1 DOSAGE DU GLUCOSE DANS LES ALIMENTS MTHODE LA GLUCOSE-OXYDASE 1.

. PRINCIPE : Le glucose est oxyd en gluconolactone par le dioxygne, avec production d'eau oxygne (peroxyde d'hydrogne). La raction est catalyse par une glucose-oxydase L'eau oxygne est rduite par un chromogne incolorore l'tat rduit : amino 4 phnazone + phnol . La raction est catalyse par une peroxydase. 2 x ( glucose + O2 ---GOD---> gluconolactone + H2O2 ) 2 x (gluconolactone + H2O ------> acide gluconique ) 2 H2O2 + amino 4 phnazone + phnol --POD--> quinone-imine + 4 H2O La quinone-imine absorbe la lumire et permet un dosage colorimtrique. 2. TALONNAGE DE LA MTHODE: 2.1. Gamme d'talonnage: A l'aide d'une solution talon de glucose 200 mg/L raliser une srie de 6 solutions talon de concentration allant de 0 200 mg/L. Raliser ces solutions en tube hmolyse sous un volume final de 5 mL. Raction colore: Traiter chaque solution talon de la manire suivante : chantillon..........0,200 mL Ractif la GOD.......2,000 mL Mlanger, laisser 20 min l'obscurit. Lire les absorbances 510 nm contre le tmoin de gamme ( solution 0 mg/L). Donnes: Limite de linarit : 2 g/L CV = 3 % 2.2. Rsultats: Etablir un tableau de colorimtrie Tracer le graphe A 510nm = f(c chantillon) Dterminer les paramtres de la courbe d'talonnage. Calculer la valeur du coefficient d'extinction molaire de la quinone-imine en m+2.mol-1

3. DOSAGE DU GLUCOSE DANS LES PRODUITS ALIMENTAIRES: 3.1. Prparation des chantillons : (d'aprs Boehringer Mannheim) 3.1.1. Aliments liquides : Diluer les solutions faiblement colores selon le tableau de dilution et les utiliser pour l'essai. Neutraliser les solutions fortement acides ou alcalines devant tre utilises sans dilution. Seules sont dcolorer sur polyamide (1g/100 mL) les solutions trs colores qui ne sont pas dilues en raison de leur faible teneur en glucose. liminer le gaz carbonique des chantillons gazeux par agitation et filtration. Filtrer ou centrifuger les solutions troubles. Diluer le surnageant ou le filtrat pour l'essai. Exemple: dtermination du glucose dans le lait : Introduire 20 mL de lait dans une fiole jauge de 100 mL , ajouter 10 mL de solution I de Carrez , 10 mL de solution II de Carrez et 20 mL d'hydroxyde de sodium (0,1 mol/L) en agitant vigoureusement aprs chaque adjonction. Complter jusqu' la marque avec de l'eau distille, mlanger et filtrer. Doser sur le filtrat. 3.1.2. Aliments solides et pteux : Homogniser les aliments pteux, broyer et homogniser les aliments solides. Aprs extraction l'eau, chauffer 60C si ncessaire, liminer la turbidit par filtration. Les chantillons renfermant des matires grasses doivent tre placs au froid aprs extraction pour obtenir la sparation des graisses. Ensuite filtrer. Dprotiniser les chantillons contenant des protines ou des enzymes avec les ractifs de Carrez (en prsence de saccharose, de maltose ou lactose, il faut viter de dprotiniser avec de l'acide trichloractique ou de l'acide perchlorique afin d'viter l'hydrolyse de ces sucres et la libration de glucose). Peser exactement environ 1 g d'chantillon dans une fiole jauge de 100 mL , ajouter 60 mL d'eau et chauffer 15 min, 70C. Agiter de temps en temps. Pour prcipiter les protines ajouter 5 mL de solution I de Carrez, 5 mL de solution II de Carrez et 10 mL de NaOH (0,1 mol/L). Ramener temprature ambiante, complter avec de l'eau distill jusqu' la marque et filtrer. Prendre la solution claire ou lgrement trouble pour essai, diluer pralablement si ncessaire. Donnes: solution I de Carrez : hexacyanoferrate de potassium K4Fe(CN)6, 3H2O 36 g/L solution II de Carrez : sulfate de zinc ZnSO4, 7 H2O 72 g/L

3.2.Echantillons doser : 3.2.1. le lait : tablir et raliser un protocole pour dterminer la concentration en glucose dans le lait. 3.2.2. la confiture : tablir et raliser un protocole pour dterminer la concentration en glucose dans la confiture. 3.2.3.un sirop : tablir et raliser un protocole pour dterminer la concentration en glucose dans un sirop de table. 4. RSULTATS : Pour chaque produit analyser : Donner un schma du protocole suivi. Justifier les diffrentes tapes Calculer la teneur en glucose soit en g/L soit en g/100 g selon le produit analys.

144712405.doc matriel et ractifs tiquette solution talon de glu 200 mg/L glucose 200 mg/L confiture (gele d'abricot) sirop de citron avec glucose dans la composition lait ractif la glucose oxydase solution I de solution I de Carrez Carrez : hexacyanoferrate de potassium K4Fe(CN)6, 3H2O 36 g/L solution II de Carrez solution II de Carrez : sulfate de zinc ZnSO4, 7 H2O 72 g/L NaOH 0,1 mol/L bain marie 70C fioles de 100 mL tube colorimtrie tube hmolyse parafilm cuve spectro grand volume NaOH 0,1 mol/L

quantit 1L 1 pot de 250 g 1 bouteille 1L 1L

rpartition 16 fl de 50 mL

1 fl avec pompe de 5 mL 5 fl de 200 mL (batterie)

1L

1L 1L 1 panier

5 fl de 200 mL (batterie)

5 fl de 200 mL