DiaSorin S.p.A.

Via Crescentino snc - 13040 Saluggia (VC) - Italy

|
www.diasorin.com

Modifications : § 1, 4, 7, 8, 10, 11, 13, 14, 15

Suppressions : § 8, 10, 12

LIAISON® ACTH ([REF] 313221)

1. UTILISATION
Le test LIAISON® ACTH utilise la technologie immunoluminométrique (CLIA) pour la détection quantitative in vitro de l'hormone adrénocorticotrope
(ACTH) dans les échantillons congelés de plasma humain sur EDTA.
La détection de l'ACTH combinée à d'autres analyses cliniques et diagnostics est particulièrement indiquée lors de l'étude des pathologies
surrénales chez l'homme. Le dosage est un test automatisé sur les automates de la gamme LIAISON® Analyzer*.

2. INTÉRÊT CLINIQUE
L'hormone adrénocorticotrope ou corticotropine (ACTH) est un polypeptide formé de 39 acides aminés. Elle est sécrétée par le lobe antérieur
de l'hypophyse (1, 2).
L'ACTH stimule les glandes surrénales et favorise la sécrétion d'hormones glucocorticoïdes comme le cortisol. Elle exerce un certain contrôle
sur la sécrétion de l'aldostérone, autre hormone stéroïde sécrétée par le cortex des glandes surrénales.
L'hypothalamus contrôle la synthèse de l'ACTH hypophysaire par le biais de la CRH (corticolibérine), l'hormone qui stimule la synthèse de
l'ACTH, un peptide formé de 41 acides aminés et sécrété en réaction à la douleur, l'anxiété ou le stress par l'intermédiaire de neurotransmetteurs.
La sécrétion de CRH est inhibée par les glucocorticoïdes par un mécanisme de feed-back négatif (rétroaction) (2). Le cortisol exerce une action
négative sur la sécrétion d'ACTH au niveau de l'hypophyse et de l'hypothalamus.
La sécrétion d'ACTH suit un rythme circadien contrôlé par divers facteurs, dont la lumière. Parmi les conditions qui peuvent altérer le rythme
circadien normal figurent le syndrome de Cushing, la sécrétion d'ACTH ectopique, le stress physiologique et les interventions chirurgicales (3, 4).
Les variations de la sécrétion qui apparaissent la journée sont bien connues : la fréquence des pics de sécrétion d'ACTH augmente après trois
à cinq heures de sommeil et atteint son maximum avant le réveil et pendant une heure après le réveil. En raison du rythme circadien,
les échantillons de plasma pour le dosage de l'ACTH sont généralement prélevés entre 8 et 10 heures du matin. La mise en évidence des patients
atteints du syndrome de Cushing par rapport aux sujets sains est possible grâce aux échantillons prélevés le soir (entre 22 heures et minuit).
L'ACTH, comme d'autres hormones, est synthétisée par l'hypophyse. Le précurseur de l'ACTH est une grande protéine, la proopiomélanocortine
(POMC), synthétisée et donc hydrolysée par protéolyse en fragments, notamment la lipotropine (précurseur de la bêta-endorphine et de la mét-
enképhaline) et la MSH (mélanostimuline).
La détection de l'ACTH dans le plasma permet le diagnostic des pathologies de l'axe hypothalamus-hypophyse-cortex surrénal.

Une augmentation des niveaux d'ACTH est observée Une diminution des niveaux d'ACTH est observée
Maladie de Cushing hypophysaire (hypercortisolisme secondaire) Adénome surrénal (syndrome de Cushing primaire)
Maladie d'Addison (hypocortisolisme) Insuffisance surrénale secondaire
Tumeurs autonomes qui sécrètent l'ACTH (syndrome de l'ACTH ectopique)

Le syndrome le plus important impliquant les glucocorticoïdes est le syndrome de Cushing secondaire ou hyperadrénocorticisme qui fait état
d'une augmentation des niveaux d'ACTH. Abstraction faite de l'administration de glucocorticoïdes pour raisons thérapeutiques, le syndrome
de Cushing peut être causé par une hyperplasie surrénale bilatérale (due à une hypersécrétion d'ACTH hypophysaire et appelée maladie de
Cushing), un adénome hypophysaire ou une hyperplasie corticotrope.
Le diagnostic en laboratoire de la maladie de Cushing est effectué par des tests de stimulation et de suppression comme l'administration de
fortes doses de déxaméthasone (qui donne lieu à une suppression de la sécrétion d'ACTH et de cortisol), l'administration de faibles doses de
déxaméthasone, l'augmentation de la réaction du cortisol en présence de métyrapone et des niveaux d'ACTH normaux et élevés.
Le syndrome de Nelson implique également une augmentation des niveaux d'ACTH. Il s'agit d'une maladie plutôt rare qui se déclare chez 15
à 25 % des patients ayant subi une surrénalectomie suite à la maladie de Cushing. Elle se caractérise par une sécrétion hormonale anormale,
un grossissement de l'hypophyse et le développement de gros adénomes invasifs.
Outre l'hypersécrétion du cortex surrénal, les niveaux d'ACTH peuvent être influencés par une insuffisance surrénale (hypocortisolisme).
Dans ces cas, la détermination du cortisol ne permet pas à elle seule de différencier les causes primaires de l'insuffisance surrénale (due au
syndrome d'Addison) des causes secondaires. La détection de l'ACTH est donc utile dans ces cas afin de mieux comprendre le type de
pathologie impliqué.

Maladie Niveau de cortisol Niveau d'ACTH

Maladie de Cushing (tumeur hypophysaire sécrétant l'ACTH) haut haut
ACTH « ectopique » (ACTH sécrétée par une tumeur extra-hypophysaire) haut haut
Tumeur surrénale haut bas
Syndrome d'Addison (dommages surrénaux) bas haut
Hypopituitarisme bas bas

*(LIAISON®, LIAISON® XL et LIAISON® XS)

LIAISON® ACTH ([REF] 313221)

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3. PRINCIPE DU DOSAGE
La méthode pour la détermination quantitative de l'ACTH est un test immunologique sandwich basé sur le principe de l'immunoluminométrie.
Un anticorps monoclonal de souris spécifique (dirigé contre le fragment N-terminal) revête les particules magnétiques (phase solide) ; un autre
anticorps monoclonal (dirigé contre le fragment C-terminal de l'ACTH) est lié à un dérivé de l'isoluminol (conjugué anticorps-isoluminol).
Lors de l'incubation, l'ACTH se trouvant dans les étalons, les échantillons ou les contrôles, lie l'anticorps monoclonal en phase solide.
Ensuite, le conjugué d'anticorps réagit avec l'ACTH déjà liée à la phase solide. Après l’incubation, le matériel non lié est éliminé par un cycle
de lavage.
Ensuite, la réaction de chimiluminescence débute par l’injection automatique des réactifs Starter dans les modules réactionnels. Le signal
lumineux, et par conséquent la quantité de conjugué anticorps-isoluminol, est mesuré par un photomultiplicateur en unités relatives de
luminescence (RLU, relative light units) et est indicatif de la concentration d’ACTH présente dans les étalons, les échantillons ou les contrôles.

4. MATÉRIEL FOURNI
L’ordre des réactifs est le même que celui des compartiments du réactif Integral.
Réactif Integral pour 100 analyses
2,3 mL [SORB] Phase solide : contenant des particules magnétiques, revêtues d’anticorps monoclonal anti-ACTH (souris),
de la SAB (sérum albumine bovine) et de l’azide de sodium à 0,09 %
23,0 mL [CONJ] Conjugué : contenant un anticorps monoclonal anti-ACTH (souris) marqué à l'isoluminol, de la SAB
(sérum albumine bovine) et de l’azide de sodium à 0,09 %
Le conjugué et les particules magnétiques sont fournis prêts à l'emploi.
Les éléments suivants sont inclus dans l'Integral :
3 x 1,5 mL [CAL|1] Étalon 1, bas : contenant l'ACTH humaine dans une solution d'albumine sérique
humaine, et de l'azide de sodium à 0,09 %
3 x 1,5 mL [CAL|2] Étalon 2, haut : contenant l'ACTH humaine dans une solution d'albumine sérique
humaine, et de l'azide de sodium à 0,09 %
8 x blanche [CAL|1] Pour étiqueter les tubes d'étalon aliquoté
Étiquette à code-barres, petite
8 x blanche [CAL|2] Pour étiqueter les tubes d'étalon aliquoté
Étiquette à code-barres, petite
Les étalons sont lyophilisés.

Matériel nécessaire, mais non fourni (relatif au système)

LIAISON® XL Analyzer
LIAISON® Wash/System Liquid ([REF] 319100)
LIAISON® XL Waste Bags ([REF] X0025)
LIAISON® XL Cuvettes ([REF] X0016)
®
LIAISON XL Starter Kit ([REF] 319200) ou
LIAISON® EASY Starter Kit ([__ REF__ ] 319300)
LIAISON® XL Disposable Tips ([REF] X0015) ou
LIAISON® Disposable Tips ([REF] X0055)
LIAISON® Analyzer
LIAISON® Wash/System Liquid ([REF] 319100)
LIAISON® Waste Bags ([REF] 450003)
LIAISON® Module ([REF] 319130)
LIAISON® Starter Kit ([REF] 319102) ou
LIAISON® XL Starter Kit ([REF] 319200) ou
LIAISON® EASY Starter Kit ([__ REF__ ] 319300)
LIAISON® Cleaning Kit ([REF] 310990)
LIAISON® Light Check 12 ([REF] 319150)

LIAISON® XS Analyzer
LIAISON® EASY Wash Buffer ([__ REF__ ] 319301)
LIAISON® EASY System Liquid ([__ REF__ ] 319302)
LIAISON® EASY Waste ([__ REF__ ] X0054)
LIAISON® Cuvettes on Tray ([__ REF__ ] X0053)
LIAISON® EASY Starter Kit ([__ REF__ ] 319300)
LIAISON® Disposable Tips ([__ REF__ ] X0055)
LIAISON® EASY Cleaning Tool ([__ REF__ ] 310996)

Matériel supplémentaire nécessaire

LIAISON® Control ACTH ([REF] 319132)
LIAISON® Endocrinology Diluent ([REF] 319133)

5. PRÉCAUTIONS D’UTILISATION
Réservé à un usage diagnostique in vitro.
Tous les produits d'origine humaine utilisés pour la fabrication des composants de cette trousse ont été analysés et se sont avérés négatifs en
Ag HBs, en anticorps anti-VHC et en anticorps anti-VIH-1, anti-VIH-2. Toutefois, puisqu’il n’existe aucune méthode de test garantissant l'absence
totale d'agents pathogènes, tout matériau d’origine humaine doit être considéré comme potentiellement infectieux et doit être manipulé avec
précaution.

LIAISON® ACTH ([REF] 313221)

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6. RÈGLES DE SÉCURITÉ
Ne pas manger, ni boire, ni fumer ou se maquiller pendant le dosage.
Ne pas pipeter avec la bouche.
Éviter tout contact direct avec l'ensemble du matériel potentiellement infectieux en portant des vêtements de laboratoire, des lunettes de
protection et des gants à usage unique.
Se laver soigneusement les mains à la fin de chaque dosage.
Éviter de provoquer des éclaboussures ou des vaporisations. Si cela arrivait, chaque goutte de réactif biologique doit être nettoyée avec une
solution d'hypochlorite de sodium contenant 0,5 % de chlore actif et le moyen utilisé doit être traité comme un déchet infectieux.
Tous les échantillons et les réactifs contenant du matériel biologique utilisés pour effectuer le test doivent être considérés comme susceptibles
de transmettre des agents infectieux. Les déchets doivent être manipulés avec précaution et être éliminés conformément aux directives du
laboratoire ainsi qu'aux dispositions réglementaires en vigueur dans chaque pays.
Le matériel réutilisable doit être stérilisé de manière appropriée conformément à la législation et aux directives locales.
Vérifier l'efficacité du cycle de stérilisation/décontamination.
Ne pas utiliser de trousses ou de composants dont la date figurant sur l'étiquette est dépassée.
Réactifs contenant de l'azide de sodium (< 0,1 %) [No CE : 247-852-1] :
DIRECTIVE CE n° 1272/2008
EUH 210 - Fiche de données de sécurité disponible
MENTIONS DE DANGER/RISQUE
sur demande

7. PRÉPARATION DES RÉACTIFS

7.1. Réactif Integral
Suivre scrupuleusement les précautions suivantes concernant la manipulation des réactifs :
Remise en suspension des particules magnétiques
Les particules magnétiques doivent être remises en suspension intégralement avant de placer le réactif Integral dans l'automate. Suivre les
étapes indiquées ci-après afin de garantir la mise en suspension complète des particules :
Avant d’ôter les opercules des compartiments, agiter légèrement le compartiment des particules magnétiques à l’aide de la molette jusqu’à ce
que la solution soit marron. Le fait d’agiter horizontalement le réactif Integral doucement et avec soin favorisera la suspension des particules
magnétiques (éviter cependant la formation de mousse). Contrôler visuellement le fond du compartiment des particules magnétiques pour
s’assurer que toutes les particules sédimentées ont été effectivement remises en suspension. Si nécessaire, répéter la procédure jusqu’à ce
que toutes les particules magnétiques aient été remises en suspension. Retirer les opercules et essuyer doucement la surface de chaque
septum pour éliminer le liquide résiduel.
Formation de mousse dans les réactifs
Pour garantir les prestations optimales du réactif Integral, il est indispensable d’éviter toute formation de mousse. Observer les recommandations
suivantes afin d’empêcher la formation de mousse :
Avant toute utilisation, contrôler visuellement les réactifs et notamment les étalons pour exclure la présence de mousse. Si après la remise en
suspension des particules magnétiques il y a formation de mousse, placer le réactif Integral dans l’automate et laisser la mousse se disperser.
Le réactif Integral est prêt à l’emploi lorsqu’il a été laissé au repos à l’intérieur de l’automate, lorsque les particules magnétiques sont
maintenues en agitation automatiquement et que la mousse a été entièrement dispersée.
Placer le réactif Integral dans le compartiment à réactifs de l’automate d’immunoanalyse
Automate LIAISON® Analyzer
Placer le réactif Integral dans le compartiment à réactifs de l'automate d’immunoanalyse, en ayant soin que l’étiquette des codes-barres soit
à gauche et attendre 30 minutes avant utilisation. Pendant cette période, les particules magnétiques sont agitées et remises en suspension
automatiquement.
Se reporter au manuel d’utilisation de l’automate pour charger les échantillons et démarrer le test.
Automates LIAISON® XL Analyzer et LIAISON® XS Analyzer
Les automates LIAISON® XL Analyzer et LIAISON® XS Analyzer sont pourvus d’un dispositif magnétique interne qui favorise la dispersion des
microparticules avant l'insertion d'un réactif Integral dans le compartiment à réactifs de l’automate d’immunoanalyse. Se reporter au manuel
d’utilisation de l’automate d'immunoanalyse pour avoir des renseignements détaillés.
Placer le réactif Integral dans la rainure prévue à cet effet.
Laisser reposer le réactif Integral à l’intérieur du dispositif magnétique à l’état solide pendant au moins 30 secondes (et jusqu’à plusieurs
minutes). Répéter l'opération si nécessaire.
Placer le réactif Integral dans le compartiment à réactifs de l'automate d’immunoanalyse, en ayant soin que l’étiquette soit à gauche et attendre
15 minutes avant utilisation. Pendant cette période, les particules magnétiques sont agitées et remises en suspension automatiquement.
Se reporter au manuel d’utilisation de l’automate pour charger les échantillons et démarrer le test.
7.2. Étalons
Les étalons de la trousse LIAISON® ACTH sont lyophilisés.
Reconstituer chaque flacon à l’aide de 1,5 mL d’eau désionisée ou distillée. Fermer le flacon avec le bouchon en caoutchouc puis le retourner
délicatement à deux reprises pour permettre la reconstitution complète du lyophilisat. Éviter la formation de mousse. Ne pas agiter au vortex.
Laisser reposer les flacons pendant 15 minutes à environ 18-25 °C pour permettre une dissolution complète.
Les valeurs des étalons attribuées aux différents types d'automates LIAISON® Analyzer peuvent différer.
Si nécessaire, aliquoter les étalons comme indiqué au paragraphe 8 et étiqueter les tubes avec les petites étiquettes blanches fournies.

Pour obtenir des détails sur l'utilisation des étalons, consulter le manuel d'utilisation de l’automate d'immunoanalyse.
Consulter le paragraphe 8 pour la conservation des étalons après reconstitution.
7.3. Contrôles
Consulter les instructions de la trousse LIAISON® ACTH Control pour la préparation et la manipulation adéquates des contrôles.

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8. CONSERVATION ET STABILITÉ DES RÉACTIFS
8.1. Réactif Integral
Fermé : Stable à 2-8 °C jusqu’à la date de péremption.
Ouvert et à bord de l’automate d'immunoanalyse ou à 2-8 °C : stable pendant deux (2) semaines.
Au terme de ce délai, il est possible d’utiliser le réactif Integral si les contrôles restent dans les limites attendues.
Toujours utiliser le même automate d'immunoanalyse LIAISON® Analyzer pour un réactif Integral déjà ouvert.
Ne pas congeler.
Le réactif Integral est à conserver verticalement afin de faciliter la remise en suspension des particules magnétiques.
Utiliser le support fourni avec les automates de la gamme LIAISON® Analyzer pour la conservation du réactif Integral en position verticale.
Conserver à l’abri de toute lumière directe.
8.2. Étalons
Lyophilisés : Stables à 2-8 °C jusqu’à la date de péremption.
Reconstitués : Stables pendant 1 jour si conservés entre 2-8 °C.
Congelés : Les parties aliquotes peuvent être conservées à -20 °C pendant 1 mois.
La molécule d'ACTH en solution présente une stabilité limitée en présence de chaleur : ne pas laisser les étalons reconstitués
à température ambiante pendant une durée supérieure à celle de l'utilisation sur les automates de la gamme LIAISON® Analyzer.
Immédiatement après la reconstitution complète, les étalons doivent être testés ou aliquotés pour une période de conservation plus longue.
Aliquoter et congeler les étalons dans des tubes en plastique ou en verre siliconé. Les étalons doivent être utilisés le jour où ils ont été
décongelés. Le volume minimum d’une partie aliquote est de 600 µL (450 µL d’étalon + 150 µL de volume mort).
Les parties aliquotes ne peuvent être congelées et décongelées qu'une seule fois.
Lors de la manipulation des étalons, prendre les précautions nécessaires pour éviter la contamination bactérienne.

9. PRÉLÈVEMENT ET PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS

La molécule d'ACTH se dégrade rapidement suite au prélèvement de l'échantillon ; suivre scrupuleusement les recommandations
suivantes pour la manipulation de l'échantillon.
Le seul type d'échantillon pouvant être utilisé est le plasma humain sur EDTA congelé.
Prélever un échantillon de sang en pratiquant une piqûre intraveineuse. Recueillir l'échantillon dans un tube en verre siliconé, un tube Vacutainer
(bouchon violet) ou équivalent, contenant l'anticoagulant EDTA. Éviter une hémolyse. Placer immédiatement les tubes dans un bain de glace et
conserver au froid.
Une fois l’échantillon prélevé, ne pas attendre plus de 120 minutes avant de centrifuger. Utiliser une centrifugeuse réfrigérée et aliquoter
immédiatement le surnageant pour le surgeler (-20 °C au minimum) dans des tubes en plastique ou en verre siliconé. Le volume minimal de
l’aliquote est de 300 µL.
Avant le dosage, décongeler avec soin, agiter les échantillons décongelés et éliminer les bulles d'air le cas échéant. Les échantillons décongelés
doivent être conservés à 2-8 °C et utilisés dans les 6 heures.
Ne pas utiliser des échantillons fortement hémolysés ou lipémiques, ni des échantillons contenant des particules en suspension ou une
contamination microbienne évidente.
Ne pas utiliser les échantillons congelés.
Éviter les cycles de congélation et de décongélation répétés. Éliminer les résidus de chaque partie aliquote utilisée pour le dosage.
Le volume minimum d’échantillon nécessaire pour une analyse est de 300 µL (150 µL d’échantillon + 150 µL de volume mort).

10. ÉTALONNAGE
L'utilisation des solutions d’étalonnage spécifiques à chaque dosage permet d’ajuster les valeurs mesurées en unités relatives de luminescence
(RLU) sur la courbe maîtresse attribuée. Une solution d’étalonnage permet d’effectuer 6 étalonnages (au total).
Les étalons doivent être utilisés uniquement avec le lot de réactif Integral auquel ils correspondent. Ne pas utiliser d'étalons qui
correspondent à un lot de réactif Integral différent dans le même dosage. Pour garantir la bonne correspondance entre les lots,
le numéro de lot de l'étalon est également imprimé sur l'étiquette du réactif Integral.
Le ré-étalonnage en triplets est obligatoire chaque fois qu’au moins une des conditions suivantes s’applique :
Un nouveau lot de réactifs Integral ou de réactifs Starter est utilisé.
- L’étalonnage précédent a été effectué plus de sept (7) jours auparavant.
- L’automate d’immunoanalyse a subi un entretien.
- Les valeurs des contrôles sont en dehors des limites attendues.
Automate LIAISON® Analyzer : les valeurs des étalons sont enregistrées dans les codes-barres de l’étiquette du réactif Integral.
Automate LIAISON® XL Analyzer : les valeurs des étalons sont enregistrées dans l’étiquette d'identification par radiofréquence (Radio
Frequency IDentification transponder, étiquette RFID) du réactif Integral.
Automate LIAISON® XS Analyzer : les valeurs des étalons sont enregistrées dans l’étiquette d'identification par radiofréquence (Radio
Frequency IDentification transponder, étiquette RFID) du réactif Integral.

11. PROCÉDURE DE DOSAGE

Afin d’assurer les performances optimales du dosage, suivre attentivement les instructions contenues dans le manuel d'utilisation de l’automate
d'immunoanalyse.
Automate LIAISON® Analyzer : tous les paramètres du dosage sont identifiés par les codes-barres figurant sur l’étiquette du réactif Integral.
Si l'étiquette à code-barres ne peut être lue par l'automate d'immunoanalyse, ne pas utiliser le réactif Integral. Ne pas jeter le réactif Integral ;
contacter votre assistance technique DiaSorin locale pour obtenir des instructions.
Automates LIAISON® XL Analyzer et LIAISON® XS Analyzer : tous les paramètres du dosage sont identifiés par les informations codées
dans l'étiquette d'identification par radiofréquence (Radio Frequency IDentification transponder, étiquette RFID) du réactif Integral. Si
l'étiquette RFID ne peut être lue par l'automate d'immunoanalyse, ne pas utiliser le réactif Integral. Ne pas jeter le réactif Integral ; contacter
votre assistance technique DiaSorin locale pour obtenir des instructions.
Se reporter au manuel d’utilisation de l’automate d'immunoanalyse pour obtenir des renseignements détaillés.

LIAISON® ACTH ([REF] 313221)

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L'automate LIAISON® Analyzer exécute les opérations suivantes :
1. Distribution de l’échantillon, de l’étalon et des contrôles dans le module de réaction
2. Distribution des particules magnétiques revêtues (phase solide) et du conjugué
3. Incubation
4. Lavage avec le LIAISON® Wash/System Liquid
5. Ajout du réactif Starter et mesure de la lumière émise
L'automate LIAISON® XL Analyzer exécute les opérations suivantes :
1. Distribution des particules magnétiques revêtues (phase solide) et du conjugué dans la cuvette de réaction
2. Ajout de l’échantillon, de l’étalon et des contrôles
3. Incubation
4. Lavage avec le LIAISON® Wash/System Liquid
5. Ajout du réactif Starter et mesure de la lumière émise
L’automate LIAISON® XS Analyzer exécute les opérations suivantes :
1. Distribution des particules magnétiques revêtues (phase solide) et du conjugué dans la cuvette de réaction
2. Distribution de l’échantillon, de l’étalon ou des contrôles
3. Incubation
4. Lavage avec le LIAISON® EASY Wash Buffer
5. Ajout du réactif Starter et mesure de la lumière émise

12. CONTRÔLE DE QUALITÉ

Les contrôles LIAISON® sont à analyser en simple pour évaluer la performance du test. Le contrôle qualité peut être effectué en utilisant le
sérum de contrôle LIAISON® ou les contrôles dédiés du commerce :
- au moins une fois par jour de travail,
- chaque fois qu’un nouveau réactif Integral est utilisé,
- chaque fois que la trousse est étalonnée,
- chaque fois qu’un nouveau lot de réactifs Starter est utilisé,
- ou conformément aux recommandations ou aux exigences des réglementations locales ou organisations accréditées.
Les valeurs des contrôles doivent être comprises dans les limites attendues : à chaque fois que l'un des contrôles est en dehors des limites
attendues, l’étalonnage doit être refait et les contrôles doivent être testés à nouveau. Si les valeurs des contrôles se trouvent à plusieurs
reprises en dehors des limites prédéfinies après l'étalonnage, le test doit être répété en utilisant un flacon de contrôle neuf. Si les valeurs des
contrôles sont en dehors des limites attendues, les résultats ne sont pas à reporter.
La performance d'autres contrôles doit être évaluée pour s'assurer de leur compatibilité avec ce test avant utilisation. Il est donc essentiel d’établir
les intervalles des valeurs pour le matériel de contrôle de qualité employé.

13. INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

L’automate d’immunoanalyse calcule automatiquement les concentrations d’ACTH des échantillons exprimées en pg/mL. Se reporter au manuel
d’utilisation de l’automate d'immunoanalyse pour avoir des renseignements détaillés.
Les étalons et les contrôles peuvent donner des résultats différents de concentration ou d'unités relatives de luminescence (RLU, relative light
units) sur les automates LIAISON®, LIAISON® XL et LIAISON® XS, mais les résultats des patients sont équivalents.
13.1. Intervalle de dosage :
l’automate d’immunoanalyse calcule automatiquement les concentrations d’ACTH jusqu'à 1500 pg/mL.
Facteur de conversion :
1 pg/mL x 0,2202 = 0,2202 pmol/L
1 pmol/L x 4,5413 = 4,5413 pg/mL

LIAISON® ACTH ([REF] 313221)

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13.2. Intervalle basal de référence :
Pour déterminer l’intervalle de référence du dosage LIAISON® ACTH, une étude clinique a été réalisée sur 589 échantillons prélevés chez des
sujets européens qui se sont présentés au laboratoire pour le dosage de l’ACTH. Les sujets (hommes = 270, femmes = 313, inconnus = 6)
ont été classés comme normaux lors du test exécuté avec une méthode de référence.
Une valeur médiane de 16,3 pg/mL a été observée ainsi que des valeurs basales d’ACTH comprises entre 4,7 et 48,8 pg/mL (5ème et 95ème
percentile respectivement). Chaque laboratoire doit établir ses intervalles basaux de référence.
Échantillons cliniques : Une étude clinique a également été réalisée sur 51 échantillons de patients pathologiques ; l'analyse statistique des
échantillons normaux et pathologiques est illustrée dans le tableau ci-après. Le graphique suivant illustre la corrélation des niveaux cliniques
obtenus sur un total de 640 échantillons prélevés chez des sujets normaux et chez des patients atteints de maladies hypophysaires et de
pathologies surrénales.
Médiane
2,5e e 97,5e Valeur Valeur
Moyenne E.T.** 50
Condition clinique n* percentile percentile minimum maximum
pg/mL pg/mL percentile
pg/mL pg/mL pg/mL pg/mL
pg/mL
Test de suppression à la
15 10,3 15,0 2,5 6,7 46,6 2,4 63,0
dexaméthasone (ST)
Maladie d'Addison (AD) 9 219,1 157,3 62,8 134,3 437,0 59,4 450,0
Syndrome de l’ACTH ectopique (ES) 8 424,6 489,9 143,7 187,7 1381,0 139,0 1500,0
Syndrome de Cushing (CS) 12 116,8 64,7 52,0 103,1 236,1 50,0 240,0
Syndrome de Nelson (NS) 4 729,8 625,9 165,2 632,1 1460,0 155,0 1500,0
Cathétérisme du sinus pétreux (SPC) 3 298,1 67,7 225,9 337,1 337,3 220,0 337,0
Sujets normaux (N) 589 16,3 14,6 3,6 16,3 60,5 1,4 106,1
* nombre de déterminations ** E.T. Écart-type

Pour les abréviations (ST, AD, ES, CS, NS, SPC et N), voir le tableau ci-dessus.

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14. LIMITES DU DOSAGE
Les réactifs de la trousse ne doivent être utilisés que dans les automates de la gamme LIAISON® Analyzer
Les composants individuels des réactifs ne doivent en aucun cas être séparés du réactif Integral.
La trousse ne doit pas être utilisée après la date de péremption figurant sur l'étiquette extérieure.
Afin d’obtenir des résultats fiables, il faut suivre strictement le mode opératoire et effectuer les manipulations de façon appropriée.
La contamination bactérienne des échantillons ou leur inactivation par la chaleur peuvent modifier les résultats du test.
Cependant, un résultat non-pathologique n'exclut pas la possibilité d'une pathologie surrénale et doit être évalué en association avec d'autres
méthodes diagnostiques.
Les résultats du test sont indiqués de façon quantitative. Cependant, le diagnostic d'une pathologie surrénale ne doit pas être établi d'après le
résultat d'un seul dosage, mais il faut prendre en considération les investigations cliniques et l’avis d’un médecin. Toute décision d'ordre
thérapeutique doit être prise au cas par cas.
®
La trousse LIAISON ACTH a été mise au point pour détecter l'analyte sous sa forme intacte et inaltérée. La dégradation de la molécule en
fragments peut altérer les caractéristiques de liaison de l'anticorps et influencer le résultat final. Ces échantillons peuvent fournir des résultats
discordants en fonction des dosages car les effets des altérations dépendent de l'anticorps utilisé.
Bien qu'il existe des agents pouvant neutraliser les anticorps anti-souris (HAMA, human anti-mouse antibodies), des concentrations de HAMA
très élevées peuvent parfois influencer les résultats du dosage.
Les échantillons contenant des niveaux d'ACTH au-delà de l'intervalle de mesure peuvent être préalablement dilués à l'aide du diluant
LIAISON® Endocrinology Diluent ([REF] 319133).
Les réactifs Integral ne peuvent pas être échangés entre les différents types d’automates (LIAISON®, LIAISON® XL et LIAISON® XS). Une fois
qu’un réactif Integral a été introduit dans un type d'automate particulier, il doit toujours être utilisé sur cet automate jusqu’à épuisement.
En raison des problèmes de traçabilité qui découlent de l'affirmation ci-avant, le suivi des patients ne doit pas être effectué sur différents types
d’automates. Il doit toujours être effectué sur le même type d’automate (LIAISON® ou LIAISON® XL ou LIAISON® XS).
Attention : Le test a été mis au point pour le dosage des échantillons congelés de plasma sur EDTA. L'intervalle basal de référence et les
prestations de la trousse ont été obtenus à l'aide d'échantillons congelés de plasma sur EDTA. Au cas où des échantillons frais seraient
utilisés, chaque laboratoire doit établir l'intervalle des valeurs attendues. À titre d'exemple, il est fait état de la corrélation observée entre les
échantillons frais et congelés obtenus à l'aide de la trousse LIAISON® ACTH dans l'étude lors de laquelle les intervalles basaux de référence
ont été établis (consulter le paragraphe Interprétation des Résultats).

Echantillons frais, pg/mL

Les prélèvements de sang ont été conservés au froid pendant 15 minutes.

Les échantillons cliniques présentant de hauts niveaux d'ACTH (au-delà de 20 000 pg/mL) n'ont pas été dosés. Certains ouvrages et articles (1)
font état de cas de syndrome de Nelson avec de hauts niveaux d'ACTH (au-delà de 20 000 pg/mL). Si cette pathologie est suspectée, les valeurs
trouvées dans l'intervalle de mesure doivent être évaluées attentivement pour exclure tout effet crochet (consulter le § 15.4). Il est préconisé de
réitérer le dosage suite à la dilution de l'échantillon.

15. CARACTÉRISTIQUES DU DOSAGE

15.1. Spécificité analytique
La spécificité analytique est définie comme la capacité du test à détecter exactement l'analyte en présence de facteurs pouvant interférer
dans la matrice de l'échantillon (par exemple hémolyse, lipémie, bilirubinémie).
15.2. Interférences
Des études contrôlées sur des facteurs potentiellement interférents ont démontré que les caractéristiques du test ne sont pas modifiées par
des concentrations de bilirubine inférieures à 0,1 mg/mL, d'hémoglobine inférieures à 500 mg/dL ou de triglycérides inférieures à 30 mg/mL.

LIAISON® ACTH ([REF] 313221)

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15.3. Réactions croisées
La présence des molécules suivantes n'a pas fait état d'interférences lors du dosage. Ces molécules sont généralement susceptibles de
provoquer des réactions croisées.
Molécule Quantité ajoutée à l'échantillon, pg/mL % réaction croisée
ACTH (1-10) 250 000 indéterminable
ACTH (1-24) 1 400 0,034
ACTH (18-39) 1 600 0,2
ACTH (11-24) 9 800 0,03
Alpha-MSH 3 000 0,04
Bêta-MSH 2 450 0,06
Bêta-endorphine 49 000 0,01
Somatostatine 9 800 0,09
Neurotensine 9 800 < 0,01
Enképhaline 9 800 < 0,01
15.4. Fidélité avec l'automate LIAISON® Analyzer
Plusieurs échantillons à différentes concentrations d'ACTH ont été testés pour déterminer la répétabilité et la reproductibilité du dosage
(c’est-à-dire, la variabilité intra-essai et inter-essais).
Répétabilité (variabilité intra-essai). Quarante réplicats ont été testés au cours d'une même session d'analyses pour évaluer la répétabilité.
Reproductibilité (variabilité inter-essais). Vingt réplicats ont été testés sur plusieurs jours pour évaluer la reproductibilité, en utilisant deux
lots différents de réactif intégral.
Variabilité intra-essai Variabilité inter-essais
Moyenne Moyenne
CV (%) n* CV (%) n*
(pg/mL) (pg/mL)
20,4 4,9 40 46,3 8,9 20
70,2 2,6 40 262,8 5,5 20
396,7 2,7 40 880,1 7,9 20
*nombre de déterminations
15.5. Fidélité avec l'automate LIAISON® XL Analyzer
Plusieurs échantillons à différentes concentrations d'ACTH ont été testés pour déterminer la répétabilité et la reproductibilité du dosage (c’est-à-dire,
la variabilité intra-essai et inter-essais).
Répétabilité (variabilité intra-essai) : Vingt réplicats ont été testés au cours d'une même session d'analyses pour évaluer la répétabilité.
Reproductibilité (variabilité inter-essais) : Vingt réplicats ont été testés sur 10 jours pour évaluer la reproductibilité.
Variabilité intra-essai Variabilité inter-essais
Moyenne Moyenne
CV (%) n* CV (%) n*
(pg/mL) (pg/mL)
33,7 4,3 20 23,6 5,5 20
56,8 2,4 20 57,2 3,2 20
317,2 2,7 20 255,2 2,6 20
*nombre de déterminations
15.6. Fidélité avec l’automate LIAISON® XS Analyzer
Plusieurs échantillons à différentes concentrations d'ACTH ont été testés pour déterminer la répétabilité et la reproductibilité du dosage (c’est
à dire, la variabilité intra-essai et totale intra-site). Les résultats se réfèrent aux groupes d'échantillons étudiés ; il ne s'agit pas de
caractéristiques garanties car des différences peuvent exister entre les différents laboratoires et lieux géographiques.
Variabilité intra-essai Variabilité inter-essais
Moyenne Moyenne
CV (%) n* CV (%) n*
(pg/mL) (pg/mL)
28,5 5,3% 90 28,5 6,7% 90
57,9 2,8% 90 57,9 6,1% 90
65,5 2,7% 90 65,5 3,9% 90
161,5 1,6% 90 161,5 4,5% 90
231,5 1,9% 90 231,5 5,2% 90
677,0 2,0% 90 677,0 5,2% 90
41,0 3,7% 90 41,0 5,4% 90
273,9 2,1% 90 273,9 6,0% 90
* nombre de déterminations
15.7. Justesse
La justesse du dosage a été contrôlée au moyen du test de dilution et de surcharge.

LIAISON® ACTH ([REF] 313221)

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15.8. Test de dilution
Le test de dilution a été réalisé sur des échantillons de plasma purs ou dilués en série à l’aide du diluant pour échantillons. Une analyse de
régression linéaire des concentrations en ACTH mesurées par rapport aux concentrations attendues a été réalisée. Les coefficients de
corrélation (r) oscillaient entre 0,993 et 1,000.
Valeur mesurée Valeur attendue Récupération
Dilution
(pg/mL) (pg/mL) (%)
1:2 180,0 168,1 107
1:4 87,2 84,0 104
1:8 46,3 42,0 110
1 : 16 23,9 21,0 114
15.9. Test de surcharge
Des échantillons de plasma ont été dosés après une adjonction progressive d'ACTH afin d'évaluer la surcharge du test LIAISON® ACTH.
Concentration initiale de l'échantillon 1 : 6,76 pg/mL et de l'échantillon 2 : 60,73 pg/mL.
Échantillon 1 Échantillon 2
Valeur mesurée Valeur attendue Récupération Valeur mesurée Valeur attendue Récupération
(pg/mL) (pg/mL) (%) (pg/mL) (pg/mL) (%)
123,60 119,00 104 336,9 318,9 106
95,86 96,55 99 291,7 267,3 109
76,68 74,10 103 233,0 215,6 108
49,48 51,66 96 173,7 164,0 106
27,07 29,20 93 115,8 112,4 103
15.10. Effet crochet
L'effet crochet à fortes doses (HDH, high-dose hook effect) a été déterminé en ajoutant l'ACTH à un pool de plasma humain jusqu'à une
concentration maximale de 155 000 pg/mL.
Lorsque des échantillons contenant des concentrations très élevées d'analyte sont dosés, l'effet crochet peut minimiser les concentrations en
donnant des valeurs inférieures aux valeurs réelles. La présence d’un effet crochet a été évaluée en analysant 5 échantillons à haut titre en
ACTH. Tous les échantillons ont donné des valeurs de concentration au-dessus de l’intervalle de mesure. Ces résultats indiquent l’absence
de classification erronée des échantillons.
15.11. Sensibilité analytique et fonctionnelle
Sensibilité analytique :
La sensibilité analytique est définie comme étant la dose minimale détectable d’analyte qui peut se distinguer du point zéro ; c’est-à-dire
2 écarts type au-dessus de zéro.
Sensibilité fonctionnelle :
Sensibilité fonctionnelle (définie comme étant la concentration minimale d’analytes qui peut être déterminée avec une variabilité inter-essais
< 20 %) :
Sensibilité analytique Sensibilité fonctionnelle
(Limite de détection) (Limite de quantification)
Gamme d'automates
1,6 pg/mL 3,8 pg/mL
LIAISON® Analyzer
15.12. Exactitude
L’exactitude du test LIAISON® ACTH a été évaluée dans 118 échantillons par rapport à une méthode non isotopique utilisée comme référence.
La corrélation suivante a été mise en lumière :
LIAISON® ACTH = 0,894 x test ACTH non isotopique 1,32 avec un coefficient de corrélation r = 0,935.
Les valeurs nominales des étalons du test LIAISON® ACTH ont été assignées de manière à représenter les données d’exactitude indiquées.
Pour convertir les valeurs des étalons en valeurs standard internationales WHO 74/555, il convient d'utiliser un coefficient de multiplication de 1,85.

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16. BIBLIOGRAPHIE
1. Williams, Textbook of Endocrinology, 9th Edition, Saunders
2. Harrison´s Principle of Internal Medicine, XXth Edition
3. Reader, S.C.J., Alaghband-Zadeh, R. Daly and W.R. Robertson, Journal of Endocrinology, 92:443 (1982)
4. Krieger, D.T., The Medical Clinics of North America, 62:251 (1978)
5. Odell, W.D., et al., The Use of ACTH and Cortisol Assays in the Diagnosis of Endocrine Disorders

LIAISON® ACTH ([REF] 313221)

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