOSES SIB
Coloration des cqupes d'organes d'animaux charbonneux.

- Diss6udre 1a paraffine a:vec k «ykll, puis alcoal ahsolu,
eau. Brasiline, eau ·ordina.ire, solution aqueuse de violet
de gentiane, Iiquide de LugoI, alcool-acetone presque a
;decolorati.on, ~au ordinaire, aurantla, alcool a !)(j)o, 11)0°,
xylol, ~haum~, lameHe. .
Reaction de precipitation d'Ascoli. - On addith:mne les
produits -suspects finement hroyes (rate, foie, etc.~ de 4 a
5 fpis leur poids .d'eau ph'YsioIogique .et .on faiti>ouiltilr
pendant 5 minutes. On fikre a froid sur papier }usqu'a ce
que ~e 'li~uide devienne clair. Dans un petit tuhe a
essa:i·de 3 a 4 mi;l.limetr.es de diametve, on v.erse e oc. 5 Ge
·s(lrom pr~cipi1ant anticharbonneux, puis ~yec une pipette
a efUIure tres 'fine, on ~jollte dans Ie m~me :tube 0 .cc. 5 <Iu
flIt-rat procMeat, .en prenant 1a precaution d'ap:piiquer l:ex-
tremite de Ia pipette CQntre Ia pami <Iu tube 'Pour .que i1es
liqui<Ies ~estent nettement 'Superposes. Si les organes PTo·
viennent d'un animal tIllort de charbon, un tr.ouble annn-
1a"ire caracteristj.q-ne se forme au contact des deux.liquides.
,. .
B. - Pasteurellw.
~ARA,CTERES Gi!:NERAUX (d',apres Ligfl,ieres). - Ce groupe,

auquel appartient Ie microbe, du cholera des ponIes, com-
pr.end une seJ'je de Dacteries pathogenes pour les Ilnimaux,
pr.i.noipalement ponr les r.ong~urs.et 10$ 'ruminants ,et pour
rhomme. (Septicemie OU a-apin, pneumo-enterites du mou-
ton, :de ila che1fr.e, pleuro-pneumonie.du .buflle .ou barbone.
Pasteurellose du pore (Schweinseuehe), pneumouie inf-ee-
tieu6(l ,Elu che:vai, peste humaine, ,etc,
T.ou-s .ces microbes sont des oocoo-bacilles presentant la
ooloration hi pola ire , tres poiymorphes, immobiIes, .non
.spor.mes, <surtout aerohies; non colorables par Ie Gram. ills
Ge'Pousse-nt pas sur ia :p.omme.de ter.re natur.eUe, acide,:ne
coagulent pas Ie lait, ,ne,.donnent pas ,d'indol. lIs sont ious
p:l,us .on moius .agglutiuahles par nn pasteurella-serum
tres actif, prcpar:.e par exemple avec 1a Pasteurella poxcine
,de P",eis,.;.
332 MALADIES INFECTlEUSES. TECHNIQUES SP:ECIALES
COCCO-BACILLE DU CHOLERA DES POULES.

(Pasteurella aviaire).
EXAM EN A L'ETAT FRAIS. - Cocco-bacille immobile;
formes plus courtes, isolees ou en diplocoques dans les
cultures.
COLORATION. - Facile avec toutes les couleurs basiques,
thionine phcniquee. Ne prend pas Ie Gram. Poles plus
colores, centre clair (Pasteurella).
CULTURE. - Aerobie. Tres facile dans les bouillons
Iegerement alcalins, de veau ou de poule qui se troublent
dans toute leur masse. En gelatine. pas de liquefaction:
colonies petites, transparentes, en gouttes de. rosee. Pas de
culture sur la pomme de terre (Garactere differentiel avec les
microbes de Ia typhose aviaire). Le microbe du cholera des
poules, comme la Pasteurella du lapin et les ·Pasteurell~
humaines, ne se developpe pas dans l'eau de levure. Pou I'
Ie differencier des germes de la typhose aviaire, on ense-
meneera un milieu Iiquide prepare de la maniere sui-
vante (Staub et Truche):
Delayer 100 grammes de levure de boulangerie dans un
litre d'eau de conduite en ajoutant reau peu a peu. Faire
bouillir pendant 5 minutes. Filtrer sur papier double. Ver-
ser Ie filtrat dans un ballon et steriliser a 110°-112° p~n
dant 15 minutes. Laisser deposer pendant 15 j6urs, decan-
ter et repartir Ie liquide clair.
Ce milieu..ne doit etre ensemence qu'a partir d'une culture
sur gelose ou en bouillon. Le microbe de la typhose aviaire
s'y developpe abondamment, de meme que Ie Bacterium
coli; la Pasteurella du cholera des poules ne s'y developpe
pas.
Pour l'ensemencement des produits organiques, il est
preferable de prelever un os long, une patte desarticulee ou
eoupee au-dessus de l'articulation tibio-tarsienne. On sec-
tionne transversalement l' os a l'aide d'un costotome ou d'un
secateur, on brule a la flamme la surface de section et on
plonge une pipette sterile dans le,conduit osseux pour aspi-
rer une petite quantite de moelle qu'on ensemence en suite
sur de Ia gelose Martin ou du bouillon Martin. On peut se
con tenter de plongcr un fil de platine flambe dans la moelle
CHARBON BACTERIDIEN 333
ct de Ie promener a la surface de la gelose inclinee. On

porte ensuite aJ'etuve a 37 0 (Truche).
Le virus, detruit en quelques minutes a 58°, resiste a Ia
glycerine. On 'peut conserver virulents pendant plusieurs
mois (surtout a la glaciere) des fragments assez volumi-
neux de rate immerges dans la glycerine pure a 300 Be .
Nola. - C'est dans Ie filtrat d'une culture en bouillon du
cholera des poules que Pasteurdecouvrit la premiere toxine
soluble, en 1880.
**'*'
C. - Baeille du rouget du pore.
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Immobile. Elements isoles
ou groupes par deux dans les tis sus ou en am as souvent
inclus dans les phagocytes. Chainettes dans les ·cultures en
bouillon:
COLORATION. - Toutes les couleurs basiques. Thio-
nine pheniquee. Prend Ie Gram.
CULTURE. - Aerobie. En bouillon legerement alcalin
a :no, trouble uniforIPe en 48 heures. Colonies flocon-
neuses. L'addition de 2 p. 1.000 de glucose ou de liquidc
d'ascite favorise la culture.
En gelatine, par piqure, developpement rayonne en
brosse a bouteille, caracteristique. Pas de liquefaction.
Sur gelose, colonies petites, blanches ou grisiHres.
La culture sur pomme de terre ne reussit que dans Ie
vide. Elle est peu abondante.
Microbe virulent pour Ie pore, Ie. lapin, la souris, Ie
pigeon; cobaye et poules refractaircs. Tue par chauffage
30 minutes a 50°, en quelques minutes a 580, exalte par pas-
sages. sur Ie pigeon, attenue pour Ie pore par passages suc-
cessifs sur Ie lapin.
CHAP IT RE XXX
S'l'AI?HY:LOCOQUE. - STREPTOCOQUE. -PNEUMOPOQrJE.

- MENINGOCOQUE. - GONOCOQUE. - MICROCOCCUS
MELITENSIS ET BACILLUS ABOR·TU'S.
A. - Staph-ylocoque.
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Diplocoq.ues, couries
chainettes ou petits amas da-ns les p'l'oduits paj_)hologiques.
Formes en grap,pes et elements isoles dans .les cultures.
Immobile. Non cilie. N'e sporule pas.,
COLORATION. - ' Prend' Ie tiram, se colore egalement
avec les couteurs basiques d'aniline, Ie- brun de Bismar.ck,
Ie vert malachite et aussi avec certaines couleurs acides,
par exemple [orange G, ou l'aurantia, en solution aqueuse
concentree.
Les coupes doi.vent etre traitees par Ie pic];o-carmm.
et Ie Gram~ ou bien d'abord par Ie Gx;am-Nicolle-,. puis par
Ie 'eaWl'in. I
CULTURE. - Temperature opt. 24. a. 38 0 , ruais pousse
ellcoue it 60. Aerobie facultatif.
Les ruilieuiX solides usuels con"ienneni parfaitement. 11
est utile de les alcaliniser· un peu. L'optimum d'alcali-nisa-
tio'll esb de 6 ce. 8' de lessive normale de soude paJ: litre,
ajoutes a partir du point de neutra:iisat:iol1. au. tourn-esol.
pH limites,= 5,6-8,1. pJiI uptimum = 7,2-7,6.
Le lait est coagule.
DansIe bouillonrascite, les cultures agglutirrecs paussent
enamas.
La gelatine est tiquefiee assez rapidement (ferment tryp-
sique)._
Les pigments colores se developpent Ie mieux sur
serum de bamf gelatine-, sans glycerine, et sur pomme de
terre.
Les cultures sont tuees par 2 ou 3 heures de chaufIage
a 52·53°, en 10 minutes a 62°, en 5 minutes a 70 0 •
STREPTOGOQUE 335
le filtrat contient une leucocidine et une ltemol'gsine 1>.

eette derniere est detruite par Ie chauffage a_·6&O et reap-
parait a_ 1000 • (Landsteinel' et von Rauchenbiehlel'.)
.*.
B. - Streptocoques.
10 STREPTO,COQ'OES AEROBI~S,.
La privcipale varie1e pathogene est Ie Sir. longus pyo-

genes.
EXAM EN A L'ETAT FRAIS. - Chainettes plus ou morns
Iongues, encapsulees dans IeS' exsudats.
COLORATION. -Partoutesles couleurs basiques d'llniline.
Prend le Gram.
CULTURE., - Temperature opt. 24-38°. Tres tente de 1'2
a_, 150 , Anaerobie facultatif. pH Hmi'tes = 5,8-8',O~ pH opti-
mum = 6,2~1,0.
L~ gefose-peptone de Witte Iigeremerrt aIcaIlne, en tubes.
inclmes, arr:osee a_ sa surface de quelques gouttes d'e sang
huma-iu, convient surtout pour l'isolement.
6el'Ose lactosee tournesolee. ~ Fines cohmies bleufees en
21J: henres, surelevees legerement au centre en suite, avec
bord~ sinueux. Virage en 2'4 neures.
Lait. - Coagule en 24-48 heures, avec tassement du caiJ:...
lot. '
Bauillon serum de M'armorek.
Bouillon fraichemenl prepare et alcalin. 1 p.
5 cc environ de lessive de soud& par litre
it partir de lit neutralile.
Serum humain frais.. . . • . . • . 2 p.
ou bien:
Bouillon 2 p. Liquide d'aseite, 1. p"
01L bien ~
Bouilhm Marlin 1- p. Seru):U de ehev.al
iooctive par 30 minutes-de chauflnge it 58<> 1 p.
1, Pour In recherche des hemolysines des stuphylocoques ot streptocoques, voir la

technique deerite U pl'OpOS du cholera (chapitl'e "XXIV).
3_3S-:MALADIES INFECT IEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
On melange aseptiquement Ie serum ou Ie liquide d'ascite

au bouillon prealablement sterilise a l'autoclave ou mieux au
filtre Chamberland. .
ISOLEMENT ET IDENTIFICATION DES STREPTOCOQUES DEs
PLAIES DE GUERRE. •
a) Milieu d'enl'ichissemenl de Weisseflbach (eau peptonac
glue osee a I'albumine d'reuf; alcaline) :
Eau. . . • • • . . . •• • 100 cc.
Peptone Chapoteaut. . • . . . . . • 4 gr.
Sel. . . . • . . . • . • • . • • o gr. 50
Glucose. . . • . . • . . . . ' . . o gr. 20
Alhumine d'reu( alcalinisee par la soude et
diluee it raison d'une partie de blanc
d'reuf pour trois d'eau distillee. . . . 100 ce.
b) Gelose ordinaire en tubes inclines.

c) Gelose de Veillon pour ensemencement anaerobie (voir
chap; III et XXXIX).
Les streptocoques pyogimes attaquent l'amidon soluble,
Ie saccharose et Ie lactose en formant des acides. Ils n'atta-
querit pas I'inuline, la mannite et la glycerine. Le mililEu
de Saloinon permet de les differencier des autres groupes de
streptocoques et des pneumocoqu_!:)s: A 10 centimetres
cubes de gelose nutritive a 3 p. 100, fondue a 58°, on
ajoute 1 ce. 5 d'une solution d'amidon soluble a 10 p. 100
faite dans la teinture de tournesol, puis 5 c6ntimetres cubes
de liquide d'ascite frais, inactive par 30 minutes de chauf·
fage au bain-marie.
On melange et on coule en boites de Petri qu'on ense-
mence en etalant en surface une goutte de liquide au moyen
d'un petit earn~ de papier glace sterile.
On peut incorporer a ce meme milieu les divers sucres a
la place de I'amidon.
(Pour la preparation de I'amidon soluble voir chapitre:xvlI
reactif de Tromsdorff.)
Hemolysine. - 'Pres fragile, disparait rapidement dans les
cultures. On l'obtient Ie mieux en bouillon-serum apres 8 a
10 heures d·etuve. Elle est detruite par une demi-heure de
ehauffage a 55°. Son action est paralysee par 2 p. 100 ae
chlorure de sodium.
(Pour la technique de titrage voir chapitre XXXIV, Cho-
lera.)
STREPTOCOQUE
VARIETES DE STREPTOCOQUES PATHOGENES
S. [ol1gissimus"(amygdales de sujets sains).

S. conglomeratus (Kurth, amygdales de sujets sains).
S. brevis (non hemolysant, cavite buccale de sujets
sains).
_ Les enterocoques se differencient difficilement des strep-
tocoques non hemolytiques. Us produisent une toxine tres
resistante a la chaleur.
STREPTOCOQUE DE LA GOURME OU CHEVAL

(Streptococcus ·equi).
EXAMEN A L'ftTAT FRAIS. - Cocci jsol~s, diplocoques
au chainettes plus au mains longues dans Ie pus. Longues
ehainetles sinueQses, enchevetrees dans Ie bouillon-serum.
COLORATION. - Facile par les c.ouleurs basiques d'ani-
line. Prend Ie Gram.
CULTURE. - Aerobie indifferent. Temper. opt. 37Q.
Bouillon. -. Culture rapide sous forme de petites mas~es
blanches qui se deposent peu it peu. pendant que Ie Iiquide
s'cclaircit. Se developpe mieux dans Ie bouillon de cheval
que dans Ie bouillon de breuf. Hemolyse en quelques heures
Ie sang defibrine de cheval ajoute au milieu (Brocg-Rous-
seu, Forgeot et Urbain).
Gelose. - Culture directe difficile en partant du pus. En
24 heures, colonies arrondies. punctiformes, transparentes.
Puis strie ,etroite; blanc grisatre ou jaunatre (Lignieres).
Gelatine. - Culture difficile. Liquefaction faihle 0"
Serum coagule. - Goutlelettes grise.s, transparentes,
nulle.
bientot confluentes.
Lait. - Barement coaguIe.
Att~que dextrose, saccharose, maltose et lactose, mais
non raffinose et mannite.
Pathogene pour Ia souris, 'Ie rat blanc, Ie cohaye (surtout
lorsqu'on l'inocule dans 1a cavite peritoneale). Ie Japin (sur-
tout par la voie veiq_euse) et Ie cheval (par toutes les voies).
On peut infecter Ie cobaye et Ie lapin par la voie digestive
(Brocq-Rousseu, Forgeot et Urbain).
Peu toxigene.
MICROBIOLOGI2 22
338 MALADIES INFECTIEUSES, TECHNIQUES SPECIALES
2 0 STREPTOCOQUES ANAEROBIES.
(d'apres Prevot)
A) Stl'epi'ocoques producteurs de gaz et {elides.
Micrococcus fcetidulJ (Veillon).
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Gros coccus arrondi ou
ovoide ; diplocoques ou chainettes courtes dans les sero-
sites; chainettes de 6 a 8 elements dans Ie bouiJIon neutre
(Prevot).
Coloration. - Prend Ie Gram.
Culture. - Anaerobie strict.
Bouillon Martin glucose. - Culture en grumeaux sans
trouble. Degagement de gaz'fetides, inllammables.
Gelose Veillon. - En 48 heures, coionies punctiformes.
Uegagement gazeux, plus ou moins abondant.
Gelatine. - Non liquefiee.
Lait. - Non coagule.
N'attaque aucune proteine chaufIee (blanc d'reuf coagule,
foie, viande, fiorine, serum coagule).
Pouvoir pathogene inconstant. Non toxigene.
St. anaerobius (Kronig;-Natvig.)
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Courtes chainettes dans les
produits morbides'et Ie bouillon alcalin ; lohgucs chainettes
dans Ie bouillon neutre.
Bouillon glucose. - Grumeaux sans trouble. Degagement
gazefiX', -fetide, Acidification.
Gelose Veillon. - En 24 heures, colonies regulieres,
lenticulaires. Dcgagement gazeux.
Gelatine. - Non liquefice ..
Lait. - Non·coagule.
Aucun pouvoir protco}ytique.
Proprietes' pathogenes et toxigehes faibles et transitoires.
Sf. pUfridus (Schottmiiller). ~.
E:itAMEN A L'ETAT FRAIS. - Courtes chainettes dans les
serosites et les milieux.alcalins, longues chainettes dans les
bouillons neutres.
STREPTOCOQUE 339

Culture. - Anaerqbie strict. Bouillon glucose. Trouble
rapide. puis depot. Pas de degagement gazeux. Odeur
putride.
Gelose Veillon. - En 24 heures, colonies lenticulaires.
Pas de gaz.
Gelatine. _ Non liquefiee.
Aucun pouvoir proteolytique.
Pouvoir pathogene variable selon les cchantillons. Non
toxigene.
Slreptocoques ni producleul's de gaz ni (elides f!'revot).

St. micros.
EXAMEN A L'ETAT FRAIS'. - Fin streptocoque en longues
chainettes 'dans les bouillons neutres.
Bouillon glucose-. ~ Trouble bomogene. Acidirication.
Gefose Veillon.·- En 2 ou 3 jours, colonies puncti-
formes, puis lenticulaires, arborescentes.
Gelatine. _ Non liquefiee.
Pyogene pour Ie cobaye. Non toxigene.
St. intermedius (Prevot).

EXAM EN A. L)\:TAT FRAIS. - Diplocoques dans les cra-
chats ; Jongues chainette~, parfois bifurquees. dans les
bouiIIons neutres.
'Coloration. - Prend Ie Gram.
Culture. _ Anaerobie strict. Ni gaz, ni odeur.
Bouillon glucose. - Culture abondante, depot, acidifica-
tion.
Gelose Veillon. - En 48 heures, colonies regulieres.
limticulaires.
Gelatine. - Non liquefiee.
Lait..- Co.agule sans retrait ni digestion ulterieure du
~aillot. Acidification.

Pyogene pour-Ie cobaye et la souris. Non toxigene.
'St. evolutus (GrOf et Wittneben, Prevot).

EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Tres polymorphe. Longues
chainettes dans les bouillons neutres.
Culture. - Anaerobie au .moment de l'isolement, Ie mi-
crobe s'accoutume a l'oxygene et devient faiblement aerobie
fa cuI ta tif.
Bouillon, - Grumeaux sans trouble.
Gelose Veillon. - Colonies lenticulaires:
Gelatine. - Liquefiee.
Lait. - Coagule en 24 heu'res avec retrait du caillot.
Pyogene pour Ie cobaye et la souris, mais irreguliere-
ment.
C. - Pneumocoque.
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Diplocoque lanceole (grain

d'orge, flamme de bougie), encapsu\c -dans les produits
pathologiques et les milieux de culture albumineux. Non
capsule, en courtes chainettes ou petits amas dans les
mjlieux non albumineux.
COLORATION. - ?ar toute'S les couleurs basiques d'ani-
La capsule est decoloree par Ie Gram et colorable par
l'eosine (voir technique de coloration des capsules; cha-
pitrevn). _
CULTURE. - Ne pousse pas a 20°. La gelatine ne peut
done pas etre utili see. Le milieu de choix est la gelose:pep-
tone arrosee de sang de lapin ou de sang ·humain, ou Ie
bouillon-serul1], comme pou~ Ie streptocoque. pH limites =
7,0-8,3.pH optimum = 7,8.
Milieu de Salimbelli et d'Herelle (liquide). :- On fait Jige-,
rer pendant 7 a 8 heure,s (pas plus), a 50°, des estomaes de
pore degraisses et haehes eomme pour la preparation de la
peptone de Martin. L'eau est d'abord portee vers -55 0 •• Oh
PtvEUMOCOQUE 341
ajoute ensuite, par litre, 10 centimetres cubes d'ijCl pur (22°

Be) et, en agitant, 3.00 grammes de hachis d'estomac. On
regIe la temperahfre. vers 50°. Apres 7 a 8 heures, on monte
celle-ci a 80-90° -afin de detruire la pep sine et d'arreter la
qigestion. La peptone ainsi ohtenue se conserve, sans pre-
cautions, pI-p.sieurs semaines.
Pour prepare):' Ie milieu destine a la culture du pneumo-
coque, on rend la peptone legerement alcaline au tournesol,
par addition de soude, et on sterilise it 1200 • On filtre sur
papier Chardin mouille et on ajoute 2 grammes de glucose.
On sterilise apres repartition vers 1120 a 115 0 •
Pour conserver les pneumocoques virulents, Ie milieu
sUlvatit est excellent:
Milieu T(de Truche) liquide
Peptone Chapoleaot 4 gr.
Chlorure de' sodium. o gr. 5
Glucose. . . . . o gr. 2
Eau disliIlee.. . • 100 ce.
Faire dissoudre a 800 • Alcaliniser legerement j IIsqu'u

reaction legerement rose avec Ia phtaleine de phenol. Fairc
bouillir pendant 5 minutes, filtrer, repartir et steriliser
1/4 d'heure a 1100 •
II est bon, pour les premieres cultures, d'additionner
cc milieu de 1/3 de liquide d'ascite.
Gelose T. - Meme composition que Ie milieu T liquide.
On ajoute 20 grammes de gelose par litre. Apres dissolu-
tion de la gelose, on alcalinise jusqu'a vix:age legerement
rose de la phenolphtaleine. On repartit en tubes sans filtrer
et on sterilise it 110 0 pendant 20 minutes. On laisse les
tubes en position droite pendant 30 minutes dans l'auto-
clave chaud ouvert, puis on les incline com me les tubes de
gelose ordinaire.
Nota. - Les pneumocoques virulents sont solu~les dans
Ie. bile (0 cc. 1 a 0 cc. 2 d'un melange de bile de lapin
et de glycerine dans 1 ,centimetre cube de culture de
24 heures en bouillon ou-d'emulsion de culture sur gelose),
Ie milieu s'cclairciten quelques minutes a la temperature du
laboratoire (phlmom€me de Neufeld). Le taurocholate de
soude, en solution a 10 p. 100 dans l'eau salee physiQlo-
gique sterilisee, a la meme action a 1a dose de 1 volume
pour 100 volumes de culture.
Milieu differentiel.
1 vol.
M {'l'leu de H'ISS ft Eau
Serum de bamf.
distillee. . 2 vol.
Ajouter 1 p. 100 de teinture de tournesol a 5 p. 100,

chauITer a 100°, filtrer. Ajouter 1 p. 100 d'inuline.
Steriliser par chauITage discontinu a 100 0 •
Le pneumocoque fermente l'inuline. Le milieu rougil et
se coagule. Le streptocoque ne fermente pas.
CONSERVATION DE LA VIRULENCE. - Procedi ala gela-
tine(M. Nicolle, Cotoni et Truche). - Dans un litre de milieu
T chauffe au bain-marie, faire dissoudre 150 grammes de
gelatine portee a 550 , ajouter un blanc d'ceuf; alcaliiiiser ;
chauffer 1/4 d'heure a 1150, filtrer, repartir en tubes; steri-
liseI' pendant 20 minutes a 1100 • Au moment de l'emploi,
on fait fondre un fube de gelatine Tau bain-marie et on y
.introduit la culture a conserver dans la proportion de
2 parties de gelatine pour une de culture. On melange
intimement en roulant Ie tube entre les mains et on porte
a la glaciere. Les microbes conservenl ainsi Jeur vitalite ~t
leur virulmtte pendant plusieurs mois. Pour les repiquer,
il suffit de fluidifier la gelatine a 370 et d'ensemencer 2 it
3 centimetres cubes de son contenu dans un tube de
milieu T. I
Sera-agglutination (M. }Yicolle). - Centrifuger une cul-
ture en bouillon T de 16 hel1rl:ls. Emulsionner Ie culot dans
reau chloruree s6'dique a 10 p. 1.000, a raison de 1 centi-
gramme de germes par centimetre cube de liquide. Verser,
dans une ser:ie de petits tubes a essai steriles, de 4 a 5 milli-
metres de diametre.l centimetre cube d'emulsion et ajouter
dans chacun d'eux des doses decroissantes de serum: 1/20,
1/50, 1/100, 1/200 de centimetre cube. Boucher a rouate,
agiter pendant5 minutes. Si l"agglutination n'est pas imme-
diate, Iaisser les tubes a Ia temperature du laboratoire pen-
dant 12 heures et lire les resultats.
Les pneumocoques serepartissent en agglutinables (43 %);
hyperagglutinables (agglutinables par Ie serum normal
frais) (7 %) ; inagglutinables par les methodes ordiI}aires
(45 %) mais agglutinables apres avoir ete traites par la
methode suivante de Porges: ajoufer 1/10 d'Rel n'ormal a
10 centimetres cubes d'emulsion de pneumocoques. Plon,({er
MJJ:NINGOCOQUE 343
5 minutes dans l'eau bouillante, refroidir.a l'eau cour~mte,
neutraliser avec1/10 de NaOH normale. Repartiret opereI'
com me precedemment. Selon les echantillons, il est parfois
necessaire de porter de 2/10 a 5/10 la quantite d'HCl.
Streptococcus mucosus capsulalus - Simple variete de
pneumocoque du type III; facilement agglutinable par Ie
serum anti-pneumococcique Ill; forme des capsules tres
cpaisses meme dans les milieux non albumineux.. Dis-.
position frequente en chaflletles courtes et rectilignes. En
bouillon, trouble uniforme avec ondes Sur gelose, colonies
visqueuses, Ctalees. En gelatine, colonies globuleuses.
Soluble dans la bile.
On Ie trouve dans 10 pour 100 environ des pneumonies
(cas graves, souvent mortels) et surtout dans les.suppura-
tions oto-mastoidiennes.
Pathogene pour Ie cobaye (M. L'evy-Bruhl), la souris
et, parfois, Ie lapin.
Produit une hemolysine assez active ct comme presque
to us les pneumocoques, transforme l'hemoglobine en me-
themoglobine.
D. - Meningocoque.
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Cocci isoles ou diploco-.
ques en grains de cafe dans les produits pathslogiques. Les
preparations faites avec le depot centrifuge de liquide cere-
bro·~pinal preleve par ponction lombaire montreni la plu-
part des elements microbiens inclus dans les leucocytes.
C;occi isoles, tetrades et formes geantes d'irwollltion dans
les milieux de culture. surtout a Ia premiere generation.
COLORATION. - Bleu Loffier ou hi en Borrel. Ne prend-
pas Ie Gram. Le meningocoque se trouve souvent associe'
au DiplococclIs crassu.> ou psclldo-merzingocoquc de Jaeger,
qui est plus epais, plus arrondi, et reste colore par Ie-
Gram. Le meningocoql1e vrai ne peut etre differencie
des parameningocoques que par l'etude complete de ses
diverses reactions biologiques.
CULTURE. - Aerobie strict. Temperature optimum 37°,
Ne se developpe pas au-dessous de 22°,
Bguilloll ascite. - 3 volumes de bouillon, 1 volume d'as-
344- MALADIES INFEC7;'IEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
cite.Le meningocoque ne commence a troubler ce milieu

que vers Ie 5~ ou Ie 6e jour. Voile mince it la surface.
Gelose-asci/e.
Bouillon gelose .• 3 vol.
Ascite •. ' • • • 1 vol.
"
Faire Ie melange a la -temperature de 50°. Couler en
boites de Petri. Laisser solidifier.
0).1 ensemence ces plaques directement'au lit du malade,
avec les tampons d'ouate qui ont servi a prelever les exsu-
dats nasopharynges; on les porte 36 heures it l'etuve, puis
on repique les colonies sur les milieux differentiels. S'il
s'agit d'un liquide de ponction lombaire, on e!ale sur ce
milieu une partie du depOt centrifuge: Les colonies du
meningocoque se developpent en 20 it 24 heures it 370.
Si ron ne peut se procurer du liquide d'ascite, on
emploiera Ie milieu suivant, preconise par SacqUl!pee .et
DelateI' :
On melange, dans un vase d'Erlenmeyer prealablement
gradue, deux blancs d'ceuf entiers. On y ajoute 3 fois leur
volume d'eau distillee et 0 cc. 5 p. 100 centimetres cubes
d'une solution de soude caustique a 10 p. 100. On sh~riHse
a l'autoclave a 115° pendant 15 minutes. On ajoute 1
partie de ce liquide a 5 parties de bouillon gelose neutre
sterile, fondu it 55°, et on coule en plaques. \ .
M. Nicolle, E. Debains et C. .louarz recommandent l'em-
ploi de la gelose Truche (ou Mlose T) comme milieu habi-
tuel.
Gelose au serum [ormole (M. Nicolle, E. Debains et .louan).
- Pour preparer Ia gelose-Martin-serum (formole), on
ajoute, a 500 centimetres cubes de serum de cheval, 1 centi-
metre cube de formol du commerce. On mele. On verse
apres quelques instants 1 centimetre cube d'ammoniaque a
220 Be pour neutraliser la formaldehyde, on etend de deux
parties d' eau dislillee et on sterilise pendant 15 minutes a
l'autoclave a 110°. Le milieu contient ainsi Hne partie de
serum pour 9, ce qui suffit.
Dans Ie bouillon preconise par Salimbeni et d'Herelle
pour Ie pneumocoque, Ie meningo pousse egalement tres
bien et reste vivant pendant une quinzaine dejours.
Presque tous les meningos, d'apres M. Nicolle et .ses
MENINGOCOQUE 34t>
collaborateur's, attaquent Ie glucose, Ie maltose et, moins

energiquement, Ie levulose.
Pour l'isolement, on ens~mence, sur gelose-serum et en
milieu de Salimbeni et d'Herelle, Ie culot de centrifugation
du Iiquide cephalorrachidien preleve par ponction lombaire.
Milieu MM. (Panse glucosee). - Prendre, par exemple~
un litre de peptone Martin obtenue par digestion courte
(6-'8 heures); elle est fortement. acide. Alcaliniser, pre-
cipiter par chauffage a" l'autoclave pendant 15 minutes
a 120°. Filtrer sur papier, ajouter 2 grammes de glucose
par litre, repartir et steriliser par chauffage a l'autoclave
15 minutes a 112-115°.
Gelose au placenta (de Kutscher:). - Preparer un litre de
bouillon en faisant macerer 500 grammes de placenta bache
dans 1 litre d'eau:
Ajouter:
Gelose .. 2,5 p. l{)O
NaC!. {).5
Glucose. 1
Nutrose. . • . . 2
Peptone Chapoteaut. 2
A 3 volumes de cette gelose, legcrement alcalinisee ct

sterilisee., ajouter 1 volume de serum de brouf inactive par
chauffage a 60 0
•La gelose et Ie serum steriles doivent
etre portes l'un et l'autre fila temperature de 50° au b'ain-
marie avant d'en faire Ie melange.
CONSERVATION DES SOUCHES DE MENINGOCOQUES eM. Ni·
1;011e, D_ebains -et Joua/l). - On prend de gros tubes a
essai de 25 mm. de diametre et on y verse de la gelose-
Martin au serum formole, de fayon a obtenir un culot de 5
a 6 centimetres de hauteur. A la surface de ce culot solidifie,
on depose une anse de germes sans trap en lamer Ie milieu.·
On etale, afin d'obtenir, au centre de la surface Jibre, un,
disque d'epaisseur partout egale et on porte a l'etuve a 37 0 •
Les microbes ne tardent pas it se developper : Ie disque
d'ensemencement gagne lao paroi du lube 'et se sureleve
progressivement. Ils demeurent vivants pendant deux mois,
en general. Les repiqllages mensllels suffisent.
Pour l'envoi des cultures, on fait fondre un tube de
gelatine, on emulsionne. une grande quantite de germes
jeunes dans Ie milieu, on refroidit et on scelle.
~ MALADIEB.INFECT.LEUSES. rflCHmQUES SPEC/ALES
- A. Dujarric ,de la Riviere el A. Roux preconisent la tech-

nique suivante :
1. - On prepare: 10 de la gelose-foie selon la formule :
Foie de cheval (foie coupe en morceaux). • 500 gr.
Eau. . . • . . • . . . . . . . . 1.000 cc.
Faire bouillir a petit feu pendant 2 heures dans une

marmite fermee; filtrer sur papier; ajouter la 'quantite
d'eau qui s'est perdue par evaporation; mettre 20 grammes
de peptone Chapoteaut par litre; neutraliser, alcaliniser
faiblement ; meitre 20 grammes de gelose par litre; auto-
clave a 1150 pendant 30 minutes ; repartir sans fiJtrer;
sterjliser a 112 0 pendant 20 minutes.
2 0 Le melange suivant:
Gelatine (au bouillon). . . . . . • . • 200 cc.
Extrait globulaire(formule Agulhon-Legroux). 40 cc.
On s'assure par un sejour de 48 heures a l'etuve que ces

milieux sont steriles.
II. - La souche a conserver est d'abord semee a Ia surface
d'un culot de gelose-foie (repartie en tubes de 22 mm. pour
avoir une large surface de culture). Apres 48 heures d'etuve
on verse directement sur la culture (sur une hauteur de
4 centimetres environ) Ie melange gelatine-extrait globu-
laire prealablement fondu a une douce cpaleur: quand la
gelatine a fait prise, on ferme Ie tube a lit lampe.
III. - Au moment OU l'on veut pratiquerle repiquage on
commence par mettre Ie tube a l'etuve a 37 0 pendant quel-
ques heures. On ouvre en suite Ie tube en cassant Ie verre
Ie plus loin possible de la culture, puis on bouche avec un
coton sterile. En inclinant Ie Iiquide (gelatine liquefiee), on
prend aseptiquement avec une spatule Ie plus possible de la'
culture qui est sur la surface plane de la gelose-foie; avec
Ie fragment ainsi preleve on ensemence largement, et sans
trop etaler, un tube de gelose-ascite inclinee et on met a
l'etuve a 37°. On remet de meme a l'etuve, apres l'avoir capu-
chonne, Ie tube otigine afin de pouvoir pratiquer d'autres
repiquages.
DIAGNOSTIC B'ACTEnIOLOGIQUE DE L'INFECTION MENIN-
GqCOCCIQUE. - Recherche du meningocoque.
A) Dans Ie liquide ceplzalo-rachidien (chap. xxvnr, B). -
MENINGQCOQUE 347
Le liquide cephalo-rachidien, preleve par ponction lom-

baire, est centrifuge pendant \5 it 20 minutes.
Examen microscopique. - Decanter Ie liquide clair.
Avec bne pipette effilee, prelever quelques gouttes du culot
de centrifug~tion, et les etaler sur plusieurs lames de verre.
Dessecher, fixer par la chaleUl: ou l'alcool ether; faire un
Gram et colbrer Ie fond par Ie Ziehl dilue.
Le meningocoque se presente sous la forme de cocci
en grains de cafe intraleucocytaires ou libres, ne prenant
_pas Ie Gram.
IsoIemenl du meningocoqlle.
10 Procede classique. - Ensemencer abondamment Ie
culot de centrifugation sur gelose-ascite, en tubes ou boite
de Petri. Mettre it l' etuve it 37 0 pendant 24 heures, exa-
miner les colonies qui ont pousse.
2° Procetle de Tribondeau. - Apres la ponction Iombaire,
prelever de 5 it 10 centimetres cubes dfl Iiquide cephalo-
rachidien. Le reste sera centrifuge pour l'examen micros-
copique et l'ensemencement du culot.
Couler de la gelose-ascite dans une grande boite de
Petri. Lorsqu' eUe est prise, verser sur Ie milieu les 5 it 10
centimetres cqbes de Iiquide cepl)alo-rachidien qui ont
ete preleves. La boite de Petri ainsi ensemencee est placee
~ plat it l'etuve it 37°. Au bout de quelques heures, incliner
legerement la boite de fayon que Ie liquide cephalo-rachi-
dien laisse a decouvert une bonne moitie de la surface du
milieu."
Vers la 18" heure, examiner les colonies de meningoco-
ques qui ont pousse dans la zone seche. Ie plus souvent it
la limite du liquide.
B) Dans Ie mucus rhino-pharynge. Le mucus doit ltre

preleve dans Ie rhino-pharynx avec l'ecouviIlon d_'ouate
sterile:
Deposer une parcelle de mucus recueilli sur une' boite
de Petri contenant de la gelose-ascite. Avec une pipette
coudee, l'etaler sur la boile. Sans la recharger-on peut faire
une 20 et une 3" boite semblables.
C) Dans Ie sang. 5 centimetres cubes de. sang ensemences

dans un ballon de 250 centimetres cubes de bouillon
ascite ou d'un autre milieu favorable. Isoler en suite sur

gelose-ascite.
IDENTIFICATION. - Les epreuves d'identification per-
mettent de reconnaitre : 10 si Ie germe isole est un menin-
gocoque j 2 0 a quel type de meningocoque il appartient.
Epreuve des fermentations SUCl'ees parle milieu diffel'en-
tiel au rouge lleulre (Dopier, R. Koch).
Dans une serie de matras con tenant chacun 75 centi-
metres cubes de bouillon gelose it ~ p. 100'fondu au bain-
marie a 55 0 , on fait dissoudre 1 gramme de ~hacun des
sucres suivants (chaque sucre dans un matms different) :
Glucose.
Saccharose.
Maltose.
Lactose.
" On chauffe 20 minutes a l'autoclavea 1050, on laisse refroi-

dir a 50", on ajoute a chaque matras 25 centimetres cubes
de liquide d'ascite et 1 centimetre cube de solution aqueuse
de rouge neutre alp. 100. Le milieu prend une couleur
orangee. On Ie mainticnt au bain-marie pendant 1 heUl"c.
An bout de ce temps, un precipite se forme. On agite les
inatras et on coule chaque milieu en boites de Petri. Sous
une faible epaisseur, il prend une teinte jaune et rougit
nettement sous les colonies qui fermentent les sucres.
Voici les resultats de la reaction avec Ie me'ningocoque et
avec les principaux microbes dont il s'agit de Ie diiIeren-
cier:
Glucose" Sacchal'ose Maltose Lactose
Meningocoque el Parameningocoque. + 0 + 0
Diplococcus crassus. • • . • . .
Microc. catarrhalis. . . .
+0 +0 +0 +0
Diploe. pharyngis flavus 1. + 0 + 0
II'» II. + 0 + 0
» III. + 0 +0 0
Gonocoque. + 0 0
DIAGNOSTIC PAR LA SERO-AGGLUTINATION~. - On prend

3 tubes a essai et on verse dans l'un, 1 centimetre cube d'une
dilution alp. 100 de serum anti-meningo (non chauffe),
dans les deux autres, respectivement, 1 centimetre..cube de
dilution aLp. 100 de serum de cheval normal {non chaufIe
et 1 centimetre cube d'eau salee physiQlogique a 7 gr. 5
p. 1.000.
MENINGOCOQUE 349
On emulsionne dans chaque tube 1 ans~ de culture au

d'emulsion concentree d'une colonie agee de 24 heures du
meningoccrque a identifier. On porte a l'etuve a 37°, L'ag-
glutination est cbmpli~te au bout de quelques heures
(24 heures au plus) da!ls Ie premier tube s'il s'agit d'un
meningocoque. Beaucoup de pseudo·JTlcningocoques s'agglzz-
tinenl spontanemenl el presque instantanement dans ['eau
salCe physiologique. C'esl le cas, en particzzlier, pour Ie
lIfieroe. eatarrhalis.
11 est souvent commode d'effectuer Ia reaction d'aggluti-
nation directement sur lames (S. Costa):
On depose au centre d'une,lame deux gouttes d'enn salee
physiologique dans lesquelles on emulsionne, avec une anse
de .platine, un fragment de colonie suspecte. O~'J'ajb{Ite
une anse (representant environ 1/25 de goutte) de serum
agglutinant. On melange fortement pendant quelques
secondes, puis on recOUvre d'une lamelle et on examine.
Si, au bout de deux a trois minufes, l'agglutination ne se
produit pas, Ie sero-diagnostic est negatif. On fait ega-
lement une epreuve de conirole ayec du serum normal et
une autre avec de l'eau salee physiologique.
M. Nicolle, E. Debains el C. Jonan ant signare l'existenc'e
de plusieurs types de meningocoque (A, B, C) plus speoi.
fiquement agglutinables par un serum. .
Dans la region parisienne, Ie type B est Ie pIlls commun.
Pour determiner chaque type, on cultive les germes sur la
gelose Truche (voir chap. xxx, C) et, apres 24 heures
d'etuve, on les emulsionne dans de l'eau physiologi'que
additionnee de 1/20 de bouillon Martin, a raison de 1 centi-
metre cube de microbes pour 20 centimetres cubes de
liquide. On prepare 4 groupes de 4 tubes contenant 1 cen-
timetre cube d'emulsion et on verse respectivemerit poor
chaque groupe 1/20, 1/50, 1/100, 1/200 de centimetre cube
de chaque serum anti A, Bet C au de serum equin nornlal
(il est exceptionnel qu'on soit oblige d'emplQyer plus de
1/200 de centimetre cube de serum specifique). Oh agite
environ 10 minutes et on note]e taux auquel I'agglutination
se produit dans chaque lube. '/'
Sero'agglutination par la' 'methode de Porges modifiee
(M. Nicolle, Debain:~ cl JOllanj. - "Emulsionner les germ€s
provenant d'une culture recente sur gelose T, a raison de
350 MALADiES iNFECTiEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
1 centigramme 'de microbes pour 20 cc. d'eau physiologique

a10 p.1.000. Ajonter 0 cc. 1 d'acide chlorhydrique normal
pour 20 cc. d'cmulsion. Plonger 5 minutes dans l'eau
bouillante. Refroidir sous un courant d'eau et neutraliser
avec 0 cc. 1 de soude normale. '
Verser 1 cc. de l'emulsion ainsi traitee dans une serie
de tubes steriles et ajouter respectivement do, 10' 1~0'
2~0" .,. du serum etudie. Boucher les tubes a ronate.
Agiter quelques instants en indinant et redressant Ie porte-
tubes, alternativement, et lire.
On abandonne en suite les tubes pendant 24 heures.a ]a
temperature du laboratoire et on fait une seconde lecture,
]aquelle donne parfois des va]eurs ]egerement superieures
nux premieres.
La meme methode est applicable a t{}US. I.es..microbes.
PROC)~;DES INDIRECTS : PRECIPITO-DIAGNOSTIC (VINCENT)
POUR'LE LIQUIDE DE PONCTION LOMBAIRE. - Le liquide
centrifuge et decante est verse dans un tube sterile. A
50 gouttes de ce liquide on ajoute 1 a 3- gouttes de serum
antimeningo non chaufJe. Boucher Ie.tube au caoutchouc.
Preparer un tub,e de controle avec Ie Iiquide cephaIo-
rachidien seul. Porter a l'etuve a 37" ou mieux au bain-
marie it 550 • Au bO\lt de 15 it 16heures, ]e tube contenant Ie
serum anti est opalescent si Ie meningocoque est en cause,
L'autre tube reste ge~eralement Iimpide. Toutefois la reac-
tion n'est pas rigoureusement specifique. Elle est souvent
positive avec Ie param~ningocoque et avec Ie pneumocoque.
RECHERCHE DE L'AGGLUTINATION AVEC UN MENINGO-
COQUE TYPE. - Elle s'-effectue, avec Ie serum .du malade
suspect, vis-it-vis d'une culture type de meningocoque en-
tretenue au ]aboratoire. Elle doit,etre positive it 1 p. 40 ou
alp. 50. La reaction n'I"Pparait qu'au 8" ou 10· jour de .l~
maIadie, ce qui diminue beaucoup son importance.
FIXATION DU COMPLEMENT. - Elle se fait seIon la
technique des reactions pe Bordet-Gengou (voir chap. XXI),
soit avec Ie serum inactive du malade et un meningocoque
de culture-type entretenu au laboratoire, soit en meUant
en presence 1 centimetre cube de Iiquide cephalo-rachid~en
cOll!me antjgene et du serum antimeningococcique.
(IONocOgUE 351
EPREUVE DU PERITOINE. - On prend deux cobayes de
250 a 300 grammes. L'un rec;oit, dans Ie peritoine, 1/2 cen-
timetre cube de jierum antimeningo non chauffe ; l'autre
1/2 centimetre cube de serum normal de cheval non chauffe.
Apres 24 heures, on injecte a tous deux, dans Ie peritoine,
1/6 environ d'une cuI'ture sur gelose, agee de 24 heures,
emulsionnee dans l'eau physiologique. 25 minutes plus tard
on preleve, a la pipette capillaire, par ponction (I'animal
etant tenu par un aide, Ie ventre en bas, saillant transver-
salement), quelques gouttes d'exsudat qU'on etale sur
lame. On seche et on fixe par l'alcool-ether. Colorer par
thionine pheniquee. Les menlngos vrais ont disparu ou
sont a peine visibles dans l'exsudat du premier cobaye,
tandis qu'ils se montrent nombreux et bien colores dans
celni du second. S'il s'agit de parameningocoques, l'exsu-
dat du premier cobaye est anssi riche en cocci bien colores
'que celui au second.
EPREUVE DE GRYSEZ (inoculation intra-rachidienne au
cob~ye). - On inocule directement dans la cavite rachi-
dienne, au niveau de la 4e ou5 evertebre lombaire, par ponc-
tion d'arriere en avant, avec une forte aiguille de seringue
de Pravaz, 0 cc, 5 du liquide cephalo-rachidien suspect,
non centrifuge. S'il s'agit de meningite cerebro-s'pinale a
meningo, la mort snrvient entre 2 et 24 heures avec nne
hypothermie tres caracteristique. Les animaux pr~alahle
ment vaccines par Ie serum antimeningo ne succombent
pas et n'ont pas d'hypothermie .
••
E. - Gonocoque.
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Diplocoques en grains de

cafe, opposes par leur face plane dans les produits patholo-
giques. Generalement intracellulaires. Plus arrondis ou
ovalaires dans les milieux de culture. I
COLORATION. - Elle s'obtiel1't tres aisement avec les

methodes simples. La plus recommandable est celIe de
Maurice Nicolle a la thionine pht'miquee ou bien Ie melange
de Pick et Jacobsohn, qu'on doit preparer au moment de

s'en servir avec des solutions meres:
Eau. . ....•.•.... 20 CC.
Sol. de fuchsine ~e Ziehl. • . • • XV gouttes.
So!. alcoo!. sat. de bleu de methylene. VIII goutles.
Colorer 30 secoudes. La'ver. Secher.
On peut aussi employer la methode de Pappenheim. qui
est tres alegan'fe. Elle consiste a colorer la preparation
pendant 1 minute avec une solution de vert de methyle et
de pyronine faite de la maniere suivante :
On met dans un flacon.O gr. 15 .de vert- de methyle,
o gr. -25 de pyronine, 2,5 -cent. cubes d'alc.ool absolu, 20
~entimetres cubes de glycerine, 100 centimetres cubes d'eau
ph'eniquee a 0,5 p. 100. Ce liq~ide est d'une belle- couleur
bleu ·violet. On Ie fait agir sur les preparations (fixees par
simple dessiccation lente et passage a travers Ia flamme)
pendant 2 a 5 minutes, puis on lave a,l'eau et on seche. Les
gonocoques apparaissent rouges et les noyaux cell!llaires
bleus.
La methode de Lesscynski est aussi tres bonne. On colore
ala thionine pheniquee pendant 30 a 60 secondes, puis on
lave a l'eau et on fait agir sur la preparation, pendant
1 minute, la solution suivante :
So!. sal d'acide picrique dans l'eau . • 1 vol.
Sol. nqueuse de potass"caustique a 1 p.1.000. 1 vol.
Ensuite, on passe a l'dlcool, on lave a \'eau, on seche et
on examine dans l'huile a immersion.
Les cellules sont jaune paille, les noyaux rouge violace,
les gonocoques violet noir, les autres microbes jaunes ou
rose rouge. Il y a toujours avantage a faire une prepara-
tion coloree au Gram pour deceler les cocci autres que Ie
gonocoque, par exemple Ie synocoque de Ch. Nicolle, qui
peuvent coexister ~vec celui-ci daJ,1s un pus urethral.
On fera alors un Gram-Nicolle et une coloration de con-
traste 'avec de la safranine DU du brun de Bismarck ott de
la fuchsine de Ziehl. . . ' .
CULTURE - Aerobie strict. pH limites = 6,0,8,3, pH
optim. = 7,3. Temperature optima: 37 0 ; ne pousse p,as
au-des~ous.
Pour isoler Ie gonocoque on peut se servir de. bouillon..
ascite (1 partie de liquide d'ascite, 3 parties de bO\lillon Oll
GONOCOQPE 353
de gelose p-eptonee legerement 'alcaline), ou bien de III

gelose au serum de pore, de Wassermann.
Milieu gelose de Wassermann:
Serum de pore.. . . • 150 cc.
Ean distillee. . . . . 150 cc.
Glycerine. '" . 20 cc.
NutIOse (sol. a 2 p. 100). 9 ce.
Faire ce melange dans un vase d'Erlenmeyer et Ie por-

ter a 'l'ebullition en agitant constammerit, puis ajouter,
apres refroidissement a 55 0 , parties egales de gelose pep-
tonee a 2 p. 100 fondue, et couler en boites de Petri.
Les col~nies se 'developpent bien en 24 heures a 37 0 •
On peut encore employer Ie milie~ suivant :
Milieu de Sabou,raud eL Noire : Faire bouiIlir pendant
5 minutes 1 litre de lait frais. Precipiter la caseine par
addition de 2 centimetres cubes d'RCI et recueillir Ie'
serum par simple passage sur uh tamis recouvert de coton
h.ydrophile.
Ajouter moitie du volume d'eau. Neutraliser avec solu-
tion de soude a 10 p. 100. Porter it l'autoclave a 120 0 pen-
dant 10 minutes. Filtrer. Ajouter :
1 p. 100 de peptone.
l' p. 100 de glucose ou saccharose ..
0.30 p. 100 d'uree.
1.60 p. 100 de gelose.
Faire dissoudre a l'uutoclave. Filtrer Sur Chardin.
Repartir en tubes. Steriliser 10 minutes a110 0 •
Le milieu de Ch. Nicolle est aussi tres recommandable.
II permet de cultiver Ie gonocoque et Ie synocoque pour
la preparation du vaccin mixte :
Bouillon de viande. • . 100 ce. •
Uree . . • . . . . o gr. 40
Glucose pure. . . . . 2 gr.
Phosphate d'ammoniaque. o gr. 05
Sel marin. .• . •. 1 gr.
Gelose . . • 1 gr. 5
Plus, gour Ie gonocoque, a cc. 5 de.serum de lapin pour

5 centimetres cubes de milieu.
Apres 24 heures, retirer les cultures de l'etuve.
Pour la preparation de son vaccin mix~e, Ch. Nicolle
emulsionne les cultures dans nne solution a 7 p.,l.OOO 'de
MICROBIOLOGIE 23
354 MALADIES INFECTIEpSES. TECHNIQUES SPECIALES
fluorure de sodium, sterilisee par filtration a la bougie

Chamberland. On lave et on centrifuge plusieurs fois les
microbes avec la solution fluoree. Finalement 011 melange
1 partie de gonocoques a ~ parties de synocoques et on
titre a 500 millions de microbes par centimetre cube.
48 heures de sejour a la gI-aciere suffisent pour detruire
la vitalite des microbes.
Milieu de Lebamf. - L'auteur se sert d'un bouillon de
foie de cheval ou de boouf a 500 gr. par litre, additionne de
20 gr. de peptone Chapoteaut. D'autre part on melange
une par.tie de blanc d'oouf et 10 d'eau distilIee; porter a
l'ebullition, puis filtrer et steriliser a 120 0 • Le milieu com-
prend 400 cc! de cet extrait de blanc d'oouf pour 4 litres de
bouillon au foie; on ajoute 20 gr. de fecule de pomme de
terre et on gelose a 20 gr. par litre. Les cultures sont tres
abondantes en 24 heures. Pour conserver, on ensemence
par piqure ou culots de 30 mm. de diametre.
Le milieu ne, convient pas pour l'isolement .. mais pour
la recolle ou la conservation du gonocoque.
Nota. - Les cultures .de gortocoqueS' sont tres sensibles

ala dessiccation.
La plupart perdent leur vitalite sur Jes mi\ieux artificiels
en 5 a 9 jours. Cependant, ensemencees sur gelose-ascite
en tubes droits (en eulots) et maintenues a l'eiuve constpm-
ment entre 35 et 390, bien .capuchonnees plour eviler la
dessieeation, on., peut les conserver vi'Vantes pendant plus
d'une'annee ( V. Morax).
DIFFERENCIATION AVEC LE MENINGOCOQUE. - Sur
gelose ascite additionnee de teintnre de tournesol et de
2 p. 10Q de maltose, Ie meningocoque donne des colonies
rouges; celles ?e gonocoque restent i,ncolores. Le menin-
gocoque apres isolement pousse tres abondamment sur
gelose T; Ie gonocoque ne pousse pas.
FIXATION DU COMPLEMENT. --:-11 .resulte. des travaux de
nombreux auteurs que la reaction de Bordet-Gengou appli-
quee :it la recherche des anticorps gonococciques peut
fournir 100 p. 100. de reactions positives dans certaines
manifestations gonococciques (arthrites, orchi-epididy-
mites, affections gynecologiques).
D'apres Rubinstein et Jauran, il faut employer eomme
MICROCOCCUS MELITENSIS
antigene un melange de plusieurs souches de gonocoques

apres 24 heures de culture sur ge!ose-ascite. Les memes
auteurs ant observe que Ie serum chauffe donne des resul-
tats plus specifiques .que Ie serum non chauffe.
F. - Micrococcus melitensis.
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Cocco-bacille immobile,
tres fin, isole ou en diplocoques. Non cilie, non capsule,
non sporule.
COLORA'rION. -- Par toutes les couleurs basiques d'ani-
line. Ne prend pas Ie Gram.
CUL'I'URE. - Toujours lente. Temperature optimum 37°.
Sur plaques au tubes de gelose, ressemble it des gouttes
de rosee apres 48 a 72 heures (sur serum coa-gule,
colonies blanchiltres, humides). Aerobie.
Sur gelatine, n'apparait qu'apres 5 jours a 220. Pas de
liquefaction.
En bouillon legerement alcalin, faible trouble apres
4 heures, mais la culture ne se developpe bien qu'en 8
jour.s. Aroas peu denses au fond des tubes. Ne fermente pas
les,sucres. Tue par 10 minutes de chauffnge it 58°.
SERODIAGNOSTIC. - L'epreuve doit toujours etre effec-
tuee avec Ie serum des malades chautIe 30 minutes a 560
pour eliminer les agglutinines nOn specifiques. Employer.
autant que possible, des races de M. melitensis non agglu-
tinables par les serums normaux.
Pour eviter Ies contaminationsfrequentes de laboratoires
on peut se servir aussi.<iu b acille de Bang au bacille de
l'avortement epizootique qui se comporte exnctement·
comme Ie M. melitensis dans les epreuves d'agglutination.
Si les rcsultnts sont negatifs ayec ces microbes, essayer
Ie pouvoiI' agglutinant du serum sur une race de M. para-,
melitensis.
En prenant les precautions indiquees, jes titres d'aggru-·
tination superieurs a 1 p. 250 permettent d'ctablir Ie dia-
gnostic.
Le serum reste agglutinant apres In con'Vales'cence pen-
dant longterops, parfois apres 10 tms.
356 MALADIES INFECTIEUSES. TI!CHNIQUES SPE(JIALES
\
DIAGNOSTIC PAR L'INTRADERMOREACTION. - Ce pro-
cede, propose par Burnet, consiste dans l'injection d'une
goutle du filtrat d'une cnlture de M. melitensis en bouillon,
agee d'un mois (MeIitine). La'culture est filtree sur bougie
Chamberland La. A la suite de !'injection, on voit, a partir
de la sixieme heure, une reaction locale' caracterisee par de
l'redeme et de la rougeur. Cette reaction n'apparait que
chez les sujets infectes par Ie M. melilensis.-Elle sert au
diagnostic de la me]itococcie chez l'homme, mais non chez
]a chevre.
HEMOCULTURE. - Le diagnostic doit toujours etre
appuye d'une hemoculture portant sur 5 ~ntimetres cubes
de sang qu'on preleve aseptiquement dans une ve~ne, au
moyen d'une seringue contenant 8 a 10 gouttes de solution
it 10 p. 100 de citrate de soude sterilisee et qu:on pro-
jette aussitOt dans un gros tube de bouillon nutritif.
Le tube est porte a I'etuve et, a partir du 3e jusqu'au 10"_
jour. on en preleve, a la pipette, quelques gouttes pour
ensemencer des tubes de gelose et isoler des colonies dont
on verifie ]a purete.
L'urine des ma]ades, surtout a partir du 15" jour et pen-
dant la convalescence. contient frequemment des me]ito·
coques qu'on peut cultiver en partant d'urine recueillie
aseptiquement a ~a sonde.
...."*
G. - Bacillus I abortus, (Avortement epizootique.)
Morpho]ogiquement, rien ne distingue]e bacille de l'avor-

iement epizootique du MicrocOf;CU$ melitensis.
~~s ~ulture~ sont identiques ; .elle& brunissent reguliere-
ment ; cette propriete est plus marquee pour ]e coccoba-
cille de Bang.
Les deux microbes developpent dans Ie bouillon un~
alcalinite identique ; i]s decbmposent l'uree et ]'aspa~a
gine; ni run ni l'~utre u'attaquent les sucres.
Le serum des individus attcints de fievre ondu]ante' et Ie
'serum des animaux (chevres, cobaye~) infectes. par]e meli-
tensis agglutinent au meme titre Ie melitensis et l'aborlus.
BACILLUS ABORTUS 357
Les cobayes infectes avec Ie M. melitensis sont seni>ibles it

l'intradermoreaction a l'aborline comme ceux qui ilnt etc
inocules avec Ie B. abortus repondent it l'injection de
melitine.
Si l'on excepte I'action pathogene pour J'homme, rien ne
permet, en l'etat actuel de nos connaissances, de distinguer
Ie Micrococcus melitensis du Bacillus abortus.
Le serum des vaches infectees agglutine Ie Bacillus
abortus it un taux variable de 1 p. 100 alp. 10.000. Le
diagnostic de l'infection peut etre fait par l'epreuve de
l'agglutination.
CHAPITRE XXXI
BAClLLE PYOCYANIQUE. - BACILLE DE LA COQUELU-

CHE. - BACILLE DE DUCREY. - BAClLLES DES
CONJONCTIVITES. - BACILLE DE FRfEDLANDER.-
BACILLE DU RHINOSCLEROME. - BACILLE 00 BORDET
(DIPHTERIE AVIAIRE). '
A. - Bacille pyocyanique (Gessard).
Tres polYmorphe. Mobile, 1 seul cil. Non sporule.

Formes isolees ou en chainettes.
COLORATION. - Par to utes les couleurs basiques. Ne
prend pas Ie Gram.
CULTURE. - Aerobie facultatif. Temperature opt. 20-38°.
pH limites : 5,6-8,0; pH optimum 6,6-7,0.
Se developpe bien sur tons les milieux usuels, peptones.
Sur gelatine, donne des colonies bIen verdatre, fluores-
centes, lentement liquefiantes. Sur gelose, ii forme un pig-
ment vert bleuatre, qui penetre peu a peu toute la masse,
brunit en vieillissant et donne naissanc,e a des cristaux en
forme d'aiguilles.
II pousse abondamment sur bouillon alcalin en formant, a
la surface, nne membrane mucilagineuse qui s'epaissit peu
a peu et reste flottante dans la masse liquide. II y developpe
une odeur aromatique assez intense, rappelant celie des
fleurs de jasmin ou de tilleul. A la longue, Ie milieu brunit
et les bacilles s'autolysent. Cette antolyse se continue et
s'acheve lorsqu'on ajoute au bouillon dn chloroforme ou
du toluol.
Coagule Ie lait; Ie coagulum est peptonise et digere
lentement.
Le b. pyocyanique acidifie les milienx glucoses mais ne
les fermente pas. II est tres fortement denitrifiant, de-
compose les nitrates et aussi les nitrites en degageant de
l'azote.
13ACILLE PYOCYANIQUE
Le milieu de culture propose par GessarG. convient Ie

mieux a l'etude des proprietes tres curieuses de ce microbe:
Gelose hnchee en petits morceaux. 12 gr. 50
Peptone. • 5 gr.
Enu. . . • . . . • • 250, c:!c.
Glycerin". • . • . . • • • 10 gr.
On dissout la peptone dans reau chaude, ort ajoute ia

glycerine puis Ia gelose. On fait fondre a 1000 dans I'auto-
clave non boulonne et on repattit en tubes, sans fiItrer.
Steriliser 30 minutes a 1150 et laisset reftoidit les tubes
Inclines, ' .
Dans ce milieu, Ie bacille produit avec intC"llsite sOri pig-
ment bleu et certaines varietes y produisent Ut1 pigment
jaune verdiHre, puis rouge v:if (vin ou groseille), ou un
pigment noir (varieies eryihrogenes et vur. melunogenes).
Dans Ie blanc d'reuf pur, liquide (preleve aseptiquement
"par ponction de l'reuf a travers Ia chambre a air et reparti
en tubes a essai steriles), il ne donne que du pigment vert
fluorescent.
Le pigment bleu (pyocyanine} est soluhlt; dans 1e chloro-
forme. On peut l'extraire en agitant, avec quelques goultes
de chloroform6;' Un tube de culture en bouilldtt papton~. Le
pigment vert, 1luorescent est insoluble dans Ie cnlororotme
et dans l'alcool, soluble dans reau.
La pyocyanine cristallise (par evaporation du chloro'"
forme) en longues aiguilles bleues. Les aoidas dilues (Hel)
la rougissent, tandis qne les substances rcdtictrice~ (HiS)
la transforment en leucobase jauniHre ; Ies alcnlis la blouis-
sent de nouveau. .
Les cultures de b. pyocyanique contienlIent un ferment
lipolytique tres aetif, une hemolysine thermdstabile li~e it
In presence de lipd'ides et qui n'est pas susceptibl~de jouer
Ie role d'antigene, une catalase qui decompose I'6mJ,oxyge ..
nee, un ferment trypsique, un ferment lab, une casease, une
invertine et un ferment bacteriolytique.
Cet ensemble constitue la pyocyanase. Celle-ci dissout
Ia gelatine, la fibriI1e l la caseine, Ie Serum coagtile. et l'al-
bumine d'reuf. Ella dissout aussi les bacteridies charbon-
neuses et tue rapidement les bacilles diphteriques, les
pneumocoques, les staphylocoques, les streptocoques, les
vibrions cboleriques et les bacilles de la dysenteric.
B. - Bacille de la Coqueluche (Bordel el (iellgou).
Tres petit bacille aerobie, intra ou extracelluhiire, ne

prenqnt pas Ie Gram, immobile.
II prend difficilement 'les couleurs. On Ie met cependant
en evidence pade bleu phenique de Kuhne, Ie bleu Borrel,
Ie bleu de toluidine ou la thionine pheniquee, en prolon-
geant quelque peu l'action du colorant. II se teint davan-
tage aux poles qu'au centre. ~
On Ie cultive sur gelose arrosee de sang humain-ou mieux
sur Ie milieu suivant de Bordet el Gengo,!- :
Pommes de terre conpees en trnnches.. • 100 gr.
Ean glycerinee Ii 4 p. 100.. • . . . . 200 cc.
Cuire a l'autoclave 30 minutes a 120 0 ; separer Ie Iiqriide

par expression a travers un linge. Filtrer sur ouate hydro-
phile.
A 50 centimetres cubes de ce liquide, ajouter:
Ean salCe a 6 p. 1.000. • . 150 cc.
Gelose. ••...•. 5 gr.
Faire fondre a l'autoclave a 100°, rcpartir en tubes et

steriliser a 120°.
A chaque tnbe contenant ce milieu liquide a 50°, ajouter
parties egales de sang defibrine d'homme IOU de lapin
recueilli aseptiquement. Agiter legerement sans faire de
bulIes et coaguler en 'position inclinee.
Le developpement du microbe ne devient visible qu'a-
pres 24 a 48 heures. Colonies tres petites, blanches, proe-
minenles, a bords tailles a pic. ElIes sont fragiles et ne
se conservent guere plus d'un mois vivantes.
Le b. de Ia coqueluche est hemolysant. II contient une
endotoxine necrosante.
C.- Bacille de R. Pfeiffer (non specifique de l'inflncnza,

mais presque constant dans cette maladie).
Ce bacille aerobie, tres petit, abonde dans les crachats des
malades. On Ie col0rc facilement par Ia fuchsine diluee, Ie
BACILLE DE DUCRE'Y 361
bleu de methylene alcalin ou la thionine pheniquee. II ne

prend pas Ie Gram. II est recommandable de traiter d'abord
la preparation, avant de la colorer, par une solution a
1 p. 100 d'acide a(_!ctiqueo On voit alors mieux les amaS de
microbes parmi les cellules.
On Ie c'ultive sur gelose arrosee ou melangee de sang
humain, ou addition nee d'extrait 'd'henJalies (Legroux)
(voir milieux vitamines). pH limites: 6,2-7,6; pH opti-
mum: 7,0.
Les colonies se dcveloppent en gouttes transparentes,
homogenes, coniluentes, seulement entre 27 et 42" (opti ...
mum 37 0 ) en 18 a 24 heures. II faut les reensemencer taus
les 4 ou5 jours, car elles sont tres fragileso
Le microbe n'est pathogene que pour les tres jeunes
cobayes; il est tue par 15 a 20 minutes de chauffage a 50° .
..
Do - Chancre mou (Bacille de Dllcrey).
Petit diplobacille en chainettes, tres grele, ne prenant
pas Ie Gram. On Ie colore tres elegamment par la methode
de Unna-Pappenheim. Les coupes de tissu, fixees par 1'al-
.cool ou Ie formol a 4 p. 100, sont traitees pendant 10 minu-
tes par la solution suivante:
Vert de methyle. . . • o gr. 15
Pyronine.. 0 0 0 0 • o gr. 25
Alcool absoluo . • 0 • 2 ceo 5
Glycerine.0 • 0 • • • 0 0 20 cc.
Eau phCniquee a 0,5 po 100. 200 ce.
On lave a l'eau, puis a l'alcool et au xylol. On monte

en suite dans l'huile de cedre ou Ie baume. Les diplobacilles
sont colorcs en rouge pourpre fonce, les tissus en vert
bleu:Hre.
Oulture assez difficile a obtenir. Pour l'isolement, par-
tir d'un chancre d'inoculation protege par un pansement
aseptique, ouvertau second jour et bien nettoye. Prelever
ponrla culture Ie tissu du fond de I'ulceration.
Le meilleur milieu est la gelose peptonee, a 3,5 p. 100
d'agar, additionnee du tiers de SOn poids de sang defibrine
de lapin (Reerzslicrna) Repartir en tubes d'assez gros volume
0
362 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SP~CIALES
qu'em incline et prepares Ie jour meme. (Ce milieu peut

etre legerement modifle en sterilisnnt dans tme.fiole d;Er~
lenmeyer90 grammes de gelose nutritive a 3 p. 100 d'agar
et en y ajoutant 20 grammes seulement de sang defibrini!
de lapin. Ch. Nicolle et P. Durand.)
Ensemencer une douzaine de tubes, les mettre a-l'etuve a
35°. La culture se developpe en mbins de24 heures et l'on y
observe, dans l'eau· dj condensation,les longues chaines
typiques du streptobacille. Des tubes identiques, conserves
ilIa glaciere, serviront pour la purification des .premieres
cultures ct ensuite pour les passages.
En bouillon Martin additionne de 1/5 d~ sang defibrint!
de lapin, culture rapid'e en grains et en voile incomplet.
La gelose molIe (gelose nutritive a 2,5 pour 1.000 d'agar,
additionnee de 1 pour 100 d'amidon ou de fecule de pommc
de terre), qui convient a la conservation du gonocoque et
du microbe de Ia coqueluche pendant 10 a 15 joms a
l'etuve, convient egalement a celie du str:epto-bacille, a)a
condition de deposer.a sa surface une parcelle detachee
dri milieu de Reenstierna u\lIise pour I'ensemencement.
Mais Ie milieu de conservation Ie plus favorable est la
gelose molle additionnec de 1/5 de son volume de sang deft-
brine de lapin. Le developpement s'y fait rapidemcnt, In
vitalite atteint un mois et les repiquages y sout tres faciles.
(Ch. Nicolle).
• ¥
E. - Bacille de Weeks (Conjonctivile contagieuse t ophlaZmie

aigue d'Egypte).
COLORATION. - Gram, puis safranine oU fuchsine ph en i-
quce diluee (10 minutes). Ne prend pas Ie Gram. Immobile..
CULTURE. - Gelose-ascite ou gelose-sang humain.
Paul Durand preconise Ie milieu suiyant pour l'isolement
du hacille de Weekl!, les tepiquages at les cultures pour la
preparation de vaccins ou l'immunisation des nnitttaux !
on met au. bain marie boUlllant de la gelose nutritive it
2,5 p. 100 d'agat. Des qu'elle est fondue, on y. proj~te
5 p. 100 de sang de lapin (defibrine au non), on II1elange
en remuant doucement, on reporte 3 minutes au bain-
marie bouillant, puis on repar[it en tubes inclines.
DAClLLBS DES CONJONCTIV11'ES 363
Sur ce·niilieu, 09 ontient, en ensemenyallt largemellt, Une

culture visible des la 8 e heure.
Cette gelose, tres favorable au bacille de Weeks, permet
l~ dheloppem~nt" rap ide et exuberant d'autres microbes:
elle ne conviellt pas -pour rechercher l'agent de la conjonc-
tivite aigue dans 1es fosses nasales, Ie pharynx, etc. II y a
lieu pour ce\ objet d'y ajouter 5 parties p. 100 d'une solu-
tion sterilisee it 2 p. 100 d'oleate de soude. Sur ce milieu
Ie baciIle de Weeks' pousse de fayon satisfaisante aloTs que
les streptocoques, les pneumocoques n'arrivent pas it se
developper.
Diplobacille de Morax-Axenfeld (BUpharo-con;oncti-

vile infeclieuse).
COLORATION. - Thionine pheniquee (pas de centre clair,
coloration homogene). Ne prend pas Ie Gram. Immobile.
CULTURE. - Aerobie strict. Gelose-scrum humain un
peu suralcalinisee. Serum liquefie en 48 heures.
Diplobacille liqw5fi.ant de Petit (Keralo-conjonc/ivile).

Ne prend pas Ie Gram. Pousse sur la gelose peptone ordi-
naire et lique£ie la gelatine. .
••
F. - Bacille de Nedden (Keralile ulcereuse).
Ne prel1d pas Ie Gram. Immobile. Pousse en bouillon et
sur gelose peptone (glycerinee ou non) ; coagule' Ie lait ; ne
fonne pas d'indol.
G. - Pneumobacille de Friedlander.
Plu:~ieurs varietCs de micr.obes saprophytes entoures
d'une capsule souyent tres epaisse, constituent 1e groupe
des bacilles muquellx encapsllles, dont Ie prototype est Ie
pneumobacille deFl'iealander. Ils ont les caracteres communs
sui-vants: immobiles, non cilies, non sporules, sont faci-
lement colorables par les couleurs d'aniline; ne prerlnent
pas Ie Gram. se cultivent aisement sur les milieux u3uels,
sont aerobies facultatifs, ne liquefient pas la gelatine, for- .

ment des colonies en amas muqueux, gras, porc~laines, ne
produisent generalement pas d'indol. lIs sont incidemment
pathogenes pour l'homme et pour les petits animaux, par-
ticulieremen t pour la sCluris blanche et pour le cobaye en
injection intraperitoneaIe.
Les pneumobacilles-types de Friedlander se presentcnt
-sous .J'aspect de bacilles longs et flexueux ou droits, asso-
'cies a des formes courtes, effilees en diplocoques dans les
<;ultures.
Bouillon trouble en 4 a 5 heures avec formation d'un
anIieau epais a la surface; en suite depOt jaune, muqueux,
et Ie liquide devient visqueux.
Le pneumobacille de Friedlander attaque glucose, levu-
lose, arabi.nose, galactose, maltose, saccharose, mannite,
dulcite (sauf certains echantUlons), glycerine, mais non.
l'erythrite. II coagule inconstamment Ie lait.
H. - Bacille du rhinosclerome (bacille de Fl·isch).
L'aire geographique est etendue a toute I'Europe orien-

tale. Ce bacille se trouve dans Ie mucus nasal des malades
et dans la lymphe du sclerome nasal. II est encapsule et ne
prend pas Ie Gram. On Ie colore bien par l'flction prolongec
du violet de methyle ou de la thionine; Ies capsules par la
safranine. II ressemble beaucoup au pneumobacille de
Friedlander. Sa culture s'obtient aisement et presente sur
les milieux geloses et sur pomme de terre les memes as-
pects gras, hoursoufles de hulles gazeuses. Il pousse ahon-
damment sur gelose glycerinee, ne coagule pas Ie lait, ne
fermente ni Ie glucose ni Ie lactose et ne produit pas
d'indol.
1. - Microbe etudie par J. Bordet dans la diphterie des

poules.
Microbe tres petit, en batonnet grele ou en point, for-

mant des masses zoogleiques dans les cultures. Facilement
colorable par Ie Giemsa apres fixation par l'alcool absolu,
sans chauffer(5 gouttes de solution de Giemsa, pour 2 cen-
BACILLE DE BORDET 365
timetres cubes d'eau distillee). On laisse Ie reactif colorant

agir pendant 30 a 45 minutes sur la lame, la face impregnee
de culture.ou de frottis etant tournee en dessous pour eviter
les depOts, puis on lave a l'eau, on desseche et on examine
dans une goutt!) d'huile a immersion.
Se cultive snr gelose arrosee ou melangee de sang de
lapin, ou sur Ie milieu .qu'utilise Bordet pour la culture du
microbe de la, coqueluche, ou encore dans du bouillon
peptonise additionne d'un demi-volume de serum frais de
lapin. Les cultures restent longtemps virulentes.
On isole Ie microbe soit en ensemencant les larmes de
I'reil infecte, soit ~n broyant une fausse i~embrane avec un'
peu de solution salee physiologique, en trempant un fil
dans ceUe emulsion et en passant ce fil dans la membrime
nictitante del'reil d'unepoule saine. Le Iendemain, on retire
Ie 61 et, au bout de quelques jours, lorsque la' nictitante
est epaissie, on Ia reseque, on la lave a l'eau sterile, on la
broie et on ensemence Ie produit de ceUe emulsion a la'
. surface de plusieurs tubes. Apres 2 jours, les colonies visi-
bles sont des impuretes; mais si ron promene Ie fil de
platine sur les parties du tube OU il semble que rien n'ait
pousse, on ramenele virus qu'on peut repiquer sur d'autres
tubes OU il se developpera a retat pur. La culture est it
peine visible it J'reil nu.
CHAPITRE XXXII
BACILLE TYPHIQUE. - B. PARATYPHIQUES ET BAC-
TERIUM COLI. - SALMONELLA. - BACILLES DE LA
TYPHOSE AVIAIRE. - BACILLUS FCECALIS AERO·.
GENES. -PROTEUS VULGARIS.
A.-- Bacille typhique.

CARACTImES BIOLOGIQUES. - Petit batonnet mobile,
portant. it sa peripherie, de 10 it 12 cils environ, quelque·
fois plus. non sporule. Se developpe bien sur les milieux
usuels it 37°, tres lentement a 200, plus du tout au-dessous
de 9 0 • pH limites : 6,2-7,6. pH optimum: 6,8-7,2.
Se colore avec facilite. Ne prend pas Ie Gram. Trouble
Ie bouillon. Ne liquefie pas la gelitine (caracterescommuns,
a tous les microbes de ce groupe). Sur gelose et gelatine,
colonies de forme irreguliere, aplaties, grisatres, hurnides,
translucides, irisees lorsqu'on les regarde a la 1umiere inci-.
dente, et it centre proeminellt. Sur pomme de terre, culture
a peine visible, apparait selllement apres quelques jours'
comme une trainee luisante.
Ne produif pas d'indol dans les milieu~ peptones.
Ne coagule pas Ie lait.
Ne fermente ni Ie lactose ni Ie glucose.
Ne decolore pas Ie rouge neutre, la safranine, Ie vert
malachite, l'indigo, ,Ie bleu ,de l\lethylene; decolore lente-
ment l'orceine.
RECHERCHE DU'BACILLE TYP~IQU~ DANS LE SANG DES
MALADES. BILE PURE. a) Procede Conradi. _ Le meilleur
procede consiste it projeter, avec une seringue, 2 ou 3 centi-
metres cubes de sang (preleve par ponction dans une veine
superficielle) dans un tube it essai contenant 5 centimetres
cubes de bile de bceufpure, filtree sur ouate hydrophile et
sterilisee. On porte a I etuve a 370 pendant 48 a 12 heures,
et on reense1)1ence sur les milieux differentiels.
b) Pro cedes de Kayser-Zeidler, de L. Tribondeau et
BACILLE TYPHlf!TJE 367
J. Dubreuil. - Au lieu de bile pure, "Qn emploie la bile

addition nee de 10 p. 100 de peptone et de 4 p. 100 de glyce-
rine. On sterilise 2 heures a 1000 (sans pression). L. Tri-
bandeau et J. Dubreuil preconisent la bile additionnee de
1 gr. de peptone et de 1 gr. de glucose par 100 centimetres
cubes. (Les paratyphiques y degagent de petites bulles de
gaz.) •
c) Pro cede .J. COllI·mont. - On· ensemence 2 a 5 centi-
metres cubes, de sang dans un grand ba]]on con tenant 200
a 500 centimetres cubes de bouillon. On cultive 24 heures
it 37° et on reensemence sur milieux differentiels.
RECHERCHE DU BACILLE DANS L'EAU ET DANS LES DEJEC-
TIONS SUSPECTES. - ,Suivant les. circonstances, on peut
choisir entre deux methodes: l'une consiste a ensemencer
100 centimetres cubes ou 1 litre de l'eau suspecte,dans 'un
milieu d'enrichissement avant de faire les cultures sur mi-
lieux differentiels; l'autre, en general preferable, consiste
a fiItrer 10 a 100 litres d'eau suspecte a travers Une bougie
Chamberland sterile. On recueille avec un pinceau ou un
petit tampon d'ouate sterile Ie depOt qui s'est accumule a
la surface de Ia bougie ; on Ie delaye dans un tube con-
tenant 10 centimetres cubes d'eau sterile et on 'etlsemence
Ie
cette emulsion, d'abord dans milieu d'enrichissement ci~
apres, puis, avec un autre pinceau ou tampon'd'ouate sterile,
a la surface de boites de Petri contenant les milieux soli-
des d'isolement.
MILIEU D'ENRICHISSEMENT DE FICKER ET HOFFMANN.-
Dans un grand ballon contenant 900 centimetres cubes' de
l'eau suspecte, on ajoute successivement les solutions sui;-
vantes qui ont etc sterilisees separement pttr chauffage dis-
.continu a 100°.
S~lution de nutrose a 10 p. 100 .. 80 ee.
Sol de caf<ii ne it 2 gr. 5 p. 100. . 20 ce.
So!. de crystall-violet it 0 gr. 1 p. 100. 10 ee.
On porte a l'etuve a 3.7 0 pendant 12 heures et on ense-

mence ensuite sur les milieux d'isolement.
Pourisoler Ie b. typhique des dejections, on se sert avec
grand avantage de ce milieu qu'on prepare alars en ajou-
tant, a 90 centimetres cubes d'eau sterilisee, 8 centimetres,
cubes de solution de nutrose, 2 centimetres cubes de solu-
368 MALADIES INFEC7;IEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
lion d~ cafeine tit 1 centimetre cube;<Ie solution .de crystal]-

:violet. Ce melange st~rile est .en!\emen.ce avec 1 gramme
ou d gr. 50 de dejections suspectes et laisse it l' etuve pen-
dant 12 heures. On r!'lporte ensuite, par diluti~ns convena-
bIes, sur milieux d'i!\olement.
La rechercqe du bacille typhique dans les dejectio,ns est
plus commodement effectuee eOn utilisant la technique de
Bil!rast modifiee par Hall: -
On melange 1 ou 2 grammes de dejections dans un mor-
tier de porcelaine sterile, avec 8 centimetres. cubes de bouil-
lon nutritif par petites portions, it la pipette. Lorsque Ie me-
lange est bien homogene, on y ajoute 2 centimetres cubes
d'ether de petrole IP. S. 650); on Ie ver:;e dans un flacon
sterile bouche it I'emeri ou ~v:ec un tres bon bouchon de
liege et on Ie soumet it une agitation continue pendl1nt une
demi-heure (autant que possible au moyen d'un appareil
donnant 150 secousses it la minute'l. On laisse ensuite
la masse en repos pendant 2 heures, puis on fait les ense-
men cements sur les milieux electifs choisis.
'{':agitation avec l'eth(!r de petrole a pour effet d'eliminer
presque completement Ie Bacterium coli et elle permet de
retrou ver Ie bacille lyphique et aussi Ie paralyphiqlle B,
alors meme que ceux-ci n'existent que dans lao proportion
de 1 p.l.OOOpar rapport au B. coli. C'est un procede particu-
lierement recommandable pour la recherche des bacilles
dans les dejections des « porteurs de germes ». ~e para-
typhique A est sensible it I'ether de petrole. comme Ie
B. coli. Le bacille dysenterique Shiga se comporte comme le
typhique.
MILIEUX O'ISOLEMENT. - Ces milieux solides servent it
isoler les bacilles qui sont cultives dans Ie milieu d' enri-
chissement ci-dessus, ou qui se trouvent dans une urine
suspecte, ou dans le'produit de delayage du depot des bou-
gies filtrantes.
Ils peuvent servir aussi it isoler directement les bacilles
des matieres fecales ou de l'urine. On prepare alors une
emulsion de dejections (environ 1 gramme pour 200 centi-
metres cubes d'eau) et, avec un pinceau ou un tampon
d'ouate sterile, on l'ensemence it la surface des milieux
couIes en boites de Petri et desseches pa-r 24 heures d'ex-
position a l'etuve a 37°, Ie couvercle etant dirige en bas.
BACILLE TYPHlfjUE 369
L'isolement des baciUes de l'urine s'opere de meme par

l'ensemencement it la pipette de quelques gouttes de ce
liquide.
Les milieux de- choix sont ceux de DriIJalsld-Collradi,
d'Eudo, de Chantemesse, de Conradi et surtout ceux de
Loffier-Schuster au vert malachite. de LudWig Bilfer au
vert miotlachite-bleu de Chine et de Schmitz (gelose-serum
au rouge Congo).
1 0 Milieu de Drigalski-Conradi :
On prepare separement ;
1. Une maceration de viande (1.050 grammes de viande
de bamf ou de cne:val, finement hachee, pour 2 littes d'eau).
Laisser ,.24 heures it la glaciere; exprimer, faire bouillir
1 haure ; completer au volume de 2litreS. Ajot.'lter :
Peptone de Witte.. • . 20 gr.
Sel inarin. . . . . . . 10 gr.
t-iutrose (ou Tropl'ln). . . 20 gr.
Gelose (linement hllchee). . 60 gr.
Porter it l'autoclave it 120°,30 minutes. Filtrer it chand
sur ouate hydrophile ou sur sable.
(On peut remplacer Ia maceration de "iande par une solu-
tion it 1O'p.1.000 d'extrait Liebig.)
2. Solution:
Teinture de tournesol. . • • • 300 cc.
Lactose. . ' . . . . . • . • 30 gr.
Faire bouillir 15 minutes dans l'autoclave non boulonne
decanter apres repos, aseptiquement.
3. Solution de soude a 10 p. 100, sterilisee.
4. Solution:
Crystall- violet chimiquement pur de
HOchst(O.). . • • . • . !lgl·.10
Eau distillee chaude.. . . . 100 cc.
Dans Ie bouillon gelose nO 1, chaud et liquiqe t v~rs~r la

solution riO 2 (tournesol-Iactose) ; agiter fortemeQt. ppis
ajouter une quantite suffisante de solution nO 3 (soude) jps-
qu'a ce que la masse bleuisse legeremen·t. Ajouter encore
6centimetres cubes de la solution n 0 3 (sou4e), puis 20cen-
timetres cubes de la solution no 4 (crystall-violet).
Repartir aseptiquement par 200 centimetres cubes en
ballons steriles qU'on peut conserver pour les besoins ul·
MICI\OBIOLOGIIl 24
3iO MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
terieurs. Au moment de s'en servir, on liquefie au bain-

marie et on verse en boites de Petri de 18 a 20 centimetres
de diametre. Sur ce milieu, Ie bucille d'Eberth et les pura-
typhiques donnent des colonies rondes, ressemblant a des
gouttes de rosee, incolores ou bleuatres, quelquefois den-
telees legereftlent, toujours transparentes ; Ie B. coli donne
des colonies rouges, opalescentes.
2 0 Milieu d'Enrlo.
Bouillon peptone-gelose, neulre, prepare a la maniere or-
dinaire auquel, fondu a 100°, on ajoute, par litre, 10 centi-
metres cubes de lessive normalc de soude (a 40 p. 1.000),
puis 10 grammes de lactose dissous dans 100 centimetres
cubes d'eau.
Repartir en gros tubes, par fractions de 100 centimetres
cubes ou en petits ballons et conserver apres sterilisation
a l'autoclave.
Au moment de l'usage, on fait fondre Ie contenu d'un ou
plusieurs de cos tubes ou ballons et, a chacun d'eux, on
ajoute :
Sol. nleoo!. de fuchsine alp. 10 (liltree). 0 cc. 5
Sol. de sulfite de soude II 1 p. 10 (fraiehe-
'ment prepnree). . • • . • • • . . '2 ce. 5
Agiter pour melanger (sans faire de bull~s.) et conler en

plaques.
Le bacille typhique donne des colonies illcoiores, d'e 3
millimetres de diamctre environ, en 24 l).eures. Le B. coli
donne des colonies rouges, opaques. Apres 48 heures. les
colonies typhiqnes deviennent roses et deux fois plus
grandes que celles de B. coli.
30 Milieu de Chaniemesse.
Enu. . 100 ec ..
Peptone. 3 gr.
Lactose. 2- gr.
Gelose .• 2 gr.
Au moment de l'emploi, liquefier ce milieu et ajouter

pour 10 centimetres cubes, dans chaque tube, avant de
couler en. plaques:
Acide pbenique solution II 3 p. 100. • . . IV gouttes.
Teinture de tournesol. . • . • . . . 1 ce.
Ce milieu convient surtout a l'isolement du Bact. coli.
II est beau coup moins favorflble que les precedents (et sur-
BACILLE TYPHIQUE 371
tout que les suivants) a l'isolement du b. typhique qui cst

plus sensible que Ie B. coli a l'acide phenique.
4° Milieu de Conradi.
a) Eau distillee. , 900 cc.
Extra;t. Liebig. 20 gr.
Gelose.. • . 30 gr.
Sterilise,r, filtrer sur ouate. Ajouter :

Sol. stl,rllisee de peptone Wille :\ 10 p. 100. 100 cc.
b) Acidifier Ie milieu it 3 p. 100. Pour cela, prelever un

echantillon et chercher combien il faut ajouter de lessive
normale de soude ou de solution normale d'acide phospho-
rique. pour obtenir une acidite telle que 100 centimetres
cubes soient neutralises a Ia phtaleine du phenol par 3 cen-
timetres cubes de solution normale
..... de soude .
c) A 1.500 centimetres cubes de ce milieu acidifie, ajou-
tel' :
Verr15'i-ffiant crist. (Griibler), sol. aq. it
1 p. 1.000. • • • . . . . • . • • 10 cc.
Acide picrique sol. aq. it 1 p. 1.000. . • 10 ce.
SteriliseI' et repartir en tubes ou en boiles. Le B. coli~ne

pousse que difficilement. Les colonies typhiques sont
vert clair, transparentes, aplaties et elles apparaissent gre-
nues a la loupe. Les paratyphiques sont vert jaunatre,
plus proeminentes.
50 Milieu de Liifflel'-Schusler au vert malachite·safralline~
bleu de methylene.
On prepare 1 litre de bouillon gelose ordinaire (ou Lie-
big) avec 3 p. 100 de gelose. Ori y ajoute, aprcs neutralisa-
tion aussi exacte que possible (au tournesol) par une solu-
tion saturee de carbonate de soude, et aprcs dissolution de
la gelose:
Sol. decinormale de soude.. . • 5 cc.
Sol~ it llr p. 100 de nutrose. . • 100 -ec.
On porte pendant 20 minutes it 100 0 •

On decante par repos, on separe Ie precipite et on repar-
tit par doses de 100 centimetres cubes dans une serie de
vases d'Erlenmeyer ou de ballons a fond plat qu'on stermse
et conserve d·avance.
372 MALADIES INFECTIEUSES. 'j'ECHN IQUES SPECIALES
A chaque dose de 100 centimetres cubes de cctte getose

fondue a 500 et decantee, on ajoute :
Bile de bamf filtree et sterilisee. . • . • 3 ce.
Sol. aq. it 0,2 p. 100 de safranine pure de
Griibler. . . . • . . . . . •. 1 c;e.
Sol, aq. it 1 p. 100 de bleu.de methylene de
Hochst. . . . . . • • . . • . . 3 ce.
ou:
o cc.. 1d'une scU.. aq. it 0,5. p. 100 sterilis.ee
d'Azobleu.
Sol. aq. sat. steril, de vert malachitll. crtS-
tallise (chimiquement pur, <;hlorzinkdQP-
pelsalz, de Hiichst).. • • . . • . .
ou:
1 cc. 7 d'une sol. aq. it 0,2 p. 100 steJ'ilisee
de "f'erl m.alachite (}rdinaire.
Vers'er apres melange en larges boites de Petri.

Sur ce milieu, de couleur violet bleu-atre, enscmence en
surface (au pinceau) avec une goutte de dilution de dejec-
tions, Ie bacille d'Eberth donne des colonies bleues, irre-
gulieres, moUes et minces, a reflets metalliques trcs carac-
teristiques.
Le paratyphique B donne des C6<lonies iden-liqtJ.es.
Le paratyphique A, des colonies rondes, iEanspaoontes...
blemltrcs, sans reflets mffialliques..
Les microbes au groupe Gartner et Ie 8. coli doonent:
des colonies roses ou rouges. I
6 0 Milieu all Mea de Chine (Chinabfau-) .. de Lp.dlVig Bitler.
A 100 centimetres cubes de gelose-peptone neuwalisee au
tournesol (bouillon gelose a 2 Oll. 3 p. :teO de gelose) et
prealab~emel;1t fo~due au bairr-marie, on aj,o,u.ta2 gra-m.me~
de lactose. On laisse fondre qrt'clques minute.s. a 1000" en
agitant, puis on introduit dans Ie ballo.u 9r gouttes de SQlu-
tion aqueuse saturee de bleu de Chine. On peut y a3Qutm"
aussi, mais les avis sont partages sur les avantages de cette
addition, 2 cc. 5 de solution aqueuse a O~l p,. H,)(} de vert
malachite ordinaire (ou 1 centimetre cube de solution it 0,1
p. 100 de vert malachite cFistal1isepuF). On sterilise 10 mi-
nutes a 10O" et on ver~e dall'S des boHes de pffiri ('3 boi.tes
pour un essai sur matieres fecales ; 2 boites pOllr I'urine).
On laisse secher a l'etuve pendant quelques heures pour
eli miner l'eau de condensation a leur surface, en reteuraant
BACILLE TYPHIQUE ~73
les plaq.u.es ~ns nessus dessous. On ense,mence nne pre-

Iniere plaque en .etalant sur Ia moitie de celie-ci, gms
comme une lentiiIe de dejections avec une spatule de
platine, et on essui~ ia spatule sur l'autre moitie de IQ pla-
.que. On frolte avec Ia meme spatule, sans reprendre de
semeRC!'J, la deuxieme, purs la troisieme plaque, et on porte
it l'etuve it 37 0 pendant 24 heures.
Les baciJles qui forment des acides d.onnent des colonies
bleues ; ceux qui nc forment pas n'acides ou qui sout aka.
Jigenes donnent des colonies incolores ou jaunatres. Ces
dernieres seules sont soumises it 1'6preuve de l'agglutination.
7· Miliell de Schmitz (gelose-serum-rouge Congo).
La preparation de ce milieu est tres cconomique. ElIe
dispense d'employer de la viande. On recueille a l'abattoir,
sans precaution particuliere, du sang de breuf ou de mou-
..ton. On Ie laisse coaguler. On decante Ie serum qu'on utili-
sera a part. comme il,sera dit plus loin. Le caillot est me-
lange au double de son poids d'eau, grossierement delay6
et soumis a la cuisson pendant 5 a 10 minutes, puis filtre sur
un linge d'abord et tlnsuite sur ouate hydrophile. On ajoute
a ~e liquirle 20 gram\nes de peptone pal' litre. 20 gl'O.mmes
de nutl'ose (ou de Tropon) et" 60 grammes de gelose. On fait
fondre celle-ci et, lorsqu'elle est bien dissoute, on ajoute
it la masse un volume egal du serum primitivement separe
des caillots. 01} repartit par 100 centimetres (lubes, dans des
fhcons, en filtrant encore sur un entonnoir it ouate hydro~
phile et on sterilise a 100·, seulement pendant une heure.
On dissout a chaud, aux environs de 95°, dans ch<lcun
de ces fla~ons de 100 centimetres cubes de gelose-serum,
1 gr. 5Q de lactose et 0 gr. 30 de rouge Congo. La dissolu-
tion est tres rapide. On p~ut aussi ajouter de la cafeine
(mais si l'addition da cafeine empeche Ie deveioppement
. du Bact. coli, elle gene beaucoup celui du h. typhique).
On prepare alors une solution de 1 gramme de cafeine
dans 10 oentimetres cubes d'eau (Ia cafeine se dissout com-
pletement dans ce volume d'eau bouillante, tandis qu'ellc
exigerait 80 centimetres cubes d'eau froide). On intro-
duit 6 centimetres cubes de cette solution do cafeine dans
chaque- flacon de gelose serum. On coule aussitOt apres
dans une grande· boite de Petri, sans steriliseI' de nouveau
P!Hll' nr pas modifier Ie lactpse.
374 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECIJ',ALES
Lorsque les plaques ont fait prise, on ·les ensemence

avec une anse de platineOde dejection delayee dans 200 cen-
timetres cubes d'eau salee physiologique.
Sur ce milieu Ie Bact. coli ne pousse que difficilement, en
donnant des colonies de couleur bleu noiratre, tandis que,
deja apres 24 heures, les colonies rouges de bacille typhique
sont tres apparentes.
Chandelier en a sill1plifie tres heureusement la prepara-
tion. II emploie du bouillon gelose ordinaire (a 3 p. 100 de
gelose), lactose a 1,5 p. 100, exactement neutralise au tour-
nesol, reparti en ballons'de 100 centimetres cubes et steri-
lise a 115 0 • •
A 100 centimetres cubes de ce milieu, prealah)ement
fondu au bain-marie a 50°, on ajoute :
Sol. de sonde a 0 gr. 5 p. 100, sterilisee. 10 ce.
Puis sol. aq. slerili.ee de rouge Congo it
3 p. 100. . . • . • • . . . • . 10 ce.
Puis on coule en °grandes boltes de Petri steriles dont Ie

couvercle est garni d'une rondelle, de papier filtre, sur le-
quel s'etfectuera la condensation de l::t vapeur d'eau dega-
gee pendant la solidification de la gelose. On ensemence
ensuite et on porte a l'etUye.
Les colonies typhique!> sont apparentes au bout de 24
heures, sous l'aspect de petites masses ~platies, seches,
ecaiIleuses, cupuliforll1es et de couleur rouge [once, les co-
lonies de B. coli se detachent en blen [once sur Ie fond
rouge. Les colonies de hacilles dysenteriques de Shiga et
de Flexner donnent des colonies de meme aspect et de
ll1eme couleur que Ie bacille typhique.
Ce milieu est, avec celui de Lafller-Schuster, Ie plus recom-
maudable pour l'is.olemelll dll bacille typhique. C'est incollles-
tablemellt celui qui, ell I'elat actuel de nos connaissances,four-
nit les meilleurs resultats.
¥ILIEUX DIFFERENTIELS PERMETTANT D'IDENTIFIER LE
BACILLE TYPHIQUE, LES PARATYPHIQUES A ET B ET LE
BACTERIUM COLI.
1° Lait tournesole. - Repartir du lait tres frais et non
eCrell1e dans des tubes, par,8 centimetres cubes environ.
Steriliser 15 minutes a 110°, ajouter au moment de I'emploi
la teinture aqueuse de tournesol a 2 p. 100 (6-8 gouttes
BACILLE TYPHIQUE 375
dans chaque tube). Ensemencer a;vec une goutte de cul-

ture de bouillon.
20 Petito/ail tournesole (Petruschky). - Porter it 400 du lait
ecreme, ajouter de la presure en pastilles et laisser coa-
gulet:, a la temperature du laboratoire, pendant.2 heures.
Jeter lecaillot coupe en morceaux sur un linge fin. Alcalini-
ser Ie filtrat avec de la soude jusqu'au rouge franc de la
phtaleine. Ajouter 2 grammes de CaCl2 cristallise par litre.
Porter 15 minutes it 110°. Filtrer sur papier jusqu'a ce que
Ie liquide passe clair. Verifier que la reaction est violet
fonce au tournesol. Ajouter une solution aqueuse de tour-
nesol·(2 p. 100) jilsqu'a ce que la teinte soit ass.ez foncee.
Filtrer sur bougi~. Repartir. Eprouver (deux jours a l'etuve,
PUi5 huit jours au Iaboratoire). Capuchonner. Ensemencer
avec une goutte de culture en bouillon.
30 Gelose au SOlls-acelate de plomb. - Preparer des
liquide. Au milieu chaud, ajouter °

tubes de gelose ordinaire avec 5 centimetres cubes de
cc. 1 de sous-acetate
de plomb en solution au ~ixieme, melanger, laisser
refroidir_
Ensemencer largement en partant d'une culture sur ge-
lose inclinee. Le fil de platine charge doit etre introduit
entre la paroi dutube et Ie milieu au plomb. Faire ainsi pIu-
sieurs traits nets.
40 Gelose all rouge neu/re. - Preparer la gelose 'ordinaire,
mais avec seulement 0,4 p. 100 de gelose, de fa!(on qu~ Ie
milieu soit a peine solide (gelee tremblante). Ajouter it
la fin 2 grammes de glucose par litre et la quantite de
rouge neutre juste suffisante pour teinter Ie milieu en
rose tres clair, so it environ 0 cc. 75 de la solution· au
centieme pour 100 centimetres cubes. Repartir en tubes
droits.
50 Bouillon glucose carbonate
Bouillon normal. 100 ce.
Glucose. . • • . 2 gl',
Carbonate de chaux. 1 pi:lC<;e.
Repartiren tubes et steriliser 30 minutes it 1150 •

6 Bouillon lactose carbonate:
0
Meme preparation en rempIa<;ant Ie glucose par du lac-

tose.
7° A rtichaut. - On coupe des fonds d'artichauts en tran-

ches de 2 a 3 centimetres de longueur sur 1, centimetr.c
Q'epais~eur. On les sterilise a 1200 pendan~ 20 l}1inutes
dans des tubes a essai. Ensemencer en Une stria mediana .
..
B. - Bacille paratyphique A.
Gdracteru biologiques . ...... Le para A a les memes carac-

teres morphologiques' et culturaux que Ie bacille d'Eberth.
11 s'en disHngue par les earaetcres suivants : Il a eomme
pH limites 4,5-7,8 et con1me pH optimum .6,4-7. rr decolore
lentemeI1t la g~lbse au rouge neutre et provoque "sa fluores-
cence. II rougit franchement Ie petit-Iait tournesoIe. II ne
noirclt pas Ia geibse au plomb .
..
C. -: Bacille paratyphique B.
Caracteres biologiques. - Le para B a des e[lracteres dif-
Mrentieis plus nettement accuses. Son pH est an~logue a
celui du Para A. Mais en bouillon, il degage souvent une
odeur tecaloide. En gelose inclinee, Ial culture est plus
abondante sous la forme d'un enduit epais, opaque, souvent
visqueux. Sur pomme de terre, Ia culture est abondante,
epaisse, brunissant rapidement. Comme I'Eberth ct Ie
para A, Ie para B ne coagule pas Ie bit, mais il 1'eelaireit
tardivement.
Le petit-lait tournesole rougit tres vite, puis bleuit
(cameleonage). La gelose au rouge neutre est decoloree et
devient fluorescente. L'artichaut verdit en 24 heures. Con-
trairement au para A, Ie para B noireit la gelose au sous-
flcetate de plomb, comme I'Eberth.
CARACTERES DIFFERENTIELS DU BA-CILLE TYPHIQUE,
DES PARATYPHIQUES A ET B ET DU BACTERIUM
COLI SUR CHAGfJN DES MILIEUX pRECEDENTS.
Baeill.
typhique
-_ A
Paratyphiques
_.--
R
Pas de COli'
Bacterium
coJi
Pas de Pas de gulation. Coagulation

10 Lait parfoi~
chaugement changement Eclaircit
tar,di vement tardive
Rougit
~o petit-Iait Rougit . Rougit Ires vile,puis Rougit
tourntsoie- legerement franchement bleuit (CII- IreS
meleonage) fortement
3 0 Milieux
d'Endo ou de Colonies Colonies Colonies Colonies
Drigalski incolores incolores incolores rouges
Ne noiq:it
4 0 Milieux Ne noircit Noireit pas (quelques
NQircit
au ~lomv pas exceptions)
Decoloralion Decoloration
50 G8Iose Pas de lente. Fluo· Decoioralion Fluorescence
au rouge nentre modification rescence Fluorescence inte'lse
6" Bouillon gZi.t- Pas de Fermen- Fermen· Permenlation

cose carbonate fermentation tation tation abondante
70 Bouilloft lac- Pas de Pas de Pas de F ermen la lion

tose carbonate fermentation fermentation fermentation abondante
-----
Verdisse- Verdisse-
80 Artichaut Pas de ment nul ou ment en Verdissemllnt
verdissement lent 24 heures I'lIpide
Mobile dans
les cultures
Generalement
;_ iigee~ oeimmobjle
90 Mobilite Mobile Mobile IllOlns
de 12 heures, ou peu
puis mobile
immohile
100 Formation Positive

d'indol Negative Negative Negative
378 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECI'ALES
METHODES DE RECHERCHE DE LA REACT ION

DE L'INDOL.
Cette recherche doit se faire sur des cultures en eau pep'-

tonee. (Peptone 20 a 40 grammes, sel marin 5 grammes,
eau 1 litre.) Examiner les cultures ,apres 2 jours. Employer
de preference une peptone pancreatique exempte d'indol
libre au de composes indologenes facilement dissociables,
et riche en tryptophane libre. Bien ajuster Ie pH de l'eau
peptonee., On pent employer ues milieux synthetiques
a base de tryptophane (A Berthelot, Soc. de Biolo-
gie, 1912).
a) Reaction de Salkowsk.'l' - A un tube contenant envi.
ron 15 centimetres cubes de culture, ajouter :
XXX gouttes de solution de nitrite de potassium a 1 p.
1.000, puis en agitant legerement et en laissant couler re
long du verre,
XX gouttes d'acide sulfurique chimiqnement pur.
Coloration rose, due ail nitroso-indol, s'il s'est forme de
l'indol.
Beaucoup de microbes ne produisent pas d'indol aux de-
pens du tryptophane, mais seulement de l'acide indol-3-
acetique. Celui-ci donne avec Ie nitrite et l'acide une teinte
rose, legerement violacee, que 1'0n a souvent cohfondue
avec celle du nitroso-indol (A. Berthelot). \
b) Reaction de Legal- Weyl. - A un tube de culture, ajou-
tel' 4 a 5 gouttes de solution de nitro-prussiate de 80ude a
5 p. 100, puis apres agitation, quelques gonttes de lessivc
de'soude a 40 p. 100. Le liquide devient rougeatre. En
• ajoutant environ 10 gouttes d 'acide acetique cristallisable,
la coulenr vire au blen-vert s'il ya de l'indol.
c) Recherche de l'indol parle papiel' oxalique. - Des
bandes de papier a filtrer, larges de 5 millimetres environ.
sterilisees par flambage au four Pasteur dans .des boites de
Petri, sont largementimpregnees de solution aqueuse satu-
ree d' acide oxaliqlle et sechees it l' etuve.
On introduit une de ces bandes a l'interieur d'un tube
~e culture (contenant I'eau peptonee ensemencee) de telle
sorte que la bande maintenue en place, par Ie bouchon
BAClLLR8 TYPIIIQURS ET PA1IATYPIIlQUES 37!l
d'ouate demeure sU!ij>endue au-dessus du milieu, sans Ie

toucher.
S'il y a d~ !'indol, Ie papier se colore nettement en rose
au bout de 1 a 3 joms.
d) Reaction de Fleig el Sicre. - A un tube de culture,
ajouter 10 centimetres cubes de solution alcoolique de fur-
furol a 1 p. 50. puis quelques gouttes d'acide chlorhydrique
pur. Colorationjaune s'il s'est forme de l'indo!.
e) Reaction d' Ehrlich.
10 Paradimelhylaminoben~aldehyde. 5 gr.
Alcool it 96 0 • • • • • • • • • 380 gr.
Acide chlorhydrique pur. . '. . 80 gr.
2 0 Solution saturee de perslllfate de potassium dans reau

distillee. A 10 centimetres cubes de culture en bouillon ou
en eau pcptonee, on ajoute' 5 centimetres cubes de la pre-
miere, puis 5 centimetres cubes de la seconde solution. On
melange par agitation. La presence d'indol se manifeste
par une coloration l'OUge. L'addition de 1 a 2 centimetres
cubes (I'alcoo1 amylique pur rend la coloration encore plus
nette.
f) ProcUe de A. Berthelot. - 1 0 Operer sur 10 a 15 centi-

metres cubes de culture contenue dans un tube it essai;
prendre Ia reaction de celle-ci au papier de tournesol et
alcaliniser franchement au moyen de quelques gouttes dc
lessive de soude, si besoin est.
20 Ajouter un volume egal d'ether purifie, agiter douce-
ment pendant quelques minutes, puis laisser deposer jusqu'it
ce que la'couche etheree soit bien limpide, au moins dans la
moitie superieure. Si l'emulsion est h'op stable, on l'addi-
tionne de quelques gouttes d'alcool.
3 0 A vee un tube :\ effilure courte, prelever 3 a 4 centime-
tres cubes de 1a solution etheree en evitant d'entrainer des
gouttelettes du milieu de culture.
4° Ajouter a rether, ~insi Tecueilli dans un tube it essai,
1/4 de son volume d'une solution de p. rlimethylaminoben-
zaldehyde 3.4 pour 100 dans l'alcool a Wo. Melanger inti-
mement cn agitant.
50 A l'aide d'un tube effile, faire arriver au fond du tube
380 MALA!JIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
contenant Ie melangeprt'lcedent, 2 it 3 centimetres cubes d'a-

cide chlorhydrique. Laisser reposer 5 minutes, puis exami-
ner sur un fond blano. La presenoe d'indol est (lecelee par
I'apparition d'un anneau rouge, Iegerement violaoo, dans Ia
zone de s~parfltion des deux liqueur;; ; lor;;que la quantite
d'indQl est assez forte, Ia, coloration s' etend it toute la couche
inferieure. Dne t~inte plus violacee tendant vcrs Ie bleu ill-
dique la presence de scatol.
Faire toujours une reaction avec deux tubes temoins, l'un
pour s 'assurer qlle la peptone employee seale ne contient pas
d'indol, l' autre avec une culture de Bacterium coli, pour s'as-
surer que la peptone employee donne bien de l'indol en pre-
sence de ce bacille.
Les cultures en ~au peptonee de bacille lyphique et de
paratyphiquc A ne donnenl jamais d'indo/.
Les cultures de paralyphique B ~n dppnent quelquefois
(notamment av~c la peptone de Witte), muis faiqlement.
Les cultures de Bacleril1m coli donnent loajoqrs {ie /'in-
dol, sauf dans les milieux sucres fermentescibles par oe mi-
crobe.
Pour r~nseignements complementaires sur l'etnde du
pouvoir indologene des microbes, consulter A. Berthelot,
Annales de [,Instilul Pasteur, 1914, et surtout F.-G. Valle-
Miranda, Contribution a I' etude du « Proteus vul9arill})
(These de sciences, 1917, Gauthier-Villars.)
I
DIAGNOSTIC PAR LA REACTIQN D'AGGLUTINATWN,-
I. - IDENTIFICATION DES CULTURES Pl\R UN SERUM

AGGLUTINANT TYPE (SERUMS ANTI-EflERTH, ANT~-PARA A
ET ANTI-PAR.~ B).
'Elle peut s'effectuer soit par la methode d'exumen eq
gouttes pendantes, soit par les melanges in vitro.
a) Agglutination ell goulles pendantes. - Avec une cul-
ture sur gelose du bacille suspect, agee de 24 heures, delu-
yee dans 5'centimetres cubes envil'on d'eau sa-iee physio-
logique, on prepare une emulsion aussi homogene quepos·
sible. Au moyen d'une anse de pIa tine, on en depose une
goutte au milieu d 'une lamelle bien' propre. Dans cette
goutte, avec la meme anse. de platine (qu'on a sterilisee a
/'
BACILLES TYPHIQUES ET PARATYPHIQUES 381
la flamme dans l'intervalle), on depose un volume sensi-

blement egal d'une dilution alp. '50 du serum agglutinant
type. La dilution dont il s'agit est preparee. au moment de
l'usage, en melangeant dans un tube a essai une goutte de
serum a 2 cc. 5 ou·50 gouttes d'eau salce physiologique.
Le melange doit toujours etre soigneusement agite sur
In Iamelle m~me, avec Ie fit de platine.
On renverse la lamelle sur une lame creuse, on attend
20 minutes et on examine au microscope avec un objectif
a sec (nO 6 ou 8, oc. 3 de Stiassnie) en diaphragmant
beaucoup.
Vne preparation temoin doit etre faite sans serum. On
voit immediatement si les bacilles sont fl3unis en grumeal_\x
dans la goutte pendante qui a rec;u Ie serum. Si l'aggluti-
nation est neUe, c'est qu'il s'agit d'un bacille typhique
authentique.
- b) Agglutination ell tllbes : mesure de l'agglulinabilite. -

Dans une serie de petit'S tubes a essai, on verse un meme
volume (1 centimetre cube) de dilutions a ~aux progressi-
vement decroissants d'un meme serum agglutinant-type,
dont Ie pouvoir agglutinant maximum a ete deja anterieure-
ment precise (1/5.0aO e par exemple). Les dilutions succes-
sives sont faites aI/100, 1/200., 1/500, 1/1000, 1/2000,
etc. (Voir tableau ci-apres.)
Dans chacun des tubes, on introduit une goutte (ou une
anse de platine) d'une emulsion homogcne de la _culture it
determiner, emulsion faite en delayant toute la culture de
24 heures dans 1 centimetre cube seulement d'eau salee
physiologique.
On porte les tubes a 1'6tuve a 37 0 pendant 3 heures (de-
lai optimum) et on nole ensuite, en les examinant a la
loupe, ceux des tubes dans lesquels les baciI1es se mon-
trent agglomeres ou suspendus en grumeaux. Le taux de
l'agglutinabilite de Ia culture est indique par Ie titre de
la dilution de serum qui a produit une agglutination
neUe.
Vne experience temoin doit toujours etre effectuee avec
une culture typhique autqentlque ayant servi a titrer Ie
pouvoir agglutinant du serum, pour s'assurer que celui·ci
n'a pas varie.
382 MALADIES INFECTIEUSES. TECIINIQUES SP~CJ.ALE~
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II. - DIAGNOSTIC DE L'INFECTION TYPHIQUE HUMAINE

OU EXPERIMENTALE PAR LA SERO-AGGLUTINATION DE F.
WIDAL. - Les prises de sang se font soit it Ia seringue,
dans une veine, soit par aspiration capillaire a la pipette,
apres piqure du lobule de I'oreille ou de la pulpe du pouce
(prcalablement comprimc it sa base et flechi au maximum)
au moyen d'une aiguille sterile. II faut toujours prendre
soin de laver Ia-peau it l'aIcool avant de faire la piqure.
On separe Ie serum apres coagulation du cailIot ou, si
l'on 'est presse, on defibrine Ie sang par agitation avec un
fil de platine, et 011 centrifuge.
On utilisera une culture de 24 heures de bacille d'Eberth
authcntique, ell eau peptonee, de preference. A defaut de
culture en eau peptonee, on emulsionnera dans 10 centi-
metres cubes d'eau salee physiologique une culture sur
gelose de 24 heures.
Deux tubes a essai suffisent pour chaque epreuve.
Dans Ie premier tube, on verse, avec une pipette graduce
sterile, 2 cc. 5 (ou 50 gouttes) et dans Ie second tube 5 cen-
timetres cubes (ou '100 goutles) de culture.
Immediatement apres, on laisse tom bel', dans chacun de
ces deux tubes, avec une pipette effilee, sterile, 1 goutte de
serum it eprouver. La dilution du serum dans Ie premier
tube est done de 1 p. 50 et dans Ie second de 1 p. 100.
On agite legerement les deux tubes et on les laisse au
repos, autant que possible it la temperature de 37 0 , pendant
au moins 30 minutes et au plus 3 heures.
On pratique alors I'examen macroscopique a la loupe.
Celui-ci suffit sonvent it mettre en evidence l'apparition de
grumeaux plus ou moins compacts.
Lorsque l'examcn est fait apres 30 minutes, leg- grumeaux
nc sont pas visibles macroscopiquement, mais si la reaction
est positive, ils apparaissent tres nets au microscope.
,Pour les observer, il suffit de prelever, avec une anse de
platine, nne goutte de chacune des dilutions an J/50 et au
1/100. On porte cette gouUe entre la .lame et la lamelle et on
examine sans coloration avec un objectif it sec nO (j ou 8,
Oc. 3 (de Stiassnie), en diaphragmant beaucoup. Par com-
paraison, on fait une preparation temoin a,:ec une gouUe de
Ia culture sans serum. -
Si l'aggiutination est neUe dans Ie second tub~, ou Ie
384 MALADIES INFEOTIEUSES. TEe:HNIQUES SPBCIALES
serum est dilue au 1/100, on dit que Ie taux de l'agglutina-

tion est de 1 p. 100.
Si ron veut preciser Ie taux de 1'agglutination au dela de
1 p. 100, on fait une dilution du serum au 1/10 (0 cc. 1 de
serum pour 0 cc. 9 d'eau salee physiologique). On opere
alors de la maniere suivante :
Dans uneserie de tubes a essai, on verse successivement
1/2 centimetre cube, 1 centimetre cube, 1 cc. 1/2, 2 centi-
tirnetres cubes.·5 centimetres cubes et 10 centimetres cubes
de culture de bacille d'Eberth de 24 heures en eau pepto-
nee. Puis on laisse tomber. dans chacun de ces tubes, une'
goutte de la dilution du serum au 1/10·. On agite et on
porte a l'etuve pendant 3 heures. Au bout de ce temps, on .
fait l'examen macroscopique a la loupe, puis l'examen mi-
oroscopique d'une anse de platine du contenu de chaque
tube. Si l'agglutination est positive dans les 1·. ., 2·et 3"
tubes par exemple, et negative dans Ie 4e , on en conclut que
In limite du pouvoir agglutinant du serum ctndie est de
I p . .300.
Le taux de 1 p. 100 suffit pour HabIir un diagnostic cli-
nique. Si la re'action est positive seulement alp. 50 et
negative il 1 p. 100, Ie diagnostic reste douteux et l' epreuve
sera renouvelee deux ou trois jours plus tard. En pareil cas,
il est egalement indique d'effectuer parallelement, ~t dans
les memes conditions, l'examen du serum Isuspect vis-a--vi$
du paratyphique B, qui est Ie plus commud. Mais on det;rra
se rappeler que parfois les serums normaux agglutinent Ie
paratyphique B alp. 80 et meme alp. 100. Le diagndstic
de rraralyphofde B ne .sera donc Habli que par Une scro-
agglutination positive au taux de 1 p. 200 au moins, alors que
lebo d'Eberth ne se rnontrera agglutine par Ie merne s~rum
qu'a moins de 1 p. 100.
..
*
D. '_ Salmonella.
On groupe, so us Ie nom de Salmonelloses (~igIliel'es),
toute une serie d'infections produites par des bacilles qu'il
est impossible de differencier du par.atyphique B au point
de vue hacteriologique.
Le groupe des SaLmonella, dont Ie bacille-type a ele isole

par Salmon sur des pores atteints de hog-cholera (pneumo-
enteriteT comprend un certain nombre de microbes a
caracteres generaux communs, pathogenes pour l'homme
et pour di vers animaux, principalement pour les rongeurs,
les boy ides et les pores.
Ce sont tous des bacilles courts, cilies et mobiles, ne pre-
n!-lllt pas Ie Gram, non sporules, poussant sur la pomme
de terre, peplonisant ordinairement Ie lait sans Ie coaguler,
ne formant pas d'indol, ne fermentant pas Ie lactose mais
attaquant Ie glucose et plusieurs auh'es sucres, el deco-
I oranl Ie'> milieux additionnes de rouge neutre.
On ral)ge parmi les Salm,onella les baciIIes des empoi-
sonnemenls alimentaires (.!ertrycke et Gartller), Ie Lacille
de la psitlacose, Ie' Bacillus typhi murium (d.e Loffler), Ie
virus DallYsz et Ie bacille de La septicemie des veaux (de
Thomassen).
Lomry et Gillet les classent en trois groupes d·apres
leurs proprietes fermentatives et leurs caracteres, d'agglu.
lination: 1 0 les para BI, race homogene dont Ie type normal
dccrit par ,schollmiiller est Ie para B ordinaire; 20 les
para B', ensemble de souches moins homogenes, dont Ie
type est Ie baciL(e d'Aertrycke ; il se rattache aux para Bl et
se separe nettement des para Ba; 3 0 la race des para B3,
aussi homogene ct aussi uniforme que celIe des para Bl,
qui correspond au type decrit par Gartner et comprend
Ie bacille de Nors~ele, Ie B. typhi mllrium et Je virus Danysz.
BACILLUS TYPHI MURIUM ET VIRUS DE DANYSZ, - Mi-'
Hell de clllture pOllr les virus destines a La destrllction des SOli-
ris et des rats ()3acilills typhi mllrillm de Lamer, Danysz,
etc, variele de paratyphique) :
Extrait de viande Liebig. " 10 gr.
Peptone. . . . . . 15 gr.
Sel marin, ,'., 5 gr.
Carbonate de barYl\m, 5 gr.
Ean, . ' , •.. l,litre.
Faire bouillir et ajouter q. s. de lessive de soude pour

bleuir Ie papier de tournesol rouge. Inutile de filtrer. Ste-
riliserit I'autoclave a 120", 30 minutes. Refroidir. Ensemen-
cer avec une culture virulente et laisser 48 heures a l'etuve
a 370 • •
MICROBIOLOGIE
Le virus do it etre utilise dans Ie plus bref delai, Avec.,lIn

litre dilue dans 3 lilres d'eau salee a 5 p. 1.000 et melange
avec 8 kilogrammes degrain ecrase ou'concasse, on prepare
12 kilogra'mmes d'appat.
Preparation en grandes qllantites du virus pour la des-
[metion des rais, des campagnols et des souris (DallYsz).
- Melanger d'ans des recipients de grande capacite,
'10 grammes d'extrait de viande, 15 graml,Iles de peplo"e,
5 grammes de sel de cuisine et 5 grammes de carbonate
de ehaux ou de baryum par litre, chaufTer jusqu'a ebullition
en remuant de temps en temps, puis ajouter de Ia lessive de
soude en quantite suffisante pour que Ie liql!,tde donne une
teinte legerement violacee au papier de tournesol rouge.
Repartir ce bouillon chaud a 70 0 environ, dans des bou-
teilles, s~ns cesser d'agiter la masse du liquide pour que Ie
carbonate de chaux reste a l'etat de suspension homogene
et soit egalement distribue. Boucher les houteilles avec aes
'tampons de coton et les recouvrir avec un capuchon de pa-
pier. Porter a l'autoclave et chaufl'er pendant 30 minutes ~
115°-1200. CeUe sterilisation a l'appareil de Vaillard exige
'au total environ 2 h. 1/2 pour 105 a 106 bouteilles.
Vingt·quatre heures avant l'expedition, on ensemence,
avec 1 centimetre cube de culture de B. typhi 11Iurium
les bouteilles maintenues a 36°. Ail moment de l'envoi,
on substitue, aux bouchons "de coton, des bouchons de
liege sterilises it 120 0 , a l'autoclave, dans un bain de
paraffine.
Pour l'emploi, ce virus peut eire dilne dans 3 fois son
volume d'eau salee a 5 p. 1.000. Le liquid~ dilue est ensuite
verse sur l'appat, de l'avoine concassee de preference, dans
la proportion de 4 litres de liquide pour 8 kilogrammes de
grains. Remuer pour que I'a~,roine soit regulierement im-
pregnee de virus. Au bout de2 ou 3 heures. on peut la repan-
dre dansles locaux et 'les champs infestes de petits rongeurs.
On compte en moyenne une bouteilIe de virus, soit 12 kilo-
grammes d'appat par hectare.
Pour l'infestation des campagnols-un milieu compose de :
Eau. . ... 1 litre.
Son. . •.. 25 gr.
Peptone de riz. . 5 gr.
Soude normale. 5 ce.
Sel ordinnire. 4 gr.
donne une culture tres riche. La virulence du bacille (a

egalitc de nombre de gf\rmes) est egale a celIe du bacille
cultive en bouillon.
E. - Ba cterium coli.
II existe un grand nombre de varietes, les unes mo-

biles, les autres immobiles. Les va riMes immobiles n'ont
pas de cils; les variMes mobiles en ont de 4 a 8, dissemines
sur toute la surface d,u corps microbien.
Peuvent se developper entre 10 et 45 0 • Temperature
optimum 37 0 (pH. limites =4,47-8, pH optimum = 6,0-
7,0.
Ne liquefient pas la gelatine et ne prennent pas Ie
Gram. _
Sur gelatine et sur gelose, colonies plates, grisatres,
translucides, irisees it Ia lumiere incidente (orient de la
perle un peu seche), it contours irreguliers. Mais cer-
taines varietes. sont molles, epaisses, opaques et non
irisees.
Poussent rapidement sur pomme de terre en couche molle,
jaunatre, qui brunit en vieillissant et 'degage des vapeurs
ammoniacales.
Coagulent Ie lait on masse corp.pacte en 48 heures it 3
jours, pour certaines varietes plus tardivement.
Decomposen! /es hydrates de carbone sllivants :
Sucres en CO : glucose. mannose, fructose. gqlactose,
sorbose.
Sucres en C5 : arabinose. xylose. rhamnose.
Sucres en C n : s&ccharose. lactose, maltose, melibiose.
trehalose. .
Sucre en 0 8 : rallinose
Alcools hexatomiques : Mannite. Dulcile, Sorbite.
Alcool penlalomique : Erythrite.
Alcool triatomique : glycerine.
Cette decomposition des sucres et de certains alcools est

une degradation moleculaire avec degagement d'hydrogene,
d'acide carbonique, de m~thane et production de quantites
variables d'acides lactique, acetique, formique, butyrique,
propionique, succinique, ainsi que de traces d'alcool et
388 MALADIES INFECT IE USES. TECHNIQUES SPECIALES
d'aceton,e. Les caracteristiques essentielles des Bacterium

coli sont :
1° La propriete de decomposer Ie laclose en CO~ et H
avec formation d'acides lactique, acetique et formique ;
2° De former rapidement de l'indol dans les milieux
peptones;
30 Dc reduire, surtout en culture anaerobie, certaines
coulcurs telles que l'indigo, Ie bleu de methylene, Ie bleu
de toluidine, Ia safranine, l'orceine, Ie rouge neutre, Ie vert
malachite. Ces matieres sont transformees en leucobases
incolores et reprennent leur coloration normale si on lcs
agite avec de l'ail'.
Le Bacteriam coli, dans les cultures en bouillon, pro·
duit line hemolysine thermostabile qui dissout fortement
les hematies de chien, faiblement celles de bCCllf, de cheval
et de lapin et qui n'attaque pas celles de cobaye,de mouton,
de pore, d'homme.
Ce microbe est agglutinable par les serums homologues,
pIllS fortement. souvent alp. 5.000, par les serums prepa-
res avec la souche mem'e de B. coli que 1'0n cllltive; plus
faiblement, de 1 p. 100 a 1 p.·l.OOO, a des taux tres variables
par les serums prepares avec des Bacl. coli de diverses
o'rigines.
La reaction de fixation du complement donne, elle aussi,
des. resultats tres divers, suivant qu'on emploie, comme
antigene, Ie Bacterium coli qui a serv.i a \preparer Ie serum
sensibilisatenr ou un Bact. coli etranger.
On isole Ie Bacterium coli du sang ou des divers excreta
des malades avec les memes methodes qui servent a isoler
Ie bacille typhique (bile pure, milieux de Drigalslci-Conradi
ou de I.oftZer).
Caracteres differentiels de culture des principales

especes de microbes.du groupe Bacterium coli et des
groupes voisins (d'apres Castellani et Chalmers).
A : production d'acide A + K : production d'acide +: positif.

G : pl'Oduction de ga1- . d'nb,ord, puis d'{llcali [)': negutjF.
C ; coagulation L : reactIon l<;gere ±: douteux ou
variable.
P : pellicule de surface T : trouble,
'"'
t.: '"'
~
IOPUI
I ++10 +++1 ++1 0 += +-=-+1 +00 +-=- +0+++0+
+ +
a·n mnr
uOlHnolI
<J~!J~nb!I
I ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
0 000+0000000000000
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\'l!l!qol~ I +0 ++++000 +00 +++++++ 0000000

E. - Bacilles de la typhose aviaire.
On comprend, sous Ie nom de typhose aviaire, deux mala-

dies distinctes des volaiIles causees par des germes tres voi-
sins: rune est la diarrhee blanche des poussins dont l'agent
pathogene est Ie Bact. pullorum, l'autre la typhose propre-
ment qite, due a Bact. sanguinariu11l ou Bact. gallinarLll1l al-
califaciens.
A. - Bacterium pu,llomm,
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Ell bouillon Martin court
b:Honnet immobile, en navette, avec un espace clair.
COLORATION. Se colore facilement par to utes les cou-
leurs d'aniline. Ne prend pas Ie Gram.
CULTURES. - Aerobie. Temperature optimum 30 a 37",
croit de 4 a 45°.
Bouillon. - Croissance rapide. Trouble uhiforme en 18-
24 heures, ondes moirees par agitation; aptes quelques
jours, collerette et depot blanchatre,ie liquide s'eclaircit et
brunit.
Gelatine. - Developpement abondant sahs liquefaction.
En piqure, petit disque opaque a la surface; petites colonies
arrondies, opaques, Ie long de la cultu,re.
Gelose. - Culture rapide et abondante. Trainee b1an-
chatre, cremeuse, a bords irises ou colonies blanches, ar-
rondies, opaques par transparence. ._
Pomme de terre. - Tanlot nappe incolore, br.illanle,
tant6t nappe foncee bruniHre.
Ce milieu convient a la diITerenciation du B. pullorum et
-du B. sanguinarium avec Ie microbe du cholera des' poules
qui ne pousse pas ::;ur Ia pomme de terre.
13. - B. gallinarum.
Presente des caracteres morphoIogiques et culturaux
iaentiques it ceux de B. pullorum. On ne les distingue
13ACILLES TYPHIQUES ET PARATYPHIQUES 39i
que par leur action Sur Ie lait tournesole (reduction tres'

precoce, avec eclaircissement pour n. pullorum, reduction
survenant seulement apres 30 jours pour B. sanguina-
rium) et leur action fermentative sur les sucres (mannite,
arabinose, levulose, glucose sont fermentes par les deux
microbes, mais seulle B. pullorum prod'uit des gaz).
B. pllllol"llm. B. sangllinarillm, bacille d'Eberth et bacille

paratyphique A ont des agglutinations reciproques avec les
serums correspondants.
..
F. - Bacillus frecalis alcaligenes.
Bacille mobile ou tres mobile. Ne prend pas Ie Gram et

presente les caracteres gene raux du bacille =typhique. S' en
distingue par la presence de lou 5 cils polaires etnon peri-
triches et son aerobiose stricte. Ne coagule pas Ie lait qui
se clariJ,ie Iegerement et devient opalescent eI! 8 jours.
Enduit epais, brun sur pomme de terre. Alcalinise Ie lait
tournesole et Ie petit lait tournesole. N'est pas agglutine par
les serums antityphiques.
Peu ou pas· pathogene. Existe frcquem_ment dans l'intes-
tin de l'homme. .
..
"
G. - Proteus vulgaris.
EXAMEN A L'ETAT FR.AIS. - Microbe polymorphe,

formes en cocci, et cocco-bacilles a extremites effilees ou
fins bacill~s filamenteux. Cilie. Mobile. Non sporule.
COLOR.ATION. - Toutes les couleurs basiques ~'aniline.
Ne prend pas Ie Gram lorsqu'il est traite par la methode
de Gram-Nicolle (A. Berthelot). Anaerobie facultatif.
CULTURE. pH limites = 4.4-8,4, pH optimum = 6-7.
Anaerobie facultatif. Bouillon uniformement trouble, depot
floconneux et collerette. Odeur ammoniacale.
Gelatine. - Liquefiee. Sur plaques, colonies nattees
rayonnantes; en culot, par piqllre, rayonnement en an'!te de
:,392 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPb'CIALES
poisson. Odeur putride. Certaines races sont a peine pro-

teolytiques (Valle-Miranda).
Gelose. - Nappe muqueuse blanc grisiHre, surface iri-
see, culture rapidement envahissante.
Lait. - Coagulation generalement tardive et souvent
incomplete, suivie d'U'lle digestion lente du coagulum.
En eau peptonee produit toujours de l'acide indolace-
tique et tres souvent de l'indol (A. Berthelot, l'alle-Mi-
randa). Acidifie l'eau peptonee additionnee de glucose, ga-
lactose ou saccharose. Certaines races acidifient egalement
Jes milieux contenant du levulose ou du maltose.Le Proteus
etant un puissant producteur d'ammoniaque, I'etude de ses
propriMes saccharolytiques donne des resullats d'interpre-;
tation difficile; les qosages fournissent des donnees tout
a fait diiTerentes de celles qu'on obtient par l'examen des
changements de reaction du milieu (l'alle-Miranda).
Pathogene pour la souris, Ie cobaye et Ie lapin (abces,
septicemie, intoxication). Tne par chaufl'age entre 60 et 80 0 •
Produit une exotoxine et un~ endotoxine (A. Berthelot).,
Le Proteus X 19, de Weil-Felix, ala' propriete dBre
agglutille parle serum des malades aileints de typhus exallthe-
malique. On l'utilise pour Ie diagnostic de cette maladie_
CHAPITRE XXXIII
DYSENTERIES.
.
, A. - Dysenterie bacillaire.
On en distingue habituellemcnt quatre types:
10 Type Shiga·!(mse, de beau coup Ie plus frequemment
rencontre dans les epidemies de dysenteric de l'hemisphere
septentrional et Ie plus pathogene. Pr.obablement identique
au bacille decouvert ct sommairement decrit par Chanle-
llIesse et Widal, en 1888.
2'; Type FlexileI'. Hepandu surtout en Asie orientale, au
Japon, dans I'Amerique du Nord et en Europe. A ete signale
il Marseille.
3 0 Type Slrol1g (iles Philippines, Japon, Chine, Russie
et Amerique <In Nord).
4" Type Hiss·Russel ou type Y, auquel sont attribuahles
surtout les petites epidemies d ·asiles d'alienes (pseudo-
dysenterie des fous, de [(ruse) egalement rencontre dans
des epidemies de dysenterie dans I'Amerique du Nord, en
Europe,. en Asie orientale. Dopter l'a trouve dans une epi-
demie a Paris et avait cru pouvoir l'identifier au type
Strong, Ie plus commun apres Ie Shiga-!(ruse.
Les typcs Flexner et Hiss ont ete isoles aussi des dejcc-
tions de singes (macaques) spontanement infectes dans les
laboratoires.
Tous sont immohiles, aerobies facultatifs, non cilies
et facilement colorables par Ie bleu de methylene ou la
fuchsine de Ziehl diluce au dixieme. lis ne prennent pas Ie
Gram.
Ils se cultivent aisement sur les milieux usuels a 37 0 et a
la temperature du laboratoire. I1~ ne liquefient pas la gcla-
tirie et ne coagulent pas Ie laiL Le hacille dc Shiga-Kruse-
nc pousse pas dans les milicux hilies. Au contrairc, Ic type
Flcxner s'y devc.loppe tres bien.
Pour les differencier, il faut les ensemencer dans les
394 MALAbIES INFEcTIEUSES. TECHNIQUES SPl1CIALES
milieux qui servent a l'identification du bacille typhique

ou, plus simplement, d'abord en eau peptonee pour la
recherche de l'indol, puis dans des tubes de bouillon, lege-
rement alcalin, tournesole et additionne respectivement de
lactose, glucose, saccharose, maltose et mannite, dans la pro-
portion de 2 grammes de chaque sucre pour 100 centime-
tres cubes de bouillon. .
La gelo~e tournesolee, mannitee :i 2 p. 100, convient par-
raitement pour la difl'erenciation du Shiga avec Ie bacille
typhique. Avec -Ie bacille typhiqlle, on obliellt,'Sul' ce miLieu,
des colonies rouges, landis que celles de Shiga restellt
inc%res.
Pour l'isolement rapide du bacille de Shiga des matieres
fecales lors des epidemies de dysenterie, ]{indborg a pre-
conise l'emploi de gelose coloree avec de la fuchsine acide
et du vert malachite. On prepare ce milieu de la maniere
suivante:
On fait d'abord une solution a 3 p. 100 de fuchsine acide
(fuchsine acide de Riedel-Berlin) et une autre solution a
1 p. 10.000 de vert malachhe. Dans 1 litre de bouillon
gelose, neutre au tournesol. on verse 50 centimetres cubes de
Ia solution de fuchsine et 10 centimetres cubes de celie de
vert malachite. On ajoute 40 centimetres cubes d'eau dans
laquelle on a fait dissoudre 14 -grammes de lactose; on ste-
rilise :l 100 0 et on coule en plaques. I
Sur ces plaques, deja apres 12 heures, les colonies de
bacilles de Shiga apparaissent entourees d!une aureole de-
coloree. La decoloration s'accentue ensuite.·
Ce caractere de decoloration de la gelose fuchsinee, acide
cst particulier au bacille de Shiga, au bacille typhique et au
paratyphique B; plus iaiblement au vibrion cholerique.
Le Bacterium coli ne s'entoure d'aucune zone claire.
Voici les caracteres des differents types dans les milieux1
usueIs :
DYSENTERIES 395
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3G6 MALADIES INFECT IE USES. TECHNIQUES SPECIAL_ES
On peut encore differencier Ie typc Shiga par l'agglu-

tillation au moyen d'un serum de lapin vaccine contre Ie
Shiga. Ce serum n'agglutine aucun des trois autres types.
Inversement, les serums specifiques anli-Flexner et anti-
Hiss n 'agglutinent jamais ,Ie type Shiga, mais, par contre,
run et l'autre agglutinent ala fois les types Flexner-Hiss.
Le serum anti-Strong n'agglutine que Ie type Strong.
De meme, on peut utiliser la reaction de Bordel-Gengou
comme procede auxiliaire de diaBnostic. Les bacilles de
type Shiga fixent les sensibilisatrices d\U1 serum specifique
anli-Shiga et ne fixent pas celIe d'un serum anti-Flexner et
anti-Hiss et. inversement. les bacilles des types Flexner.
Strong ou Hiss ne fixent pas les sensibilisatrices d'un
serum anti-Shiga.
II ne semble donc pas y avoir de difIerence specifique
entre les types Flexner, Strong et Hiss qui ne se distin-
guent que par quclques reactions culturales. Le type
Shiga au contraire, seul intensivement toxigene, est nette-
ment dilTerencie. La dose mortelle de culture virulente du
Shiga est. pour l-a souris blanche, par voie sous-cutanee, de
o mgt'. 02 environ, peses a l'etat frais et, pour Ie lapin, par
voie intraveineuse de 0 mgr. 5~ Les cobayes y sont peu sen-
sibles, meme par voie peritoneale : 1 _milligramme ne les
tue pas toujours.
TOXINE DYSENTERIQUE. - Les cultures Ituees par la
chaleur provoquent chez les animallx inocules les memes
symptomes ct les. memes lesions que les Lacill es vivants.
On en a conclu que l'action du bacille de ,Shiga devait
etre liee a la presence d'une toxine dans Ie corps microbien
et liberee dans l'organisme.
Plusieurs procedes permettent de mettre ceUe toxine cn
evidence:
Proced(~ de l'aulolgse asepliqlle (Conradi). -- Emulsion-
ner dans 20 centimetres cubes d'eau physiologique UJle cul-
ture sur gelose -en hoite de Roux. Mettrc ~\ l' etuve ~\ 37 0
pendant 48 hcures. Filtrer sur bougie Berkefeld : 0 ce. 1
du lillral, injecte dans les vcines d\ll1 lapin de 2 a B kilo-
grammes, Ie tne en 24 heures.
Pracede! de Todd el Rosenthal. - Ensemencer dll hacille
de Shiga en bouillon assez fortement alcalin ; mettre a
l'etllye ~\ 37 0 pendant trois semuines -; puis filtrer sur bou-
DYSENTERIES 3!J7
gie Chamberland: 0 cc. 01 du filtrat injectc dans les veines

d'un lapin de 2 kilogrammes Ie tue en 48 heures.
Procide de M. Nicolle, Debains el JOllan (technique Row . .
land). Les bacilles vivants peses et verses dans un mortier
sterile sont aband()nnes au froid pendant une"heure ; ajouter
1 partie 1/2 de sulfate de soude fraichement calcinc, broyer.
Pour obtenir l'extrait, ajouter 20 centimetres cubes d'eau
distillce a 1 gramme de poildre, abandonner 24 heures au
-froid et passcr ensnite SlIr de la terre d'infllsoires. Le
liquide ainsi obtenu est tres toxique pour Ie lapin. '
AGGLUTINATION PAR LE SERUM DES MALADES. - Les
serums normaux agglutinent Ie Shiga de 1 p. 20 alp. 40 ;
les types Flexnel', Strong et Hiss de 1 p. 50 U 1 p. 80.
Le scrum des malades, ainsi que celui (]es convalescents
et des porteurs de germcs sains, agglutine it des taux tres
variables. Celui des sujets infectes par Ie Shiga agglutine de
1 p. 100 alp. 1000. L'agglutination du Shiga ~I 1 p. 50 par un
serum de malade suffit a etablit la tres grande probabilite
d'un diagnostic positif. Celui des sujets infectes par I'un
des autres types n'agglutine pas Ie Sh~ga et agglutine sou-
vent indifferemment les trois types Flexner, Strong et Hiss
it des taux variant de 1 p. 100 it 1 p. 1000.
VACCINATION ET SEROTHERAPIE. - Shiga a essaye de
vacciner l'homme par des injections sous-cutanees de
bacilles dysenteriqllcs tues par la chaleur, mais il a dfl Y
renoncer it cause des troubles locaux et gencraux qlle ces
injections produisaient.
Les essais de vaccination par serum vi rlls ont etc egale-
ment abandollnes.
On pent prepareI' un uaeein allti -Shiga avec des cultures
sllr gelose chauffees 1 heure it 60°, dessechees 'dans Ie vide,
reprises par quelques gouttes d'eau physiologique et sensi-
bilisees pendant 12 heures par un serum specifique anti-
Shiga (selon Ie procede de Besredka). On centrifuge ensuite
ct on met le'precipite decante en suspension dans de l'eau
physiologique. 5 milligrammes de bacilles peses it reiat
frais representent une dose de vaccin. L'immunite est
{lcqllise deja' apres 4 it 5 jours (Dopter).
Le Dr Aime Gauthier a obtenll des resultats interessants
en vaccinant par la voie buccale les refllgies grecs d' Asie
Mineure avec des cultures polyvalentes de bacilles dysen-
teriques tues par la chaIeuret contenant 3 milliards de-corps

microbiens par centimetre cube. La dose journaliere
. employee Mait de 1 centimetre cube ponr un adulte. de 1/2
centimetre cube pour un enfant de deux a six ans et de
1/4 de centimetre cube pour un enfant an-dessous de deux
ans. Elle etait renouvelee pendant trois jours consecutifs ;
Ie vaccin etait donne dans un pen d'eau.
Le serum antidysenterique prepare a I'Institut Pasteur est
a la fois antitoxiqne, bactericide et polyvalent a l'egard des
divers types de bacilles. La dose a injecter varie de 20 a
100 -centimetres cubes et doit etre renouvelee si c'est neces-
saire. L'immunite conferee est immediate, mais ne dure ql.1'e
dix a douze jours.
DrAGNO'STIC BACTERIOLOGJQUE DE LA DYSENTERIE
·BACILLAIRE. - S'effectue par la recherch'e du bacille
dysenterique dans les selles, ou a deraut, par Ie sero-dia-
gnostic. ,
Examen microscopique des selles. - A l'etat frais, on cons-
tate l'absence d'amibes dysenteriques et la tres grande
abondance des leucocytes.
lsolement du bacille dysenterique. - Doit etre pratique Ie
plus rapidement-possible apres l'emission des selles.
Prelever une glaire sanguinolente, la laver 2 ou 3,fois
dans de l'eau physiologique. Ensemencer par stries avec
un fil de pIa tine ou, de preference, par etalement avecl'extre-
mite d'une pipette coudee sur 3 boites dC'\ Petri contenant
de la gelose lactosee·tournesolee, ou de la gelose d'Endo.
Sur Ia gelose lactosee. tournesolee, on ne retient que les
colonies bleues; snr Ie milieu d'Endo, que les colonies inco-
lores.
Identification des gel'mes. Si apres examen a·l'Mat frais,
coloration et repiquage sur milieux 'us11els, les caracteres
du bacille repondent a ceux du bacille dysenterique, on
determine Ie type auquel il appartient par:
. 10 Les fermentations sucrees (voir tableau donne) ;
2 0 L'agglutination avec les serums experimentaux.anti-
Shiga et anti-Flexner.
Sero-diagnostic. - Effectuer Ie sero-diagnostic par Ie pro-
'cede microscopique \methode de Widal pour Ie sero-d~a
gnostic de la :fievre typhoide) ou par Ie procede macrosco-
pique.
DYSENTERIES 399
II est indispensable de determiner Ie taux d'agglutination

du serum a l'etude par les dilutions successives, a cause de
la frequence des coagglutinations.
Pour Ie Shiga, ne tenir compte que des tau x d'agglutina-
tion superieurs ~ 1 p. 50, pour les bacilles de Flexner et
de Hiss, que des taux superieurs alp. 100 ou alp. 150.
BACILLES DYSENTERIQUES DITS « ATYPIQUES)l.
Ces bacilles ont ete nommes pseudo-dysenleriques ou
paradysentel'iques ou encore mCladysentcl'iques.
Certains d'entre eux, plus communement 'appcles parady-
senteriques, se rapprochent du Shiga,Flexner, HissetStrong.
lIs en different so it parce que leurs reactions fermentatives
ne sont pas superposables a celles de ces microbes, soit
parce qu'ils ne sont pas agglutines par les serums experi-
mentaux.
D'autres se rapprochent davantage du B. coli que des
dysenteriques a cause de la production-de gaz dans les fer-
mentations sucrees. lIs ont ete plus specialement designes
sous Ie nom de pscudo-dysenlcriques.
Dans Ie premier groupe, on peut ranger Ie bacille de
Schmitz et celui de d'Herelle.
Dans Ie second, les bacilles de Morgan.
Le bacille de Schmitz ne fait pas fermenter les lactose,
mannife, maltose etsaGcharose, ce qui Ie rapprochedu Shiga,
mais contrairement a lui, il produit de l'indol.
II n'est pas pathogene pour Ie :Iapin.. J.J n'est pas agglutinc
par les serums anti-Shiga, anti-Flexner, anti-Hiss et anti-
Strong.
Le bacille de d'Herelle fait fermenter les maltose et man-
nite; il est inactif sur Ie saccharose. II ne vire pas les mi-
lieux au Touge neutre, donne de I'indol (Debains) et n'est
pas agglutine par Jes serums anti-Shiga et anti-Flexner.
Les bacilles de Morgan sont mobiles ou immobiles. Dans
Ie bouillon oils degagent une forte odeur fecaloide et produi-
sent de l'indol. Sur gelose ordinaire, leurs colonies sont
analogues a celles du B. coli. En milieu lactose, it se
produit une acidification 'legere avec formation de bulles
gazeuses. La fermentation des aut res sucres est 'variable,
mais quand elle a lieu, c'est toujours avec formation de
bulles de gaz, ce/qui ne se constate jamais avec les dys-
enteriques typiques. Quand les milieux sucres au rouge
4'00 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
.neutre "fermentent, ils virent atl jaune canari avec produc-

tion d'une fluorescence intense.
Les bacilles de Morgan et celui de d'Herelle donnent, par
injection intraveineuse au lapin, une paralysie du train pos-
terieur. Mais les lesions constatees ne sont pas superposa-
bles a celles de la dysenteric experimentale, due au bacille
de Shiga.
Hi - Dysenterie amibienne.
COLORATION. - Seeher les preparations ~I l'air libre,

sans jamais les passer sur la flamme, puis fixer par expo-
sition, durant 10 a 20 minutes, aux vapeurs degagees par
une solution it 2 0;0 d'aeide osmique ou, mieux. par Ie
fixat!!ur: suivant (de Schmzdinn) chauife a 50°, qu'on fait
agir pendant 10 a 15 minutes:
Sol aq. sat. a chand de bichlorure de mercure 2 vol.
Alcool absoln 1 vol:
Acide ncctique. . . . . • . . . • • . qq.gtt.
Passer en suite pendant quelques minutes dans l'alcool

iode, puis dans l'alcool a 70 0 e-rcolorer par Ie Giemsa ou
par l'hematoxyline au fer'ou par la methode de Laveran au
bleu 1:!0rrel. (Voir : Coloration dll \sang, protozoaires,
chap. VlI )
Coloration par la methode de S. L. Bru(J (de Batavia'. -
Fixer les frottis de selie par la liqueur de Schaudinn;
Laver a l'eall pendant quelques secondes.
Passer 2 minutes ~i l'alcool a 70°, iode, jusqu'a coloration
rouge bruno -
Laver a l'eau. Passer pendant 2 minutes dans solution
d'hyposulfite de soude a 0,2 %.
Laver it l'eau. .
Mor.dancer pendant 10 minutes avec nne solution de sel
de Mohr a 3 % (sulfate double d'ammoniaque et de pro-
toxyde de fer): Fe (AzH4? (SO~)2 + 6H 2 0.
Laver pendant 10 minutes it l'eau courante.
Colorer 10 minutes a l'bematoxyline de Heidenhain.
Laver 10 minutes it l'eau courante.
DYSENT,ERJES 10,1
Colorer 1 minute a J'J,lematoxyline DelafleM,(mu~e,ill p.lO

dans l'eau distillee.
Laver quelques minutes a l'eau •
.coJo.r~r p~nd.;lnt J ;millR'te a.v.ec so.l\lti9Q COY~!inw~ pe
fuchsine aeide (rubine S).
~flS,stl.r a l:lll€qol il ~6° qJ,lelq\le,s s~~n4es, iit l:~ftco.ol.~lu
1 !1liIl\l,te, fiY- :lI<iYwl ~ mi,nute.et fIlOn.~f@P h~.
La ~hr.C)jJ~t}AW e&t jCol.oree en .lWir w'llce" ),e :pro.t9Prl~m.~
en v:i.oj~, ~~S ,MlPiNiAs.tW r.o.u,ge·bfil~~t. .
,P09,ar t\es .c.Q;llPes .(r~nt~l>tjl,1 ,ppAe·f9~e ppr;i\RitklP.;l;r}.ef; .AlWi· .
MS, uIWr I?,ar l~ ,F~fl1WWg 9.u ,~ jij9.W.9--J~$9§c.g ,(v~,i.r
cJwp· n) ,; (CoJ.~er .pi-x .~i~jlilil;~ ~ar ~ §9.~~ .a~\\~~
saturee de fuclxi'\lle .; ,p~s, ,~an$ ~vf!r, po.r~r j\e?lhw: tidip.
rp;\il~ _daps PJlr#~ ~gale.s 9!'lS ~.EWx"sol"~io~W .§~i:YJl»k1.s :
Solution aqueuse saturee d'acide picrique.
Solution aqueuse saturee d'iudigo·carmin.
Les.~iPes apparaissent.colore~s en gris-h'leu iouge,i1~~.e;

les .ooya;UlX iSottt violets. '
lOp peulenco,J;e colorer par 1'.hem.~oxyli\1e:£c,r,r.i<Jl,le~'~ei-
4en'ha;itn,.,pllis lP,a.r l'eo;;ine.
tFfl.We S1Sir .s.uecessi:y.e.tn~nt xylol. pleoo'l, ~lcocJ.l :J~~i,lJ.e,
e_au.
Mo-.rl~a\}C~r ;pendantj24 heures dans l'alun de fec"a,a f: -I.
Colorer 24 heures d~s ,un b~ip .d'hematoxyline alp. 1-
Differeneier dans l'alun de.fer a 1 %.
,Sui-~l;e ~Jl.piffereneiation ,au .~ieroscope.
$EElsine ,quE1.lgues secondes,_alcool, xylol, bJunne.
JCY',f;A"'!)'RJ;!: .~ Les alIlih.~s 51;yscnt~riques (~a,Uilre:pjl his-'
(o£utica)!l1~ ·::;e jlllultiplient;PJls dans les milieu,x ~i:ticiels.
M..!\1s ODIPeu.t,cultiver les ilom-t4es.de la terre ou des eaux (en
melangeJl.V6c les micrO'bes dont ees o~gan~~es ,s.e p.~u~Iiis
sent) sur la gelose de Musgrave el Clegg:
'finu. . . . • • . • . •
'E~tr.ait 'Li6~ig. . . • . . •
-Gelose 'lavee. . • • • " .
NaC!. . • . . • • • • •
,t\lcll.lin~:rrI~gel{8lJl.e;~t f1 1a .soude,.G~ml~r 1-}P ib.5\~tes dl:W

tes de Roux, steriliser et solidifier en cou<W.e!Dt;JlAPAlS:i~.
,1;..e:;,apl~b!'ls :;de ,In .BaiUe,~.~mRx.) ~e ,c\l1\i;vapt ,}.>¥ip .1I"r. Ie"
lllili,_eu1\e y'O/l.WasUeUJ~~i ~t Jl.ir~c~f.e,lf].,:
MICROIlIOLOGIB 26
402 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SpECIALES
Eau dislillee. . . 900 cc.
Gelose ; . • . • 10 gr.
Bouillon de bceuf. 100 cc.
On peut allssi ohtenir des cultures sur Ie milieu Novy-

Neal-Ch. Nicolle (gelose au sang).
Nota. - On sa it aujourd'hui que la dysenterie amihienne
est justiciable du traitement de L. Rogers par l'emeline, al-
caloide de l'ipeca. Cette substance est tres toxique pour les
amibes, ill vitro et ill vivo. Chez l'homme, il est preferable de
l'injecter par voie intraveineuse,a la dose de 2 a3 centigram-
meso On emploie allssi avec d'excellents resultats Ie Stovar-
sol (de Fourneau) qui s'administre par voie buccale, en
comprime~ de 0 gr. 25, a raison de 4 par jour.
DIAGNOSTIC DE LA DYSENTERIE AMIBIENNE. - Se fait
o 5 10 1S 20 25 ~ 35 40 ~ 50
l""I,,,,I",,I,,,,I,,,,I,,,,I,,,'I,,,,I",,I,,,,1
£ c/"f!!e en ft--
Fig.23 - Amibes. - 1-2-3. Amibes u retat mobile. 1. ,Amreba bystolytica avec
inclusions glohulaires. 2. La meme it in phase Amreba tetragenu. 3. Amreba coli.
4-5-6. Amibes a rotat immobile. 4. A. X b contenant e11core de. globules rouges
alteres. 5. Pbase A. t. 6. A. coli d'apres Ravaut.
par Ia conslatation dans les selles des amibes dysenteriques

ou de leurs kystes.
Comme pour la dysenterie bacillaire, les selles doivent
eire examinees Ie plus rapidement possible apres leur emis-
DYSENTERIES . 403
sion. Les amibes se reconnaissent surtout a leur mobilitc

qu'elles perdent des qu'elles se rerroidissenL Si. I'examen
microscopique ne peut etre fait au lit du l1lalade. transpor-
ter les matieres d'ans un flacon entoure d'eau tiede.
a) Examcn d l'etat frais. - Prelever avec un fil de pla-
tine une glaire sanguinolente, la deposer entre lame et
lamelle et 6xa!uiner au microscope d'abord it sec, puis it
l'immersion en diaphragmant.
La forme mobile d'Amceba dysenterire dite A. histoly-
lica a de 25 a 40 p.. Elle presente un~ partie centrale granu-
leuse, l'endoplasme, et une zone peripherique claire, refrin~
gente,l'ectoplasme.
Dans la partie granuleuse, se trouve un noyau plus ou
moins visible. tan tot central, tantot peripherique de 4-5 p. de
diametre.
L'endoplasme contient aussi des globules rouges ou leurs
debris qui ont une couleur jaune paille. lis ont ete phago-
cytes par l'amibe.
L' A. histolyca presente un deplacement amiboide carac~
teristique qui peut etre ranime par la chaleur.
Dans les selles diarrheiques ou normales, on trouve Ie
type letragena qui correspond au type normal de l'A. dy~
senterire. Elle ne mesure que 20-25 p.. Elle a peu d'ectoplas-
me. Elle est moins mobile. Aussi est-il difficile de la diffc·
rencier de l' A. coli non pathogene, qui est comme elle peu
mobile, ne presente pas d'ectoplasme tres visible et n'en·
globe pas de globules rouges.
Dans certains cas, Ie diagnostic ne peut etre pose que pill'
l'examen des kystes qui sont tres caracteristiques.
Les kystes apparaissent dans les selles lorsque la crise ai-
gue:est terminee. lIs consti_tuent la forme de resistance do
l'amibe. lis restent intacts dans les selles pendant pres de
48 heures.
A reiat frais, les kystes d'A. dysenterire ont un aspect
refringent mesurant 10 a 15 p.. lIs contiennent 1 a 4 noyaux
et de petits Mtonnets s~derophiles.
Les kystes d'A. coli ont de plus grandes dimensions, 16 U
25 fL. lIs contiennent jusqu'a 8 noyaux et ne renferme111
pas de b:itonnets siderophiles.
b) - Examen apres coloratioll. - Vincent conseille de
401i MALADIES INFEC,);lEU$ES. TE6:IlN,lQUES SPECIALES
ooposer, sur lies bondls ~e fa. Iam.eldle, une gon.M!e de i)'f}!u.!lioo

ali{ueuse de bleu. de m.eth?,lt!ne a 1: % : &Jus Ib'S e-Iement5
autr.es. que les. am-ibes se colore-ot ilnmediat4m'llrrtJ erl hi'tnt!rt
les amibes se detachent pa:. leup teion, dnwr.e SUll Ie £on'd.
II est preferable d:employ~: ,Ie roug~. neutre (Sabrllzes) ~ui
colbre en rouge brIque Ies elements dlvers et, en rose pare,
les amines. Le d'iagIWstic sur Ies amibes fixe'es et (~otorees
est ))eaucoup plus difficile a etablir : les fixer et les c'Ol'orer
par les,methodes indiq_uees.
Pbur affi.'rmer Ie. diagnostic, iI' faut p-ratiqper l·inj,ection
d'un. fragment de glaire ·(,emul·sionne) dans I'e rect'um, d'un'
jeune chat de l' a 3 semaines (t cc. envi'ron, av.ec·uue s<5nd~
fine). Apres 7 a 8 jours. l'animaI rend des seffes gll1irens(!s.
tres ri.ches en' amihes. 1'1:' succomoe generalbn'ent vers Ie f2e
jour-avec dies ulcerations et une congestion int'ense de l!r
muqueuse du gros intestin. On peut aussi infecter Iel>.jeunes'
chats par ingestion.
(5;asll'llani a si'gnaIe a Ceylan une forme de dysenwrie'due'
a un protozoaire mobile, de 45 it 55 I,L de Ibnguet1r, c<5Ib ...
rable en 1:Ihm par Ie Giemsa:, conrenant des granulb chr.ol111l-
tiques. II lui a d'onne Ie nom d'EnlbpLl1srna.
.cHA.PITRE XXXIV
CHOLERA
A. - Milieux de-culture ,pOUl' la recherche et la deter-

mination des vibrions cholerigenes.
1. - RECUERCHE bu VlBRI<ilN CHOLERIGEl.'IE

al.ANS LES E}\UK.
Pour 10. ,1'echel'che d,u vibri<O!ll clw16rigbme chtn-s les

'6mx. 8ll ya lJieu ~,e p-roo6dcr <d'abord it l'eITsemencemenl,
en aussi grande quantite que possible, de l'eau s'llspecte
,d3\1ll'5 UP! milieu d'enrichissemeRiI: {ean p8pt@JJ.oe). En-
'Suite Oll ~tIOcede iI. l'iSt01eruem-t des get'nres S\lr lllIli·l.ieux
soliuies tpJ,aqn6s,dce t;.e~'Il.ti4alHI\l mili-eu. de Bic-udof1lte.).
La meil1erne. r;ne.t,hode oomsis'te a ij1t:rer, -sur uoo oo'lllgie
Chamberland sterile, une dizaine de litres au moins de l'eau
suspecteet a .recueillir ensuite, au mO,ycn d'un pinceau ou
d'un tampon d'ouate' sterile, Ie depot 1aisse par ceUe eau a 1a
surface de la bougie. Ce depot est d€laye et verse dans un
9alJon .d'e:m {peptonee. CQa.ce:ntree (fo.rmuJe ,61. .ci-a,pres),
.q[u'c.n1 dlill1.e -av.ec 90 % d'-elilu dis61lee stel'ile. Si les vibrions
s'y t.rouv.ent, mellLl.e en petit lU.embre, nos ne tardentpas a se
develCl'Pper.
a} ECtiU pepfonee t:ancentree (foTll'1!JJe 'de Melc'mikoff, re-
commandee) :
Peptone secbe. • • . , 10 gr.
Sal U'lar;-n. • • • • . • '0 gr.
Gtilolli ne . • • • • . . • 2Q~
Eau distillee q. sulE •. pour. 100 cc.
AI'Ctltiniser Mgerement a fa soude et stel'iHs'C'[' a l'a'!l.tQ-

dave SO minutes a 11.:,}o,
On v'erse~ centimetres cubes doe l'eau suspecte dans
un ball<>n de 21itl'es de capRdt~ contenaat tOO ,oentimetres
cubes de ceUe eau peptonee de Metchnikoff. On porte it

l'etuve it 37° et, si l'eau renferme des vibrions, il se forme,
deja apres 6 au 8 heures, un lege:t: voile a la surface. On en
prend une parcelle avec un fil de platine et on la reense-
mence dans des tubes d'eau.peptonee (meme formule, diluee
au dixieme avec de reau sterile), puis sur milieux solides
(Dieudonne et plaques de bouillon-gelatine ordinaire) allies
colonies de vihrions se developpent avec un aspect carac-
teristique (petites huIles d'air et liquefaction).
b) Eall peplonee (formule allemande) :

Peplone de Wille seehe. 100 gr.
Sel marin. . . . . . . . . . . 100 gr.
Nitrate de potasse. . . . . . . . 1 gr.
Carbonate de soude eristallise. . . . 2 gr.
Eau dislillee (quantite suflisanle pour). 1.000 ce.
Cette solution-mere doit, pour l'usage, eire etendue de

9 fois son volume d'eau dans laquelle il s'agit de rechercher
les vibrions.
POlzr la Cllltllre des vibrions cholerigcnes dans les milieux
gelatiIll!s ou geioses, il convient d'alcaliniser forlement ces mi-
lieux par addition de 3 % d'zllle solution a 10 % de lessive de
sonde. pH limites; 6,4-7,9, pH optimum 7,0-7,4.
II. - RECHERCHE DU. VIBRION lHOLERIGENE

DANS LES SELLES.
Lorsqu'il s'agit de selles liquides. on preleve une ansc'

de plaline it la sllrface de l'echantilloll,apres repos de 10 a 15
minutes. Si les matieres fccales sont solides (porteurs de
germes), -on prepare, dans l'eau physiologique (100 centi-
metres cubes environ), une emulsion d'environ 5 grammes
de matieres.
L'anse de platine est ensuite plongee dans un tube d'eau
peptoriee a 2 % (peptone pancreatiqne, de preference) qu'on
laisse immobile 10 it 15 minutes. Pendant ce temps, on fait
un examen direct de la selle au microscope, d'abord a retat
f1'ais, puis apres coloration (Gram-fuchsine en sol. aqueuse).
On preleve alors, it la surface dn tube d'eau peptonee,
une anse de liquide avec laquelle on ensemence, sur
.toute son etend ue, un tube de gelose inclinee .(A) qui est ca-
CHOLERA 407
puehonne et mis a l'etuve a 37°, ainsi que Ie tuba d' eau pep-
tonee.
Apres 3 heures d'etuve on prelcve de nouveau a la surface
du mcme tube d'eau peptonee, une anse de liquidc avee
laquelle on ensemence un second tube de gclose (B) qu'on
porte aI'etuve a 37°.•
Au bout de 10 a 12 heures, les colonies sontapparentes et
assez caraCteristiques : brillantes, laiteuses, a bords ronds.
On emulsionne une de ces colonies dans un peu d'eau phy-
siologique pqur en pratiquer I'examen direct a I'etat frais,
puis aprcs coloration (Gram-fuchsine aqueuse). Avec la
meme emulsion, on recherche (a 37°) I'agglntination avec
Ie serum de I'Institut Pasteur, au taux d'au moins 1 pour
500 et jusqu'a 1 pour 10.000. CeJ'taills vibJ'iolls l1e deviel1llelll
agglulinables qu'upJ'es 3 011 4- J'epiqlwges sllccessifs sur gelose.
La separation des vibrions dewloppes en voile se fait,
comme il a etc dit ci -dessus, par rcensemencement apres
6 heures, Ces reensemencel11cnts doivent etre effectues en
eau peptqnee diluee au dixicl11e, engelatine nutritive coulee
en boltes, de Petri, sur milieu de Dieudonne, et dans la bile
de brenf.
Le milieu de Dieudonne, employe seul, permet souvent
d'isoler ~'emblee les vibrions cholerigenes des dejections
riziforl11es.
a) Milieu de Dieudonne (pour les "matieres fecales). -
On melange parties egales de sang de breuf oude pore defi-
brine et de solution normale de potasse (a 56 grammes
d'hydrate de potasse par litre), ou mieux, suivant la methode
de Pilon, on melange parties egales de sang defibrine et de
solution de soude pure, cristallisee, a 12 p. 100. On sterilise
II l'autoclave (liqaide A).
On prepare d'autre part, selon In technique ordinaire, de
lagelose nutritive exnctementneutre au tournesol (liquide B).
On melange 7 parties de B pour 3 parties de A et on coule
en plaques.
La gelose ainsi obtenue contient environ 0,6 p. 100 de
potasse au de soude 1.
1. On peut remplacer te sang defibrine par line solution d·hemoglohine.

On dissout 5 grarnmes. u'hemoglohine dans un melange de 15 centinleh'es cubes de
408 MALADIES INFECTJEUSES. tECHNIQUES SPECIALES
~a{tdenif 1M p"1aqtYcs de~ottvertes et fa face eft bas, a

l'etuve a 37 pendant quelquesjours ou, si ron est pteMe",
0
TM ~I.-i'ai{trer 5- hli'ti'Ufe'!l a g5' d _ If ~st rtt[euJ{ de'l es cl:n'l.se):<,rer

4~r ien'te"S' au' ia}Jo"t~toiI'~ a~anf rusag~', POttI' ~litftfrreI', par
ev~bt:ltiO'fi, drie tfartie de f'aftim'O'l'lili«(I'rc' qui' emp&cfretaft Ie
developpement des vibrions.
(ift' e'd~am.·eitC~ ~e's plaques El'rt sides aveC uti pihcettn ou
U:ff. ptMf tllltip'bti d'ot1'ate s'fetife, trt!tnp-e dttns ¥ide di-ftrtiati de
i gr"afhfrl'e eYrvlr6't'l' de' Mjections dans 1<1 ceI1tfffl~fti!S' c'ul'les
tf'ea't'l s-te-rile'. brt e'!lsurtt sutN!ssivt!in'eht Ie piflc'eatl dti Ie
ittrlip6lt sut' p1ttsieutl': plaques, stt'rls Fe'I'ec1tatger.
On ptftfe :i f'llttJ.ve it :flo fes piaq'des tenvef's~e's, Ie coU:-
-ve't<lle erlllii~ (p-bUI' evHer Ie depOt d' ea'n de' cbrlde'ti'llatiM a
f!l. slitf:i(:~ d'u tffifil!ti). Au bottt de dix lietlrM, od e"!utrhitIe.
Lt~s' t'ol6'ttfes de V'i'b'rioi'H~ son't deFl visibles, tdfidis <jtte
cMle'~ d~ Ii. d6'li et d'g-trtres nrict6'hes irifMti'fJactx se' deve-
lOt>,/}ertt p'lM fattlNetrlenf. II faut dtmc en ptati<jtlet Ie
ri?eh's~1ri~liceiUMt ptc!l:!tfce, ett e11.u peptonM d~ne pa'rl,
~nr tl'o'tril1b1i geltf~1! en {uhlt irfclirh~ li'tJ:tftte Pa'tt, pout
Ul'ehiliief erlSulte Iell vibridns ptlr Ia tMfteI'che de Ia
reaction indolnitreuse et par les reactions d'aggliIt!iId-
Hifrl. teHe ide1ttificatit1ii peuf ~fre' eITe'clue€! stlns dlffi-
cuif~s 36 a 40 heutes api'~s l'e'MeI1H~rieeme'flt iflifittl deli
dejections .
. Hoffmalln ~t Kutscher ont propose de 1essecher Ie milieu
de DicllJonne dans un appareil a vide pour Ie franstormer
en une p6udre grossi~re qui peut se conserver iddefiniment
~n flacori boudie a I"emeri et dont il suitl.t,de faii:e dissoudre
ra quantile doni on a besoin dans 9.parties d1eau, au momen t
de s'en servil~. On sieri1ise Ia solution it 1000 av!lnt de Ia
r~par1:ir en piaques.
bj Modificaliohs diverses dll iniliezi tie IJteudonne. __,_ 1d An

lieu de Se servir de sang frais defibrine, qu'il n' est pas
toujours possible de Se procurer rapidement, Costa pr.e-
conise l'emploi de sang ( cristallise» qu'gn lrouve tout
prepar~ dans Ie commerce et qujon peut obtenll' soi-
lessive n()rmale de soude et de 15 centimetres cubes d'eau distillee. Cette solution est
sterilisee it 100 pend...'lht "n~ heUl'e dans .l·tlutbctav~ non boulonne). OIl en verbe
0
15 cehtirnetr~s cunes Harts 85 c~nJjmetres }!ubes d~ gJl~)fij:e nutritive neu~re fondpe et

pn repartit en ~ros tubes a essai. On solidifie par re£roidissement, en position inclinee.
CHaLEItA 409
m·~e. pmtr Ie gal'd'er en provisrorr, en dessechant dans des

cuvettes, en couche mince, dans un autoclave a vide, a la
ten1pel!attlre de' 45<t, du sang de bamf aefibdne. Ce sang,
fil1e'1tle1It pUNerrse all mortier, est d'elase Ientement a froid
avec de l'e~1tl distillce en evitant Ia formation de gru-
n1e'llUx :
Sang oristalliso. . 20 gr.
E':111 distillee. . . 1(J{) ce.
On 'venle el1~uite ~ans l

S'ohit1dtt t1dtM'll.te de'ilotrtslte.
.
100 (le.
POlS. on p9rte a l"autoclav6 a 1000 pendant 30 minutes On

fi.l.tr'e :n1 papier Chard in mQuill6, puis on sterilise pendant
Ge1:lx. heutes a 100° a l'autoclave. CcUe solution est ajoutee
a Ia gelose,. seIgn la techll'ique de Di€udonne, dans Ia pro-
Iiortion de 3 volumes de solution pour 7 volumes de gelose.
La melang_e est coule en boites de' Petri et peut etre utilise
12 heures apres sa solidification.
2 0 Bdert.hlein et Gildemeister mQdifient egalement Ie milieu
de Dieudonne en substitu:mt, au sang frais, l'hemoglobine
(extrait d'hemoglobine de Pfeiffer). On dissout 3 gr. 50 d'he-
nioglobille dans 10 centimetres cubes d'eau salee physiolo-
gique. On y Ajoute 10 centimetres cubes de solution ii.
5 gr. 50, de soude! cnustique pure anhydre et 2 cer1timetres
cubes de lessive normale de potasse. On sterilise a 100 0
•
Lorsque Ie liquide est refroidi aux environs de 50°, on Ie

melange a 80 centimetres cubes de gelose a 3 p. 100, exac-
tement neutre au tournesol et prealablement chauffee a 80-
90°. On agife pour rertdre Ie melange bien homogene et on
coule atrssifo~ en boile's de Petri. On desseche les plaques en
position reI1versee pendant 24 ou 48 heures a l'etuve avant
de le& employer.
c) MILum n'HAN6 ARONSON. - On prepare d'avance une
serie de petits ballons ou vases d'Erlenmeyer con tenant
chacun 100 centimetres cubes de bouillon gelose neutre,
peptone a 3,5 p. 100, avec de la peptone de Witte, et alca-
linise avec 6 centimetres cubes pour 100 d'une solution
a 10 p. 100 de carbonate de soude cristallise purifie.
A chaque ball on de ceUe gelose, prealablement [ondlIe
au bain-made ou a l'autoclave, on ajoute :
5, centimetres cubes de solution de suc:re (saccbarose) a

20 p. 100 ;
5 centimetres ,cubes de solution de dextrine a 20 p. 100 ;
occ. 4 de solution alcoolique saturee de fuchsine basique
ou ~agenta ; .
2 centimetres cubes de solution a 10 p. 100 de sulfite de
soude.
Chacune de ces solutions do it avoir ete sterilisee a part.
On agite ; il se forme un pr~cipite qu\on laisse se deposer
mais qu'onone separe pas et on cO,ule en boites de Petri en
retenant dans Ie ballon les quelques centimetres cubes de
liquide,qui contiennent Ie precipite.
Sur ce milieu tres alcalin, qu'on peut utiliser immediate-
ment, les vibrions choleriques se developpent abondam-
ment en 10 a 20 heures, en formant des colonies brillantes,
rouges au centre, incolores a la peripherie. Ces colonies
'grossissent rapidement jusqu'~tteindre 6 millimMres de
diametre. Les colonies de Bacterium coli poussentbeaucoup
plus lentement et gardent une coloration blanche.
L'isolement des vibrions choleriques contenus dans les
dejections est tres facile avec ce milieu.
d) MILIEU n'OTTOLENGHI (bile de bamf). Tres recom-
mande. - On melange, a 100 centimetres cubes de bile de
bceuf fraiche, filtree sur papier, 3 centimetres cubes de la
.solution suivante :
Carbonate de soude. 10 gr.
Nitrite de potasse. o gr. 1
Eau dislilIee. . . 100 ce.
On r-epartit ~n 'tubes a essai, a raison de 5 centimetres

cubes par tube, et on sterilise a l'autoclave pendant
20 minutes a 115 0 • On ensemence les tubes avec une anse
dr pia tine de dejections sllspectes, diluees ou non. On porte
a l'etuve a 37 pendant 12 heures et on reensemence direc-
0
tement en eau peptonee gelatinisee ou en bouillon gela-

tinise pour isoler les colonies de vibrions.
e) MILIEU MINERAL DE KEMAL ~OUKTHAR.
Phospbate de soude. . o gr. 8
A.paragine. . . . . o 'gr. 4
Lactate d'ammoniaque. o g". 6
Chlorure de sodium. . (I gr. 5
Eau distillM. • . . 100 ce.
CHOLlSRA / 411
On fait -dissoudre les sels dans l'eau distillee et on ste-

rilise apres repartition en tubes. Ce milieu peut etre
employe immediatement. On ensemence les tubes avec illle
parcelle de matieres fecales suspectes et on porte a l'etuve
it 37 0 • ,Au bout de 5 it 6 heures, Ie vibrion y donne une cul-
ture presque pure tandis que Ie B. coli et les autres bactcries
intestinales n'ont pas Ie temps de se multiplier. On peut
faire ensuite l'isolement sur un milieu prepare comme
suit:
Eau dislillec. . . 100 ce.
Phosphate de soude. 2 g".
Gelatine. . . . . 2 gr.
Gelose . . . . . 2 gr.
an porte a l'autoclave :1 120 0 pendant 15 minutes

on filtre a chaud et on repartit en larges tubes it essai qu'on
laisse solidifier en position inclinee.
Les proprietes biologiques des vibrions ne sont p.as
modifiees par la culture sur ce milieu mineral.
fJ MILIEU POUR LA RECHERCHE DE LA REACTION INDOL-
J'HTREUSE (cholera-roth de O. Bujwid).
Peptone de Witte. . 10 gr.
Nitrate de potnsse. 1 gr ..
NaCI . . . . . 3 Itr.
Eau distillee.. . . • 1 litre
Apres 24 heures de culture, verser dans Ie tube HCI ou

SO~H2 pur (lou 2 centimetres cubes). II se prodnit une colo-
ration rose-rouge. Si la teinte est douteuse, ajouter 1 centi-
metre cube d'alcool amylique et agiter : l'alcool amylique
surnage, colore en rose par Ie nitroso-indol
CeUe reaction n'est pas absolument caracteristique, car
des vibrions non ,choJerigenes la presentent. mais ellc ne
manque presque jamais avec les vihrions cholerigenes
authentiques.
g) MILIEU POUR LA RECHERCHE DES HEMOLYSINES. -
On incorpore it un tube de bouillon-gelose (fondu au bain-
marie a 50°).2 ou 3 centimetres cubes de sang de lapin ou
de mouton defibrine et on coule en hoite de Petri. au
bien, plus simplement, on verse a la surface d'une plaque
de gelose. ou d'un tube de gelose inclinee, quelques gOl]ttcs
de sang de lapin ou de sang humain defibrine.
On ensemenceen stl'ie, sur cette gelose au sang, Ie vibrion

qU'OlT veut etudie}' (ou tout autre microbe dont on veut
rechercher les proprietes hemolysantcs, par exemple Ie
streptoeoque).
, Si Ie microbe produit une hernolysine, ses colonies
s'entourent d"une' aureole claire sur Ie fond opaque' du
milieu.
Presque tous I,es vibrions pseudo-choleriques isoles des
eaux produisent, autour de leurs colonies, une zone nette
d'hemolyse surtout dans les cultures ugecs de 3 semaines.
Les ·vibrions cholerigenes authentiques ne produisent
pas d'hemolysine.
Les cultures, plus au mains agees, de quelques rares
vibrions non cholerigenes sont ccpendant assez forte~l1ent
bemolytiques. Celles du vibrion de Nasik sont Ie plus actives
ii. 3 semaines. Pour rnesurer l'activite de l'hemolysine
pseudo-cholerique qui est generalement labile, il ne faut pas
fiItrer les cultures, mais les centrifuger fortement et long-
temps pour eliminer la plupart des elements microbiens. Le
liquide decant.e est ensuite mis en contact, a doses variables
(0 cc. 01 ':) 0 cc. 5 par exemple), dans nne serie de tubes :)
essai, avec un volume constant d'emnlsion de sang, par
exemple : 0 cc. 5 d'emulsion :) 5 p. 100 de sang de mouton
defibrine. On complete partout au meme volume, 3 ct!nti-
metres cubes, avec de l'eau salee physiologiqne; on porte
dans un bain-marie a 37°, et on lit les r~sultats apres des
temps variables, de 5 en 5 minutes.
II faut savoir que, dans certains cas, les cultures renfer-
ment des substances qui empechent l'hemolyse, de teIle sort~
qu'avec de tres petites dosljs de ces cultures, l'hemolyse se
produit, tandis qu'avec de fortes doses ~l1e est empechee.
B. - Diagnostic des vibrions choUirigimes par

l'agglutination,
II faut disposer d'un immun-serum actif au moins it

1 p. 4.000 ; celui de l'Institut Pasteur agglutine jusqu'a
1 p. 10.000.
On prepar~ l+n~ ~¢rie de dilutions de cet immun-serum
CHOLl5RA 413
dans l'eau physiologique au taux de 1 p. 500,1 p. 1.000, etc.
Dans ane serie de petits tubes a essai, on verse 1 centimetre
cube -de d.iJution serique; pllis, dans chacun d'eux, on delaye,
en ayant soin d'agiter de fayon a dbtenir un trouble homo-
gene, une anse d',une cwture sur gelose, agee de 18 heures,
du vibrion a essayer, provenant d'un isolement sur milieu
de Dieudonne ()U sur plaques de gelatine. On porte a l'eoove
.a 37° et on 'ohserve les resultats au bout de deux heures.
On considerera, comme donnant une reaction positive,
toute dilution dans laquelle let> vibrions sont reuRis en gcu-
meaux depos~s au fond du tube et laissen.f: au-dessus d'eux
un liquide clair.
If faut faire, dans les memes conditions, d<!ux .cssais
temoins: l'UD {tvec la culture a identifier et du serum nor-
mal de l'espece animale qui a fourni l'immun-serum,
l'nutre avec l'immun-serum et un vibrion cholerique authen-
tique.
Tout vibrion,agglmine par Ie 6erum II Ulllo.ux in{erieul' a
1 p. 500 ne doil pas eire considere comme ohoierigcne auihM-
tique.
L'Institut Pasteur de Paris enyoie aux microhiologistes
qui en desirent, du serum de cheval anti-cholerique agglu-
tinant. Mais on peut aisement preparer, pour les reactions
d'agglutination, un sel'Um aetif en inoculant a un l{lpin
ou a nne chevre, sous la peau .d'ahord, une petite iiuan-
tiM (une demi-culture sur tube de gelose indinee) de
vibrions cholerigenes authentiques. chauffes a 580 pend-ant
30 minutes, puis quelques jours apres, des .quantites peo-
gressivement croissantes de cul-tures vivantes (a partir d,e
1 dixieme de culture sur tube de .gelose). Le sang recueilli
huit jours apres la cinquieme ou sixieme injection fuurnit
generale~ent un serum deja tres agglutinant. Ce sernm ne
doit pas efre challffe. On l'essaye d'ahord et on titre SOil pou-
voir agglutinant av.ec un ou plusieurs vibrions cholerisenes
autbentiques.
DIAGNOSTIC DU CHOLERA. PAR LE PHENOMENE DE PFEIF-
F~R. ~ On injecte a un premier cobaye (de 300 a 350
grammes environ), dans Ie peritoine, un melange de :
Un dixieme de culture'de 24 heures (sur gelose) d'u
yihrion suspect, -emulsionne dans 2 centimetres cubes d'eau
saIee physiologique, avec 0 cc. 5 ou meme 0 cc. 1 ,de
·114 MALADIES INFECTIEUbE,'S. 1'ECHNIQUES SPECIALES
serum anticholerique agglutinant alp. 4.000, par exemple.

A un second cobaye de meine poids, on injecte, dans Ie
peritoine, la meme quantite de la meme emUlsion du vibrion
suspect, melangee a 0 cc. 5 ou 0 cc. 1 de serum normal
de la rncme espcce animale qni a fourni Ie serum anticho-
lcrique.
Quinze it 30 minutes apres, on fait une ponction abdomi-
nal~ it la pipette, sur la ligne blanche, l'animal Clant'ieim
par un aide Ie ventre bombe en bas, de telle sorte que
l'exsudat peritoneal s'accumule au voisinage de l'ombilic.
Par de legers mouvements de va-et-vient, l'extremite de la
pipette penetre dans Ie peritoine et, par capillarite, aspire
un peu d'exsudat. On examine celui-ci, d'abord a retat frais,
en goutte pendante, puis apres coloration it la thionine phe-
niquee ou, mieux, suivant la technique ci-apres:
On fait agir sur la lamelle, OU une gouttelette d'exsudat
a ete etalee et sechee a l'etuve a 37 0 , d'abord une solution
concentree d'acide picrique, pendant 2 ou 3 minutes,
p'uis une solution it 1 p. 100 d'eosine dans l'alcool a 950,
2 a 3 minutes; enfin, pendant 1 it 2 minutes, une solution
aqueuse, concenlree de bleu de methylene ou de bleu
Borrel.
S'il s'agit d'un vibrion cholerique vrai, l' exsudat prove-
nant de l'animal qui a re<;u Ie serum anticholerique en
melange avec la culture, montre, en goutte pendante, des
vibrions immobiles (agglutines et transforfues en granuIes
spheriques), tan dis que, dans l'exsudat de l'animal qui a
re<;u Ie melange de culture et de, serum normal, les vibrions
sont intacts, mobiles et parfaitement colorables.
On peut realiser in vitro ceUe reaction en melangeant,
dans de petits tubes a es:;ai steriles, deux gouttes d'emulsion
de vibrions avec 1 centiIl,lctre cube de dilution au dixieme de
serum anticholerique inactive par chlluffage it 560 et
2 gouttes d'alexine fraiche de cobaye. On porte a l'etuve
it 37 0 pendant 2 heures, puis on examine ~n goutte pendante
et sur lame apres coloration par la thionine.
Bien entendu, on fait une epreuve de controle avec l'e-
llluision de vibrions, de l'alexine fraiche de cobayc et du
shllm normal inactive par challffagc.
Solution de ROBers, pour injections inil'Qveineuses chez les
choicriq!1es :
CHOLF.'RA 415
Chlorure de sodium . . 1 gr. 5
Chlorure de calcium .. o gr. 45
Chlorure de potassium. o gr. 7
Eau distillee • . '. . 1 litre
Dose, 1 litre 500 <'t 2 litres 500, it la temperature de 37°.

On injecte lentement, a raison de 10 minutes pour
1 litre.
En 1911, it Palerme, Rogers a employe les injections
intraveineuses d'un liquide hypertonique. compose comme
suit:
Chlorure de sodium. •
Chlorure de calcium • o7 gr.
gr.
68
25
J 1Pour
seule
Chlorure de' potassium. o gr. 38 injection
Eau sterile. . • . • 567 ce. lente
Nola. - En 1911 egalement, en Tunisie. Naame a obtenu

d'excellents resultats de l'injection intraveineuse de 2 it
3 milligrammes d'adrenaline, meme en periode d'algidite.
CHAPITRE Xxxv
PESTE
La 'recherche du bacille de la peste peut s'effectuer wit

dans. Ie .lj,quide .de ponct!on (a la seri.n~l.le~ d'un ,bubon,
soit dans 'Ie sallg pr.eleve par poncliQd1 ~ne.tl6€ sur Ie
malade ,ou ,(lans 1es 'o,r:,ganes a I'autopsie, 'Sort dans :les pus-
tules ou vesico pu,stules, soit dans l~s crachats (pneumonic
pesreirse-:).
Le b. pes.Jie;uK est lliet1'.uit ;pad, }}6urf! ·Qe ~u:e:~ge it .600 •
Il riiiiste'maJ,a 'la ,a.es'S;iocaotio.a,ct illa itumier.e.spjili~. 1il
se conserve une dizaine de jours dans Ies cadavrcs en
putrefaction.
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Dans les cultures en
milieux Iiquides, formes en chaineUes et formes d'involution
avec renflements irn\guliers. Le microbe n'est pas mobile.
COLORATION. - Coloration du sang ou des frottis apres
fixation par l'alcool·ether. Bleu de methylene phenique ou
alcalin, ou bleu borate (solution a 2 p. 100 de bleu de
methylene medicinal dans solution aqueuse de borax a
5 p. 100). Le bacille de la peste ne prend pas Ie Gram. 11
presente une colorabilite caracteristique des poles avec Ie
centre clair.
CULTURE. - Aerobie.
Bouillon. - pHlimites = 5,6-7,5pH optimum = 6,5-7.
Temperature optimum 30°-35° (aspect caracteristique en
flocons), puis voile !ragile et stalactites en bouillon gelose
ou gelatine faiblementalcalin et de preparation recente. Les
milieux soli des dont Ia surface est seche et les milieuxlegere-
mentacides ou trop alcalins nedonnf?ntaucun developpement.
Gelatine. - Lorsque la recherche porte sur des cra-
chats ou sur des matieres purulentes dans lesquelles Ie
bacille de la peste peut se trouver associe it d'autres
microbes, l'ensemencement doit etre fait en stries sur tubes
de gelatine inclines, et ceux-ci seront maintenus hors de
PESTE 417
l'etuve a la temperature de 22°. Les colonies de b. pesleux
y deviennent visihles en 2 a 3 jours, tandis que les pneu~
mocoques et les streptocbques ne se developpent pas. La
gelatine ntest pas liquefiec.
Milieux geloses. - Les colonies sur gelose n'appa~
raissent qu'apres 48 heures de sejour a 30-350 , d'abord en'
goutte de rosee, puis grisatres et muqueuses. Les tubes de
cultures sur' gelose doivent etre alors scelles et conserves a
la glaciere, sinon les bacilles perdent assez rapidement leur
virulence. Cultu're presque nulle sur pomme de terre.
L'ensemencement du sang au de cultures pures, en vue
de l'obtention' de grandes quantites de corps microbiens..
s'efIectuera, de preference, a la surface du bouillon gelose,
en fioles plates de Roux.
Le bouillon gelose additionne de 2 gr. 5 a 3 gr. 5 p. 100
de chlorure de sodium (ou gelose preparee a I'eau de
mer) convient pour I'observation des formes d'involution
caracteristiques du bacille pesteux (formes renflees en
boules).
TOXINE PESTEUSE. - Pour la production de la toxine
'pesteuse, on utilisera les milieux liquides, de preference
en bouillon, a la surface desquels on aura depose une petite
quantite d'un corps gras (beurre ou huile d'olive steriles)
dont les gouttes servent de points d'appui aux stalactites
caracteristiques du bacille.
Diagnos~ic bacteriologique. - A) CHEZ LE MALADE :
a) Dalls fa peste bubollique.

Ponctionner Ie ganglion avec une seringue. Avec Irt
serosite recueillie:
1° Examen direct. Colorei' une lame par Ie Gram, une
autre lame par la thionine.
2° Ensemencent sur gelose. Mettre les tubes a l'etuve it
30-35°. Le developpement est lent (48 heures). Repiquer les
colonies en bouillon pour avoil' la culture caracteristique
en flacons.
30 Epreuve de la virulence. S'il s'agit de cultures pures
(cultures sur bouillon gelose emulsionnees dans quelques
gouttes d'eau sa lee physiologique), Ie meilleur procede con-
siste a y tremper I'extremite d'une aiguilJe d'acier creuse
MICROBIOI.OGIE 27
418 MALADIES INFECTIEUSE5. TECHNIQUES SPECIALES
(aiguille a seringue a injection) avec laquelle on pique la

peau de la cuisse d'une souris ou d'un rat, ou la paume de
la main ou du pied d'un singe. (L'espece de singe la plus
sensible est Ie Semnopilhecus enlellrls de l'lnde, puis 'ensuite
les macaques).
S'ils'agit de rechercher la presence de bacilles pesteux
virulents dans des crachats, dans du pus au dans des frag-
ments d'organes preleves sur un cadavre frais au deja pu-
treiie, on prepare une emulsion epaisse du produit dont on
dispose et, avec une pipette effilee, on eillaisse tomber une
goutte sur la muqueuse oculaire d'un rat ou d'un cobaye. Ce
mode d'infection entraine la mort de l'animal en 3 ou a,
jours. On peut encore infecter les rats ou les cobayes par
badigeonnage des narines avec un petit tampon d'ouato
impregnee de substance virulente, ou par simple frotte-
ment d'une petite etendue de peau fraiohement rasee. L'an,
topsie des animaux qui succombent aces differents modes
d'infection permet d'isoler Ie bacille pesteux, a l'eIat pur;
par ensemencement du sang du cmur au de pulpe de
r.atc.
Le diagnostic peut etre facilite par I'injection sous-cuta-
nee, ~ la souris, de 1 centimetre cube de serum antipesteux,
en meme temps que Ie produit virulent. D'autres souris,
conservees comme temoins, sont inoculces avec Ie produit
virulent seul.
S'il s'agit debacille pesteux, les souris ~yant re!(u Ie se-
rum antipesteux restent vivantes ; celles qui ont re!(u seu-
lement les produits virulents meurent avec des lesions ren-
fermant Ie coccobacille pesteux :
b) Dans fa plleumonJe pesleuse.
10 Examiner directement les crachats, Faire un Grflm
pour rechercher s'il existe du pneumocoque;
2 0 Ensemencer sur gelose et gelatine a 27 0 pour eviter Ie
developpement du pneumocoque ;
30 Inoculer une parcelle de crachats au cobaye ou au' rat,
mais pas a la souris, a cause de sa grande sensibilite au
pneumocoque.
B)-SUR LE CADAVRE. - Lorsqu'on se trouve en pr~se,nce
d'un cadavre suspect de peste, il convient de faire de& pre-
levements' sur des organes plus au moins accessibles. S'il
PESTP ~19
n'y a pas .d'adenopathic, .on ponctionner,a Ie creur .et ~les

poumons. La rate est tres difficile it atteindre, Ie foie a l'in-
ca,uvenien.t de se putr:efier ,tres vite et de contenir d.es ger~
IDes d:orio,gine intestinale qui peuvent preter.il ,confusion.
Un siro.pIe examen micrQ.scopiq,ue ne fournira donc q,u'un
di~gnos.tic.de prohabilite. Aussi doi.t-on faire it l~ fois des
cultures et des inoculations. Si 1e materiel recueilJ,i eS,t
trQP souille p,our etre ,injecte sous la peau" la friction sur
peau rasee ou l'inoculation au cobaye par scarification
restent les procedes de choix.
L)ia,gnostic par la sero-agglutination. - La sero-

agglutination peut ser,vir soit it identifier ,une cu,lture de
.p~ste. au mpyen (l'un serum ant~pesteux, so,it it rechercher
Ia .propriete a.gghitinante aans Ie serum de sujets atteints,
suspects ou convalescents de peste.
Dans Ie premier cas, on .utilise un serum antipesteux~
type (de cheval, par exemple), tel que celui de l'Institut
Pasteur, dont Ie 'pouvoir agglutinant varie de 1 p. 1.000 it
1 p. 6.000. La culture it jdentifier (provenant de bouillon
g~lose et'agee de 24 a 48'heures) est ¢mulsionnee avec soin
dans une.quantite d'eau physiologique·telle qu.e l'emulsion
se presente parfaitement homogcne, pas·trop e,Paisse, mais
simplement'louche. On verse 0 cc. 1 de ceUe emulsion dans
2 petits tubes it essai contenant chacun 1 centimetre cube
d'eau physiologique. Dans Ie premier, on ajoute 0 cc,.J de
serum de cheval normal. On agite et on porte a l'etuve a
37° pendant 30 minutes. L'agglutination en petits,flocons
visibles'a la'loupe apparait tres nette dans Ie premier tube,
tandis qu'elle est nulle dans Ie second s'il s'agit d'une cul-
ture de b. pesteux.
Lorsqu'on se propose de rechercher Ie pouvoir aggluti-
hant d~un serum de convalescent ou de malade suspect, on
utilise une emulsion homogene de culture de b. pesteux
authentique,preparee comme il a ete dit ci~dessus. On verse
o cc.l dans une serie de petits tubes it essai contenant
1 centimetre cube d'eau salee physiologique et, a chacun de
ces tu~es, on ajoute des proportions variables du serum
a etudfer, par exemple 0 cc. 1, 0 cc. 2, 0 cc. 3, 0 cc. 4 ....
1 centimetre cube, puis respectivement 0 cc. 9, 0 cc. 8,
occ. 7, 0 cc. 6 d'eau physiologiquc pour completer partout
420 MALADIES lNPECTIEUSES. 'rECHNIQUES SpECIALES
les volumes a 2 centimetres cubes. On agite, on porte a l'c-

tuve it 37 0 pendant 30 minutes ct on examine it la loupe.
L'apparition de flocons dans l'un des tubes indique Ie tau x
auquelle serum it etudier se montre aggltltinant. Le scrum
des malades atteints de peste n'agglutine que faiblement,
en gcneral alp. 30u 1 p. 5. Le serum normalmcme it 1 p. 1
n'agglutine pas. L'absence d'agglutinatioll ne permet pas
d'ecarter Ie diagnostic de peste. Seule I'inoculation est
decisive.
Diagnostic par la reaction de deviation du com-

plement. - Dans toutes les formes OU Ie diagnostic clini-
que reste. douteux, la recherche des anticorps pesteux
peut donner des renseignements utiles. lis apparaissent
dans Ie sang au 5· jour de la maladie et y sont encore pr~
sents 9 mois apres la guerison. La reaction de deviation
permet done d'efIectuer Ie diagnostic retrospectif de la
maladie.
Conservation des fragments d'organes cjestines

aux examens bacteriologiques. - Les fragmeI'lts d'or-
ganes sonl immerges, aussitot apres leur prelevement,
dans la solution suivante, prealablcmcnt slCrilisee, qui
conserve la virulence des bacilles et cmpeche la putrefaction
pendant plusieursjours. I
Solution de Broqllet :
Glycerine neutre it 30 0 • 20 cc.
Eau dislillee. . . . 80 ce.
Carbouate de chaux purille. 2 gr.
CHAPITRE XXXVI
DIPHTERIE
A. ,- Coloration. Diagnost!c differentiel. Recherche

\ des porteurs de germes.
Le bacille de [([ebs-Loeffler (Corynebacterium diphterire)

peut etre mis en evidence dans les fausses membranes par
l'examen des frottis et par la culture.
EXAMEN DES FROTTIS. - Etaler un fragment de fausse
membrane sur une lame. Fixer par l'alcool-ether (parties
egales). Colorer par la methode de Gram. Apres lavage a
I'eau, colorer par.de la fuchsine diluee, qui teinte en rouge,
les microbes ne prenant pas Ie Gram.
Le bacille di'phterique se presente en amas de biHonnets.
it bouts arrondis, legerement recourbes, renfles en poire au
en mas sue et colo res en violet fonce.
CULTURE. - Surtout aerohie. Le milieu de choix, pour
l'isolement, est Ie serum de breuf ou Ie serum de cheval
coagules.
On doit ensemencer avec la spatule, par stl'ies paralleles,
sur toute la surface du tube. Ensemencer trois tubes sans
recharger la spatule pour avoir des colonies bien isolees .
.Porter a I'Muve a 37 0 • Le premier examen· peut etre fait
au bout de 18 heures. Ne pas donner de reponse negatiye
avant 48 heures.
Les colonies de b. diphteriques sont rOlldes, it bords nets,
grisatres. Si on les regarde par transparence, Ie centre est
plus sombre que la peripherie. Elles sont generalement
impures. Si 1'0n veut rechercher la virulence du bacille
etudie ou essayer les methodes d'identification du bacille,
il faut purifier les germes en.diluant une parcelle de colo-
nie dans un tube de bouillon et en faisant un isolement sur
serum coagule.
MILIEU DE KLEINE. - Pour I'isolement du baciIle

diphterique, Kleine recommande Ie milieu suivant: 9 par-
ties de serum de cheval sont additionnees d'une partie de
soude a 15 p. 100. Ce melange est abandonne pendant
48 heures it 37°, puis neutralise avec une solution d'acide
chlorhydrique a 2& e/f) et additiorrne de 4 parties de
gelose sterilisee 1/2 heure a 1050 ,
MILIEU D'ENRICHISSEMENT DE PERGOLA. - Premier
temps: mise en elpulsion du materiel preleve, dans un tutle
contenant 1-2 cc. de bouillon sterile .
.Qeuxieme temps : isolemen1. Cinq grasses anses de
ceUe emulsion precedeate (II 011: III gouttes) sont ense-
mencies SUr Ie milieu suivant :
Serum de sang normal de boouf ou cheval. 50 ceo
Sot. de Na'Cr it 08 %. . . . • . • . 50 c!c.
Sol. de leHurile de' pO'tasse iii 2 %, _ . . 10 ceo
Jauna d'reuf. , , , . . , , . • . nO 1
C::oaguler en tubes en bec de flute, par chauffage ft 8a<>·70o

pendant nile heure. .
Orr peut conser-vcr Ie milieu Iiquide ~n tubes au ballons
scelles, sterilises par chauffage au bain-marie a 50°-550
pendant 3 jours cortsecutifs.
Troisieme temps: culture d'enrichissement. On ajoute,
dans Ie tube meme qui a servi f faire l' emulsion, 4-5 cc.
de I'un des milieux suivants :
Miliell I : c'est Ie milieu au serum et' a 1'reuf ci-dessus
conserve liquide.
Miliell II : m~me formnIe moins Ia solution de NaCI,
mais avec une quantite de serum double~
On porte les tubes a l'etuve et on examine apres 15-20
heures. On colore les preparations par la vieille methode
de Neisser.
Si les essais d'isolement ne donnent pas de cultures,
on pratique de nouveaux ensemencements a partir de la
culture d'errrichissement.
MILIEU DE BIFALCO.
Bifalco a modifie Ie milieu pr¢cedent en remplaE;ant Ie
serum par de l'alhumine d'reuf. Celle-ci est diluee dans
trois parties d'eau plus 0,5 ce. de soude a 1/10 et sterilisee
15 minutes a 115°, puis neutralisee si ron desire obtenir
un milieu liquide. Le blanc et Ie jaune des reufs sont re-
DIPHTERtfE 423
cueill~ fI part aseptiquement. On melange 75 ce. d'o'Vul-
buminA" 25 ec. de jaurle! 2 ce. de solution ;1. 1 PI 100 de tel-
lurite I)_e potassiuin sterile. 011 chauffe 2 jours de suite
30 minu.tfs a 50o·55d , puis on coagule, Ie Be jour, it 70o·75o~
Pour preparer Ie milieu liquide, on remplace l'ovalbumilll;l
par la dilution indiquee ci-dessus, sterilisee a I'autoclave,
et I'on fait ,rois chauffages a 50°-550 •
CARACTE\ES DES CULTURES. - pH limites : 6,0-8,3,
pH optimum = 7,3-7,6. En bouillon alcalin, granula-
tions Ie long d,es parois et au fond du tube; Ie milieu reste
clair. Apres 24--36 heui-es, un voile se forme ass.ez souyent
a la surface du houillon.
Sur gelose ordinaire, culture abondante, colonies plus
petites que sur se,rum coagule.
Sur gelatine, cu.lture lente.
Sur pomine de terre, culture presque invisible.
Types de bacillas diphteriques. - On peut distinguer,
au' point de vue de Ja forme, trois varietes de baci~les
diphteriques ~
10 Les bacilles longs, de 5 a 7 p.. de long;
20 Les bacilIes intenMdiaires ou fuoyens, de 3 a 4 p; tie
long;
30 Les baciIles courts, de 1 a2 (Jo.environ.
La plus grande partie des bacilles provenant des angines
diphteriques se classent dans les deux premiers, groupes.
Parmi eux, les bacilles longs representent les races le~ plus
toxiques. Les bacilles courts, rares dans les angines, sont
frequents d4ns les croups.
Faux bacilles diphteriques. Bacille d'Hoffmann. Bacille de
forme courte, ramassee, prenant Ie Gram (forme losan-
gique, en fer de lance ou en coin). Colonies plu~ blanches
d'aspect que les colonies de diphteriques, luisantes, cre-
meuses, a contours mains reguliers. Par transparence,
leur centre n'est pas opaque: elles sont pius pales, et plus
transparentes que les colonies dip}1teriques.
Le Corynebacterium cutis commzme, etudie par Ch. Ni-
colle, a de tres grandes analogies ave-c Ie haciIle diphterique
vrai ! il presente des granulations pol aires colorables par la
technique de Neisser, il fait fermenter Ie_glucose, mais il
fermente aussi Ie saccharose, ce que ne fait pas Ie bacille
diphlerique vrai.
424 MALADIES INFECTIEUSES. TECIINIQUES SPECItLES
COLORATION. - Prend Ie Gram. Le ba'cille diphterique,

en culture sur serum coagule, apres 24-36 heures de dejour it
l'etuve, traite par la methode de Gram originale, n'es\jamais
granuleux. Cet aspect est dli it l'emploi du violet ~enique,
du crista I violet, du bleu de toluidine, ou d'un (tecolorant
trop energique, ou it l'action trop prolongee Je l'alcool
absolu.
Si, dans la methode de Gram, on fait agir l'alcool absolu
pendant 10-15 minutes, les bacilles des cultuj'es agees de
24 heures se decolorent et ne montrent plu!\,que quelques
grains colores dans un corps bacillaire al- peine visible.
Dans Jes memes conditions, Jes faux bacilles diphteriques
de la gorge restent uniformement colores.
Coloration des corpuscules metachromb.tiques; Bleu de
methylene potassique de Loeffler:
Sol. saturee de bleu de methylene dans alcool it 90·. 30 ce.
Solution de potasse it 1/10.000.. . . . . • . • 100 cc.
Colorer quelques minutes, laver it l'eau et traiter rapide-

ment par la liqueur de Gram. Laver. Les 'granulations sont
noir verdatre et les bacilles verdatres.
Coloration au blell de Roux :
Violet dahlia. . 1 gr.
Vert de methyle. 2 gr.
Alcool. 10 gr.
Eau. . . . . 90 gr.
\
Colorer une minute. Laver, passer dans la vesuvine a
1/250. Les granulations sont bleu fonce, Ie corps bacillaire
est jaune.
Methode de Neisser (colonie~ de 24 heures sur serum).
Ble.u de methylene . '.' 1 gr.
Alcool it 90·.. . . . . . 20 cc.
Ajouter apres dissolution:

Ean distilJee. . . . . . 950 cc.
,Acide acetique glacial. . . 50 ce.
Faire agir quelques secondes sur les preparations de

frottis ou de cultures. Layer, puis colorer 3 it 5 secondes
dans solution de, vesuvine-it 0,2 p. 100 (faite dans J'eau
bouillante). Laver it l'eau et examiner.
Pour la coloration ges granules polaires, R.Debre, R. Le-
DIPHTE8IE 425
tllile et L. Sergent preferent employer la methode suivante,
derivee de celle de Neisser.
Fixer it la chl'!leur, colorer avec:
Bleu de methylene. . • 1 gr. ) Dissoudre Ie bleu aans
Alcool a 95°. . • . • 20 cc. \ l'alcool
puis ajonler
Eau distillee • . • • 900 cc. reau ct l'acide.
·Acide acetique cristal!. 50 cc.
Chauffer sur la lame jusqu'a emission de vapeurs, chan-

ger la couleur et chauffer deux fois, puis laisser 5 minutes
en contact. Laver rapidement a l'eau distillee.
Recouvrir Ie frottis avec solution de vesuvine preparee
d'avance comme suit:
Vcsuvine. . . . . . •. 0 gr. 50 Filtrer bouiilant.
Eau distillee bpuillante. • . 250 cc.
Laisser 10 secondes en contact. Laver rapidement a l'eall

distillee.
Methode de Faliere :
Bleu de methylene. 1 gr.
Borax. . . ' . • • 0.5
Eau,di,,\ilh\e.. . . 100 cc.
Alcool absolu.. . . VIII gil.
. Triturer dans un mortier Ie bleu a\'ec l'alcool, ajouter Ie

borax; puis, par petites quantites, l'eau jusqu'a dissolution.
Faire agir ce colorant pendant quelques secondes, laver it
l'eau et colorer Ie. fond avec solution aqueuse de vesuvine a
0,1 p. 100.
MeillOde de Ljubinsky (tres recommandee) :
On fait agir sur la preparation prealablement fixee par
l'alcool absolu la solution suivante (pendant 1/2 it
2 minutes) :
Pyoctanille. . . . . . . . • • . .. 0, 25
Acide acetique, so!. aqneuse a 15 p. 100.. . 100 cc.
Laver it I'eau, puis colorer pendant 30 secondes avec

une solution de vesuvine alp. 1.000 (aqueuse).
Les granulations du bacille diphterique se colorent en
bleu fonce. Elles apparaissent volumineuses·. Les contours
du bacille sont colores en violet fonce.
n n'y a pas de rapport etroit entre la presence de granu-
lations et la virulence; les faux diphteriques peuvent pre-
senter parfois une granulation. Cependimt, Ie plus souvent,
'426 MALADIES INFECTlEUSES-: TECHNIQUES SPECIAL'ES
ils n'eh presentent pas. La valeur de celte reaction, quoi-

qu'importante, est relative.
DIAGNOSTIC DIFFERENTIEL PAR LA OULT,URE potJR DE-
TEll.MINER L' ACTION FERMENTATIVE SUR LES SUCRES. RE'"
CHERCHE DES PORTEURS DE GERMES.
Le bacille dlphterique fait fermenter Ie glucose et Ie
levulose, jamais Ie saccharose ni la mannite. Les bacilles
psel1do-~iplHeriques ne font fermenter ni Ie glucose, ni Ie
s:iccharose, tii la mannite. 11 est comlbbde de se servir des
milieux differentiels suivants :
Milietz de Thiel:
Peptone
Nutrose
Glucose
l !ill 1 gr.
NaGI • 05
S.o!. de tournesol. 5 ce.
Eau. . ..• 100
Repartir en tubes qu'on ensemence avec chaque colonie

suspecte, isolee a retat pur. S'il ya fermentation, 1e tour~
nesol rougit, la nutrose se precipite et Ie milieu se coa-
gule.
Miliell de Rothe . ..:... Melanger 90 parties de bouillon-
serum (4. parties de serum de breqf et 1 de bouillon neutre)
avec 10 parties de. solution de tournesol contenant 1 p. 10
du sucre a etudier et prealablement sterilisee.
Ce milieu, en tubes ou coule en boites de Petri, est coa-
gule par la chaleur, comme Ie serum del hamf simple. II est
particulierement commode pour la'recherche des PQrteurs
de germes.
Le bacille diphterique fait virer au rouge les tubes ens,e-
mences ('on tenant glucose et levulose. II ne fait pas virer
ceux qui renferment du saccharose ou de la mannite.
Miliell de Drigalski et Bierasl (recommande).
A 600 centimetres cubes de serum de bomf, on ajoute
174 centimetres cubes de bouillon contenant 1 p. 100 de
glucose, et 26 centimettes cubes de bile de bomf pure prea-
lahlement filtree sut papier Chardin.
Ce melange est verse, a raison de 16 centimetres cubes
environ, dans des bOittlS de Petri et cdagule vers 90 a 95°,
a plat, puis sterilise, trois jours de suite pendant une lieure
a 800, comme Ie s(lrl,lm gelatinise orainaire.
On froth:! directement, a 1a surface de ce mil,ieu, les tam~
DIPHTERIE 4'27
pons d'ouate qui ont servi a faire les prelevements d'exsu-

dat pharynge : les colonies de bacilles diphteriques y sont
deja-tres apparentes apres 16 heures a la temperature de 37 0 •
L. Martin et L'oiseuzl ont montre que la culture en milieu
de Veillon (gelose glucosee en tubes droits) permet de dis~
tinguer a coup sur -les vrais bacilles diphteriques des faux.
Les vrais diphteriques se developpent uniformement dans
toute la masse de gelose sucree, suI' todtela hauteur du tube,
sans etalement a -130 surface, tandis que les faux diphte"
riques, au contraire, se developpent abondamment a 1'air
Iibre et envahissent toute la surfa~e du milieu en formant
une couche cremeuse, epaisse.
Miliell de Cos/at J. Troisier et Dauuergne. - Le procede
de ces auteurs permet d'isoler et d'identifier Ie germe.
n est base sur les proprietes fermentatives que Ie bacille
diphterique exerce sur Ie glucose, alors que les faux
diphteriques sont sans action. Le milieu est Ie suivant :
Serum de cheval. . . . • . • . . • . . 100 cc.
Sol. de glucose" 30 % sterilisee. . . • . . . 10 cc.
Teinture de tournesol concentree et sterilisee. • XXX gu.
Sol. d'acide sulfurique ,,, 10 gr. p.1.000, sh"rilisee. 3 cc.
L'acide sulfurique a pour effet de saturer partiellement

1'alcalinite naturelle du serum. L'addition d'acide et de
glucose ne change rien aux proprietes eleotives du set-urn
pour la cultute du bacille diphterique.
Tous ces produits, apres melange, sont repartis en boites
de Petri a fond regulierement plat, a raison de 10 a 12 cen-
timetres cubes par bohe. On coagule Ie milieu dans une
etuve a serum ou dans l'autoclave, en elevant la tem-
perature Ientement et progressivement jusqu'aux environs
de 80". On I'y maintient pendant 1 heme 15. On rejette
ensuite l' eau de condensation; les boites peuvent etre uti-
lisees immediatement.
Pour les ensemencer, on ftoUe une anse de platine trian-
gulaire contre Ie coton ayant servi au prelevement. On
essuie l'anse sur to ute la surface du milieu, par segmeIlts
paralleles, sans la recharger.
Les boites ainsi ensemencees sont placees a I'etuvc a 37°,
Ie couvercle en dessous.
Apres 24 heures, les colonies du bacille diphterique ont
les dimensions d'une .tete d'epingle.; elles sont rouges au
~28 MALADIES INFECTIEUSEi:>. TECHNIQUES SPECIALES
centre, roses a la peripherie. Vues par transparence a l'aide

d'une loupe, eUes donnent l'image de travees so us la forme
d'une petite croix. Legerement glQbuleuses, de consistance
plutot ferme, eUes s'enfoncent dans le milieu a la fa90n de
clous de tapissier.
Les colonies des baciUes diphterimorphes sont opaques,
blanc ·grisatre et plus etalees.
Quelques heures plus tard, les colonies du bacille diphte-
rique restees circulaires ressemblent a une pustule vario-
Hque, tandis que les colonies des baciUes diphterimorphes
prennent une forme irreguliere, a bords denteIes.
Cet isolement doit etre complete par l'examen des colo-
nies rouges, les seules parmi lesquelles peut se trouver Ie
bacille diphterique.
..
B. - Milieu de culture pour l'obtention de la tQxine
diphterique.
Prendre 1 kilogramme de viande de veau qu'on passe au

hache-viande et qu'on melange a 2 litres d'eau. Laisser
macerer pendant 20 a 24 heures a 36° au bain-marie (pour
supprimer Ie glycogene, par fermentation).
Filtrer sur un linge, ajouter parties egales de bouillon de
peptone L. Martin et 5 grammes de chic/rure de sodium.
SteriliseI' pendant 45 minutes it 1200 • Filtrer. Neutrali-
seI' exactement au tournesol. Alcaliniser ensuite en ajou-
tant 7 centimetres, cubes pal' litre de solution de soude nor-
male a 40 p. 100.
SteriliseI' a 1200 pendant 20 minutes. Filtrer et repartir
dans de grands ballons a fond plat, en couche ne depassant
pas 3 centimetres cubes d'epaisseur, pour assurer une
large aeration en surface. Porter a l'etuve a 37 0 apres ense:
mencement. Le bacille diphterique doit se developper en
voile sur ce milieu. On filtre les cultures a travers les bou-
gies Chamberland (marque F), du septieme au neuvieme
jour.
Pour entretenir les proprietes toxigenes du bacille diphte-
rique, il faut Ie ree'nsemencer dans ce bouillon en tubes a
essai tOllS les dellX jOllrs.
DIPHTERlE 429
Le bacille toxigt'me de ehoix est Ie bacille dit amh'icain
(isole par W. Parle it New-York), qu'on utilise dans presque
tous les Instituts serotherapiques.
II est toujours prudent d'en conserver quelques semences
sur serum coagule, en tubes scelles, a Ia glaciere.
Pour rechercher la virulence des diverses souches de
bacilles diphteriques, il cst commode d'employer Ie proce.de
de Zingher par injection intracutanee chez Ie cohaye: On
epile la paroi ahdominale et on injectc, a la dose de 0 cc. 15,
une emulsion de cuI Lure de 24 heures dans l'e.paisseur de la
peau. U ne inflammation necrotique apparait dans les 48 it
72 heures, s'il s'agit dOune race microbienne virulente .
......
C. - R.echerche de l'immunite antidiphterique.
Reaction de Schick:
Se fait au moyen de la reaction de Sahick: injection
intradermique d'une dose tres faible de toxine diphte-
nque.
Chez les sujets dont les humeurs c9ntiennent de l'anti-
toxine, on n'observe aucnne reaction. Celle-ci se produit
quand il y a absence d'antitoxine, 24 heures apres l'injec-
tion; on consfate un halo rouge indure qui augmente jus-
qu'a la 48e heure, puis diminue et disparait au cours
de Ia semaine suivante.
Chez l'homme .et chez Ie cobaye, on injecte dans Ie der,me,
sous Ie volume de un dixieme de centimetre cube, une
quantite de toxine diphterique egale au cinquantieme de la
dose mortelle en quatre jours pour un cobaye de 250
grammes. 11 faut avoir une toxine titree. Si la toxine tue par
exemple au 1/700, Ie 1/50 de la dose mortelle est 1/35.000.
II faut donc ajouter 1/10 de centimetre cube d'une solu-
tion a 1/3.500. Faire la dilution avec de l'eau physiologique
sterile dans des verres a pied steriles. Prendre, par exem-
pIe, trois verres, dans Iesquels on met respectivement
9 centimetres cubes dans Ie premier, 9 dans Ie second et
34 dans Ie dernier. MeUre dans Ie premier 1 centimetre
cube de tm~ine pure (dilution au 1/10). Reporter 1 centi-
metre cube du premier dans Ie second (1/100) et 1 centi-
metre cube du second dans Ie troisieme (1/3.500).
430 MALADIES INFECTIEUSES, TECHNIQUES SPEciALES
E. - Anatoxine diphterique. (G. Ramon.)
La toxine diphterique additionnee de 3 a 4 p. 1.000 de for-

mol et abandon nee a Ia temperature de l'etuve (37-.38°) perd
peu a peu son pouvoir nocif mais conserve son pouvoir flo-
culant. Dne toxine tres active, tuant par exemple a la dose
de 1/800 de centimetre cube un cobaye de 300 grammes
en 4 jours, se transforme ainsi finalement en un produit flo-
culable en presence de la meme quantite d'antitoxine que
la toxine non modifiee, avec seuIement un retard plus au
moins grand dans l'apparition de la noculation. Mais'elle ne
provoque plus, meme a Ia dose de 6 centimetres cubes, ni
lesi.ons locales, ni symptomes d'intoxication precoces ou
tardifs chez Ie cobaye. C'est ce produit antigene, atoxique,
que Ramon a propose ~'appeler anatoxine dipht~rique.
L'anatoxine diphteriql;le injectee a la dose de 1 centi-
metre cube, intmunise Ie cobaye contre 50 et 100 doses mor-
teUes ; deux injections successives de 1 centimetre cube
d'anat,oxine Ie protegent contre plusieurs milliers de doses
mortcHes. EIle convient parfaitement a l'hyperimmunisa-
tion des chevaux en ,,"ue de Ia production de serum anti·
toxique. Apres 2 injections de 1 centimetre cube, puis,de
3 centimetres cubes a 7 jours d'intervallt.\l centimetre cube
de serum est deja capable de neut'ral.i~er 600 doses mor-
telles pout Ie cobaye. En repetant ensuite les injections
d'anatoxine a doses croissantes, on const:.tte une augmenta-
tion progressive de la' teneur du seruzp. en antitoxine. La
production d'antitoxine est la meme qu'avec des quantites
equivalentes de toxine, mail; eUe s'effcctue en un temps
beaucoup plus cO';1rt (3a 4 semaines) et avec un moinsgrand
dommage pour les animaux, puisqu'il s'agit d'une substance
depourvue de to ute toxicite.
L'anatoxine de Ramon est aujourd'hui employee pour vae-
eillcr aetivement lcs enfarits et aussi les adulles exposes a eon-
(raeter la dl'phtb·ie.
CHAPITRE XXXVI
TUBERCULOSE. - PSEUDOTUBERCULOSES. - LEpRE,

- ENTBRiTE HYPERTROPHIANTE DES BOVIDBS. -
MORVE.
I. - TUBERCULOSE.
A. - Coloration du bacille tuberculeux dans les pro.

duits tuberculeux (crachats, pus, etc ... ).
a) Methode de Ziehl-Nielsen (methode de choix). - Les
preparations de [rouis ou de crachats, fixees par la cha-
leur, spnt immergees dans un bain de fuchsine de Ziehl con-
lenu dans un tube large, a recouvrement, de Barrel, au da.ns
tout autre recipient qu'on porte a l'etuve .,30 37° pendant
deu~ heures. Ou bien, 1?i I' on est presse, on verse directe-
ment sur la lame quelques gouttes de colorant filtre et on
chauffe sur la veiIIeuse d'un bec Bunsen au au-dessus de la
Hamme d'une lampe a alcool, jusqu'3o ce que Ie liquide emetie
des vapeUliS, et ce, pendant au mains deux minutes.
On lave un instant a l'eau [roide pour enlever l'exoes de
~ouleur et on verse sur la lame une dilution d'acide azo-
.ique (1 partie d'acide pour 3 parties d'e.au distillee), ou bien
Upe dilution d'acide acetique au tiers dans l'alcool a 95°.
On laisse en contact 20 secondes ; on lave 3o' l'alcool a 60°
jusqu'a ce que la preparation soit bien decoloree. On Ia
pass.e a l'eau.
Oh recolore pendant 30 secondes avec Ie bleu phenique
de Kuhne. On lave finalement a grande eau sous Ie robinet
pendant 2 ou 3 secondes ; on seche ; on laisse tomber sur la
preparation une goutte d'huile a immersion et on examine
directe\Dent, sans lamelle. .
Si la lame doit etre conservee,. on la lave au xylol apres
l'exameJ.l. pour enlever l'huile, et on seche. Elle peut alors
etre repri~e ulterieurement et recoloree s'il est necessaire,
car a la longue les bacilles se decolorent.
-432 MALADIES INFECTIEUSES, TECHNIQUES SPECIALES
Les bacilles tuberculeux se dCiachcnt nettement colores

en rouge sur fond bleu.
Au lieu d'employer l'acide azotique au quart ou I'alcool
acetique comme agent dccolorant apres l'action de la
fuchsine pheniquee, on peut se servir d'une solution de
chlorhydrate d'aniline it 2 p. 100 dans l'eau. Ce reactif est
beaucoup moins brutal, moins nuisible aux elements histo-
logiqlles qui accompagnent Ie bacille tuberculeux. On Ie
fait agir pendant environ 30 secondes, puis on acheve de
decolorer par l'alcool it 95 0 '; on lave it l'eau et on reeolore
au bleu de methyUme comme il a ete d.it ci-dessus.
b) Methode de von Be.legh. - Verser sur Ie frottis que~
ques gouttes d'aeide azotique it 15 p. 100 et chauffer quel-
ques instants.
Laver et. colorer par un melange it parties egales de bleu
de methylene alcalin de Lreffler et de fuchsine pheniquee
de Ziehl. Chauffer de nouveau 1 it 2 minutes.
Decolorer par l'alcool it 60 0 et recolorer Ie fond pendant 1
it 2 minutes par, une solution aqueuse saturee de vert mala-
chite. Laver. Les bacilles apparaissent rouges et leurs gra-
nulations prennent une teinte bleu sombre sur fond vert.
c) Methode d'Herman. - Colorer it chaud par un melange
de soI'ution it 3 p. 100 de crystar-violet dans l'alcool absolu
et de trois parties de solution aqueusEi it 1 p. 100 de carbo-
nate d'ammoniaque. I
Decolorer2 it 5 minutes dans l'acide azotique it 10 p. 100;
laver it l'alcool it 90 0 jusqu'it coloration bleu pale; reeo!
lorer Ie fond soi t avec la vesuvine, soit avec la safranin~ E;h
solution aqueuse it 1 p. 100. I
Les bacilles sont bleu intense, Ie fond rouge ou brun .sui-
vant Ie colorant de fond employe.
d) Methode de Much. - (Pour les granulations gramo-
philes.) Colorer 24 it 48 heurcs par la solution suivaqie :
Sol. alcool. concenlree de "iolet de Inelhyle BN, • . 10' cc.
Sol. d'acide phenique it :.I p. 100. . . . . • • . 100 cc
/
Traiter 12 minutes par la solution iodo -ioduree d~ Gram-
Lugol. puis ~ans laver, 1 minuteparunesolulion it/5-p. 100
d'acide azotique et 10 secondes par une solution it 3 p. 100
d'acide chlorhydrique. I /
"
TUBERCrJtOSE 433
Lavel:" a llalcool-acetone (parties egales) jusqu'a ce que

toute Ia conleur soit eliminee.
Recolorer avec une solution de.fuchsine dilnee ou pAr une
solutioIl aqueus'e de safranine alp. 100, 5 a 10 secondes.
Laver a l'eau et seeher.
e) Methode de Fontes (pour les granulations gramophiles).
Colorer 2 minutes a chaud par la fuchsine de Ziehl. Laver a
reau. Colorer au, crystal-violet phenique. 2 minutes. Cou-
vrir la lame (sans laver) de solution iodo-ioduree de Gram-
Lugol qu'on verse et renouveIIe 3 fois.
Traiter par l'alcool·acetone jusqu'a decoloration com-
plete. Laver a .reau. Recolorer rapidement au bleu de
methylene phenique. Laver a l'eau, secher; examiner dans
l'huile a immersion. Le bacilJe, dans les cultures commj:)
dans les crachats, parait alors constitue de deux parties:
une enveloppe protoplasmique teinte CI} rouge et des granu-
lations colorees' en. violet fonce, en nombre d'autant plus
grand que les hacilles sont plus ages. Les jeunes bacilles ne
presentent ordinairement qu'une seule granulation chroma-
tophile centrale.
f) Methode de coloration des bacilles de Koch el de leurs
granulations (Blanco) :
1d Fixer la lame par la chaleur;
2 0 Colorer aU Ziehl pendant 5 a 10 minutes en chauffant
setllement une fois jnsqu'a emission de vapent's ;
3 0 Decolorer avec alcool absoln contenallt 3 % d'RCI;
40 Bien laver a l'eau;
50 Differencier pendant 10 minutes avec nne solution
d'ol'ange I obtenue en ajontant 1 centimetre cube d'une solu-
tion aqueuse satur\~e de ce colorant a 99 centimetres cubes
d'eau ;
60 Incliner la lame et colorer seulement la moitie infe-
rieure de III preparation avec une solution faible de blett de
methylene pour teindte Ie fond.
B. - Coloration des coupes.
Fi!.er les pieces a l'lllcool ou all formD]. Trniter 2 it

MICROB!OLOGJE 28
434 MALADIE61NFEGTIEUSES. TEGHNIQUESSPEGIALES
.5 minutes par l'hematoxyline pour cororer Ie noyau des

ceIIules. Colorer au Ziehl deux heures a 370, ou 24 heures
,a la temperature du·laboratoire. Decolorer au chlorhydrate
d'aniline, puis a l'alcool a 95 0 ; laver a l'eau, colorer Ie fond
en jaune par I'acide picrique (solution alcoolique saturee).
'C. - Homogeneisation des crachats ou produits tuber-

culeux pour Ia recherche et la culture des bacilles.
a) Procede a la sonde. - Met/lOde de Petro!. - Les cra-

chats sont recueillis dans un flacon sterile, a large gou-
'lot, ferme par un bouchon de caoutchouc. On les addi-
'tionne en suite de solution sterile de soude a 4 p. 100, par-
ties egales si les crachats sont muqueux et fluides; ou 3 ou
'4 parties de solution sodique pour une partie de crachats'
s'ils sont epais et purulents. On agite' vigoureusement et
on porte a l'etuve. Apres nne demi-heure on agite et on
'laisse de nouveau Ie melange a l'etuve pendant 30 minutes.
On centrifuge pendant un quart d'heure a grande vitesse,
puis on Mcante Ie liquide. Si I'operation.a ete bien con-
duite, Ie sediment doit se presenter sons I'aspect d'une
pate homogene, exempte de grumeaux. Pour rechercher les
bacilles de Koch qu'il contient, on I'emnlsionne dans une
petite quantite d'eau physiologique et onl I'etale sur des
lames ,de verre prealablement lavees a I'acide chlorhydrique
et sechees. On fixe par Ie blanc d'reuf de Deniges et on
colore ensuite suivant la methode de Ziehl-Nielsen.
On peut egalement ensemence~, sur Ie milieu special de
.Petrof dont il sera question plus loin, Ie culot de centrifu-
gation des crachats traites par la soude. Pour cela, apres
avoir decante la liqueur sodique comme il vient d'etre indi-
que, on emulsionne Ie sediment dans 4 a 5 gouttes <Htcide
chlorhydrique a 4 p, 100. La reaction doit etreJegerement
acide; on la veri fie en prelevant avec une fine pipette ste-
rile une gouttelette de l'emulsion qu'on depose sur du papier
de tournesoI bIeu. II ne reste plus qu'a ensemencer Ie sedi-
ment sur trois au quatre tubes de milieu special a I'reuf au
moyen d'une pipette sterile et a porter a I'etuve a 37-38°,
les tubes ensemences, coiffes d'un capuchon de cao.utchouc.
TUBERCULOSE 435
Suivant la richesse des crachats en bacilles, la culture appa-
rait du ge au 15· jour so us l'aspect de petites colonies iso-
lees au conflu{mtes, blanc jauniHre, qui s'eteudent peu it peu
pour former une membrane presque continue, seche, mame-
lonnee.
• b) Procede a l'antiformine. - On melange dans un fla-
con 20 it 30 centimetres cubes de crachats au de pus, ou de
feces avec la meme quantite d'une dilution" d'antiformine
dans l' eau a 15 p. 100. On bouche Ie flacon et on agite forte-
ment pendant quelques minutes. On laisse en contact 2 a ,5
heures. On verse dans un ou plusieurs tubes centrifugeurs
steriles. On centrifuge 10 minutes et on separe Ie culot pa r
decantation, pour l'etaler sur lames.
Pour eviter la mousse, on ajoute quelques centimetres
cubes d'alcool ou quelques gouttes d'ether it l'antiforminc
avant d'agiter. \
A defaut d'antiformine,on peut employer reau de Javel
ou 1a.1iqueur de Labarraque pure. II faut alors prolonger
Ie contact de 1 a 2 heures.
c) Procede de Bezanr;otl eL Philibert. - A 5 centimetres
cubes de crachats, on ajoute 25 centimetres cubes d'eau dis-
tillee et V gouttes de lessive de soude it 0,2 p. 100 (D : 1. 33),
soit une goutte par centimetre cube de crachats. On chauffe .
doucemeul.ce. melange it 60 0 dans une capsule de porce-
laine en agitant constamment; on ajoute de nouveau 25 cen-
timetres cubes d'eau distillee et on chauffe pendant 10 mi-
nutes. On laisse refroidir et on determine la den site du me-
lange au moyen d 'un densimetre gradue de 950 it 1.100. Si
cette densite depasse 1.004, on ajoute un peu d'alcool it 500
jusqu'a ce qu'elle soit retombee a 999 ou 1.000.
On preleve de quoi garnir 2 ou 4 tubes it centrifuger et on
centrifuge pendant 3/4 d'heure ou pendant une heure. On
decante Ie liquiqe et on elale Ie eulot sur plusieurs lames
de verre qu'on fixe et colore par la methode de Ziehl-Niel-
sen.
d)' Procede de Ronchese.
10 TECHNIQUE EXTEMPORANEE SANS CENTRIFUGATION.-
Verser les crachats dans un verre it pied et ajouter, par
petites portions, de l'alcool sode, en agitant avec une ba-
436 MALADIES INFECTIElJSES. TECHNIQUES SPECIALES
gueHe oe verre sterile. S'arreter des que Ie liquide devient

filanL (Pour un meme volume de crachats, Ia quantite
necessaire d'alcool sode est de 2 it 3 volumes avec les cra-
chats surtout muqueux et de 43. 8 volumes avecles crachats
purulents. )
Avec une pipette a extremite effiMe, verser de l'acetone
avec precaution a la surface des crachats fluidifies sans que
les deux liquides se melangent. Puis, aussitOt, remplir de
nouveau d'acetone Ia pipette; Ia boucher au doigt et Ia
plonger au fond du verre a pied; Iaisser couler lentement
l'acetone qui traverse Ies era chats et vient se rassembler it
leur surface, entralnant les badlles de Koch s'il s'en
trouve.
On constate alors qu'une pellicule s'est formee it Ia
limite .des crachats et de l'acetonc. CeUe pellicule a empri-
sonne les microbes. La cueillir avec l'anse de platine. L'e-
goutter contre la paroi du verre, puis proceder a l'etale-
ment.
Pour cela, mettre sur une lame de verre une petite
goutte d'alcool soM et y deposer la pellicule qui,a son con-
ta~t" se ramollit. Triturer avec un fil de platine jusqu'a
evaporation de l'aleool et faire un etalage epais. Seeher,
fixer par quelques gouttes d'acetooe, puis par passage rapide
dans la Gam me.
2 0 TECliNIQUE PAR CENTRIFUGATION\ - Verser dans un
verre a pied: 1 volume de cracha\s et de 5 a 15 volumes
d'alcool sode (selon la consistance des crachats). Agiter
jusqu'a liquefaction complete des crachats. Ajouter de
l'acetone (1/10 environ du volume total), Melanger et verser
Ie liquide dans un tube de centrifugeur. Centrifuget, puis
titaler Ie culot.
e) Procede de Papacostas el Gate al'eau de Javel. - Melan-

ger dans Ie tube a centrifugation 1/3 de crachats, l/p d'eau
de Javel et 1/3 d'alcool. Agiter, puis centrifugar pendant 3
minutes. Apres avoir decante Ie liquide qui surnage, il est
recommande, pour se debarrasser de l' eau de Javel adherente
au culot et susceptible de gener la fixation d_e l'etalement,
de laver rapideruent a l'eau physiologique sans aglter Ie
tuhe.
Le culot est ensuite elale sur lame.
TUBERCUL6sE 437
f) Concentration des bacilles tuberculeux dans les crachats
fluidities a l' etuve (Bezau90n, Mathieu et Philiberl).
On verse 5 it 10 centimetres cubes de crachats suspects
dans un tube a essai que l'on porte a l'etuve a 37° Les cra-
chats se fluidifient peu a peu pendant que les bacilles se
deposent dans Ie fond du tube, La concentration atteint son
maximum Ju 40 au 7' jour. On decante alors Ie liquide, on
fixe par la chaleur eton colore, par les methodes habituelles,
Ie culot etale sur des lames de verre. On peut egalement
centrifuger to ute la masse, decanter et etaler Ie culot.
4 •
D. - lIomogeneisation du sang pour Ia recherche des

bacilles.
On cxtrait it la seringue, d'une vcine cIu pli du bras,
10 centimetres cubes dOe sang qu' on projctte aussitot dans un
tube con tenant 10 centimetres cubes de solution sterile de
citrate de soude a 2 p. 100 dans l'eau salee physiologique.
On ferme Ie tube avec un bouchon de caoutchouc sterile;
on Ie retourne 3 ou 4 fois et on Ie porte a la glaciere pen-
dant 24 heures. On decante ensuite Ie liquide avec precau-
tion et on recueiIIe Ie sediment it la pipette. Ce sediment
est etale en couche epaisse sur lames de verre, seche a
I'etuve, puis debarrasse des hematies par immersion dans
l'eau distillee sterile, et colere pour examen au microscope.
On peut aussi Ie laquer par l'eau distilIee, Ie centrifuger et
inoculcr Ie depOt a des animaux.
\,
E. - Milieux de culture pour Ie bacille tuberculeux
(pH: 6,8 a 7,2).
'a) Serum de bamf glycerine a 4. p. 100 et coagule par

ohaufIage a 720 en position inclinee ; la culture doit etre
faite dans une etuve hi en reglee it la temperatute constante
de3S".
b) Pomme de terJ'e glyceriuee a4. ou 5 p. 100. - Dans des
tubes de Roux, it etranglemen~. On remplit Ie tube, jusqu'a
438 MALADIES INFECTIEUSE6. TECHNIQUES SPECIALES
la partie etranglee: avec de l'eau glycerinee ou avec du bouil-

lon glycerine, de telle sorte que l'extremite de la tranche de
pomme de terre touche au liquide.
c) Bouillon ol'dinaire Zegerement alcalill et glycerine d 40u
5 p. 100. Surce milieu, Ie bacille tuberculeux doit etreense-
mence avec precaution, en surface, au moyen d'un fragment
de voile preleve sur une autre culture jeune. Si la semence
est noyee dans Ie liquide, fa culture ne se devefoppe pas.
d) Bouillon de pomme de terre ( Vaudremer). -'()n fait bouil-
lir 500 grammes de pommes de terre pelees dans un litre
d'eau. On filtre. On ajoute de la soude jusqu'it reaction neu'
tre au tournesol et on sterilise it 1200 pendant une demi·
heure. Les hacilles de Koch ensemences sur ce milieu non
additionne de glycerine forment un voile assez rapidement.
lIs sont plus longs que les bacilles tuberculeux cultives sur
les milieux ordinaires; leur acido-resistance est faible
surtout quand ils proviennent de la peripherie du voile .
. e) Milieu d ['(Eu!, de Dorset. - On lave des <l!ufs de poule a
reau bouillie et on les brosse soigneusement. On les immerge
pendant quelques minutes dans une solution pheniquee it
5 p. 100. On les saisit entre deux fe~illets de papier bU"\Tard
sterile. On flambe leurs deux poles et, avec une pince pointue,
flambee, on pratique sur chacun de ces pqles (au-dessus de
la flamme de la veilleuse d'un bec Bunsen', une ouverture.
Au moyen d'un tube de caoutchouc sterile portant un fiItre
it coton sterilise, on' souffle par l' ou verture su perieure, de telle
sorte que Ie contenu de l' amf tombe de l' ouverture inferieure
dans un matras d'Erlenmeyer sterile et prealablement tare.
On introduit en suite, dans Ie matras, une quantite d'eau ste-
rile correspondant it 10 p. 100 du poids d'<l!uf et on agite
pour assurer Ie melangehomogene du jaune, du blanc et de
l'eau, sans faire de huIles d'air. On jette ensuite Ie tout dans
un entonnoir portant une tarlatane sterile (sous un couver-
cle en papier buvard sterile) et on repartit aseptiquement
la masse filtree dans des tubes a essai. On coagule a 70 0
pendant 2 heures, en position incIinee, et on p~rte Ie tube
it l'etuve a 37 0 pendant trois jours, afin de rejeter ceux qui
seraient contamines. On les ohture ensuite avec des capu-
chons de caoutchouc et onles conserve en position verticale
TUBERCULOSE 439
jusqu'au moment de leur emploi. Ce milieu convient a l'iso-

lement des bacilles tuberculellx d'origine bovine. Le bacille
humain n'y pousse que tres faiblement.
f) Milieu a l' re.ur glycerine, de Lubenau. - Meme prepara-
tion en remplayant reau de dilution de l'reuf par 30 p. 100
(du poids decelui-ci) de bouillon alcalinglycerine a5 p. 100.
Ce milieu permet la culture du bacille d'ori_gine humaine.
g) Milieu a ['(£llt, de Petrof. - A 250 grammes de viande
fraiche de veau, hachee au hachoir sterile, on ajoute 212
grammes d'eau distillee et 37 grammes 5 de glycerine ste-
rile. On place Ie tout a la glaciere pendant une nuit et on
filtre sur gaze sterile.
On desinfecte en suite les reufs frais en les immergeant
pendant 15 minutes dans I'alcool a 70 0 et on les casse, en les
manipulant avec des gants de caoutchouc steriles. Apres
avoir melange intimement blancs et jaunes et filtre sur gaze
sterile, on ajoute 200 centimetres cubes de filtrat de viande a
400 centimetres cubes de fiItrat d'reuf. et on additionne ce
milieu de solution alcoolique de violet de gentiane a 1 pour
100 d'alcool a 950 , dans la proportion de 1 centimetre
cube de solution colorante pour 100 centimetres cubes de
milieu. Melanger de nouveau et repartir en tubes.
Faire coaguler ensuite en position inclinee en chauffant it
85· pendant 30 minutes le premier jour
750 - 30 - Ie deuxieme jour
750 30 Ie troisieme jour
Le milieu obtenu presente une belle coloration violette,

homogt'me, qui permet d'observer facilement les colonies
blanches ou jaunatres du bacille tuberculeux. II convient
partic1,llierement it l'isolement de ce microbe a partir des
crachats prealablement traites par la soude. Pour les repi-
quages ulterieurs, on utilise Ie meme milieu non additionne
de violet.
h) Milieu de Heyden-Hesse:
Nutrose de Heyden I • 5 gr.
Ean. • •.•.... 50 cc.
1. Le nutl'ose de Heyden pl'ovient de I" rubl'ique Heyden, a Rnd.beuI, pres Dresd •.

On peut lui substituer In Somatose au Ie Tropan.
440 MALADIES INFEC'1'1EUSES. 'J'ECHNIQUES SPECIALES
apres dissolntiop, ajouter :

Chlprure de SQdi\lnl. • • 5 gr.
Glycerine.. • . . • . 30 gr.
Gelose.. . . • . . . . . . 10 a 20 gr.
Solution decinormale de &Pude .• Q cc.
Eau distillee. • . . . . . '. 950 ce.
Porter 15 minutes a l'autoclave a 1000, filtrer, steriliser a

1150 en tubes contenunt chacun la quantite de milieu neces-
saire pour nne boite de Petri.
(Convient plus particulierement a l'isolement initial des
hacilles tuberculeux.)
i) Pomme de terre biliee (CalmetleetGuerill). ~ On immerge
les tranches de pommes de terre coupees ? l'emporte-piece
dans de la bile de boouf pure, filtree et-ste'rilisee, a laquelle on
a lljollte 5 p. 100 de glycerine. On porte Ie tout au bain-
made a 750 pendant 3 heures. Les pommes de terre sont
ensuite reparties en tubes de Roux qu'on remplit jusqu'iI
l'etranglement ~\Vec de la bile pure glycerinee a 5 p. 100. On
sterilise 30 minutes it 120".
Sur ce milieu, Ie bacille tuberculeux donne des cultures
tres epaisses, abondantes, lisses et luisantes, de couleur
c?fe au Iait et ressemblant aux cultures de bacilles morveux.
j) Milieux mineraux. -1° Milieu.-de L. Massol el M. Bre-
ton:
Eau distillee. • • • . \. 1 litre
Carbonate de soude. 1 gr.
Sulfate ferre-ux. . . o gr. o~o
Sulfate de magnesie. o gr. Q50
Pho~phate de potasse. 1 gr.
Cblorure dll sodium. I)gr. 0
Gluco&e. ., . 10 gr.
Glycerine. . . . 40 gr.
A~paragine. • • 2 Sr.
20 Milieu de Sauton.
Asparagine. 4 gr.
Glycerine. 60 gr.
Acide citrique. •• 2 gr.
Phosphate bipolassique. o gr. 5
Sul£ate de magnesie. . o gr. 5
Citrate de fer ammoniacal. o gr. 05
Ean. • ...•.•. 1;000 ce.
Neutraliser avec quelques gouttes d'ammoniaque pur

jusqu'apH = 7,2. Repartir en halloo ot steriliser.
TUBERCUL@.Sk 44i·
Apres 20 jours de culture, Ie poids de bacilles "Secs obtenu
sur ce milieu est de 1 gramme environ iJour 100 centimetres
cubes de liquide, tan dis que sur Ie bouillon glycerine il
n'est que de 0 gr. 65.
30 Milieu d'i)..rmand Delille, Maye~, .Schaeffer e,t Terl"oine.
Eau . . • . . • • . • . 200 gr.
Chlol'ure de sodium. 1 gr. 25
Phosphate monopotassique. ~ 1 gr. 25
Citrate de ·maguesie. . . . o gr. 60
Glucose.. . • . . • . . 1 gr.
Glycerine • . . . • . • 10 gr.
Glycocolle.. . . . . . . 1 gr.
Arginine. . . . . . . . o gr. 50
Solution de soude a 1 pour 100. 1 cc. apres neutrali-
sation prealable.
En douze jQurs, les bacilles fournissent sur ce milieu un

voile complet, epais, gaufre, grimpant Ie long des parois qu
vase.
F. - Culture des bacilies contenus dans les crachats.

Le milieu a l'reufde Petrof etla gelose nutrosee de Heyden,
ci-dessus indiques, sont tres favorables a l'isolement initial
des bacilles 'tuberculeux contenus dans les crachats' ou dans
les organes.
La methode de UhLenhul it l'antiformine est egalement tres
reeommandable (mem'e chap., c). On ensemence Ie edlot
de cenlrifugation sur plusieurs tubes de serum gelatinise
glycerine, sur pommes de terre biliees glyeerinees et sur
les milieux differentiels a l'retif, de Dorset, de Lubenall, de
Petrofou de Besredka. On porte a l'etuve a 37-58°.
G. - Tuberculine.
a) Preparation de La tuberculine brute de Koch. - On ste-
rilise a la vapeur a100°, pendant une herire,des cultures de
bacilles tuberculeux en bouillon gly~erine a 4 p. 100, agees
de 6 semai-nes. On les evapore ensuite au bain-marie dans
des capsules de porcelaine jusqu'a reduction au 1/10 et on
filtre Ie liquide concentre a travers un double filtre de pa-

pier epais (papier Chardin) qui.retient la plus grande partie
des corps microbiens Une do~e de Occ 1 a 0 cc. 3 de ceUe
tuberculine doit tuer en 6 a 24 heures les cobayes infectes
depuis 4 semaines par l'injection sous-cutanee de 1 centi-
gramme de bacilles tuberculeux. quantite ordinairement suffi-
sante pouramener la mort de ces animaux en 8a 10 semaines.
A l'autopsie de ces cobayes on trouve, au point d'inoculation
des bacilles et aux alentours, une infiltration rouge, rede-
mateuse qui s'etend aux ganglions correspondants. La rate,
Ie foie, les poumons et l'intestin grele presentent des taches
de couleur rouge fonce ressemblant a des ecchymoses. Les
capsules surrenales sont augmentees de volume et conges-
tionnees.
b) Tuberculine pUl'ifiee (Calmelle et Massol). - On obtient
des produits faciles a purifier en partantde cultures en mi-
lieu liquide sans peptone, tel que celui dont la composition
a ete indiquee ci-dessus (milieu de Massol et Breton). On les
concentre dans Ie vide it 45 0 jusqu'a reduction au cinquieme
du volume primitif. On precipite ce liquide par 20 volumes
d'un melange a parties egales d'alcool a 95 0 et d'ether sul-
furique; on redissout Ie precipite dans un 'faible volume
d'eau et on Ie soumet, pendant 6 a 12 heures au plus, a la
dialyse a l'eau distillee courante. iroide •.sur parchemin
animal; puis on precipite une deuxieme foi~ par 10 volumes
d'alcool absolu. La poudre blanche (tuberculine c:q qu'on
en retire apres dessiccation est environ dix fois plus active
que celie fournie par la precipitation alcoolique de la tuber-
culine ancienne. Le rendement est.d'environ 0 gr. 75 pour un
litre de culture.
c),Preparation des emulsions bacil/aires pour l'inoculation
des animallX de laboratoire. - II est indispensable de pre-
ciser, pour chaque experience, Ie poids de microbes em-
ployes. Pour peser les bacilles, on preleve. avec une spa-
'nne de platine flambee, une petite quantite de culture qu'on
cssore par pression sur plusieurs feuillets de papier fiItre
ct qu'on porte en suite sur un petit carf(~ de papier Chardin
tare, dans un verre de montre, a la balance de precision.
On en prend ainsi 10 mgr. par'exemple.
Ces bacilles sont en suite in!roduits, avec la spatule, dans
TUBERCULOSE, 443
un petit hallon de "erre de 100 a 150 cc., sterile et conte-
nant des billes de verre de 2 a 3 millimetres de diametre sur
une hauteur de 1 centimetre environ. On agite vivement
pendant 1 ou 2 minutes de fac;on abien dissocier les mi~robes.
On verse ensuite 1/2 cc. d'eau physiologique avec une
pipette graduee ster!le. On agite de nouveau pendant 2
ou 3 'minutes et on ajoute 9 cc. 5 d'eau physiologique en
remuant constamment pour obtenir une emulsion bien ho-
mogene titrant 1 milligramme de bacilles par centimetre
cube.
Pour preparer des emulsions titrant 0 mgr. 1, 0 mgr. 01,
o mgr. 001, etc., par centimetre cube, il suffira de diluer,
dans un verre sterile, 1 centimetre cube de l'emulsion mere
dans 9 centimetres cubes d'eau physiologique, d'agiter soi-
gneusement en aspirant et refoulant avec la pipette Ie liquide
a plusieurs reprises dans Ie recipient; puis de diluer 1 cen-
timetre cube de ceUe enmlsion titrant 0 mgr. 1 par centi-
metre cube dans 9 centimetres cubes d'eau physiologique,
et ainsi 'de suite.
On peut egalement preparer l'emulsion mere en depo-
sant les bacilles dans un mortier d'agate sterile et en les
dissociant peu a peu avec une solution sterile de carbonate
de soude au dix-millieme ajoutee d'abord goutte a goutte, a
la 'pipette, ou avec 2 ou 3 gouttes de bile de bamf sterile,
ou' encore avec 2 ou 3 gouttes de jaune d'reuf frais. Mais Ie
premier procede donne des emulsions plus homogenes et
plus pures.
..
OR. _ Modes d'inoculation 00 ~'infection experimentale
des petits animaux de btboratoire.
a) Inoculation du cobaye par 'voie ph'itoneale (cu11ures ou

produits suspects purs). - Le cob aye elant immohilisepar
un aide, Ie ventre dirige horizontalement en haut, on coupe
lcs poils un pen a droite on a gauche de l'ombilic sur une
ctendue de 2 a 3 centimetres earrcs. On badigeonne de
teinture d'iode et, quand l'alcoolest evapore, on pique verti-
calement Ia peau et Ia paroi musculaire d'un coup sec, en
faisant penetrer l'aiguille d'environ 1 centimetre dans Ia
444 MALADIES INFEC'tiEUSES.1'ECHNIQUES SPECIALES
cavite perit~neale. On s'assure que la pointe est mobile en

tou}> ser:s, on pousse doucement l'injection, on retire l'ai-
guille et on touche de nouveau la petite plaie avec de la
teinture d'iode.
Avec des bacilles de virulence moyenne injectes it la dose
de 0 mgr. 1 peses it l'etat frais, la mort survient, en general,
en 50u 8'semaines. .
b) Inoculation intravasculaire (cultures pures), - Se fait
tres aisement, chez Ie lapin, dans la veine marginale de.
1'0reille. Chez Ie cobaye, on injecte les emulsions virulentes
dans la veine saphene, la jugulaire ou la carotide mise it nu
par section de la peau. Chez Ie rat et la souris, on choisira
une des veines laterales de la queue et on injectera les emul-
sions bacillaires au moyen d'une aiguille tres fine, sembi a "
ble it celles qu'emploient les dentistes pour les injections in-
tragingivales. L'injection intracardiaque est facilement rea-
lisable chez Ie lapin et lecobaye (quantite maxima de liquide
it injecter 1/2 it 1 centimetre cube suivant la taille pour ce
dernier animal).
c) Inoculation intracranienne (voir chapitre XIV).
d) Inoculation par voie intraoculaire (voir chapitre XIV).
e) Inoculation sous la conjonctive. (Blanc el Caminopelros.)

Inoculer 2 cc. environ d'un produit presume, tuberculeux
sous La conjonctive tUl'sienne de la pa~pierb superieure du
lapin. Au bout de 8 a 15 jours un redeme palpebral appa-
rait. Si 1'0n retourne la paupiere superieurc et si l'on tend
la conjoncti ve tarsienne, on aper90it celle-ci tres conges-
tionnee et bosselee de petites tumeurs arrondies, de cou-
leur blanc jaunatre~ tr'i)s l}.(lttement perceptibles so us la
mince couche cQnjonctivale. Ces tUll).eurs sont des tuber-
cules qui s'abcedent, s'ouvrent spontanement et donnent
un pus,assez pauvre en bacilles. L'ouverture,de l'abces n'a-
mene pas la guerison de la conjonctive. La conjonctivite
tuberculeuse s'ac~ompagne generalement d'une adenite des
ganglions sous·ll\axillflires.
f) Inoculation par' instillation oculaire (Calmetie, Guerin,
Grysez) (cultures et crachats). (Voir'chapitre XIV).
g) Infection par les, voies digestives (~uliures et produits ba-
TUBERCULosk 445
cilliferes). -- Melanger les produits bacilliferes a une..petite

.quantite d'aliments, du pain de preference. On peut aussi
.les faire absorber a la pipette ou a la sonde, comme il est
indique au cbapitre'Xlv, D, e.
h) Infection par voie transcutanee (cultures et produits ba-

cilliferes) (voir cha:pitre XIV).
I. ~ R.eactions tuberculiniques diagltostiques.

a) Reaction thermique. - Parmi Ies petits animaux de la-
boratoire, Ie lapirt sain sup porte sans dommagejusqu'a 0 cco'5
de tunerculil1e brute injectee dans Ia veine, en, solution dans
4 cc. 5 d'eau physiologique. Chez les lapins tuberculeux, au
contraire, I'injection.intraveinens~ de 0 ce. 01 a 0 ce. 05 de
la meme substance provoqne nne reaction thermique deja
manifeste vers la 3 a heure et persistant pendant environ
12 henres Em diminnant progressivement a partir de Ia 5e
ou 6e heure. Une elevation de temperature snperieure
a 00 8, persistant pendant 4 a 6 heures, autorise a conclure
a l'existence de la tuberculose chez l'animaI eprouve. Une
dose superieure 'a 0 ce. 1, injectee par la meme voie, est
generalement mortelle pour Ie lapin tuberculise depuis au
moins trois semaines.
L'injection soUs-cutanM donne des resultats peu satis-
faisants dans Ie diagnostic de la tuberculose chez Ie lapin
et Ie cobaye. La voie la plus favorable chez ce dernier ani-
mal est la'voie peritoneale. On injectera 0 cc. 02 a 0 ce. 05
de tuberculine brute en solution dans 1 centimetre cube
d'eau physiologiqc.e et on prendra Ia temperature toutes Ies
deux heures jusque vers la douzieme heme. U ne reaction
thermiqne superieure a 0°8 et persistnnt Rendant 4 a
6 heures, a partiI' de Ia troisietne, cst I indice de In
tuberculose.
b) Inlradermo-reaction. - CeUe methode consiste ainjecter,
dans l'epaissenr meme du derme, nne quantite donnee de
tuberculine. Chez les animaux de laboratoire, Ie cobaye en
particulier, Clz. Mantouxtecommandel'epteuve de l'intrader-
-446 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
·mo·reaction par l'inoculation d'unegouttedeIa solution mere,

a 1 pour 10, de tuberculine precipitee de l'Institut Pasteur.
.La region d'election est Ia face externe des pattes poste-
rieures qu'on depile prealablement. On fixe la peau contre
Ie plan osteo-musculaire sous-jacent entre Ies doigts et on
injecte ensuite Ia solution dans Ie derme.
La reaction positive consiste en une infiltration redema-
teuse du derme, blanche ou rosee, de 12 a 18 mm. de dia-
metre, accompagnee souvent d'une suffusion hemorragique.
Elle aUeint son complet developpement 48 heures apres la
piqure. Quand Ia reaction est negative, toute trace a disparu
a la fin du deuxieme jour.
D'apres Blanco, Ia region des Iombes ou des flancs con-
viendrait l11ieux. On la depile au moyen d'un melange a
parti,es egales de sulfure de baryum et de carbonate de
chaux et, Ie lendemain,' on injecte dans Ie derme 0 cc. 1
d'une dilution au 1/5 de tuberculine ancienne de Koch en
serum physiologique (soit 0 cc. 02 de tuberculine brute). La
reaction specifique doit durer 48 heures et Ia rougeur doit
etre tres apparente dans Ies24 heures. Les rea",tiQllS faibles
.ou fortes s'observeraiel\t du 7e au 150 jour apres l'infection.
Chez les bovides, on injecte dans un des plis cutanes qui
relient Ia base de la que,ue a Ia marge de l'anus 0 cc. 1 a
o ec. 2 de tuberculine diluee au 1/10. Les ]'(!sultals de
[' epreuve (infiltration redemateuse avec, par(ois, des plaques
hemorragiques rouge brul? ou violacee1;! du pli caudal)
doivent eire recherches de ~a irenie-sixieme a la guaranie-
huilieme izeure. De ires ra,res sujels, cepcndani, reagissenl
tardivement, du iroisieme au cillgllieme jour apres i'eprellve.
La constatation d'une'reaction neUe est car<lcteristique
de l'existence de Ia tuberculQse.
c) Guli-reaciion. - Tres inconstante dans ses resultats,

cette methode est peu emplQyee pour Ie diagnostic de Ia
tuberculose chez Ies petits animaux de laboratoire.
Pour son utilisation chez I'homme, la meilleure technique
consiste a deposer sur Ia peau (region deltoidienne, de
preference), nne goutte de tuberculine brute de l'Institut
Pasteur. On incise aussit6t apres, a l'inMrieur de cette
goutte, l'epiderme et Ia couche superficielle du derme, avec
un vaccinostyIe sterilise, en ayant soin d'etirer legerement
TUBERCULOSE 447
_1a peau entre deux doigts, pour favoriser la penetration.

II est recommande de faire une scarification temoin avec
.un autre vaccinostyle sterile, sous une goutte d'eau glyce-
rinee a 20 pour 100; sterilisee. Cette scarification temoin
peut etre faite sur Ie meme bras a quelques centimetres de
distance au-dessous ou au-dessus de celJe impregnee de
.tuberculine.
La lecture des resultats (avec mesure, en millimetres, de
.I' etendue de la zone erythemateuse) doit etre effectuee apres
24 'et 48 heures.
d-) Ophtalmo-rcaction. - Reussit mieux chez Ie lapin

tuberculeux que chez Ie cobaye. On instille une goutte de
tuberculine brute, ou une goutte de solution au 1/100 de tu-
berculine purifiee, dans l'angle interne de run des yeux de
I'animal suspect. Quand la reaction est positive, en observe,
.deja apr~s 5 ou 6 heures, un peu de rougeur de Ia conjonc-
tive, puis I'ceil devient larmoyaut, I'inflammation de la om-
queuse augmente et une serosite trouble s'accumule dans Ie
cul-de-sac conjonctivaI. Au bout de 2 jours, cette inflam-
mation locale s'atlenue puis s'efface .
. •.
J. - R.eaction de sedimentation
des globules rouges.
Dans Ie sang rendu incoagulable par addition d~

citrate de soude, les elements figures se sedimentent en
3 couches: les globules rouges dans la partie inferieure.
les globules blancs dans la partie moyenne et Ie plasma
citrate qui surnage. La rapidite de cette sedimentation varie
selon les conditions physiologiques et pathologiques du
sujet. Elle est fouction : lode la composition du milieu
plasmatique et des proport.ions relatives de ses proteines ;
2 0 du nombre, du volume et de la composition physico-chi-
mique des globules; 30 de la tension superficielle, des
forces capillaires et de la charge electrique des elements
en presence.
'448 MALADIES INFECTIEUSES, TECHNIQUES SPECIALES
Technique de Fahrams- Wes~ergreen, - Dans une se-

ringue contenant une solution de citrate de soude a 3 p. 100,
on recueille du sang ·par poncfion veineuse dans la propor-
tion de 1 partie de sang pO,ur 4 parties de solution citratee.
On agite Ie melange et On en remplit, jusqu'a la marque
200 millimetres-, des tubes de 300 millimetres de haut sur
2 mm. 5 de diametre qu'on place en suite verticalement, On
e:xamine apres 1,2 et 24 heures et on note les resultats. Chez
l'hotnme normal, Ie niveau de sedimentation,a la fin de la
premiere heure, est de 3 millimetres; chez la femme, de 5 a
10 millimetres. Ces chiffres sont tou.1ours plus eleves dans la
tuberculose pulmonaire, et d'autant plus que son evolution
est plus deravor~ble.
Technique de Westergreen et Katz. - A 8 cc. de sang

recueilli par ponction veineuse, on ajoute 2 cc. d'une solu-
tion de citrate de soude a 2 ponr 1.000 dans un tube a essai.
Apres 3 heures environ, on preleve 2 cc. du melange qu'on
reporte dans un tube special de 5 millimetres de diametre,
gradue en millimetres. On laisse reposer une et deux
heures et on lit la hauteur atteinte dans ce tube par l'amas
de globules rouges sedimentes. Les valeurs norinales sont :
apres une heme, de 2 millimetres chez I'homme, de 3 milli-
metres chez la femme; apres deux heures, de 6 millimetres
chez l'homme, de 8 millimetres chef la femme.
Technique de Linzenmeier. - Avec une serirrgue de 1 cc.,
contenant 0 cc 2 d'une solution citratee, sterile, a 4 pour
100, on preleve, dans nne veine, 0 cc, 8 de sangl de fayon
a avoir, au total, 1 cc. de liquidc, II faut avoil' s'oin de lais-
ser penetrer une bulle d'air dans la seringue pour faciliter
Ie melange des deux liquides que l'on fait par i'nclinaisons
et redressements successifs, sans agiter, On verse Ie sang
citrate dans un tube de verre de 4 millimetres de diametre
interieur et 65 millimetres de hauteur. Sur ce tube, Ie
niveau atteint par 1 cc. de sang citrate est indique par un
trait marque 0 ; au-dessous de ce trait sont gravees trois
auh:es raies sepanles par des intervalles de 6 millimetres et
marquees 6, 12 et 18 millimetres. Le tube est place- v-erti-
calement sur un porte-tubes. On note Ie temps necessaire
pour que Ie niveau superieur des globules rouges tasses
TUBERCOLOSE 449
descende a 6 millimetres, puis a 12 millimelres et enlin a

18 millimctres. Pour rendre ceUe methode plus facilement
utilisahle en clinique, on peut supprimer les traits interme-
diaires entre 0 et 18 millimetres (Salomon et Valtis). Le
temps de sedimentation est exprime par Ie nombre de mi-
nutes qui s'ecoule jusqu'au moment Oil Ie niveau atteint 18
millimetres. Ce temps est de 250 minutes et au-dessus,
chez les sujets normaux. 11 est un peu plus court chez la
femme que chez l'homme.
II. - PS~UDO-TUBERCU,LOSES.
A. Pseudo-tuberculose des rongeurs·.

(Lapins, Cobayes.)
Tuberculose zoogleique de Malassez et Vignal (Bac. pseu-
do-tuberculosis rodentium de Pfeiffer) : Streptobacille, 2 cils.
terminaux spirales.
COLORATION. - Facile par les couleurs basiques : thio-
nine pheniquee. Ne prend pas Ie Gram.
CULTURE. - Aerobie facultatif, pousse a partir de 50 sur
tous. les milieux, glycerines et surtout glucoses. Colonies
ressemblant au Bacterium coli, grisatres, molles, grasses, de-
gageant une odeur desagreable. Ne liquefie pas la gelatine.
Trouble Ie bouillon et l'alcalinise fortement en 8 it 14 jours
en y formant des cristaux. Ne donne pas d'indol et n'est
pas toxigene. Tue par une heure de chauffage a 60 0 •
B. - Pseudo-tuberculose des souris (B pseudotLlbercu-

losis muriam, [(alscher).
Immobile, prend Ie Gram, assez semblable au bacille diph-
terique. Non sporule.
Cultivable sur les milieux usuels. Donne, sur gelose gly-
cerinee, des colonies jaunatres. Ne liquefie pas la gelatine.
Pousse surtoutabondammentsur Ie serum coagul~ glycerine.
Trouble Ie bouillon et y forme des crislaux de phosphate
ammoniaco-magnesien, bien reconnaissables aU'microscope
IIIJCnODJOLOGlE 29
450 MALADIES INFECT'IBUS'ES, TECHNIQUES SPECIALES
('coti'verc1:e de cercueil). N e donne pas d'indol ; ne 'Cbllgule

p'a"s l'e lait ; ~e po'Usse pas sur pomme d:e terre. Tut} pnr
chauffage it 'fOo.
G. .:._ Pseudo-tttberculose du mouton '(B. de Preis:-

Nocard) .
. Immobile, prend Ie Gram; assei': semblable ~m. b!lcill~

diphterique. Surtout aerobie. Donne, sur gelose, a 37°, des
colonies ecailleuses qui se develop pent rapidement et
atteignent au bout d'une semaine les dimensions d'une len-
tille, gris:Hres. Ne pousse pas sur gelose glycerinee, pousse
diflicilement sur gelatine, mais croit abondamment sur
gelose-serum et sur gelose-ascite. Ne trouble .pas Ie bouil~
Ion et y forme des grains adherents aux parois du vase.
Couche seche blanc sale sur pomme de terre. Tue par
i{) minute's de chauffage a 650, mais supporte plusieurs heures
00°. Facile a conserver longtemps vivant et virulent 'dans
les milieux de culture. Pathogene pour souris, robaye~
lapin, chevre et mouton. Produit, surtout dans Ie bouillon
Marlin, une toxine tres active.
Ill. - LEPRE
~ ........ Bacitlus leprre, de Han~n. - Aoido-l'csistatll:.

·Immd'bile. '(Lolorable par toutes les n1ethode~ enrp1l'>'yees
;pour Ie haciile'tuberculeu'x.. Ses 'elemt<nts l.'enferI'Mtlt des
granule's (dits de Babes-'Ernst) qu'oo. peut colorer 'par ltl
bleu de methylene, Ie brun de Bismarck ou la methode
de Much, et qui sont probablement constit'Ues )?a.r d~'s
lipoides.
Les bacilles sont presque toujours intracellulaires, dis-
poses en faisceaux, en amas ou buissofls epineux ires carac-
teristiques (globies), souvent entoures d'une matiere mu-
cilagineuse, formaM capsule. Leur acid'q,fesistance ,est
moindre que celIe du bacille tubel:culeux, suttout dan's Ie's
jeunes 1ep'rome's.
La tniUhbae de coloratio'n de Batlm!Jarlen permet ~'e les
distinguer des bacilles de Koch. Colorer a froid pendant
LEPRE 451
5 'minutes avec Ie violet aniline, apres fixation des frottis

par in ·chaleur. Decolorer ave"C:
Alc:ool ~bs.ol';l. . • . . • • . • . .• 10 cc·
A.,lde Dltnque.. • • . . • . . . .• 1 'Ce.
Laver et secher. Le baciUe de Koch n' est pas colore tandis

que Ie bacille de Hansen est tolon~ en violet.
Goloration des coupes. -- Faire agir succes'Sivement:
glycbemalun 5 minutes; Javer, fuchsine de Ziehl 5 minutes;
laver, 'et piero-indigo carmin penda-nt une minute. Laver a
l'~au puis a l'ul'Cooi, decolorer par l'essence de girofle, arre-
tel' Ia decoloration par Ie xylol. Monter au Daume. Les
noyaux.lSont colotes en violet, les hematies en jaune, Ie tissu
conjonctif en bleu, les bacilles 'en rouge.
La methode de Pick est tres recommandable : elle con-
siste a colorer pendant 20 a 25 minutes, it froid, dans une
solution forte de fuchsine (ph'eniquee it 2 gr. 5 p, 100); on
lave ensuite .:l reau, puis daus l'alc()ol a 950 pendant 15
secondes, on traite par Ie vert d'iode alp. 100 (dissous
daus de l'eau pheniquee it 2 p. 100) pendant 2 minutes;
on pas'se a l'alcooJ absolu jusqu'a ce que la coloration verte
apparaisse, puis dans le'xylol, et on monte dans l'hui.le de
cedre.
Les cl'achats, les exsudats naso-pharyngiens et les
lep!:'omtls peuvent ~tre avantageusement dissous par ['anti-
formine pour la mise en evidence des bacilles lepreux.
'On tritite des cia chats .peb-dant 15 minutes a 2 heures,
les fragments de leprome broyes pendant 2 it 18 heures, pat'
une dilution it 25 p~ 100 d'antiformin,e ; on agite it diverses
,repti'Ses, ·on centrifuge et on lave 1?lusieurs fois Ie depot it
l'eau'physiologique, puis on l'etale sur lames pour fixer et
colo'rer, Ii est possible de d~oou'Vrir ninsi, dans.les prO"-
duits d'exptmtoration, les'bacilles Iepreux qui passent ina~
pirr-vus lorsqu'on n'empJ.oie que' les methodes d'cxamen
dirett,
0n peut par ce moyen se procurer en assez grande abon·
dance des baciH'es.Iepreux pour faire des essais de cultUl,e
o'll pourpreparer des extraits pouvant servir d'antigene.
. POt'll' J:e diagnostic bacteriologique des lepromes, la meil-
leure technique consiste a piquer la tumeur, nun pas avec
tine aiguille, mais nl'ec nne pointe de pipette effiMe. en
452 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPEC1ALES
aspirant forlement par l'extremite opposee bouchec a

l'ouate. On obtient ainsi une goutte de serosite qui, etalee
en frottis, se montre habituellement tres riche en bacilles,
tandis qu'une gouttelette de sapg preleve par piq(lre.a l'ai-
guille n'en montre que tres rarement.
La 'culture du hacille lepreux en serie sur des milieux
artificiels n'a pas encore pu etre realisee.
La specificite des cultures doit etre authentifiee: 10 par
leur aptitude a servir d'antigene et a fixer l'alexine dans la.
reaction de Bordet-Gengou en presence de sensibilisatrices
contenues dans Ie serum des Iepreux ; 20 par leur aptitude
a produire chez les lepreux des reactions locaTes analogues
a celles que l' on obtient avec les cultures tuees de bacilles.
tuherculeux ou avec les tuberculines .
..
B. - Le bacille de la Lepre des rats, de Stefallsky, res-.
semble beaucoup au bacil1e 1epreux.ll est acido-resistant.,
intracellulaire et se trouve parfois en nombre immense
dans les cellules endotheliales vasculaires, dans les gan-
glions lymphatiques, la rate et la peau.
IV. - ENTERITE HYPERTROPHIANTE 'DES BOVIDES

I
Le bacille de l'enterite chronique hypertrophiante du
bamf, de Johne, est egalement tres voisin du bacille Je-
preux ; acido-resistant, intracellulaire, il est cultivable sur
les milieux glycerines, additionnes d'extrait glycerine de\
bacilles de la fleole. On einulsionne 1 gramme de ba~illes de
Ia llcolc sees dans 20 centimetres cubes d'eau physiologiq'ue
a 8 pour 1.000, glycerinee a 4 p. 1.000. On porte l'emulsion
a I'autoclave, on chauffe a 1200 pendant une h~ure et demi~
et on filtre sur papier. On ajoute en suite 1(J0 centimetres
cubes de ce filtrat it 300 centimetres cubes de milieu it
l'reuf, glycerine a 5 p. 100, prepare en melangeant inti-
mement blancs et jaunes aussi aseptiquement que possible
(voir 1a preparation du milieu de Petrof aU'chapitre t,uber-
culose) .. Apres avoir agite, on repartit ce milieu dans des
tubes steriles qu'on chauffe au bain-marie it 60 0 pendant
MORVE 453
une ~eure, trois jours de suire. Finalement on congule en

position inclinee dans l'appareil special et, apres les avoir
capuchonnes, on eprouve la sterilite des tubes en les lais-
slInt it 1'6tuve it 370 pendant 2 jours.
V. - MORVE
Bacillus mallei. - Immobile, non sporule.

COLORATION. - Toutes les couleurs. basiques. Ne
prend· pas Ie Gram. La thionine pheniquee convient tres
bien mais l'action des matieres colorantes doit etre un peu
prolongee. Le bleu de methylene, suivi de lavage rapide'par
l'acide acMique dilue a 0,5 p. 100 et du traitement par la
solution a 10 p~ 100 de tanin pour differencier (~uivant Ie
procede de M. Nicolle), est aussi excellent.
La double coloration dans les tissus est difficile a obtenir.
On peut employer, it cet effet, Ie melange de Gorini : 1 par-
tie d'eau saturee de bleu de methylene, 1 partie de solu-
tion d'eosine a 0,5 p. 100 dans l'alcool a 70°, 2 parties d'eau.
Les frottis se colorent en quelques minutes; les coupes
en .1 heure environ.
CULTURE. - Aerobie. Se developpe de 25 a 45°. L'addition
de 4 a 5 p. 100 de glycerine aux divers milieux est tres
favorable. Bouillon de viande de bamf, de veau ou de cheval
neutre ou tres legerement alcalin. Trouble des 24 heures
apres l'ensemencement; anneau muqueux adherent au
verre a Ja surface du liquide et celui-ci se couvre bientOt
d'une membrane analogue a celIe que forme Ie bacille tuber-
culeux mais plus lisse et plus grasse. Cette membrane se
dissocie, se depose au fond du vase et se reforme plusieurs
fois si on laisse longtemps la culture a l'etuve.
Le bacille de la morve pousse egalement bien sur serum
coagule, glycerine et sur gelose glycerinee. Mais la pomme
de terre glycerinee est Ie milieu de choix. 11 s'y developpe
rapidement et forme une couche cremeuse, luisante,
d'abord jaunatre, qui prend aprcs 6 it S jours une teinte
brique et brunit a la longue.
Les pommes de terre ne doivent ;amais etre acides, car Ia
mOlndre trace d'aeidite- empeche la culture. II est donc

necessaire d'en faire tremper les fragments p.endant une
heure, avant la mise en tuhes, dans une s.olution de bical'-
bonate de.soude a 0,5 ou 1. p'. 10.0,
Les pommes de terre gelees, qui 'sont plus ou moins
sucrees, sont egalement inutilisables.
Le lait est lentement coagule sans formation d'acide.. Les
cultures sur gelose ou sur pom~e de terre doivent etre
reensemencees tous les mois, car elles sont assez fragiles.
Apres 30u 4 jours d'Muve, il est pref~rahle de les garder
dans une armoire a l'obscurite et a la temperature du labo-
ratoh:e.
La jaune d'reuf eoagule, eJ)." tubes inclines. cons.titue un
excellent milieu de culture. Au coutrairej l~ hlanc d:re\}f ne
conv~ent pas,
Le bacille mOrVe\lX chauffe a 58" est tue en 1 heuxe a
1 heure et demie ou el). 5 minute.s, a 80p, ~l se conserve trois
mois environ vivant et virulent 'dans les cul~UJ;es: en gelose
a.
.glycerinee, en tubes scelles,. ma.intenus. la glaciere !;lpreS
developpement a l'etuve. •
Les cultures en houmo\]. agees d'uo mois et ste,rilis~es a
110·, puis evaporees. au bain;-Ql.arie, perm'ettent d,'obteuir loa
mlll[einc. Les baciHes tues sont ell:x-m~mes tre.s toxiques.
(Voirles travaux de M. Nicolle dans les ;1l)naies de l'Institlli
Pa:steur, 1906 et 1907.) I
L'iso.lement qu baciUe morveux es~ difIicile:). faire eu pat-
tant des lesions. morveuses du cheval ou de ]'horome, i\ Caus.e
des infections micfobiennes associees. Pour l'obtenir, il
faut inoeuler d'abord un cob aye sous la peau de la oujssl}.
aVe~ une petite quantite d'emulsion du produit suspeet. Si
ce produit renferme des baciUes. mOJ;veux, les. g:mgl~ol,\s
inguinaux voisins se tumefi~nt all. bout 'de quelques, jours.
an excise aloJ;s un de ces ganglions (dont on peut effectue.r
l'examen microscopiqu.e imroediat en coupes' et frotHs),;
on Ie hroie asepti,quement, on l'emulsionne dans un peu
d'ean. physiologique s.terile et o.n l'inject~ daus Ie peritoiue
d'un cobaye male. On voit bientot (en 5. a 6 joul;'s) appa-
raitre chez eet an~IUal une vaginalite rnorvC}use (sarcocele),
dQnt il est facae d'E)xtraire a. la pipette, apres avoir sacrifie
Ie cobaye, de la serosite plus ou moins riche en elements
microhiens. On ensemence di,r~<;tement cette serQ.site sur
MORVE ~55
plqsiem:s, tubes (Ie pommes, de t~l,'re glyceriJ;16cs; qUt'Oil

l'Muve a. 37,°. La clliture est deja tJ;'cs ahaqcta,~t<J
P91't~ il,
en 5 a 6 jaurs.
~NIMAUX ElENSIBLES. ~ Cabaye, chat, mout_on,. :Vane
est hypersensihle. Viennent apres I\!\ : Ie cheva,I, 'Ie mulet,.
l'hamme et tes grall.~s carnassi~rs (Ii~n, tigre, leOPaI;d).
Les bQvide~ s"ont refractaires.
L~ lapin 'est pe\], sensil;lle a l'inoculat\on sous-cuta,nee,
mai~ il wend tre& bien la morve aigue paJ;" inoculation intra-
vein.euse; s~ rate, ail,1si que Ie sang du ernul', p~u~~nt
alor& sel,'v\r ~ ensemencer les mi~ieux de culture l,iquid.es,
d~stinesa la preparation de la malleine. L'inocula,tion'intra-
peri.toneale des produits mo,rveu,x au cobaye provoq1).~ une
vaginalite caracteristique (signe de S~rauss). La mort &ur~
vien.t en 8-15 jours.
Le chi(,)n est peu sensible. II en est de meme du pore et du
rat. La souris est refractaire maiS' devi~nt sensible sj on l\\i
iojeete au prealable un peu de phloridzine pour la r~mqre
d:1ahetiqu,e.
Les oiseaux sont refractaires.
L'homme est tres receptif.
DIAGNOSTIC DE LA MORVE PAR L'AGGLUTINATION. -
~l est co~mode d'employer, comme emulsion agglutinable,
une culture sur gelose glycerinee tuee par 30 minutes de
chauffage a 60 0 et additionnee de 0,5 p_ 100 ·d'acide
phenique. La culture doit eire prealablement broyee au
mortier d~agate et emulsionnee dans de l'eau salee physio-
logique sterile, puis diluee jusqu'a former un. liquide
blanchatre, laiteux, qu'on fiItre 'rapidement sur un mince
tampo.q d'ouat~ hydrophile mou,illee. L'emulsion ainsi pre-
par¢e I?eut se conserver plusieurs seroaines.
II faut savoir que l'agglutinabilite des cultures de morve
est tres vad~ble s,uivant leur origine, et s'en .ten,ir a urie
souche dOJ,lt l'agglutinabilite est connue.
L'epre,uve de l'agglutination se faitcomme pour les serums
de typhiques. L~s serums normaux de cheval agglutinent
souvent jusqu'a 1 p. 300, mais pas davl.\ntage; celui de
l'homme sain alp. 500, L.e serum des morveux agglutine
a des tau,x variant de 1 p. 1.000 alp. 10.000. Les tubes
dqivent e\re ma,intenus pendant 30 minutes it 370 avant la
le~tufe <l~s resultats.
4GG MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
Les serums de volailles (pouIe, canard, pigeon, oie) agglu-

tinent normalement Ie baciIle morveux alp. 1.000, queI-
quefois davantage. .
La malleination prealabIe du cheval sain n'influence pas
Ie pouvoir agglutinant de son serum.
DIAGNOSTIC DE LA MORVE PAR LA PRECIPITATION. - On
proccde comme dans Ia methode d'Ascoli (voir bacteridie
charbonneuse) par superposition de l'antigene (malleine au
1/10 dans I'eau physioIogique), au serum anti, chauffe a 55°.
On laisse a la temperature du laboratoire et on note Ies resuI-
tats apres 18-20 heures. Methode de peu de valeur, beaucoup
de serums normaux precipitant au contact de la malleine.
DIAGNOSTIC DE LA MORVE PAR LA DEVIATION DU COM-
PLEMENT. - La technique generale de Calmette et Massol
est egalement applicable au diagnostic de la morve par la
deviation'du complement. La malleine diluee it 1 p. 5.000,
employee comme antigene (Ciuca), donne des resultats
inconstants, Les emulsions de corps microbiens preparees
de la maniere suivante (Brocq-Roussell, Forgeot et Urbain)
la remplacent avantageusement :
a) On emulsionne 2 centigrammes de bacilles morveux
tues dans 20 centimetres cubes d'eau pbysiologique et on
centrifuge it deux reprises en decantant chaque fois Ie li-
qgide surnageant qui est remplace par un egal volume
d'eau physiologique. La suspension mibrobienne est en suite
portee pendant 5 minutes a I'ebullition. Cet antigene est
employe it la dose de 3/10 de centimetre cube par tube dans
la reaction de fixation.
b) L'antigene prepare avec des bacilles morveux traites
par l'alcool-ether a la nH~me activite que Ie precedent. II
offre l'avantage de se conserver indefiniment lorsqu'il est
maintenu it l'abri de l'humidite. Les cultures de bacilJes
morveux en bouillon glycerine, agees de 6 joms, sont sterili-
sees par un chauffage de deux heures au bain-marie a 600.
On centrifuge en suite et on lave it deux reprises les corps
microbiens dans l'eau physiologique. Finalement on deshy-
drate Ie eulot par l'alcool et on ajoute une quantite egale
d'ether. On laisse agir Ie melange aIeool-ether p1endant
24 heures, puis on decante Ie liquide et on fait dessecher
les corps microbiens a l'etuve ou SOlIS Ia cloche it vide.
/
MORVE 457
Quand ils sont bien secs, on les broie dans un mortier

d'agate ou bien dans un tube metallique garni de billes de
bronze. Pour la recherche des anticorps morveux. on
emulsionne les bacilles it raison de 1 centigramme cube
pour 50 centimetres cubes d'eau physiologique et on em-
ploie 3{10 de centimetre cube de cette emulsion par tube.
La malleine, injectee sous la peau, fait apparaitre des
anticorps chez les chevaux sains. Si 1'0n associe la mallei-
nation a la deviation du complement, il convient de prelever
Ie sang avant ou dans Ies 3 jours qui suivent Ia malleina-
tion (Brocq-Rollsseu, Forgeot et Urbain).
DIAGNOSTIC DE LA MORVE PAR LES REACTIONS MAL-
LEINIQUES. - a) lntra-dermo-malleination palpebrale. -
Avec nne seringne de 1 cc., graduee par 1/10 de cc. et
munie d'une aiguille fine de 10 a 15 millimetres de longueur,
on injecte dans Ie derme de Ia paupiere inferieure 0 cc. 1
de malleine diluee au quarL. La technique de cette injection
est tres simple: Ie cheval elant immobilise, on saisit entre
Ie ponce et l'index de Ia main·gauche un repli de la pau-
piere, a un centimetre environ du bord libre. La main
droite tenant Ia seringue, dont Ie cursenr a ete regIe it 1/10
de cc., prend un point d'appui sur la tete, de falton it en
suivre tous les mouvements. On implante l'aiguille hori::-
zontalement dans Ie pli cutane, sur nne profondeur de 2 a
3 millimetres et on ponsse l'injection dans l'epaisseur dn
derme.
Sur les anilllaux sains, I'reil conserve, les jours snivants, •
son apparence normale; it peine note-t-on, parfois, un leger
redeme de la paupiere injectee. Au contraire, sur les ani-
maux: morveux, il se produit un redeme palpebral, volumi-
neux, envahissant sonvent tout Ie pourtour de l'reil ; la
conjonctive est injech\e, la fente palpebrale laisse ecouler
un liquide muco-purulent.
b) SOlls-culi-mallcinalion. - Sous la peau de l'encolure,

prealablement tondue et desinfectee, on injecte 2 cc. de
malleine diluee, soit 1/4 de cc. de lllalleine brute.
En quelques heures il ,se forme au niveau de l'injection
chez les chevaux morveux, une tumefaction ch3ude, tendue.
douloureuse souvent tres etendue, d'ou partent des cordes
trainees Iymphatiques sinueuses. CeUe tUllleur augmente
45:8 MALADIES INFECTIEv,sES. TECHNIQUES SPISCIALES
de volume pendant 24 a 36 heures et persiste 2 a 3 jours.

En meme temps que se prdduit ceUe reaction locale, l'etat
general se_ modifie : abattement, tristesse, anxiete, anorexie,
frissons, et l~ temperature &'eleve graduellement de 105 it
295 et plus, au-c)essus d~ la normale. Cette reactifm fher-
migue deja notable a la huitieme heure, atteint son IllaximuqI
de la douzieme a la vingtieme heure et persiste 24 it 36
neures.
Chez les chevaux sains, l'injection de malleine est sans
eifet.
Q~ Qphlaimp-walleino;~~on. ----... On p~PQse qn,6 gO,\ltt~ de

malleine hrute dans un des culs-de-sac conjonctivau~. ~a
reactiou positive ~st o~ra((teris~~ par utle v,olente in{lam-
l)1ation, de la conjonctiv~ et un ecoulement n1Uco-pur\11~nt.
CHAPITR.E' XXXVIII
MYCOSES.
A. - Procedes d'examen.
Les procedes varient avec Ie materiel a examiner.

L'examen direct des champignons, sans coloration, apres
dissociation, se fait soit dans Ie lactophenol de Amann, soit
dans ~e liquide de Pinoy.
Lactophenol de Amann :
A"ide pbenique cristallise pur. 1 gr.
Acide lactique.. . . . . . 1 gr.
Glycerine. 2 gr.
Eau distillee. 1 gr.
Lz'quide de Pinoy:
Hydrate de chloral. .' . • • • • . • 40 cc.
Glycerine. • . . • • . . • . • . 2Q cC.
Eau. . . • . . . • . . . . • • 20 cc.
Sol. alcoolique d'acetate de plomb Ii 2 %. 10 cc.
EXAMEN DES SQUAMES EPIDERMIQUES ET DES PQILS

POUR LA RECHERCHE DES ,CHAMPI'GNONS PA~SITES. _
Les squames ou leI'> poils sont deposes sur une lame, laves
a l'ether, puis immerges dans une gOl,ltte de solution de
potasse caustrque a 40 p. 100, recouverts d.'une IameUe, et
portes a 100 0 sur Ia flamme de Ia veilleuse, pendant 15
a 20 secondes. La pr~paration est alors eclaircie. On peut
l' examiner telle queUe. Ou· bien Ia laver et colorer 24 heures
dans une solution alcoolique saturee de bieu c(e methylene
etendue de moitie d'eau; laver a I'eau soigneusement; faire
agir la solution de Gram pendant 5 minutes; laver a l'eau.
Decolorer par Ie melange de :
Xylol. . , . . . . . . . • • .. 1 cc.
Huile d'aniline.. . . . . . . . " 2 ce.
Laver au xylol pur et monter au baume.

(Favus, Teignes, Trichophytias.)
460 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPBCIA,LES
On peut aussi examiner it froid les poils parasites dans

Ie chloral-Iactophenol" compose de :
Hydrate de chloral cristaIIise. 2 parties en paids
Acide phenique eristaIlise. . 1 »
Aeide laetique. . . . '. • 1 »
Ce procede est plus simple que celui de la potasse et

ecIaircit suffisamment.
Pour les dermatomycoses (Pityriasis versicolor et Ery-
thrasma microsporoides minutissimus), dissocier les squames
epidermiques dans une goutte d'acide acetique glacial. Lais-
ser secher et fixer a l'alcool absolu, puis colorer a chaud
avec Ie bleu de toluidine a 1 % et differencier it l'essence de
girofle, colorer Ie fond a l'eosine : Ie parasite est colore en
bleu violace.
Pour Ie Muguet, colorer au violet degentiane phenique.
Pour l'Actinomycose, . traiter Ie produit de raclage par
la potasse a 40 p. 100, laver et colorer par la methode de
Gram, puis par l'eosiU'e qui colore les massues en rose, alors
que les filaments prennent la couleur vi01ette (voir ch. V1l).
PREPARATION DES MOISISSURES. (Methode de Pinoy.)-
Choisir une tres jeune fructification. La saisir par la base
au moyen d'une pince a pointes fines et la poser sur une
lame.
Deposer sur la lame, aupres de la moisissure, une goutte
d'alcool ammoniacal et l'amener au contactlde la moisissure
au moyen d'une pointe d'aiguille. L'alcool commence a
mouiller la moisissure et permet aux liquides employes
ulterieurement de penetrer les tissus.
Faire agir ensuite Ie liquide de Flemming :'
Acide osmique iI 2 p. 100. . . . • . " 4 ce.
Aeide chromique a 1 p. 100. . . . • • • 15 ~C.
Acide acetique.. . • . • • . . . • . 1 ce.
Laver a l'eau. Appliquer une lamelle sur la preparation

et examiner.
Si 1'0n veut obtenir une preparation durable, rempla-
eel' I'ean par de)a glycerine; deposer une gouttelette de
glycerine d'un cote de la lamelle et absorber l'eau du
cOte oppose avec une handelette de papier huvard. Border
ensuite a la paraffine.
GOMMES RAMOLLIES, pus. - Examen direct entre lame
MYCOSES 461
et lamelle, la refringence des filaments myceliens per-

met de voir ces elements. Si l'examen est negatif. fixer et
colorer par la methode de Gram.
GRAINS DES MYCETOMF.S. - Examen direct apres dis-
sociation dans Ie lactophenol.. Apres fixation, faire des
inclusions et des coupes.
BRONCHOMYCOSES. - Examen direct et apn!s, coIor~tion
des crachats par la methode de Gram .
..
B. - Milieux de culture des champignons.
Pour l'isolemeQ-t des champignons deux milieux sont

suffisants: l o la carotie preparee suivant la technique indi-
qmie pour la pomme de terre; 2 0 la gelose maltosee de
Sabouraud.
a) Milieu d'epreuve de Sabouraud :

Eau. • . • • . . . • • . 1.000 ee.
Gelose. . . . . . . . • • . 18 gr.
Maltose brut_!l de Chanut. . . . 40 gr.
Peptone granuIee de Chassaing .. 10 gr.
MeIer Ie tout dans un ballon ; porter it l'autoclave et

chauffer Ientement avec une couronne de gaz jusqu'a 120°,
eteindre et Iaisser refroidir. Agiter Ie hallon en Ie sortant
de l'autoclave, filt)'er it chaud sur papi~l' Chardin. repartir
en tubes ou en fioles, boucher au coton. Steriliser de nou-
veau Ientement it 120°, cQmme precedemment.
b) Milieu de conservation de Sabouraud.

Meme formule que ci-dessus en supprimant les hydrates
de carbone.
EXAMEN DES CULTURES DE CHAlI:IPlGNONS. - Prelever un
fragment de la culture it examiner, Ie dissocler delicate-
ment dans Ie lactophenol et examiner entre lame et
lamelle.
Dessiner les myceliums, les formes de reproduction, l'as-
pect de l'appareil sporifere, les dimensions des spores et
fixer leurs dimensions respectives.
462 MALADIES INFECTlEUSES. TECHNIQUES SP}1CIALES
C. - Etude du developpement des champignons.

Trois procedes peuvent eire employes :
10 Methode des guuttcs pendante8 de Vall Tieghem.
Sur des lames de verre, On fixe, avec Ie lut de Kronig, de~
petits' anneaux de verre ayant environ un centimetre de
hauteur. U ne fois que Ie lut est sec, on sterilise Ie fond et
les parois de ces cellules en les passant dans la flamme
d'un bec Bunsen. QUJllld elles sont refroidies, on enduit la
partie s'uperieure de Ces anneaux de verre d'une legere cou-
che de vaseline au subliqle a 1 %. Flamber ensuite une
lamell-e temi'e ave-c' une pince, depo'se'r sUr tine de se's faces
1 gO'utte de Jll$ de carotte et la placer sur la "tranche vaseli-
tree de l'anneau, la goutte vers l'int~rieur de 1a tellule.
Pour ensemencer une spore, faire une dilution des spo-
res dans une petite quantite d'eau physiologique sterile,
contenue dans un verre de montre flamlle. Verser sur une
lame fl~mbee, 1, gou.tte du liquide que.l'on etale en faisant
2 ou 3 stries, thl:lrcher au microscope une spore' isolee.
Porter :cette spore avec une -pipette dans la gouUc de jus
de carotte en soulevant et retouroant la lamelle que ron
replace sur la .celh;tle apr~s ensem.encernent. Pour empe-
che't 1'evapo'ration de la goutte, on disposV les cenules dans
une cloch~ de Malassez gal'nie a !'intet-ieur de papier buvard
-tremp'!! dan's une solution~e'sublime au millieme. qui em-
peche les contaminations secondaires de la goutte.
20 ProcMe de la boite-de Petri.
Placer 2 ou 3 lames flambees dans une boite de Petri ste-
rile, en les isolant du forid par de 'fines baguettes de verre.
Versb~ un peu '<l'eau sterile au fobd de l,a bolte. On depose
ensuite, sur chaque lame, une gouUe de jus de c.arotte dans
1a'quelle on ensemence une spore, puis on replace Ie cou-
-verele de la boite.
30 Prbcede des lames seches.
On dispose verticalement, dans un cylindre de Borrel,
3 larl.:1es maintenues separees par un triangle en bague,ttes
d.e verre. V>etser 'dans Ie cylindre, sur une haufeut de •
l.centimetre environ, le.liquide ~uivant:
MYCOSES 463
Eau . . • 100 'ceo
GI'l'l<iose. • 2 gr.
Pel'>tone. • 1 gr.
Glycerihe .• 2 gr.
Bouch'er avec un tampon de ouate, coiffer d'un cornet de

papier et steriliser a l'autoclave.
On mouille une partie des lames avec Ie liquid'e, en incli-
nant Iegerem.ent Ie cylindre et on ensemence les spores dans
IG p'artie du litJuide qui reste sur la lame.
Pour ~xaminer au microscope, remplacer Ie Iiquide de
culture par une goutte de lactophenql qu'on recouvre d'-une
lamelle. En lutant la lamelle avec Ie lut de Kr6nig, on peut
ctmserver des preparations monteant tous les stades de
devel~ppement du clrampignon. '
D. - Inoculation des champignons.
Ih'Oculer la culture du champignon a de'S animau~ sensi...

~les (lapin, '~at, souris, ,pigeon) ,en varinnt ~es modtJs·d'ino·
culation : sOlis·cutanee, intraveineuse) intratesti'Culaire
(s'pototrithose), dans les hO'tm;es plantaires du m-etatarSc du
pigoon) 'etc ...
..
E. - SpOtotricho'Se.
~OL'ORATION. ~ Toutes l-e'S couhnars basiques. Le Spo-
rottichrlm prend Ie Gram. Forrues ov-ales bu en fus-eau,
intm. ou extracellulaires, ordinnirc1rrent contenue1l dan's
fes ID'a-crophage(s mononucleaircs;' tonjours rares .dans h!
lpu'S. Fo't'lnes allongees, disposl!es ''Cn faisC'eaux on etoile'S
avec 'conidies 'portant un bduquet'de 2 a 30 spOres 'ovoides
dans les cultures. Chlamydospores sur la longueur 'de'S
filan'J.!mts.
CULTURE. - Sur tous les mili~ux glucoses. Ne liquefie
'Pas la gelatine non glucoseey liquefie la gelatine glucosee et
forme des colonies brunes.
Le milieu de choix est celui de Sabouraud :
464 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECI4LES
Gelose. • . . • . 10 gr.
Peptone Chapoteaut. . 10 gr.
Glucose. • 40 gr •
Eau . • • • . . . • 1.000 CC.
Cultiver a la temperature du laboratoire, sur plaque de

Petri. Optimum de temperature, 22 it 300.
Pour Ie diagnostic, de Beurmann et Gougerot recomman-
dent Ie simple couJage du pus sur verre sec (a l'inMrieur
d'un couvercle de boite de Petri). Maintenir a 220. Les
formes myceliennes caracteristiques, en etoiles, se develop-
pent en quelques jours.
SPORO-AGGLUTINATION. - Broyer a sec, dans un petit

mortier d'agate, un grumeau de culture agee de 4 it 6
semaines et delayer avec quelques gouttes d'eau physio-
logique. Filtrer sur papier mouille pour retenir Ie myce-
lium. Les spores traversent Ie papier. Recueillir Ie liquid~
pour repartir dalls une serie de verres de montre a la dose
unique de 1 centimetre cube. Ajouter en suite, a chaque
verre de montre, des quantites progressivement crois-
santes de serum du malade suspect (serum dilue alp. 10
avec une eau salee physiologique), 1 goutte,2 gouttes, etc ...
Apres quelques minutes, prelever une goutte de chaque
melange et examiner entre lame et~lamelle. On peut deter-
miner ainsi Ie taux de l'agglutination qui varie de 1 p. 100
a1p.500. \
DEVIATION DU COMPLEMENT. - On peut utiliser la tech-
nique de Bordet-Gengou en employant 1 centimetre cube
du serum a eprouver, 0 cc. 5 d'emulsion de Sporotrichum
(non filtree), 0 cc. 2 de serum frais de cobaye et 0 cc. 7
d' eau salee physiologique pour chaque tube. On Iaisse
4 heures a l'etuye a 37°, puis on ajoute 0 cc. 3 de serum
de lapin anti-chevre inactive et 0 cc. 5 d'hematies lavees
de chevre (diluees a 5 p. 100 dans l'eau saleephysiolo-
gique).
Les macerations de cultures de Sporotrichum, tuees par
chauffage a 1200, peuvent aussi servir au diagnostic par
sporo-cutireaction, comme la tuberculine dans la tuber-
culose, mais ces reactions ne sont pas absolument speci-
fiques.
MYCOSES 465
..
*
P. - Actinomycose.
COLORATION. - Dans les coupes, les massues se colo-
rent tres hien avec Ie picrocarrnin, l'hematoxyline-eosine,
l'orceine, et Ie'S filaments par Ie Gram. On traitera succes.
sivement par Ie violet de gentiane, la solution de Lugol
et Ie picrocarmin OU les coupes se decoloreqt partielJe-
ment. Laver en suite a l'eau, puis it l'alcool absolu jus-
qu'a ce que l'exces de violet disparaisse et que les coupes
presentent une teintejaune rougeiltre.
On peut aussi' laisser lcs coupes immergees pendant 4 a
5 heures a l'etuve a 37 0 dans une solution alcoolique con-
centree d'eosine ,puis on les lave a I'alcool a 95 0 et on les
colore pendant environ 5 minutes par l'hemateine de Mayer.
On lave en suite longuement en suivant la decoloration au
microscope, jusqu'a ce que la teinte eosine soit tres affai-
hlie. Les massues sont rouges tandis que les elements eel.
lulaires environnants ont pris la double coloration.
On peut egalement employer la thionine pheniquee dt!
M. Nicolle ou la methode de Ziehl telle qu'elle est utilisea
pour la coloration du baciIle tuberculeux, avec Ie bIen de
methylene comme colorant de contraste.
Pour la coloration des germes des culturell, la methode
de Gram est tres commode.
CULTURE. - Les premieres cultures sont difficiles a
obtenir. II faut broyer finement dans un mortier' d'agate
sterile, avec un peu de bouillon, un fragment de tumenr
contenant des grains actinomycosiques, et ensemencer un
grand nombre de tubes de gelatine fondue qu'on coule en
plaques et qu'on maintient a la temperature de ~2°.
Les colonies apparaissent au bout de 5 a 6 jours, sous
forme de petits points grisatres ; il faut les reporter aussi-
t9t sur gelose et sur seruql. coagule.
- En 24 heures, a l'etuve a 370 , les colonies et bientot
de petits amas saillants, granuleux, blanchatres. Au bout
de deux semaines, elles deviennent confluentes, seches,
jaune rougeatre ou brique et sont constituees par des
nodules adherents it la profondeur de la gelose. A l'exa.
MICROBIOLOGIE 30
'466 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
men microscopique, on ne ~oit que des filaments fins,

ramifies. On peut les reensemencer facilement dans Ie
bouillon alcalin OU elles se developpent en petites houppes
autour d'un noyau.dense. Le bouillon reste limpide.
Les Actinomyces poussent aussi tres bien, mais plus
lentement, sur pomme de terre et y prennent une couleur
jaune rougeatre. lIs peptonisent lentement Ie lait. Leur
temperature optimum de croissance est de 33 a 37°.l1s
resistent longtemps a la dessiccation, mais Ie chauffage a
75 0 les tue en 5 minutes.
Les tumeurs actinomycosiques s'observent chez l'homme,
Ie breuf, Ie pore, Ie cheval, I'ane, beaucoup plus rarement
chez Ie chien, Ie chat, Ie mouton, Ie cerf, Pours et l'ele-
phant.
*
G. - Mycetomes.
Les mycetomes sont des tumeurs mycosiques inflam-
matoires, produisant des grains de couleur et de dimen-
sions variables, formes par un feutrage mycelien et pou-
vant etre elimines a l'exterieur par des fistules plus ou
moins developpees (Brumpt).
II en existe plusieurs varietes. L'isolement du cham-
pignon est assez difficile.
Les grains constituent un bon rrlateriel d'ensemen-
cement. On peut aussi puiser, avec une pipette sterile, a
I'interieur d'un nodule ulcere, prealablement lave al'ether
puis a l'alcool iode, et ensemcncer ·daps un bouillon lege-
rement alcalin. Les cultures apparaissent lentement, apres
deux semaines environ, sous forme de nodules arrondis,
grisatres, qu'on reensemence en suite sur pomme de terre,
sur carotte.et mieux dans un milieu constitue par 100 cen-
timetres cubes d'infusion de fain additionnee de 4 grammes
de gelatine et 4 grammes de glucose On obtient aussi un
bon developpement sur gelose glycerinee glucosee. Les
colonies, d'abord grisatres, deviennent confluentes, volumi-
neuses, rouges a la peripherie. grises au noiratres au cen-
tre, ratatinees et plissees, Elles croissent lentement, mais
sont resistantes a la dessiccation et restent vivantes pen-
'dant des mois. A l'examen microscopique on lesArouve
MYCOSES 467
constituees par defins filaments transversalement divises en
segments d'inegale longueur, tres petits dans les vieilles
cultures, se colorant aisement :par les couleurs basiques et
prenant Ie Gram.
La maladie appeIee Pied de Madura est' assez commune
dans l'Inde. dans Je Levant, dans I'Afrique du Nord et au
Senegal.
H. - Teignes.
On donne Ie nom de teignes aux mycoses de i'epiderme,
du cheveu et du poil.
Le milieu de culture Ie plus favorable est la gelose neu-
tre et sucree de Sabouraud, dite milieu d'epreuve, parce
qu'eUe permet la difl'erenciation des especes Sur ce milieu,
les especes degenerent. On les conserve mieux sur les
milieux de Srtbouraud sans hyd_rates de carbone.
~exanren microscopique des squames et des poils s'opere
suivant la technique indiquee .
..
1. - Blastomycoses.
Les. bla~tomycoses sont' produites par des levu res et
formes levures de' champignons.
Le muguet (Endomyces albicans) est la blastomycose la
plus commune. Les froWs de I'exsudat blanchatre qui
recouvre les mugueuses. colo res par Ie Gram, montrent des
formes brunes et quelques filaments. La culture sur ca-
roUe donne des colonies blanches, cremeuses, carac.teris-
tiques;
La, LYlJ1phallgile epizootiqlle des solipedes (Cryptococcus
'farciminoslls, de Rivoltal est une affection des chevaux,
mulets, anes, qui est tres repandue dans Ie bassin medi-
terraneen.
Ensemencer un demi-centimetre cube de pus sur gelose
de Sabouraud et meUre les tubes a 34-35 0 • A cette tempe-
raturtj les colonies apparaissent au bout d'une dizaine de
jours.
Dans Ie pris, les cryptocoques 'se colorent par Ie Giemsa.
lIs prennent mal Ie Gram, mieux Ie Claudius.
CHAPITRE XXXIX
MICROBES AEROBIES ET ANAEROBIES DES PLAIES,

ANAEROBIES DES PUTREFACTIONS ET DE L'INTESTIN
I. - MICROBES AEROBIES
Outre les streptocoques, staphylocoques, B. proteus, B.

coli, B. pyocyaneus, on trouve, parfois, dans l~s plaies, des
germes aerobies d'un type particulier, dont les plus fre-
quents sont les suivants :
A. - Bacillus anthracoides.
(Hiippe el Wood).
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Bacille a' extremites l~ge.
rement arrondies. Mobile. Sporule. Offre l'aspect du B.
anthracis: .
Coloration. - Prend Ie Grain.
Culture. - Aerobie facultatif.
Bouillon glucose. - Trouble abondant, puis. voile qui
se detache, tombe, se reconstitue et reto~be en laissant
une collerette.
Odeur aigrelette.
Gelose. - Meme aspect que B. anthl'acis.
GeJatine. - Par piqure, strie grise avec halo de colonies
punctiformes. Liquefaction lente. Voile a la surface.
Serum coagule. ~ Liquefacti9n progressive.
Pomme de terre. - Culture abondante, humide, jaune,
virant au brun par vieillissement.
Pathogene pour la souris. Non pathogene pour Ie cobaye.
B. - 'Bacillus pseudo-redematis maligni.

(San Felice.)
EXAMEN A L'ETA'l1 FRAIS; - Batonnet it extremites
arrondies. Mobile. Non sporule.
MICROBES ANABROBIES DES""PLAIES 469
Coloration. - Ne prend pas Ie Gram.

Culture. - Bouillon. - Trouble puis flocons. Reaction
alcaline;
Gel~se. - Ruban grisatre .
. Gelatine. - Non liquefiee.
Pomme de terre. - Enduit visql1eux, jaunatre.
Pathogene pour cobaye, lapin, souris.
II. - MICROBES ANAEROB1ES
A. - Vibrion septique et Bacillus Chauvrei.

(Charbon symplomalique).
- .
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Batorrnets a bouts .arrondis,
mobiles (mouvements onduleux) cilies, souvent reunis en
chainettes, spores centrales ou subterminales deformant
Ie corps du microbe (clostridium) aspect de massue, de
barillet ou de fuseau. Les spores ne se produisent pas
dans l'organisme vivant.
COLORATION. - Se colorent par toutes les couleurs
d'aniline. Prennent Ie Gram, mais se decolorent facilement
si on prolonge trop l'action de l'alcoo1. Spores et cils colo-
rabIes par les procedes decrits au chapitre VII.
CULTURE. - Anaerobies. - Poussent entre 30 et 400 •
Optimum 370 • Le bouillon Martin, glucose a 2 p.1.000, frais
est Ie milieu de choix. En 15 heures, trouble abondant et
M.gagement de gaz, puis des flocons apparaissent dans Ie
milieu, se deposent, Ie degagement gazeux s'arretc et, en
48 heures, Ie Iiquide est clarifie. Odeur butyrique.
GelSltine. - Liquefiee lentement et souvent disloquee
par les gaz. Colonies arrondies, laiteuses. Aspect arbo-
rescent, en chenille, Ie long de la strie.
Gelose. - Colonies arrondies, lenticulaires .il. bords
arborescents, degagement gazeux dans la gelose de Veillon.
, Serum coagule. - Non liquefie.
Lait. - Lentement coagule (5 a 20 jours), puis Ie caiUot
se retracte, se fragmente, et Ie liquide se clarifie.
Font fermenter Ie glucose. Ie galactose, Ie levulose, Ie
lactose et Ie maltose. 'Ne forment pas d'indol. ou seule-
ment des traces. Produisent une toxille (Roux et Cham-
berland) et une hemolysine (M. Nicolle). Pathogenes pour Ie
hamf, Ie mouton, Ie cob aye et Ie lapin. Ce dernier ani-

mal est plus sensible a l'inoculation intramusculaire qu'a
l'inoculation sous-,cutanee. Les deux microbes ont des
caracteres et des proprietes presque identiques. lIs sont
generalement consideres comme appartenant a la me'me
espece.
B. - Bacillus perfringens.
(Veillon el Zuber.)
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Bacille trapu, droit, a bouts

a peine arrondis, isole ou en diplobacilles, ~ncapsule, non
cilie, immobile. Spores ovalaires medianes, terminales ou
libres, rares dans les milieux artificiels.
COLORATION. - Se colore par toutes les couleurs d'ani-
CULTURE. - pH = 6,0-7,6. Anaerobie strict. Culture
rapide en bouillon ordinaire, plus abondante en }rouillon
glucose a 2 p. 100; trouble, degagement gazeux, odeur
butyrique; finalement les microbes se deposent et Ie
liquide s'eclaircit. .
Gelatine glucosee. - Liquefaction lente et incomplete.
Gelose glucosee profonde. - Colonies lenticulaires avec
petites protuberances. - Degagement gazeux abondant,
entrainant la fragmentation du milieu.
Serum coagule. - Rurement attaque.
Ovalbumine coagulee. - Faiblement attaquee,. devient
parfois translucide.
Lait. - Coagule en 24heures, puis caillot retracte, spon-
gieux par accumulation de gaz. Le lait tournesole rougit ;
odeur butyrique.
Attaque Ie gl,p.cose, levulose, galactose, maltose, lactose,
avec degagement gazeux et production d'une forte acidite.
Certains echantillons font fermenter l'inuline et la glyce-
rine ou l'une de ces deux substances seulement.
Pathogene pour les animaux et l"homme. Frequelhmcnt
rencontre dans les plaies souillees. Produit des phlegmons
gazeux, de la gangrene.gazeuse et parfois de la septicemie ..
MICROBES ANAEROBIES DES PLAIES 4.7.1
Le p_igeou, ]a souris et Ie cobaye sont tres sensibles, Ie

lapin pl!ls resistant.
Produit une toxine et une hemolysine.
.. «.
C. - Bacillus bifermentans.
(Tissier et Mariel/g).
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Bacille epais, bouts legc-
rement arrondis, immobile, non cilie, sporule.
Coloration . ...::.. Prend Ie Gram.
Culture. - Anaerobie.
Bouillon glucose. - Trouble en 24 heures, avec degage-
ment gazeux.
Depot muqueux adherent.
Digere lentement la gelatine, Ie serum coagule, Ia caseine
et la viande. Donne de l'indol, H2S et NH3.
Attaque glucose, maltose, levulose, mais non lactose ct
amIdon.
Non pathogene. Non toxigene.
....*
D. - Bacillus putrificus.
(Bief.l.stock.)
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Bacille it bouts arrondis,

mobile, cilie, sporule.
Colol'(1tion. - Prend Ie Gram.
Bouillon. - Trouble en 24 heures puis depot.
Tres proteolytique. Liquefie la gelatine, Ie serum coa~
gule et l'ovalbumine.
Digere Ie lait sans coagulation massive.
Attaque faiblement Ie glucose et Ie lactose. Sans action
sur Ie saccharose et la dextrine.
Non pathogene, -sauf peut-etre pour la souris (Hibler).
Secrete nne toxine pen active.
4';2 MALADIES INFECT IE USES. TECHNIQUES SPSClALES
E. - Bacillus tertius.
(Henry.)
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Bacille a bouts arrondis,
irregulierement mobile. cilie, spores terminales rondes,
rappelant celles du bacille tetanique.
-Culture. - Anaerobie.
Bouillon glucose. - Trouble, puis depOt granuleux.
Gelose profonde glucosee. - Production de gaz.
Ne liquefie ni la gelatine, ni la caseine, ni Ie serum coa-
gille.
Acidifie et coagule lentement Ie lait.
Attaque glucose, levulose, maltose, saccharose, lactose,
mannite mais non inuline et glycerine.
Peu pathogene.
..
*
F. Bacillus redematiens.
(Weinberg et Seguin.)
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Bacille long, droit, incurve
ou sinueux, a bouts arrondis, cilie, mobile seulement en
l'absence totale d'oxygene. Spores oval aires subterminales
(formes en raquette) abondantes.
Goloration. - Preud Ie Gram dans les cultures tres
jeunes, mais non dans les cultures figees.
Culture. - Anaerobie strict. Trouble Ie bouillon glu-
cose. puis les microbes s'agglutinent et se deposent. Dega-
gement gazeux. Odeur fetide sui generis.
. Gelatine. - Non liquefiee. sauf lorsqu'elle est fortement
sucree (2 p. 100.)
\ Gelose profonde nitratce. - Colonies arborescentes, it
centre opaque s'eclaircissant en 2-3 jours.
Serum et ovalbumine coagules. - Non attaques.
Lait. - Lentement coagule (5 a 30 jours), puis Ie caillot
se desagrege. I
MICROBES ANAEROBIES DES PLAIES 473
Attaque plus fortement galactos~, glucose, maltose et

dulcite que levulose et saccharose.
Tres pathog~ne pour les animaux de lahoratoire. Produit
chez Ie cobaye, par inoculation sous-cutanee, un oodeme
gelatineux blanc ou rose, peu depressible. Mort en 6·
18 heures.
Produit une toxine tres active et une hemolysine.
G. Bacillus histolyticus.
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Bacille polymorphe. a bouts

artondis, cilie, mobile, sporule. Spores generalement ter-
minales.
Culture. - Anaerobie strict. Trouble uniformement
Ie· bouillon glucose, puis se depose.' Pas de degagement
gazeux. Odeur legerement fetide.
Liquefie rapidement la gelatine. Digere Ie serum coagule,
1a viande et l'ovalbumine. Coagule Ie lait, puis digere Ie
caillot.
Attaque glucose, levulose, maltose.
Pathogene pour tous les animaux de Ip.boratoire ': redeme,
digestion des tissus, denudation des os.
Produit une toxine qui provo que les m8mes desordres
que Ie microbe.
H. - Bacillus sporogenes.
(Metchnikoff· )
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Cilie. Mobile surtout dans

les cultures jeunes. Sporule. R~ssemble au vibrion sep-
tique. Tres Jrequent dans les plaies de guerTe.
Culture. - Anaerobie strict. Trouble en 24 heures
Ie bouillon ·glucose, degagement gazeux et odeur putride.
Les microbes s'agglomerent en longs filaments qui se

deposent peu a peu, et Ie milieu s'eclaircit lentement.
Liquefie rapidement gelati.ne, serum et ovalbumine coa-
gules. Coagule Ie lait en grumeaux qu'il digere ensuite.
Digere la viande: Attaque glucose, levulose, maltose. galac-
tose, mannite. Forme H2S et donne des traces d'indo!.
Certaines varietes sont pathogenes pour Ie cobaye (gan.
grene gazeuse_ putride) et pour l'homme lorsqu'elles sout
associees a d'autres microbes.
Produit une toxine (Weinberg et Seguin) et une petite
quantite d'hemolysine. .
..
1. - Bacillus fallax.
EXAM EN A L'ETAT FRAIS. - Bouts arrondis. Cils nom-

breux et longs. 'Mobile. Exceptionnellement sporule.
Encapsule dans les ,cultur~s jeunes et les s6rosites patho-
Iogiques.
C%ration. -'-- Prend Ie Gram.
Culture. - Anllcrobie. Trouble Ie bouillon Mal,tin 'avec
degagem.enLgazeux £t odeur aigrelette. Non proteolytiquc
mais fortement saccharolytique. Pathogenle pour Ie cobaye
et_la souris, non.pour Ie rat. Toxine peu active .
••
J. - Bacillus aerofretidus,
(Weinberg et Se.guin.)
Bouts arrondis. Mobile. Prend. Ie Gram. Non sporule.
Anaerobie strict. Trouble Ie bouillon Martin; depot pulve-
rulent. Odeur [etide, surtout dans les vieilles'CuItures.
Liquefie rapidement la gelatine. Coagule et attaque
l'ovalbumine et la rena transparente. Coagule Ie lait et
digere Ie caillot. Digere l'e serum coagule. Peu pathogene
et seulement pour Ie cobaye.
Ne secrete ni toxine,.ni hemoIy.sine.
. *"
K. Bacille de la necrose.
(Lo41Zer, Schmorl.)
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Longs filaments dI'oits ou
llexueux, souvent enchevetres dans les lesions et les (:ultures
recentes ; predominance des formes courtes dans Ies lesions
anciennes et les vieilles cultures.
Coloration. - Toutes les couleurs basiques d'aniline. Ne
prend pas Ie Gram.
CulLure. - Anaerobie strict.
Bouillon Martin. - Trouble uniforme en 10-12 }1eures ;
ondes soyeuses et degagement de bulles gazeuses lIar agi-
tatio~. Apres 24 heures, depot blanc sale, puis Ie milieu
s'eclaircit La culture est plus rapide et Ie degagement plus
abondant dans Ie bouillon glucose it 2 pour 1.000. Odeur
fetide.
Geh-;:,e \:m:,l\.nee. - C~l<mie~i\:'~lie\:'. ? hm~d\:'de~h.i.qlJ.ete\1,;
legerement brunatres et semi-transparentes ..
Gelose' Veillon. - Colonies Ienti!!ulaires du troisieme
au cinquieme jour. Bulles gazeuses.
Serum coagule. - Trainee grisatre.
Lait. - Coagule du quatriem~ au sixieme .lour, par aci-
dification. .
Attaque glucose et lactose mais non saccharose et glyce-
rine. Tres pathogene pour Ia souris et Ie lapin, moins pour
Ie cheval, Ie breuf, Ie porc, Ie mouton et Ie cobaye. Non
pathogene pour Ie chien, Ie chat, 1a poule, Ie pigeoo.
Produj.t une toxine active, dont l'inoculation sous, 1a
peau du cobaye provoque une eschare ; Ie lapin se Illontre a
peu pres insensible (Cesari) .
..
L. - Bacille tetanique.
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Batonnet grele, non spo-
rule dans Ie pus. Spore terminale refringente dans les
milieux de culture (forme en epingle). Legerement mobile
en I'absence d'oxygene et seulement avant la sporulation.
476 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES ::'PECIALES
Nombreux cils peritriches (30 a 100) en culture jeune non

sporuIee.
Coloration. - Toutes les couleurs basiques d'aniline.
Spores colorables par la methode de Moeller comme celles
du charbon. Prend Ie Gram.
Culture. - pH Iimites = 5,5-8,3; optimum = 7,0-
7,6. Anaerobie. Supporte la presence de faibles quantites
d'oxygene. Culture entre 15 et 42 0 • Optimum 37°. Bouillon
frais trouble en 24 heures, puis eclairci par dep~t des
spores. Odeur caracteristique de corne brulee.
Gelose. - Culture en arbre de pin par piqure. Degage-
ment de finesbulles gazeuses (coa, CIf').
Gelatine. - Colonies radiees. Degagement de petites
bulles ,gazeuses. Liquefaction lente.
Lait. - Non coagule. ,
Pomme de terre. - 'Culture maigre, filaments. fins, sans
spores.
Pulpe de cerveau. - Excellent milieu (von Hibler), noir-
cit par formation de sulfure de fer.
Spores tres resistantes a la chaleur (tuees en 4 heiIres it
90°, en 2 a 3 minutes a 1000 ) et aux antiseptiques. Abon-
dantes dans l'intestin des herbivores et la terre des jar-
dins.
Tous les animaux de laboratoire S"ont sensibles a l'infec-
tion tetanique, la·souris, Ie Tat et Ie cobaye, en particulier.
Ie lapin et Ie chien resistent davantage. L4 cultures jeunes
ne sont pas virulentes. Des que la toxine est formee, leur
inoculation donne Ie tetanos. Les spores lavees et chauffees
it 800 sont inoffensives; mais lorsqu'ell~s sont protegees
contre la phagocytose par un caillot sanguin, des corps
etrangers ou des microbes associes, ou quand elles sont
injectees avec une dilution d'acide lactique ou de sulfate de
quinine, elles deviennent tetanigenes.
Le bacille. tetanique reste localise au point d'inoculation
ou il secrete une toxine, d'une extreme activite. Le milieu Ie
plus favorable a la preparation de 1a toxine tetanique est l~
bouillon Martin frais, faiblement alcalin, additionne de
1 p. 100 de peptone et de p,5 p. 100 de NaC!. Culture a 370.
Le maximum d'activite est observe vers Ie 18e jour .;,1a
toxicite diminue ensuite. surtout au contact de l'air. Les
cultures decantees, non filtrees, sont plus actives. On peut
MICROBES ANA"SROBIES DES PLAIES 477
obtenir des filtrats hypertoxiques en ensemenyant Ie bacille

tetanique dans un filtrat provenant d'une culture de
20 jours et en repetant la meme" operation une ou deux fois.
U ne toxine initiale tuant la souris au 1/1.000 de centimetre
cube peut ainsi devenir mortelle pour Ie meme animal a
1/100.000 de centimetre cube.
La toxine tetanique est facilement modifiee ou detruite par
la lumiere et 1M agents oxydants, par la bile dont 1 centimetre
cube neutralise 200 doses morteHes pour Ie cobaye (Vincent);
Ie trichlorure a'iode, la solution de Lugol, Ie formol (Ra-
mon). On la conserve en solution glycerinee au froid ou sous
huile de paraffine. Elle est precipitable par Ie sulfate d'am~
moniaque a saturation. Le precipite dialyse et seche a 220
est stable. Injecte aux animaux sensibles, il provoque
l'apparition d'un tetanos typique.
M. - Bacillus botJllinus.
Bacille rectiligne, a bouts arrondis. Sporule. Legerement

mobile. Prend Ie Gram. Anaerobie strict. Temperature
optimum 220. Trouble Ie bouillon glucose avec degageIl)ent
gazeux. Odeur butyrique. Colonies transparentes, arron-
dies, jaune brun sur gelose glucosee. Gelatine, lentement
liquefiee.
Peu pathogene. Rencontre dans les aliments alteres ;
secrete une toxine tres active dont l'injection reproduit
les symptomes de la maladie naturelle (botlliisme).
N. - Bacillus fusiformis.
EXAMEN A L'ETAT FRAIS. - Bacille long, uectiligne ou
incurve, parfois sinueux, extremites effilees et partie
mediane renflee. Non cilie. Immobile.
f'Coloration. - Toutes les couleurs basiques d'aniline.
Ne prend pas Ie Gram.
Culture. - Anaerobie. Culture difficile, vit en sym-
biose avec divers microbes, cocci, spirilles. On peut obte-
478 MALADIES INFECT IE USES. TECHNI!)UES'SPE;CIALES
nir des t!oIonies pures, repiquables dan's Ia geIose'sucree tie

Veillon.
Pathpgene (pourriture d'hOpital, angine de Vincent), est
generalement associe it un fin spiriIIe.
O. - Bacillus bifidus.
Bacille polymorphe, meme dans les cultures jeunes ; fila-

menteux, vesicuIeux, bifurgue dans les vieilles cultures.
Immobile. Prend Ie GraJ;n. Anaerobie.
Peu pathogene. Tres abondant dans l'intestin des nour-
rissons eleves au sein.
P.- Bacillus asthenogenes.

P. Noel Bernard a isole en Cochinchine ce microbe du
sang et du tube digestif des mulades, dans la phase initiale
(gastro-intestinale) du Beril;leri. Ce germe est morphologi-
quement tres proche du Bl},pillus meg.atherium de Bary,
,mais s'en distingue par des caracteres culturaux, hiochi-
miques et pathogenes.
Tres repandu dans la natu,e sous sa f6rme sp0rulee,
.saprophyte du tube digestif de l'homme et des -animaux en
Cochinchine sous sa forme bacilI~ire, il etait apparu d'a,bord
comme essentiellement aerobie. L'etude de son action
pathogene a montre que, dans l'organisme'l sous l'influence
de Ia vie parasitaire, il peut dev{lnir anaerobie de predi-
lection.
EXAMEN A L'ETAT FRAIS, - Uatonnet Iegerement ar-
rondi, de 4,5 fL sur 1,5 fL, cilie, IIJobile; ne produit pas de
spore en culture anaerobie, sporule au contact de I'air:
Culture anaerobie. - Temperature optima: entre 35 0 et
380. Trouble Ie bouillon avec opdes moirees sans voile.
Sur gelose inclinee, culture gr~le. Produ~tion de, bulle's
de gaz dans Ie cuIot: En gelose Veillon, colonie,,> lehticu-
laires, cotonneuses.
Fait virer au rouge et decolore avec productio n de gaz

les geloses tournesolee, glucosee, maltosee, lactosee, sac- _
charosee, Vire au jaune serin Ie rouge neutre, Noircit la
gelose au plomb. Liquefie la gelatine et Ie serum coagule.
Attaque faiblement ),~lbumine d'reuf coagule. Opere la
digestion trypsique des matieres proteiques jusqu'au stade
tryptophane. Ne produit pas d·indo~. Avec I'amidon du riz,
production d'une acidite volatile (acide propionique avec
traces d'acide acetique et butyrique).
CULTURE AEROBIE. - En bouillon, voile blanc, non
plisse. Sur gelose, enduit cremeux. gras. Fait virer au
rouge, sans production de gaz, les geloses glucosee, mal-
tosee, saccharosee, ne fait pas virer Ie rouge neutre, ne
noircit pas la gelose au plomb.
Donne une spore ovalaire, mediane, de 2,5 p. sur 1 p., qui
determine la forme en naveUe et qui resiste a la tempera-
ture de 100 0 •
Pathogene pour Ie porcelet (voie digestive).
En culture anaerobie secrete une toxine qui provoque chez
les animaux des lesions identiques aux lesions de la'maladie
experimentale consecutive a l'ingestion de cultures pures
{porcelet) et du beri-beri humain.
CHAPITRE XL
VIRUS INVISIBLES ET VIRUS FILTRANTS

(ULTRA VIRUS)
Les virus « filtrants »etaient, jusqu'a ces dernieres annees,

consideres comme appartenant tous au groupe des microbes
invisibles ou ultramicrosc,opiques. Nous savons actuellement
que certains microbes filtrants, tel celui de la fievre jaune,
de la peripneumonie des bovides' et de la rage, peuvent etre
deceIes au microscope, et que certains bacilles, comme celui
de la iuberculose, passent a travers les bougies Chamber-
land. On ne peut.. done plus affirm~r que, Ie cara«tere de
filtrabilite implique celui d'invisibilite. En attendant que
la place, dans la classification, des microbes de la peripneu-
monie, de l'agalaxie contagieuse de la brebis et de la chevre,
et de la rage soit etablie, nous maintiendrons provisoirement
ces maladies dans ce gronpe. Celui-ci comprend avec e1les'
La diphtel'ie aviaire, Ie typhus exanthemaljque, la fievl'e tache-
tee des Montagnes Rochellses, la fievl'e fluviale du Japon, la
scarlatine, la rougeole, la poliomyelite epidemiqjle, l'encepha-
lite epidemique, l'herpes, La grippe, la fievre de trois jours ou
fiev.re d pappatacis, la dengue, Ie lrachome, la vaccine, La cla-
veLee, La fievl'e aphtease, la peste bovine, La peste porcine,
La peste des ·oiseaax, La maLadie des chiens, l'anemie pe/'/zl-
cieuse du cheval et la horse sickness.
TECHNIQUE DE LA FILTRATION DES VIRUS. - Pour ope-
rer la filtration dOun liquide pathologique virulent, il faut
Ie diluer dans dix a vingt fois son volume d'eau physiolo-
gique pour eviter Ie colmatage de la bougie par l'albumine
-pure.
La filtration doit etre effectuee sous faible pression et
aussi rapidem,ent que possible. Si elle durait trop long-
temps, la culture des microbes se ferait a travers les. pores
de la bougie et les resultats n'auraient plus aucune signifi-
cation.
Pour les autres details sur la filtration, voir chapitre ll.
VI1WS INVl$lBLES ET VIRUS f'1l:I'JlA-lVTS 481
..
A. - RAG I:::
1. - Extraction de Ia moelle pour Ie diagnostic de la

rage chez Ie chien.
Placer Ie cadavre en position sterno-abdominale.

Flechir tres fortement la tete vers Ie sternum pour metire
bien en relief la base du crane.
En arriere de la protuberance occipitaIe externe et a 2 ou
5 centimetres de cette eminence, suivant Itt taille de l'ani-
mal,'inciser profondement.et largement la peau et les m,us~
cles pour arriver au ligament capsulaire de l'articulation
occipito-atloidienne.
Sectionner ce ligament qui recou vre Ia moelle placee d~hS
Ie canal rachidien.
Prcl.e:v.er, de cette moeHe mistl ~ u.n, )J.U fr~gment Je ,Plus
important possible. Pour cela, sectionner cet organe tres
en avant et tres en arriere dans l'interieur du canal rachi-
dien.
Introdnire aussitot ce fragment dans un flacon contenatlt
de la glycerine a 300 B~, s'terHe.
II. - Methode d'Oshida 1'.QN.r l~e~trl;t.Ctjo,Jjl. .df'ls ·mq~\~s

ra'biques de lapin.
Le lapin est etendu et fixe P'lr s.a f.u;:e flbpp,min.~le .l;lurWl

pl3.lteau :LaQi:6;]1llSie.
Alv.ec les .cisftaJ:liX. ,cU)t).f'AeS, (j)JIl co.up,e !l#s ,poils .de J;t .r~Wl
dOl'lso-loUl1baire ~1;1lr.5;O\1,() c;enti.\llbtres.de lfirgeu,r •.Q.n .u~IP'~e
-tol1tecebte.region '<lV~C)1n bep B;t.l.Ils,en.
On coup.e e.Jjl-smte, tropsversale,me\}t, Ia.U :Q1o:yel1 d'un nis-
touri sterile, la peau du cou et les plUscies lious-ja,cen\s AU
,ni vean· de la.;;I.e ~u 40 iVertehre ;eerviptl{ie .j 'P).lis ~a .pepp ~t les
llllusaies de la .re.gioJ1 J@ombaire, au ni;y~al1 de,la.3 e,ou 4" "IVW-
:tebr-e ,lomhaire .
.An.lec-une fort.e Jpa.iret<ie oaiS;etluX ~tertUes Ptl,seQtiop..ne ~:J,llll
seuLcQupd:a..()O'lonne.".er,t~bI;aJeauiX. 1Jl6.J;n6fi wadrpits (¥.ert~x:e.s
MICROBIOLOGIE 31
48'2 MALADIES INFECT1EUSES. TECHNIQUES SPEC/ALES
cervicales et verlebres lombaires). On reprend Ie bistouri

pour degager Ie cou ot attirer. Ia tete en avant, afin de faire
de Ia place pour l' enlevement des moeUes.
Fig. 24. - Extraction de la Inoell. rabique de lapin sui "'tnt la methode. d'O.hid".
On reprend en suite Ie bec Bunsen et on flambe rapide-'

ment les deux sections de la colonne vertebrale.
On a prepare et sterilise d'avance desmandrins de 0 m. 40
de longueur et 2 millimetres de diametre, termines a une
extremite par une section nette, et portant\ a l'autre une
courbure en anse formant poignee.
L'extr~mite droite porte un petit tampon d' ouate sterile,
enroule tres serre et dontl'epaisseur est calcu}ee pour pene-
trer dans Ie canal rachidien.
Pour extraire la moelle, il suffit d'introduire ce mandrin
dans Ie canal medullaire, bien horizontalement, d'arriere en
avant, par les lo'mbes. La moelle est refo'ulee (sans ses mem-
'branes) et sort en tortillon par l'ouverture cervicale sous
laquelle on a pris soin d'etendre un carre de papier b'uvard
sterilise pour 1a recevoir.
II est recommande de l'extraire en deux temps. Lorsque
]a premiere moitie de la moelle est etalee sur Ie carre de
papier, on'la coupe avec une pince et une paire de-ciseaux
fla~bes, et apres avoir·fixe un fil en boucle a l'une de ses
exfremites, on introduit chaque tron~on dans un flacon a
,,-
VIRUS INVISIBLES ET VIRUS FlLTRANTS 483
large ouverture garni de quelques fragments de potasse
anhydre. (Fig. 24.)
Les moelles rabiques attenuees par dessiccation lente dans
ces flacons, pendant 1 a 6 jours, servent a preparer les
emulsions vaccinales.
II est commode de les conserver par immersion dans des
pots-bans a moitie remplis de glycerine pure a 30 0 Baume,
sterile (Methode de Calmelte). On peut ainsi disposer de
reserves de moelles att~nuees, de 1 a 6 jours, immergees
en glycerine,liquide dans lequel leur virulence reste fixe
pendant environ deux semaines. On en prel(~ve chaque
jour, suivant les besoins, des fragments qui, apres avoir
ete essores sur papier buvard sterile,. sont broyes, emul-
sionnes dans l' eau pliysiologique sterile, a raison de 2 milli-
metres de moelle par centimetre cube, et utilises pour 1a
vaccination des sujets mordus.
III. - Diagnostic par la recherche des corps de Negri.
On peut l'effectuer par l'examen a I'etat frais de la corne

d' Ammon 1. Pour isoler celle-ci, apres avoir degage les
hemispheres cerebraux de la boite cranienne, on coupe
transversalement I'un d'eux jusqu'au corps calleux qu'on
souleve avec Ie trigone, et on penetre dans la portion tem-
porale du ventricule lateral. Le plancher du ventricule
lateral est alors decquvert et la corne d' Ammon apparait
avec sa forme caracteristique. On y fait, avec un bistouri fin,
une coupe mince, perpendiculaire a &a surface et, avec une
aiguille, on recueille une parc,elle de substance grise de la
circonvolution. C'est ceUe parcelle qu'on dissocie sur un
porte-objet, dans une goutte de solution 'tres diluee d'acide
acetique (1 : 10.000), et qu'on examine a 1'etat frais; ou bien
on fait des frottis qu'on seche immediatement et qu'on fixe.
avant de les colorer par rune des methodes suivantes :
a) Methode de Mann. -- 1° Coupes. - Fixer Ie tissu
de Ia corne d'Ammon dans Ie Iiquide de Zenker et enro-
(1) Si ron ne dispose pas de la corne d'Ammon, les recherches doivcllt porter sur
des fragments d'ecorce cerebmle et du cervelet. L'etude de la lnoelle allongee et des gan-
glions spinaux: (grmgliOll'i ccn'icaux, ganglion de Gns!'cr) fonrnit des resultnts moins
constants.
lt84 MALADIES INFECTlBUSES. TECHNIQUES SPl!;CIALES
her dans la paraffine. On peut fixer pius rapiclement 1es

minces fragments de tissu par immersion dans 15 .eenti-
nretres cubes d'aceto'llle, a la temperature de 3.7 0 , 'pendant
30 a 40 minutes. On les p'loo'gB enSiUiil:e dans de 1a pa:r!lfiine
fondue it 55 0 pendant 1 heure it 1 h, 15, puis res pieces son:t.
montees at coupees.
Colorer dans 'la sca:l,ution suiva:nlte, 12 a 24 heures (3G-mi ...
tlilltes suffisent pour des IDlDttis) ;
Sol. aq. alp. 100 de bleu de methyle. 35 ce.
Sol. uq. it 1 p. 10!) d'eosine. . . . . 35 ce.
Eau disLillee. • . . . . liOO ,ee.
Laver rapidement a l'eau.. Pl(;JIllg.er q.uel~ues min.utes

dans l'alcool absolu. ImmergeI' ell'Vj,n).u 10 minu.tes., _j,usqu'i\
~olora.tion rose dans ~
Alcool Ilbsolu, . . . . . . . . . . . . . . . 3D ce.
Sol. it 1 p. 100 de soude eaustiqu~ dans l'alcooI absolu. X gtt.
. Laver rapidement a l'alcool absolu. Plonger 1 it 2 mintites

dans l'eau jusqu'it ce que les coupes deviennent bleuatr.es.
Plonger 1 it 2minutes dans l'eau additionneede-2 ou 3 gourtes
(f'acide acetique p. tOO. Replonger dans l'a'1cool ahsolu.
Xylol. Baume.
Les corpuscules de Negri sont colon~s en.rouge vio'let {once,
Jes nucleoles des cel'lules nerveuses en rouge, les noyaux
et Ie tissu ceIlulaire en Meu fonce, les glo'blilJs rouges en
1'ose pale.
20 'Frotlis. - On prepare plus commodement de simples
Frottis par ecrasement d'une parcelle de substance grise de
III corne d'Ammon entre deux porte-objets. Apres dessic-
cation rapide a l'etuve, on plonge les lames 'encore humiaes
aans l'alcodl methylique pur, puis dans un me1ange it parties
egales d'alcool absolu et d'ether. On a prepare d'avance
des colorants ci-apres (Methode lle ~elltz) ;
A. i Eosine extra B de HreehsL • . . . • o gr. 5
( Aroool a 60°. •...••.•.• 100'ce.
5 Bleu de metl)ylene B de Hoochs!. sol. al. sat. . 30 ce.
B. ( Sol. de potnsse de 0 gr. 01 p. 100. • . • . . 100 ce.
c (Alcool absolu. • . . . . . • . . . . . 30 cc.
. (Sol desoudecaustiquea 1p.100dansalcoolahsolu. V gtt .
D (Alcool absolu. . • • . . . . . . • . • 30 ec.
, • t Sol. acide acetique iI 50 p. 100. • • • • • • I gUo
,
/'
VIRVS INVISIB£ES ET VIRUS FILTRANTS 485
On verse sur les lames porte-objets quelques gouttes de

121 soluti.on A. On 1aisse en con·tact 1 mmute. Laver a l'eau.
Colorer en suite par B, 1 minute; laver it l'eau. Essorer avec
papier buvard. Differencier par l'alcool sodique C, jusqu'a
ce que la preparatibn apparaisse faibI'ement teintee en
rose, puis par l'alcool acetique D jusqu';'J. ce que les noyaux
bleus deviennent u'pparents.
Laver rapidement a I'alcool absolu et monter, ou exami-
ner immediatement dans une goutte d'huile a immersion.
On peut encore employer la technique suivante qui rend
les « corp!'! de Negri» plus apparents dans leurs details de
structure:
Colorer dans A pendant 1 minute. Laver a l'eau. Colorer
dans B pendant) minute. Laver a l'eau. Traiter par la
solution de Gram-Lugol 1 minute. Laver a l'eau. Differen-
cier par I'alcool methylique jusqu'a ce que Ia preparation
_apparaisse rose. Laver a l'eau Recolorer par la solution B,
·30 secondes. Lavera l'eau. Essorer au papier buvard. Passer
successivement dans les alcools alcalin et acide C et D,
puis, rapidement, dans l'alcool absolu et monter.
b) Methode de Negri. - Traiter pendant 10 minutes

les coupes ou les froUis prealablement fixes dans 1'alcool
absolu par:
Eosine B IGrubler). 1 gr.
Jode en pailletles.. . o gr •. 1
lod. de potassium . . 2 gr. 2
Eau distillee 100 ce.
(Dissoudre d'abord l'iode et l'iodure de potassium dans

quelques centimetres cubes d'eau et diluer ensuite dans 50
centimetres cubes. D'autre part, dissoudre I'eosine dans 50
centimetres cubes d'eau distillee. Melanger, puis filtrer.
Conserver en flacon bouche a l'emeri.)
Apres coloration, laver a l'eau distiIlee. Traiter 5 mi-
nutes par une solution aqueuse a 0 gr. 1 p. 100de bleu de me-
thyle. Laver a l'eau distillee. Differencier dans I'alcool
a 95°. Laver a l'alcool absolu. Seeher. Eclaireir et mon-
tel' au baume. Les « corps de Negri » apparaissent brit-
lants, rouge violaee, sur Ie bleu du protoplasma 'et des
noyaux. Les hematies sont roses. Les corpuscules baso-
philes des vacuoles des « corps de Negri» sont bleus.
48G MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECIALES
C) Methode de Y. Manouelian. - Enlever, it I'aide de

ciseaux tres fins, de tres minces tr.anches de corne d' Ammon
et les immerger clans:
Acetone. . . . . . . . • • . . • • 50 cc.
Teinture d'iode. . . . • . • . . . • VI gu.
Apres 30 minutes, renouveler l'acetone sans iode, puis au

bout d'un quart d'heure, inclure dans In. paraffine. En une
demi-heure, l'inclusion peut etre achevee et les coupes sont
colorees par la methode de Mann, de 15 minutes a deux
heures, a la temperature de 38 a 40 0 •
On peut fixer les frottis de corne d'Ammon directement
sur lame par l'acetone iode pendant quelques secondes. On
lave a l'eau courante pendant une minute, on colore pen~
dant un quart d'heure a chaud par Ie Mann et on differen.~
cie par l'alcool sodique, l'alcool ahsolu, etc.
d) Methode de NissZ. - (Pour l'etude des elements cel·-
lulaires du tissu nerveux.)
Colorer pendant un temps variable, de 1 a 2 heures, dans
Ie bleu polychrome de Dnna. Differencier par Ie melange
suivant (dit de Gotha) :
AlcooI nbsolu.. • . 16 vol.
Xylol. . . . • . 5 vol.
Essence de Cajeput. . • 4 vol.
Creosote de betre. 5 vol.
Deshydrater rapidement a l'alcool absolu. X~lol.

Baume.
Les granulations des cellules nerveuses sont colon~es en
bleu, Ie tissu conjonctif en vert.
NOTA. - P. Remlinger a montre que Ie virus rabique est
filtrable et diffusible (par exemple dans la glycerine pure
et dans Ie liquide de Locke). II n'est pas influence par Ja
centrifugation.
e) Methode de Y .. Manouelian et J. ViaZa (pour la
recherche de [,Encephalitozoon rabiei, parasite .de la rage).
Pour la fixation, utiliser Ie sublime alcoolo-acetique de
Gilson modifie ou Ie sublime de Dominici.
Le premier melange est compose de parties egales d'ace-
tone pure, chloroforme et acide acetique cristallisable.
On ajoute du bichlorure de mercure en pondre, en exces.
Le melange doit eire prepare d·avance. Au moment de s'en
VIRUS INVISIBLES ET VIRUS FILTRANTS 487
servir, on ajonte goutte a goutte une solution alcoolique

concentree d'iode en agitant Ie liquide avec une baguette
de verre jusqu'a ce que Ie fixateur prenne une teinte acajou
fonce.
Le liquide de Dominici doit eire prepare extemporane-
ment. On decante une solution aqueuse saturee de sublime
et ron verse goutte a goutte, en agitant, de Ia teinture d'iode
jusqu'a teinte orangee.
A 100 volumes de cette solution, on ajoute 12 volumes de
formol a 40 p. 100 et 5 volumes d'acide acetique. II faut
Ic\voir soin de maintenir Ia teinte orangee du melange en
ajoutant encore au besoin quelques gouttes de teinture
d'iode.
Les pieces sejournel\t de deux, quatre, six a douze et
vingt-quatre heures dans Ie fixateur, puis on les trans-
porte dans l'alcool ou I'acetone iode, avant de proceder a
l'inclusion.
Les auteurs recommandent la double inclusion: d'abord
a la ceIIoYdine puis a la paraffine. Lorsque I'inclusion a la
ceIIoidine est achevee, il faut eviter de durcir completement
la masse coIIodionnee ainsi qu'on Ie 'fait dans la technique
ordinaire. La piece do it etre entouree d'une couche Iegere
de ceIIoidine assez epaisse, qu 'on laisse secher a l'air
pendant quelques minutes. Au bout de ce temps, Ie bloc
e5t mis dans Ie melange suivant :
Afcool absolu. 500 cent. cubes
Chloroforme. 50 cc.
Ce liquide remplace I'alcool absolu dans l'inclusion a Ia

paraffine. Apres un sejour de quelques heures, variable sui-
vant les dimensions de la piece, on transporte celle-ci dans
un solvant de la paraffine, toluene, par exemple.
Pour la methode de Mann, voici comment les auteurs con-
seillent de proceder :
10 Colorer les coupes pendant quelques heures a 38-400
dans Ie melange suivant, prealablt1ment porte a la meme:
temperature:
Sol. aq. de bleu de methyle (ne pas confondre
avec bleu de methylene) ii 1 p. 100.• 35 cc.
Sol. aq. d'eosine ill p. 100. 45 ce.
Eau distiII~",. . . • " • . . • • . . 100. c,<,
488 MAiADIES INFECTIEUSES. TECHNIf)OE8 SpECIALES
2 0 Laver rapidell1ehtet soigneuset11ent it Yeau de fonfaine ~

30' DMhyd'tater les coupes it {'alcool absolu ;
4 0 FaiN! agit 111 solution sui\'ante :
Alcool absolu. . . . . . . . . . • . 30 cc.
Sdiution de soude caustique alp. 100 . X gtt.
Attendre jusqu'a ce que les coupes deviennent rouges,

milis aussitot que cette teinte est obtenue, arreter la diffe-
r.enciatioh ;
50 Laver .3. l'a.!cool absolu afin d'enlever tOlite truce de
soude caustique ;
6° Plonger dans l'eau ordinaire ; des trainee" rougeatres
quittent les coupes qui deviennent bleuatres ;
70 Planget d.ans l'eau a'ciduIee par l'acide acetique
(2 gouttes d'acid~ dans 40 centimetres cubes d'eau).Imme-
diatement les coupes deviennent bleues, Attendte une
minute.
Desliyarat~r les Coupes par l'alcool absolu, edaM-cir au
I xylol et monter au haume-acide. Ce bautne-acide se pre-
pare en dissolvant Ie baume de Canada dans,du xylol prea-
lablemlmt sature d'acidesa-licylique.
Pout les frottis, les fixer humides en plongeant les lames
dans les fix.ateurs dont la composition a ete indiquee plus
haut. Les y laisser au moins un quar(Il'hellre. Colorer et
differencier comme pour les coupes.
. *.
B. - TYPHUS EXANTHEMATIQUE 1
Le typhus exanthematique, 3. sa petiode de debut, peut

etre confondu avec la grippe, la rougeole, la fievre medi- •
terraneenne, Ie paiudisme, mais, SUrtout dans nos pays,
avec la dothienenterie accompagnee d' eruption purpurique ..
En presence d'un cas suspect, faire une pOllctidn tJeinellse
pour:
a) Une hemoculture;
b) Un examen mictoscopique;
1. Technique mise au point par LEGROUX it l'Jnstitut Pastettr.

,,-
VIRUS INVISIBLE6 ET VIRUS FILTRANTS 489
c) Des sero-agglutinations ;
d) Une inoculation dans Ie peritoine de 2 cobayes ;
e) Examiuer aUssi, tous les deuxjours, Ie liquide cephalo-
rachidien apres ponc/ion lombaire.
a) L'hemoculture decele les infections typhoidique et
melitensique.
b) Si l'examen microscopiqu~, a retat frais, entre lame
et lamelle, ou apres etalement et coloration ne decele ni Ie
spirille d'Obermeier~ ni l'hematozoaire de Laveran, on
devra denombrer et diagnostiquer les leucocytes. D'apres
les indications de Ch. Nicolle, puis de Jonesco Mihaesti, l'hy-
perleucocytose oscille entre 13.000 et 20.000 leucocytes par
millimetre cube. La polynucleose est abondante ; Ie proto-
plasme des globules blancs et leur noyau sont alteres ; on
compte 5 a 6 % d'eosinophiles; vers la fin de la maladie,
(10 e a 15e jour), apparition des mononuclefiires et dispa-
rition des eosinophiles.
c) Les sero-agglutinations Se recherchent avec les bacilles
typhiqu.e, paratyphique A et B pour eliminer Ie diagnostic
de dothi~nenterie.
La sera-agglutination, dans les cas suspects de typhus
exanthematique, se pratique avecdifferentesbactt~ries isolees
de l'intestin des typhiques. Plusieurs souches ont ete pro-
posees: celIe qui, aujourd'hui, est Ie plus couramment
employee', est la culture de B. proteus X 19, de Weil-Felix ;
des cultures de ce baeille ont ete isolees en Europe cen-
trale, meridionale, en Orient et chacune semble etre plus
agglutinable par les serums des malades de sa region d'ori-
gine.
La sero-reaction de Weil-Felix n'esl pas specifique. Elle
possede neanmoins une valeur indicative lorsqu'elle est
bien observee :
Elle doit eire recherchee a partir du 1/100. Le serum de
mala des atteints de fievre typhoide peut agglutiner Ie B.
proteus X 19, d'apres Weil et Felix eux-memes, entre 1;25
et 1/40 dans 10 p. 100 des cas.
Au cours du T. E., les agglutinines pour Ie B. proteus X
/9 apparaissent ~ntre Ie 4e ct Ie 8e ;Our; elles atteignent leur
maximum vers Ie 11" jour, puis diminuent tres rapidement

apres Ie 20" ; elles persistent dans Ie serum des convales-
cents jusqu'a la fin du 2" mois apres la guerison.
Techniqlle. - Observer les agglutinations macroscopiques
totales a la temperature dulaboratoire (10 a 150 ) en notant les
taux positifs pendant les deux premieres heures, puis entre
la 5~ et 8" heure ; une agglutination totale s'opere rarement
apres ces delais. Faire la reaction dans de petits tubes de
verre de 6 a 8 miIJimetres de diametre. L'agglutination est
obtenue en petits grumeaux qu'on examinera a la loupe
pour les taux limites.
Comme pour toute agglutination, la valeur de la reac'tion
depend:
10 De la densite microbienne de l'emulsion:
L'emulsion bacterienne a la densite voulue s'obtient en
delayant, dans 5 centimetres cubes d'eau physiologique, une
anse de platine (2 mm. de diametre) d'une culture de 16 a
18 heures a 370, sur gelose. La culture de B. protells X 19
datant de plusieurs jours est peu agglutinable, et une emul-
sion preparee trop a l'avance ne peut plus etre agglutinee.
20 De la dilution du serum dans l'emulsion:
Le taux d'agglutination positive variant suivant les perio-
des de la maladie, commencer les dilutions par 1/100 et
rechercher Ie taux limite'maximum entre Ie 1/500 et Ie
1/10.000 vers Ie lIe jour.
30 De la vitesse de la reaction :
L:agglutination rapide en 15 a 30 minutes a une dilution
du serum au 1/100 ou a\11/200 possede une grande valeur;
l'agglutination presque immediate d'une dilution tres faible,
1/5, l/tO ne peut servir que d'indication dans la recherche
ulterieure d'une reaction plus marquee.
4 De la temperature a laquelle l'agglutination se pro-
0
duit.
Le phenomime est accelere a la temperatm;e-de l'etuve,
37° ; il doit etre, dans ce cas, termine en moins d'une heure,
d) 10 L'inoculation :lUX cobayes (2 cc. 5 de sang dans

Ie peritoine de chaqu6 animal), du sang d'un malade
atteint de typhus exanthematique, au debut de la periode fe-
brile, donne une maladie experimentale; la temperature
de l'animal, prise matin et soir, marque une elevation de 6 a
/'
VIRUS INVISIBLES ET Vl1{US FILTRANTS 491
10 jours df! durce : 7 it 10 joursapresl'inoculation(tempcra-

ture normale 39°, 390 5). CeUe epreuve est vrainlent speci-
fique, J_TIais elle ne renseigne pas avant Ie douziem~ jour.
En outre, elle doit etre parfois controlee par des pas~ages
en serie sur les animaux.
DeUs 1 2 3 4. 5 6 7 8 S 10 11 12 13 1~ 15 16 17 18 19 ZO
JOUAf-MSMSMSMSMS S MSMSMSMSMSMSMSMSMSMSMSMSMS S
Fig. 25. - Coul'be de eohoye infect'; reh. Nicolle).
2° S'il est possible de prelever des poux ayant pique Ie

malade pendant les premiers jours de sa maladie, on peut
conserver les parasites 8 a 10 jours (les nourrir sur des sou-
ris nouveau-nees ou mieux un singe), et, a ce moment, ino-
culer Ie broyage de ct's poux sous la peau d'un cobaye ou
d'un singe. Le rcsultat positifse traduit, comme dans l'ino-
culation intrapcritoneale, par une elevation thermique du
meme type. Pour etre certain de la temperature des ani-
maux, enfoncer Ie thermometre de 8 centimetres environ.
E. - Ponction lombaire: d'apres Devaux, Paulian et
Tllpa, la reaction cellulaire du liquide cephalo-rachidien
serait prccoce ; ces auteurs recommandent de pratiquer la
ponation lous les 2 jours, afin de suivre Ie pourcentage et
les variations qualitatives des leucocytes.
Prendre 5 centimetres cubes de liquide, centrifuger
5 minutes ii 7.000 tours, faire un etalement uniforme sur
lame du culot de centrifugation, colorer; oculaire compo
6, objectif a imm. 1/12, on voit :
Dans les formes legeres de typhus exanthematique, 5 a 6
Icucocytes par champ;
492 MAEADIES INFECTIE&SES. TECHNI!2UESSPJS6IALES
Dans les formes moyennes de typhus exanthematique,

15 a 20 l>eucocytes par champ;
Dans les formes gra'Ves de typh)ls exanthemat~que, 60 a· 80·
leucocytes pM" champ.
Art debut de la periode febrile, predominance des leuco·.
cytes polynucleaires aprotoplasme vacuolaire etkaryorhexie;
apres quelques jours, apparition des mononucleaires dont
la moitie est formee de cellules de Turk avec degeneres-
cence karyorhexique, puis, 2 a 3 jours avant la chute de la
temperature. apparition des lymphocytes.
Dans les cas de typhus exanthematique a eruptions pur-
puriques avec forte injection des conjonctives, ou dans les
formes tres delirantes, la ponction lombaire donne issue a
un liquide colore en jaune. Cette xanthochromie peut etre
legere, et. pour bien la voir, il est necessaire d' eX;lminer Ie
liquide des qu'il a ete retire, et surtout dans un tube etroit,
en regardant en hauteur l'axe du cylindre; si la xanthochro·
mie est intense, la couleur se voit, meme sous faible epais-
seur.
C. - PERIPNEUMONIE DES BOVIDES
CULTURE. - Nocard, Raux, Barrel et Sal.imb~ni 011t reussi,

e,n 1898, a cultiver Ie microbe de la peripneun\onie en sacs
de collodion dans Ie peritoine du lapin.
In vitro, Du;ardin-Beaumetz a obtenu des cultures a 380
dans du bouillon Martin additionne de 6 a 8 p. 100 de
shum de beeuf, sous Ia forme d'un louche a peine percep-
tible. En gelosant ce milieu liquide, on observe un tres
grand nom~re de petites colonies dont !'inoculation donne
des resuitats positifs.
Le microbe de la peripneumonie se developpe egale-
ment sur la gelose sanglante a l'extrait de pomme de terre'
(voir Bacille de la coqueluche). Apres 48 heures de sejour
a l'etuve, il ne se forme pas de colonies apparentes, mais,
en raclant la surface et en faisant des preparations du
produit de raclage. on met en evidence, par Ie Giemsa,
un microbe ayant l'apparence d'un filament oodule, ou en S,
avec des spires (J. Rordet).
./
VIRUS 1NVISIBL'ES ET VIRUS FtLTRANTS 493
Borrel, Dujardin-Beaumeiz, Jeaniei et Jouan, en operanl

sur Ie culot de centrifugation des cultures, lave dans l'eau
physiologique, ont mis en evidence, apres 'l1lordan~age
et surcoloration par la methode de Lomer, un polymor-
phisme tout a fait remarquable de ce germe .
..
D. - AGALAXIE CONTAGIEUSE DE LA BREBIS
ET DE LA CHEVRE
'Celli et de Blasi ont etab1i que Ie virus trave~sait les fil-

tres.
Bridre et Donalien rant cultive sur bouillon-serum de
cheval, de mouton QU de·b<£uf et ont reproduit Ia maladie
par inoculation ae cultures, apn:s plusieurs passqges .
••
E. - POLIOMVELITE EPIDEMIQUE
La 'poliomyelite a pu etre 'inoculee exp'erimentalement

au chimparrze, aUK sin~s inferieurs et meme au lapin, par
'injection de moeHe virulente.
Si on :injecte dans Ie cerveau (d'un singe'un 1iltrat·sur.bou-
gie Herkefeld ()u Chamberland d'une emu1sion ile ·moeHe
virulente, on lui .communique'Ja ·poliomyelite.
Flexner et Noguchi pensent avoir cultive Ie virus dC'la
poliomyelite nans ,Ie ,milieu qui hmr a servi pour \le 'trepo-
neme de 1a syphi1is"A. ·Pettit 'a prepare un serum en injec-
·tant a plusieurs repDises ,dans les \Tllines du mouton ~t dli
cheval des moelles de singes infectes de virus polyomye-
Htique.
'F. - ENCEPHALI"'r:E ,EPIDEMIQUE
Comme pour la poliomyelite. Ie virus semb1e sieger un i-

'quement dans les centres nerveux. Ce virus est filtrant.et
494 MALADIES INFECTlEUSES. TECHNIQUES SpECIALES
invisible, alors que l'encephalite spontanee cpizootique du

lapin parait due it un parasite visible: I'Encephalilozo6n
cuniculi (Levaditi).
G. - SCARLATINE
REACTION DE DICK. - L'epreuve de Dick est une intra-

dermo-n!action pratiquee avec nne toxine extraite d'un
streptocoque hemolytique, qui permet de deceler la recepti-
vite it la scarlatine.
Si l'intradermo-reaction est positive, Ie sujet est consi-
dere comme sensible it la scarlatine. II est en Ciat d'immu-
nite dans Ie cas contraire.
Le microbe choisi est un streptocoque isole chez un scar-
latineux. L'experience seule permet de juger si Ia race em-
ployee fOllrnira aisement une tox~ne utilisable ppur la reac-
tion de Dick.
Le germe une fois isole, la toxine se prepare de la fagon
suiyante : ensemencer une cultuJ;'e de streptocoque hemoly-
tique dans du bouillon con tenant 5 pour 100 de sang de che-
val defibrine ou citrate. Laisser it l'etuve it 37 0 pendant cinq
it six jours, puis ajouter de I'acide pheniqu~dans Ia propor-
tion de 0,5 pour 100, laisser deposer et filtrer sur bougie Ie
liquide clair. Le filtrat dont la steril\te est verifiee constitue
la toxine.
CeUe toxine doit etre diluce it un ~aux variant de 1 pour
500 it 1 pour 2000 suivant la force de l\l toxine.
On injecte un it deux dixiemes de fentimetre cube de la
toxine convenablement diluee dans Ie germe de l'avant-bras
d'un cote et, du cote oppose, la mem~ quantite de toxine
chauffee it 1000 pour eliminer les pseuqo-reactions determi-
nees par les proteines.
La reaction positive apparait de quatre a six heures
apres l'injection et atteint son maximum vingt-quatre heures
aprcs; les diITerentes manifestations locales sont de la
rougeur et de l'induration comme dans Ia reaction de
Schick.
ViRUS iNViSLBLES ET VIRUS'l7JLTRANTS 4!J5
••
H. - VACCINE
Les travaux de ,11. Nicolle et Adil bey, Rouget, Remlinger,

Carini et Negri Ollt montre que Ie virus' de la vaccine est
un virus filtrant.
L'un de nous, avec C. Guerin, a prouve qu'il est possible,
en utilisant Ie lapin, de controler avec precision la virulence
des vaccins de diverses origines et d'ages difi'erents (Ie
lapin etant moins receptif que la genisse et l'enfant,
seuls les vaccins tres virulents donnent chez lui de belles
eruptions).
La technique de Calmette et Guerin consiste a badigeon-
ner avec la pulpe vaccinale la peau fraichement rasee, sans
faire d'autres lesions epiderrniques que celles, tres super-
ficielles, que produit Ie feu du rasoir. Apres 48 heures, on
observe une congestion intense du derme, dont la colora-
tion rouge vif tranche sur les parties voisines res tees
hlanches. CeUe reaction locale est surtout apparente chez
les animauxde couleur claire ou albinos. Le troisieme jour,
J'eruption est a maturite complete. La plupart des pustules
s'ombiliquent nettement, surtout sur les bords de's plaques
rouges. D'autres commencent a se couvrir de croutes jau-
natres. Les jours suivants, la dessiccation s'acheve. Les
croutes tombent du onzieme au douzieme jour.
La pulpe va~cinale, fecueillie Ie quatrieme au Ie cinquieme
jour avec une curette a bord tranchant, est assez abondante
et tres active. On peut l'utiliser soit pour vacciner les en-
fants, soit pour reporter Ie virus sur des genisses, soit pour
inoculer de nouveaux lapins.
Preparation du vaccin chez La genisse. Prendre de jeuhes
genisses reconnues non tuberculeuses par epreuve a la
tuberculine. Raser les poils des deux cotes de la poi trine
et l'abdomen. Bien laver la peau ainsi rasee, a l'eau tiede
et secher avec des serviettes sterilisees. Tracer de grandes
scarifications, espacees d'environ 10 a 12 millimetres, en
evitant de faire saigner, puis, au moyen d'une spatule
enduite de pulpe vaccinale diluee dans la glycerine, ense-
mencer les plaies scarifiees.
Toutes les regions inoculees doivent etre recouvertes

d'un tablier de toile sterile, attache sur Ie dos par des
cordons.
La recolte se fait vel'S Ie 5e ou 6" jour. On gratte les pus-
tules avec une curette speciale, en evitant les hemorragies.
La pulpe est recueillie dans des pots-bans sMriles. puis addi·
ltionnee de glycerine dans Ia proporti(')fl de 2 de glycerine
pour 1 de pulpe. Elle peut etre aussi conservee au frigo-
rigene (de -7 a - 100 ) pendant plusieurs mois. A. ce
moment, on la brQie dans l'appareil de Chalybells et on In
repartit en ampoules.
1.- T£.CHNIQUE DE L',J80LEMENT

DES-« B"C:rERJOPHAGES »
(d'aprcs d'Here.[/e).
Un appareii a .filtration sur bougie Chamherland LB

-ou -La est in.dispensable 'Pour les liquides nan steniles.
Si Ie materiel dans lequel on recltcrehe Ie bacteriophage
.est limp ide, on Ie fiitre sur une h(mgie. S11 present.e
uon trouble homogene abondant, on Ie clarine, au preaiable,
de Ja maniere s.uivante. Dans ltn verre "rean ordinaire,
'Qn ajoute une foute pineee die terre d'infasGiOO6.·On _qgi.te
.et on verse la suspension d'un seui ooUp s.ur un .entonnoir
garni d'un fiitre plisse. A mesure que le liquide s'ecouie,
Ie papier se recouvre d'une mince .couche qe 'Lerce d'mfu-
sGires, sur iaqueUe on passe ensu<ill:e da suspension a e~ayer.•
Le liqnide clair ainsi obtenu est nnaleuwnt filtre SUT .hoo-
·gie.
S'il s'agit d'un liquide tenant .en .suspension des parli-
'Cules organiques, on de matieres plus ou m6i,ns compactes
(dajections, iumi'Cr, debris d'or.ganes),.on les .(lesagr.ege, -au
'Prealable, en les emulsionnal'lt gr.@ssieremcnt dans W it 20
·parties de houi-llon q.u·on abandonne a l'.etuve pendant Il2
.a 18 heU'I"es. On filtr.e ensuit-e successive.ment stIr papiJer
gami de terre d'infusoires, comzne pr.ecedemment,.et SJlC
,bougie.
POUl" rechercher de bacteriophage o(;mi'l'e ,le ·bacille de
Shiga par exemple, on ensemence,.quatr.e ,tubes.de b~n
VIRUS INIT]SiBLES ET vrfius FILTRANTS' 497
Martin avec up.e culture de 24 heures sur gelose. On aJoute

dans Ie premier tube une goutte de filtrat, dix dans Ie second,
2 centimetres cubes dans Ie troisieme, puis on les porte it
I'etuve a 37 0 ; Ie quatrieme sert de temoin. Suivant l'activite
dU bacteriophage, un ou plusieurs tubes restent limpides
apres 12-18 heures. Cependant il convient de rechercher
l'agent lytique, meme lorsque tous les tubes de culture sont
troubles. On decelera sa presence en etalant une anse
de chacune des cultures en bouillon sur tubes de gelose
qu'on porte ensuite a I'etuve. Si Ie bacille dysenterique sa
developpe alors normalement, Ia recherche du bacterio-
phage peut etre consideree comme definitivement negative.
Quand Ie bacteriophage existe, ]a couche bacterienne pre-
sente un aspect varie : dechiquete, it bards corrodes, colo.
nies isoIees ou p]ages nues. S'il est tres abondant, ]a
gelose reste indemne de toute culture·appa~ente.
Lorsqu"on se propose de verifier l'activite fun bacterio-
phage it regard de plusieurs germes, on ensemence autant
de series 'de quatre tubes de bouillon qu'on additionne de
filtrat comme precedemment.
Numeration des ultramic;robes bacter"iophages.

- Chaque plage nue, qui apparait dans une culture sur
gelose additionnee de filtrat. correspond it un point oit, pen-
dant l'etalement, s'est depose un element bacteriophage
actif. Pour demontrer ces elements, on prepare, une fois
POUl' toutes, des tubes etalons contenant 100, 200, 300 ct
400 millions de bacilles de 'Shiga par centimetre cube; on
ajoute une goutte de formol dans chaque tube qu'on scelle
ensuite au chalumeau. L'emulsion destinee iI la lyse doit
etre preparee, de preference, avec des bacilles provenant
d'une culture de 24 heures sur gelose; eIIe est facilement
obtenue en versant dans Ie tube 1 ou 2 centimetres cubes de
bouillon dont on laisse s'imbiber la cauche microbienne en
inclinant Ie tube pendant quelques minutes. Agiler ensuite
et prelevCr avec une pipette une petite quantite de cette
emulsion concentree qu'on versera goutte a gautte dans un
tube de bouillon jusqu'a ce que l'opacite devienne inter-
mediaire entre celle des tubes etalons contenant 200 et 300
millions de bacteries par centimetre cube. Soit un tube
con tenant 10 centimetres cubes de cette emulsion de baciJ1es
MICnOBJOLOGIE 32
de Shiga. On l'additionne de 1/50000 d'une culture de bac-

U~riophage agee de 10 jours, c'est·a dire d'une emulsion de
Shiga lysee depuis 10 jours. On agite pour bien repartir
la semence et on prelt'~ve avec une anse de pIa tine 1/100 de
centimetre cube de l'emulsion qu'on elend uni~ormemerit
sur un tube de gelose. Etuve a. 37°. Apres 18 heures, on
observe, par exemple, 51 plages dans la couche microbienne.
Le calcul est alors simple. Chaque centimetre cube de
I'emulsion a revu 1/50.000 X 10, soit 1/500.000 de bacterio-
phage, dont on preleve ensuite 1/100, soit 1/500.000X100=
1/50.000.000 donnant 51 colonies provenant d autant d'ul-
tra-microbes bacteriophages, soit pour 1 centimetre cube
51 X 50.000.000 = 2.550000 germes lytiques.
Exaltation de l'activite du bacteriophage. - Quand

l'ensemencement sur gelose decele la presence d'un bacte-
riophage dans une emulsion en bouillon, on filtre celle-ci
sur terre d'infusoires, puis sur bougie. On prepare une emul-
sion faiblement louche de la bacterie vis-a.-vis de laquelle
Ie bacteriophage s'est montre actif; on y ajoute 4 a 5 gouttes
de filtrat et on laisse a. l'etuve, a. 37°, pendant 24 heures.
Si la lyse n'est pas complete, on filtre cette seconde emul-
sion, on introduit 3 a 4 gouttes de filtrat dans une suspen-
sion legere de la meme bacterie et on continue ces passages
jusqu'a. ce que Ie milieu devienne clair. Achaque repiquage,
on recherche l'abondance du bacteriophage en ensemenc;ant
un tube degelose avec l'emulsion et en comptant Ie nombre
des plages qui apparaissent dans la couche microbienne.
CHAPITRE XLI
SYPHILIS. - ICTERE INFECTIEUX< HEMORRAGIQUE.

SPIROCHETES.- TREPONEMES ET SPIRILLES.
A. - Syphilis.
Recolte du materiel. - Scarifications legeres :'t la
peripherie, au niveau de]a zone d'extension. Si Ie sang
apparaH, Ie bisser s'ecouler, l'epuiser, attendre quelques
minutes et n'utiliser que les gouttes de serosite que 1'on
obtient ensuite par expression du chancre. On peut re-
cueillir ainsi jusqu':'t 8 et 10 gouttes de sera site particulie-
rement riche en treponemes.
Recherche des treponemes a Z'etat frais.
1 Sans coloralion, par l'encre de Chine.
0
RecueiIlir une petite goutte de serasiM qu'an depose sur
I
.?
Fig. 26. - Treponemes (frottis it r,mere de Chine). a. Cellule. - b. Treponeme.

une lame. Pres d'eHe, on depose une goutte_ d'encre de

Chine de meme volume {encre de Chine tres fine, marque
RALl. On fait Ie melange de ces deux gouttes avec Ie bord
de la lameHe qui sert en suite a etaler Ie tout (comme pour
un etalement de sang). On 'seche rapidement sur la lampe.
On examine sans lamelIe, dans une goutte d'huile de
cecire, avec un objectif a immersion homogene, et ce procede
simple permet d'eviter l'emploi d'un ultra-microscope.
L'encre forme une nappe noire, plus ou moins transpa-
rente et uniforme, sur laquelle se detachent avec une remar-
quable nettete tous les corps etrangers (globules sanguins,
microbes, treponemes, etc ... ) apportes par la goutte de se-
rosite.
Les treponemes 'pales, en particulier, apparaissent avec
tous les caracteres fondamentaux qui les font differencier
des autres spirochetes non specifiques. '
20 A l'ultramicroscope. - Verifier l'aspect ,Pu corps de
I'organisme; remarquer que pour Ie treponeme toutes les
ondulations sont situees dans un meme plan, Ie corps du
parasite est plat, tandis que les autres spirochetes sont
constitues par un filament helicoidal enroule autour d'un
axe fictif, rectiligne.
Coloration des treponemes. - a)-Procede de Giemsa.
Les deux methodes, Gi(\msa lent et Giemsa rapide peu-
vent etre employees (voir .chap. VII, E, f). I
Dans les deux cas, Ie degre d'alcalinite de l'eau utilisee
pour la coloration joue un role considerable : il faut, pour
un flacon de colorant donne, employer toujours la meme
eau : eau bidistilIee, conservee dans des flacons steriles en
verre neutre. De multiples essais sur un spirochete connu
(Sp. de la bouche) permettent de verifier Ie degre d'alcali-
nite obtenu par addition de carbonate de sodium, qui
donne les meilleures colorations.
Les causes d'insucces tiennent ou a l'emploi de lames
grasses ou mal nettoyees (n'utiliser, en consequence, que
des lames flambees) ou a une mauvaise alcalinite de l'eau f.
1. Proet\de pour verifier I'alcalinite de renu (Langeron). Ajouter II iO cc.-d·.au deux

gouttes de la solution it 1 p. 100 d'hematoxyline dans l"alcool it 95 0 • Si reau reste inco-
lore ou jaune., ajouter goutte it goutte de In solution de carbonate de soude :\ t pour
1 00. L~eau doit, a 1'epreuve de l'hematoxyline. prendre nne teinte ,violacee. raible, en
5 minutes.
SYPHILIS 501
Les coupes provenant de tissus fixes dans Ie formol a

4 p . .100 et lavees a I'eau, sont colorees, d'abord dans un pre-
miel' bain pendant 1 heure par Ie Giemsa, puis pendant 12 a
24 h~eures dans rin second bain frais. On lave ensuite rapi-
dement a l'eau distilIee, puis pendant quelques secondes
(2 a 4) dans une solution concentree d'alun de potasse, puis
·dans l'eau distillee. On seche enfin a l'etuve et on monte
dans Ie baume 'ou dans.Ia gelatine glycerinee.
b) Pro cede de BOrJ·el et Burnet. - Exciser un' petit frag-
ment de tissu pathologique(chancre, papule, etc.). Le porter
successivement sur pIusieurs lames OU 1'0n a depose une
goutte d' eau distillee. Gratter et dissocier Ie tissu avec la
pointe d'un bistouri ou d'une aiguille ; Ie produit de grat-
tage se repand dans la goutte. Secher a l'etuve. Mordancer
en versant sur la lame quelques gouttes de mordant de fuch-
sine de Loffi~r (tanin, sulfate ferreux, fuchsine) utilise
pour la coloration des cils.
On repete Ie mordan9age 3 ou 4 fois, en chauffant jus-
qu'a~ emission de vapeurs.
Or verse ensuite (sans laver) sur la lame quelques gouttes
de fuchsine de Ziehl et on chauffe de nouveaujusqu'a emis-
siorr de vapeurs.
On rince a l'eau, on seche, eclaircit au xylol et on exa-
min,e dans une goutte d'huile a immersion.
c) Procede de Ravalli modifie. - Utiliser la largine de
Lillienfeld (Vienne). Preparer peu de temps avant de s'en
servir une solution au 1/20 de largine: faire la dissolution
Ie hlieux possible dans l'eau bidistillee en operant avec
de~ instruments steriles, Ia filtrer a l'abri de Ia lumiere, la
conserver'dans un flacon en. verre bruno
Preparer une solution d'acide pyrogallique a 5 p. 100
(verre brun).
£taler Ie materiel a examiner en une cO\lche mince,
lais~er secher et fixer a l'alcool methylique en achevant la
fixaTion par un flambage rapide, arreter Ie flambage en
souftlant sur la lame.
Placer dans une boite de Laveran les lames (frottis en
dessous) avec de -la solution de largine en exces, Laisser
2 heures a l'etuve a 56°,
Prendre les lames avec une pince paraffinee, les plonger
dans un bain d'acide pyrogallique. La reduction est ins·

tantanee. Laver a l'eau distillee.
Puis, nouveau sejour dans Ie bain de largine pen,dant
une demi-heure et nouvelle reduction dans l'acide pyro-
gallique. •
Laver a I'eau distillee. Secher.
d) ProeMe Levaditi (coupes). - 10 Fixation des fragments
d'organes au formol a 10 p. 100,24 hemes ;
2 0 Durcissement par alcool a 95 0 pendant 24 heures ;
3 0 Lavage a l'eau distillee, quelques minutes;
4 0 Impregnation au nitrate d'argent, solution aqueuse a
1,5 p. 100, pendant 3 a 5 joms a 380 ;
50 Lavage a l'eau distillee pendant quelques minutes,
puis:
6 0 Reduction, pendant 24 a 48 heures, par:
Acide pyrogallique. . • . . . . . 4 gr.
Formol (sol. commerciale a 40 p. 100~ .. 5 cc.
Eau. . . . . . . . . . . • • 100 cc.
7 0 Laver a l'eau distillee. Deshydrater a l'alcool. X5101.

Paraffine. Faire les coupes.
8 0 Colorer les coupes par Ie Giemsa dilue au 1/20·, 3 a 4
minutes. Differencier a l'alcool. essence de girofle, xylol,
baume.
e) Methode de Y. Mahoueiian. - Fixer des fragments de
1 millimetre d'epaisseur, pendant une dfmi-heure a une
heme, dans Ie formol a 10 pour 100, l'e forplOl-alcool (for.
mollOcc., alcool a·90 o, 90 cc.), ou l'alcooi a 960 • Laver a
trois reprises au moins, et a 10 minutes d'intervalle, dans
l'alcool a 900 • Mettre les fragments dans un flacon de 50 a.
100 cc., a large goulot, rempli a moitie d'eau distilJee. Au
bout de quelques minutes, ces fragments tombent au fond
du flacon. Renouveler l'eau distillee. Impregner en versant
dans Ie flacon une solution de nilrate d'argent a 1 pour 1100,
dont la temperature ne do it pas depasser celle du labora-
toire. Porter Ie tout a l'Muve a 56 0 OU on laisse sejourner de
40 minutes a une heme.
RetireI' Ie flacon de l'etuve ; prendre delicatement les
pieces avec une pince en acier parafIince (paraffine fusible
a 70 0 ), et les laisser tomber dans Ie melange suivant,
fraichement prepare:
/'
SYPHILIS I 503
Acide pytogallique en $olntion nqnense a2 % 90 ell.
Fornrol. . . • • . - ~ . . . . . • 10 ee.
Od peut employer aussi Ie reducleur de yan Ertnengem.

Acide gallique . 5 gr.
Tanim. ; • . • • . 3 gr.
Acetate de soude. • • . I 10 gr.
Ean distillee. • • . . 350 ec.
ou Ie melange fort, suivant:

Acide gnlJiqne.. . 7 gr.
Tanio. . ....• 3 gt. 50
Acetate d~ soude.. . . 14, gr.
Enu distill~e. . . • • 350 ee.
En une demi·heure, la reduction est faite. o.n peut

d'am~urs laisser les pieces pendant 48 heures dans Ie re-
ductep.r.
Inolusion a la paraffine, selon la technique habitueUe.
Demqheures sufIisent pour cette operation. En refroidis A
sant lIe bloc de paraffine sous un jet d'eau froide pendant

une ~izainede minutes, on peut immediatement pratiquer
des coupes.
f) Methode de Fontana- Tribondeau (recommandee pour
la recherche des treponemes dans Ie cerveau des paralr
tiques generaux).
Preparation des solutions.
Eiquide de Bilge:
Acide acetique .. 1 ce.
Formal a 40 %. 2 cc;
Enn distillee. 100 ee.
Solution de tanin.
Chauffer ~OO cc. d'eau distil lee a 60 0 • Ajouter 5 gnilt1n1e~
de fanin ; acltever la dissolution qui est rapide en chauffant
doucement. Filtrer et conserver en flacon de verre brurt
apres avon- ajoute un crista? de caJ'nphre.
Solution de nitrate d'argent.
~ Peser 5 grammes de nitrate d'argent. Les faire dissou-
dre fank 100 cc. d'eau distiIIee. (Faire to utes les manipula-
tions dans des recipients flambes avec des instruments
steriles.~-Une fois la solufion faite, en mettre de cote
20 cc.
Les 80 cc. restant sont verses dans un verre a pied. On
50~ MALADIES INFECTrEUSES. TECHNIQUES SpECIALES
ajoute goutte a goutte de l'ammoniaque en agitant constam-

ment. II se forme un precipite jaune brun, puis noir qui se
redissout a un moment donne (point tres impor/ant:
ujo-gtcr doucement l'ammoniaque et arreter la reaction 10rs-
que la solution est encore nettement opalescente. Si ron
avait depasse cette opalescence, utiliser les 20 cc. mis de
cote dans ce but pour ramener l'opalescence au point
desire; en fin filtrer, seul moyen d'eviter les precipites.)
Etaler sur lame une goutte d'emulsion d'ecorce cerebrale
faite en dissociant 2 a 3 millimetres cubes de tissu dans
2 ou 3 gouttes d'eau salee physiologique. Fixer pendant
1 minute par le'liquide de Riige.
Laver a reau courante. Mordancer a chaud, sur la
yeilleuse du bec Bunsen, par quelques gouttes de lasolution
de tanin.
Laver a 1'eau COUl·ante. Impregner, toujours a chau~, sur
la veilleuse, pendant 30 seeondes et jusqu'a degagemert de
vapeurs avec la solution de nitrate d'argent.
Laver a l'eau courante, secher. ~
Les treponemes apparaissent colores en brun noir sur
fond jaune. Les fibrilles nerveuses sont jaune clair.
g) Panchrome Laveran (Institut Pasteur).
Etaler sur lame Ie produit suspe~t. Secher. Deposer sur
la lame 0 ce. 25 de panehrome. Laisser agir 3 minutes
(fixation) en ayant soin de couvrir Ia lam). Ajouter 5 centi-
metres cubes d' eau distillee (que ron aura fait bouillir prea-
lablement 5 a 10 minutes dans un ballon de verre pour la
rendre legerement alealine) a 0 cc. 25 de panchrome. Lais-
ser agir pendant 20 a 30 minutes. Laver a grande eau.
Secher.
h) Methode de Noguchi pOLlr fa culture directe de Trepo-
nema pallidu.m a partir des Lesions syphilitiques humaines.
Le milieu de culture se compose de deux parties de
gelose a 2 % legerement alcaline, et une partie de liquide
d'ascite ou d'hydrocele (les serums de cheval ou de mou-
ton peuventegalement etre employes, mais sont moins favo-
rabIes). L'addition d'un fragment de tissu (rein ou testicule
de lapin) est indispensable. Au-dessus de la gelose-ascite,
verser une couche d'huile' de paraffine sterile, de 3 centi-
metres d'epaisseur. Inserer les fragments ensemences avec
ICTERE INFEC1'IEUX 505
une baguette de verre ou une spatul-e, sans faire eclater Ie

lfJ.ilieu. A l'etuve. a 37°, pendant denxou trois semaines. Pour
les repiquages, necessaires pour eliminer les impuretes qui
se sont developpees Ie long de la strie d'ensemencement,
puiser dans la r.egion louche it disLance de l'axe. Assez sou-
vent Ie treponeme se deyeloppe sans qu'on voie u'll louche;
parfois on observe un louche dfi a l'acidite et noll it un
developpemeflt du treponeme. La culture commence vers la
62" heure et croil pendant 2-3 semaines.
On peut employer egalementle milieu liquide au serum
di!lle du cheval, lapin ou homme (voir ictere infectieux).
Qne! que soit Ie procede de cn Iture, solide ou liquide,
n'n!iliser que des tubes en verre neutre et n'employer que
du chlorure de sodium chimiquement pur.
°i) Reac/ion de Bordel- Wassermann (voir chap. XXI).
j) Eprelwe de la bile el de Ia saponine.
Recherche de la dissolution des spirochetes par une
solution de hile ou de saponine a 10 p. 100.
Leptospire: dissont par la bile; resiste it la saponine.
Treponeme: dissont par la bile ; dissout par la saponine.
Spirochete (oreillons) : dissout par la bile; resiste ala
saponine.
Spironcme (poule, fievre recurrente) : dissout par la bile;
dissout par la saponine.
B. - Ictere infectieux.
(Spirpchelose ictero-hemorragique, Typhozde bilieuse, Maladie
de Weil au ictere a l'echule.)
Spirochrete iclel'o-hemorragire ~Inada et Ido).
COLORATION (dans Ie foie principalement). Par Ia methode
de Giemsa, bain prolonge ; 1 goutle pour 1 centimetre cube
d'eau distillee, 12 heures.
Le parasite est tres difficile it trouver dans Ie sang des
malades. II n'y existe gu' au debut de la rna/adie, avallt /'ap-
parition de l'iclere et pendant les deux premiers jours. Mais
il est" tres abondant dans Ia glande hepatique. II persiste
plus Iongtemps dans l'urine (parfois jusqu'u 6 semaines et
meme trois mois). On Ie retrouve aisement chez Ie cobaye,

dans Ie foie, les reins, Ie sang, la vesicule b'iliaire et pres-
que dans tous les organes. Mince filament spirale de
6 a 9 p. ou plus long (jusqu'it 25); ordinairement a 2 ou
3 spires; parait entoure d'un halo a l'ultramicroscope.
EXPERIMENTATION. Cobaye tres sensible a l'inoculation
du virus, surtout par voie intraperitoneale (5 centimetres
cubes de sang ou d'urine du malade) et in tracardiaque.
Mais l'animal peut etre infecte par la pea'll, cpilee ou rasee,
par les muqueuses saines, par simple instillation sur l'ceil,
par les voies digestives, avec 1 a 2 centimetres cubes de
sang humain virulent. Trois jours apres, l'animal est
malade. son foie fourmille de spirochetes. 11 meurt du
40 au 8 e ou lO e jour en hypothermie. avec des hemorragies
dans Ie tissu graisseux des aines ou de I:aisselle, des reins,
des muscles; des infareti dans les poumons et de la degib-
nerescence graisseuse du foie.
On peut aisement faire des passages du virus de cobaye
a cobaye. Le lapin est peu sensible. Les singes, rats, sou-
ris, chiens (sauf les jeunes chiens), chats, porcelets, mou-
tons, anes, poules, etc., sont insensibles.
Les dejections, et particulierement l'urine, des malades
et des animaux infectes, sont susceptibles de propager la
maladie.
Le serum des sujets gueris contient des substances pro-
tectrices : 0 ce. 001 de serum sumt a anni~iler, in vitro, la
virulence de 1 centimetre cube de s~ng virulent. II est
encore actif apres 7 mois et ne s'affaiblit qu'apres 1 an. 1 a
2 centimetres cubes de serum de convalescent peuventgue-
rirIe cobaye infecte depuis 3 jours.
Le foie de cobaye infecte peut servir d'antigene pOUr
diagnostiquer la maladie par la reaction de Bordet-Gengou
avec Ie serum des malades.
Le virus se conserve plusieurs jours actif dans Ie sang
et Ia bouillie d'organes, a la glaciere ; 7 jours dans Ie sang
citrate, a la temperature du laboratoire. ILa dessiccation a
37 0 Ie tue en 3 heures ; a la temperature du laboratoire en
10 heures. Le chauffage a 500 , en moins de 30 minutes. II est
ires sensible aux antiseptiques et a la bile. II resiste a Ia
chimiotherapie par Ie neosalvarsan, l'emetique, l'atoxyl, Ie
collargoI, etc.
FIEVRE RECURRENTE ET TreK FEVER 507.
Le role oes insectcs (punaises, puces, etc.) dans la trans-

mission de la maladie n'est pas encore precise, mais il est
probable. Les rats, surtout Ie Mus decumanus, servent,
o'hotes intermediaires et de reservoirs de virus. La mala-
die peut se transmettre par morsure du rat. On a observe
des infections de laboratoire produites par contact direct
du virus sur la m'uqueuse oculaire.
CULTURE. - Elle peut se faire dans I' cau de rubinet addi-
tionriee de 1 p. 30'oe serum de lapin, en partant de frag-
ments de foie de cobaye infecte qu'on recouvre prealable-
ment d'eau physiologique. Au bout d'une demi-heure, Ie
liquide surnageant, distribue en tubes, est additionne de
serum. de lapin, puis p'huile de par:lffine, et porte :i l' etuve
:i 350 • Du 3e au 6e jour les spirochetes apparaissent nom-
breux. II faut repiquer les cultures tous les 7 jours. Elles
restent ainsi virulentes. La presence d'hemoglobine dans
Ie milieu entrave Ie developpement.
Milieu au· serum dilue. - A quatre ou cinq parties
o'eau physiologique, ajouter une partie de .serum de lapin
(exempt d'hemoglobine). Steriliser par filtration a la bougie
Chamberland La. R'epartir :i raison de 10 centimetres cubes
par tube dans des tubes prealableOlent flambes con tenant
un centimetre cube dl'huile de vaseline sterilisee. Terminer
la sterilisation par chauffage discontinu:i 560 trois jours de
suite, a 24 heures d'intervalIe, pendant 30 minutes.
Aux tubes du milieu ainsi prepare, on peut ajouter un
fragment d'organe (rein, testicule de lapin) preleve asepti-
quement.
Milieu a l'exlrait globulaire. -10 Ecraser des caillots d~
sang de cheval sur un tamis et ajouter a la bouillie deux
fois son volume d'eau physiologique:i 8 p. 1.000.
20 Chauffer a 750 pendant 15 a 30 minutes, filtrer sur
papier Laurent, filtrer sur bougie Chamberland La, ajouter
une faible quantite de serum sterile de lapin (5 %). sterili-
ser par chauffage discontinu a 56 0 trois jonrs de suit!;), a
24 heures d'intervalle, pendant 30 Olinntes.
C. - Fievre jauDe.
Leptospira iclero'ides (Noguchi).
Noguchi a constate et isole, dans Ie sang des malades
-508 MALADIES INFECTIEUSES. TECHNIQUES SPECIALES'
alteints de fievre jaune, un spirochete qui se rapproche

de celui de Ia spirochetose ictero - hemorragique, mais
qui en differe par certains caracteres. Leptospira icleroi'des
est un fin filament mobile, a extremites effiIees de 4 a 9
fI- de longueur, a spires courtes et Tegulieres.
COLOHATION. - Fixer par l'acide osmique. colorer par la
methode de Giemsa ou celIe de Fontana-'Pribondeau.
CULTURE. - Noguchi superpose dans u'n long tube, it rai-
son de 8 centimetres cubes chacun, deuxwilieux: un, demi-
solide dans Ie fond. l'autre, liquide au-dessus. Le milieu
liquide comprend une partie de serum humain normal et
trois parties de solution de Ringer. Le milieu demi-solide
est obtenu en ajoutant au milieu precedent 0,3.p. 100 de
gelose. .
Pour l'ensemencement, on liquefie Ie milieu demi-solide
a 420 ; on y verse 0,5 a 1 centimetre cube de sang citrate
du malade ; apres refroidissement. ajouter'le milieu liquide
qu'on ensemence egalement avec 0,5 it 1 centimetre cube
de sang citrate. Verser a la surface une 'Couche d'huile de
paraffine.
A37o, Ie developpement est rapide, mais Ie spirochete perd
rapidement sa vitalite. IlIa conserve plus longtemps it 25°.
INOCULATION AUX ANIMAUX. - Les cultures ainsi obtenues,
injectees dans la cavite peritoneale, donnent au cobaye Ia
fievre jaune experimentale. De meme I'inoculation intra-
peritoneale de sang malade. L'animal \nocule, apres une
incubation de 3 a 6 jours, presente ,une elevation de tem-
perature accompagnee d'albuminurie, cylindrurie, oli-
gurie, hyperemie, surtout au niveau des conjonctives et
des oreilIes, s'accompagnant de suffusions sanguines.
Apres quelques jours, I? fiiwre tombe en lysis. A ce
moment l'ictere apparait, il se complique d'hemorragies
au niveau des muqueuses, et I'animal ~eurt.
REACTIONS HUMORALES. - Phenomenede Pfeiffer. - Melan-
ger du serum, de convalescent it une culture de Leptospira
icleroi'des et injecter dans Ie peritoine de cobaye. Dans
83 p. 100 des cas, on constate la lyse du parasite alors
que les rcsultats sont negatifsl{lvec lei> temoins (serum nol'-
mal + culture).
Le serum de convalescent protege Ie cobaye contre I'in-
fection experimentale.
FIEVRE RECURRENTE ET TICK FEVER 509
Les serums prepare's par injections de L. iclel'ordes a

des animaux rMractaires (cheval, lapin) sont doues de pro-
prietes agglutinantes et bactericides indiscutables vis-a.-vis
de ce germe et n'ont aucune ac~ion sur Spiro iclel'ohemo-
ragite. De meme pour Ie pouvoir neutralisant it l'egard de
l'infection experimentale determinee par ce parasite.
.. *.
D. - Fievre recurrente et tick fever.
(Spil'ochreta l'ecul'l'entis et Spil'ochreta dutfoni.)
COLORATION. - 10 Du sang eiale sur lames. Le procede de
choix est la coloration par Ie liquide de Giemsa.
On peut aussi employer Ie violet aniline d'Ehrlich, mais
il faut d'abord dissoudre l'hemoglobine .
. Pour cela, verser sur la preparation de l'eau acetisee a
5 p. 100 ; laisser en contact pendant trente secondes. Puis
faire agir pendant quelques secondes des vapeurs d'ammo-
niaque et laver a l'eau distillee.
Les spirilles et les globules blancs sont colores en violet,
les hematies sont incolores.
2 0 Dans les coupes. Procedlide Nikiof. - Tremperles cou-
pes pendant vingt-quatte heures dans Ie colorant suivant :
Sol. sq. de bleu de methylene.. . . 10 ec.
Sol. aleool de tropeoline 0. 1 p. 100. . . . 1 cc.
Sol. de potnssI: nIp 10.. . • • . . . IV gil.
Enu distillee. . • . . . . . . . . . 10 ce.
Laver a l'eau, puis a l'alcool-ether. xylol; monter.

EXPERIA,lENTATION. - Le spirochete de Ia recurrente est
faciJement inoculable au singe, difficilement, au depart, au
rat et a. la souris. Le spirochete de Ia tickfevel'se traIismet
facilement aux rats, souris, cobaye, mouton et singe.
DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIQUE. - Recherche directe du
spirille.
l o Examen, a l'etat frais,du !'ang preleve pendant un
acces febrile. Colorer au Giemsa du sang etale sur lame
et fixe par l' alcool.
20 Entre deux acces ou pendant la convalescence, recher-
cher Ie pouvoir agglutinant du serum du mala de vis-a-vis
d'un virus homologue.
....CULTURE. ~ Procede de Noguchi. - Noguchi a retlssi a

cultiver les divers spirochetes sanguicoles dans des milieux
semi -solides.
Eau physiolo~ique sterile. . • • . • . • . . . 80 ce.
Serum de lapm frais etsterile.. . . . . • • . • 10 ec.
Milieu a I'agar 2 0/0 (pH, 7.2) fondu et refroidi a 45 0 • 10 ee.
Solution sterile d'hemogiobine. . . . • . • . • 0,5 ec.
Laisser solidifier en tubes droits. Ensemencer quelques

gouttes de sang citrate ou de culture et recotlvrir de 1 a
2 centimetres cubes d'huile de vaseline.
Le developpement se fait a la partie superieu~e dans une
zone de 1 centimetre environ. II commence Ie 5e jour.
Repiquer toutes les semaines. .
Proce,de d'Ungermann. - Plus simple que Ie precedent.
On emploie du serum de lapin jeune~ frais et inactive a
58-60°, reparti a raison de 0 cc. 5 dans des petits tubes
de'9 millimetres de diametre, qu'on recouvre d'huile de
vaseline. La culture se fait bien a 370. A 30 elle se 0
,
developpe aussi vite et se conserve plus 101lgtemps.

Repiquer tous les 5 jours, avant que la multiplication
n'ait atteint son maximum. Ce milieu convient parfaite-
ment pour Ie spirochete des poules. Pour celui de Ia fievre
recurrente, il vaut mieux ajouter___au serum inactive quel-
ques gouttes de sang frais de lapin. La culture se fait
meme a 370.
E. - Sodoku.
(Spirochreta morsus mllris.)
I Prelever du sang chez Ie malade, pendant Ia periode d'as-

cension du cycle thermique ; l'inoculer dans Ie peritoine
d'un animal, a fortes doses: 5 cc. au cobaye. 1 cc. a la
souris. Faire quelques examens de sang, car on peut ren-
contrer Ie parasite a l'examen direct.
Examiner les animaux au bout d'une semaine. On trouve
Ie parasite dans l'exsudat peritoneal du cobaye et, secon-
dairement, dans Ie sang. L'infection du cobaye a une plus
grosse valeur diagnostique que celIe de la souris, car. celIe-
ci peut etre spontanement atteinte par Ie parasite du So-
FIEVRE RECURRENTE ET TICK FEVER 511
dohf. it faut donc vecifier si l'elevage dont provient Ia

souris inoculee est indemne.
It n'existe pas, jusqu'a pn!&ent, de procede de culture du
parasite du Sodoku.·
F. - Spirochete des oreillons.
Kermorgant, par ensemencement dans un milieu au

serum de cheval des secretions bucco-pharyngees des
malades. prelevces au premier stade de la maladie, a obtenu.
par repiquages successifs, une culture ne contenant que
deux especes micr\)hiennes : un spirochete et une baclb·ie.
L'inoculation de cultures en anaerohiose de la hacterie
isolee a l'etat de purete n'a provoque aucune reaction gIan-
dulaire chez l'animal. Au contraire, la maladie ourlienne a
ete constatee chez les animaux chaque fois que Ie spiroch~te
etait present dans Ie materiel inocule. ,
Les spirochetes de Kermorgant traversenl .les hougies
Chamberland,L2. oU L3 .
Le serum des convalescents contient une agglutinine et
une lysine specifiques vis-a.-vis de ces germes.
CHAPITRE XLII
TRYPANOSOMES. - LEISHMANIES. -HEMATOZOAIRES.

PIROPLASMES.
A. - Trypanosomes.
Les trypanosomes sontdes flagelles a membrane ondulante
bordee par un flagelle qui se termine en avant par une
partie libre ; noyau, blepharoplaste ou centrosome. Ce
sont des parasites du sang i:les vertebres .
1. - R.echerche des trypanosomes dans le sang,

- 10 EXAMEN DU SANG ENTRE LAME ET LAMELLE, A
L'ETAT FRAIS.
20 COLORATION DES FROTTIS DE SANG.
Etaler sur une lame, en couche mince, une gO'utte de
sang de l'anil!lal trypanosome. Dessecher rapidenlent en
agitant la lame.
Pro cede de Giemsa.
Fixer Ie frottis en Ie recouvrant pendant une dizaine de
minutes d'alcool absolu jusqu'a evaporyation, puis colorer
par la solution de Giemsa.
a) Coloration rapide. - Colorer pendant 40 a 50 minutes
par la solution de Giemsa obtenue en melangeant un centi-
metre cube de colorant de Giemsa avec 20 centimetres
cubes d'eau legerement alcaline. Verser ce melange dans
une boite de Laveran, OU ron depose la lame, frottis en bas,
de fa<;on a eviter Ie depot des precipites. Laver rapide-
ment a l'eau.
b) Coloration lente. - Diluer Ie colorant de Giemsa a
1(2 centimetre cube pour 20 centimetres cubes d'eau. Lais-
ser en contact pendant 16 heures danf; une boite de Laveran.
S'il y a surcoloration, difIerencier rapidem'ent au bnin
a 5 p. 100.
Procede panoptiqlle. - Sur un frottis non fixe, verser
TRYPANosoME'S 51~
XV gouttes de la solution de May-Grunwald. Recouvrir
d'uri couvercle de boite de Petri pour empecher l'evapora-
tion. Apres 3 minutes de contact, ajouter XV gouttes d'eau
distillee. Au bout d'une minute, rejeter Ie colorant et, sans
laver, verser sur Ie frottis hi solution de Giemsa diluee
(III gouttes pour 1 centimetre cube d'eau de robinet). Lais-
ser une heure, laver et seeher.
3 0 ' COLORATI9N DES COUPES (par exem pIe de Schizo-
trypanum Cruzi dans les muscles).
Pr"ocede de Laveran. - Preparer Ie melange suivant au
moment de l'emploi :
Eosine a 1 p. 1.000. 4 parties.
Eau dislillee. • 10 pnrtie&.
Verser ce melange dans une boite de Laveran, ajouter

1 parti,~:de,bleu Borrel it l'argent, deposer Ia coupe face en'
bas. Laisse,r colorer 20 minutes. Laver rapidement it l'eau
Fig. 27 (il gauche) Trvpanosoma qambiense dans Ie ,ang du rat : 1 et 4. formes

adultes ; 2, 3, 8, 9, dtfl"el'ents slades de Ia division en deux; 5, 6, divibions multiples;
7, formejeune sans flagclle (d'apr"s Brumpt)
Fig. (en haut it droite) Spirochetes de la I ck [ever uhys.ine dans 10 suug dll rut;
gf b, 'globule blanc; g, r, globules rouges (d'apres Brumpt). '
Fig. (en bas il droite) Corps de Leishman daus un frottis de pulpe splenique ; C. l.eu., .
LeIshmania . . gr, globule rouge,' N, noyaux de mononuclcaires (d'nprcs BI·UIll.pt).
~IICROBIOLOGIE 33
5H ,MALADIES INFECT .lE,f,!~$,S. TECH,NIQUES SPECIALES
c9,qrant~ et diff¢rencier quelql,les lieco,n.des au tanin orang!}
0.\1. a 19. s.olutiun aqueuse de tanin a 5 p. 100. Laver a !'e1;lU,
s~Fher.
IL - Culture des tryp.anosomes, _" Se fait daQs Ie

liquide de condensation de la gelose .au sang de Novy et
Mac Neal...,Nicolle (Milieu N. N. N.) (vo.ir page 62).
La culture des trypanosomes non pathogenes est facile,.
Celie des trypanosomas pathogenes est difficiie, sauf S-ehi-
zolrypanum Cruzi.
Culture des 'lrypanosomes palhogenes par Ie
. procede de Ponselle,
Ponselle a pense que Ie principal obstacle a la culture des
trypa.nosomes'pathogenes venait de la I?resence d'an,tiQorps
dans ie sang des animaux parasites fournissa'nt la semence.
Pour les adsorber, il prend un milieu renfermant de la
peptone et de la gelatine. La tonicite du milieu joue
aussi un role important, variant d'une espece 'a une autre.
On dissout 2 grammes de peptone et 2 grammes de ge-
latine pure (et merne repurifiee) dans 100 cc. d'eau bidistil-
lee auxquels on ajoute 0.3 it 0,8 de Nael et 1 ce, de solution
norrnale de carbonate de soude. A ce milieu, liquide a la
temperature du laboratoire, on ajoute un vqlurne egal de se-
rum de lapin (pour les cultures d'isolenl.ent) ou du sang
defibrine pur ou dilue au 1/20 dans Ie serum (pour les cul-
tures de passage). On inactive 30 minutes a 56°.
Pour les premieres cultures, on ensemence une petite
quantite de sang d'animal infecte (1 a 2 gouttes) ; pour les
mdres, on ensemence largement. Temperature: 23- 26°.
Repiquage to us les 7-8 jours. Les flagelles se developpent
au-dessus du depot d'hematies, en petites colonies puncti-
formes sur les parois du tube. lis ant la morphologic des
trypanosomes de culture intestinale des glossines. IIs ne
sont pas virulents. On peut les utiliser comme antigime.
~..
III. - Trypan.osomiases humaines, Trypanoso-
miase afrcc;aine c;ausee.. par Trypanosoma flam-
TRYPANOSOMES 515
516 MALADIES INFECTIEUSES. 7BCHNIQUES SPECIALES
biense. - 10 Recherche des tr!JP~llOSOl1leS dans un ganglion.

- Au debut de Ia lllaladie, ponction ,d'un ganglion. Examen
direct, a I: etat frais, d'une goutte de lyrnphe entre lame et
lamelle pour Ia recherche des trypanosomes vivants.
2 0 Recherche des parasites dans Ie sang:
a) Examiner Ie sang a I'etat frais entre lame et lamelle.
Chez les malades non traites et recemment infectes, les try-
panosomes sont Ie plus souvent rares;
b) Observer si les hematies presentent de l'auto-aggluti-
nation;
c) Rechercher les parasites apres centrifugation du sang.
Pour cela, re~ueillir 10 cen timetres cubes de. sang de la
veine du pli du coude dans un tube a centrifugeI' contenant
1 centimetre cube d'une solution de citrate de soude a
10 p. 100 ; bien melanger.
Centrifuger pendant 15-20 minutes jusqu'a ce que Ie
liquide surnageant so it clair.
Decanter avec soin et prelever, immediatement apres la
centrifugation. a la pipette, la couche superficielle du
depOt cpntenant les leucocytes. Examiner entre lame et
lamelle.
d) Inoculer a 2 ou 3 cobayes, sous la peau, 6 centimetres
cubes de'sang, Examiner Ie sang des ani,mau±. 15 a 20 jours
apres l'inoculation. .
3 0 Recherche des parasites dans Ie liquide cephalo·rachidien.
- Cette recherche presente une grande importance au point
de vue du pronostic.
Centrifuger 5 centil11~tres cubes de liquide. Decanter et
prelever Ie depot: avec une pipette. Deposer une goutte
entre lame et lamelle. Si l'examen. est negatif, inoculer
Ie culot de centrifugation sous la peau du cobaye.
Lorsqu'un de ces examens a revele un parasite vivant,
,1 est utile, pour Ie diagnostic du parasite, de pratiquer une
coloration par Ie procede de Giemsa ou les procedes ana-
logues.
IV. - Trypanosomiase americaine ou Maladie de

Co .Chagas, ceJusee par SChrzotrypanum Crllzi. - Ce
parasite se distingue des autres trypanosomes par son evo-
LEISHMANIES 517
.lution schizogoniq:p.e. II infe'cte l'homme et beaucoup d'a-

nimaux domestique~ ou sauvages. II est transmis dans la
.nature par. un hemip'h~re : Conorhimls megistus.
B. - Leis1hmanies.
Parasites generalemE1nt intraceIIulaires avec noyau et

centrosome bacill~ire d;ou l'on peut'voir partir un ilagelle
interne (rhizoplaste de Novy), dimensions 2-4 fL X 1-2 fL
formes ovoides. parfois.bacillaires. En culture. donnent des
flagelles du type Leptompnas ou Herpetomonas de 15-20 fL X
1,5-4 ['- pourvus d'un 10Jtg flagelle s'inserant a l'extremite
anterieure du corps. Multiplication: generalement par divi-
sion binaire, longitudinale i division multiple des elements
leishmaniens. Especes : Leishmania donovani (Kala-azar in-
dien), Leishmania tropica (Bouton d'Orient) Leishmania in-
fantum (Splenomegalie infantile). .
Materiel de recherche pour Ie diagnostic. - Pour les leish-
manioses cutanees, nettoyer les ulcerations et racler legere-
ment les tissus. Faire des frottis avec Ie produit du raclage.
Ponctionner avec une fine pipette les lesions non ulcerees,
Maler sur lame Ie sue aspire et l'ensemencer.
Pour les leishmanioses viscerales, les recherches doivent
porter sur Ie. sang. les ganglions, Ie foie et la rate, la
moelle des os longs (chap. XIV, F) Ia serosite d'un vesi-
catoire (Cummins et Ch. Nicolle).
La ponction du foie ~e fait en enfon<;ant une aiguille a
ponction lombaire dans cet organe, apres asepsie de la
peau ~\ la teinture d'iode ; aspirer avec une seringue sterile
et secher. Retirer l'aigpille d'un geste brusque et deposer
. sur l~me, par refoulement, Ie petit cylindre de tissu preleve;
l' etaler et colorer.
Pour la ponction de la rate. dont Ie tissu est plus fragile,
.il faut· observer les precautions indiquees par Ch. Nicolle
afin d'eviter les hemorragies ou les ruptures: faire coucher
Ie malade sur Ie .s:Ote en Ie- faisant maintenir par un aide.
Apres asepsie d~ la peau aIn teinture d ·iode. ponctionner en
pleine matite splcnique avec une aiguille -assez longue, fine
et nellve. Les ujgllilles.epaisses, rouillees on rugueuses ris-
'&rs MALADIES 'INFECT l!§i;SES. TECHNIQUES SpECIALES
quent de dethiter Ie tissu spJenique. Aspirer avec la set-in-
gu~, trois retirer l'aiguille d'un coup sec.
CULTURE. ~ La culture des Leis'limanies se fait it 220
dans Ie liquide de condensation de la gelose au sang (Milieu
N.N.N.) (chap. v, h, J). Elles peuvent etre repiquees inde-
finiment.
COLORATION. - Par les methodes derivees du Roma-
nowsky.
Les cellules infectees sont reparties dans la rate, la
moelle oSseuse, Ie foie dans les leishmanioses internes ~
dans les cel1ules granulomateuses lors de leishmanioses lo-
cales. '1'outes les categories de celluI-es mesodermiques ayant
1e p<"Jl1vofr phagocytaire peuvent etre parasitees.
Dans les leishmanioses internes, Ie sang contient pres-
que toujOutS de l'ares parasites, decelables a 'l'examen
direct, surtout dans Ie kala-azar indien, et pouvant se deve-
IOlltler dans les cultures. Dans 4.es leishmanioses locales,
les parasites p~nettellt quelquefois dans la circulatiOI'l
sanguine.
Leucopenie dans les leishmanioses internes: moins de
4.000 leucocytes avec moins de 50 p. 100 de polynucleaires
et 20 p. 100 oU plus de grands mou?nucleaires.
C. - lIematozoaites du paludisme.
Plasmodium inalarire lFieVl'e quarte).
Plasmodium vivax (Fievre tierce 1)enigne).
PlasmodIUm prrecox (ou falcipat:um) (Fievre fropicale on
tiet'ce m,aligne).
Transmission par les Anophelines.
L~ recherche du parasite du paludisme doit etre faite
dans Ie sang durant l'acces oules heures qui Ie precedent.
Se rat>peler que le traitement 'par la quinine fait dispa-
l'altre les hematozoaires, sauf les croissants qui lui resistent
bien.
Le sang est preleve par piqure du doigt ou du lobule de
l'oreille. Les parasites peuvent eire recherches it l'etat frais
oU' apres coloration:
. 16 EUMll::N A L'ETA'D FRAIS. - Recueillir Ia goutte de
HEMATOZOAIRES DU PALUDISME 519
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EXPLICATrON DE LA PLANCHE
lempruntee a AHM ....ND-DELlLLl·:)
Plasmodium vivax (Val'. tertiana Laveran).

1. Scltizonte jeune (sporozo'ite venant de penetrer dans Ie globule).
2. Schizonte.
3. Corps am02bozde dans un globule hypedmphie pn'!sentant des gru-
nulntions de Schil:!l'nel'
4 Corps am02bo'ide en voie de segmentDtion, dans un globule tres
hypertrophie.
5. Corps en rosace.
6. MacrogameteJeune.
7. Macroyamete adalte.
8. Ilficrogametocyte .
8 bis. 21facrogamete en schizogonie regressi~·e.
Plasmodium Falciparum (Val'. parva Laveran).
9. Sporozoite aecole a un globule.
10. Deu.-v schizonte.s it rinlerieUl' d'un globule.
11. Scltr"zonfe dans un globule presenlant des granulations de Maurer.
12. Trois sc}tizontes dans Ull globule avec granulations de MaUl'er.
13. Co.r ps ell rosace.
14. Gamete jeune intraglobulaire.
15. Jllacrogamete adulte (corps en croissant 1ype).
16. Microgametocyte adulte (microga m etocyt,,) .
16 his. Gamete pent· etre en schizogonie regressi ve ?
Plasmodium. malaria! (Val'. quartarna Lavel'an).
17. Schi:onte jeulle dans un globule non hypertrophi.e.
18 . S"hizonte plus deueloppe ct pigment!;.
19 Schizonte en poire.
20. Schizonte uge tres pigmcnte.
21. Schimnte en voie de segmentation.
22. Corps en marguerite.
23. Macrogamete.
24. Microgametocyte.
Globules rouges . Hematoblastes et leucocytes.
a) Globule rouge et IlI!matoblaste.
b) Ife1l1atoblasfe sur un globule ronge paBvant simuler un schizonle.
c) Globule rOllge presenlant des granulations artificielles (preeipites
de matiere eolorante) avec un hematohlnste s\lr son bard (Cause
d'erreur).
d) Hemalie nucieee.
c) Leucocyte polynucleair'e it gL'anulalioDs neutrophiles.
n Leucocyte ITIonol1uc/eail'e defol'me.
g) Leucocyte melanifere avec quelques gl'anulations a:r.urophiles.
Hematozoaires du paludisme
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P. Armafld-Delillc del.
MAS SON ET C'· , EDITEURS.

HEMATOZO:A.IRES DU PA[;UDISME ,521
,sang sur, une lame tres propre, bien debarrassee des

matieres grasses qui e~pechent la repartition uniforme du
liquide Recouvrir d'une lamelle.
Observer au microscope' avec un e-clairage de moyenne
intensite et en diaphragmant.
L'examen it l'et::}t frais permet.,de decouvrir surtout;les
formes pigmentees. II est plus difficile de voir les formes
jeunes sans coloration.
Les parasites doivent etre recherches dans'les globules
.rouges ou on les per~oit sous forme de petites taches. de
'protoplasma pale, a contours souvent imprecis, contenant
des' grains de pigment noir.
Les leucocytes melaniferes (Ie plus souvent grands mono-
nucleaires) sont reconnaissables aux' dechets parasitaires
·qu'ils ont phagocytes.
Ne pas prendre pour des parasites les vacuoles. des
globules rouges qui sont a contours nets, arrondis,. ni les
hematoblastes qui peuvent etre fixes sur uQ,globule rouge.
Ne pas prendre pour du pigment les granulations refrin-
.gentes des eosinophiles, ni celIe.s des lymphocytes, ni les
.grains de'poussiere.
20 COLORATION. - La goutte. de sang doit etre etalee sur
la lame comme il a ete indique. Secher la lame en l'agitant
e,n l'air, mais pas sur la flamme d'une lampe. Fixer it I'al-
cool absolu.
Colorer par les methodes derivees du Romanowsky
(Giemsa, etc.).
S~ rappeler, pour eviter les causes d'erreur qui peuvent
faire prendre des hematoblastes oules vacuoles des globules
'rouges pour des parasites, que ceux-ci doivent presenter
'un noyau se colorant en rouge et un protoplasme qui appa-
rait en bleu pale.
Pro cede de La goulle cpaisse (Laveran, Ronald Ross). -
Quand les parasites sont rares, il est avantageux d'em-
ployer Ie procede de )a goutte epaisse, qui a pour effet
,de concentrer sur une surface tres reduite les hemato-
zoaires contenus dans un volilme determine de sang .
.on depbse,sur une'lame 3 a fi gouttes de sang sans les eia-
leI'. En s'agglomerant\ eIles prennent.nn diametre de 5 mil-
,limetres environ.
Laisser seeher, puis hemolyser p~r J'ean distillee qui
5~2 MALAnmS INPEcTIttrJSES. TECHNIQUES SpECIALES
dt!colote les henu1ties .at faisse itltacts les Ieucocytes et

les parasites. Secher de noUveau, puis colorer pnt les me'-
thodes classiques. .
CULTURE (C. C. Ba~). - Du sang d'un rnalad~ p~lhe
avec une aiguille it une veine du pH du coud'e est conduit
par fill tube· de caoutchouc sterile dans lin tube doe 25 mil-
limetres de diametre sur 12 :}. 15 de .long, dal1s laquel il
est defibrine avec un agitateur. A. ce sang defibrine. on
ajoute Un dixieme de centimetre cube de solution de dex-
"tl'ose ou de maltose a 50 p. 100 par 10 centimetres cubes
de sang et on centrifuge de fa<;on a reunir tous les leuco-
cytes a Ia surface du depot cellulaire. On decante Ie
'set'tim !mrnageant et on Ie distrihue dans des tubes de ¢ul-
·tu1'e a fond plat sur une hauteur de 12 a 25 millimetres.
On preleve en suite des globules rouges vets Ie mHieu du
depot cellulaire et on ensemence les tubes de serum !l,. rai-
Son d'un a deux dixiernes de centimetre cube de ces glo:
buIes- par tube. Dans ces milieux prives de leucocytes, et a
la temperature optima de 40 0 ou 41°, Bass a obtenu plu-
sieurs generations de Pl. vivax et de PI. (alciparum. Mais'
il s'agit plutot d'une survie prolongee des hematozaires
ttue d'une veritable culture.
30 Examen des parasites chez l' Anophete.
A) RECHERCHE DES ZYGOTES. - Diss~quer l'anophele:
enlever les pattes et les ailes, placer l'anoppele sur. une lame
dans une goutte d' eau. Avec une pince, maintenir l~ thorax;
avec une autre pince, saisir les derniers segments de l'ab-
domen et tirer doucement. On arrache ainsi l'intestin pos-
terieur et moyen. Enlever tout ce qui est chilineux. Placer
une lamelle couvre-objet Examiner a l'etat frais, a faible,
puis a fort grossissement.
On peut colorer au Giemsa, sans enlever Ia lamelIe, en
deposant une goutte de solution colorante sur un bord de la
lamelle, et en aspirant Ie liquide par Ie bord oppose, au
moyen d'une bandelette de papier buvard. Pour la conser-
vation, luter it Ia paraffine ou au baume.
B) RECHERCHE DES SPOROZOITEs(ProcedeEt. Sergent).-
Saisir l'anophele avec une pince fine par Ie thorax. Avec
une autrepince fine, saisir et arracher la tete de l'anophele.
Une gouttelette som::d it la plaie du' thorax: elle contient
·
P iROPLASMSS 523
les glandes salivaires et les sporozo'iles. Examiner a l'etat

frais. Pour colorer. faire un frottis leger, secher a rail',
fIxer et colorer com me un frottis de sang.
¥
*•
D. - Piroplasmes.
Les piroplasmes sont des parasites endoglobulaires qui
determinent des infections chez les bovides, les ovides, les
equides, Ie chien. lIs sont inocules par les Ixodes ou tiques
chez lesquels s'effectue la reproduction sexuee. Certaines
piroplasmoses sont transmises par les filles des tiques
qui ant suce Ie sang des animaux malades'; d'autres sont
transmises par I~s memes tiques qui. a un stade anterieur
de leur evolution, ont suce Ie sang des animaux malades.
La coloration s'effectue par la methode de Romanowsky
et les procedes derives.
Le procede Ie plus sur et Ie plus commode pour Ie dia-
gnostic de la theileriose bovine consiste dans la ponction du
foie (voir chap. XIII, F.)
PRINCIPALES ESPECES DE PIROPLASM IDES (d'apres Mes-
nil).
Piroplasma bovis (Europe) transmis par Ixodes ricinus,
Hremaphysalis punctata
Piroplasma bigeminum (Europe meridionale, Texas, Aus-
tralie, Inde, Madagascar, Afrique australe, Erythree) trans-
mis par diverses especes d'ixodes des genres Margaropus et
Boophilus.
Piroplasma argentinum (Amerique du Sud) transmis par
Margaropus australis.
Gonderia muians (Afrique, Asie et Europe meridionales,
Australie) transmis par Rhipicephalus simus, evertsi, appen-
diculatus.
Piroplasma canis transmis par Hremaphysalis leachi en
Afrique australe (Lounsbury), Rhipicephalus sanguineus
aux Indes (Christophers), Dermacentor reticulalus en France
(Brumpt).
Nullalia equi transmis par Rhipicephalus everisi.
Piroplasma caballi transmis par Dermacentor reticulatus.
Piroplasma ovis transmis par Rhipicephalus bursa.
.524 MALADIES INFECT IE USES. TECHNIQUES SPECIALES
.Theileria parva agent de la fievre de la cote orientaltl, trans-

,mis par Rhipicephalus appendiculatus et R. everlsi.
Anaplasma m,arginale, centrale, argentinum transmis par
Boophilus decoloratlls au Transvaal et Amblyomma en Ar-
gentine
On ne connal! pas de piroplasm( humain.
SIXIEME PARTIE
PREPARATION ET TITRAGE DES VACCINS

ET DES SERUMS THERAPEUTIQUES
1
CHAPITRE Xhlll
TECHNIQUE DE PREPARATION ,ET DE TITRAGE
DES ,VACCINS MICROBIENS.
La technique de preparation de ,ces vaccins varie avec les

divers, microbes pathogenes. Quelques methodes peuvent,
toutefois . etre appliquees a beau~oup d'entre eux.
A. - Vaccins antityphoidiques.
a) Methode de Wrighl-,Leishman. - Cette methode fut

1a premiere utilisee dans la pratique 10rs de la guerre du
Transvaal.
Des cultures de bacilles typhiques dans du bouillon
peptonise, largement aerees et agees de 48 heures, .sont
chauffees au bain-marie a 530 pendant une heure .
.A.pres refroidissement, elles sont additionnees de ,0,4
p. 100 de lysol. On effectue Ie titrage des elements micro-
biens par centimetre c'ube, suivant la technique de Wright
qui sera decrite un peu plus loin ·(G) et, par addition d'eau
salee physiologique. 'on fait en sorte que chaque 'centimetre
cube contienne 1 ,milliard de bacilles. ·Le vaccin est
en suite reparti en :petits flacorrs 'qu'on scelle.a 'la lampe.
On ,injecle une premiere fois 1/2 centimetre cube, puis,
8 jours apres .. 1 centimetre cube et. encore; 8.jours plus
tard. 1 centimetre cube.
Au lieu de cultures en bouillon, ·on emploie.aujour.cl'hui, !
526 PREPARATION DES VAGGINS ET SERUMS
pour la preparation du vaccin destine aux armeesanglaises,
des cultures sur gelose nutritive en fioles plates de Roux.
Apres 48 heures, les microbes sont recueillis par raclage,
puis delayes dans de l'eau salee physiologique.
b) Methode de Chantemesse. - Lors de ses premieres
recherches qui datent de 1887 (avec F. Widal), Chante-
messe cha.uffait a 120°, puis, plus tard, a 100°, des culture.s
en bouillon. Mais a cette temperature Ie pouvoir vacci~ant
est a peu pres completement detruit. Le vaccin actuel de
Challtemesse est prepare de la maniere su~vante, tres ana-
logue a celle de W righ t :
Une emulsion de culture sur gelose agee de 24 heures
est diluee dans une qU:;lDtite d'eau sa lee physiologique
sterile, telle que chaque centimetre cube renferme 1 mil-
liard· it 1 milliard 200 millions de germes. On chauffc au
bain-marie it 56° pendant 45 minutes; on ajoute 2.5 p. 1000
de cresolou d?acide phenique et on repartit en tubes.
c) Methode de Widal et Salimbeni. - Des cultures de ba-
cilles ty:phique et paratyphiques A et B (T. A. B.) selec-
tionnes d'aprcs leur pouvoir antigene, sont emulsionhees
dans reau physiologique apres 18 heures d'etuve. On les
sterilise pendant une heure dans un lippareil a agitation
continue' it 57 0 pour Ie para B, it 56° pour Ie bacille typhique
et Ie para A. L'emulsion finale renferme pat centimetre
cube 4200 millions de germes dont 3/7 de T, Z/7 de paraA,
et 2/7 de .para B.
On pratiquesoit une seule inoculation de 1,5 centimetre
cube, soit deux inoculations de 1 et 2 centimetres cubes.
d) Methode de Vincent.- Les cultures sur gelose, agees de
24 heures, de dix souches de T, cinq de A et cinq de B sont
emulsionnees dans l'eau physiologique sterile, puis diluees
nux proportions voulues. On additionne ensuite Ie liquide
d'ether, on agite et on laisse ala glaciere pendant 24 heures.
Puis on evapore rapidement l'ether en portant Ie liquide
dans un flacon. large. a demi relDpli, et simp~ement bouche
it. l'ouate et plongeant qans un cristallisoir garni d'ean
a 38 sou~ la oloche a vide. Le liquide vaccinal est fina-
0,
lement reparti aseptiquement en flacons sterilesl qu'on

s~lle, a la !awpe. 11 e.s'· titre. a raison de 2.5.0(,) 'millions de
TEGHNIQUB POUR LES VAGGINS MICRQBIENS 527
bacilles par centimetre cube. soit Ij2T, 1/4 A et l/4 B, On
doit Ie conserver en glaciere a l'obscurite et Ie rejeter
llpres trois mois.
C'est sous cette forme que Ie laboratoire special du Val-'
de-Grace Ie distribue pour l'armee fran~aise, ou la vaccina-
tion ·antityphoidiqueest obligatoire depuis 1914. On pratique
actuellement une seuIe inoculation de 2 centimetres cubes,
en arriere de l'epaule. a deux travers de doigt en dedans de
l'aoromion, SOilS fa peall.
Methode de A. Berthelot. - Au lieu de tuer les element&:
microbiens par reiher, on peut les sleriliser tres efficace-
ment, sans endommager leur protoplasme, par Ie chlorure
cf ethyle.
Popr steriliser par Ie chlorure d'ethyle une emulsion nii-
crobienne, on abaisse lao temperature de celle-ci au voisi-
nage de 00 en pIa~ant Ie tube qui la renferme dans de la glace
concassee; puis on y introduit, par lOcentimetres cubes d'e-
mulsion, lln au deux centimetres cubes de chlorure d'ethyle·
liquide, au moyen du jet capillaire produit par les petits
tubes qu'on utilise pour l'anesthesie locale. On agite dou-
cement Ie melange des deux liquides et 1'0n place Ie tube
debout dans une bouteille Thermos contenant de la glace
pil~. On l'y laisse 24 au 48 h,eures.
Pour se aebarrasser rapirlement d.u chlorure d'ethyle, il
suffit de ploRger quelque temps dans un bain.d'eau tiede., a
38°, Ie tllbe qui contient l'emulsion sterilisee. /
CeUe methode est applicable a la preparati()n de divl;lrs
vaccjns microbiens, mais certains germes sont tres resis-
t~nts au chlorure d'ethyle et il est necess,aire de prolonger
l'action de Gelui-ci. On doit toujours controler la sterilit.e
du va,ccin d,ebarrasse de C~H5Cl. C'est d ailleurs une prt-
caution qlJ.:on doit prendre pour tous les vaccins.
e) Methode de Pfeiffer et KoJle. - Des cultures sur gelose
de 24 heures sont emulsionnees dans l'eau salee physl010-
gique, chauffees a 600 pendant une heure et demie a deqx
heures, additionnees de 3 p. 1.000 d'acide phenique, re-
parties en flacons scelles 11 la lampe et chauffees de nou-
veau ~a 600 pendant 30 minutes Chaque centimetre cube
d'emulsion contient environ 4 milligrammes de microbes. .\
f) ,Vi/,llS vivants vaccinanls. - Castellani a employe comm.e
528 PREPARATION DES VACCINS E2° SERUMS
vaccin, en injections sous-cutanees, des cultures chauffees

1 heure a 500 •
Ch. Nicolle, Conar et E. Conseil ont propose l'injection
intraveineuse de bacilles typhiques provenant de cultures
sur milieux geloses, bien laves par plusieurs centrifugations
successives avec de l'eau physiologique, puis chauffees seu-
lement pendant 25 minutes it 460 , temperature insuffisante
pour les tuer. On fait une premiere injection de 400 millions
de bacilles et, 2 semaines apres, une seconde de 1 milliard
200 millions.
g).Alltoiysats. - Conradi, Bassenge et Mayer ont utilise
comme vaccins les produits d'autolyse directe des bacilles
typhiques dans l'eau distilleeo Les bacilles, recueillis sur
gelose apres 24 heures de culture, sont simplement mis en
suspension dans de l'eau distillee et rigoureusement agites
par intermittence pendant trois jours. On filtre ensuite
sur bougi.e Berkefeld ou. mieux sur papier Chal'din
mouille.
Mac Fadyen et Rowland ont employe un filtrat de bacilles
congeles d'abord par I'air liquideo puis decongeles.
h) Methode de Ranque et Senez, vaccins iodes. -_ Une dilu-
tion de cultures de 18 heures sur gelose ....de concentration
telle qu'un centimetre cube contienne environ 500 millions
de bacilles, est additionnee de 1 po 100 de solutibn aqueuse
iodo-ioduree decinormale du Codex. On laisse agir l'iode
pendant 30 minutes et on arrete ensuite son action par ad-
dition d'une solution d:hyposulfite de soude sterilisee. jus-
qu'a decoloration totale. On laisse ensuite au repos pendant
15 a 20 jours. Les ba~iIles morts se deposent. On decante
Ie liquide surnageant qu'on remplace par un volume d'eau
salee physiologique correspondant au volume initial de la
dilution de culture. Le vaccin est reparti en am~oules et
pret a servir.
i) Lipo-vaccin de Le Moignic. Pinoy el Sezary - On ernul-
'sionne les cultures sur gelose aprcs 19 heures d'etuve, dans
l'eau physiologique sterile. Apres centrifugation, Ie culot
est additionne d'une preparation huileuse speciale et steri-
lise par chauffage it 57° pour T et it 60 0 pour A et B avec
addition d'eugenol. On· dilue en suite Ie tout dans un me-
TECHNIQUE POUR LES VACCINS MICROBIENS 529
lange huileux definitif qui renferme, par centimetre cube,

2 milligrammes de T, 1,75 milligramme de A et autant
de B. On pratique une seule inoculation de 1 centimetre
cube.
....*
B. - Vaccins sensibilises de Besredka.
Au lieu de tuer ou d'aUenuer les cultures par un nntiscp-

tique ou par la chaleur, Besredka «sensibilise » les microbes
avec un antiserum specifique (antityphique, antipesteux,
antidysenterique, anticholerique, etc.).
On rade des cultures sur gelose, on les emulsionne dans
une petite quantite d'eau physiologique et on verse cette
emulsion dans un tube con tenant un volume au moins
double de serum sensihilisateur. Les microbes sont bientOt
agglutines. On les laisse en contact avec Ie serum a la gla-
-ciere pendant 48 heure§.. On centrifuge et on decante Ie
serum clair. Le depot de microbes est alors remis en sus-
pension dans de l'eau salee physiologique, centrifuge de
nouveau et lave encore trois fois de la meme maniere pour
enlever to ute trace de serum libre.
La masSe microbienne est diluee dans une quantite d'eau
salee physiologique telle, que chaque centimetre cube con-
tienne environ 500 millions de corps microbiens, et repartie
dans des tubes qu'on scelle a la lampe, sans addition d'nn-
tiseptique.
Sadakichi Ichikawa, au Japon, dit avoir obtenu des re-
sultats excellents dans la therapeutique de la fievre typhotde
en sensibilisant les bacilles typhiques et les paratyphiques
B par du serum de convalescents. 11 emulsionne 10 anses
de culture dans 10 centimetres cubes de serum de convales-
cent, laisse en contact 5 a 6 heures a l'Huve, en agitant fre-
quemment, centrifuge et lave trois fois les hacilles a'Vec de
l'eau salee physiologique sterile, puis reprend par 100 cen-
timetres cubes d'eau salee physiologique pheniquee a
0,3 p. 100 et agite fortement pendant 1 heure.
Avant I'emploi, chaque ampoule de vaccin est agitee pour
dlssocier les grumeaux, et aspiree dans une seringue conte-
nant a cc. 5 environ d'eau salee physiologique tiede.
MICROBIOLOGIE 34
530 PREPARATION DES VACCINS ET SERUMS
La dose de vaccin a injecter est de 0 cc. 3 a 0 CC. 6. L'in-

jection doit eire {aite dans les veines. Elle est inefficace so~s
la peau. Elle produit, chez les malad.es typhiques, une eleva-
tion immediate de temperature suivie d'un frisson et d'une
chute brusque de la fievre .
.. .
C. - Vaccins ,mixtes.
Castellani a prepare des vaccins mixtes dont l'utilisation
s'est montree inoffensive et efficacedans de nombreux essais
effectues sur l'homme dans l'Inde. lIs sont constitues p~r
des emulsions de cultures sur gelose dans l'eau physiolo-
gique, additionnees de 0,5 p. 100 d'acide phenique pur et
non chauffees (sauf pour Ie bacille typhique et les paraty-
phiques qui sont chauffes a 530 pendant 30 minutes). On en
fait 2 injections a une semaine d'intervalle, l'une de 1 centi-
metre cube, l'autre de 2 centimetres cubes (1/2 et 1 centi-
metre cube pour les enrdnts et les femmes).
Le vaccin mixte typhique, paratyphiques A el B est titre a
raison de 500 millions de bacilles typhiques et 250 millions
de chacun des para par centimetre ct1be.
Le vaccin mixte cholera + peste est prepare avec des cul-
tures de vibrions choleriques et de bacilles pesteux agees de
3 jours, emulsionnees dans reau salee physiologique phe-
niquee a 0,5 p. 100, titrees chacune a 1 milliard de bacilles
pesteux et 2 milliards de vibrions par centimetre cube, aban-
donnees pendant 24 heures a la temperature du laboratoire
puis controlees par reensemencement pour garantir leur
sterilite avant l'usage
I.:e vaccin mixte bacille typhique + parafyphiques A et B +
+
peste cholera est prepare de la meme maniere, mais les cul-
tures de typhiqne et de paratyphiques, agees seulement
de 24 heures, sont chauffees a 530 , apres avoir ete emulsion-
nees dans I'eau salee physiologique pheniquee a 0,5 p. 100.
Le vaccin mixte bacilfe typhique + paratyphiqlles A e1B +
M. melitensis contient une emulsion de culture de meLi-
tensis sur gelose agee de 3 jours, non chauffee, titree' a
, 1 milliard de germes par centimetre cube. Les quatre especes
, de microb~s sont melangees en parties egales. La dose a in-
TECHNIQUE POUR LES VACCINS MICROBIENS 5'31
jecter est de 0 cc. 5 it 0 cc. 6 pour la premiere inoculation et

de 1 centimetre cube it 1 cc. 2 pour la deuxieme.
te serum des sujets injectes avec ces vaccins mixtes est
agglutinant apres 2 a 3 semaines pour chaque microbe, au
meme taux que s'ils avaient ete traites par un seu} microbe-
vaccin isolement.
D. - Methode de Sabouraud pour Ja preparation des

vac~ins staphylococciques.
Des cultures sur gelose-peptone glycerinee acetique (mi-

lieu de Sabouraud deja indiquel sont, apres 48 heures de
se-jour a l'etuye a 37°, delayees dans de l'eau salee physiolo-
gique (environ 10 centimetres cubes par tube). L'emulsion
est aspire.e it la pipette et portee dans des tubes a centrifuger
steriles. On centrifuge, on decante Ie liquide clair. Le cnlot,
repris par 3 ou 4 centimetres cubes d'eau salee, est reporte
;\ la centrifuge, mais cette fois dans un petit tube soigneuse-
ment tare avant l'introduction de l"emulsion microbienne.
On centrifuge, on enleve toute reau que la pipette peut
aspireI', puis on pese de nouveau Ie tube a la balance de pre-
cision. L'experience montre que Ie culot contient environ
'5L10 milIion5 de cocci par milligramme.
Les microbes sont delayes dans de l'eau physiologique
sterile, a raison de 5 centimetres cubes de celle-ci pour
1 centigramme de depot. Chaque centimetre cube contient
donc environ 1 milliard de cocci.
L'emulsion, ainsi faite au taux voulu, est portee dans un
flacon bouche a i"emeri, sterile, et addition nee de son
volume d'ether. On la conserve it la glaciere pendant
24 heures et on l'agite de temps en temps.
On decante ensuite l'ether et on evapore ce qui en reste
en portant Ie flacon immerge dans un cristallisoir conte-
nant de l'eau tiede a 380, sous une cloche it vide.
Le vaccin est alors reparti en ampoules qu'on scelle ala
lampe et qu'on chauffe finalement pendant une heure dans
un bain-marie a 600. II est ainsi pret a servir et se conserYe
longtemps.
....*
E. - Methode de eh. Nicolle et Blaizot.
Appliquee d'abord it la preparation d'un vaccin mixte an-

li90no et alltisgnococcique (voir chap xxx), ceUe methode
a ete adaptee par Ch. Nicolle et Blaizol it d'autres microbes
(staphylocoque, coqueluche, etc.).
Elle consiste a emulsionner les cultures sur milieux so-
lides, raclees puis lavees par plusieurs centrifugations suc-
cessives, non plus dans l'eau salee physiologique, mais darn;
une solution it 7 p. 1.000 de fluorure de sodium. La vitalite
des microbes. et aussi leur toxicite, sont ainsi supprimees
sans que Ie protoplasma soit altere. lIs ne s'autolysent plus
et conservent cependant toutes leurs proprieMs antigenes.
Apres 24 heures ou 48 heures de culture sur milieux ap-
propries les microbes sont emulsionnes dans la solution de
fluorure puis centrifuges et laves plusieurs fois dans cette
meme solution en vue d'eliminer toutes les substances
toxi'ques (peptone, etc.) provenant des milieux nutritifs.
L'emulsion finale est portee it la glaciere OU on Ia laisse pen-
dant 48 heures it trois jours, puis on la titre par addition
d'eau fluoree. de telle sorte qu'elle renferme 50U millions de
microbes par centimetre cube. Au moment de l'employer,
on dilue ce vaccin dans deux volumes d'e~u salee physiolo-
gique afin d'eviter la sensation legerel'nent douloureuse que
provoque l'introductiori du liquide fluore dans les tissus.
Les vaccins antistaphylococcique et ,anticoquelucheux
fluores, contenant 250 millions de microbes par 1/2 centi-
metre cube (dose therapeutique) sont chauffes 48 heures a
40 0 • On les emploie en injections intramusculaires tous les
2 ou 3 jours.
....*
F. - Methode de Wright pour la numeration des
germes contenus dans Ie vaccin microbien.
CeUe methode consiste a melanger 1 centimetre cube

d'emulsion.vaccinale (faite dans l'eau salee physiologique)
/'
TECHNIQUE POUR LES VACCINS MICRO BIENS 533
coloree par une gouUe de solution aqueuse alp. 100 de

bleu de methylene, avec un egal volume de sang humain
(dont on n determine, aU prealable, la richesse en globules
rouges f) et avec 3 dmtimetres cubes d'eau salee physiolo-
gique.
On preleve une gouUe de ce melange qu'on etale sur une
lame porte-objet et qu'on laisse secher. Les microbes appa-
raissent legerement teintes en bleu parmi les hematies.
Dans plusieurs champs du microscope pourvu d'un ocu-
laire micrometrique ou quadrille, on compte, d'une part les
hematies et, d'autre part, les elements microbiens. II ne
reste plus qu'a etahlir Ie rapport des uns aux autres pouren
deduire Ie nombre de microbes contenus, par exemple, dans
1 centimetre cube diI vaccin.
Si on trouve une moyenne de 36 hematies et de 20 bacilles
par champ microscopique, Ie rapport est:
36 5.000.000.000
20 = X
X (representant Ie nombre de bacilles contenus dans

1 centimetre cube de vaccin) = 2.800.000.000 par centimetre
cube.
On peut ausst, comme Ie fait M. Neisser, melanger avec
une pipette a tetine de Wright, 1 volume de sang, 1 volume
de solution de citrate de soude a 1.5 p. 100 et 1 volume
d'emulsion vaccinale. On fait, avec ce melange, des prepara-
tions sur lames, on seche a l'etuve et on fixe dans Ie su-
blime sature, puis on lave a l'eau et on colore par la thio-
nine pheniquee. On compte ensuite 500 hematies dans un
certain nombre de champs et les microbes qui se trouvent
dans les memes champs. Supposons qu'on en ait trouve
670. On etablit alors Ia proportion suivante :
670 X 5.000.00() 000 0 .
X = WO = 6.700.0 0.000 de mIcrobes par cc.
Dans la pratiquecourante, la methode de titrage par pesee

de Sabouraud ci-dessus decrite (D) est beaucoup plus expe-
ditive et donne des resultats suffisamment precis.
1. La teneur normnle du sang hUInain en hemuties est de 5 milliards par centimetre

cube.
534 PREpARATION DES VACCINS ET SERUMS
....*
G. - Methode de numeration a l'hematimetre
(Salimbeni).
Employer l'hematimetre Thomas-Zeiss dont chaque
carre correspond a 1 j4000 e de millimetre cube. Faire
des dilutions de plus en plus etendues de l'emulsion mi-
crobienne avec de l'eau formolee au 1/100, legerement
coloree par la fuchsine, de fa!(on a obtenir un maxi-
mum de 10 germes par petit carre de l'hematimetre. On
note Ie titre de la dilution, on prend la moyenne des germes
contenus dans un petit carre et on multiplie par 20 millions.
Ce chiffre de 20 millio!ls correspond, pour Ie modele d he-
matimetre precedent, ala quantite de germes contenus dans
1 centimetre cube lorsque chaque petit carre en contient
1. En tenant compte du taux de la dilution employee. il
est facile de calculer la teneur en germes de l'emulsion
mere et de la ramener ensuite au titre can venable en la di-
luant.
....*
H. - Numeration des germes par mesure de
l'opalescence des emulsions.
On peut egalement prepareI', pour un ricrobe donne, des
emulsions-tests con tenant un nomb]\e determine de germes
qui servent a eta]onner les emulsions de la meme espece
microbienne en comparant leur degre ,d'opalescence. Les
differences d'opalescence entre deux erp.ulsions rel'tent
appreciables lorsque la difference du nombre des germes
est superieure a 25 millions au centimetre cube. Quand Ie
titre microbien des emulsions est superieur it 400 millions
de germes au centimetre cube, leur opacite est trop intense
pour que d'aussi faibles differencesapparaissent avec nettete.
II est indique de preparer une serie d'emulsions-tests en
eau formolee a 0,5 pour 100 Con tenant de 50 a 400 millions
de germes par centimetre cube et dont la concentration
augmente de 50 millions par tube. On scelle les tubes ala
lampe et on les conserve a l'obscurite. Les tubes servant a
comparer les emulsions vaccinales avec les emulsions-tests
doivent etre de meme calibre et de meme verre.
I. - Dosage des 'vaccins bacteriens par Ie diapl1ano-

metre de Leopold R.obert (Stiassnie, constructeur).
Leopold Roberl a applique a la determination du degre

d'opalescence Ie principe de l'hemoglobinimetre de Gowers
et Sahli II a fait construire, a.cette fin, par M. M. Stiassnie,
nn appareil : Ie diaphanometre baelerieri.
Ce diaphano~etre se compose de deux tubes de diametres
et de parois exactement semblables. Le lube A est gradue
en quarts de centimetre cube, de 0 centimetre cube il
15 centimetres cubes, et coiffe d'un bouchon de caoutchouc
qui permet de la renverser (il n'y a pas interet a descendre
au dela de ceUe graduation). Le tube B contient la suspen-
sion microbienrte etalon qui va servir de point de compa-
raison. II est scelIe a la lampe et peut, par consequent,
etre facilement agite. II y a autant de tubes B que de
varietes de vaccins. Les deux tubes sont supportes dans un
montant en aluminium bruni. dont la forme rappelle celle
de l'hemoglobinimetre de Gowers et Sahli et qui a l'avan-
tage de ne Iaisser passer les rayons Iumineux qu'au tra-
vers des emulsions microbiennes, rendant ainsi la lecture
tres rapide.
Le principe consiste : 10 a faire, a l'aide des cultures, une
suspension microbienne'epaisse de volume connu; 2° a pre-
level' un volume egalement connn de cette suspension
epaisse et a l'introduire dans Ie tube A; 30 a amener a ega-
lite. par additioft progressive du liquide de suspension (eau
salee ou eau fluoruree) 1 opalescence du tube A et du tube B.
Soit P Ie volume total de suspension microbienne epaisse,
soit N Ie volume de cette emulsion sur laquelle on opere,
soit R la qUlmtite de liquide de suspension ajonte (R = Ie
chiffre obtenu sur la graduation, diminue de N)
La quantite L du liquidede suspension a ajouter a l'emul-
sion microbienne epaisse totale pour o.btenir un vaccin de
meme richesse que Ie tube eta]on sera:
_'PXR
L _ N
,... ..
J. - Vaccins antichoUiriques.
Pour la preparation des vaccins anticholeriques" on peut
admettre aveC Kolle qu'une culture sur gelose inclinee en
tube (enselllencee sur toute sa surfac~) fournit environ
20 milligrammes de vibrions. On delaye ceUe culture dans
10 centimetres cubes d' ean salee physiologique. Chaque cen-
timetre cube correspond alors a 2 milIigrammes de vibrions.
On chauffe ceUe dilution pendant 1 heure a 580 ; on peut
y ajouter ensuite 3 pour 1.000 d'acide phenique. La dose
vaccinale est, pour la premiere injection, 1 centimetre cube,
pour la seconde (8 a 10 jours apres), 2 centimetres cubes.
Pendant la grande guerre, afin d'obtenir un vaccin anti-
cholerique aussi actif que possible en tres grandes quantites,
B. Fischer, L. Bitterel G. Wagner (de Munich) ant prepare
leur milieu de culture tout simplement avec une decoction
de 30 grammes de levure de brasserie dans 1.000 centimetres
cubes d'eau de conduite, sa lee a 5 grammes par litre et soli-
difiee par15 grammes pour 1000 de gelose. Au lieu de tuer
les vibrions par chauffage au bain -marie a 530 , ce qui est assez
difficile a realiser sur de grandes masses d'emulsions sans
laisser des germes vivants, ces exp~mentateurs ste'rilisent
leurs cultures en ajoutant a I'emulsion faite en eau salee
physiologique, pour chaque litre, 37 cc. ~ d'HCl normal.
lIs agitent, laissent en contact 10 min~tes, puis neutralisent
avec 24 centimetres cubes de Iessive normale de soude.
On constate, par l'experimentation sur les animaux, que les
vaccins ainsi prepares determinent la formation d'anticorps
aussi activement que ceux provenant de cultures tuees par
chauffage. Chez l'homme ils ne provoquent pas de pheno-
menes reactionnels plus intenses .
....,.
Le baciIle dysenterique doit eire chauffe 1 heure .Ii 600
pesteu" 65 0
Les slreptocoques 60 0
La pneumocoque 600
Les slaphylocoques 60 0
Les « auto )) ou « hi!lI!ro-vaccins }) micro biens destine's a

l'usage therapeutique sont generalement dilues et conserves
TECHNIQUE POUR LES VACC1NS MICROBIENS 537
darts une sO'lution d'acide phenique it 0,5 p. 100 ou de lysol

a 0,25 pour 100. Leur titrage est effectue de telle sorte que
1 centimetre cube renferme, d'apres Wright:
Pour Ie stapnylocoque. 100 a 500 millions
streptocoque • I) a 19
pneumocoqne . 5 a 10
gon?coque. • 5 it 10
acne. . • . . . . . 8
vaccin mix\e (acne e\ s\aphy\ocoque) 8 minions
d'acne,200 millions de staphylocoques.
hac. typhique, • • . • 1 it 2 milliards
Hac. coli. . . . • • . 5 a 50 millions
bac. tuherculeux 0 mgr. 002 e1 0 mgr. 005
(emulsion bllcillaire de Koch).
. *.
K. - Entero-vaccills.
a) Methode de A. Lumiere el J. Chevrotier. - On inclut

dans de petites capsules de keratine de grandes quantites
de corps microbiens, d'abord debarrassespardeslavages et
centrifugations successifs, des exotQxines produites dans
les milieux de culture, lues ensuite par une heu,re de chauf-
fage a 500 , puis desseches et reduits en poudre.
L'enveloppe de keratine n'etant pas attaquee par Ie suc
acide de l'estomac, mais seulement par Ie suc intestina}, les
corps microbiensnese trouventmis enliberte que dansl'in-
testin grille, de sorte que leurs chances d'absorption sont
ainsi beaucoup accrues, d'autant que chaque capsule ou·
spherule contient une assez grande quantite de microbes
(300 millions de bacilles d'Eberth, 120 millions de paraty-
phiques et 180 millions de Bacterium coli),
Inger~e a la dose de 3 milliards de corps microbiens par
kilogramme d'animal. en trois fractions,_ it 8 jours d'inter-
valle, ceUe preparation, d'apres les auteurs, confere au
lapin et au cobaye l'immunite contre l'infection experimen-
tale par une dose surement mortelle en 24 heures de ba-
ciUes d'Eberth ou de paratyphique.
b) Methode de Besredka. - Des experiences effectuees sur
Ie lapin ont conduit Besredka it user d'un artifice pour sen-
sibiliser l'intestin de cet animal et faciliter ainsi l'absorp-
tion des bacilles tues par chauffage, en evitant, comme
~38 PREPARATION DES VACCINS ET SERUMS
A. Lumiere et Chevrotier en avaient eu les premiers l'idee,

leur destruction dans l'estomac. Cet artifice consiste a utili-
ser la bile de breuf sterilisee quO on fait ingerer au lapin a la
dose de 5 centimetres cubes, seule ou en melange avec un
peu de poudre de reglisse pour Ia rendre moins amere.
Dne ou deux ingestions de bile, quelques heures a'Vant I'in-
gestion d'une quantite convenable de culture de bacilles
tues par chauffage. suffisent a assurer l'lIbsorption des mi-
crobes par la muqueuse intestinale et a realiser l'immunite,
meme contre I'inoculation de virus dans les veines. Cette
technique a ete appliquee a la vaccination antidysente-
rique, antitypholdique, anticholerique et antipesteuse.
. *..
Vaccins divers.
a) VACCINS AU SUCRE DE A. BERTHELOT (1913). - Pre-

parer par la methode de Maurice Nicolle des j::orps micro-
biens ne contenant que leur eau de constitution; aussitot
recoltes les broyer dans un mortier sterile avec 3 .fois leur
poids de sucre blanc finement pulverise. Melanger intime-
ment. On obtient une pAte qui se consel've des annees avecla
to xi cite et Ie pouvoir antigene des microbes traites; au mo-
ment de l'emplpi preparer Ie vaccina la dilupon convenable
avec une solution sterile de saccharose a 10 %. Si ron des-
tine cet extra it a l'immunisation locale ou par voie buccale,
I'additionner de 5.100 de quinosol (sulfate'd'ortho-oxyqui-
noMine) ; pour les injections sous·cutanees, tyndalliser.
Quand on traite par Ie sucre des corps microbiens conte·
nant plus de 80 % d' eau, assurer la conservation de la
pate par addition de quelques gouttes d'ether;conserver en
flacon bouche hermetiquement.
b) VACCINS AU PHOSPHATE DISODIQUE (A. BERTHELOT',

1913). - Preparation de,~ vaccins par Ie phosphate disodique,
Preparer par la methode de Maurice Nicolle des corps
microbiens exempts d'eau de condensation.etles deshydra-
ter par Ie procede de Lumicre et Chevrotier en les br~yant
avecdu phosphate disodique pur desseche. Un calcul simple

base sur la teneur en eau des germ.es et du PO'NatH
utilise permet de determiner la quantite ~e phosphate
strictement utile. La poudre microbienne titree se conserve
fort bien a l'abri de l'humiditC Pour preparer un vaccin, on
eo ajoute la dose necessaire ft, une solution de saccharose
it 10 % sterile; on met en ampoules et on tyndaIIise.
On obtient des" extraits tres actifs en filtrant sur bougie la
dilution ci-dessus; on peut opcrer de meme avec les
extra its bacteriens sucres.
Pour diminuer la toxicitc des vaccins et extraits au sac-
charose ou au phosphate disodique, sou vent tres grande
avec les microbes du groupe des bacilles dysenteriques, on
pourra les additionner de 3 pour 1.000 de formol. suivant la
methode de Ramon. et les abandonner 15 jours a 37 0 avant
mise en ampoules ou filtration.
c) IMPREGNATION GALGIQUE DES VAGGINS.
Albert Berthelot et Dominique Be1'lrand, en se basant sur
raction kinasante du calcium, ont etudic'en 1913 l'impre-
gnation calcique des germes (traitement pendant 24 heures
des corps microbiens - methode Nicolle - ou centrifuges,
par une solution de chlorur,e de calcium pur et neutre a 20 %
de CaCI2, suivi de deux lavages (centrifugation) et dilution
avec solution de saccharose a 10 % sterile ,; ils ont constate
que pour de nombreuses espcces, ce traitement diminue la
toxicite et permet d'injecter des doses plus fortes. II y aUl'ait
avantage, surtout avec les extraits au phosphate de soude,
a toujours controler Ie pH des dilutions microbiennes et a
l'ajustera 7,3-7,4.
CHAPITRE XLIV
SERUMS ANTIMICROBIENS ET LEUR TITRAGE
1. - Mesure du pouvoir preventif et curatif.
L'efficacite preventive ou therapeutique des serums

antimicrobiens, teis que les serums antistreptococcique,
antipesteux, antipneumococcique, etc., ne peut etre garantie
que s'ils ont ete prealablement eprouves sur l'anitnal.
Cependant Ia faible virulence du meningocoque pour les
animaux de Iaboratoire ne permettant pas d'utiliser cette
methode, onJa remplace par Ia mesure dq pouvoir agglu-
tinant du serum antimeningococcique.
A. - TITRAGE DU SERUM ANTISTREP TOCOCCIQ UE.
L'epreuve se fait sur Ia souris et" sude lapin.

On determine, au prealable, pour chacun des types de
streptocoques qu'on se propose d'etudier, dlabord s'il est
virulent et ensuite quelle est la dose de culture susceptible
de tuer, en 48 heures a trois jours, Ia souris par voie sous-
< cutanee,ou Ie lapin par voie intraveineuse.
Ceci fait, on cherche par des iooculations preventives de
doses variables de serUm effectuees respectivement sous Ia
peau ou dans Ies veines, queUe est Ia quantite de ce serum
qui suffita preserver l' animal contre l'infection realisee douze
heures apres avec une dose surement mortelle de culture.
En inoculant la culture d'abord, les doses variables de
serum douze heures apres, on etablit Ie pouvoir curatif de
celui-ci.
Le serum antistreptococcique de l'Institut Pasteur est
preventif pour la souris, a Ia dose de 1/40 a 1/400 ae cen-
timetre cube, contre ,une dose de virus susceptible de tuer,
par inoculation sous-cutanee, environ 2.000 souris. II
est curatif it In dose de 0 cc. 001 Iorsqu'on l'introduit
SERUMS AlVTIMICROBIENS 541
dans Ie peritoine d'une souris inoculee sous Ia peau,.

depuis 18 a 24 heures, avec une dose 10 fois mortelle
de virus.
Chez Ie lapin, on empikhe Ia mort de -l'animal inocule
sous la peau avec 100 doses morteHes en lui injectant
dans Ies veines, deux heures apres l'injection, 1 cc. 5 it
2 centimetres cubes de serum.
B. - TITRAGE DU SERUM ANTIPESTEUX
1/10 centimetre cube injecte sous la peau ou dans Ie

peritoine d'nne souris, 24 heures avant ou 16 heures apres
infection de cet animal par simple piqfrre avec une ttiguille
trempee dans une culture virulente de bacille de In peste,
doit empecher la mort. En Allemagne, on prefere se ser-
virdu.rat. On injecte Ie serum a essayer dans Ie peritoine
et l'infection est realisee par piqure avec nne !1iguille
creuse, it la base de la queue.
C. - TITRAGE DU SERUM ANTIPNEUMOCOCCIQUE
a) METHODE AMERICAINE (Etat de New-York\. Sb'um

etalon. - Son efficaci'te est telle que, injecte it la dose de
o cc. 2 a une souris de.16 it 22 grammes, il l'immunise
pendant 4 jours au minimum contre 0 cc. 1 de culture
etalon de pneumocoques du type I. dont 0 cc. 000001 tue
la souris temoin en moins ete 48 heures.
Technique dll Wrage. - La dilution de la culture et du
serum sera 'faite en bouillon prepare avant l' epreuve expe-
rimentale, de telle fa<;on qu'il ne soit pas mesure moins de
occ. 5 de cette, dilution. Ainsi 2 centimetres cubes de
serum sont dilues dans 3 centimetres cubes de bouillon,
de sorte que 0 cc. 5 du melange contienne 0 cc. 2 de
serum. De meme on ajoute 1 centimetre cube de -..culture
a 4 centimetres cubes de bouillon, de sorte que 0 cc. 5
du melange contienne 0 cc. 1 de culture.
Dans la preparation de l'injection, 0 cc. 5 de la culture
diluee et 0 cc. 5 de serum dihie sont intimement melanges
dans Ie tube de Ia seringue et injectes en 2 minutes dans
Ie peritoine d'une souris pesant 16 a 22 grammes. On pro-
cede en meme temps it des epreuves de contr&le. avec Ie
serum Malon et a des epreuves de controle de la virulence

de la culture sans serum.
Le titre protecteurdu serum vis-a-vis de Ia culture cons-
titue son degre d'efficacite et doit au moins egaler celui du
serum Malon.
b)METHODEDE M. NICOLLE-COTONI-TRUCHEET RAPHAEL.

- On injecte sous la peau ou dans les muscles de la souris
(souris blanches, males, pesant de 16320 grammes), 1/10 de
centimetre cube du serum 3 titrer et, Ie lendemain. 1/100
de centimetre cube de culture tuant les souris temoins au
millionieme de centimetre cube. Si l'animal qui a re~u Ie
serum resiste, Ie serum est considere comme bon. 'n
convient d'eprouver les animaux-serum avec diverses
races de pneumocoques.
Un serum provenant d'un animal hyperimmunise avec
un type donne de pneumocoques peut etre tres actif sur des
pneumocoques tout differents par leur agglutinabilite. C'est
ainsi que:
10 Les plleumocoques du t!Jpe I fournissent des serums
qui peuvent proteger la souris contre l'inoculation de
10.000 doses mortelles de pneumocoques I et contre I'ino-
culation de 100, 1.000, ou 10.000 doses mortelles des pneu-
mocoques II et Ill. Ils sont peu actus Isur les pneumo-
coquesIV. .
2° Le.s pneumocoques II fournissent ,des' serums qui
protegent Ia souris contre 1 000 quelquefois 10.000 doses
mortelles de germes h<;lmologues et contre 1.0()0 doses
mortelles de pneumocoque III. Ils sont peu actifs sur les
pneumocoques I et IV.
30 Certains serums d'animaux prepares avec Ie pneumo-
coque III protegent contre 1.000, quelquefois 10000 doses
mortelles de germes homologues et contre 1.000 doses mor-
teHes d'un pneumocoqlle 1. lis sont tres pel! actifs sur les
pneumocoques II et IV
40 Les pncumocoqucs IV fournissent des serums qui pro-
tegent la souris contre 100 doses morteHes de germes homo-
logues. Leur activite it l'egard des pneumocoques I, II et III
est en general pel! marquee.
-La conference internationale de Serologie (Paris, 1922)
estime que'le titrage du sevum chez la souris, avec l'emploi
SERUMS ANTIMICROBIENS 543
d'un serum Halon comme controle, constitue une base sur-

fisante pour Ia standardisation internationale des serums.
On peut ainsi effectuer ce titrage chez Ja souris, soit en
injectant dans Ie peritoine une quantite fixe: 0 cc. 2 de
serum melange a des quantites de culture tres virulente en
bouillon, variant de 0 cc. 1 a 0 cc. 40u plus, soit en injec-
tant dans Ie peri,toine des quantites variables plus faibles :
o cc. 001 a 0 cc. 0001 de serum et, trois heures apres, une
quantite moyenne de c\llture, par exemple, 0 cc. 0001. La
culture devra tuer la souris a la dose minimum de
occ. 0000001. Pour chaque titrage, on devra employer un
serum etalon.
D. - T1TRAGE DU SERUM ANT1MENl/VGOCOCCIQUE
a) METHODE AMERICAINE. - (Etat de New-York.)Le

serum antimeningococcique doit agglutiner aux dilutions
de 1/5.000, 1/2.UOO, 1/3.000 et 111.500 les quatre cultures
types de meningocoques A. B, C, D, rcspectivement, en
employant une emulsion d'opacite type et en maintenant
les tubes a 55 0 centigrades, pendant une duree de 16 a
24 heures.
Emlllsiolls microbielllles tupes. - Leur opacite doit corres-
pondre a une emulsion de sulfate de baryum contenant
3 centimetres cubes de solution a 1 pour 100 de chlorure
de baryum et 79 centimetres cubes de solution it 1 pour'IOO
d'acide sulfurique. Ce type d'emulsion meningococcique
contient approximativement 2.000 millions de germes par
centimetre cube.
Techniqlle dll iitrage. - La dilution sera faite avec une
solution saline normale it 8,5 pour 100 de NaC!. Apres addi-
tion de serum, Ie melange doit contenir environ 1.000 mil-
lions de baciIles. Les emulsions de cultures types seront
ajoutees, dans des tubes it agglutination de 8 it 11 millime-
tres de diametre, au serum dilue a titrer ainsi qu'aux dilu-
tions correspond antes du serum Malon. On porte au bain-
marie it 65 0 pendant 16 a 24 heures. Le titre ainsi deter-
mine est represente par la dilution maximum du serum avec
laquelle I 'agglutination finale des meningocoques pent
etre aisement reconnne a l'reil nu. Le pouvoir agglutinant
enregistre donne l'efficacite dn serum,
b) METHODE DE M. NICOLLE, E. DEBAINS ET C.JOUAN.-

On emulsionne les germes dans la solution physiologique
(10 pour 1000 de NaCI), a raison de 1 centigramme de mi-
crobes pour 20 centimetres cubes de Ia solution. Les cultures
jeunes, agees de 24 heures ou moins, conviennent seules.
On prepare quatre series de tubes contenant tous 1 cen-
timetre cube d'emulsion d'un des types A, B. C, D, de me-
ningocoques et l'on verse respectivement, pour chaque
groupe, des quantites croissantes de serum 1/20, 1/50,
1/100, 1/200,- etc... On abandonne pendant 24 heures a
Ia temperature ordinaire et on examine ensllrte :'i. la loupe.
Nola. - Les serums antimicrobiens qui s'adressent a'llx
maladies septicemiques ne sont efficaces, d'une maniere
generale, au point de vue therapeutique, que lorsqu'on les
injecte a doses elevees et par voie intraveineuse. Lorsque
celle-ci ne peut pas etre choisie, il faut employer Ia voie
peritoneale.
E. - TITRAGE DES ANTICORPS

OUSENSIBILISATRICES DES SER UMS AN TIMICROBIENS
Le role des sensibilisatrices ou anticorps que renferment

en plus ou moins grande quantite_les serums anti micro-
biens n'est pas encore tres exactement etabli, Quelques-
unes de ces sensibilisatrices. « les antic?lrps iuberculeux »
par exemple, apparaissent piutOt a certaines periodes de Ia
maladie comme des temoins de l'infection baciIlaire, mais
ne senJbIent pas remplir de fonctions defensives. Quoiqu'il
en soit, dans beaucoup d'infections, Ia richesse dt! serum
eD sensibilisatrices parait d'autant plus grande que la de-
fense de l'organisme est plus active. II ya donc interet a
provoquer Ia formation de ces sensibilisatrices (c' est Ie bu:!:
des vaccins micro biens) et a en mesurer Ia quantite existant
dans les humeurs.
Cette mesure se fait par Ia reaction de fixation de Bordet-
Gengou en prenant comme antigene Ie microbe (Oll parfois
ses produits de maceration ou de secretion) et COlllme
source d'anticorps, Ie serum dans Iequel iLs:.agii de Ies
titrer. On etablit ainsi, pour chaque echantillon de'se-
rum, Ia valeur en unites d'anticorps par centimetre cube,
(Voir technique de Calmette et Massol, chap. xx, D.)
CHAPITRE XL'V
METHODES DE TITRAGE DES TOXINES ET DES SERUMS

ANT ITOX IQU ES.
I. - SERUM ANTIDIPHTERIQUE
A. - Titrage d'un serum antidiphterique en unites

antitoxiques. .
0{1 doit avoir a sa disposition:

10 V n serum-etalon (par exemple celui que fournit I'lns-
titut Pasteur de Paris ou I'Institut de Medecine experi-.
mentalc de Francfort-sur-Mein, en solution glycerinee et
titree) ;
20 Vne toxine d'epreuye dont on a prealablement de-
ter:m~ne, par injection sous-cutanee a des cobayes du poids
d~ 250, a 300 grammes, la dose minima mortelle en 4 a.5
jours. Cette dose doit etre voisine de 0 cc. 005 ou 1/200 de
centimetre cube;
30 De l'eau salee physiologique a 8 gr: 5 de NaC} par
litre pop-r les dilutions;
4 0 Vne serie de pipettes (au moins 2) de 1 centimetre cube
gradJlees en centiemesde centimetre cube, entre deux traits;
50 De~ pipettes de 1 et de 2 centimetres cqhes graduees
par 1/~0 de centimetre cube;
. 6° Vne serie de petits verres coniques a experiens:es, de
15 cen~imetr~s cubes. recouverts de capuchons de papier-
fil tre et sterilises a sec;
70 Des, seril:1gues sterilisables de 1 et de 5 centimetres
cubes;
8 0 Vn certain nombre de jeunes cobayes du poids de
250a 300 grammes (maximum);
96 Enfin Ie serum antidiphterique dont .il s'agit d'effe y-
tuer Ie titrage. Ce serum doit avoir ete prealablement qhauffe.
au bain-marie une heure a 580 ,
UICRORJOLOGIR 35
a) Serum etalon. - Les solutions glycerinees de serum-,

Malon contiennent generalement 10 unites antitoxiques par
centimetre cube (leur titre est d' ailleurs indique sur l' eti-
quette).
On en prend 1 centimetre cube qu'on dilue dans 9 cen-
timetres cubes (ou dans x centimetres cubes d'eau salee
physiologique, de telle sorte que chaque centimetre cube de
dilution corresponde dune unite antitoxique pu VA (ou IE
Immunitats-Einheit d'Ehrlich).
Cette unite neutralise exactement in vitro 100 doses mi-
nima morteHes de toxine.
b) Toxine d'epreuve. - II faut avoir une toxine dont on
a determine par plusieurs experiences la dose minima
mortelle en 4 ou 5 jours par injection sous-cutanee aux
cohayes de 250 it 300 grammes.
'Cette toxine doit etre vieille d'au moins deux mois et
avoir ete conservee a la glaciere, sous une ~ouche d,e to-
luol, dans un flacon bien bouche. ,Elle est alors suffisam-
ment stable et Ie meme echantillon peut servir a un grand
nombre de titrages.
Si ron n'a pas de bonne toxine a sa disposition, on peut
se procurer de la toxine d'epreuve (standardtoxine), toute
titree, a l'Institut Pasteur de Paris 'ou a\llaboratoire de
Francfort.
En possession (1~ ceUe toxine, dont nous' supposons la
dose minima mortelle DMM = 0' cc. 0.04, iJ s'agit de de-
terminer d'abord la dose qui est exactement neutralisee par
1 UA (1 unite antitoxique de serum-etalon). Cette dose est
appelee Lo. Pour la preciser, on fait, dans une serie de
verres coniques, des melanges de toxine a doses crois-
santes a partir de 100 Eois Ia dose minima mortelle (soit pour
notre toxine dontla DMM est 0 ce. 004 X 100 -;- Dcc. 4) avec
1 centimetre cube de dilution de serum-Malon con tenant
1 VA i. On complete dans tou's les vases au meme volume.
soit 3 centimetres cubes, avec de l'eau physiologique. On
laisse en contact pendant 30 minutes it la temperature du .
laboratoire et on injecte successivement chaque m_elange a
un cob aye du poids de 250 a 300 grammes, sous la pean du
ventre, pres de la racine de la cuisse, - avec la meme
1. Voi~ append;ce ilia fin du volume (tables de dilution).
TOXINBS BT SISRUMS ANTITOXIQUBS 547
seringue, en commen~ant par Ie melange. Ie plus faible en

toxine.
Void Ie schema d'nne experience type:
Numero Resultat.
des Melanges de
verres I'iIloeuIation
---
1 1 UA + Oce. 46 toxine + 1 cc. 54 H'O Phys' ."" " Pasd'cOOemeau ('jour
~ ~
2 1 UA + Oce. 47 toxine + 1 ce. 53 - "'''

=" Burrie
~.tJ e Leger redeme, survie
3 1 UA + Oce. 48 toxine + 1 cc. 52 - ~a·.§ ffideme, parnlysic.
~ " E
11.1-
= Eiurvie
4 1 UA + Oce. 49 toxine + 1 ce. 51 - "d...:s~ Fort ",deme + mort
~ .~.....-I
le 8& jour
5
6
1 UA + Oec. 50 toxine + 1 ee. 50
1 UA + Oce. 51 toxine + 1 cc. 49
- .S-""
- a ++mort
::I ""'"
8:ol
mort Ie 5' jour
en 3 jours.
gEl
La dose Lo pour cette experIence est donc 0 cc. 46 de

toxine puisque Ie melange de ceUe dose avec 1 U A de se-
rum etalon ne donne pas d'redeme local au quatrieme
jour.
II s'agit maintenantdedeterminerla dose L+,c'est-a·dire
In dose de toxine qu'il faut ajouter a Lo pour tuer en 4 a 5
joms les cobayes de 250 a 300 grammes. Il semble que
cettedose L+ doive etre la dose Lo + 1 dose minima-mor-
telle (0 ce. 004). En fait, il resulte des travaux d'Ehrlieh sur
les toxones et les toxo'ides qu'elle est toujours superieure et
qu'elle varie, suivant les toxines, de 0,5 a 28 doses minima
mortelles.
Pour la determiner, on fait dans uneautre serie de verres
coniques, et dansles memes conditions que preeedemment,
des melanges de 1 centimetre cube de dilution de serum
contenant une unite antitoxique et de quantites de toxine
graduellement un peu plus forte's que la dose Lo, soit par
exempIe:
Numero l Resultal.
des :Melnnges 'de
verres I'inoculation
-- " ~
.~
1 1 UA + ace. 47 toxine + 1 ee. 54 HOO Phys. §-~ Pasd'<£deme, survie
pour completel~n 3 ce. ~~~ ~
2 1 UA + Oce. 48 toxine + 1 ee. 52 - g.. g.''§ Pas d'redeme. survie
3 1 UA + ace. 49 toxine + 1 ce. 51 - ~ a; ;= Leger mdeme, sur"i€
4 1 UA + ace. 50 loxine + 1 ce. 50 - ~~j FOI·t rodeme + morl
g3.e..! le g e jour
:.
Ii
1 UA + Oce. :'1 toxine + 1 ce. 4!l
1 UA + O~·c. 5210,;no + 1 cr. 411
-- g~ + lnort le 5- jour
';=_!l +
mo,'! en 48 heure.
=·CIJ ~
~E
Dans cette experience, la dose L + de toxine d_'epreuve est

donc 0 cc. 51, soitladoseLo(Occ.46)+ Occ.004(DMM) X
13, c'est-a-dire qU'eIle correspond :Lla dose Lo+ 13 doses
minima morteHes.
C'est cette dose Lo + 0 cc. 51 ou L +, qui va des'Ormais
scrvir pour effectuer Ie titragc du serum antidiphteriqlle
dont il s'agit d'etablir la valeur antitoxique.
c) Titrage 'du serum. - On prepare d'abord des'dilutions

de ce serum au 1/10,1/100,1/200, IPOO, etc., en eau salee
physiologique.
Dans un premier tube it essai contenant exaclement 9
centimetres cupes d'eau salee physioJogique sterile, on in-
troduit 1 centimetre cube du serum it titrer et on agile
violemment pour faire un melange bien homogene. GElst la
dilution 1.
1 centimetre cube de cette dilution I correspond aI/10
centimetre c,ube du serum initial.
Dans un second tubea essai contenant 9 centimetres cubes
d'eau salee, on introduit 1 centimetre cube de la dilution I
et on agite de nouveau avec soin. Cette dilution II, dont
1 centimetre cube correspond it 1/100 du serum initial,
sert a faire les dilutions successives auxquelles il s'agit
d'ajouter la dose L + de toxine (0 cc. 51) puis de I'eau salee
physiologique pour completer au volume de 3 centimetres
cubes dans tous les verres. Apres 30 minutes de repos a In
TOXINES ET SERUMS ANTITOXIQUES 549
temperature du laboratoire, chacun de ces melanges est

inocule it un tobaye Qe 250 a 3uO grammes.
On trouvera plus loin, en appendice, des tables de dilu-
tion qui permettront d'effectuer tres commodement et
avec toute la precision desirable les divers titrages.
Un serum titre au moins 350 unites par exemple, 10rs-
que, dilue a 1 pour 349 dans I'eau physiologique, 1 ce. de
eette solution melange a la dose L + de toxine, ne tue
pas en moins de 4 jours Ie cobaye.
Un autre serum titrerait au moins 500 unites, lorsque,
dilue a 1 pour 499 dans l'eau physiologique. 1 centimetre
eube de cette dilution melange a Ia dose L + de toxine,
se montre inoffensif en injection sous-cutanee, pour Ie
cobaye de 250 it 300 grammes.
Le serum antidiphterique normal delivre par l'Instilut
Pasteur de Paris titre en moyenne 250 a 300 unites par
centimetre cube. Mais I'Institut Pasteur prepare aussi, par
'till nouveau woeede etudie par Ramon, des serums concen-
tres titrant 1.000 unites par centimetre cube.
••
B. - Mesure de la valeur preventive d'un serum
antidiphterique.
Le pOUYOlr preventif d'un serum est iandique par la

quantite de ce serum qu'il faut injecter a un cobaye pesant
x grammes pour Ie preserver conlre l'intoxication par une
dose de culture ou de toxine mortelle en 36 au 48 heures ;
la culture ou la toxine ayant ete injectee sous la peau de
l'animal 24 heures apres Ie serum.
Si 0 ee. 01 du serum it eludier, par exemple, suffit a pre-
server un cobaye du poids de 500 grammes contre une dose
de culture ou de ~oxine martelle dans Ie delai slls-indique,
Ie serum est preventif a 1 pour 50.000.
Si a cc. 005 d'un autre serum exeree Ie meme pouvoir
preventif sur un cobaye de 500 grammes, Ie serum est pre-
ventif alp. 300.000 et ainsi de suite, comme il est indique
dans Ie tableau ci apres :
550 PR"SPARATION DES VACCINS BT S"SRUMS
Dose du serum Poids du cohayc Pouvoir preventif
o ce.1 500 gr~ 1 p. 5.000

009 10.000
0,08 "» 15.000
0,07 » 20.000
0,06 » 25.000
0,05 » 30.000
O·O~ » 35.000
0,03 » ~O.OOO
0,02 » 45.000
0,01 » 50.000
0,009 ,. 100.000
0,008 » 150.000
0007 » 200.000
0,006 " 250.000
0,005 » 300.000
O,OO~ » 350.000
0003 » 400.000
0.002 » 450.000
0,001 » ;;OO.'QOO
Ce qui revient a dire que 1 centimetre cube de serum

preserve 25.000,50.000, 75.000 oli 100.000 gr~mmes, etc.,
de cobaye contre la dose mortelle de culture ou de toxine.
*
......
C, - Mesure du pouvoir curatif d'un serum
antidiphterique.
EIle se fait par la meme technique que Ia mesure du pou-

voir preventif, mais en inoculant Ie serum six heures apres
la dose mortelle de culture ou de toxine.
Les effets therapeutiques d'un serum varient considera~
blement suivant· que ce serum est introduit dans I'orga-
nisme par la voie sOlls-eutanee ou par la voie intrapel'itoneale
ou par Ia voie illiraveineuse.
Pour Ie serum antidiphterique, s'il s'agit de neutraliser
ih vivo Ia meme dose de toxine llne lIeure, par exemple, apies
l'inoculation de celle-ci. il faut en injecter, par la voie in-
traperitoneale. 80 Ii 90 {Dis plus, ou, par voie sous-cutanee,
500 [ois plus que la dose qui suffit par voie intraveineuse.
En d'autres termes les quantites en unites antitoxiques

sont, dans ces conditi~ns :
Pnr voie so us cutonee . 40 unites
introperitoneale. 7 unites
intrnveineuse .• 0.08
....* /
D - Determination de la purete bacteriologique

et chimique du serum antjdiphterique.
(Voir ci-apres, IX.)
II. - SERUM ANTITETANIQUE
A. - Mesure du pouvoir preventif du serum

antitetanique.
On etablit Ie plus simplement la valeur preventive d.'un

serum antitetanique par la determination de la quantite de
sefUm necessaire pour immuniser 1 gramme de souris
blanche contre une dose mortelle de toxine.
Habituellement la toxine tetanique est d'une activiie
telle. qu'il suffit d'en inoculer un cenlieme de milligramme a
une souris de 15 grammes pour la tuer en 4 jours. Un cen-
timetre cube peut donc tuer 1.500.000 grammes de souris.
On dit qu'nne telle toxine a un pouvoir toxique de
1.500000.
Il faut environ 0 cc. 005, souvent beaucoup moins,
pour tuer un cobaye de 500grammes cn 2ft 3 jours.
La dose minima mortelle en 2 a 3 jours pour une souris
etant connue, on cherche queUe quantite de serum il f~ut
injecter 12 au 24 heures avanl celie dose pour empecher la
mort.
On prend une serie de souris pesant environ 15 gramme!!
et, a chacune d'elles, on injecte des doses progressivement
croissantes de serum convenablement dilue dans de l'eau
physiologique sterile, de telle sorte que la quantite de li~
quide a injecter ne depasse pas 1 centimetre cube.
Les serums antitetaniques ont generale~ent une activite
552 PREPARATION DES VACCINS ET SE'RUMS
qui varie entre 10 millions et 1 milliard, c'est·it-dire qu'il

suffit d'injecter un dix·millionieme de serum, parfois un
milliardieme, pour preserver 1 gramme de souris contre
l'intoxication par Ja 'dose minima mortelle de toxine.
On fait donc les dilutions de telle sorte que la premiere
souris re<;oive. dans 1 centimetre cube de liquide.
acc. 000 000.1 de serum, soit 1 centimetre cube de Ia VUe
dilution a par.tir de Ia dilution au dixieme dans l'eau salee
physiologique.
Une seconde souris re<;oit une dose dix foismoindre, soit
1 centimetre cube de la VIlle dilution, soit 0 cc. 000.000.01
de serum. Et enfin une troisieme souris re<;oit une dose
environ dix fois moindre, soit 1 centimetre cube d'une IX e
dilution ou a cc. 000.000.001 de serum.
Si la premiere et la seconde souris resistent ensuite a
l'inoeulation de la dose minima mortelle de toxine
(0 cc. 000.01 par exemple), tandis que la troisieme memt
apres une periode plus ou moins longue de paralysie, on
dit que Ie serum est actif au cent millionieme de centime/re
cube.
. *..
B. - Titrage du serum antitetanique en unites
antitoxiques d'apres la methode arhericaine t.
La methode officiellement adoptee aux Etats-Unis (circu-

laire du 250c'tobre 1902, no 61, Treasury department) pour
Ie tit rage des serums antitetaniques livres au commerce est'
basee sur la definition suivante de l'unite antitoxique:
L'unite antitoxiqlle represente dix lois la dose minima de
serum antitetanique necessairc pour neutraliser in vitro une
+
dose L representant 100 doses minima mortelles d'une toxine
d'epreuve stable doni la dose minimamortelle tue ell 96 heures
un cobaye de 350 9ramm~s.
La toxine tetanique etant d'activitc tres variable et beau-
coup moins stable que la toxinc diphterique, 011 a prepare
en gmnde quantite une slandard-loxine, poudre seche, que
l'on conserve ~ l'obscurite et au froid, dans Ie vide, ct
1. Voir en appendice : tahles de dilution.

TOX/NES ET SERUMS ANTITOXIQUES 553
parfaitement deshydratee p'lr l'acide phosphorique. Dans

ces conditions, sa toxicite ne varie sensiblement pas en l'es-
pace de deux annees.
On l'oblient en precipitant la toxine liqllide (filtree) par
Ie sulfate d'ammoniaque.
+
J..a dose L Calls/ante de cette toxine representant 100dose&
minima morteHes est (calculee sur Ie poids sec) de 6 di-
xiemes de milligramme (0 gr. 0006).
Pour l'usage, on en dissout 0 gr. 1 dans 1e6 cc. 66 d'eau
salee physiologique a 8,5 de NaCI pur par litre. Un centi-
metre cube de celte dilution contient exactement la dose
L+, c'est·a-dire 0 gr. 0006 (100 DMM).
On dillle ensuite Ie serum a titrer et on en melange des
quantites progressiyement croissantes a la meme dose de
toxine L +. Voici un schema d'experience a titre d'exem-
pIe:
l3
>, Injection tooOus-clllance
'""...5
!;
'""
c1e~
Poid.
cohnyes -- --
dll melange de
TO"iine
dose L + Serum
Hc~ultalb de. !'inoculation
-Z
1 360 0,0006 occ. 001 mort en 2jours" h.
:.! 350 0,' 015 lIlorl en "jours 1 h.
3 350 "
» 0,002 parnly.ie, survie
»
"5 360
3.50 »
0.00:.!5 h\gere pnraiysie, survie
O,OU3 flucun malaIse. survie
Le cobayc nO 2 qui a rc\(u 0 cc. 0015 de serum est morl'en

97 heures. Aux termes de Ia definition de l'unite anti-
toxique, cette dose contient un dixieme d'unite 0,1, donc
1 centimetre cube de ce meme serum titre 66 unites.
C'est generalement la teneur du serum antitetanique de
l'Institut Pasteur de Paris, Iorsqu' on Ie titre par Ia me-
thode amcricaine avec Ia s/andard toxine preparee par Ie
laboratoire d'hygiene de Treasury Department (PLlblic Health
and Marine Hospital service of the United Sla'les, lVashillgloll,
D. C.).
... *,.
C. - Titrage d'apres 1a methode allemande.

La methode employee a l'lnstit{lt de therapeutique experi-
mentale de Francfort-sur-Mein< charge du controle des serums
allemands) repose sur l'emploi d'un serum-etalon qn'on
dilue de telle sorte que 1 centimetre cube renferme 1/100
d'unite immunisante (UI) et d'une toxine d' epreuve dont on
a determine, au prealable, en se servant de la souris comme
animal reactif, la dose Lo et la dose L +
comme PQur Ia
toxine diphterique.
Lorsqu'il s'agit de determiner Ie titre antitoxique d'un
seruIl}, on fait deux series de 8 melanges: la premiere
serie re<;oit 1 centimetre cube de dilution de serum-etalon
(standard-serum) correspondant a 1/100 IV;
La deuxieme serie rel(oit 1 centimetre cube de dilution
du serum a titrer.
A chaque serie on ajoute la toxine d'epreuve aux doses
intermediaires entre Lo et L +.
On complete partout au volume de 4 centimetres cubes
avec del'eall sa lee physiologique; on laisse en contact 30
minutes a l'abri de la lumiere et ala terpperature du labo-
ratoire, puis on injecte deux series de 8 sduris, chaque sou-
ris recevant 0 cc. 4 de run des melanges, sous la peau de
la cuisse (donc 1/1000 UI + dose croissante de toxine d'e-
preuve).
Pour etre accepte, Ie serum doit contenir au moins 40
unites par centimetre cube.
.....
*
D. - Methode fran~aise.
La technique tres simple adoptee a l'Institut Pasteur de

Paris est la suivante :
On commence par determiner la dose minima mortelle
(en 4-5 jours) de toxine pour les cobayes de 250 a 300
grammes.
Cette dose, mullipliee par 100, est la dose d'epreuve.
I
TOXINES ET SllRUMS ANTITOJCIQUES 555
On prepare ensuite au moins trois dilutions du serum a
titrer: l'une a 1/1000, la seconde a 1/10.000, la tr~sieme a
1/100.000.
Dans de .petits verres coniques, on effectue soigneusement
les melanges de :
+
I 1 cc. de Ia dilution a 1/1 000 de serum 100 doses mi-
nima mortelles de toxine.
II icc. de la dilution a 1/10.000 de serum + 100 doses
minima mortelles de toxine.
III 1 cc. de la dilution it 1/100.000 de serum+ 100 do-
ses minima mortelles de toxine.
IV etc ...
On complete partout a 4 centimetres cubes avec de reau

physic>logique; on laisse les melanges pendant 30 minutes
a.la temperature du laboratoire et it }'ahri de la Iumiere,
puis on injecte la totalite de chacun d'eux dans les muscles
de la cui sse d\lll cobaye. 11 faut employer une seringue spe-
ciale, sterile, pour chaque melange.
Les serums actifs a 1/10.000 sont consideres comme lar-
gement suffisants pour l'usage veteri'naire.
On teserve a l'usage humain ceux dont l'activite est de
1/100.000 et au-dessus.
.. *..
E. - Rapports entre les unites antitoxiques
americaine, allemande et frans:aise.
La Conference internationale de Serologie tenue it Lon-

dres en 1921 a propose d'etnhlir une commune mesure de
titrage du serum antitetanique au moyen d'un serum
etalon en utilisant les procedes employes pour Ie dosage
du serum antidiphterique. II ressort des experiences com-
paratives effectuees dans les Instituts de Copenhague,
Francfort, Paris, Rome et Washington que les rapports
-entre les diiferents serums sont ii peu pres les suivants :
En considerant Ie serum allemand comme titrant 1, ]e
serum americain titrerait 60 ii 66 et Ie serum franc,;:ais 2.500.
Pour obtenir un rapport plus simple, Kolle a suggere l'idee
de modifier l'unite allemande, de maniere que son rapport
avec l'unite americaine soit de 1: 50 et de multiplier ceUe
I
unite par 100 pour l'adapter au titrage du serum anti-

diphterique. On aurait ainsi :
Unite nmericaine Nouvelle unite allemande Unite frutt~aise
50 100 2.500
,. *...
III. - VENINS ET SERUMS ANTIVENIMEUX
A. - Determination du pouvoir neurotoxique d'un·

venin.
On determine Ie pouvoir neuroloxique d'un venin par

Ia methode que voici :
On dissout 0 gr. 1 de venin sec, de cobra par exemple I,
dans 10 centimetres cubes d'eau salee physioIogique. ,On
fait, avec cette premiere solution qui correspond it 0 gr.
01 centigram me par centimetre cube, des dilutions succes-
sives it 1/1.000 et it 1/10.000.
On determine alors Ia toxicite par grammc d'animaI, par
injection sous-cutanee. .
La dose de venin de cobra mortelle en deux it six heures
pour les souris pesant 15 grammes est ordinairement voi-
sine de 0 gr. 000025. \
Pour Ie cobaye, elle est d'environ 0 gr. 0005 (0,0002 par
°
voie intraveineuse)et pour Ie Iapinde gr. 0001 (0,0006 par
voie intraveinensel, mais elle varie snivant I'origine, l'age
du venin et 1a '1laniere dont" il a ete recolte et desseche, de
sorte qu'il est necessaire de titrerchaque echantillon,
Le venin sec, conserve dans Ie vide, it l'abri de Ia Ill-
miere et au froid, garde pendant de longues annees sa toxi-
cite initiale.
En solution dans I'eau physiologique, meme it I'abri de
l'air .et de Ia lumiere, son attenuation est rapide. II se con-
serve mieux en solution glycerinee it 50 p. 100. On peut
alors Ie garder en petites provisions dans des pipettes sceI-
lees.
1. On trou' e du venin sec de coLru chez Poulenc f'l'iwes, 92, rue Vieillc·du·Temple, u
Paris.
....
B. ~ Determination du pouvoir'coagulant d'un venin
de viperide vis-a.-vis du sang, in vitro.
On rend Ie sang de cheyal, de chevre, ou de lapin incoa-

gulable en Ie re<;ueillant directement dans un flacon qui
contient une solution concentree de citrate de soude,
par exemple, 10 <;:entimetres cubes de sang dans 0 cc. [) de
solution de citrate a 20 p. 100. Le .melange est agite. (Cette
dose de 1 P' 190 de citrate suffit pour cmpech~r la coagula-
tion du sang; la dose de 1 p. 150 ne suffit pas toujoursl.
Le sang citrate est ensuite reparti entre plusieurs tubes
a essai qui en reyoivent chacun 1 centimetre cube.
On a prepare d'autre part une solution a 0,5 p. 100 de
chlorure de calcium dont 0 ec. 2 sullisent it faire coaguler
rapidement Ie sang citrate, tandis que 0 ec. 1 ne eoagule
que lentement et 0 ee. 05 pas du tout (mais ceci doit etre
verifie pour chaque serie d'expericnces).
A une serie detubes contenant chacun 1 centimetre cube
de sang citrate, on ajoute des quantites variables d'un
'venin de viperide, par exemple, de Lachesis: 0 mgr. 1,
o mgr. 2,0 mgr. 3, c'est-a-dire 0 cc. 1, 0 ce. 2 , etc., d'une
solution alp. 1000. On note rheure de 'chaque melange.
On ajoute ensuite it chaque tube 0 ec. 05 de chlorure de cal-
einm (II gouttes de solution it 0.5 p. 100). On note l'heure
de l'addition et on observe en suite au bout de eombien de
temps, it la temperature du laboratoire, il se forme un cail-
lot. 11 ne doit pas s'en former du tout dans un ,tube temoin
qui n'a re~u que Ie sang citrate el. 0 cc. 05 de chl.orure d,e
calcium.
On fait plusieurs series d' experiences ':
1 0 En ajoutant en meme temps Ie venin et la solution de
chlorure de calcium;
20 En ajoutant Ie venin au sangcitrate quelques minutes,
(15' par exemple) avant Ie chlorure de calcium.
. *..
C. .._ Determination du pouvoir hcmolytique
d'un venin (voir chap. XXV).
558 PREPARATION DES VAcdINS ET SERUMS
".
*".
D. - Determination du pouvoir antitoxique d'un

serum antivehimeux.
Pour effectuer cette determination, on opere Ie plus com-
modement par des melanges in vitr:o.
Connaissant la dose IDOl'telle en 2 a 6 heures, pour les
souris blanches pesant 15 grammes, par exemple:du venin
dont on dispose, on repartit dans une swie de petits
verres coniques de 15 centimetres cubes de capacite, des
quantites de serum progressivement croissantes. On ajoute
dans chaque verre la meme dose mortelle de lII'enin et on
ramene partout au meme volume par addition d'eau salce
physiologique.
Apres 30 minutes de repos it la temperature du lab.ol'a-
toire, on inocule chacun de ces melanges it une souris,
SallS la peau du dos.
II suffit ordinairement de 0 cc. 2 du serum antivenlmeux
delivre par l'Institut Pasteur de Paris, pour neutraliser in
vitro 0 gr. 0001 de venin de cobra.
On peut, conventionnellement, adopter comme unite an-
titoxigue la dose de serum qui neuJ::calise ill vitro dix doses
minima mortelles de venin. Mais cette unite n'est pas la
merne pour les differentes especes animales~ Elle varie dans
de larges limites, de la souris, par exemple, au cobaye, au
lapin et au chien.
E. - Determination du pouvoir preventif du serum

antivenimeux par l'inoculation intraveineuse au
lapin.
C'est une experience de cours qu'il est tres facile d'effec-

tuer et qui montre de la fa~on la plus saisissante l'action
preventive immediate du serum antivenimeux contre l'in-
toxication par Ie venif\ de cobra.
On prend deux lapins de poids ega! (1.800 grammes
environ). A l'un d'eux (lapin A) on injecte, dans la veine
marginale de l' oreille droite, 2 centimetres cubes de serum
anticobra. On attend quelques minutes, puis dans Ia

~eine marginale de I'o)'eille gauche de ce meme lapin A,
on injecte 1 centimetre cube d'une solution de venin titree
a 1 milligramme par centimetre cube.
Immediatement apres, on injecte dansla veine marginale
de l'oreille droite du second lapin B, qui ~ert de temoin, la
meme dose de J milligramme de venin.
On s'est assure. par une experience prealable, que cette
dose de 1 milligramme. injectee par voie intraveineuse, tue
un lapin de Il!.~me paids en 20 a 30 minutes Si un milli-
gramme ne suffisait pas pour produire la mort dans Ce de-
lai, on augmenterait 1a dose, de telle sorte que celle-ci fue
suryment en 20 a 30 minutes. Le premier lapin A, immunise
par Ie serum, reste bien portant et accepte volontiers de
.grignoter une carotte pendant que Ie lapin B meuri dans Ie
aclai indicIue.
•*•
IV. TITRAGE DES SERUMS ANTITOXIQUES
PAR LA PRECIPITATION
(M. Nicolle, E. Cesari et Debains.)
Pour mesurer l'activite des serums antitoxiques: on fait

agir sur un ,"olume constant de solution toxique concen-
tr¢e des volumes dccroissants de serum homologue.
Technique. - On sature par Ie sulfate de soude anhy-
dre des filtrats de cultures diphteriques et tetaniques. On
secHe les precipites, obtenus (vide sulfurique) et on les
reduit en poudre homogene. On dissout 0 gt'.8 de poudre
dans 10 centimetres cuLes dOeau distillee. Le liquide resul-
tant tue Ie cobaye de 550-650 grammes au 1/800 de cen-
timetre cube sous la peau (poison diphterique) ou au
1/12. 000 dans Ie muscle(poison tetanique). On melange a
parties egales la solution t9xique et une solution prealable-
ment fon,due a 40 0 de gelatine neutre, a 10 %, dans l'eau
physiolegique. On repartit Ie melange en tubes sous Ie
volume de 1 centimetre cube et, apres l'avoir solidifie a la
glaciere, on verse sur les culots 1 centimetre cube de serum
antitoxique de plus en plus dilue au 1/20, 1/50, 1/100.
1/200, etc ... On abandonne pendant deux heures a la tem-

perature du laboratoire et on lit. Tout resultat positif 'se
traduit par l'apparition d'un disque blanc bleuatre au-des-
sus de la limite du seJ:Ulu dilue et de la toxine-gelatine. II
importe que s'olution toxiqlle et serum soient absolument
limpides. I
Le serum antidiphterique de l'Institut Pasteur titrant

300 unites <it Ie serum antitetanique titrant 4900 unites
correspondent d'apres la precedente technique a la forma-
Lion d'un disque net pour 1 centimetre cu~e de sernm dilne
au cinquantieme.
TABLE DE CONCORDANCE
Precipitation obtenue" Hvec 1 ce. Nombre d'unites correspondant

de serum dilue :'t
~
1/25 200
\ 1/50 300
S. alltidipZ,lerique < 1/75 400
I 1/100
1/125
500
600
I J /10 2.000
\ 1125 3 000
1150 4.000 I
S. antitelaniqlle 5 5.000
,117
1/100 6 000
1/125 7.000
\ 1/150 S.OOr
...
*...
V. - TITRAGE DES TOXINES DIPHTERIQUE ET TETANIQUE

(M. Nicolle, E. Cesari et E. Debains.)
On fait agir sur un volume constant de serum tres puis-
sant (6.00 unites pour Ie serum antidiphterique et 9 UOO
pour Ie serum antitetanique), des volumes deeroissants de
1iltrats homologues tels quels.
Technique. - On ajoute au serum sale a 3 p. 100. 0,3

de gelatine et on repartit en tubes a raison de 1 centimetre
cube par tube. On fait prendre a la gJaciere, 'puis on verse
doucement sur Ies euIot., 1 centimetre cube de filtrst de
TOX,INES ET SERUMS ANTITOXIQUES 561
plus en plus dilue a 9/10, 8/10 ... , 1/10. On abandonne

pendant 2 heures it la temperature ambiante et on lit.
Les toxines utili sees dans l'immunisation des chevaux
doivent tuer les. cobayes de 350 grammel> sous Ie volume
minimum de 1{5000 d~ centimetre cube pour la toxine
diphterique et 1{10 000 pour la toxine tetanique Ces
chiffres correspondent a la formation d'un disque net pour
1 centimetre cube de poison dilue a 1(2 ou 1(5 :
6/10 de cc. dans la methode precedente correspondent ii }1100 de cc.
pour la taxine diphterique ; 5/10 correspondent a 1/150 4/l0 corres-
pondent a 1/200 ; 3/10 correspondent a 1/250 ; 2/10 correspondent a
1/300 ; 1/10 correspond 111/350 •
.. ..
VI. - TITRAG,E DES AN1"ITOXINES PAR LII FLOCULATION
(G. Ramon.)
a) FLOCULATION. - Dans une serie de tubes it essai, on
verse 20 centimetres cubes I d'une toxine diphterique filtree
au g e jour de culture et tuant en 4 jours un cobaye de
250 grammes, a la dose de 1/500 de centimetre cube, puis on
ajoute des. quantites decroissantes, soit 1 cc. 5, 1 centiqH:~tre
cube, 0 cc. 9.0 cc. 8, 0 cc. 7,0 ce. 6,0 cc. 5.0 ec.4" etc.,
d'un serum antidiphterique frais, titrant 200 unites d'Ehr-
lich au centimetre cube et on melange intimement en agi-
tant Dne opalescence apparait bientot dans quelques-uns
des tubes; elle augmente rapidement et, au boutde quelques
heures a Ia temperature ordinaire, elle fait place a une veri-
table floculation CelIe ci est bien specifique, eUe n' est pro-
duite en presence de la toxine diphterique ni par les autres
antitoxines, ni par Ie serum normaL La floculation des me-
ranges toxine antitoxine. n'apparait pas dans taus les tubes
apres Ie meme temps d'incubation. Le tube qui flocule en
premier lieu correspond au melange toxine antitoxine exac-
tement neutralise Quant aux tubes gui floculent plus tardi-
vement et qui contiennent des quantites immediatement
inferieures au superieures, iis sont, les premiers, de plus
en plus toxiques, les seconds de plus en plus antitoxiques,
1. On peut evidemment employer un volume moindre de toxine, 5 au meme 2 centi-'C

metres.cubes et des quantites pr.oportionnellcs de serunL
~UCl\OBlOLOGIE 36
562 PRi£PARATlON DES VACCINS ET SERUMS
b) TECHNIQUE DU DOSAGE DE L'ANTLTOXINE DIPHTERIQUE

PAR LA FLOCULATION. - 10 Determination du pouvoir.satll-
rant de ia toxine destinee aux dosages et etablissemenl de ia
table de titrage cOl'respondant a celle toxine. - Dans des·
tubes a essai contenant, par exemple, 20 centimetres cubes
de la toxine choisie en vue des dosages [uturs, on ajoute des
volumes decroissants: 2 centimetres cubes, 1 cc. 8,1 cc 6 .• ,
1 ce., 0,9 ... ,0.3,0,25,0,2,0,15,0,1 duserum etalon(dilution
dans l'eau distillee d'un serum etalon sec, conserve it l'abri
de l'air et de la lumiere). On agite, puis on laisse reposer it
la temperature du laboratoire et on observe la floculation
initiale. Supposons qu'avec Ie serum etalon titrant 250 unites
d'Ehrlich au centimetre cube, cette floculation apparaisse
dans Ie tube contenant 20 centimetres cubes de toxine +
o ce. 8 de serum; la floculation etant l'indice de la satura-
tion, il faut done, pour saturer 20 centimetres cubes de
toxine, 250 unites X 0,8 = 200 unites d'antitoxine. Par
consequent, un serum· qui floculerait en presence de ceUe
meme qU;,j.ntite de toxine, a la dose de 1 centimetre cube,
titrerait 200 unites au centimetre cube; un autre serum
qui ferait apparaitre la floculation initiale avec, 0 cc. 4 seu-
lement serait plus riche en antitoxine, puisque d'apres la
floculation ces 0 cc. 4 contiendraient ,200 unites; il titrerait
200/0.4 = 500 unites au centimetre cube.
Pour une toxine donnee, on peut etablirla t'able de titrage
suivante :
Doses de serum ajoutees Titre correspondant a chaque dose

it 20 ce. de toxine lorsqu'elle provoque Ia llocuJation initiale
2 cc. / 100 unites

1,8 110 »
1.6 125 »
1,4 145 »
1,2 165 »
1 200 »
0,9 220 »
0,8 250 »
0.7
0.6
290
330
»
»
.
0,5 400 »
0,45 .••.. 440 ~ .....
0,2 etc. 1.000 »
2 0 Dosage d'un /Serum antidiplzterique quelconque. On

prepare, comme precedemment. une serie de tubes conte-
nant 20 centimetres cubes de toxine et 2 centimetres cubes,
1 ce. 8 ... , 1 centimetre cube, 0 cc. 9, 0 cc. 8. 0 cc. 7,
o ec. 6, etc., du serum a essayer. On agite, puis on laisse au
repos a la temperature de la chambre et on note l'apparition
de la premiere floculation. Si elIe se produit dans Ie melange
20 centimetres cubes de toxine + 0 cc 6 de serum, on voit
que Ie titre correspondant du serum dans la table prece-
dente est de 330 unites.
La floculation est plus rapide a l'etuve a 37 0 -380 et plus
rapide encore au bain-marie a 45°, mais, dans la pratique
courante des dosages. il convient d'operer a la temperature
du labontoire de IS a 20°.
Avec les serums chaufI'es a 55 0 -56°, Ie retard dans la 110-
culation est notable. Avec un serum ehaufI'e a 580, ce retard
est plus considerable encore. Les serums portes a 60·65° ne
floculent plus.
c) POUVOIR TOXIQUE ET POUVOIR FLOCULANT DE LA TO-

:XINE DIPHTERIQUE (d'aprcs C. Ramon). - Pour comparer
Ie pouvoir toxique et Ie pouvoir floculant, on preleve chaque
jour une petite quantite de bouillon ensemence de bacilles
diphteriques dont on dose, apres filtration, Ie pouvoir toxi-
que in vivo par inoculation au cobaye et Ie pouvoir floculant
in vitro en presence d'un meme serum antidiphterique. Jus-
qu'au huitieme jour, pouvoir flocula.nt et pouvoir toxique
s'elevent parallelement. A partir du ge jour, Ie pouvoir
toxique baisse alors que Ie pouvoir floculant se maintient
stationnaire pendant plusieurs semaines.
Techniqae dll dosage dll POllDOi/' toxiqlle pal' fa floclllation
- Dans uneserie de tubes a essai contenant20centimetres
cubes d'une toxine qui, filtree au huitieme jour de la culture
eteprouvee immedialement, lucIe cobaye de 250 grammes;1
la dose de 1/600 de centimetre cube, on ajoute des quanti-
les progressivement decroissantes : 2 centimetres cubes,
1 cc. 5, 1 cc. 3, 1 centimetre cube, 0 cc. 9,0 cc. 6,0 cc.3,
etc., de serum alltidiphterique choisi en vue des titrages
flllurs.
Si la 110culation apparait d'abord dans Ie tube contenallt
+
20 centimetres c. de toxine 0 cc. 7 lie serum, par cxemple;
c'est que cette qu:;tntite de serum neutralise 600 X 20 =

12.000. doses morteHes ; 1 centimetre cube du meme serum
12.000 X 1<1
floculera donc en presence de G,7 = 17.000. doses
morteHes, ce qui correspond a une toxine ayant un pouvoil'
toxique egal it 172~00 =,850 doses morteHes au cerrtim~tre
cube. Pour un serum do'nne, on peut ainsi etablir la taMe de
concordance suivante :
Doses de serum ajoutees. a 20 -ce. Pouvoir toX\quc: correspondant a chnque

de In toxine dont on veut dOll!!l' dose de serum lorsqu'elle r.rovoque'
Ie popvoir loxique In floculation i,niti'l e
1 CC. 5 (850 X 1,5) = 1.2(5. qoses motlelles au cc.

1.3, etc 1.105, »
1,2 1.020 »
1,1 935 »
1 850 »
0,9 765 •»
0,8 680
0,7 595 »
0,6 .510 »
0,5 etc. 425 »
0,2 (R50 X 0,2) 170 »
,
En possession de cette table, on peut fa<;ilement doser Ie

p01;1voir toxique d'une toxine quelqmque pendan~ soJ;l 61a,-
boratioJl dans la culture. II suffit, pOUl;' cela, de ~repareli
un certain nombre de melanges renfermant. par ~xemple,
~O centimetres cubes de la toxine a examiqer et del;> dOIi~!?
decroissantes : 2; 1.6; 1,4 ; 1 ; 0\9; 0 8 ~ 0 7. etc ... du serum..-
test. On ajoute les melanges, on laisse au repos"op sl1r-
veille et on note l'a,pparition de la premiere floculati~n qui
a lieu, par exemple, ave:: 0,8. On s~ reparte ~ la table Q.e,
ti.tl!age et on lit Ie nombre correspondant a 0,8, soit 680,
doses morlelles au centimetre cube.
*
••
VII. - Conservation des to~ines.
On conserve les toxjnes en les dessech,ant dans Ie vide, :)

basse temperature, ou en les precipitant au moyen du sul-
TOXINES ET S-ERUMS ANTITOXfQUES 565
fate de soude deshydrate (Pro cede de Rowland) ou du sul-

fate d ammoniaqde a saturation. On peut egalement conser-
ver les filtrats microbil;ns toxiques entre chloroforme et
toluene, ala gladere et a l'obscurite, ou enles addi-tionnant
de quinosol a 1 pour 5.000 (ne pas employer Ie formol ou
t'iode qui alterent et meme suppriment Ie pouvoir toxique
des poisons microbiens).
Pro cede de M. Nicolle et Ch. Truche. - On ajoute Ie poi-
son seC en execs, a de reau glycerinee (parties egales de
glycerine et d'eau). dans un gros tube et on garde Ie
melange au froid. On agite durant quelques jOUl'S, puis on
laisse deposer. Lors de l'usage, on preli~ve Ie liquide clair
avec une pipette donnant Ie cinquantieme de cc., sterilisee
a I'eau bouilJante et bien egouttee. L'exces de toxine est
rejete dans Ie tube. Grace a la haute teneur en glycerin'e de
la solution, ceUe -manreuvre peut etre repetee autant qu'e
ron veut et pendant des annees, sans )e moindre inconve-
nient.
Les filtrats toxiques melanges en parties egales a de la
glycerine sterile se conservent aussi tres bien (Ramon).
. * ..
VIII. - Conservation des serums.
Les serums preleves aseptiquement seront gardes a Ia
glaciere a une temperature voisine de 4°, s'ils doivent etre
employes it bref delai.
Pour les conserveI' indefiniment steriles, il convient de
les soumettre a l'action de la chaleur (tyndallisation), ou de
les dessecher, ou encore de les additjonner d'antiseptiques.
TYlldallisation. - ~erum reparti en amponles qu'on scelle
ensuite au chalumeau. Chauffer trois fois, pendant une
heure, a 55-56°, a deux jours d'intervalle Mais ce mode de
sterilisation est parfois insuffisant; de plus, iloffre l'incon-
venient de detruire ou d'alterer certaines des proprietes des
serums.
Dessiccatioll. - Tres bon procede, mais lent et d'appli-
cation difIicile : dessecher Ie serum dans Ie vide en chauf-
fant legerement. Ne pas depasser 35° car Ia redissolution
ulterieure du serum deviendrait diffi~illi).
Anlisepliqlles. - .on emploie habituellement Ie chloro-

forme (0.25 a 0,5 pour 1.000), l'acide ph_eniqlle (3 Ii 5 pour
1.000), Ie tricresol (3 a 5 pour 1.000). Mais toutes ces subs-
tances ont -l'inconvenient de communiqueI' une odeur au
serum et de former des precipites qui, Ie troublent.
Le formol a la dose de 1 pour 2.000 et meme 1 pour 3.000
empeche la culture des bacteries mais non celIe de certaines
moisissures. Comme il se combine avec les groupes amines
des proteines seriques, Ie serum peut etre injecte a haute
dose sans provoquer d'irritation locale. On evitera la conta-
mination des serums formoles par les moisissures en les
chauffant pendant une heure a 55.56 0
Le qlliI1osol (sllI1oxol au slIperol), sulfate double de potasse
et d'oxyquinoleine, contrairement au formal, s'oppose it la
culture des moisissures. II est mains efficace contre les bac-
teries. On I'emploie t\ la dose de 1 pour 5.000.
."
*
IX. - DETERMINATION DE. LA PURETE BACTERIOLOGIQUE

ET CHIMIQUE DES SERUMS
~
Les serums prepares pour Ie commerce renferment par-

fois des impuretes qu'il importe de re~hercher pour eviler
tout accident. Les infections d'origine microbienne sont
faciles if deceler par Ie controte hacteriologique. On
cfl'ectue celui-ci, en ensemengant :
5 gouttes du serum sur une plaque de gelose;
2 gouttes dans nn tube de bouillon;
ct quelques gouttes dans de la gelose glucosee, en profon-
denr (tubes de Veillon), pour la recherche des anaerobies.
Tous ces enscmencements doivent rester steriles.
D'autre part, si Ie serum renferm(un antisept'ique des-
tine a assurer sa conservation, il importe de s'assurer que
la proportion de cet antiseptique n'est pas telle que Ie se-
rum en devienne toxique. Pour Ie verifier, on injecte, sous
la peau d'nne souris d'environ 15 grammes, Occ. 5 dn serum
dont il s'agit. L'animal ne doit presenter aucun pheno-
mtme d'intoxication (une souris blanche pesant 15 gram-
mes supporte au maximum 0 gr 0025 d'acide pheniquc,
c'est-tt-dire la quantite con'espondant if une tenenr de
0,5 p. 100 d'acide phenique ou de 0,4 p. 100 de tricresol).

Enfin, il convient de s'assurer que Ie serum ne renferme
pas de toxine tetanique Iibre. Pour cela. on en injecte 10
centimetres cubes sous la peau du ventre d'un cobaye. Si
l'animal reste parfaitement bien portant, Ie serum, dont Ie
pouvoir an;titoxique ou prcventif a etc reconnu suffisant,
offre tontes les garanties desirables.
CHAP ITRE XL VI
DETERMINATION ET MESURE DE L'ACTIVITEDES PRIN-

CIPALES DIASTASES '. - SERUMS ANTITRYPTIQUES.
1. - Hydrolases (diastases hydl'olysantes).
a) Sucrase (par exemple de la levure pressee de boulan-

gerie). - On melange dans un mortier. 20 grammes de
levure avec 10 it 15 grammes de sa~le siliceux fin, bien lave.
On ajoute peu a peu 5 centimetres cubes d'eau en broyant
pendant 5 minutes, puis, toujours par petites portions, en-
core 40 centimetres cubes d'eau en continuant it brayer. On
laisse en contact 30 minutes en agitant de temp:> en tem{ls,
puis on filtre sur papier Chardin mouille ou on centrifuge.
On fait agir des quantites variables (_par ,exempie 0 ce. 5,
1 centimetre cube, 1 cc, 5, etc.) de cette solution de su-
crase sur 10 centimetres cubes de .solution\ de sacc?ar?se
a 20 p 100. en presence de 1 centImetre cube de dilutIOn
d'acide acetique a 1,5 p.100 lacidite optima: 1 p.1000) it la
temperature de56 0 (optima) , dans un bain-marie it regulateur.
On complete dans chaque tube au meme volume avec de
reau distillee sterile.
Apres 30 minutes ou 1 heure, on arrete raction diasta-
sique en ajoutant a ehaque tube quelqu~s gouttes de lessive
de soude. On mesure Ie pouvoir reducteur de chaque tube
en comptant Ie nombre de gouttes necessaires pour deco-
lorer exactement un melange bouillant de 2 centimetres
cubes de liqueur de Fehling et 2 centimetres cubes d'eau.
b) Amylase et Dextrinase. On peut les extraire,
par exemple, du malt d'orge de brasserie.
On fait macerer 20 grammes de malt, finement broye au,
1. Pour plus de details. voir Ie Guide pour Ie. Manipulallons de Chimie Moloy/que. de
Gab. Bertrand et P. romas, auquel sont empruntees la plupart des notes de ce chapitre
(H. Dunod. edit , Pal~s).
ACTIVITB DES PRINCIPALES DIASTASES 51)9
moulin, dllns 100 centimetres cubes d'eau froide, pendant

cinq heures, en agitant frequemment. On centrifuge en suite
et on decatlte Ie liquide limpide qui renferme a la fois de
l'amylase, diastase Iiquefiante, et de la dextrinase, diastase
qui saccharifia l'amidon. Si ron chauffe ce liquide pendant
15 minutes entre '800 at 85°, Ia dextrinase est detruite tandis
que l'amylase persiste. Cette derniere ne perd son activite
qu'au voisinage de l' ebullition
L'amylase liquefie l'empois d'amidon prepare en qelayant,
par exemple, 6grammes d'amidon dans 10 centimetres cubes
d'eau et en versant Ie lait ainsi obtenu dans un ballon con-
tenant 90 centimetres cubes d'eau bouillante, On agite vive·
menL On plonge dans ce ballon un thermometre et on laisse
refroidir a 850 , On ajoute alors 1 centimetre cube du Ii-
quide de maceration de malt prepare comme il a ete dit ci-
dessus, en remuant constamment Ie melange. La masse se
fluidifie bien tot. Lorsque la liquefaction est totale, on porte
a l'ebullition et on laisse refroidir. L'amidon ainsi dissous
n 'est pas saccharifie, II bleuit par 1'iode et ne reduit pas
la liqueur de Fehling,
Le liquide de maceration de malt liquefie et saccharifie
simultanemellt l'empois d'all1idon, La temperature optimum
pour cette double action est de 65 0 a 70',
Pour mesurer Ie pouvoiJ' saccharifiant, on utilise, de
preference, un empois d'amidon a 3 p. 100 (au lieu de
6 p, 100).
Dans un ballon contenant 100 centimetres cubes de cet
empois maintenu a Ia temperature de 65 0 a 70 0 , au bain-
marie regulaleur, on ajoute parexemple 2 centimetres cubes
de liquide de maceration de malt.
Dans un certain nombre de tubes, on a verse d'au!re part
10 centimet,res cubes d 'eau distiJIee et 2 ou 3 gouttes de so-
lution d'iode alp, 100, Toutes les deux au quatre minutes
(au davantage suiva'nt 1 activite du malt employe), 011 pre-
leve 1 cen'timetre cube du liquide du hallon avec une pipette
graduee et on Ie verse dans I'un des tubes. On obtient ainsi
une gamme de coloration depuis Ie bleu au debut jusqu'a
une temte nulle, en passant par Ie violet, Ie rouge, Ie mar-
ron et Ie ja une
Lorsque la teinte est nulle, on s'assure que Ie liquide
reduit energiquement la liqueur de Fehling a cause de la
formation de maltose. II reste encore de la dextrine precipi-

table en blanc par 4 a 5 volumes d'alcool.
L'amylase de fa saUve saccharifie l'amidon et Ie gfycogene
en les transformant en maltose et en dextrine.
On peut mesurerson activite en faisantagir des quantites
variables: 1 centimetre cube, 2,5 centimetres cubes, par
exemple, sur une quantite fixe de solution preparee en dis-
solvant 1 gramme de glycogene dans 5 centimetres cubes
d'eau distillee tiede a la temperature de 40 o,-au bain-marie.
On arrete la reaction apres 1 heure. On cherche dans
quels tubes Ie Iiquide ne se colore plus par l'iode et on prc-
cipite dans taus les tubes la dextrine restant par 2 ou 3
volumes d'alcool.
On obtient facilement de la salive en deposant une
goutte d'cther ou de chloroforme sur la pointe de la langue.
On recueille la secretion dans un verre sterile et on filtre
sur papier Chardin mouille.
Les leucocytes et les serums normaux rcnferment toujours
une petite quantite d'amylase qu'on peut mettre en evidence
en Iaissant a l'ctuve, pendant 24 heures a 37°, dans un vase
d Erlenmeyer. 2 centimetres cubes de serum, par exempJe,
melanges a 50 centimetres cubes d'une solution sterilisee
d'amidon alp. 100 qu'on additionne de 1 centimetre cube
de wlution alcoolique de thymol alp. 5, afin d'eviter les
fermentations. Apres 24 heures, on ramene (avec de l'eau
distillee) au volume de 53 centimetres cube~; on defeque
par 5 centimetres cubes de solution de sous-acetate de plomb
et on filtre, puis on dose Ie sucre par la 1iqueur de Fehling
titree de telle sorte que 1 centimetre cube so it reduit par,
5 milligrammes de sucre, Avec Ie serum normal humain, on
trouve ilinsi, en moyenne, 152 milligrammes de sucre forme.
La preparation du glycogene s'effectue Ie mieux en partant
des mollusques (moules, huitres, etc.). On broie leur corps
au hache-viande et on en prend 30 grammes, par exemple,
qu'on chauffe doucement dans une petite capsule ae porce-
laine avec 30 centimetres cubes de solution concentree de
potasse (faite avec 60 grammes d~ potasse en piaques pour
40 centimetres cubes d'eau).
On agite avec une baguette de verre jusqu'a ce que la dis-
solution soit complete, ·ce qui prend environ 1 heure. On
remplace au fur et a mesure l'eau qui s'evapore pendant Ie
ACTIVI1'J1 DES PRINCIPALES DIASTASES 571
chauffage. On ajoute ensuite 50 centimetres d'eau et on

·filtre sur un tampon d'amiante en repassant sur un filtre
les premieres parties.
A 50 centimetres cubes dn liquide filtre, on ajoute 25 cen-
timetres cubes d'alcool a 95°. Le glycogene se precipite. On
recueille ce precipite sur un petit filtre en papier Berzelius
sans plis, ou mieux on Ie centrifuge. On Ie lave avec 10 a
15 centimetres cubes d'alcool a 40°, on l'essore entre deux
doubles de papier a filtrer et on seche a l'etuve, aux environs
de 50°. Le glycogene ainsi obtenu est soluble dans l'eau
tiede. On neutralise sa solution par l'acide acetique. Une
goutte de solution d'iodedonne unecoloration rouge acajou.
Ce liquide additionne de 2 ou 3.gouttes d'acide chlorhy-
drique et porte a l'ebullition pendant quelques minutes re-
duit la liqueur de Fehling par suite de la transformation du
glycogime en glycose. .
On dose Ie glycogenecomme l'amidon, en faisant bouillir
avec de I'acide chlorhydrique alp. 20 et en determinant
la quantite de glucose forme.
c) Monobutgrinase du serum. Lipodiastases. - On

verse dans cinq tubes a essai, 10 centimetres cubes d'une so-
lution aqueuse saturee d,e monobutyrine. Dans Ie premier,
on ajoute 1 centim.etre cube du serum a etudier. dilue de
1 centimetre cube d'eau et prealablement chauffe (aprcs
dilution) 30 minutes a 80 0 (tube temoin); dans les quatre
au tres, 1 centimetre cube de meme serum frais. On ajoute,
a chaque tube, 1 goutte de solution alcoolique de phtaJeine
et on neutralise avec une solution de carbonate de sodium
pur a 0, fj p. 100 jusqu'a teinte rose persistant un momenl.
Les cinq tubes sont aloz's portes nans un bain-marie regIe iI
a5-37°. '
Apres 15 minutes, on constate que Ie contenu du temoin
est reste neutre. Le tube 1 est devenu acide et on compte Ie
nombre de gouttes de la solution de carbonate de sodium
necessaires pour neutraliser. Soit a ce nombre. Au bout de
15 autres minutes on voit que, pour neutraliser ce meme
tube, il faut verser a pen pres a gonttes de carbonate de so-
dium : or a ce moment, Ie tube 2 n 'exige qu'un nombre de
gOllttes b < 2 a, ce qui signifie que l'action n'est pas pro-
portionnelle au temps, mais va en se ralentissant. On Ie
verifie de nouveau en examinant Ie tube 3 apres 45 minutes

ct Ie tube 4 apres 1 heure. Le ralentissement est dfi a
I'acide butyrique mis en liberte, car si on Ie neutralise,
l'action redevient identique a ce qu'eIIe etait au debut.
On peut aussi mesurer l'action de la monobutyrinase du
serum sur la monobutyrine par Ie compte-goulies de Du-
claux (variation de la tension superficielle du Iiquide).
Pour cela, apre~ avoir melange 20 centimetres cubes de
solution saturee de monobutyrine avec 1 centimetre cube
-du serum frais a etudier et 3 centimetres cubes d'eau, on
aspire Ie Iiquide dans Ie compte-gouttes, on essuie l'aju-
tage inferieur de ceIui'"ci et on compte Ie nombre de gouttes
qui s'ecoule de I'appareil. Ce nombre est voisin de 160 pour
5 centimetres cubes de Iiquide. II varie avec la temperature.
On recommence I'operation apres 15, 30 et 45 minutes. Les
nombres obtenus decroissent reguliel.'ement.
En portant en abscisses les temps et en ordonnees Ie
nombre de gouttes correspondant, on peut construire sur
un rapier quadrille la courbe representative du ph-enomene.
On doit toujours faire une experience temoin avec un
melange de 20 centimetres cubes de la meme solution de
monobutyrine avec 4 centimetres cubes de serum preala·
blement dilue alp. 4, puis chauffe a 800pendant 30 minutes.
On peut voir que Ie nombre de gouttes donn¥s par ce me-
lange ne varie pas avec Ie temps.
La monobutyrinase du serum saponifie les divers ethers
des acides gras monobasiques (acetate, butyrate, etc.,
d'ethyle ou d'amyle) avec d'autant plus d'intensite que Ie
poids moleculaire du radical acide est plus eleve. Ainsi Ie
butyrate d'ethyle est saponifie au moins 10 fois plus yite
que l'acetate d'ethyle.
Les lipodiasases que renferment en abondance certaines
graines, particulierement les graines de ricin, sont presque
inactives en milieu neutre, mais elles agissent plus ou
moins energiquement en presence d'un acide(sol. a2,5 p. 100
d'acide acetique pas exemple.
d) Pepsine. - On dissout 0 gr. 10 de la pepsine it Mudier

dans 60 centimetres cubes, par exemple, d'acide chlorhy-
drique alp. 100 et on ajoute 2 gr. 50 de fibrinedessechCea
basse temperature (la meilleure fibrine est celIe que I'on
ACTIVIT& DES PIHNCIPALES DIASTASES 57~
obtient en dessechant dans Ie vide des caillots de sang de

breuf ou cheval bien debarrasses de globules rouges par
lavage prolonge dans l'eau courante).
Ce melange est porte dans un bain-marie regIe a 50 0 d
agite de temps en temps. La fibrine ne tarde pas a se
gonfier et a se dissoudre. Le liquide donne avec intensite
les diverses reactions de precipitation des albumoses; la
reaction du biuret devient de plus en plus intense.
Apres 6 heures, on laisse refroidir, on filtre et on pre.
leve 10 centimetres cubes du liquide : c~lui-ci refroidi a
150 sous un CQurant d'eau froide ne dQit plus se troubler-
par addition de 10 a 2(} gouttes d'acide azotique etendu. Les.
autres reactions des albumoses ont disparu; celles des
peptones persistent se.ules.
Hammarsten et Mandel ant fait observer que la fibrine
crue se disseut assez facilement sous l'influence des acides
seuls C'est pourquoi ils recommandent d'employer, pour
les titrages de pepsine, de l~ fibrine prealablement so.o-
mise a l'ebuUition.
Preparation du sue gastrique. de pore. - On prend un
estomac de porc qu'on a prealahlement bien nettoye et
rince a grande eau. On Ie cloue sur une planchette par sa
face peritoneale et on enleve la mqqueuse avec 11,n bistouri
et une pince. On coupe cette muqueuse en menus mor-
ceaux et on la hache, puis on fait macerer 1a pulpe ainsi
obtenue pendant 24 heures dans un litre d'eau additionne
de 8 centimetres cubes d'acide chlorhydrique. On remue
frequemment Ie melange. Le lendemain, on dec~nte Ie
liquide clair et on Ie fiare sur papier Chardin mouiUe ou
sur ouate hydrophile. Cette solution doit etr~ utilisee
immediatement, eUe ne se conserve pas.
REACTIONS DU sue GAST'RIQ.UE.
Violet de melhyle. - On melange ,Ie sue avec 'un egal
volume d'une solution aqueuse tres diluee de violet dt\ me-,
thyle. Coloration bleue (acide mineral).
Phloro-glucine vanilline. - On melange}~ sue avec un
ega I v'olume d'une solution de 2 grammes de phloroglHcine
et 1 gramme de vanilline dans 100 centimetres cubes d'al-
cool absolu. On evapore dans un verre d& montre sur un
bain-marie, sans aller jusqu'a l'ebullition. II' reste unetache.
rouge qui indique 1a presence d'un acide mineral.
Tropeolirre 00. - On melange environ 5 centimetres cube~

de sue avec quelques gouttes de solution'alcooliquea 1 pour
100 de tropeoline 00, une coloration rose indique Ia pre-
sence d'un acide mineral.
e) Trypsine. - On fait digererau bain-marie it la tempe-

rature de 500 , un melange de 2 gr. 50 de fibrine seche avec
60 centimetres cubes de solution de carbonate de sodium
a 1 pour 100 dans laquelle on a fait dissoudre 0 gr. 20 de la
trypsine a essayer. On agite de temps en temps. La fibrine
se dissout et Ie liquide donne les reactions des albumoses,
Au bout de 6 heures, ces reactions ont dispam : Ie li'quide
ne se trouble plus par addition menagee d'acide nitrique
etendu et ne contient plus que des peptones. Si la digestion
est continuee, on voit, peu a peu, la reaction du biuret dimi-
nuer d'intensite et Ie liquide refroidi laisse deposer des
cristaux de tyrosine faciles a reconnaltre au microscope
(fines aiguilles blanches groupees en gerbes ou en rosaces).
Les lrypsines pancrf!aliglles contiennent toujours une
plus ou moins grande proportion de diastase amylolytique
dont on pent mesurer I'activite sur I'empois d'amidon (voir
Amylase).
On prepare du sue pancreatiquo avec un pancreas de
pore, ou mieux, de bamf. qu'on hache finem.ent aprcs l'a-
voir bien depouille de graisse et qu'on fait\macerer pel)dant
24 a 48 heures dans nne soln\ion a 2 pour 100 de carbonate
de sodium additionnee de quelques gouttes d'une solution
alcoolique de thymol pour empecher la putrefaction. On
agite de temps en temps. On fittre a travers une bourre
d'ouate hydrophile.
Le liquide ainsi prepare emulsionne tres bien les
graisses; il les saponifie et les acidifie. II p~ptonise la
fibrine et l'albumine en solution ~lcaline ou neutre. II hydro-
lyse l'amidon et Ie glycogene.
f) Papai·ne. - L'action de la papai'Jle croit it mesure

qu'on eleve la temperature jusque vers 90 0 , - Dans deux
tubes a essai, on verse 2 centimetres cubes d'une solution
de papaine a 5 p. 100. L'un de ces tubes est porte a 10()V
pendant deux minutes.
On ajoute alors dans les deux tubes, 10 centimetres cubes
ACTIVITE DES PRINCIPALES DIASTASES 575
de serum, frais de cheval; on melange et orr pIonge dans

l'eau d'un bain-marie qU'OD chauffe jusqu'a ce qu'un ther-
mometre place dans Ie tube contenant la papaine non bouil-
lie marque 980. On r-etire alors les deux tubes. L'un est
plein cl'un liquide un peu trouble; l'autre qui contenait la
diastase bouillie est coagule. Le liquide du premier tube,
dont Ie serum a ete rapidement et completement digerc,
donne les reactions des albumoses.
MESURE DE L'ACTIVITE PROTEOLYTIQUE DES CULTURES

DE MICROBES OU DES LIQUlDES DE CULTURE DIASTASI-
FlmES.
1) Methode des tubes de MeU.- Onsepare un blanc d'reuf
frais dans un verre conique et on en remplit par aspiration
une serie de tubes bien calibres, propres et steriles, longs de
15 a 20 centimetres et de 1 on 2 millimetres de diametre
interieur. On les scelle a une extremite et on les plonge
horizontalement dans de l'eau chauffee a la temperature de
95°. L'albumine se coagule. On coupe en suite les tubes en
tron90ns bien egaux de 5 centimetres cubes de longueur.
Chacun de ces tron90ns forme un test de digestion. 11 suffit
de l'introduire de telle sorte qu'il ne plonge que par une de
ses extremites dans Ie tube a essai contenant 5 centimetres
cubes, par exemple. de la culture ou du liquide de culture
diastasifere, et de porter celui-ci au bain-marie a 38°-40 0
pendant un temps determine, soit 10 heures. On mesure
alors avec une regIe millimetrique la longueur-du cylindre
d'albumine coagulee qui a ete dissoute etdigeree al'interieur
du tube. L'activite trypsique du liquide diastasifere peut
etre traduite par un chiffre qui represente Ie carre du nOID-
bre d~ millimetres du cylindre d'albumine dissous. Par
exemple. si, dans un cas, 2 millimetres ont ete dissous, et
dans un autre 3 millimetres, l'activite trypsique des deux
liquides est respectivement de4 et de 9.
2) Methode des tubes de gelatine lhymolee. - Pour etudier
l'action liquefiante des liquides de culture diastasiferes SJlr
la gelatil}e, on prepare, selon la methode de Fermi, une so-
lution de gelatine avec
Euu distillee. 1 litre.
Gelatine • 70 gr.
Thymol. . 2 gr.
On sterilise 1 heure it 100 0 et on neutralise en ajoutant

10 centimetres cubes de solution decinormale de lessives de
soude et de potasse en parties egales. On la repartit it chaud,
apres filtration sur papier Chardin, dans des tubes a essai
a raison de 2'centimetres cubes pour chaque tube. On ajoute
ensulte, suivant'les circonstances, des doses variables de
solutions.faibles de carbonate de soude ou d'acide phospho-
rique pour alcaIiniser ou acidifier Iegerement Ie milieu s'il
n'est pas indique de Ie laisser neutre au tournesol. Enfin
9-n verse, dans chaque tube, Ie liquide diastasifere et on
comptMe partout avec de reau distillee sterile, jusqu'au vo-
lume de 10 centimetres cubes. Les tubes sont maintenus (en
meme temps qu'un ternoin sans diastase) dans un pain-
maril!l a la temperature de 35-40° pendant 10 heures., Apl'es
quoi, ,on les plonge verticalement dans un courant ou un
buin d'eau froide et on les y laisse immobiles jusqu'a ce €Iue
Ie tube temoin soit entierement sotidifie, On note alors les
tubes dans Iesquels la gelatine d igeree (transformee en
proto ou deutero-gelatose). plus ou moins completement,
n'est plus coagulable par refroioissement. En par\ant d'une
dose fixe de Iiquide diastasifere, on peut preciser, par
exemple. Ie nombre d heures necessaires. a la liquefaction
de 8 centimetres cubes de gelatin_e it 7 pour 100 par cette
do.s.e. U faut toujours faire des tubes temoins avec la dias-
tase detruite par quelq~es minutes d;'ebpllition,
Pour apprecier aussi exactement que possible l'aclivile
proteolytiqlle d'une culture microbienne. filtree ou non. on
peut aussi 5e servir de tubes calibres ae 2 millimetres de
diametre sur 20, centimetres ae longueur gradues en mil1'i~
mebes sur 10 centimetres de longueur (pipettes graduees,
par exemple, dont on a (m'mine par un trait de couteau a
vene. la pointe cORiqu-e et qu'on remplit aseptiquement
de gelatine a 20 pour 100 legerementcoloree et neutvalisee.
On aspire pour cela au fI1oy~n d'un tube en caoutchouc fixe
a L~extremite sttperieure du petit tube et ron. fermeavec une
pince lorsque la gelatine est montee it la hauteur voul:Ue.
Les petits tubes etant remplis etsolidifies, onles remetdans
leurs eprouvettes ou on les transpo.rte suivant les besoins,
dans des tubes contenant Ie Iiquide diastasique it etudier. La
dissolution, de Das en haut •. de la geratine indique, en mil-
limetres, dans un temps donne, Ie pouvoir proteoiytique.
4CT./VIT$ DES PRINCIPALes DIA.~TA$E$ 5'77
3) Melhodedelacaseine.-Pour etudier l'action coagulante
QU trypsiqlle des liquides diastasiferes sur 1a casein~, 0\1
peut se st\rvir soit de lait normal (degrais_se par centrifuga-
tion) additionne de 2 pour 1000 d'acide pht\nique, soit d'un~
&olution a 2.5 ou 3 pour 100 de caseine dans l'eau de chaux
qu'on neutralise ala phenolphtaIeine avec l\e )'acidl'l chlo-
rhydrique.
On opere, dans Ie premier cas, s\1rune serie de tubes,con~
ten~\lt chacun 5 ceIltiI\lM_fes cubes d~ lait auqJlel Qn I'Ijoute
les dose~ vari'<lbles d'acidf,} phosphorique ou de <}ar~on:;l.te
d~ I),Qude dont on veut observer les etftlts empl'3~haijts 0\1
favori~ants et une quaptite fixe de liquicle di,st~sifefe. par
e~emple, puis I~ quaptited'eau p.heniquee!l~ pO\lr10()()n!!ce~
saire pour lHllener Ie melange aU volume de 10 QIl dtl15 ~riti~
metres cphes. Apres 12 hepres d'etuvtl, a 35-,*0 0 , Jf/I> tupes
sont retires et on apprecie alors-par les ch\ffrf;lS ~, 1,3, 113
de.gr¢ de solubilillation de ~a caseine en prtll,la\lt C9IPIlW 0 Ie
t\1be temoill qui .wait re<.;u Ie Iiquid~ d\as\~sifere pr~ala..
ble\llent houilli.
Lorllql,l'On se sert de caseine, on vait &e forlller aQ f<;m4
des tube~, sous l'action des diastases prot~olytiquell' lin.
depot flQconnt\ux qui devient pulverulent (n\1clejQeli) et q\W
surmonte uue couche de liquide de pl\1s en pluli trqnl>parellt.
E:XTR.i\OTJON DU FERMEN'll PRDTEOL YTIQU~ D$~ L~ ..
VURES, DES MICROBES EN GENERAL ET DES LEUCOGY'J'E!?
..,. L~& levures, pa:rticlJ,lierement les levures de l;>ol,lJan-
g~rie, produiseI\t el,l al\sez grande abpn~ance Ull f~,rnef1t
proteolylique qu'on peut obtenir de la maniere suivante ;
5 grammes de levure pressee sont tritt,m!l) spjgQtlU-
se.lllept danl> un mortier avec 30 grammes de cflrbonate d~
"hilUX precipite, pur. On yajoute 30 graJl1me~ qe chlQrp ..
fprmtl. Les cellules de l~vure s'autolysent flinf)i ~m ,quelq\l.e~
heures. OLJ verse (lans un vasebouche aI'emeri, qll'Q» Ifliss(!
ptmdant 3a 4: jours a l!;l temper;:tture du labpratoire. QJ;l pass~
IHJ-r ~n tampon d'ouate hydrophile dans un ento{lnoir L~
liqllide recueilli est additionne de quelques goutte;> d~
tQluol et Qn Ie parle ~ re.tuve it 380 pendant 36 heur~s. On
nItre elJsuite sur unc petite bougie Chal;llherhmd a grflQd
debit (marque L) ou liur un petit £lItre Berkefeld ,en tern~
d'iJlfu~oires, On obtient ainsi une solution toute prete JjQUr
l'usage. II faut l'utiliser Ie plus rapiqement possihll'l.
MlllnOIlIOLOGIE 37
Beaucoup de microbes (staphylocoque, bac. pyocyanique,

etc:.. ) produisent egalement de grandes quantites de dias-
tases proteolyliques vis-a.-vis desquellt~s les serums normaux
exercent une action antiproleolytique.
Les leucocytes renferment egalement une diastase pro-
teolytique dont l'activite ne se manifeste in vitro qu'apres
leur destruction par chauffage prolonge (18 it 24 heures)
dans un bain-marie regIe a. 50.52 0 .
MESURE DU POUVOIR ANTIPROTEOLYTIQUE AU ANTI-
TRYPTIQUE DES SERUMS NORMAUX OU PATHOLOGIQUES.-
Certains serums pathologiques (pneumoriie, nephrite, tuber-
culose, parfois fievre typhotde, etc ... ) pl'incipalemenl les se-
rums de malades cancereux, ont un pouvoir antiproteolylique
beaucoup pIns intense que celui du serum normal.
La meilleure methode pour mesurer Ie pouvoir antipro-
tcolytique de ces serums est la suivante :
On prepare une serie de boites de Petri dans lesqu:eIles
on verse une quantite de serum ste_rile (de ~amf, de cheval
ou de mouton I suffisante pour former une couche de 4 a. 5
millimetres d'epaisseur. On dispose ces' boites bien hori-
zontalement dans une etuve a. coaguler, reglee a. 720 et, lors-
que Ie serum est solidifie. on les porte a. l'etuve a. 37 0 en
position renversee (Ie couvercle tourne en bas) afin d'en
dessecher la surface. Apres 24 a 48 heures, on peut les em-
ployer. '
On fait, d'autre part, avec une bonne trypsine commer-
ciale, une solution a. 1 pour 100 dans l'eau salee phy&iolo-
gique a. 8 grammes 5 pour 1000.
Dans une serie de petits tubes a essais, on verse d'abord
hne meme quantite de cette solution: 1 centimetre cube;
puis (sauf dans Ie 1 er tube qui servira de temoin) on verse,
dans chaque tube, une quantite progressivement decrois-
sante du serum a experimenter (lequel doit etre fraichement
recueilli et non chauffe), soit 1 centimetre cube dans Ie
2 e tube, 0 cc. 8, 0 cc. 5, 0 cc. 4, 0 cc. 2, 0 cc. 1 ou meme des
dilutions plus etendues, par exemple 0 cc. 08,0 cc. 06, etc.,
d'une dilution de serum a. 1 pour 10 dans l'eau salee physio-
Iogique. On melange soigneusement par agitation Ie contenu
de chaque tube; puis, avec une anse de platine (flam bee a
chaque nouvelle prise), on porte successivement sur divers
points d'une mcme boUe de Petri, a. partir d'un endtoit
AGTIVITE DES PRINGIPALES DIASTASES 579
prealablement marque, d'abord 1 goutte de la solution de

trypsinc pure (tube 1) et, bien separement les unes des
autres, a 1 centimetre au moins d'intervalle, une goutte de
chacun des melanges trypsine-serum. On porte cnsuite,
pendant 24 heures, la boite dans une petite etuve reglec
a 52° et on lit les resultats qu'on apprecie d'apres l'exis-
tencc ou Ia non-existence d'une cupule de serum digcl'c
sous Ies. diverses gouttes.
Le serum normal humain cst generalement antitryptique
a la dose de 1 pour I, alors que les serums de cancereux
sont souvent actifs a la dose de 1/8, quelquefois meme de
1/20 de centimetre cube pour 1 centimetre cube de solution
de trypsine.
g) Oxydas'es et peroxydiastases. - Les oxydases

vraies fixent l'oxygene sur les corps oxydables. Tellcs
sont la laccase des arbres a laque (Anacardiacees du Japon),
celle d'autres vegetaux (luzerne, champignons: russule,
lactaire), Ia tyrosillase du son de ble, des artichauts, des
tubercules de dahlia, de certains champignons (russule),
et celIe que l'on trouve en plus ou moins grande abondancc
dans les cellules leucocytaires, les celluies pigmentaires
(partieulierement dans Ia melanose, tumeurs melaniques
du cheval, etc.), Ie pus,la bile et certains tissus glandu-
laires animaux.
Pour deceler leur presence, on peut se servir d'un simple
tube it essai de 12 ou de 20 millimetres de diametre sur
200 millimetres de longueur, dans lequel on introduit un
autre tube plus petit de 5 millimetres de diametre par
exemple et court (de 50 millimetres de longueur). Dans ce
plus petit tube, on met quelques gouttes'du liquide a etu-
dier. Dans Ie gros tube, on verse 50 centimetres cubes d'un
reactif oxydable, par exemple une solution de gaiacol it
1 pour 100 dans l'eau distillee, ou une solution de tyrosine a
0,1 pour 100. On introduit avec precaution, en position
inclinee it 45°, Ie petit tube dans Ie grand, de telle sorte
que les liquides ne se melangent pas. On fixe alors, sur 1'0-
rifice du gros tube, un bon bouchon de caoutchouc perce
d'un trou que traverse un tube en verre etrangle legere-
ment en un point, et relie, d'une part, it une trompe oll a
urie pompe a vide, d'autre part a un appareil producteur
5S0 PR~PARATl(JN DES VACCINS ET SeRllMS
d'acide carbonique. On fait Ie vide, puis, interrompant la

commnrrication avec la trompe. on laisse rentrer <lans Ie
gros tube de l'acide carbonique. On fait de nouveau Ie vi.d\}
eton renouvelJe la rentree d'acide carbonique de.ux (H,I trois
fois pour chasser completement l'oxygene. Finaiement, sur
Ie vide aussi parfait que possible on scelle Ie tube etr-angle~
eake Ie bOQch(}n de caoutcbouc etla tro.mpe, et.en r~tourn~
l'appareil, de maniere a melanger Ie ,CQllteau d\;l petit lQb~
:l ~Iw du gros tube. II ne se produit aucune .eQlora,tion
meme apres plusieurs jours.
Lorsqu'on vient a hriser la pointe .effilee et qu'.oJl Jaisse
rentrer de I'air au contact du Iiquide, aelui.,ci s,e ,color.e peu
a'peu s'il renferme une oxydasc.
Les principaux reactifs revelateurs des oxydases sont :
1-0 La tcinture de resine de gaiac fraichement ,pr.eparee et
C0'nservee it. l'ahri de I'air pour eviter l'oxydation'l!apjde de
l'acide gaiacolique. Bleuissement immediat.
"2;0 Le gaiacol en solution a 1 pour 100 dans l'eau .distillee.
Preciprte de couleu1' jaune rougeatre.
3 0 L'hydl'oquinonc en solution a 1 pour 106) dans reau
distillee. 'Transformation en quin<we de couleur jaune.hrun
et d'odeur caracteristique.
4 0 Lc 'Pyrogallol a 1 pour 60 dans l'eau disti:llee. Preci-
pite rouge orange, pouvant former des aiguilles (purpuro-
galline).
'Les pepoxydiastases ouoxydases indirectes n'agissent qQen
deeomposant 'les peroxydes et en rliberant de l'oxygene
libre.
SANG. - C'est ainsi que l'hemoglohine du sang renferme
une peroxydiastase qui 'lihere une partie .de Jl'oxygene de
l''eau oxygenee, de telle sorte que son meJangeaveccelle-ci
tleveJoppe les reactions des oxydases.
·On reconnait 1a presence de traces de sang dans .un
liquide en ajoutant, a 10 centimetres cubes de ce liquide,
1 centimetre 'Cube de teinture .de gaiac fraiche, puis
1 goutte d'eau neutralisee par l'eau de bal'yte. II se deve-
ioppe une belle couleur bleu indigo caracteristique.
LAIT. - 0n peut distinguer Ie lait crn du lait bouilli en
:ajoutant,par exemple, a -10 centimetres cubes de'laitO cc. 5
·de teinture de gaiac et 1 goutte d'eau oxygenee.neutralisee
,par l'eau de baryte. Le lait ern donne une coloration
ACTIVITE DES PR1NCIPALES DIASTASES 581
bleue; Ie lait bouilli reste incolore. Mais ]e lait bouilli doit

etre refroidi car, it. chaud, la reaction peut encore se
produire comme dans Ie lait cru.
On peut rempla~er la teinture de gaiac par 4 it 5 centime-
tres cubes de solution de gaiac a 0 pout 100 dans l'eau dis-
tillee. Lorsqu'on ajoute ensuite 1 goutte d'eau oxygenee
neutraiisee, Ie lait eru se colore en rose, Ie lail bouilli reste
blanc.
Essai de Storch (pemxydase). - A 10 centimetres cubes
de lait, on ajoute 2 gouttes d'ean oxygenee a 1 pour 100 et
2 gouttes de solution aqueuse fralche, a 2 pour 100, de para-
phenylenediamine. Le le.it non chauffe au chaulN a une tem-
perature inferieure a 70 0 prend une coloration bleue. Le lail
chauffe resle blanc.
Recherche des calalases du lail. - On introduit dans un
ureometre d'Yvon 10 centimetres cubes de lait a exami-
ner (hlen melanglr au prealable) et 5 centimetres cubes
d'eau oxygeneea 10 ou 12 volumes. On obture rapidement
en fermant lerobinet. On agite vigoureusement et on attend
10 minutes. On retablit, sur la cuve a mercure ou sur la
cuve a eau, les niveaux de fac;on it mesurer Ie volumed'oxy-
gene degage sous pression normale. II faut operer a une
temperature voisine de 20 a 25°.
h) Ferment g tyeo lytique du sang. - Ce ferment trans-

forme en acide lactique Ie sucre qui existe normalement
dans Ie sang en quantites variables de 0 gr. 5 a 1 gr. 5 par
litre.
Cette transformation n'a plus lieu si, au sortir des vais-
seaux, 'le sang est additionne de 2 pour 1000 de fluorure de
sodium. Elle n'est, au contraire, pas genee par l'oxalate de
sodium a 1 pour 1000 qui rend egalement Ie sang incoagu-
lable. II faut donc se servir du fluorure de :-odium si 1'on
veut doser Ie sucre du sang. Ce dosage s'effectue suivant Ia
methode indiquee par Gab. Bertrand et P. Thomas (Guide
pour les manipula'lions de chimie biologique).
i) Carboxylases baeieriennes. - Pour rechercher

si un microbe isole sur histidine par la technique indiquee
est dec;trboxylant, preparer Ie milieu suivant :
Eau. . . . . . • . . . . . . • . ] .000 ce.
Peptone pepsique de viande P.B.C. Vaillant.' 5 gr.
P04I{'H pur et sec. . • . . . . • . • 1 gr. 50
SO>Mg cristallise pur. . . • . . • . • 0 gr. 75'
Monochlorhydrate d'histidine. , • . . . 1 gr. 50
Steriliser 20' ,i 1150 ; ue pas s' occuper du precipite.
En raison du prix de l'histidine, ne preparer que juste

la quantite du milieu necessaire et la repartir par lOcc. dans
des tubes de Pyrex ou de verre vert. A voir soin de verifier
Ie P04,K2H, car certains fabricants de produits chimiques
livrent souvent comme phosphate dipotassique P04Ka ou
PO'KH2.
Ensemencer largement avec des corps microbiens de
24heures recoItcs sur gelose humide. Laisser 3 a 4 jours a
37 0 • Additionner de Nael (solution saturee) en quantite
calculee pour rendre la culture isotonique, filtrersurpapier,
injecter tres lentement avec une aiguille courte et fine
dans la jugulaire dun gros cobaye. Quand Ie microbe a
decarboxyle l'histidine et forme de la ~ imidazolethylamine
(histamine) 3 ou 4 centimetres cubes provoquent la mort
presque immediate de l'animal avec de violentps contrac-
tions' du diaphragme et un ensemble de symptomes simulant
il s'y meprendre la crise anaphylactiquc. Quand la teneur
en histamine e~ t elevee, Ie cob ave -meurt au cours de l'in-
jection intraveineuse meme pratiquee tres'lentement. En
ouvrant l'animal immediatement apres ia mort, on conS-
tate une exageration tres marquee du peristaltisme L'his:'
tami ne injectee dans les veines tue Ie cobaye de 500 grammes
a ]a dose d'nn demi-milligramme. (Albert Berthelot.)
<".
SEPTIEME PARTIE
DESINFECTION
CHAPITRE XLVII
DESINFECTANTS ET ANTISEPTIQUES. -DESTRUCTION

DES ECTOPARASITES ANIMAUX.
a) CRESYLOL SODIQUE.
Cresylolofficinal.. • • 1 kgr. (de densite environ 1.045)
Soude caustique liquide. 1 kgr.
Effectuer Ie melange dans un vase en gres ou en metal

emaille. car il degage beaucoup de chaleur qui ferait ecla p
ter Ie verre.
S'emploie en solution a 40 grammes par litre. Le cresy-
101 sodique renferme 50 p. 100 de soude caustique. Son
point d'ebullition varie de 185 a 205 0 ,
b) LYSOL (Cresyl-oleine-potasse). - Tres soluble, ne

tache pas Ie linge et n'est pas caustique pour les muqueuses.
S'emploie en solution a 40 grammes par litre dans reau
distillee ou de pluie. L'eau de robinet, si elle est calcaire,
. forme un precipite,qui trouble la solution.
c) CHLORURE DE CHAUX. - Solution aID grammes par

litre .. On delaye d'abord 100 grammes de chlorure de chaux
du commerce dans un litre d'eau. On etend ensuite a 10
volumes avec de reau tiede a 40-500 au moment d'en faire
usage. La dose de 10 grammes de chlorure de chaux cor-
respond a 1 litre de chlore, si Ie chlorure. de chaux titre
1000, c'est-a-dire renferme 100 litres ou 321 gr. 5 de chlore
par kilogramme. II faut dOQc reconnaitre, par un tirage
584 DESINFECTION
ch10rometrique prea1ab1e, 1a teneur du chiore du produit .

qu'on veut employer.
d) EAU DE JAVEL. - Dilution a 25 grammes par litre,

correspondant a 2 gr. Q de ch10re actif par litre.
(Meme observatIon que pour Ie ch10ture de chaux pour
1a teneur en ch10re. L'eau de JaveL du commerce renferme
habituellement de 60 a 100 grammes de ch10re actif par
litre.)
e) LIQUEUR DE LABARRAQUE. - (Hypochlorite de soude

ou .chlorure de soude liquide du Codex, titrant 2 fois son
volume de ch10re actiO
S'emploie en solutions a 50 ou 100 gtammes par litre,
principalement pour les lavages et la desil1tectiun des mu-
queuses.
Nola. - L'efficacite des divers produits a base de ch10re
depend de leur teneur en chlore. Or celle-ci est tres va-
riable. II importe donc d'en preciser Ie titre, ce qu'on peut
faire aisement de la maniere suivante :
On pe'Se 10 grammes d'hypochiorite de ~haux ou d 'eau de
Javel qu'on dissout ou delaye dans une quantite d'eau dis ..
tillee suffisante pour porter Ie volume a 1 litre.
On verse 25 centimetres cubes de cette\solution dans une
fiole conique dans laquelle on ajoute 2 grammes d'iotiute
de potassium dissous et quelques gouttes d'acide ch10rhy ..
drique pour acidifier legerement. Puis on dose riode
wis en liberte par une solution d'hyposulfite de sodium
a24: gr. 800 par Htre hyposulfite cristallise, purine). 1 Cell"
timetre tube de ceUe solution-correspond a 3 milligr. 55 de
chlore actif.
t) ANTIFORMINE. - Constituee par parties ega1es de 1a

liqueur chloruree, calcique et sodique de la Pharmacopee
anglaise et d'une solutIon a 15 p. 100 de soude caus ..
lique.
La formule de 1a liqueur ch10ruree, calcique et sodique de
la Pharmacopee anglaise est la suivante :
Carbonate de soude .• 60 gr.
Chlorure de chaux sec. 40 gr.
Eau distillee. , . . 400 ce.
DESTRUCTION DES ECTOPA1'M,sttES ANIMAIlX 585
Dissoudre Ie carbonate de soude dans 100 centimetres

cube'S d'eau distillee ; triturer ensuite Ie chlorure de chaux'
dabs 300 centimetres cubes d'eau distillee; filtret separe-
ment les deux liqueurs, les melanger el fiItrer de nou-
vellu.
g) LAtT DE CHAUX. - 1 kilo de chaux eteinte pour 4
litres d'eau. (On eteint la chaux en delitant L kilo de chaux
vive avec 500 graIllmes d'eau qu'on ajoute par petites por-
tions.)
Pour desinfecter les dejections, il faut melanget celles-cl
avec 2 p, 100 de lait de chaux fraichement prepare. Con·
tact au moins six heures.
h) ALDEHYDE FORMIQUE OU FORMOL. - Solution it
40 grammes par litre d'eau (40 centimetres cubes de !>olu-
tiob commerciale a 40 p. 100, dans un melange d'eau'et
d'alcool methylique a parties egales).
En vtl.peurs 2 gr 5 a 5 gramrnes par metre cube (voir
tables de desinfection ci-apres)
Pour }'usage, la solution commerciale d'aldehyde for-
mique a vaporiser doit toujours eire Men due d'au moins
4 fois sou volume d'cau afin d'eviter Ie polymerisation.
tes vapeurs d'aldehyde formique se combinent avec l'am-
moniaque pour former une hexamethylene-diamine qui n'a
pas d odeur ; d'ou la possibilite de faire disparaitre rapi-
dement l'odeur de formol dans les locaux desinfectes, en y
pulverisant de I ammoniaque.
i) DtSINFECTION DES LOCAUX PAR L'ALDEHY~E FOR"
MIQUE ET LE PERMANGANATE DE POTASSIUM, A FROID, SANS
AI'PAREILS (Procede de R. Doerr et H. Raubitschek). -
Ce proci'lde, employe depuis 1908 pour la desinfection offi-
cielle en Allemagne, presente les avantages suivants:
10 Suppression de tout appareil couteux;
20 II n'est pas nece~saire de fermer hermetiquement les
locaux, rti de coller du papier sur les interstices des fenetres,
des portes, etc ... , comme c'est Ie cas pour les autres pro-
cedes;
30 Ce procede est si simple qu'il est a la portee de tout
Ie monde ;
40 II u'y a pas de danger - d'incendie ;
586 DESINFECTION
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DESTRUCTION DES ECTOPARASITES ANIMAUX 587
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588 nE:SINPECTION
50 II est moins cher que tous les autres.

II faut, pour la desinfection : 10 formol de commerce a
40 p. 100, qu'on etend de la meme quantite d'eau; 2 0 per-
manganate de potftssium cristallise; 30 de grands vases dans
lesquels on verse la solution de formal ~ur Ie permanga-
na~e de potassium.
D'apres Ie tableau etahli par les auteurs, un loc~l de
50 m 3 hecessite. pour etre desinfecte : 1 kilo de perma'nga:-
nate de potassium cristallise et 21itres de formol a: 4Op. 100,
etendus d'eau. 11 faut surtout veillet it ce que les vases
soient tres grands et employer, dans Ie cas ci-dessu.9, par
exemple, une cUve de 25 litres, car ce melange mOusse
fortement et pourrait dehorder.
On Opere de preference a la temperature de 2()0. En hi-
veI'. oh chauffera Ie local au prealable, et on attendra que
Ie feu soit eteint. Les vieilles cuves, baquets ou tonneaux
en bois, de dimensions convenables. sont preferables aux
vases en metal, bien que ces derniers ne soient pas delerio-
res par les produits employes,
Pour eviler que Ie liquide ne vienne tacher Ie plattcher
s'il debordait, on placera les cuves sut des vieux chiffons
ou des sacs Du reste. les taches s'enlevent facilemerit par
I'acide oxalique. Pour desinfecter. ,on ferme simpletnent
les portes, les fenetres ou toutes aut res ouverture!l. On
ouvre largement les armoires, commodes. bahuts; on de-
fait les Hts; on suspend les tapis, couvertures, draps, de
telle sorte que les vapeurs desinfectantes puissent pedetrer
partout, et on verse, dans les ustensiles ad hoc con tenant
Ie permanganate de potassium cristallise, la quantite I1eces-
saire' de formol dilue • Apres 10 a 12 secondes, Ie gaz stl
degage en epais nuage qui se repand dans la piece. Durant
ces 10 secondes, on peut facilement sortir et fermer la
porte On laisse Jes vapeurs agir pendant six heures. temps
suffisant pour que Ia desinfection soit complete. 11 ne reste
plus ensuite qu'it aerer jusqu'a dispatition de l'odeur pi-
quante du formol.
Le tableau qui suit permet de se tendre compte de la
quantite de produits a employer pout Ia desinfection des
locaux.
DESTRUCTION DES ECTDPARAS]TES ANIMAUX 589
Conte~ce
en metres cubes
dlj local
II desinfectcr
------------
Quantites necess~res de Contenance minimum
MnO'K
Formal
a 40di1::utI lOO
des vases a employer
pour Ie melange
,
50 rna 1 )rgr. 2 litre. 25 lit. de contenance
75 D 1 .. 500 3 » 50 lit. ou 2 vases de 25 lit.
100 » 2 » 4 » » »
125 » 2 » 500 5 .. " lit. ou 3 vases de 25 lit·
75
150 » 3 » 6 » » » »
200 » 4 » 8 .. 100 lit. ou 4, vases de 25 lit.
250 » 5 » 10 » 125 lit. ou 5 vases de 25 lit.
j) AMMONIAQUE. - On peut remplacer les procedes

usuels de desinfection des pieces habitees (fumigation de
form 01 ou de ses succedaues) par l'evaporation d'llmmo-
niaque ordinaire plaeee simplement dans des vases plats
(c~vettes de photographe, par exemple) au niveau du par-
quet. Le Dr RIEGLER, a I'Institut d'hygiene de Buda Pcsth,
desinfecta ainsi une ehambre de 100 mes avec 1 kilo
d'ammoniaque ordinaire. Apres une heure, il s'etait
eva pore 300 grammes de liquide, apres 2 heures 250
grammes, apres 3 heures 300 grammes, apres 4 heures 350
grammes, apres 5 heures 390 grammes, et 450 grammes
apres huit heures. Nllturellement la piece do it etre herme-
tiquement close.
Dans ces conditions, apres examen de tlssus impregnes
auparavant de microbes dive;s. on constate que les bacilles
du cholera et de la typhoide sont tues au bout de deux
heures, la baoterie et les spores du charbon en moins de
trois heures, Ie bacille diphterique apres huit heures. On
voit que Ie procede est efficace ; en outreil est peu cou-
teux i enfin il n'altere ni les meubles, ni les tentures 1,
k) SOUFJ\E. - Eq. brulant, Ie soufre degage Ie double de
son poids. d'aRhydride sulfureux (SOl). Ce dernier est uJl
desinfectant assez actiC qu'on emploie surtout pour la desin-
f~ction at la destruet~on des rats et des insectes dans les
cales de ~~l.Vires, n;lagasins, docks, oave~, etc. 11 a l'incon-
v$Q.ient de c;l~colorer certains tissus et d'attaquer legerement.
1 •. La Natrp;~, 1" revne!' 1913.

590 DESINFECTION
certain:;., melaux. Mais on peut protegeI' ceux-ci en les re-

COlnTunt &implement dOun lcger end nit de vaseline ou d'un
papier d'emballage.
La teneur de l'air en acide sulfureux dans un. local a de-
sinfecter se determine au moyen d'nne pipette gradnee en
centimetres cubes. a entonnoir, a deux robinets, de 250 cen-
timetres cubes de capacite,qu'on a soin de bien dessecher
tout d'abord.
On introduit dans cette pipette, au moyen d'un tube de
caoutchouc portant une poire aspirante et foulante, de l'air
preleve dans la piece. Apres avoir balaye plusieurs fois
l'air contenu dans la pipette on ferme les deux robinets.
On verse daus l'entonnoir quelques centimetres cubes
d'une solution d'iode .dans l'iodure de potassium melangee
d'un peu d'empois d'amidon et etendue de 3 a 5 volumes
d'eau distillee. On laisse penetrer ce liquide par portions
dans la pipette, et on en introduit ne
nouveau, en agitant
jusqu'a ce qu'il n'yait plus de decoloration. 1 centimetre
cube de liqueur d'iode a 12 gr. 7 par litre correspond a
i3 mgr.2 de SO~.
Pour la desinfection des espaces clos par simple com"
bustion du soufre, il faut employer 40 grammes de sou[re en
canons par metre cube et boucher soigneusement les ouver-
tures du local avec des handes de pap~er gomme. Placer
Ie recipient contenant Ie soufre, au milieu de la piece, sur
une bassine pIeine de sable.
I) BICHLORURE DE MERCURE (slIblime).
Sublime corrosif. . . 1 gr.
Eau. . .•..... 1 litre
Acide chlorhydrique.. • • 4. gr.
A rejeterpour la desinfection d~s crachats, des dejections

et des linges, parce qu'il coagule ~es liquides albumineux et
que Ie coagulum, formant une enveloppe protectrice aux
microbes, soustrait ceux-ci a l'action desinfectante.
m) EAU OXYGimEE NEUTRE. - L'eau oxygenee dn com~

merce, a 10 ou 12 volumes, est toujours tres acide. Po'nr
eviter les inconveniertts de cette acidite, il faut ncutraliser
l'eau oxygenee par l'eau de baryte jusqu'a reaction a peine
alcaline, On reacidifie aussitot tres legerement par une
DESTRUCTION DES ECTOPARASITES ANIMAUX, 591
~eule goulte d'acide sulfurique ou phosphorique et on

filtre pour enlever l'abondant precipite blanc du sulfate ou
du phosphate de baryum.
Excellent antiseptique pour ,les plaies chirurgicaIcs au
accidentelles, infectees par des corps. ctrangers. On I'em-
ploie pure (en attouehements) ou diluee dans 3 a 5 volumes
d'eau sterile.
n) THYMOL-FoRMaL. - Recommandable pour les cra-
choirs, lavabos, etc .. :
• Teinture de quillaya. 50 gr .
Essence de thym . . 50 gr.
Formal a 40 p. 100.• 40 gr.
0) MELANGE DE JOLY CONTRE LES PIQURES DE MOUS-

TIQUES (antiseptique et anesthesiant local) :
Formal a 40 p. 100. • • . . . . 15 gr.
Xylol. . • . . . . . . • . • 5 gr.
Acetone. • . . . . . • • . . 4. gr.
Baume de Canada. . • • . • • 1 gr.
Essence de girolle ou de bergamote, Dcc. 25
On touche les piqures avec Ie pinceau ou un fragment de

bois d'allumette trempe dans ce melange et on Iaisse
seeher.
Les person;'es. tres sensibles peuvent se protegeI' ires
efficacement les parties du corps decouvertes contre les
piqures de moustiques en saupoudrant ees parties pIu-
sieurs fois par jour avec un melange de :
Trioxymethylene. . . . . • • • • . 1 gr.
Bicarbonate de sonde. . . . . . . . 20 gr.
Poudre de riz fine. (Parfumee au choix) .• 79 gr.
Ce melange doit ~tre soigncusement pulverise
et tamise.
p) LOTION SAVONNEUSE AU PETROLE POUR EL:OIGNER

LES TIQUES ET LES PUCES DE LA TOlSON DES ANIMAUX.
Savon noir. . . . . 100 gr.
Petrole. . . . . . 50 gr.
Alcool it 95 0 • 50 ce.
Bien melanger jusqu'a dissolutiort, puis ajouter peu a

peu en agitant :
Eau. 1 litre
592 DESINFECT IOJIl
q) POUDRE POUR ELOIGNER "LES POUX DU CORPS, l-ES
PUCES, PUNAI$ES, ETC., DU LINGE DE CORPS, DES VETE-
MENTS, DES DRAPS DE LITS, ETC ..•
Soufre en fleur. . . • 10 gr.
Trioxymethylene. . . . . . . 5 gr.
Paudra de talc de Vanise. • • . 85 gr.
Broyer finement ensemble dans un mortier. Saupoudrer

la peau sur toute la surface du corps au moins deux fois
par jour avec ce melange lorsqu'on doit frequenter des
endroits ou la vermine abonde. On se preserve ainsi des
maladies transmises par les insectes((gphus exanthemp.tique,
{ieure recurrente, leishmanioses, peste bubonique, etc ... ) et des
puces -chiques (Sarcopsy lIa penetmns) par saupoudrage
quotidien des pieds et de l'interieur des chaussures.
Pour la destruction des ectoparasites (Poux de la tete ou
du pubis. Demodex, etc ... ), on emploiera soit Ie vinaigre
ou l'eau de Cologne conteha!J.t 2 grammes de sublime par
litre, soit Ie xylol. en friCtions, au tampon d'ouate. Le
xylol est particul~erement recommandable. Il).ais son appli-
cation sur la peau, surtout lorsque celle-ci est excoriee,
est un peu. douloureuse. II est avantageux alors de se servir
du mel<.Ulge de Bodin:
Xylol pur. . • • 50 gr.
Alcool apsolu. • . 25 gr.
~Iher officinal. • . 25 gr.
Pour la tete. Ie pubis, les aisselles, Ie xylol sera incor-

pore a de la vaseline :
Xylol. • . . . . • . . . • . • . . L glt.
Vaseline planc}le. • . • • . • . • • 50 gr.
La naphtaline en poudre, ou bien un melange de naphta-
line et de cresol _!:In {oudre, preservent tres efficacement
contre les poux du corps (saupoudrage du linge de corps).
r) SAVON LIQUIDE, POUR LA PESINFEGTIQN DES ~AINS;
Savan nair de polasse. 100 gr.
Savon blanc de saude. 25 gr.
Glycerine. .' 60 gr.
Essence de lavande. 6 gr.
El\1J. •••••• <}. s. pour 1.000 cc.
APPEND ICE
TABL.ES DE DILUTIONS
(d'apres J, ROSENAU In' ANDERSON).
POUR_LE TITRAGE DES :rOXINES ET DES SERUMS
Table I.
Oil. A (1 ce. + 99 cc. H20 physio!.) 1 ce, :::: 0,01 :::: 1 p, 100.
Oil. B (1 ce, A + 9 ec, H20 physioL) 1 cc, = 0,001 = 1 p. },OOO.
1 cc. 1 B = 00011 ou 1/909
1,2 _ 0,0012 » 1/833
1,3 = 0,0013 »1/769
1,4 0,0014» 1/714
1,5 0,0015 » 1/666
1,6 = 0,0016 » 1/625
1,7 =
0,0017 »1/588
1,8 0.0018 » 1/555
1,9 _ 0,0019 ,) 1/526
2 0.0020 » 1;500
2,1
2,2
=
0,0021 » 1/476
= 0,0022 »1/454
2,3 = 0,0023 » 1/435
2,4
2,5
=
0.0024 » 1i417
= 0,0025 » 1/400
2,6 = 0,0026 » 1/384
2,7 = 0 0027 » 1/370
2,8 = 0,0028 »1/357
2,9 = 0,0029 » 1/345
3 0,0030 »1/333
3,5 _ 0,0035 » 1/285
Table II.
DiL A 1 ce. ~ 0,01 (1 ce. + 99 cc. H20 phys.) = 1 p. 100.
Dil. B 1 ce. = 0,0005 (1 ce. A + 19 cc. H'O p~ys.) .;::. 1 p. 2.000.
1 cc. 1 B 0,00055 ou 1/1,818
1,2 = 0.00060 » 1/1666
1,3 = 0.00065 » 1/1,538
1,4 0,00070 » 1/1,428
1,5 = 0,00075 » 1/1,333
1,6 = 0,00080 » 1/1,250
MICROBIOLOGIE 38
S94 PREpARATION DES VAGGINS ET SJlRUMS
1,7 - 0,00085 ou 1/1.174
0,00090 » 1/1 III
1,8 -
1,9 = 0,00095 » 1/1 057
2
2,1
=-
0,001 » 1/1.000
0.00105 » 1/952
2,2 = 0,00110 I) 1/909
2,3 = 0.00115 » 1/869
-==
2,4 000120 » 1/833
2.5 0.001'Z5 » 1/800
26 000130 » 1/769
2,7 - 000135 » 1/741
2,8
2,9
-:=. 0.00140 » 11714
0,00145 » 1/689
3 = 000150 ,.1/61i6
3,5 - 0,00175 » 1/571
Table-III.
Dil. A 1 cc. " 0.01 (1 cc. + 99 cc. H"O phys.)
Dil. B 1 ce.
= 1 p. 100.
0,00033 (1 ce. A + 29 H'O phys.) - 1 p. 3.000.
1 cc. 1 B = 0.0003~ ou 1/2,777
1,2 = 5).00040 » 1/2.500
1,3 0,00043 » 1/2 302
1.4 _ 0,00046 » 1/2.173
1,5
1.6
= 0,00050 » 1/2.000
= 0.00053 » 1/1.850
1,7 _ 0.00056 » 1/1 786
1.8 0,00060 » 1/1,660
1,9 = 0.00063 » 1/1,587
2 0,00066 __ II 1/1.515
2,1 = 0,00070 ,» 1/1,428
2.2' = 0 00073 » 1/1.369
2,3 0.00076 » 1/\,304
2,4 _ 0,00080 » lIt ,250
2.5 0.00083 ..' 1/1,200
2,6 0,001186 )) 11) .154
2.7 000090 » 1/1.111
2.8 0,00093 1/1' 071
2,9 = 0.00096 » 1/1,034
3 0,001» 1/1 OCO
3,5 _ 0,00116 ,,1/857
Tab1e IV.
Dil. Alec. = 001 (1 ee. + 99 ee. H20 phys.)= 1. p. 100.
Dil. B 1 cc. 0.00025 (1 ee. A + 39 H"O phys.) = 1 p. 4.000.
1 ce .•l B 0,000275 ou 1/3.636
1,2 0.000300 " 1/3.333
1,3 0 000325 » 1/3.077
1.4 - 0 000350 • 1/2.860
1,5 0.000375 » 1/2.666
1,6
1,7
= 0,000400 » 1/2,500
= 0,000425 » 1/2,353
1;8 _ 0.000450 » 1/2,222
1,9 0,000475 » 1/2,105
APPENDICE 595
2 = 0.000500 . ou 1/2.000'
2.1 = 0.000525 » 1/1.905
2,2
2.3
2,4
=
= 0,000575 .
0,000550 " 1/1,818
1/1,739
0,000600 » 111,666
2.5
2,6
=
=
0,000625 » 1/1,600
0,006650 » 1/1,538
2,7
2.8
=
-
0.000675 » 1/1,481
0,000700 » 1/1,428'
2,9 0,000725 » 1/1.379
3 = 0.000750 » 1/1.333
3,5 == 0,000875 » 1/1,143
Table V.
Dil. A 1 ce. =
0.01 (1 cc. + 99 cc. H20 phys.) :;;:: 1 p. 100.
DiJ. B 1 ce. = 0.0002 (1 ec. A + 49 H20 phys.) = 1 p. 5.000.
1,1 B = 0.00022 ou 1/4,545
1,2 = 0.00024 " 1/4,170
1,3 = 0,00026 » 1/3.846
t.4 = 0,00028 » 1/3.571
1,5 = 0.00030 » 1/3.333
1,6 = 0,00032 » 1/3,125
1,7 = 0,00034 » 1/2,941
1,8 = 000036 » 1/2.777
1,9 0.00038 1/2,631
2 = 0,00040 "" 1/2.500
2,1
2,2
= 0,00042 1/2,381
= 0.00044 »" 1/2,272
2,3 = 0.00046 » 1/2,173
2,4 = 0.00048 » 1/2.083
2.5
2,6
= 0,00050 » 1/2.000
0,00052 » 1/1,923
2,7 = 0,00054 » 1/1,851
2,8 = 0,00056 » 1/1.786
2,9 = 0,00058 » 1/1.724
3 = 0,00060 » 1/1,666
3,5 = 0,00070 » 1/1.428
Table VI.
Dil. A 1 ce. = 0.01 (1 ce. + 99 ce. H20 phys.) = 1 p. 100.
Dil. B 1 ce. = 0,000017 (1 ee. A + 59 HO' phiS.) 1 p. 6.000.
1.1 B = 0.000183 ou 1/5 454
1.2 0,000199 » 1/5 000
1,3 = 0,000216 » 1/4,615
1,4 0,000233 » 1/4.285
1,5 0.000249 " 1/4000
1,6 = 0,000266 » 1/3,750
1,7 = 0,000283 » 1/3.529
1,8 = 0.000300 » 1/3333
1,9 0000317 » 1/3,158
2
2.1
= O,OO()333 » 1'3,000
= 0 000350 » 1/2,857
2,2 = 0,000367 » 1/2.727
2,3
2,4
=
=
0.000383
0,000400
ou
»
1/2,609
1/2,500
2,5 = 0,000417 » 1/2,400
2,6
2,7 =
=
0,000433
0,000450
»
»
1/2,307
1/2,222
2,8 = 0,U00467 » 1/2,143
2,9 = 0,000483 » 1/2,069
3
3,5 =
=
0,000500
0,000583
»
»
1/2.000
1/1,114
Table VII.
Dil. Alec. = 0,01 (1 ee. +
99 ee. H20 phys.) =
1 p. 100.
Dil. B 1 ee. =
0,000143 (1 ee. A + 69 H20 phys.) = 1 p. 7.000.
1,1 B = 0,000157 ou 1/6,363
1,2 = 0,000171 » 1/5,833
1,3
1,4 =
0,000185 » 1/5,385
=
0,000200 » 1/5,000
1,5 =
0,000214
:::: 0.000229 "» 1/4,666
1/4,375
1,6
1,7 = 0,000243 ,.
1/4,118
1,8 - 0.000257 » 1/3,888
0,000271 » 1/3,684
1,9 =
2
2,1
=
0,000285 » 1/3,500
-
0,000300 » 1/3,333
2,2 = 0,000314 » 1/3,181
2,3 =
0,000329 » 1/3,043
2,4
2,5 ==
=
0000343 » 1/2.916
0.000357 » 1/2,800
2,6 0~0371
= 1/2692
2,7 = "
0,000385 » 1/2,592
2,8
2,9
=
0.000400 1/2,500
0.000414 \"» 1/2,414
-
3
3,5
=
0.000429
=
1/2,333
"
0,000500 » 1/2,000
Table VIII.
Dil. Alec, = 0.01 (l ee. + 99 ee. H20 phys.) = 1 p. 100.
Dil. B 1 ee. = 0,000125 (1 ce. A + 79 H.20 phys.) = 1 p. 8.000
1 ee. 1 B
1,2
=
~
0.000137 oU 1/7,272
0000150 » 1/6,666
1,3
1,4 =
==
0,000162 » 1/6.154
0,00()175 » 1/5.714
1,5
1,6
=
=
0.000187 » 1/5,333
0000200 » 1/5,000
1,7 == 0,000212 » 114,706
1,8 = 0,000225 J) 1/4,444
1,9
2 =
=
0,()O0237 » 1/4,210
0,000250 ,.
1/4.000
2,1
2,2 =
= 0,000275 ,.
0.001 262 » 1/3,809
1/3,636
2.3 = 0,000287 » 1/3.478
2,4 = 000 300 » 1/3,333
2,5 = 0,000312 » 1/3,200
APPENDICE 597
2,6 0.0003:!5 au 1/3,017
2,7 0,000337 » 1/2962
2.8
2,9
=
=
0.1100350
0,000362
It
•
112,860
1/2.758
3 = 0,000375 » 1/2,666
3,5 = 0,000437 » 1/2,286
Table IX.
Dil. A 1 cc. = 0.01 (1 ce. + 99 cc. H20 phys.) = 1 p.100.
Dil. B J cc. = 0,000111 (1 cc. A + 89 H20 phys.) =
1 p. 9.000.
1 cc. 1 B 0.000122 au 118,173
1.2
1,3 ==
0,000133 » 1/7,500
0,000144 » 1/6,923
1,4 = 0,000155 » 1/6.428
1,5 - 0,000166 » 1/6,000
1,6 0000177 » .1/5,625
1,7 0,000188 » 1/5,293
1,8
1,9
==;
0,000200 » 1/5.000
0,000211 » 1/4,736
2 - 0,000222 » 1/4,500
2,1
2,2
=
-
0,000233
0,000244
» 1/4,286
» 1/4,091
2,3 0,000255 » 1/3.913
2,4 0.000266 » 1/3,750
2,5
2,6 =
=
0,000277 ), 1/3,600
0.000288 » 1/3,461
2,7
:!.8
== 0,000300 » 1/3,333
0,000311 » 1/3,214
2,9 = 0,000333 » 1/3,103
3
3,5
=
=
0.000344 » 1/3,000
0,000388 » 1/2,571
Table X.
Dil. A 1 cc. = 0,01 (1 cc. + 99 cc. H20 phys.) =
1 p. 100.
Dil. B 1 ee. = 0,0001 (1 ee. A + 99 H20 phys.) = 1 p. 10.000.
1 ce.1 B -- 0,00011 au 1/9,090
1,2 0,00012 » 1/8,333
1,3 0,00013 » 1/7682
1,4 0,00014 » 1/7.143
1,5 0,00015 » 1/6,666
1,6
1,7
= 0.00016 » 1/0,250
0,00017 » 1/5882
1,8 = 0.00018 » 1/5,555
1.9 = 0,00019 » 1/5,263
2 = 0.00020 » 1/5,000
2,1 0.00021 » 1/4,762
2,2 = 0,00022 » 1/4.545
2.3 = 0,00023 » 1/4,348
2,4 0,00024 » 1/4166
2,5 = 000025 » 1/4.001)
2,6
2,7
= 0,00026 » 1/3846
0.OOO~7 » 1/3.703
2,8 = j),00028 )) 1/3,571
2,9 = 0,00029 ou 1/3.448
3 _ 000030 » 1/3,333
3,5 = 0,00035 » 1/3,000
Table XI.
Dil. A 1 ce. = 0,01 (1 ce. + 99 cc. H20 phys.) =1 p. 100.
Dil. B 1 ce. == 0,001 (1 ce. A + 9 ce. H20 phys.) = 1 p. 1.000.
Dil. C 1 ce. == 0 00005 +
(1 ec. B 19ce. H20 phys.) = 1 p. 20.000.
1 cc. 1 C == 0,000055 ou 1/18,181 .
1,2 == 0,000060 » 1/16,666
1,3 _ 0,000065 }) 1/15,385
1,4 == 0,000070 » 1/14,285
1.5 _ 0,000075 » 1/13.333
1,6 _ 0,000080 » 1/12,500
1,7 == 0,000085 » 1/11 764
1,8 = 0,000090 » 1/11,111
1,9 == 0,000095 » 1/10,526
2 == 0,000100 » 1/10,000
2,1 _ 0.000105 » 1/ 9,524
2,2 = 0,000110 » 1/ 9,090
2:3 0,000115 » 1/ 8,695
2,4 = 0,000120 » 1/ 8,333
2,5 = 0000125 » 1/7.600
2,6 _ 0,000130 » 1/7.615
2,7 = 0,000135 » 1/7,407
2,8 = 0,000140 » 1/7,143
2,9 _ 0,000145 » 1/6,896
3 = 0,000150 » 1/6,666
/"
Table XII. \
Dil. A 1 cc. = 0,01 (I cc. + 99 ee.' eBU phys.) = 1 p. 100.
Dil. B 1 ce. = 0,001 (1 ec. A + 9 ee. H20 phys.) == 1 p.1 000.
Dil. C 1 ee. = +
0,000033 (1 ee. B 29 H20 phys.) = 1 p. 30.000.
1 ce, 1 C = 0,000036 on 1/37,322
1,2 = 0,000040 » 1{25,000
1,3 0.000043 » 1/23,095
1;4 0,000046 » 1/21,428
1,5 = 0000050 » 1/20000
1,6 = 0,000053 » 1/18,761
1,7 0,000056 » 1/17,668
1,8 0.000060 » 1/16.666
1,9 = 0,000063 » 1/15,799
2 0.000066 » 1/15 000
2,1 = 0,000070 » ] /14285
2,2
2.3
= 0.000073 » 1/13.642
0,000076 » 1/13,Ofo5
2,4 ,_- 0,000080 » 1/12.600
2.5 0.00()083 .) 1/12,000
2,6 0,000086 » 1/11,547
2,7 = 0.000090 » 1/11,111
2,8 0,000093 » 1/10,504
2,9 0,000096 » 1/10,352
3 = 0,0001 » 1/10,000
APPENDICE 599
Table XIII.
Dil. A 1 cc.
Dil. B 1 cc.
=
0,01 (1 cc. + 99 cc. H20 phys.)
=
0,001 (1 cc. A + 9 cc H20 phys.)
=
=
1 p. 100.
1 p. 1.000.
Dil. C 1 cc. = 0,000025 (1 ce. B +39 H2O phys.) = 1 p. 4Q.OOO.
1.cc.1 C
1,2
-= 0,000027 Oll 1/36.363
0,000030 » 1/33 333
1,3 0.000032 » 1/30,769
1,4 - 0.000035 » 1/28.571
1,5 = 0000037 » 1/26,666
1,6 = 0,000040 » 1/25,000
1,7 - 0,000042 » 1/23,529
1,8
1,9
= 0.000045 » 1/22,222
- 0000047 » 1/21053
2
2,1
= 0.000050 » 1/20.000
= 0,00052 » 1/19.048
2.2 0.0000l.l5 )' 1/18.181
2,3 0,000057 » 1/17,391
2.4
2,5 = 0.000060 » 1/16,666
= 0,000062 » 1/16,000
2.6 0.0000ti5
2.7 0,000067 » " 1/15,384
1/14.814
2,8 '
2,9
= 0,000070 » 1/14,285
0000072 » 1/13.793
3 = 0,000076 » 1/13,333.
Table XIV.
Dil. A 1 cc. = 0,01 (1 cc. + 99 cc. H20 phys.) = 1 p. 100.
Dil. B 1 ce. = 0,001 (1 ce. A + 9 cq. H2O phys.) = 1 p. 1.000.
Dil. C 1 cc. = 0,00002 (1 cc. B + 49 H20 phys.) = 1 p. 50.000.
1 ce. 1 C
1,2
= 0,000022 ou 1/45.454
0,000024 » 1/41466
1.3 0.000026 1/38.431
1,4 = "
0.000028 » 1/35.714
1,5
1.6
- 0.000030 » 1/33.333
0.000032 » 1/31,250
1,7
1,8
- 0.00U034 » 1/29,412
0,000036 » 1/21.317
1,9
2 =
-·0.000038' » 1/26.316
0,0 0040 » 1/25.000
2.1 - 0,000042 » 1/23,809
2,2 ~ <1.000044 » 1/22,818
2.3 = 0.000046 » ]/21 739
2,4 0.000048 » 1/20,833
2.5 = 0000050 1/20,000
2.6 "
= 0,000052 » 1/19,230
2,7 O.OOOU54 » 1/18.518
2,8 0000056 » 1/11.857
2,9 - 0.000058 » 1/17,241
3 = 0,000060 » 1/16,666
II
MATERIEL ET INSTRUMENTATION D'UN LABORATOIRE

DE RECHERCHES MICROBIOLOGIQUES
Pour l'installation materielle d'un laboratoire, on trou-

vera toutes les indications utiles, tant en ce qui concerne Ie
mobilier proprement dit (tables de lave emaillee, eviers,
cuvettes, meubles divers, etc.) qu'en ce qui se rapporte aux
appareils d'optique, ala verrerie et aux produits chimiques,
dans les catalogues des principales maisons franyaises,
notamment les suivantes :
Jouan, 45, rue de la Quintinie, Paris, XV· (installations et
fournitures d'appareils de laboratoires, etuves, autoclaves,
balances de precision, etc.).
Flicotaux et Boutel (fnobilier, tables de lave), 83, rue du
Bac, Paris.
Poulenc freres (produits chimiques et appareils), 92, rue
Vieille-dl]-Temple, Paris. I
Leune (verrerie et appareils, 28 his, rue du Cardinal-
Lemoine.
Lequeux (ctuves, autoclaves et appareils de laboratoire),
64, rue Gay-Lussuc.
E. Cogit (appareils de laboratoire, verrerie, rcactifs
colorants et divers), 36, bouleyard Saint-Michel.
Stiassnie (microscopes), 204, boulevard Raspail.
Npchet (microscopes), 17, rue Saint-Scyerin.
I Societe franr;aise des Inslruments d'optiqlle (microscopes),
50-52, rue de Saint-Quentin, Ie Havre (Seine-Infcrieure).
Nous donnons seulement ci-apres la liste des objets (ins-
truments, verrerie et produits chimiques,1 non compris Ie
mobilier) qu'on peut considerer comme nccessaires ,au
fonctionnement normal d'un laboratoire de recherches
microbiologiques. Nous supposons que ce laboratoire est
pourvu de gaz et d'eau so us pression. S'il en ctait autre-
ment, il faudrait prevoir des appareils de cbauffage au
APPENDIGE 601
petrole, a l'alcool, a l'acetylene ou a I'electricite, et pour

rem placer reau sous pression actionnant les trompes, une
ou plusieurs pompes a vide telles que celIe de Moulin
(construite par Beaudoin, 31, rue Lhomond).
A. APPAREILS D'OPTIQUE Autoclnve Cbamberland, cou-

vercle a chnrniere ; dinm. min.
Microscope complet avec plntine 0,25 ou mieux 0,34.
mobile. condpnsateur, diaphragme- Bain-marie rectangnlaire a denx
iris, revolver a troi s objectifs. trous, a niveau constant, nvec bru-
Oculnires compensnteurs 2,6,12, leur.
18, soit, distance f6cnle en mm. Entonnoir ii filtrations chaudes
90. 30, 15 el 10. avec double paroi de euivre.
Objectif apochromntique a im- Sou met d Enrer (table d'email-
'mersion homogime 1/180u 2 mm. leur) avec chalumenu a gaz.
1,30 ouvert, avec diophragme it Alambic en cuivre rouge pour
fond nair pour servir a I'ultrami- distillation de l' eau (capacite utile
croscope. 6 litres).
Objectifs apochromaliques a sec Etuve ii. tempernture constanle
2, 6;,t R de Stiassnie. avec regulateur de Roux. Haut.
Condensnteur parabolique pour min 1 m., profondeur 0,40.
I'edairage a fond noir \ ultramicros- Pour les pays chauds : "tuve
cope). avec rerrigeran~.
MicromiHre objectif. Bain·marie pour steriliseI' Ie se-
Chambre claire (prisme a dessi- rum, modele de Roux 0 m. 22 x
ner'. Om 20.
Hemalimetre compte-glohules Etuve de Gay-Lussac. avec sup-
de Mnlnssez, construit par Stias- port special pour tubes ii. sertim
snie. coagule avec regulateur.
Lampe de Rnnvier a hec Aner, Tahle choufl'ante a etages, en
I~ntille mobile ou tout autre dis po- cuivre nickel';. avec brl,leur.
sitif analogue (electrique au a gaz) Filtre Chamberland (avec tonne-
pour l'eclairage du microscope let en verre)
(lampe Nernst au lampe Gractzine Filtre a toxines de L. Martin,
avec cylindre de tole) avec une grand modele, avec ballons et bou-
boule condensatriee en verrc et gies de rechange.
support. Fourneaux a gnz forme basse, ii.
Lampes electriques de 100 el manche sans robinet, de 0 m. 20
200 bougie. (de projecteur d'auto- de diametre.
mobiles) et reducteur de poten- Autoclave a vide horizontal,
tiel, 011 transformateur, pour les diam. 0,25 a\'ec regulateur bime-
adapter au courant distribue. tallique et bruleur.
Vitrin .. :i instruments pour etre
B. APPAREILS posee sur un meuble" en cuivr!,
DE LABORATOIRE nickele, pnnneanx et tabletle. en
glace (haut 0 m. 78, larg 0 m. 50,
Trompe metallique a vide, mon. pl·of. 0 m. 35)
tee sur tablette, avec manometre Supports universels en cuivre.
et reservoir pour eviler les retours sur table de fonte, avpc bruleur
d'eau. ciutre sur support i; glissiere
Bees Bunsen avec robinet a gaz Petit centriCugeur ii. main (2
et veilleuse. tuhes)
Bees de Garros a\'ec rnllumeur Petit centrifugeur electrique :i
et support 4 tuhes de 20 mm. X 120 mm. pour
Four Pasteur horizontal (Jouan) courant continu ou alternatif (indi-
pour flamber Ia verrerie. quer Ie voltage ou, It dMaut d'elec-
602 TECHNiQUES GENERALES
tricite, centrifugeur hydraulique a outils de laboratoire, a
.lixer sur
4 tubes. une table.
Balance de Roberval10 kil. avec Appareil i\. hydrogime on it acide
poids. carbonique, modele de l'Institut
Balance-trebuchet de precision Pasteur, en boite munie de poi-
sous cage, sensible ii. 5 milligr .• gnees .
. force 100 gr., avec serie de poids
cuivre Dickel". C. VERRERIE ET PETITS
Grand microtome Minot. auto- APPAREILS
matique. engrenage ii. 1/1000 avec
raso;rs de rechange. Cristallisoirs i\. recou vrement de
Appareil it contention de De- 150 X 220 en verre de Boheme ou
brand ou Mulassez. complet, monte de Krnsna, incassable.
sur table en fer nickel". Verres de montre en verre de
Appareil ii. contention de Latapie Krasna, de 25 mm., 40 mm. et
pour les animaux d'experiences. 60 rom. de diametre.
Bain-marie ii. paraffine pour in- Bocaux' en verre blanc, bouches
clusions, avec regulateur, chauffe it l'emeri de 30, 250 cc. 1 it 2 I'itres.
au gaz. Conserves cylindriques sans cou-
Dessiccateur avec etagare nicke- verele, forme haute de 1, 2 et
lee, dans une cloche ii. douille avec 5litres.
robinet de verre pour Ie vide; Flacons ii. large ouverture .bou-
manometre. ches ii. l'emeri de 15, 30, 90, 125,
Etuve ii. dessiccation ii. air chaud 250, 500 cc. 1 et 2 litres.
en tole, chaufl'age it double paroi, Flacon it huile it immersiou.
2 tablettes, avec regulateur. Flacon ii. baume de Canada avec
Broyeur Latapie, petit modele. couvercle rode, tige de verre.
Bain-marie de Beauvy pour he- Flacons compte-gouttes, bou-
molyse, avec regulateur bi-metal- chons plats en verre blanc at jaune
lique, thermometre et bnlleur. pour rElUctifs, de 50 et 100 cc.
Armoire-glaciere « Frigorifi- Su pport en bois avec 6 conserves
cus » II) de 1 m 3 de capacite. de Borrel pour colorations sur
Bocaux en verre pour souris, ii. lames.
couvercles grillages, de 0 m. 15 X Bailes de Petri pour cultUl'es,
Om 20. diametres {l0.1 100 et 150 mm.
Cages it lapins et ii. cobayes, en Boite's rondes en verre, i\. cou-
fer galvanise, it fond grillage vercle rode de 50 3. 90 mm ..
Cages it singes et ii. cobayes, en Roltes plates de Roux pour cul-
fer galvanise, i't fond grillage. tures eu larges surfaces.
Presse u jus de viande, vis it poi- Cristallisoirs de dimensions va-
gnee, cuvette mobile emaillee (2 riables, diam. 0 m. 05, 0 m. 08,
litres) .. Om 11. Om. 14, Om. 16,Om.19,
Hache-viande broyenr ii. disques o m. 26, 0 m. 29.
interchangeables, avec un jeu de Disques en verre de divers dia-
6 disques (540 mm.) nickele. metres pour couvrir les capsules et
Balance pour peser les petits les vases.
animaux jusqu'a 10 kilogr., serie de Capsules a hec en porcelaine de
poids en cuivre et fonle. Bayeux et en verre, diametres va-
Supports en bois pour 6, 12, 24 riables de 0,025 a 0.125 mm.
tubes ii. essais. Flacons tubules au bas, de 1 litre
Support en bois a plateau, a hau- (pour les moelles rabiques).
teur variable, pour pipe!tes. Barils en verre a robinets de
Support en cui vre it trois an- verre pour antiseptiql!es.
neaux pour entonnoirs, sur plateau Cloche a microscope en verre
en fonte jaune it bouton taille.
Petite meule pour aiguiser les Cuvettes a photographie, horizon-
(1) Chez Geneste-Rerscher, 42, rue du Chemin-Vert, Pari••

APPENDICE 603
tales, en porcelaine et en verre Verres a experiences, Ii pied et II

uni. de dimensions variables. lon- bec de 30, 60, 125, 500 gr., 1 et
gues et rectangulnires. 2 Htres.
Dialyseurs en verre de Grabam, Eprouvettes :l pied 1\ bec, non
montes SUr eristallisoirs, de 120, graduees, de 1 i\ 2 litres.
180 et 250 mm. Eprouvettes ii pied bonchees 1\
Fioles it fond plat jaugees a un l'emeri de ::l50, 500 cc et 1 litre.
trait. bouchee. a remer;, de 50, Eprouvettes a cuvette superieure
100, 250, 500 cc .. et 1 litre. de 1 litre (pour filtrer les toxines).
Pipettes jaugees a deux traits de Flacons a tare (pour trebuchet)
5, 10, 50 et 100 cc. bouches Ii l'emeri, de 15 et 25 cc.
Pipettes graduees it 1{10 ce., de Grenaille de plomb pour flacons
1 ce. II tare.
Pipettes graduees II 1/10 ce., de Mortier d'agate avec pilon de
10 ce. 100 mm. de diametre.
Eprouvettes it pied et bec, gra- . Crayons bleus pour ecrire sur Ie
duees par ec. de 5. 10, 50, 100,250 cc. verre.
Eprouvettes de 500 cc., graduees Couteaux a couper Ie verre.
par 5 ec. Bougies Chamberland avec et
Eprouvettes de 1 litre, graduees sans embase, marques F et L,
par 10 cc. Pissettes it eau froide pour la-
Thermometres it mercure en verre vages, 'de 1 litre.
recuit de - 5 + 60. par degre. Tubes en verre de 1 m. de lon-
de - 5 + 105, par degrtl. gueur pour effller et fabriquer des
Thermometres elalons a echelle pipettes. Diam. ext. 8, to, 12, 16
fraetionnee par 1/10e de degre, en mm (au kilogr.)
verre recuit : Baguettes en verre plein pour
de - 5 + 25 degres. agitateurs, diametres 5, 6, 7, 8 et
de + 25 11. + 50 10 mm. (au kilogr.).
de + 50 it + 75 Perles en verre pour defibriner
de + 75 a + 102 Ie sang (au kilogr.).
de:+ 98 a + 125 Flacons laveurs, sans tubes de
Thermometres pour cobayes et surete.
lupins, gradues de + 28 it + 44°, par Robinets de verre, dits de com-
1{10, a maxima. munication, ii deux et :l trois voies
Thermometres medicaux maxima horizontales
il pression. Tubes it essai pd\lr cultures
Entonnoirs II angle de 60., de par centainesl. diam. :
divers diametres. 0.012 X 0,12.
Ballons a long col, dits malras a 0.016 X 0,16.
sceller, de 260, 500 cc. at 1 litre. 0,022 X 0,22.
Ballons a bouillon, a fond plat. Tubes pour cultures sur pommes
en verre vert, col coupe droit sans da terre, etrangles de 0,022 X 0,22.
hague ni bee, de 250, 500, 750 cc., Tubes courts a fond plat (pour
1 et 2 litres. les insectes) bouches au liege de
Flacons en verre mince. sterili- 5. 8, 10. 12 et 14 mm. de diam.
sables a l'autoclave, pour toxines. Capuchons de caoutchouc pour
Caoaeite 125, 250, 500 cc. et.1Iilre. tubes de culture de 12,16,20 mm.,
Vases-conserves de 1 litre et 2 feuille anglaise rouge.
litres, sterilisables a l'autoclave, en Ballons il filtrer avec petites
verre vert. pour recueillir Ie sang bougies Chamberland montees au
des saignees. moyen d'une hague en caoutchouc;
Fioles coniques Ii tubulure late- entonnoir en' vene souffle entrant
rale pour filtrer Ii la trompe, de dans la bougie. Bagues et bongies
250 ee .. 500 ee. et 1 litre. de rechange (marque F)
Mortiers en porcelaine et en verre Fioles coniques d'Erlenmeyer en
avec pilons, forme basse, de 25b, verre mince, de 50. 75, 100, 250,
500 ec. et lHtre. 500 gr., 1 at 2 Htres.
Fioles d'Erlenmeyer en verre de cotes, pour chambres humides.
Boheme ou en verre incassahle de Moules en cuivre nickele pour
Krasna, de 90 ce., 125, 250 et 500 ec. couler la parafHne et monter les
Petites bougies Chamberland pieces it inclure, grand modele.
sans embase marque Ll it L". Crochet en cuivre nickele it
Trousse aleoometrique it trois manche, pour luter it Ia paralline.
alcoometres de a it 35, de 35 a 70, Spatules en maillecbort, montees
de 70 it 1000 • sur mllnche d'ebene, de 0,020 de
Compte·gouttes de Duclaux. largeur.
Densiru<itre universel pour li- Pierre d' Arkansas de 125 mm.
qui des plus 10llrds et plus legers de longueur pour aiguiser les ins-
que l'eau. truments.
Fils et petites spatules de platine CuiI' a rasoirs it 4 faces de Zim-
cl1lmanches sUr ebonite(de Binot), mer en etui.
epaisseur 4/50, 6/10 et 8/10 (chez Ciseaux it dissection, pointus,
Stiassnie). . droits et courbes it tenon.
Emporte-piece pour decouper les Ciseaux it autopsie, droits et
pOnlmcs de tene. courbes it tenon.
Casseroles it couvercle et a man- Pin,ces a dissection, nickelees.
che, fond plat. en tole emaillee de Pinces droites et courbees, poin-
2 it 4 litres. tues. pour dissections fines.
Marmites en tole eillaillee avec Pinces hemostlltiques de Pean.
poignee et couvercle de 2 et 4 litres. Pinces it. arteres, droites et Couroa
Cuillere ii. manche. en tole email- bes.
lee, pour decanter les bouillons. Pelits trocarts adapt abies aux
V.l8es semi coniques en tole seringues de Roux-Collin pour
emaillee. avec couvercle et anse petits animaux.
fond plat. pour les bouillons, de SeringiIes sterilisables de Roux-
1 lilre 1/2 et 3litres. Collin it pistons de caoutchouc, de
Pince it mors pints. fenetres 1, '2, 5. 10 et 20 cc. Pistons et tubes
courles et longues. POUI' saisir les de rechllnge.
petits animaux. Aiguilles d'acier de divers cali-
Scalpels 'ii. mnnche de metal, pe- bres pour ces seringues.
tits. moyens et grands. Pince it fixer la t<lte des lapins.
Aiguilles ii. dissocier, manche de Cisaille courbe pour couper les
metlll, droites et en fer de lance. vertebres.
Aiguilles de Reverdin pour su- Trepan ,it lapins avec couronne
lures, droites et courbes. de rechange.
Pinces et agrafe& de Michel pour Crochet pour rondelles d'os.
sutures. Bltipharostat ecarteur.
Sondes canneIees en acier nickele Pince universelle. plate et cou-
de 0,12. pante.
LanceHes it manche metallique Plaques de liege pour dissection
de Chambon. (260 x 190 et 270 x 180 x 4 mm.).
Curettes tranchantes, manche Pulverisateur de Ricbardson
metallique. avec plusienrs poires en caoutchouc
Trocarts it saignee, de Roux et de rechange
Nocllrd. Tub"s en caoutchouc, feuille an-
LlImes porte-objets, demi-glace glaise rouge, de 2, 4, 6, 8, 10 et
blanche, bords rodes et polis de . 12 mm. (par kilogr.).
0,076 X a 026 (par cent). Tubes de caoutchouc ii. vide
Lames de 76 x 26, epaisseur ca- avec 3 toiles interposees, di:imetres
libree pour ultramicroscopie (par intcrieurs 10, 14 et 18 mm. Ipar
cent). metre).
Lnmelles couvre-objets en verre Valets en paille de 60 ii. 100 mm.
mince. de 13/100 de mm. carres, de diametre interieur
de 14 mm. et de 22 mm. (par cent) Bouchons en caoutchouc para
Anneaux de verre rodes des deux rouge, pleins, n o'1 a 16 (par unite).
APPENDICE 605
A 1 trou, nO' 2 it 15 ; UNITES.

A 2 trous, nO. 3 a 16 ; Acetate de cuivre ammo-
A 3 trous, nO' 3 :l. 16. niacal , . . . hgr.
Bouchons de liege, coniques, de » neutre de plomb
dimensiol+s assorties (par cent). pur. . . »
Amiante en meches demi-Iongues. tribasique de
Amiante cardee pour flltrer. plomb crist. »
Toile d'amiante pour flltrer. » de potassiu_m pur
Bolte en cuine nickele, rectan- see I • •
gulaire, pour steriliser les instru- » de sodium pur

crist. . l)
ments par ebullition, long. 20 cent.,
largo 1:.1 a 14, haut. 12 cent avec » d'urane chim. pur. »
. grille interieure mobile et cou- » de zinc chim. pur .
verele. Acetone pure . kg...
Plateaux a contention rectan- Acide acetique crist. »
gulaire perces de trous tout autour, azotique pur a 40' B. »
pour fixer .les :mimaux, en cuivre » horique crist.. .
rouge brase, de 0,65 X 0,32 et de chlorhydrique pur, .
0,50 X 0,25. » chlorhydrique ord. par lourie.
Plnteau en chene pour fixer les chromique pur crist. bgr.
lapins a trepaner (perce de trous ,. citrique chim. pur
Paniers en carton perces de trous crist.. . gr.
forme cylindrique. pour tubes de » gallique crist. .
culture. )J formique pur crist.
Paniers en toile metallique gal- 25 0 B . . . .
vanisee, pour porter les tubes de » lactique pur. . .
culture it l'autoclaye. j) nitrique pur 45 0 B. kgr.
Paniers en fer-blanc avec cou- » nitrique ord. . . par tourie.
verele a poignee, anse, fond en » osmique par tubes de
toile meta IIi que, pour la sterilisa- 1 gr. . gr.
tion it l'autoclave (suivant diarnetre » oxalique pur. !Igl o
•
inll\rieur de l'autoclavel. phenique pur nei-

Spatqles en acier flexibles, de geux ..
75 a 100 et 150 mm. picrique \,ur.. ' .
Papier a filtrer hlanc (par rames). phosphOrIque orlho
Papier a filtrer gris (par rames). pur crist. »
Papier Chardin pour filtrer la » phosphllrique anhy-
gelose.(par Jiasses); . dre .•.
Pap,er a fillrer phsse de Laurent, » pyrogaJlique,.. »
renforce (diam. 15, 19, 25, 33, 40 » salicylique pur crist. »
et 50 em ) par cent. . .. » sulfurique pur 66 0 • kgr.
Perce-bouchons en cmvre, serle » sulfurique ord. 66 , par lourie.
0
de 6 grosseurs. sulfanilique. • gr.

Pinces en bois pour capsules. » sulfoindigotique pur. »
Pinces en bois pour matras. » succinique pu... hgr.
Pinces a re.sort de Mohr. » tartrique crist. pur.
» thymique (thymol). ),
D. --:" PRODUITS CHIMIQUES Agltr-agar (gelose) . kgr.
Albumine d'reuford. hgr .
UNITES.
Alcool absolu. litre.
Acetate d'ammoniaque pur » recti6c 96 0 • • »
crist. . . bgr. » amylique pur. »
Acetate d'aniline. » » methylique pur. »
» d'argent crist. »
)} de»aryte pur crist. » Aldehyde forrnique (for.
» de chaux pur crist. » mol) ..
» neutre de cuivre Alun de potasse ord. kgr.
pur crist. • » » d'ammoniaque put'. hgr.
606 TECHNIQUES GI1NI$RALES
UNITES. UNITES.
Aniline pure, huile d'ani- Cell ulqse d'alfa pour fil-
line. • hgr. tration. • • . . . • kgr.
Arseniate de soude pur. Charbon animal pulverise
» de potasse pur. pur. • hgr.
Alun de fer pur crist. II Charbon animal lave en
Amidon pulver;se. . . . » grains. . . '" kgI'.
Ammoniaque pure 28 0 B. » Charbon de Berzelius en
I> ord. 220 B. tourie. batons pour couper Ie
Arsenite de soude .. hgr. verre. . • • . . . piece.
Asparagine. gr. Chaux chim. pure.. . . hgr.
Azotate d'ammoniaque pur hgr. Chaux du marbre exempte
»' d'argent crist pur .. » de C l . . . kgI'.
'1> de' bismuth (sons). » Chloral hydrate crist. hgr.
» decuivre ammonia- Chlorate de potasse pur
cal.. » crist.. • . • :.
l> de potasse pur. Chlorhydrate de cocaine. gr.
l> de soude pur.• kgr. )) de morphine.
» de zinc pur. hgr. de quinine.. »
Azotite de potasse pur. » » de strych-
I> de sou de pur. . » nine. »
Baryte caustique pure. »
Monochlorhydrine de Ia
glycerine. . . . . . hgr.
l) hydra tee crist. • k~r.
Benzine pure . . . • htre. Chloroforme anesthesique
» ord. rectifiee 0,850. » pur. . kgr.
Chlorura de calcium pur
Bitume de Judee. hgr. desseche. • . • . l)
Blanc de Meudon. kgI'. Tetrachlorure de carbone. hgr.
Bichromate de p'otasse pur. »
Chlorure de chaux sec. kgr.
Bois de Panama. » de cuivre am-
Borate de soude pur. » mon. hgr.
Brome pur . • '• . . hgr. ferrique hydrate
Bromure de potassium. » desseche.. . »
» de sodium pur. » » de magnesium
Bromhydrate de quinine.
Brucine pure.
gr. I pur sec. '. •
))
» mercureux crIst.
Cafeine. . » (calomel).. . »
Camphre raffine.. . kgI'. (Bi) mercurique
Caoutchouc en dissolution. II ord. crist.. • kgr.
Carbonate d'ammoniaque » de. ~ethyle pu-
pur crist. • " • hgr. nfle.. • • • tubes.
Carbonate de chaux preci- d'orpuretneutre gr.
pite pUt;. kgr. (Tetra) de pla-
CarboDate de Ii thine .• hgr. tine " . »
» de magnesie » de potassium
chim pur. )) pur kgI'.
Carbonate de plomb chim. Chlorure de zinc liquide. kgI'.
pur. . . . • . . . kgr. Trichlorure d'iode. . • bgr.
Carbonate de potasse neu- Cholesterine.. . . • . gr.
tre pur .. » Chromate de potasse pur
Bicarbonate de potasse crist . hgr,
chim pur. » Cire blanche animale. . kgr.
Carbonate de soude neutre Cire Golaz (mastic de lllbo·
pur. » ratoire).. • . • . • batons.
Bicarbonate de soude pur. )) Citrate de soude pur. hgr.
Carbonate' de zinc ·pur. hgr. » de mag,,,\sie. ))
Carmin ammoniacal. gr. Collodion normal (non

Caseine pure. ricine). litre.
APPEND ICE 607
UNITES. UNrr~s.
Coton azotique pour collo- GlycocoJle. . • . gr.
dion . . . . hgr. Gomme arabique en mor-
Coton carde extra kgI'. ceaux, veritable • hgr.
» hydrophile. » Gomme copal ordinaire. »
de verre (pour filtra- Gomme laque blonde. »
lion). hgr. Goudron de Norvege.. • kgr.
Craie lavee ..•• kgI'. Hemateine chim. pure du
» .en batons blanche. boite. campeche. . . . . gr.
» couleur: . . . • » Huile de pieds de breuf. • kgI'.
Creme de tartre (bitartrate Huile d'amandes douces
de potasse) pure. hgr. vraic ..... kgr.
Creme de tartre en pail- Huile de cedre i\ 'immer-
lette •. » sion. flacons.
Creosote de hetre. » Huile de lin. kgr.
Cresylol (cresol) '. kgr. de paraffine. »
Cuivre en fil . » de vaseline. »
» en limailJe » Hydroquinone suhlimee. gr.
Curare. . • " gr. Hydroquinone photogr.
Cyal)urede potassium pur. hgr. ord. ....• hgr.
» de mercure. . . » Hydrosulnte de soude
'Dextrine pure precipitee kgr. liquide. . .•. J)
Diamidoazobpnzol (phe- Hypobromite de soude. • »

nylenediamine!... . • gr. Hypochlorite de chaux
Diastase pure (maltase).. » pur.. kgI'.
Diamidophenol Ichlorhy- Hypochlorite de ch a u x
drate j. • • hgr. ord. • . »
Diphenylamiue pure crist. Hypochlorite de soude
Eau oxygenee a 12 vol. kgI'. pur liquide
» de Javel concentree. ,. Hypophosphite de soude. "
hgr.
Emeri en poudre nOS fins. bgr. Hyposulfite de soude pur. »
Emetique (tartrate d'anti- » de soude photo kgr.
moine et de potasse).. » Indigotine pure sublimee. gr.
Encre i\ ecrire sur Ie verre. flacons. Inuline de Dragendorfl', • »
Essence de cajeput verte. hgr. lode bisublime. • hgr.
» de cedre. » lodoforme crist »
de girofle lodure mercurique crist. »
» de terebenlhine )) de potassium pur. ))
pure .. kgr. de sodium crist. .
Ether sulrurique it 65· B litre. 1) de zinc pur. •
Fecule de pommes de terre. kgr. ChIoro iodure de zinc. »
Ferricyanure de potas- Kaolin lave. . . . . . kgI'.
sium pur. hgr. Lactate d ammoniaque pur hgr.
Ferrocyanure de potas- » de chaux. . • . »
sium pur. • . . . . ») de zinc. J)
Fluorure de sodium pur. » Lactose (sucre de lait). »

Furfurol pur. gr. Lessi ve de potasse pure
GaIaeol pur crist. hgr. 45· B. . . .. kgI'.
Gaiac I resine len morceaux. » Lessive de soude pure
Gelatine PW extra blanche 45 B..
(ou Coignet). kgr. Levulose crist. hgr.
Glu marine . . hgr. Litharge en paillettes. kgr.
Glucose anhydre chim. Lycopode • hgr.
pur. kgr. Magnesie calcinee anhydre.
Glucose anhydre purifie. kgI'. Magnesium en poudre. .
Gluten-caseine. gr Malto-peptone. kgr.
Glycerine i\ 30 0 B. • • kgI'. Mallose purine. hgr.
Glycerine ord. a 28 0 B. Manganate de soude. »
UNITES .. 1lNITES.
Mannite pure . . , hgr. Persulfate de soude. hgr.
Marbre blanc concasse. kgr. Phloroglucine. . . . . gr.
Menthol pur. . .•. hgr. Phosphate d ammoniaque
Mercure (par potiche de neutre pur bibasique. hgr.
34 k. 500). . kgI'. Phosphate de chaux neutre
Metaphenylene diamine bibaslque .. hgr.
pure.. . gr. Phosphate tribasique de
Methylamine (tri) pure chaux pur . • . . . kgr.
anhydre. • Phosphate neutre de po-
Methyl-orange (Helian- tasse (bibusique). . . hgr.
thine). . » Phosphate neutre de soude
Minium pur . hgr. (bibasique) . »
Monobutyrine. . gr. Hypophosphite de soude. »
Naphtylamine B. . . Phenylhydrazine. gr.
Naphtaline en boules . l<gr. Phloroglucine »
Naphtoquinone B.. . , gr. Phlaleine du phenol. . hgr.
Nitroprussiate de sodium. » Picrocarminate d'ammo-
Nutrose (caseine sodique). hgr. niaque sec pur. gr.
NucIeine pure. gr. Platre it modeler. kgr.
Oleine pure. . . hgr. Polasse caustique ill'alcool. »
Racine d'orcanette pulv. » Potasse caustique en pas-
Orceine de rorseille. . . gr. tille. . . . • . »
Oxalate d'ammoniaque
neutre pur. . " hgr. Pnisure liquide .. flacon.
Oxalate de chaux pur. . Pyridine. . . • hgr.
Oxalate d~ potassium pur Resine de gaiac. »
Hicine . . . . . gr.
neutre. . . '" Resine Dammar. kgr.
Oxalate de sodium neutre
pur. . • •. Sable fin de Rontninebleau. »
Oxychlorure de zinc. . . Saccharose. . • . . kgr.
Oxyde de manganese pur Salicylate de soude crist. hgl·.
(hi). . . '" » Savon amygdalin. . . . l<gr.
Oxyde mercurique (bi). . » Sel de Seiguette (tartrate de
» mercureux (proto). » potass6 et d~ soude). hgr.
)) de zinc pur. » Silicate de potasse pur
Pancreatine ubsolue pure. gr. soluble.. . . . . • »
Papaine.. ., » Silicate de polasse 36 0 B. kgI'.
Papier dialyseur. . . feuille. Silicate de soude pur so
» de soie (Joseph). . rame. luble hgr.
» Pupier emeri (nos Silicate de soude liquide
varies). . . reuille. 45 B. . .
0
. . ' }<gr.
Paraffine molle 47/38 . kgr. Soude cans Ii que it I' alcool »
» molle 40/42.. . » Soude caustique en pas-
Paraformaldehyde (trioxy- tilles »
methylene). • . • • » Soufre en canons. »
Parchemin animal . kgr. SOLlfre en fleur, lave. kgr.
Pepsine pure granulee Stearine pure. . . , gr.
titre 50 . . .., bgr. Strychnine cristallisee. • »
Peptone Becbe spopgieuse. kgr. Succinate d'ammoniaque
» djl Chapoteaut. fl. ou kgr. crist . . hgr.
» ehassaing.. bgr. Succinimide. gr.
Permanganate de chaux Sucre candi blanc. kgr.
crist. . . . » Sulfate d'alumine pur. »
Permanganate de potasse Sulfate neutre d'ammo-'
pur• . . , ... » niaque pur. »
Per.oxyde de so.dium.. , » Sulfate de baryle preci pite
Persulfate. d'ammoniaque. pur.
APPEND1CE 609
UNITES. UNITES.
Sulfate de chnU'X precipite Tournesol pur soluhle. hgr.
pur• . . . • . . . hgr. Tricresol. . . • . • . kgr.
Sulfate de cuivre chim.pur. kgr. Trimethylamine Ilnhydre. gr.
Sulfate de cuivr~ ord. » Trypsine pancreatiquc. • »
Sulfate de cuivre ammo· Tyrosine . .
niacal. » Uree. . . hgr.
Sulfate ferrique pur. Il
Urotropine. gr.
Sulfate ferreux pur. » Vanilline. • . . »
Sulfate ferreux ord. » Vaseline blanche. • '. kgr.
Sulfate de magnesie neutre Xylene pur' (xylol). »
pur. » Zinc en poudre. . hgr.
Sulfate de magnesie pur. » Papiers reactifs a I'acetate
Sulfate mercurique. hgr. de plomb . • cahier.
Sulfate de morphine. gr. Papiers reactifs tournesol
Sulfate acide de potasse rouge. »
(bi). kgr. Papiers reactifs tournesol
bleu.. . II
Per sulfate de potassium .. hgr. Papiers l'eaclifs tournesol
Sulfate neutre de quinine. gr. neutre. »
Sulfate acide de sou de pur Antiformine. . . • litre.
crist. kgr. Nutrose de Heyden. . hgr.
Sulfate nel1tre de soude Bleu de methylene medi-
pur. » cinal. . gr.
Sulfate de· zinc pur. • hgr.
Sulfhydrate d'ammonia- E. - PRODUITS OOLORANTS
que pur. . . ., »
Sulfhydrate de soude du Bleu de methylene purifie
commerce (sulfure). . kgr. marque R A L. • gr.
Bisulfite de chaux sature. » Bleu Cresyl brillant. »
Bisulfite de potasse neutre Bleu de toluidine. . . .
pur . . hgr. Chinablan (BleudeChine).
Bisulfite de soude pur liq kgI'. Brun vesuvine. . . • . .
Sulfocyanure de potassium Carmin alune sec.. • •
pur . . . . • . . . bgr. Chlorhydrate d'aniline (en
Sulfo·indigotate de soude. paillettes). • . . • . hgr.
Sulfure jaune d'arsenic Chrysoidine. . gr.
(Orpiment). • . . • kgI'. Eosine extra. • •
Sulfure de carbone pur. II Fuchsine (Magenta). • . "
hgr.
Polysulfure de sodium. . » )) aeideouRubineS. gr.
Sulfure de zinc precipite Encre de Burri (Pelikan-
pur . . . . » tusche) marque. R A L. flacon.
Talc pulverise. II Melange panchrome de
Tanin it l'oither exlra. . » Pappenheim. .
Tartrate acide d'ammo- Orange G. '" gr.
niaque. . • . . . • hgr. Orceine aeide (Unnal. II
Tartrate aeide de potasse Picrocarmin lithine sec. »
(bi). . . . . . . . hgr. . Pyronine. .
Tartrate acide de soude(bi). » Poneeau P. R. "
gr.
Taurocholate de soude. • gr. Rouge Congo. J)
Teinture de tourn("sol bleue Rouge neutre extra pur. hgr.
pure (de Kahlbauml. . kgI'. Slifranine pure.. • . gr.
Tetrachlorure de carbone. Soudan III. . . . . .
Thymol crist. . . . » Thionine pure (violet de
Toluidine pure (ortho). hgr. Lauth). . . hgr.
Toluene pur . . kgr. Tropeoline 00. gr.
Touraillons sees de bras- Trypanrot. hgr.
serie .. » Vert d'jode.
"
MfCROBfOLOGIF. 39
GIO TECHNIQUES GENERALES
Vert lumiere (Lichtgriin). bgr. Bleu polychrome de Unna flacon

Vert malachite pur crist. Colorant de Giemsa, glyce·
(Chlo rzi'l1.kdoppelsalz rine R A L • " l>
chim. pur de H6chst). Baume deCanaddau xylol. tubes.
Vert de methyle crist. 00. Paradimethyhmino·
Violet dahlia. . . benza Idehyde (pour
» de. gentiane •. » diazo-reactions). • . . hgr.
» de ·methyle 6 B. gr. Hematoxyline de ·Heiden-
I{rystall-violet. . • . . hgr. hain " ...
Triacide d'Ehrlich (Grii-
bier) •. flacon.
TABLE ALPHABETIQUE
Abortine, 357.
Acide osmique, Hf2.
- picrique. 92.
Actinomycose, 465.
Action des microbes sur les hydrates de carbone, 132.
matieres azolees. 131.
Agalaxie contagieuse de la brebis et de la chevre, 493.
Air (Analyse microbioIogique), 230.
Ajustemenl de la reaction d'un milieu, 34.
Albumine (Dosage), 166.
Albumoses (Caracteres), 163.
- (Reaction), 163.
Alcalinisation des milieux, 32.
(ProeM';s d' au papier de tournesol. 32.
tProcedes d') it In phimolphtalCine, 32.
Alcalinite de l'eau (Verification), 600.
- (Tables de dilution), 593.
Aldehyde formique (Desinfection des locaux par), 58;;.
Alexine (Titrage), 246.
- (Dose minima) 247.
Alliages fusibles pour tests de sterilisation, 169.
Amibe dysenterique, 400.
. - - (Coloration), 400.
(Examen a I'etat frais), 403
(Examen apr,;s coloration), 400.
Amidon soluble 215.
Ammoniaque, 589
Amylase, 508.
Anaerobies, 27.
- (Culture, methode de Veillon), 27.
Analyse cytologique du liquide cephalo-rachidien, 320.
- microbiologique du sallg. 31'6.
du liquide eephalo-rachidien, 318.
du lait. 324.
du sol 231.
.de l'air, 230.
de l'eau, 218.
des serositM.. 323.
des urines, 326.
des selles. 327.
Anatoxine diphterique. 430.
612 TABLE ALPHABET/QUE
Animaux (Anesthesie), 181.

(Contention), 180.
(Epilation) 181.
(Experimentation),l73.
Anticorps (Titrage), 249.
- (Technique de Calmette et Massol), 249.
AntiCormine, 435, 584.
Antigene it l'oouf, de Besredka, 260.
- methylique pe poguet et Negre, 261.
- r.eptone B. de Calmetle et Massol. 260.
(pouvoir anticomplementaire), 247.
syphilitique, 253.
(l'itragel, 247.
tubereuleux, 260.
- (Valeur), 248.
Antiprottiolytique (Mesure du pouvoir), 578.
Antiseptiques. 583.
Antitoxines (Titrage par la floculation),561.
- (Tables de dilution pour Ie titrage des), 593.
Appareils de laboratoire, 601.
- d'optique, 601.
de Latapie, contention, 180.
de securite de Legroux, 22.
it filtration. de Legroux, 20.
it deshydratation continue dans III teahniqu6 histologiqu" 126.
a vide, it chute d'eau, 21.
Artichaut. 376 ..
Autoclave de Chamberland. 18.
Autolyse nseptique (Conradi), 396.
Autopsies, 195
Auto-vaccins, 536.
Avortement epizootique, 356.
Azote (A Igues fixatrices de 1'), 235.
- (Microbes fixateurs de 1'), 234.
- ammoniacal de I eau, 213.
Azotobacter. 235.
Azul' II de Giemsa. 86.
B
Bacille d'Ael'trycke, 385.
- abortus. 356
aeroroetjdus, 474.
anthracoides, 468.
asthenogenes, 478.
bifermentans, 471.
bifidus, 478.
de Bordet (diphterie aviaire), 364.
botniinn.r, 477,
Chauvoei, 469.
de Ia coqueluche (Bordet et Gll1g0ri), 360.
diphterique (Voir Diphterie).
de Ducrey, 361.
dysenterique (Caractckes differentiels), 395.
- (Toxine).396.
- atypique de Mot-gan, 39~.
- - de Schmitz, 39~.
de d'Htirelle, 399.
TABLE -1LPIIABETIQUE 613
Bacille (Enterite chronique hypertrophiante du beeu!, deJohne). 452.

- foecalis alcaligenes, 391.
fallax. 474
de ·Flexner, 393.
de Friedlander, 363.
de Frisch, 364.
fusiformis. 477.
gallinnrumj 390.
de Gartner, 386.
histolytieuB, 473.
de Hansen, 450.
de Hiss-hussel, 393.
d'Hoffmann 429,
de la lepre des rats de Sltf4rtsRg, 462.
de la necrose. 475.
de LoelJler, 421.
(Corpuscules metnchrornntiques), 424.
(Methode de Neisser). 424.
(Methode. de Faliere) , 425.
(Methode de Ljubinsky), 425.
(Action sur les suc.res), 428.
(Milleu de Thiel). 426.
(Milieu de Rothe), 426.
- (Milieu de Dtigalski et Dierast), 426.
- (Milieu de Costa, Troisier et DaulJergne), 427.
de Mornx-Axenreld, 363.
de Morgan. 399.
de la morve. 453.
de Nedden. 363.
de Noorseele. 385.
redematiens, 472.
perfringens, 470.
de In peste. 470.
de Pfeiffer, 360.
de Preis%-Nocard. 450.
pseudo-redematis maligni. 468.
pseudo-tuberculosis rodentium de Pfeiffer, 449.
pseudo·tuberculosis lIlurium de J{utsch'r, 449.
de la psittncose, 385.
pullorum, 390.
putrificus. 471.
pyocyanique. 358.
du rhinosclerome. 364.
du rouget du pore. 333.
sanguinl1rium. 390.
de Schottmiiller.385.
de Shiga. 393.
de Schmitx, 399.
sporogenes. 473.
de Strong. 393.
tertius. 472_
tetanique, 475.
de Thomassen. 385.
tuberculeux. 431.
(Coloration). 431.
(Concentration dans les crachats). 437.
(Culture des bncilles des crachats). 441.
614 TABLE ALPHABBTIQUE
Bacille tuberculeux (Homogeneisation des cracbats ou produits lubercu-

leux) 434.
(Homogeneisation du sang), 437.
(Methode de Petrof), 439.
(Milieux de culture}, 437.
(Milieux mineraux), 440.
(l\lodes d'inoculation ou d'infection experimentale des
petits animaux de laboratoire), 443.
(Procede de l"antiformine), 435.
(Procede de Bezan90n et Philibert), 435.
(Procede de Ronchese), 435.
(Procede de Papacostas et Gate), 436.
(Reactions tuberculiniques diagnostiques), 445.
(Reaction de sedimentation des globules rouges), ~47.
(Recherche dans Ie saug), 317.
(Tuberculine), 441.
typhique, 366.
. (Recherche dans Ie sang), 366.
I - - l'eau et les dejections), 367.
(Milieu~ d'isolement), 368.
(Milieux diflerentiels), 374.
(Caracteres differentiels), 377.
(Recherche de l'indol), 378.
(Diagnostic par les reactions d'agglutination), 380.
typhi lIIurium, 385.
dc Weeks, 362 .•
Bactericide (Serum), 241.
Bact~ridie charhonneuse (Voir charbon).
Bacteriolyse, 241.
Bacteriophage, 496.
(Isolement), 496.
(Numeration), 497.
(Exaltation de l'activite). 498.
Bacterwm coli, 387
- (Caracteres differentiels). 3&8.
Bacterium coli (Recherche dans l'urine), 326\
Bacterium pullorum. 390.
sanguinarium au gal/inarulll, 390.
Bichlorure de mercure. 590
Biuret (Reaction du). 165.
Blepharo-conjonctivite infectieuse, 363.
Bleu (Benzo). briIlant, 90.
horate de Kolle. 87.
Borrel,86
de bromothymol, 51.
d'indophenol, 91.
de Loefller, 85.
de methylene, 85, 111.
phenique de Kuhne. 86.
polychrome de Unna, 87, 104
de Prusse gelatine, 209.
de thymol. 51.
de toluidine 88.
Bouchons I Conservation). 156.
Bougies filtrantes (Chamberland, Berkefeld) , 19, 20.
- - (Regeneration),23.
- - (Sterilisation), 23.
Bouillon it l'extrait de viande de Liebig, 54.
TABLE ALPHABETIQUE 615
Bouillon glucose carbonate. 375.
glycerine. 438.
lactose carbonate. 375.
de legumes de' A. Bel'lltelot, M.
Martin, 56.
reuf de Besredka-Jupille. 63.
pomme de terre, 43~.
serum de Marmorek. 335.
de viande. 52.
Bronchomycoses, 461.
Broyeur de Lalapie. 253.
c
Cadavres (Destructiou). 196.
Caoutchouc (Conservation), 156.
Capsules (Coloration), 108.
_. (Exame~ sans coloration), 108.
Carboxylases bacteriennes, 581.
Carmin, 97
de Orllt, 97.
- gelatine, 209.
Cellule de Nageotle, 320.
Champignons paraSites, 459.
- - (Conservation), 31.
(Devcloppement).462.
(EX!lmen des cultures). 461.
IInoculation), 463.
(Milieux de culture), 461.
"Chancre mou, 361.
Charbon bacteridien, 329.
(Colol'ation des coupes d'organes), 331.
(Reaction de precipitation d'Ascoll),331.
(Recherche dans les produits organiques), 330.
- symptomatique, 469.
-Chloralose. 182.
Chlore (Liquide comprime). 228.
Ch1oroforme (Paraffine), 155.
Chloro-iodure de zinc. 162.
Chlorure de chaux, 196, 583
Cholera. 405.
Cholera des pouIes, 332.
Clavelee (Coloration et fixation),120.
Coagulation du sang, 295,
Coagulation du sang (Mesure de la vitesse de), pm: la methode de
Wright, 296.
Cobayes (Elevages), 173.
(Maladies), 178.
(Poids moyen). 197.
Cobolt. 157
Coccobacille pesteux, 416.
Collage des coupes, 125.
Collodion (Sacs). t 99.
(Preparation), 200.
(Sacs de), de Michel, 201. .
- (Dimitrification des sacs de), 201.
Colonles (Purification), 28,
616 TABLE ALPHABllTIQUE
Colorants acides. 91.
hasiques, 84.
composes. 92.
des graisses. 90.
directs. 90.
de Giemsa, 94.
de Leishman. 93.
de May· Grunwald, 93.
non anilines, 96.
de Wright. 94.
Coloration an bIen de Unna. 104.
des coupes par hemateine eosine, 103.
des coupes de tumeurs cancereuses, 119.
des coupes d·intestin. 119.
des capsules, 108. Methode de Borin, 109.
- - de Friedlander, 108.
de Gins. 108.
de Johne. 108.
de Klett. la8.
des cils. Methode d'Edgar Lnncernux, 106.
- de Lamer. 105.
de Pitfield, 106.
de Van Ermengem. 105.
de Kiyoshi Yokota, 1il7.
des champignons. 112.
difterentielle. 100.
simple (M Nicolle), 99.
postvitale. 112.
des protozonires, 118.
des spores. 104.
- (methode de Moller). 104.
au safran. 104.
du sang, lUi.
vitale. 110.
vitale du sang, 117.
des virus filtrants. 110.
Colorimetriques (Echelles), 44-46.
Comparateur. 49.
Concentration (Determination de la) en ions H, 34.
(Etalons de) ionique, 44.
- ionique des solutions, 33.
Condensateur Abbe, 10 ..
Conglutination globulaire, 260.
Conjonctivite contagieuse. 362.
Conservation des cadavres. 205.
des champignons. 30.
des cultures mortes, 30 .
.des cultures vivantes, 28.
Procede de Legroux, 29.
- de Thaysen. 29.
de Truche. 29.
- d'Ungermann, 29.
des levures. 30.
des pieces anatomiques, 204.
des sonches microbiennes. 28.
des tubes et houchons de caoutchouc, 156.
Contention des animaux, 180.
Coqueluche. 360.
Corps de Negri,483.
TABLE ALPHABE-TIQUB 617
Corynebacterium c~tis commune, 423.
- diphterire,.421.
Couleur. d'aniline, 84.
- (Revivification des), 208,
Crachats (Prelevements), S14.
- (Homogeneisation), 434.
Cremation (Four), 196.
Cresylol sodique, 583.
Cryptococcus farciminosus. 467.
Cultures (Conservation), 28.
(Expedition), 31.
(Fixation), 30.
dans les milieux usuels, 130.
in "ivo, 199.
en milieu ,n ecoulement constant, 74.
Cuti-reaction Ii. Ia tuberculine, 446.
Cytodiagnostic, 291.
Decalcification, 129.
Degre hydrotimetrique permanent. 217.
- - (Determination), 217.
total. 217.
Deshydratation des pieces, 124.
Desinfectants, 583.
Desinfection, 583.
des locaux, 586.
- des puits, 228.
Destruction des mouches, 156.
- des moustiques, 156.
Determination des especes microbiennes, 130.
(Tableau type pour la) des microbes, 138.
Dextrinase. 568.
Dialy~eurs (Disques), .200.
- (Sacs),200.
Diastases (Determination et mesure de l'activite des principales). 568.
hydrolysantes. 568.
Diazo-reaction d Ehrlicb. 166.
Dibromocresolphtaleine sulfonee, 43.
Dihrornothymolphtaleine sulfonce, 43.
Digestion artificielle, 129.
Dilution (Tables de) de l'alcool, 172.
Diphterie, 421.
- (Milieux d'isolement et d'enrichissement), 422.
(Types de bacilles diphteriques), 423.
(Faux diphteriques. Bacille d'Hoflmann),423.
(Recherche des porteurs de germes), 426.
(Toxine diphterique), 428.
- (Immunite antidiphtet-ique), 429.
- (Anatoxine diphterique), 430.
Diphterie des paules, 364.
Diplobacille liquefiant de Petit, 363.
- de Morax-Axenfeld, 363.
Dissociation (Constante de), 33. I
Dissolvants des graisses. eires el resil)es, 161.
Dysenterie amibienne, 400.
- baeillaire, 393.
618 TABLE ALPHABETIQUE
Dysenterie bacillaire (Toxine dysenterique), 396.
(Agglutination), 397
(Vaccination et serotherapie), 397.
(Diagnostic bacteriologique • 398.
(Identification des germes), 398.
(Sero-diaguosticl, 398.
Eau (Aualyse), 211.

- (Azote ammoniacal de 1'), 213.
- chloroformee, 181
(Evaluation de la matiere organique),212.
(Evaluation des nitrites et nitrates), 215.
( - du chlore des chlorures), 216.
de chaux, 160.
~ de levure autolysee, 219.
de Javel. 229.,684.
de mer artificielle, 203.
iodee.160.
oxygllnee neutre, 590.
peptonee, 55.
- concentree (Metchnikoft'). 405.
formule allemande. 406.
(Prelevemenf poqr analyses), 211.
(Recherche du B. coil), 221.
saleephysiologique, 203.
(Titrage hydrotimetrique), 217.
Ebul'ition (Points d). 169.
Echinococcose (Sero-reaction). 267.
Ecoulement constant pour cultures. 74.
Emetine. 402.
Emulsions bacillaires. (Preparation). 442.
Encephalite epidemique, 480.
EQcre de Chine ou de Burri. 99.
pour ecrire sur Ie verre, 153.
- a polygraphier, 154.
Endomgces albicans. 467.
Enrouissement des cadavres, 196.
Enterite chronique hypertrophiante du boonf. de Johne, 452.
Entero·vaccins, 537. -
de Lumiere et Chevrotier, 537.
de Besredka, 537.
Entoplasma, 404.
Eosine,9l.
Epilation des animaux, 181.
Epithelioses (Coloration et fixation). 120.
Epreuve de Grgsez (Meningocoque), 351.
- du peritoine (Meningocoque), 351.
Erythrosiue, 91.
Ehquetage, 152.
Etiquettes (Impermeabilisation). 153.
Examen des capsules, 108.
- des cils. 108.
Expectorations (Prelevement), 311.
Expedition des cultures et matieres virulentes, 31.
Exsudats (Prelevements), 310.
Extrait alcoolique de coour de veau, 253. 272.
de foie de nouveau-nes syphilitiques, :.!53.
humain cholesterine, 254.
methylique de Boque! et Negre. 261.
peptone Hz de Calmette et Massol, 260. '
d'organes (milieux anx), 65.
Fausses membranes (Prelevement), 313.

Favus. 459.
Ferments denitri6cateurs. 234.
glycolyti'lue du sang 527.
nitreux, 232.
nitriques. 233.
- proteolytiques (Extraction), 577.
Fermeture des vases et flacons, 152.
Fievre jaune. 507.
- (Coloration), 508.
(Culture), 508.
(Inoculation aux animaux). 508.
(Reactions hnmorales), 508.
Fievre de Malte (Voir Micrococcus melitensis).
Fievre quarte. 518.
Fievre recurrente, 509.
- - (Coloration),509.
- - (Experimentation) 509.
(Diagnostic bacteriologique), 509.
- - (Culture), 510.
Fievre lierce benigne et maligne, 518.
Fievre typholde (Voir bacille typhique).
Filtration, 19.
des virus, 19, 480.
Fixateur de Bouin, 123.
de Duboscq-Brazil, 124.
de Stamm, 124.
(Microhes de I'azote. 234.
Fixation des preparations microscopiques, 99.
Fixatrices (Al!(ues) de l'azote. 235.
Floculation (Reactions de), 271.
Formation d'H2S, 135.
Formol, 585.
Formol (Gelilication des serums syphilitiques), 281.
Four it flamber, 17.
de L. Marmier, 18.
Fragments d'organes (Prelevement), 310.
Frottis d'orgimes, 310.
Fuchsine, 84.
al'ide, 92.
Fixation des nrthropodes, 123.
- des cultures mortes. 30.
des froUis 'd'epithcilioses, 120.
des froUis de tumeurs, 119.
des frouis de sang, 114.
- de moustiques, 123.
Floculation (Titrage de l'antitoxine par la), 561.
620 TABLB ALPHABETlfJUB
G
Gaiac (Teinture de), 167.
Gale des lapins, 177.
Gelatine nutritive (Preparation), 57.
peplone a l'eau, 217.
pour polycopie, 153.
Gelose ascite, 344.
de Musgrave et Clegg (CuI lure des amibes), 365.
glycerinee, 59.
nutritive, 58.
au placenta de Kutscher, 345.
an rouge nlmtre, 375.
au sang, 62.
au sous-acetate de plomb, 375.
serum,59.
au serum-form ole, 344.
sucree, 59.
Glu marine, 152.
Glycogene (Preparation). 570.
Gonocoque, 351.
(Milieu gelose de W-assermann), 353.
(Milieu de Sabouraud et Noire),35S
(Differenciation. avec Ie meningocoque), 354.
-.. (Fixation du complement), 354.
Gourme du cheval,337.
K
Hemateine, 96.
- alunee, de Ma!fer, 95.
Hemateine-eosine (ColoratIon des coupes), 103.
Hemalimetre, 289.
Hematoxyline au fer, 97.
Delafield, 96.
- de Weigert, 96.
Hematozoaires du paludisme, 518.
Hemoglobine (Milieux a). 64.
Hemoculture, 309, 311.
Hemoculture anaerobie en milieu solide, 316.
Hemolyse, 303.
Hemolytique (Index), 259, 268.
(Preparation des serums), 215.
Hemolytique (Titrage des serums), 215.
Helero-vaccins, 536.
Homogene (Immersion), 11.
Homogeneisation des crachats ou produits tuberculeux, 434.
(Procede a l'antiformine), 435.
( - a In soude),43'.
( - de Bezauyon, Mathieu et Phi}j--
hert), 437.
( de Bezan~on et Philibert). 4il5.
( de Papacoslas el Gate), 436.
- - ( - de Ronchese). 43&.
Homogeneisation du sang (lnoscopie de JOUS$et). 317.
- - (Recherche du bacille tuberculeux), 318.
TABLE ALPHABJ1TIQUE 621
Homogemiisation du sang (Technique de BezCln~on. Griffon et Philibert)
318,
(Technique de G. Martin et Lebamf pour
la recherche des trypanosomes et spirilles),
318"
Hydrogene sulfure (Recherche). 135.
Hydrolases. 568.
Hydrotimetrie (Degre), 217.
Iclere infectieux. 505.

(Coloration). 505.
- - (Experimentation). 506.
- - (Culture). 507.
Immersion homogene, 11.
Impermeabilisation des etiquettes, 153.
Incineration des cadavres, 196.
Inclusion des fragments d'organes. 121.
- (Technique de Caullerll at Chapelier). 121.
Index bemolytique. 259, 268.
Indicateurs colores, 43, 160.
de l'absence d'oxygene, 67.
de temperature, 19.
Indice anaerobique. 224.
- opsonique. 298.
Indol (Reaction de 1'), 378, 411.
Infection (Modes d') experimentale, 184.
Inoculation articulaire, 192. .
cardiaque. 193.
cranienne, 185.
digestive, 189.
inte~tinale, 191.
intravasculaire, 185, 444.
mammaire, 191.
oculaire. 188.
peritoneale, 184, 443.
pleurale. 192.
rachidienne, 185.
rectale, 190.
respiratoire, 190.
sous-conjonctivale, 444.
sous-cutanee, 184.
transcutan~e. 191.
transorbitaire. 186.
vesicate. 190.
vesiculaire. 191-
Inoscopie, 3; 7.
Intradermoreaction melitensis. 356.
it la malleine, 457.
it la tuberculine, 445.
Ionique (Produit). 33.
- (Concentration). 33.
- (Etalons de concentration),44.
Ionisation, 33.
Isolement des mjcrobes, 25.
Isolement des microbes anaerobies, 27.
des microbes (Milieux electifs),26.
K
Keratite ulcereuse, 363.
.
I{erato'conjonctivite, 363 .
L
Lactophenol de Amann, 459.
Lait (Analyse bacteriologique), 324.
- de chaux, M5.
- formole, 156.
- (Milieu de culture), 60.
- (Petit) tournesole, 60, 375.
- (Prelevement), 311.
- (Recherche qualitative des microbes), 324.
- ( - du 8. colt), 325.
- ( - du B. tuberculeux), 324.
- ( - du M. melitensis), 325.
- (Recherche quantitatiV'e des microbes du). 325.
- tournesole, 60, 375.
Lames (Neltoyage), 154.
Lapins (Coccidiose). 177.
(Elevage), 173.
- (Maladies des), 176.
Laque cuprique, 96.
- ferrique, 97.
Leishmanies, 517.
Lepre, 450.
Lepre des rats, 452.
Leptospira icteroides, 507.
Leucocytes (Numeration et determination des), 291. I
- (Numeration des) par Ie procMe 'Ii",la pipette de Thomson,
293.
(Pouvoir phagocytaire des), 298.
Levures(Autolysel,219.
- (Conservation), 30.
(Maceration), 53.
Lipodiastases, 571.
Lipovaccin de Le Moignic, Pinoy et Sezary, 528.
Liqueur de Fehling. 166.
- de Labarraque, 584.
Liquide cephalo-rachidien (Analyse microbiologique du), 1118.
- - (All!llyse cytologique du). 320. ' .
(Disposition gimel'ale d'un examen de), d'apr;,s
Mestrezat.321.
- (Prele-vement), 312.
conservateul',204.
d'ascite, 344.
de Binot, 205.
de Borrel, 123.
de Bouin 123.
de Carnoy, 122.
de Duboscq-Brazil, 124.
d,e Dominici, 123.
'I'ABLE ALPHABET/QUE 623
Liquide d'Esbach, 166.
- de Flemming, 122, 460.
de Hayem, 289.
de /(ayserling,.180.
de Marcano, 289.
de MdlIer, 209.
de Pinoy, 31, 479.
de Perenyi, 123.
de Ringer-Locke, 203.
de Ruge, 503
de Toisson, 291.
van Gehuchten, 123.
de Zenker, 122.
hydatique,267.
physiologique de Delbet, 204.
Lotion savonnense 'au petrole pour eloigner les liques, les puces de la
toison des animaux, 591.
Lut de [{ranig, 153.
Lymphangite epi7.oofi~ue des Solipedes, 467.
Lysol,583.
M
Maceration de levures, 53.
Maladie de Chagas, 516.
du nez des cobayes, 178.
de Weil,505.
Malleine, 457.
MalIeination, 457.
Mastic pour Inter les flacons, 152.
Matieres colorantes, 83.
fecales, 311. 314.
solidifiables pour injections intravasculaires, 209.
Melange d'Ehrlich, Biondi·Heidenhain. 92.
- de Bodin, pour la destruction aes ectoparasites. 592.
de Gorini (morve), 414.
retrigerants, 16~.
. de Joly contre les piqures de moustiques. 591.
Melitine, 356.
Meningocoque.343.
- (Conservation des souches de), 345.
(Epreuve de Grysez), 351.
(- du peritoine). 351.
(Fixation du complement), 350. .
(Identification par les milieux sucres), 348.
(Isolement/,347.
(Precip~to-dingnostic), 350.
(Recherche), 346.
(Sero-agglutination), 348.
(Procede de Tribondeau), 347.
Mensuration des microbes, 12.
Mesure de I'indice opsonique, 298.
- de la resistance globulaire, 303.
MetadyseniCriques, 399
Methode au bleu de Dnna (frottis et coupes), 104.
colorimetrique, 41.
d' Abderhalden, 286.
Methode de Barnett et Chapmann, 50.
de Baumgarten, 450.
de Benignettl et Gino, 106.
de Besredka (Entero-vaccins), 537.
de Blanco. 433.
de Bordet et Ruelens, 253.
de Borin (Capsules), 109.
de Borrel, 119.
de Bouet et Roubaud, 157.
de Brag (Coloration des amibes), 400.
de Calmette (Conservation du virus rabique), 483.
de Calmetti et Massol, 249.
de Chantemesse (Vaccin antityphoidique), 526.
de Claudias, 101.
de Dienert et Guillerd. 219. •
de Dominici, 115.
de Dreyer et Ward. 271.
de Dujarric de la Riviere et Gallerand, 277.
eiectrornetrique. 33. .
eosine-bIen, 119.
de FaWre. 425.
de Fick, 451.
de Fontana- Tribondeau, 503.
de Fontes 433.
de Fornario, 208.
de Fosse. 166.
de Friedlander, 108.
de Giemsa, 94.
- classique, 94.
- rapide, 94.
- (coupes at (rollis), '102.
- (coloration du sang), 102.
de Gins ii l'encre de Burri, 108.
de Gram, 100.
de Gram Claudius, 101.
de Gram-Nicolle, 100.
de Halberstadter et Prowa%ek, 110.
d' Human, 432.
de Klett, 108.
de Laneeraux, 106.
de Laveran. 116, 230.
de Lentz, 484,.
de Lindner, 110.
de Ljubinsky, 425.
de Lofller, Nicolle, Morax,105.
de Lumiere et Cheurolier (Enttlro'vaccins), 537.
de Mann, 483.
de ManoUl!lian, 486, 502.
de ManoUl!lian et Viala, 486.
de Masson (Coloration des coupes), '104.
de Moller, 104.
de Much .. 432.
de Neisser. 111, 424.
de Negri. 485.
de M· Nicolle. E. Cesari et E. Debains, 55~.
de Nissl, 486.
de NoguchI pour In culture du treponeme, 504.
d·Oshida,. 481.
Methode de Pappenheim, 117.
de Petro!, 439.
de Pinoy (Preparation des moisissures), 460.
de Pitlield, 106.
de Porges, 342, 349.
- M. Nicolle, 342,349.
de Prescott et Breed, 325.
de Ramon, 561.
de RomanolVsky. ]02, 116.
de Ross et Ruge.l17.
de Rothe, pour la culture du 3. diphterique, 426.
de Sabra:es. 112.
de Sachs et Georg i, 271.
de Savage (Analyse des eaux), 223.
de Sheridan Lepine. 206.
de van' Ermengem.l05.
de Vincent (Vaccin T. A. B.), 526.
de vonBetegh, 432.
de Weinberg an serum chauCIe. 269.
non chauffe. 268.
de Widal et Salimbeni (Vaccin T. A. B.). 526.
de Wright pour mesnrer III vitesse de coagulation du sang
~~ ,
de Wright-Leishman (Vaccin Ilntityphoidique), 525.
de Wollman au Bacterium coli, 287.
de Ziehl-Nielsen 431.
des bourres solubles. ~30.
des gouttes pendantes, 462.
des tubes de Met! pour la proleolyse, 585.
- syphilimetrique de Vernes, 278.
Methylique (Antigene) de Boquet et Negre, 261.
Micrococcus aero fretidus. 474.
melitensis, 355.
(Sero-diagnostic), 355.
(Intradermo-reaction), 356.
Micrometre, 12 .
.Microscope, 9
- (Ultra), 14.
Milieu a l'acide pyruvique, 71.
(Ajustement de la reaction des), 48,
(Alcalinisation), 32.
U l'extrait alcoolique de foie. 65.
ill'hemoglobine, 64.
iI In maltopeptone, 82.
au serum dilue, 507.
de Bordet-Gengou (Coqueluche), 360.
de Bifalco, 422.
de Chandelier (B. typhique, B. coli), 374.
difi'erenliel au rouge neutre. 348.
de Dorset. 438.
glycerine. de Lubenau. 439.
aux extroits d'organes. 65.
d'Armand-Delille, Mayer. Schreiter et Terroine, 441.
de Baerthlpzn et Gildemeister (Cholern), 409.
de Beyerink, 235.
de Bredemann, 234.
de Chantcmesse, 370.
de Cohn, 76,
MIcnODIOLOGIE 40
TABLE ALPHABETIQU1!J
Milieu de Conradi, 371.

de conservation de Sabouraud, 461.
de Costa, J. Troisier et Dauvergne, 427.
de culture pour la preparation de In toxine diphterique, 428.
- les microbes fixateurs d'{lzote, 234.
des nodosites, 235.
phosphorescenfs, 78.
de Dieudonne, 407.
de culture pour anaerobies, 66.
de Drigalski et Bierast, 426
de Drigalski et Conradi, 369,
d'Endo, 370.
d'epreuve de Sabouraud, 46'1.
de Ficker et Hoffmann, 367.
de Fischer. Bitter et Wagner, 536.
de Gessard (8. py<!!'yanique), 359.
d'Hans Aronson, 409.
de Heyden Hesse. 439.
de Kemal Moukthar, 410.
de meine, 422.
de Lasseur, 76.
de Lebamf, 354.
de L6fl1er"Schuster, 371.
de Ludwig Bittel', 372.
de Massol et Breton, 440.
de Maze, 235.
MM. (panse glucosee), 345.
de Ch. Nicolle (Gonocoque), 353.
de Navy, Neal, Ch. Nicolle, '62.
d'Omeliansky, 232.
d'Ottolenghi, 410.
de Pasteur. 75.
de Petrof, 439.
de Pergola, 422.
de Raulin, 75.
de Reenstierna, 361.
de Rothe, 426.
de Sabouraud et Noire, 353.
de Sacquepee et Delater, 344.
de Salimbeni .l.et,atkeretle, 340.
de Salomon ~~treptocoque). 336.
de Sauton, 440.
de Savag'e, 223.
de Schmitz. 373.
d'Uschinsky, 76.
de Weissenbach (Streptocoque), 336.
de Winogradsky, 233.
de Zikes, 235
electif pour isolement, 26.
gelose de Wassermann. 353.
pour la culture du B. Cl/anogenus. 79.
du B. seborrheilJ'ue, 81.
(les ferments acetiqoes, 79~
;..:.. hutyrilJues, 'SO.,
hulgares, 79.
de la 'ceUolo'sIl, '81.
denifrifian't's, 234.
lactiques. 79.
T ABLlt ALPHAB~T IQUE 627
Milieu pour Ia culture des ferments nitreux, 232.
- I nitriques, 233.
de l'uree. 80.
des teignes, 81.
pour Ia recherche des hemolysines, 411.
- de Ia reaction indoinitreuse, 411.
synthetiques, 75.
T.341.
vitamine. 66.
- voyageurs pour hemocultures, 73.
Mixture de Goadby. 208.
Moelle de roseau (Sacs), 178, 202.
Moisissures.460.
Monobutyrinase, 571.
Monobutyrine. 571.
Montage des preparations microscopiqlles, 112.
Mol's de Malassez, 180. ,
Morve, 454.
(Animaux sensibles), 455.
(Culture du bacille), 453.
(Diagnostic par l'ogglutination) 455.
(- Ia deviation du complement), 456.
( la precipitation). 456
- (- par les reactions malleintques), 457.
Monches (Destruction des), 156.
Mousti<tlJ.es (Destruction des I, 156.
Mucorines (Conservation). 31.
Mucosites (Prelevement), 313.
Muguel,467
Mycetomas (grail1s), 461, 466.
Mycoses, 459.
- (Actino), 465.
(Blasto), 467.
(Broncho), 461.
(Procedes d'exainen), 459.
NecrobaciIIose des lapins, 176.

Nitrobachiries.233.
Nodosites (Microbes des', 235.
Numeration et determination des leucocytes. 291.
Numeration des leucocytes et des parasites dlt sang, 2113.
o
Objectifs, 11.
Ocnlaires, 11.
<Eur (Voir milieux).
- (Antigene a 1') de Besredka, 260.
- (Blanc) de Deniges, 125.
- \Bouillon a I') de Besrec!ka lupille, 63.
Ophtalmle aiguEl d'Egypte, 362.
Ophtnlmo.reaclion a la maIl6ille, 458.
- ala tuberculine, 447.
Opsonines, 298.
628 TABLE ALPIiABETIQUE
Orange. 91.
Orcanette, 162.
Oreillons, 511.
Orthocarboxybenzeneazodimethylaniline. 43.
Orthocresolphtaleine, 43.
sull'onee, 43.
Oxydases, 579.
(Recherche des), 167.
Palndisme, 518.
Panchrome de Laveran, 95.
de Pappenheim, !)5.
Papalne, 574.
Papier d'amidon, 161.
it l'ac6tate de plOmb. 161.
de tonrnesol, 32.
tne-monches, 156.
Paralysie des cobayes. 179.
Paradysenttiriques. 399.
Paratyphiques, A et B. 340, 376.
- (Caracteres differentiels), 377.
(Diagnostic par les reactions d'agglutinalion), 380.
- (Milienx diflerentielsl. 374.
- - (Recherche d" l'indol). 378.
PastenreIJre (Caracteres generaux). 331. •
Pastenrellose des poules.332 (Voir cholera des ponies).
- des lapins, 176. -'
Pectine (preparation de la). 168.
Pepsine. 572.
Peptones (Caracteres des). 163.
- (Reactions desl, 164.
P6ripneumonie des bovides, 492.
Peroxydiastases, 579.
Peste, 416.
. (Conservation des fragments d'organes ..
(Diagnostic hacteriologique), 417.
- (Diagnostic serologiqne) 419.
- ( - sur Ie cadavre), 418.
- des cobayes. 179
Petit·lait tournesole, 560. 375 ..
Phenolphtal6ine. 32. 160.
Pbenomene de Pfeiffer. 377.
de Neufeld. 341.
Picro-carmin de Jensen. 98.
de Orth, 98.
- de Ranvier, 98.
Pied de Madura, 467.
Plasma de Gessard. 63.
Plasmodium malarire, vivax, prrecox, 518.
caracteres diflcrcntiels, 519.
(Culture des). 522.
Piroplasmes. 523.
Piroplasmoses. 523.
Pneumobacille de Friedlander, 363.
tABLE ALPHABETIQUE (;29
Pneumocoque, 340.
(Conservation de la virulence), 342.
(Milieu lie Salimbeni et d'Herelle), 340.
(Milieu T), 341.
(Sero-agglutination), 342.
- (Milieux differentiels), 342.
Pneumonie des cobaye" 178.
Poids moyens des cobayes. 197.
Poliomyelite epidemique, 493.
Polychrotte, 104.
Pomme de terre pour culture, 61.
biliee. 440.
- glycerinee, 61, 437.
Ponction du coour, 193.
de la rate, 194, 517.
du foie, 194 517.
des os longs 194.
Potentiom.Hre de A. Berthelot, 34.
Poudre c~ntre les ectoparasites, 592.
Pourpre de Iiromocresol, 43.
Pouvoi,' antiproteolytique du serum (Mesure), '578.
anticom plementaire, 247.
antitoxique du serum antivenimeux, 558.
bactericide des serums. 2<l1, 2<l3.
coagulant d'un venin, 557.
hemolytique d'un venin. 556.
neurotoxique d 'un venin 556.
phagocytai"e des leucocytes, 298.
opsonique, 303.
preventif du serum antivenimeux, 558.
sacchariliant (Mesure), 569.
toxique (Dosage par In floculation), 563.
Poux (Destruction) 592.
Precipitation (Serums precipitants), 240.
Precipito-diagnostic pour Ie meningocoque, 350.
Ie charbon. 331.
Prelcvement de crachats, 314
d'ean pour analyse, 211.
d'ecoulement vaginal, 311.
d'expectol'91ion 311.
d'exsudats, 310.
de fausses membranes, 313.
de fragments d'organes, 310.
de lail, 311.
de liquides de ponction, 312.
de matieres excrementitielJes, 311, 314.
de mucosites, 313.
de pus, 310, 314.
de secretions purulentes, 310.
de squames et croutes, 31l.
d'urine. 311, 315.
Prepamtion du bouillon, 52.
Procede de Berthelot (Recherche de I indol), 379.
de Borrel et Bumet. 501.
de Conradi (B. typhique), 371.
de Courmont (B. typhique), 367.
de Dienert et Guillert (Analyse des eaux), 219.
de Glemsa. 117, 500.
630 TABLE ALPHABET IQVE
P;ocede de Kayser-Zeidler (B. typbique), 366 .

._ de' Laveran. 513.
de Levaditi. 502.
de P. P. Levy et Uobardy. 327.
de Lumiere et Chevrotier. 200.
de Bezan90n, Mathieu et Philibert. 437.
de Nikiol. 509.
de Noguchi, 510.
d' Ungermann, 510.
de Rqvaut, 501.
de Ronchese. 435.
de Walker et Swift, 254.
de la boite de Petri, 462.
d'Edm. et Et. Sergent 12.
de Todd et Rosenthal, 396.
de la goutte epaisse, 521
de la pipette de Thompson. 293.
des lames s!lebes, 462.
de Pons. lie, 514.
de Zingher (Virulence du B. diphterique). 429.
panoptique. 512.
rapide pour la fixation de l'alexine, 257.
Produits chimiques. 605.
- colorants, 609
- virulents (Recolte), 309.
Proteines (Reactions), 164.
Proteolyse, 575.
Proteolytiques Ferments), 577.
Proteus vulgaris. 391
Pseudo ·dysenteriques. 399.
Pseudo-tuberculoses, 449.
des cobayes, 178, 449.
des lapins. 177,449.
des moutons, 450.
des souris, 449.
Puits (Desinfection). 228.
Purification des colonies, 28.
des microbes. 25.
Pus (Prelevemenls), 310, 314.
Pyocyanase. 359.
Pyocyanine. 359.
Pyrethre, 157.
Pyronine. 89.
Quinoleiue. 1~7.
Quotient leucocytaire, 303.
Rage, 481.
- (Extraction de la moe lie), 481.
_ (Recherche des corps de Negri), 483.
TA~LE ALFHABETIQUE 631
Rats et souris (Elevage), 175.

- (Destruction), 385.
- (Maladies), 179.
Reaclifs de la brucine, 21,6.
de la cellulose, 162.
du chlore libre. 228.
des matieres grasses, l6?-.
de Millon, 165.
de Nessler, 213.
de Tanret. 133,
de Tromsdorff, 215.
pour laboratoire, 159.
- urologiques, 166.
Reaction d'Abderhalden, 286.
d'activation du venin, 284.
d·Ascoli. 331.
du benjoin colloidal,282.
de Berthelot 379.
de Bordet- Wassermann, 255.
de Bordet- Wassermann (Technique de \'Institqt Pasteur PII~ III
procede rapide). 257.
Diazo (d'Ehrlich), 166.
d' Ehrlich (lndol), 379.
de Dick. 494,
de Fleig et Sicre, 379.
de Gatt! et Papacostas, 281.
de Legal- Weyl, 378.
de Millon, 165,
de Salkowsky, 378.
de Schick. 429.
de Weil-Felix. 489.
de Wollman. 287.
de fixation de l' alexine. 245.
de la brucine. 216.
de In naphtylamine. 216.
de la diphenylamine. 216.
de la meiostagmine, 2!l1.
du biuret, 165.
Sigma. 271.
- xanthoproleique. 165.
Recherche des amibes. 118.
des emhryons de filaires. 117.
des hematozoaires. 117, 118.
des infusoires. 119.
Recolte des produits virulents. 309.
Reducteur de Van Ermengem. 503.
Reduction des sulfates. 135.
Refrigerants (Melanges). 169.
Reperage d'une preparation micrpscopique, 12.
Resistance globulaire (Mesure). 303.
_, des hematies aux hemolysines, 305.
RhiQos~lerome, 364.
Rouge Congo, 90
- de cresyl. 42.
- de methyle, 42.
- neutre, 90, 111.
Rou8et du I?orc, ~3&.
632 TABLE ALPHABlSTIQUE
s
Sacs de collodion de LUllIiere et Chellrotier, 200.
de Michel. 201.
de M. Nicolle, 199.
(Denitrification des)! 201.
Safralline. 84.
Salmonelloses, 384.
Sang (Coagulation), 295.
- cristallise, de Costa, 408.
- (Analyse microbiologique), 316.
- <Prelevements), 309.
- (Homogeneisation), 317.
- IVolume) 198.
Sarcosporidiose des souris, 179.
Schizotrypanum Cruzi, 516.
Secretions purulentes 310.
Sedimentation des hematies 447.
Selles (Analyse microbiologique), 327.
;- (Recherche du B. tuberculeux), 327.
Separation des microbes. 25.
Septicemie des souris, 179.
Seringues (Entrelien) 155.
Serosites (Prelevements). 312.
(Analyse microbiologique), 323.
Ser<>-agglutiuation. de Widnl, 383.
Sero-diagnostic de In fievre de Malte, 383.
Sero-reaction de l'eehinococcose. 267.
de Weil-Felix. 489.
Serum agglutinant les B. dyscnteriques, 239.
les B. paratypbiques, 238..-
Ie B. typhique, 237
- les vibrions choleriques, 239.
antidipliterique, 545.
(Mesure de la valeur preventive), 549.
(- - curative), 550.
(Purete hncteriologique~, 551.
Titrage par la floculation, 561.
(Titrage par la precipitation), 559.
antidysentcrique 398.
antimlmingococcique (Titrnge), 543.
nntimicrobiens (Titrage), 640.
- (- des anticorps), 544.
antiparalyphique A, 238.
B,239.
antipesteux (Titrage).541. .
antipneumococcique (Titrage), 641.
antistreptococcique (Titrage), 540.
antitetanique, 551.
\Pouvoir preventif, mesure), 551.
(Titrage en unites anlitoxiques, methode alle-
mandel, 554.
arne·
ricaine), 552.
fran-
- <;aise), 554.
antitetanique (Rapport entre les diverses unites antitoxiques), 555.
TABLE ALPHABEl'IQUE 633
Serum antivenirneux, 556.
- ~Pouvoir antitoxique).558.
- Pouvoir preventif), 558.
artificiel simp e, 203.
bactericide (Titrage), 2(,3.
bacteriolytique anti-vibrion, 239.
de beeu£. glycerine, 437_
de Ifayem, 204.
de Truriecfk, 204.
formole, 29.
hemolytiqne (Preparation). 245.
- . (Mesure), 245.
precipitant, 2~0.
sale et sucre, 203.
- (Purete bacteriologique), 566.
- (Conservation), 565.
Signe de Strauss, 455.
Sodoku, 510.
Sol (Analyse microbiologique), 231.
Solubilite des-composes mineraux, 170.
-' - organiques, 171.
Solution conservatrice des hematies, 289.
de Haug, 129.
de Lugo). 100_
normales. 159.
- tricbloruree de Carrel, 203.
Somnifene (Anesthesie par Ie), 183.
Sonde de Fraenkel, 231.
Soudan III. 90.
Soufre, 157. 589.
Souris (Elevage), 175.
- (Destruction) 385.
(Malatlies), 179.
Sous-cuti-malleihation, 457,
Spirilles (Recherche dans Ie sang), 318.
Spirocheta Dulloni, 509.
recurrentis, 509.
Spirochete ictero hemorragire, 505.
- - - (Recherche dans l'urine), 327.
Sl'irochiites (Epreuve de la bile et de la saponine), 505,
des oreillons, 511. .
du Sodoku, 510.
Spores (Coloration), 104.
Sporoagglutination, 463.
Sporotrichose, 463.
Sporotrichum. 463.
Squames (Prelevement), 311.
Staphylocoque. 334.
Sterilisation des aiguilles, 155.
par la chaleur humide, 18.
- seche, 17.
par filtration, 19.
- tyndallisation, 18_
Streptococcus anaerobius, 338.
brevis, 337.
conglomeratus, 337.
equi. 337.
evolutlls, 340.
654 TA~LE ALPRABETIQVE
Strepto'coCCUS intermedius, 339.
longus pyogen~s. 335.
longissimus. 337.
micros, 339.
mucosus. 343.
putridus, 338.
Streptocoques, 335.
- anaerobies, 338.
(Bouillon serum de Marmorek), 335.
~
HemOIYSinel, 336.
Milieu differentiel de Salomon), 336.
e guerre (isolement et identification), 386.
- de la gourme, 337. .
Snblime iode IDominici et Lenoble), 114.
Sulfate de zinc (Anticoagulant), 296.
Sulfates (Reduction), 135.
Sulfooes pbtaleines. 43
Suc gastrique (Reactions), 573.
Sucrase. 568.
Synocoque, 352.
Syphilis, 489
(Recherche des treponemes). 499.
(Coloration des trepouemes). 500.
(Antigenes et anticorpsl, 253.
(Floculation), 271. .
T
Tables de Clark et Lubs, 45.
de dilution de l'alcool. 172.
- pour titrage, 593.
de laboratoire (Teinture),158.
Tachiol, 227.
Technique de Bernard. Debr.! et Baron, 317.
- de Bezan{!on Griffon et Philibert. 318.
de Bierast (B typhique), 368.
de Braun, 223.
de Calmetle et Guerin, 327.
- - (vaccine), 495.
de Calmette et MQssol. 262.
de Call1lerg et Chapelier (Inclusion), l21.
de Fahrreus- Westergreen. 447.
de Fornet, Muller et Tzukuk 23S.
de l'Institut Pasteur. 257.
de Jouan et Staub. 243.
de Jupille et Legroux, 31S.
de Linzenmeier, 448.
de Marfin et Lebreuf, 31S.
de Medalia. 50.
de Moreau, 328.
de M. Nicolle, Frasey, DebaiAs et Nicolas, 243.
de H. Sachs, 246.
de Valtis pour la recherche des anticorps tuherculeux par
Ie pro cede rapide. 265.
de Weinberg, 267.
de Westergreen et Katz, 44S.
- pOllr la recherche de Sp. ictero·hemorragire.327,
Teignes.449, 467.
TABLE ALPHABl1TIQUE 625
Teignes des petits rongeurs. 179.
Teinture noire lavable. 158.
de tournesol, 161.
Temperatures normales. 197.
Tests de sterIlisation. 169.
Thionine (Violet de Lauth), 87.
Thymol-formol. 591
1'hymolphtaleine sulfonee. 43.
Tick fever. 509.
Titrage de l'alexine. 246.
- des anticorps, 249.
- (Methode de Calmette et Massol), 249
des antigenes. 247.
des Serqms bactericides, 241.
- - Mmolytiques. 215.
Tournesol ~Teintu.re), 161.
Toxine diphb!rique, 428.
diphter-ique (Titra.ge), 5{6.
- (Milieu pour Ill, preparation), 428.
dysentthique. 396.
tetanique (Titrage). 552.
- (Tables de dilution pqur Ie titrage). 593.
Triacide d'Ehrlich. 93, 115.
Trichophyties 459.
Trypanosomiase americaine. 516.
humaine. 514
Trypanosoma gambiense, 514.
Trypanosomes. 512
des animaux, 515.
(Recherche dans Ie sang). 318, 512.
(Culture), 514.
Trypsine, 574.
Tuberculine, 441.
- brute de [{och.441.
purifiee de Calmette et Massol, 442.
cuti·reaction. 446.
intrndermoreaction. 445.
ophtalmo-reaction. 447.
reaction thermique. 445.
Tuberculose. 431 (Voir B. tuberculeux).
- zooglCique, 449.
Tubes de Veillon. 67.
- de culture (Obturation), 154.
- de caoutchouc (Con~ervalion), 156.
Tumeurs (Coloration), 119.
Tyndallisation 18.
Typhose aviaire. 390.
- des petits rongeurs, 179.
Typhus exanthematique. 488.
u
Ultravirus (Voir virus invisibles).
Uree (Dosage), 166.
Urine (PreIevements). 311, 315.
- (Analyse microbiologique). 326.
636 TABLE ALPHABI5TIQUE
v
Vaccination antidysenterique, 397.
Vaccine, 120. 495.
Vaccins antichoIeriqnes. 536.
anticoquelucheux. 532.
antigonococciques. 532.
:mtidysenteriques, 361.
antisynococciqu~s, 532.
antitypho'idiques, 525.
(Autolysats). 528.
(Methode de Chantemessel. 526.
( Pfeiffer et Kolle), 5~7.
( Vincent),526..
~
- Widal et Salimbeni). 526.
- Wright-Leishmann!. 525.
Lipo-vaccins de Le Moignic, Pinoy et Sezary.
028.
(vaccins iodes de Rangue et Senez). 528.
(virus vivants vaccinantsl, 527.
au phosphate disodique de A B~l thelot, 538.
au sucre de A. Berthelot, 538.
fluores de Ch. Nicolle' et Blaizot. 532.
(Impregnation calcique des'. 539.
jodes de Ranque et Senez. 528.
jennerien, 495.
mi..ccQui..<!.U.!!. (Nu.m.ecll.ti..Qu. d.<!.!!. 't<!.em<!.!!.), &<!.~,
microhiens (Titrage par Ie diaphanometre), 535.
mixtes. -530
sensibilises. 521.
staphylococciques, 531.
vivants, vaccinants. 527.
Venins, 556.
- (Pouvoir coagufant). 557.
( hemolytique), 284.
- ( - neurotoxique). 556.
Vernis de Carrel, 204.
Verrerie. 602
Vert malachite. 89.
_ de methyle, 88.
Vesuvine. 89,
Vibrion cholerique, 405.
- _ (Diagnostic par l'agglutination), 412.
( _' par Ie phenomene de Pfeiffer). 413.
(Milieu de Dieudonne). 407.
( - d'Hans Aronson), 409.
( - de Kemal Moukhtar) 410.
( pour In recherche de I'indoll, 41.1.
__; { des hemolysmes).411.
(Recherche dans ljls eaux). 405.
( seIIes), 406.
- septique. 469.
Violet benzyIe. 89.
cristallise.89.
de Gentiane. 88.
de Lauth. 87.
de methy.le. 89.
Virulence (Conservation), 342.

Virus de Danysz, 385.
fillrants ou invisibles, 480
(Coloration), llO.
l Technique de la filtration), 4110.
w
Weeks (B"acille de), 362.
x
Xanthydrol, 166.
z
Ziehl, 84.
TABLE DES MATIERES
PREMIERE PARTIE
Techniques generales du laboratoire.
I. Microscope et ultra· microscope, 9.

II. Sterilisation. filtration, 17.
III. Isolement et purification des microbes. Conservation des
souches microbiennes, 25.
IV. Alc'alinisation et mesure de la reaction des milieux de
culture, 32.
V. MetJlodes de preparation des milieux de culture usuels,
52.
VI. Milieux de culture particuliers a quelques especes micro-
biennes, 75. .
VII. Principales matieres colorantes employees en technique
microbiologique. Methodes usuelles de coloration des
microbes et des J'l'otozoaires, 83.
VIII. Technique de fixallon et de coloration du sang et des pro·
tozoaires sanguicoles, 114. \
IX. Fixation et inclusion des fragments de Ilssus ou d'organes
destines a fournir des coupes, 121.
X. Marcqe il suivre pour la determination des microbes d'apres
leur morphologie et leurs fonctions biologiques, 130.
XI. Recettes utiles dans les laboratoires, 152.
Xli. Documents chimiques: reactifs utiles dans les laboratoires,
159.
DEUXIEME PARTIE
EXperimentation sur les animaux.
XlII. Elevage des petits animaux de laboratoire, 173.

XIV. Contention et anesthesie des animaux d'experiences. Dif-
ferents ~odes d'infeclion experimenlale. Ponction du
creur. Autopsies. Enfouissement et incineration des
cadavres~ Temperatures normales, 180.
XV. Methodes de, culture in viuo, 199.
XVI. Liquides physiologiques et liquides co DserVllleurs des
pieces analomiques, 203.
TABLE DES MATIERES 639
TROISIEME PART IE
Microbes de fair, de rea11 et du sol.
XVII. Analyse et purification des eaux potables, 211.

XVIII. Analyse microbiologique de 1'air et du sol, 230.
QUAtRIEME PARTlE
Reactions humorales.
XIX. Technique pour la preparatiotl:ct Ie titrage des serums agglu-

tinants bacteriolytiques, precipitants et hemolytiques. 237.
XX. Serums hemolytiques. titrage de i'1l1exihe, de. l"nntigene
et des anticorps. 245.
XXI. Re'action de Bordet-Wassermann et preparation des anti-
genes lIyphiIitiquE!S, 253
XXII. Recherche et titrage des anticorps tuher~leux, 260.
XXIII. Sero-reaction de l'echinococcose 267.
XXIV. Reactions de flocnlatian pour Ie diagnostic de In -syphilis,
271.
XXV. Recherche et titrage des ljpoides lihtes dans les serums et
des ferments specifiqnes'de defense dans les humeurs et
les organes, 284.
-XXVI. Hematimetrie et hematologie. Cytologie et cytodiagnostic.
Vitesse de coagplation. 'Indke opsonique. Mesure de 1a
resistance globulaire, 289.
CINQUIEME PARTIE
Techniques speciales pour l'etude des maladies infectieuses

de I'homme et <fes animaux.
XXVII. Recolte de produits Virulents pour Ie diagnostic des mala-

dies infectieuses del'homme et des animaux, 309.
XXVI1I. Analyse mierobi01ogilfue du sang, au liquide cephalo-
rachidien, des scrosites. du lait, des urines et des
selles, 316.
XXIX. Technique speciale aux microbes pathogenes. Bacteridie
charbonneuse. Cocco-bacille du cholera des pollies.
Pllsleurellre. Bacille du rouget du pore. 329. '
XXX. Staphylocoque. Slreptocoque. Pneumocoque. Meningocoque.
Gonocoque. M. melitensis et Bacillus abortus, 334.
XXXI. BaeiIle pyocyauique. Baeille de Ia coqueluehe. RaciIle
de Duerey Bacilles des eoojonctivites. Baeille de Fried-
lander. Bacille du rhinosclerome. Bacille de Bordet
(diphterie aviaire), 358.
XXXII. Baeille typhique. B. paratyphiques et Bacterium coli.
- Baeilles de la typhose avinire. -8. {moolill -aerogenes.
Proteu, vulgari., 366.
640 TABLE DES MATIERES
XXXIII. Dysenteries. 393.

XXXIV Cholera, 405.
XXXV. Pesle, 416.
XXXVI. Di-phterie 421.
XXXVII. Tuberculose. Pseudo-tuberculose,. L<'pre Enterite hy'pertro-
phiante des bovides Morve, 431.
XXXVIII. M;vcoscs, 459.
XXXIX. Microbes aerobics et anaerobies des plaies, anaerobies des
putrefactions el de I'intestin, 468.
XL. Virus invisibles et virus filtrants ultravirns), 480.
XLI. Syphilis, [clere infectieux hemorragique. Spirochete,.
Treponemes et SpiriIles, 4!J9
XLII. Trypanosomes. Leishmanies. Hematozoaires. Piroplasmes.
512.
SIXIEME PART1E
Preparation et titrage des vaccins et des serums
t herapeutiques.
XLIII. Tecbnique de preparation ct de titrage des ,aecins micro·
biens, 525.
XLIV. Serumsanlimicrobiens et leur titrage, 540.
XLV. Methodes de lilrage des loxines et des ,erums antitoxiques.
545.
XLVI. Determination ct mesure de I'uctivite de, principalcs dias-
tases. Serums antitryptiques, 568.
SEl'TIE,UE PARTIE
Desinfection.
XLVII. Desinfection et antiseptiques. Destruction des ectoparasites
animaux. 583.
APPENDICE
Table de dilntions pour Ie titrage des toxines et des serums, 593.
II
:\IaLeriel et instrumentation d'un laboratoirc de recherches mierobio·
logiques.600.
Poitiers. - Societe rran~aise d'Imprimerie. 1926

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L'infection bacillaire et la tuberculose, par A. CALMETTE,

COPyright 1026 by Masson_et C t,

L' accueiL fait ci ce manuel en ayant epuise la premiere

Nous avons appris, par noire eXp'erience personnelle,

paratio~s, mais elle n'a pas un deplaeement assez etendu

Fig. 1. - i\lnrche lies rflyons lumineux dans un microscope.

riot; peut ~tre promenee en tous sens, grace a un mouve-

volonte, Ie diarpetre du cone eclairan't. II sert surtout dans

Daqs }tjs PflYS a forte Juminosite, l'reil qui n'est .pas

On enleve alors l'objectif micrometrique et on Ie remplace

queur a pointe de diamant, on peut reperer commode-

tilles, nettoyer leurs faces interieures et les. rer.lettre en

Fig. 2. - Ultra-microscope de Stia.snie.

sateur Abbe du microscope et placer l'ultra-microscope

L 'huile de cedre de la cavite doit venir en "C~nlact avec Ia

Les instrumen ts, la verrerie, les milieux de cl)lture qui sop t

1. - Sterilisation par la chaleur secbe.

A. Sterilisation dans La f/.amme, - Employee pour

B. Sterilisation par Ie fOllr a fIamber. - Le four a

Laisser refroidir, puis ouvrir Ie four et attendre quelque

II. - Sterilisation par la chaleur humide.

A. Au-dessous de 100°. - Sterilisation par chauffage

soit revenue a 0'. Si on ouvre plus totl'autoclave, la brusque

III. - Sterilisation par filtration sur bougies poreuses.

Les'bougies filtrantes, qui sont employees pour Ia sterili·

D'autres filtres que les bougies Chamberland peuvent

de 12 a 13 centimetres et enfonce jusqu'au fond J'une

Appareil a vide, a chute d'eau (R. Legroux el M. Gory).

l'aspiration se produit. On I'arrete en pla!;ant une pince

Appareil de securite de R. Le[Jroux. - Lorsqu'on

l'appareil it filtration, et tant qu'elle est constante, Ie tube de

Nettoyage, regeneration et sterilisation des bougies

La calcination des bougies do it etre evitce, car elle pro-

grO$ tube a essai au fond duquel on a verse quelqu~s goutte&

180LEMENT ET. PURIFICATION DES MICRO)3ES _

A. lsolement a l'aide de milieux solides. - Sepa-

B Separation par epuisement sur milieux solides

bacille diphterique, sur milieu de Dieudonne pour Ie vibrion

D. lsolement par divers mogens. - Chauffage a

E. lsolement des anaerobies (voir chapitre XXXIX). -

dans un tube de gelose glucosee. Le prelevement est plus

F. Purification des colonies isoU:es. - II est rare

La formule suivante a ete recommandee.:

on introduit dans les tubes 0 gr. 2 environ de craie ou

A dMaut de maltopeptone I, on peut employer une

1. La maltopeptone est un extrait aqueux de tOllraillons, concentre SOllS pression

thylfme entre deux bouchons d'ouate et couler de la

el monler des preparations (qn'on hordet'n:'t In paraffine)

CeUe solution rend de grands services, surtout dans les

H. Expedition postale des cultures et matU:res

ALCALINISATION ET MESURE DE LA REACTION

A. - PROCEDE AU PAPIER DE TOURNESOL

Les bouillons prepares avec des peptones commercjales,

Ce procede n'est applicable qu'a des liquides froids. Ver-

C.-METHODES ELEOTROMETRIQUE ET OOLORIMETRIQUE

Les methodes au tournesol et a la phenolphtaleine ont

Vne solution l~O d'acide a une concentration en ions H

DETERMINATiON DE LA CONCENTRATION EN iONS H+

Deux m61hooes peuvent eire utilisees pour determiner

Ln il1eth~d~ electtometriqU'e est ta }:lIu'l\ 'e"lftte, mais

toxines microbienrtes, generalernent tres sensibles aux