rapie (2008) 6: 160164 Phytothe

Springer 2008

DOI 10.1007/s10298-008-0307-1

Article original Pharmacognosie

tude de six huiles essentielles : composition chimique E antibacte rienne1 et activite

J. Kaloustian 1 , J. Chevalier 2 , C. Mikail 1 , M. Martino 2 , L. Abou 1 , M.-F. Vergnes 1
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de Pharmacie, Universite de la Me diterrane e, 27, boulevard Jean-Moulin, Laboratoire de chimie analytique, qualitologie, nutrition, Faculte de la F-13385 Marseille Cedex 05, France ; UMR INSERM 476 INRA 1260 Nutrition humaine et lipides , F-13385 Marseille, France ; Universite diterrane e (Aix-Marseille 2), Faculte de me decine, IPHM-IFR 125, F-13385 Marseille, France Me 2 s de me decine et de pharmacie, Universite de la Me diterrane e, 27, Boulevard Jean-Moulin, F-13385 Marseille Cedex 05, France UMR-MD-1, Faculte Correspondance : e-mail : Jacques.Kaloustian@pharmacie.univ-mrs.fr

es en me decine sume : Les huiles essentielles sont utilise Re s antiseptiques. Au cours traditionnelle pour leurs activite ce dents, le genre Thymus avait montre de de travaux pre sultats comme antifongique. Le tude a e te pourbons re antibacte rienne. Six huiles essentielles suivie sur lactivite (Lavandula angustifolia, Lavandula latifolia, Origanum movulgare, Rosmarinus officinalis, Thymus vulgaris che motype thymol) ont e te type carvacrol, Thymus zygis che es sur deux souches : Escherichia coli et Staphylococteste cus aureus. Pour la souche Escherichia coli, les huiles ` thymol sont les plus essentielles dorigan et de thym a efficaces. Pour la souche Staphylococcus aureus, on note une ; lhuile essentielle dorigan est la plus moindre efficacite nols pre sents dans les huiles essentielles active. Ce sont les phe sentent une bonne activite antibacte rienne. qui pre s : CPG-SM Origan Thym Escherichia coli Mots cle Staphylococcus aureus

strain Staphylococcus aureus we observed little effect: essential oil of oregano was the more active. Phenols present in essential oils have a good antibacterial activity. Keywords: GC-MS Oregano Thyme Escherichia coli Staphylococcus aureus

Introduction
que les huiles essentielles Il est connu depuis lAntiquite sentent une activite antiseptique non ne gligeable. (HE) pre es dans de nombreux domaines : pharmaElles sont utilise ` la fin du XIXe et au tique, agro-alimentaire... A cie, cosme e ` cle, plusieurs travaux scientifiques but du XX sie de relataient de laction antiseptique de plusieurs HE [3, 4, rapie appara t en 1937 [9]. 5, 22]. Le terme daromathe thode de mesure in vitro du Laromatogramme est une me rien des huiles essentielles. Cest le quipouvoir antibacte ` les antibiotiques sont valent dun antibiogramme ou s par les HE [2, 14]. Plusieurs HE pre sentent un remplace rien e leve [2] : origan dEspagne, thym pouvoir antibacte (Thymus vulgaris), cannelle (Cinnamomum zeylanicum), sarriette (Satureia montana), girofle (Eugenia caryophyl` dautres qui ont une activite moyenne : lata), par rapport a pin (Pinus sylvestris), cajeput (Melaleuca leucadendron), eucalyptus (Eucalyptus globulus), lavande (Lavandula ranium rosat officinalis), myrthe (Myrtus communis), ge (Pelargonium graveolens). Les HE sont connues pour leur antibacte rienne, notamment dans les maladies activite galement contre Escherichia coli, respiratoires mais e Salmonella enterica... [1, 6-8, 16, 26, 27, 30-32]. Les HE sentant une bonne activite antibacte rienne sont aussi pre de bons antifongiques et antimycosiques [24, 25].

Study of six essential oils: chemical composition and antibacterial activity

Abstract: Essential oils are used in traditional medicine for their antiseptic action. During previous studies, the Thymus genus had shown good results as an antifungal. Research continued into its antibacterial activity. Six essential oils (Lavandula angustifolia, Lavandula latifolia, Origanum vulgare, Rosmarinus officinalis, Thymus vulgaris chemotype carvacrol, Thymus zygis chemotype thymol) were tested on two strains: Escherichia coli and Staphylcoccus aureus. Essential oils of oregano and thyme with thymol were most effective with respect to the strain Escherichia coli. For the
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` me sente e au 9e rapie et Plantes Me dicinales, 16-18 mars 2007, Grasse Communication pre Symposium International dAromathe

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montre lactivite antiCertains dentre nous avaient de fongique de plusieurs huiles essentielles, notamment celles qui proviennent du genre Thymus, en synergie avec lamphote `-vis de Candida albicans [10-13]. Cette e tude a e te ricine B vis-a valuation de lactivite antibacte rienne. poursuivie par le Six huiles essentielles (Lavandula angustifolia, Lavandula latifolia, Origanum vulgare, Rosmarinus officinalis, Thymus motype carvacrol, Thymus zygis che motype vulgaris che te teste es sur deux souches : Escherichia coli thymol) ont e rie Gram ne gative) et Staphylcoccus aureus (bacte rie (bacte alable, les diffe rents e chantillons ont Gram positive). Au pre te analyse s par chromatographie en phase gazeuse couple e a ` e trie de masse (CPG-SM), selon le protocole la spectrome veloppe pre ce demment [15, 17-19] afin de de terminer la de `s utilise e composition chimique exacte. Cette technique est tre dans lanalyse qualitative et quantitative des HE ; la RMN galement de bons re sultats [21, 23, 28, 29]. donne e

quipe dune colonne DB5-MS (25 m* 0,32 mm Nist, TR, et e `tre interne* 1,0 mm e paisseur de film). La tempe rature diame alise initiale de 60C est maintenue pendant 1 min, puis on re ` 3 C/min jusqua ` 200 C ; cette tempe rature un chauffage a ratures de linjecteur et finale est maintenue 15 min. Les tempe tecteur sont respectivement de 250 et 285 C. Le gaz du de lium est a ` 138 kPa en te te de colonne. La quantite vecteur he e de chaque huile essentielle en solution dans le thanol injecte ` 1 g/L est de 1 mL en mode splitless. Le dosage a e te fait par a normalisation interne (rapport des surfaces de chaque `ne e tudie /totalite des terpe `nes) pour les 6 e chantillons terpe s identifie s et supe rieurs a ` 1 % seront dHE. Seuls les compose s dans le tableau 1. mentionne

antibacte rienne Activite

ries sest porte sur deux souches de Le choix des bacte ries fre quentes en pathologie humaine, appartenant bacte ` deux cate gories diffe rentes (Gram positive et Gram a gative). Lefficacite des produits teste s ainsi que leur ne de pe ne tration dans la bacte rie sont diffe rentes. modalite riennes utilise es sont : Les souches bacte rie Gram ne gative (Escherichia coli) ; bacte rie Gram positive (Staphylococcus aureus). bacte `ces bacte riennes sont responsables souvent Ces deux espe `me dinfections nosocomiales qui constituent un proble publique. Le mergence de la multire sistance majeur de sante ries est une des principales causes de chec chez ces bacte rapeutique. Les huiles essentielles sont pre pare es en the rile dagar noble a ` 1 (m/v) [20]. solution aqueuse ste rien standardise titre 2 a ` 6.105 cellules. La Linoculum bacte thode utilise e concerne la de termination des concentrame tions minimales inhibitrices (CMI) par dilution en bouillon `s Mueller Hinton. La lecture macroscopique se fait apre ` 37 C. La CMI est la plus faible 18 heures dincubation a concentration en huile essentielle ne donnant pas de ` lil nu. croissance visible a

riel et me thodes Mate Huiles essentielles

Les huiles essentielles de lavande (Lavandula angustifolia et Lavandula latifolia), dorigan (Origanum vulgare) et de te fournies thym (Thymus vulgaris et Thymus zygis) ont e gion Provence-Alpespar les producteurs locaux de la re te dAzur (Paca). Elles ont e te obtenues dans le courant Co e 2005 a ` partir de plantes cultive es dans la re gion de lanne es a ` + 4 C. Les e tudes ont e te mene es Paca et conserve e 2006. dans le courant de lanne

talons de terpe `nes et solvant E

talons de terpe ` nes utilise s pre sentent une tre ` s grande Les e (le plus souvent supe rieure a ` 99 %) : linalol purete tate de linalyle (Extra Synthe ` se), 1-8 cine ole (Fluka), ace ` ne (Merck), camphre (Merck), carvacrol (Aldrich), a-pine ` ne (Aldrich), p-cyme ` ne (Aldrich), g-ter(Acros), camphe ` ne (Aldrich), thymol (Carlo Erba). Lalcool absolu pine provient de Carlo Erba.

sultats et discussion Re
La composition chimique des six huiles essentielles est sente e dans le tableau 1. Lidentification a e te re alise e pre ` plus de 97 %. De nombreux compose s a ` moins de 0,5 % sont a sents dans ces huiles et sont pour la plupart identifie s. pre

ratoires de la CPG-SM Conditions ope

un appareil GC Varian 3400, MS Saturn a ` Nous avons utilise ion trap, avec les librairies commerciales disponibles Wiley,

tudie es Tableau 1. Composition chimique des six huiles essentielles e Huiles essentielles Lavandula angustifolia Lavandula latifolia Origanum vulgare Rosmarinus officinalis motype carvacrol) Thymus vulgaris (che motype thymol) Thymus zygis (che s Principaux compose tate de linalyle 47,4 %. Linalol 50,2 % ; ace ole 18,8 % ; linalol 71,4 % ; camphre 9,3 %. 1-8 cine Carvacrol 98,3 %. `ne 20,8 % ; camphe `ne 5,1 % ; 1-8 cine ole 36,9 % ; camphre 34,2 %. a-pine `ne 10,6 % ; g-terpine `ne 13,5 % ; carvacrol 73,7 %. p-cyme `ne 9,7 % ; g-terpine ` ne 2,3 % ; linalol 1,4 % ; thymol 84,9 %. p-cyme Total* 97,6 % 99,5 % 98,3 % 97,0 % 97,8 % 98,3 %

`nes identifie s dans les huiles essentielles. (*) Somme des terpe

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viter de surcharger ce texte, seuls les Cependant, pour e s ayant une teneur supe rieure a ` 1 % seront mentioncompose s dans le tableau de la composition chimique. Lidentifine alise e gra ce a ` la spectrome trie de masse (deux cation est re ` 80-90 % de probabilite ) librairies sur les trois disponibles et a et la comparaison des spectres de masse ainsi que des temps tention observe s dune part sur les e chantillons a ` de re riser et dautre part sur les e talons disponibles. caracte sultats de lactivite antibacte rienne sont pre sente s Les re es, les HE de dans le tableau 2. Pour les deux souches teste sentent une L. angustifolia, L. latifolia et O. vulgare pre moyenne, par opposition aux HE de O. vulgare, activite T. vulgaris et T. zygis. `s 1973, J. Pellecuer [24, 25] avait de montre les proprie te s De ` partir de pharmacologiques des huiles essentielles obtenues a es (thym, sarriette, romarin). En 1974, quelques labie crit e galement les proprie te s dautres P. Belaiche [2] avait de huiles essentielles issues de la cannelle et du clou de girofle, ne nols mais des alde hydes aromatiques, contenant pas de phe te s antibacte riennes. Nous constatons pour leurs proprie que pour la souche Escherichia coli, les huiles essentielles ` thymol et a ` carvacrol sont les dorigan et de thym a plus efficaces (CMI = 1 000 mg/mL). Pour la souche pour Staphylococcus aureus, on note une moindre efficacite le thym (CMI = 2 000 mg/mL) ; lhuile essentielle dOrigan est la plus active. te de montre que, en phase gazeuse, dans le cadre de Il a e rapie par inhalation [16], lactivite antibacte rienne de the ` phe nol (thymol ou carvacrol) est lhuile essentielle de thym a ries S. aureus et meilleure que celle de la lavande sur les bacte

E. coli. Lhuile essentielle de thym sauvage (renfermant plus de 80 % de carvacrol) est efficace sur les souches S. aureus et ` la concentration de 12,5 mg/l dair, alors que lhuile E. coli, a essentielle de lavande vraie (renfermant 30 % de linalol et tate de linalyle) est efficace respectivement a ` 100 et 37 % dace ` plus de 1 600 mg/l dair. En solution aqueuse [1], les huiles a es, notamment lore gon, sont efficaces sur essentielles de labie ries S. aureus et E. coli, pour une concentration les bacte rieure ou e gale a ` 1 pour 1 000, soit comparable a ` nos infe sultats obtenus. re des hydrolats obtenus Nous avons par ailleurs teste ` s entra nement a ` la vapeur pour la production de apre paration avec lhuile essentielle non lhuile essentielle et se sultats sont ne gatifs (CMI> 5 000 mg/mL). miscible. Les re pour les phe nols teste s a ` En revanche, nous avons observe tat pur une activite similaire pour les deux souches : le thymol 200 mg/mL et carvacrol 400 mg/mL. nols (thymol et carvacrol) purs pre sentent une Les phe que les HE pures. La pre sence de traces meilleure activite ` nes dans les HE pourrait expliquer cette dautres terpe rence dactivite . Mais lorsque la notion de bio et de diffe est en pleine progression, on peut parfaitement naturalite s naturels et bio, imaginer lutilisation de ces HE, compose dans les produits issus de lindustrie agro-alimentaire, galement dans les produits cosme tiques, en tant mais e quantiseptiques et/ou dantioxydants (ou conservateurs). tre envisage es par une De nouvelles perspectives peuvent e tude plus pousse e de lactivite antibacte rienne, non e es seules, mais e galement en seulement sur les HE utilise lange, permettant ainsi une e ventuelle synergie. me

antibacte rienne pour les six huiles essentielles e tudie es Tableau 2. Activite Souche: Escherichia coli ATCC 10536 Concentration (mg/mL) L. angustifolia L. latifolia O. vulgare R. officinalis T. vulgaris T. zygis Thymol Carvacrol Souche: Escherichia coli ATCC 6538 Concentration (mg/mL) L. angustifolia L. latifolia O. vulgare R. officinalis T. vulgaris T. zygis Thymol Carvacrol 5 000 4 000 +/ 3 000 +/ + 2 000 +/ + + 1 000 + + + + + 800 + + + + + + 400 + + + + + + 200 + + + + + + + 100 + + + + + + + + 50 + + + + + + + + 5 000 4 000 3 000 + 2 000 + 1 000 + + + 800 + + + + + + 400 + + + + + + 200 + + + + + + + 100 + + + + + + + + 50 + + + + + + + +

gende : (+ croissance; +/ faible croissance; absence) Le

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Conclusion
Lanalyse chimique de la composition dune huile essen e si on utilise la technique de la tielle est optimise e a ` la spectrochromatographie en phase gazeuse couple trie de masse. Cette analyse a e te effectue e sur me chantillons dhuiles essentielles obtenues a ` partir de six e es dans la re gion Provence-Alpes-Co te plantes cultive dAzur : lavande (Lavandula angustifolia et Lavandula latifolia), origan (Origanum vulgare) et thym (Thymus ` plus de 97 %, les composants vulgaris et Thymus zygis). A te identifie s gra ce a ` la comparaison des de ces huiles ont e tention avec des e talons analyse s dans les temps de re mes conditions et gra ce a ` leur spectre de masse. me te re alise e par normalisation Lanalyse quantitative a e es de lavande, interne. Parmi les huiles essentielles teste dorigan, de romarin et de thym, seuls lorigan et le thym sentent la meilleure activite antibacte rienne vis-a ` -vis pre rie Gram ne gative) et des souches Escherichia coli (bacte rie Gram positive). Cette e tude Staphylcoccus aureus (bacte nols (thymol et carvacrol) confirme que ce sont les phe ` lhuile essentielle le caracte ` re antibacte rien. qui donnent a s datent dune Les premiers travaux scientifiques publie es. Il serait inte ressant de continuer trentaine danne ces travaux notamment sur de nouvelles souches de ries. Ces premiers re sultats que nous avons obtenus bacte tude syste matique de nombreux e chantilpermettront une e ries pathoge `nes lons dhuiles essentielles sur des bacte sentant une re sistance accrue vis-a `-vis des antibacte riens pre classiques, notamment en milieu hospitalier. Lutilisation de ` la place de certains conservateurs ou produits naturels a `se pourrait e tre envisage e dans le antioxydants de synthe tique. domaine de lindustrie agro-alimentaire et de la cosme ` Remerciements a C. Borrely et L. Bollo pour leur participation technique.
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