Helicobacter pylori

Introduction
qHelicobacter sont des bacilles à Gram négatif de
forme spiralée de la famille des Helicobacteraceae.

qPrésence de bactéries spiralées dans l'estomac

rapportée dès le XIXe siècle

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 Historique Prix Nobel de
médecine 2005

• 1982: Marshal et Warren , 1ère culture de H.pylori (classé dans Campylo)

et description de son implication dans l’ulcère gastrique ,
• 1989 nouveau genre appelé Helicoacter et l’espèce est alors appelée
Helicobacter pylori 3
 Taxonomie/Classification

ØPhylum: Proteobacteria

ØClasse : Epsilonproteobacteria
ØOrdre: Campylobacterales
ØFamille : Helicobacteraceae.
ØGenre : Helicobacter
ØEspèce :

Helicobacter pylori

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 Morphologiques

• Bacilles a Gram négatif

• 0,5 a 1 μm sur 2 a 4 μm
• Forme spiralée
• Mobile par 5 a 7 flagelles polaires
engainés Image microscopie
electronique

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 Habitat
• Réservoir: homme comme
réservoir exclusif

• Habitat: L'estomac de
l'homme dans la muqueuse
gastrique en association
avec les cellules
épithéliale

• propriétés uniques de
survivre dans l’estomac, un
organe pourtant hostile... 6
 Transmission
qTransmission strictement interhumaine, précoce dans
l'enfance et intrafamiliale.

qTrois voies de transmission sont suspectées :

qgastro-orale, oro-orale et féco-orale

qLa transmission peut être aussi iatrogénique, par

l’utilisation d’endoscopes sans désinfection adéquate.

qinfection persiste souvent toute la vie

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Répartition géographique et
prévalence:Michael D et al, 2017

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Facteurs favorisants

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Pouvoir pathogène

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 DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE:

2 Méthodes: Invasives et non invasives

- Invasives: Diagnostic bactériologique, test à l’uréase, PCR,

anatomopathologie
- Non invasives: Test respiratoire, Détection d’antigène,
sérologie

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Méthodes invasives

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 Prélèvements
qEffectué pendant l’endoscopie

• Deux biopsies recommandées pour une meilleure sensibilité:

antrale et fundique

qTransport/Conservation

• Vite et immédiatement au laboratoire dans du sérum

physiologique stérile et ensemencées dans les 2 heures qui
suivent le prélèvement.

• Milieux de transports : bouillon Brucelle avec 20 % de

glycerol, milieu de transport de Stuart (Oxoid), Portagerm®
pylori (bioMerieux).
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 Biopsie
- Broyage des biopsies
• Broyées a l'aide d'un pilon à usage unique adapte aux
microtubes, ou bien dilacérées au scalpel dans une boite de
pétri stérile
- Examen direct

• Le produit de broyage est étalé en frottis sur une lame de

microscope et coloré par la méthode de gram(fushine au lieu
safarine)
• H. Pylori apparait comme une bactérie incurvée, spiralée, à gram
négatif parfois regroupées en banc de poisson.

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 Test à l'uréase
qMettre le produit de broyage en
suspension dans 100 μl de milieu
urée indole et placée a 37 °C.

• Détecte la bactérie par son activité

uréasique avec modification de la
couleur de l’indicateur dans un
délai de 60 minutes

• Faible Sensibilité (68%)

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 Culture
Milieux des cultures :

• Ensemencement du
broyat sur le milieu

• Gélose enrichie au sang

(10 %): Milieu Brucella ou
Mueller-Hinton ou
Columbia

• Milieu sélectif: Milieu Helicobacter pylori sur gélose au sang.

Campylobacter (mélange
de Skirrow ) 19
 Incubation
qConditions/Exigences de culture

• Atmosphère micro aérophile: 3 à 6% O2 et 6 à 10% CO2)

• Température optimale de croissance 37°C

• En subculture, en atmosphère enrichie en CO2 à 10 %

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 Culture
Aspects des cultures :

• En primoculture, les colonies

sont claires, petites, rondes
et luisantes en 3 a 12 jours.

• En subculture, la croissance
est plus rapide, en 2 a 4 jours

Helicobacter pylori sur gélose au sang.

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 Identification
Basé sur :

• exigences culturales (micro-aérophilie, gélose au sang,

milieu sélectif),

• aspect spiralé à l'observation microscopique après

coloration de Gram d'une colonie étalée sur une lame
permettent d'identifier Helicobacter.

• Mini-galérie Campylobacter: la présence d'une activité

catalasique, oxydasique et uréasique forte permet
l'identification de l'espèce pylori.

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 Caractères biochimiques
• Micro aérophile

• N’utilise pas de sucre

• Catalase positive,

• Oxydase positive

• Uréase positive

• Gamma glutamate transférase positive

• Phosphatase Alcaline positive

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Méthodes non invasives

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 Test respiratoire à l'urée marquée
• Evalue la présence de la bactérie quelle que soit sa
situation dans la cavité gastrique.

• Sa sensibilité dépasse 90 %.

• Basé sur l'activité uréasique de la bactérie.

• Détecte la production de CO2 marqué au carbone 13 à

partir d'urée 13C ingérée par le sujet.

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 Diagnostic immunologique direct
• Principe: détection d'antigènes d'H. pylori dans les selles
par une technique ELISA ou immunochromatographique
utilisant des AC monoclonaux (+ performant) ou
polyclonaux

• Conditions: avant le ttt ou 4Semaines après l’arrêt

thérapeutique

• Le test peut servir tant au diagnostic primaire qu'au

contrôle d‘éradication
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 Antibiogramme

• Milieu : Gélose de Mueller-Hinton additionnée de 10 %

de sang de cheval ou à défaut gélose de Mueller-Hinton
+ 5% de sang défibriné de cheval et 20 mg/L de β-NAD
(MH-F).

• Inoculum : 3 McF.Vérifier l’absence de formes cocoïdes.

• Incubation : micro-aérobiose, 35±2ºC, 48 à 72H.

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 Antibiogramme: Résistance naturelle

• polymyxine,

• acide nalidixique,

• cotrimoxazole

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 Antibiogramme

qATB à tester: q Difficultés:

• Clarithromycine, § la croissance lente de cette

bactérie fastidieuse
• Levofloxacine,
§ et propension de cette
• Rifamycine,
bactérie a évoluer rapidement
• Tétracycline sous sa forme coccoïde non
cultivable =˃ long délai de
résultat ( 12 jours)
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Antibiogramme

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 Résistance acquise

qAcquisition par mutation génétique, des résistances à

tous les ATB utilisés pour son traitement (clarithromycine
23 %, métronidazole 53%)

qRésistance à l’amoxicilline est exceptionnelle.

qD’où son utilisation peu associée à des échecs

thérapeutiques

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Profil de Résistance de H.pylori (France)

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 Conclusion
qH. pylori : pathogène très répandu,
qmais il reste une bactérie très peu recherchée
dans nos pays du fait des conditions difficiles
du recueil des échantillons pour le diagnostic
étiologique
qFréquente résistance aux molécules d’intérêt
thérapeutique
qAmoxicilline généralement épargné
qBismuth en cas d’échec?

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