PHOSPHOLIPIDES

REACTIFS BIOLABO
www.biolabo.fr

Mthode colorimtrique enzymatique

FABRICANT :
BIOLABO SA,

Ractif pour le dosage quantitatif des phospholipides dans le plasma ou le srum humain

02160, Maizy, France

REF 99105

R1 10 x 50 mL

R2 10 x 50 mL

R3 1 x 10 mL

REF 99110

R1 10 x 100 mL R2 10 x 100 mL R3 1 x 10 mL

SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES

Tel : (33) 03 23 25 15 50

IVD USAGE IN VITRO

Fax : (33) 03 23 256 256

PREAMBULE

PRECAUTIONS

Ce coffret est destin la recherche uniquement. Il appartient

lutilisateur professionnel de raliser les tudes de performances
complmentaires (interfrences, rptabilit, reproductibilit).

Les ractifs BIOLABO sont destins du personnel qualifi, pour un

usage in vitro.
Vrifier lintgrit des ractifs avant leur utilisation.
Utiliser des quipements de protection (blouse, gants, lunettes).
Ne pas pipetter avec la bouche.
En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment
leau et consulter un mdecin.
Les ractifs contiennent de lazide de sodium (concentration < 0,1%)
qui peut ragir avec les mtaux tel que le cuivre ou le plomb des
canalisations. Rincer abondamment.
La fiche de donnes de scurit peut tre obtenue sur simple
demande.
Elimination des dchets : respecter la lgislation en vigueur.
Par mesure de scurit, traiter tout spcimen comme potentiellement
infectieux. Respecter la lgislation en vigueur.

INTERET CLINIQUE (1)

Le dosage des phospholipides sriques est un test clinique important
pour le diagnostic des affections hpatiques, en particulier de lictre
obstructif. En mdecine cardiovasculaire, ltat de lart
permet
lutilisation de la mesure des phospholipides pour valuer les glycrides,
par soustraction du cholestrol et des phospholipides de la valeur des
lipides totaux.

PRINCIPE (1) (2)

Mthode enzymatique colorimtrique, selon le schma ractionnel
suivant :
Phospholipides Phospholipase D
+H2O

Choline + acide phosphatidique

+ acide lysophosphatidique
+N acylsphingosyl phosphate

Choline Oxidase

Choline + 2O2

PREPARATION DES REACTIFS

Flacon R2 :

Utiliser un objet non coupant (pointe de spatule) pour

soulever la capsule et la dchirer.

Verser sans dlai le contenu d'un flacon R2 (Enzymes), dans un flacon

R1 (Tampon).
Mlanger doucement et attendre la dissolution complte avant dutiliser
le ractif (environ 2 minutes).

Btaine + 2H2O2

STABILITE ET CONSERVATION
POD
2H2O2 + Phnol + 4AAP

Quinonimine + 4 H2O

REACTIFS
flacon R1

TAMPON

Tampon Tris
Chloro-4-phnol
CaCl2
Surfactant
Conservateur
flacon R2

Phospholipides
Conservateur

mmol/L
mmol/L
mg/L
mL/L

PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (2)

Srum ou plasma : (EDTA, hparine ou oxalate).

ENZYMES

Phospholipase D
Proxydase (POD)
Choline Oxydase
4 - Amino antipyrine (4AAP)
flacon R3

50
3,5
50
1,5

Stocker labri de la lumire, dans le flacon dorigine bien bouch

2-8 C.
Etalon (flacon R3) : Transvaser la quantit ncessaire, reboucher le
flacon et stocker 2-8 C.
Avant ouverture, les ractifs sont stables jusqu' la date de
premption indique sur ltiquette du coffret, sils sont utiliss et
conservs dans les conditions prconises.
Aprs reconstitution, le ractif de travail est stable 2 semaines en
labsence de contamination.
Ne pas utiliser le ractif de travail aprs la date de premption
indique sur ltiquette du coffret.

> 450
> 3000
> 2000
0,25

UI/L
UI/L
UI/L
mmol/L

ETALON
3,0 g/L

Les phospholipides sont stables dans le spcimen :

15 jours 2-8 C
Congeler une seule fois -20 C pour une conservation plus longue.

REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES

1. Equipement de base du laboratoire danalyses mdicales.
2. Srums de contrle normaux et pathologiques
Version : FT99110 99105 22 09 2008

CALIBRATION

LIMITE DE LINEARITE

Utiliser le flacon R3 contenu dans le coffret

ou tout calibrant raccord sur une mthode ou un matriau de
rfrence.
La frquence de calibration dpend des performances de lanalyseur et
des conditions de conservation du ractif.
Il est recommand de calibrer nouveau dans les cas suivants :
1. Changement du lot de ractif.
2. Aprs oprations de maintenance sur lanalyseur.
3. Les valeurs de contrle obtenues sortent des limites de confiance
indiques, mme aprs utilisation dun deuxime flacon de srum de
contrle frachement reconstitu.

Procdure n 1 (haute sensibilit) : Linaire jusqu 5,0 g/L

Procdure n 2 (faible sensibilit): Linaire jusqu 10,0 g/L.
Au-del, diluer le spcimen avec Na Cl 9 g/L et refaire le dosage en
tenant compte du facteur de dilution dans le calcul du rsultat. La limite
de linarit dpend du rapport de dilution spcimen/ractif.

MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)

Ramener les ractifs et spcimens temprature ambiante.
Procdure n 1 :

CONTRLE DE QUALITE
Tout srum de contrle titr pour cette mthode.
Programme externe de contrle de la qualit.
Il est recommand de contrler dans les cas suivants :
Au moins un contrle par srie.
Au moins un contrle par 24 heures.
Changement de flacon de ractif.
Aprs oprations de maintenance sur lanalyseur.
Lorsquune valeur de contrle se trouve en dehors des limites de
confiance indiques, appliquer les actions suivantes :
1. Rpter le test en utilisant le mme contrle.
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, prparer un srum
de contrle frachement reconstitu et rpter le test.
3. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un autre
calibrant ou un calibrant frachement reconstitu et rpter le test.
4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, calibrer nouveau
en utilisant un autre flacon de ractif et rpter le test.
5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le service
technique BIOLABO ou le revendeur local.

Mesurer dans des tubes

essais bien identifis :

Blanc

Etalon

Dosage

Ractif

1 mL

1 mL

1 mL

Eau dminralise

10 NL
10 NL

Etalon

10 NL

Spcimen
Mlanger. Laisser reposer 10 minutes 37 C.
Lire les absorbances 500 nm (492-546) contre le blanc ractif.

Procdure n 2 :
Mesurer dans des tubes
essais bien identifis :

Blanc

Etalon

Dosage

Ractif

1 mL

1 mL

1 mL

Eau dminralise

5 NL
5 NL

Etalon

INTERVALLE DE REFERENCE (3)

5 NL

Spcimen

Dans le srum ou le plasma :

Mlanger. Laisser reposer 10 minutes 37 C.

Age

Phospholipides (g/L)

Nouveau n

0,75-1,70

Nourisson

1,00-2,75

CALCUL

Enfant

1,80-2,95

Le rsultat est dtermin daprs la formule suivante :

Adulte

1,25-2,75

Rsultat =

> 65 ans

1,96-3,66

Lire les absorbances 500 nm (492-546) contre le blanc ractif.

Il est recommand chaque laboratoire de dfinir ses propres valeurs

de rfrence pour la population concerne.

Abs (Dosage)
Abs (Etalon)

x concentration de lEtalon

REFERENCES
(1) Subbaiah, P.V., Determination and clinical significance of phospholipids, p.521p.531 in : Rifai N., Warnick G. R., Dominiczak M. H., Handbook of lipoprotein
nd
testing, 2 d., AACC Press 2000.
(2) Takayama Itoh S., Nagasaki T., Tanimizu I., Clin. Chem. Acta., 79, (1977), 93..
rd
(3) TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3 Ed. C.A. Burtis, E.R. Ashwood,
W.B. Saunders (1999) p. 1829.

Made in France
Version : FT99110 99105 22 09 2008

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