Imprimé 

par ALGERIE CERIST le vendredi 12 juin 2015

Biologie médicale
[90­10­0675]

5'nucléotidase

Pascale Clerc­Renaud : Biologiste des Hôpitaux
laboratoire de biochimie pédiatrique, hôpital Debrousse, 29, rue Sœur­Bouvier, 69005 Lyon  France

Résumé
La  5'nucléotidase  ou  5'ribonucléotide  phosphohydrolase  (EC  3.1.3.5)  est  une  phosphomonoester
hydrolase  hydrolysant  spécifiquement  la  liaison  monoester  entre  l'hydroxyle  en  5'  du  ribose  (ou  du
désoxyribose) et le groupement phosphate du nucléotide. L'activité 5'nucléotidase est présente dans
de nombreux tissus. C'est une protéine principalement membranaire. Dans le foie, elle est localisée au
niveau  de  la  membrane  des  cellules  épithéliales  des  canalicules  biliaires  et  des  sinusoïdes
centrolobulaires  et  libérée  dans  le  sang  au  cours  d'affections  hépatobiliaires  d'origine  cholestatique.
Dans ce type d'affections, l'augmentation de son activité dans le sérum s'accompagne généralement
d'une  élévation  simultanée  de  la  phosphatase  alcaline  (PAL).  La  spécificité  hépatique  de  la
5'nucléotidase  lui  confère  une  valeur  discriminante  face  à  une  hyperphosphatasémie  qui  peut  être
d'origine  hépatique,  osseuse,  placentaire  ou  intestinale.  La  mesure  de  son  activité  dans  le  sérum
trouve son intérêt, en pédiatrie, en médecine adulte, au cours de la grossesse et en cancérologie. Sa
détermination  est  utile  au  diagnostic  de  cholestase,  à  la  recherche  de  métastases  hépatiques,  à  la
détection et au suivi des atteintes hépatobiliaires secondaires aux greffes de moelle osseuse.

© 2003  Elsevier SAS. Tous droits réservés.

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INTÉRÊT PHYSIOPATHOLOGIQUE

La 5'nucléotidase (5'Nu) est présente dans de très nombreux tissus humains (foie, rein, intestin, tissu
nerveux,  muscle,  hypophyse,  testicule,  rétine,  poumons,  placenta)  ainsi  que  dans  les  éléments
figurés du sang (érythrocytes et lymphocytes) et dans le sérum. La 5'Nu est essentiellement localisée
au niveau de la membrane plasmique des cellules. Elle est également présente, à un degré moindre,
dans la mitochondrie, l'appareil de Golgi, le lysosome et le cytosol  [14].

Il  existe  plusieurs  formes  moléculaires  se  différenciant  par  leur  localisation  cellulaire  :  une  forme
membranaire  ou  ecto  5'Nu,  liée  à  la  membrane  par  l'intermédiaire  d'un  groupement  glycosyl
phosphatidyl inositol (GPI), une forme soluble membranaire et deux formes cytosoliques  [16].

Le rôle de l'ecto 5'Nu est d'hydrolyser les nucléotides extracellulaires en nucléosides (adénosine) qui
peuvent franchir la barrière cellulaire et alimenter le pool cytosolique des nucléosides puriques  [4].

Dans  le  foie,  la  5'Nu  est  localisée  au  niveau  des  microvillosités  de  la  membrane  plasmique  de
l'hépatocyte  bordant  les  canalicules  biliaires,  au  niveau  de  l'endothélium  des  vaisseaux
centrolobulaires et portaux, dans la paroi des sinusoïdes et dans les cellules de Kupffer.
La libération de la 5'Nu dans le sérum au cours de pathologies hépatobiliaires cholestatiques résulte
de  l'action  détergente  des  acides  biliaires,  associée  à  un  clivage  enzymatique  de  la  forme
membranaire.  L'augmentation  de  son  activité  dans  le  sérum  s'accompagne  généralement  d'une
élévation  concomitante  de  la  phosphatase  alcaline  (PAL).  La  PAL  et  la  gammaglutamyl  transférase
(GGT)  ont  la  même  localisation  subcellulaire.  Leurs  différents  mécanismes  de  libération  pourraient
expliquer  la  dissociation  entre  les  activités  sériques  de  la  5'Nu  et  de  la  PAL  lors  des  atteintes
hépatiques au cours de thérapeutiques hépatotoxiques  [15].

La spécificité hépatique de la 5'Nu rend sa détermination utile face à une hyperphosphatasémie qui
peut être d'origine hépatique, osseuse, placentaire ou intestinale  [7].

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ÉTAPE PRÉANALYTIQUE

Milieu biologique
L'activité 5'Nu est mesurée dans le sérum.

Conditions de conservation
La stabilité de la 5'Nu dans le sérum est de : 7 jours à + 4 °C, 15 jours à ­20 °C, 6 mois à ­80 °C.

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TECHNIQUES DE DOSAGE

Technique de référence
Il n'en existe pas.

Technique recommandée
La SFBC (Société française de biologie chimique) a proposé un technique recommandée à 30 °C pour
laquelle il n'existe pas de réactif commercialisé  [6].

Le principe de mesure utilise comme substrat, le 5'inosine­monophosphate (5'IMP) et met en jeu cinq
réactions  successives    [8] (fig  1).  L'activité  catalytique  de  la  5'Nu  est  déterminée  en  mesurant  la
vitesse d'apparition du NADPH à 340 nm. Le 2­glycérophosphate, hydrolysé préférentiellement par la
phosphatase alcaline, est utilisé comme substrat de « diversion », à concentration très supérieure à
celle du 5'IMP.

Techniques utilisées
­  Techniques  utilisant  le  même  schéma  réactionnel  que  la  technique  recommandée  mais  procédant
au dosage du peroxyde d'hydrogène par une réaction colorimétrique faisant appel à une peroxydase et
un  chromogène    [3].  Cette  technique  est  fiable,  automatisable  et  fournit  des  résultats  similaires  à
ceux  obtenus  avec  la  technique  recommandée  par  la  SFBC  (réactifs  prêts  à  l'emploi  commercialisés
®
selon ce principe : Enzyline 5'Nu optimisé , BioMérieux).

­  Techniques  utilisant  l'adénosine  5'monophosphate  comme  substrat,  dont  le  produit  d'hydrolyse,
l'adénosine, est transformé en ammonium par action d'une adénosine désaminase. L'ion ammonium
est  ensuite  dosé  à  340  nm  par  action  de  la  glutamate  déshydrogénase    [1]  (Réactif  5'nucléotidase
 ®
Sigma , Eurobio).

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INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

Variations physiologiques
La  5'Nu  ne  présente  pas  de  variation  en  fonction  de  l'âge  et  du  sexe.  Son  activité  augmente
légèrement au cours des 2e et 3e trimestres de la grossesse  [2].

Valeurs usuelles
Chez l'enfant et l'adulte, la limite supérieure de la normale est :

7 U/L à 30 °C selon la technique SFBC;
5 U/L à 30 °C et 9 U/L à 37 °C avec le réactif BioMérieux;
10 U/L à 30 °C avec le réactif Sigma.

Variations pathologiques
Les valeurs de l'activité de la 5'Nu doivent en général être interprétées par rapport à celles de la PAL
 [10, 11, 12].

5'Nu  normale  associée  à  une  augmentation  de  la  PAL  :  atteinte  osseuse,  période  de
croissance chez l'enfant, sujet âgé et senescence, atteintes intestinales, grossesse au cours
des 2e et 3e trimestres.
5'Nu  et  PAL  augmentées  :  dans  les  cholestases  hépatiques  :  cholestase  intrahépatique
anictérique,  hépatite  cholestatique,  cirrhose  biliaire  primitive    [13],  cholestase  lithiasique,
tumeurs hépatiques, cancer du pancréas.
5'Nu  augmentée  avec  une  PAL  normale  ou  modérément  augmentée  :  hépatopathie
secondaire  à  une  greffe  de  moelle  osseuse  où  l'élévation  de  l'activité  5'Nu  est  précoce  et
importante  [5]. Elle peut atteindre 20 fois la limite supérieure de la normale ou davantage.

La  spécificité  hépatique  de  la  5'Nu  en  fait  un  bon  test  de  diagnostic  de  cholestase  au  cours  de  la
grossesse, de la croissance et dans les affections osseuses. De plus, c'est un marqueur spécifique des
métastases hépatiques mais qui manque de sensibilité par rapport à la GGT  [9].

Références
[1] Arkesteijn CL A kinetic method for serum 5'nucleotidase using stabilized glutamate deshydrogenase. J
Clin Chem Clin Biochem 1976 ; 14 : 155­
[2] Bacq  Y,  Zarka  O,  Brechot  JF,  Mariotte  N,  Vol  S,  Tichet  J  ,  et  al.  Liver  function  tests  in  normal
pregnancy:  a  prospective  study  of  103  pregnant  women  and  103  matched
controls. Hepatology 1996 ; 23 : 1030­1034 [crossref]
[3] Bertrand  A,  Buret  J  A  one­step  determination  of  serum  5'nucleotidase  using  a  centrifugal
analyzer. Clin Chim Acta 1982 ; 199 : 275­285 [crossref]
[4] Che  M,  Gatmaitan  Z,  Arias  IM  Ectonucleotidases,  purine  nucleoside  transporter,  and  function  of  the
bile canalicular plasma membrane ofthe hepatocyte. FASEB J 1997 ; 11 : 101­108
[5] Clerc­Renaud P, Souillet G, Lahet C, Sotta C, Mathieu M, Mousson B Serum 5'nucleotidase and alkaline
phosphatase  activities  after  high  dose  chemotherapy  and  bone  marrow  transplantation  in  cases  of
malignancy in children. Ann Biol Clin 1995 ; 53 : 125­130
[6] Commission  Enzymologie  SFBC.  Proposition  de  recommandation  pour  la  mesure  de  la  concentration
catalytique de la 5'nucléotidase dans le sérum à 30° C. ISB 1987; 5: 340­352
[7] Dixon TF, Purdom M Serum 5'­nucleotidase. J Clin Pathol 1954 ; 7 : 341­343 [crossref]
[8] Heinz F, Pilz R, Reckel S, Kalden JR, Haeckel R A new spectrophotometric method for the determination
of 5'nucleotidase. J Clin Chem Clin Biochem 1980 ; 18 : 781­788 [crossref]
 [9] Kim  NK,  Yasmineh  WG,  Freier  EF,  Goldman  AI,  Theologides  A    Value  of  alkaline  phosphatase,
5'nucleotidase,  gamma­glutamyltransferase  and  glutamate  dehydrogenase  activity  measurements
(single and combined) in serum in diagnosis of metastasis to the liver. Clin Chem 1977 ; 23 : 2034­
2038
[10] Metman EH Étude clinique comparative des phosphatases alcalines et de la 5'nucléotidase sériques en
pathologie hépatobiliaire. À propos de 544 dosages couplés. Rev Fr Gastroentérol 1975 ; 107 : 7­21
[11] Mousson B, Vassault A, Clerc­Renaud  P,  Labbé  D,  Sotta  C,  Lahet  C  ,  et  al.  Enquête  sur  l'intérêt  de  la
mesure de la 5'nucléotidase du sérum dans l'exploration hépatobiliaire. ISB 1991 ; 17 : 187­188
[12] Reichling JJ, Kaplan MM Clinical use of serum enzymes in liver disease. Dig Dis Sci 1988 ; 33 : 1601­
1614 [crossref]
[13] Sapey T, Mendler MH, Guyader D, Morio O, Corbinais S, Deugnier Y , et al. Respective value of alkaline
phosphatase,  gamma­glutamyl  transpeptidase  and  5'nucleotidase  serum  activity  in  the  diagnosis  of
cholestasis: a prospective study of 80 patients. J Clin Gastroenterol 2000 ; 30 : 259­263 [crossref]
[14] Sunderman FW The clinical biochemistry of 5'nucleotidase. Ann Clin Lab Sci 1990 ; 20 : 123­139
[15] Zekri M, Harb J, Bernard S, Poirier G, Devaux C, Meflah  K  Differences  in  the  release  of  5'nucleotidase
and  alkaline  phosphatase  from  plasma  membrane  of  several  cell  types  by  PI­PLC.  Comp  Biochem
Physiol 1989 ; 93 : 673­679 [crossref]
[16] Zimmermann  H  5'Nucleotidase:  molecular  structure  and  functional  aspects.  Biochem
J 1992 ; 285 : 345­365

© 2003  Elsevier SAS. Tous droits réservés.

Fig. 1 :

Fig. 1 :

Principe de mesure de l'activité 5'nucléotidase selon la technique recommandée par la SFBC.
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