Projet de these

I- Identification
1- Titre se sujet

Détection et quantification des cannabinoides, terpènes et composés

phénoliques dans les variétés sélectionnées à partir des semences locales de cannabis
d’Al Hoceima

2- Nom et adresse du candidat :

TANTAOUI Hajar - Le Centre Régional de la Recherche Agronomique de

Tanger- Unité de Recherche d’Al Hoceima

3- Nom et adresse de l’encadrant :

Dr. MOUNIR Majid (Directeur de thèse)- L’Institut Agronomique et

Vétérinaire Hassan II

Dr. CHENTOUF Mouad (Membre de comité de thèse)- Le Centre Régional

de la Recherche Agronomique de Tanger
Dr. NOUTFIA Younes (Membre de comité de thèse)- L’Institut National de
la Recherche Agronomique à Rabat

II- Résumé

La question du développement des hybrides de cannabis au Maroc dépasse

le simple aspect économique, elle présente aussi des risques en termes écologiques,
sanitaires ou encore socioculturels. Bien qu’il soit impossible aujourd’hui de
connaître les surfaces exactes occupées par les variétés hybrides, celles-ci ont envahi
les champs des paysans les moins réticents ou les plus influencés par les
intermédiaires. Ces nouvelles cultures, voraces en intrants et en ressources
naturelles, fragilisent l’environnement et créent pour les paysans une dépendance à
un marché mondialisé des semences [1]. Ainsi cette problématique est aujourd’hui
celle d’un marché du cannabis mondialisé, aux fortes interdépendances, elle
toucherait également d’autres pays traditionnellement producteurs. L’épuisement
des nappes phréatiques a d’ailleurs accentué les tensions locales, la rareté de l’eau
provoquant, dans certains villages, des conflits entre les petits et les grands
cultivateurs qui ont davantage les moyens d’utiliser des techniques d’irrigation
performantes. Aujourd’hui, après plus de dix années de culture des hybrides, alignée
sur des critères industriels, le Rif et son environnement, notamment la province d’Al
Hoceima, y compris la variété locale beldiya, sont menacés par l’exploitation
intensive des ressources naturelles, mettant en péril aussi la sécurité alimentaire de la
population rifaine. De surcroît, la dégradation de l’environnement, la pollution des
sols, de l’eau et de l’air par les produits chimiques touche indéniablement la santé
humaine des populations locales et en premier lieu celle des cultivateurs
de cannabis. [1]

La diversification de ces variétés de cannabis (locales ou hybrides) pose

également une deuxième problématique de classification de ces variétés entre celles
à usage industriel ou cosmétique et celles à usage thérapeutique ou médicinal.
Certaines ont une forte teneur en cannabis CBD, tandis que d’autres sont plus
chargées en THC, l’autre composant majeur de la plante. D’où l’importance de
s’informer sur les bienfaits que peut procurer chacune de ces variétés, surtout avec
l’adoption de la loi 13.21 relative aux usages licites du cannabis qui va permettre
désormais le développent de ces filières légales tournées vers un usage dans
l’agroalimentaire, le cosmétique ou le médical. [2]

C’est dans ce cadre que s’inscrit le sujet de cette thèse, qui portera sur la
sélection, au sein d’une population de semences locales à Al Hoceima, des variétés à
intérêt économique pour l’inscription au catalogue officiel, à travers la
caractérisation biochimique par la quantification des teneurs en cannabinoides,
terpènes et composés phénoliques.

III- Importance du travail

1- Justification du sujet
La "beldia", le cannabis "terroir" qui a fait la réputation du Maroc auprès des
consommateurs de cette drogue, disparaît progressivement des champs dans le nord
du royaume, remplacée au nom du rendement par des plants hybrides importés de
l'étranger.[3]

Contrairement à cette variété autochtone de cannabis dont la culture était

pluviale, les nouvelles variétés qui sont actuellement utilisées ont été sélectionnées
pour leur capacité de production et de développement rapide. Elles augmentent de
taille d’une manière significative par rapport à la souche locale mais, pour cela, elles
ont besoin d’apports en eau qui sont importants. [4]

Une variété spécifique introduite illustre bien cette mutation de la culture du

cannabis au Maroc que les spécialistes appellent « nouvelle culture cannabique » : la
« Khardala ». Dans leurs recherches de variétés qui ont un rendement plus
important, les cultivateurs ont testé plusieurs semences. C’est ainsi que la Khardala a
progressivement remplacé une autre variété hybride : la « Pakistana », abandonnée
par les cultivateurs à cause de ses rendements jugés médiocres. [5]

En plus des dégâts sanitaires, hydriques et écologiques qu’elle occasionne, la

dynamique effrénée et anarchique d’introduction de nouvelles variétés de cannabis
menace également de détruire la souche locale dont pourrait dépendre la réussite du
chantier de valorisation médicinale entamé par notre pays. [6]

Comme dans d’autres cultures, le succès de la filière de valorisation

médicinale, agroalimentaire ou industriel du cannabis devrait débuter par un bon
choix de la variété à utiliser. Actuellement, l’enjeu réside dans l’identification de la
souche autochtone de cannabis qui est mieux adaptée, plus résiliente et beaucoup
moins hydrivore. [7]

A ce stade, il est nécessaire de mener des études afin de comprendre

l’évolution et les spécificités de chaque composante de l’agrosystème marocain de
cannabis afin de parfaire l’état de connaissance au niveau génétique et moléculaire
des variétés et sélectionner celles qui sont à usage thérapeutique et celles qui sont à
usage industriel ou cosmétique.

Dans ce cadre, l’Institut National de la Recherche Agronomique (INRA) a

collecté les diverses souches qui sont utilisées dans les zones de culture dans la
province d’Al Hoceima. Ce travail a montré qu’il est devenu difficile de retrouver et
d’identifier la variété autochtone du fait de son remplacement, mais également à
cause de l’hybridation qu’elle a pu subir avec d’autres variétés. D’où la nécessité de
capitaliser sur cette mission et quantifier les composants biochimiques
(cannabinoides, terpènes et composés phénoliques) des semences locales collectées,
pour la sélection des variétés à intérêt économique important pour l’inscription au
catalogue officiel national.

2- Objectifs

Ce travail vise la caractérisation biochimique des variétés sélectionnées à

partir des semences locales du cannabis à Al Hoceima à travers l’étude des
paramètres biochimiques qui portent sur les teneurs en cannabinoides
dont THC, CBD, Cannabichromène (CBC), Cannabivarine (CBV), Cannabigérol
(CBG), Cannabinol(CBN), Cannabicylcol (CBL) et Cannabielsoin (CBE).
Seront également analysés les teneurs en monoterpènes, sesquiterpènes
principaux, terpènes et en flavonoïdes principalement les cannaflavines A, B et
C, l’apigénine, la lutéoline, la quercétine, le kaempférol, β-sitostérol, la vitexine,
l’isovitexine, et l’orientine

IV- Matériel et Méthodes

1- Hypothèses de travail

La première hypothèse soutenant ce sujet de thèse porte sur le fait que

lancement dans la valorisation médicinale, cosmétique ou industriel du cannabis,
nécessite obligatoirement de revenir à la variété autochtone. C’est une condition sine
qua non parce que cette variété est la plus adaptée à une valorisation de ce genre, au
vu notamment des taux de THC et de CBD qu’elle contient, sans oublier sa
résilience et sa faible consommation d’eau

Le projet de thèse fait également l’hypothèse de détection des teneurs

cannabinoiques, terpéniques et phénoliques des différentes semences locales
collectées afin de réussir la sélection des variétés qui seront utiles pour les
différentes usages légales mentionnées par la loi 13-21. Le cannabis contient de
nombreuses propriétés médicinales grâce aux interactions synergiques entre les
cannabinoïdes, les terpènes, les flavonoïdes et d’autres composés. [8]

Il est fondamental de déterminer le profil terpénique du cannabis pour

prouver l'identité et l'efficacité médicale des cultivars ou des souches utilisés. Les
terpènes sont les principaux constituants organiques des huiles essentielles et des
résines de cannabis. Ils possèdent une odeur caractéristique et des propriétés
organoleptiques distinctives. Constitués de sous-unités isopréniques en C5 volatiles
et semi-volatiles, les terpènes pourraient amplifier par synergie les effets
thérapeutiques des cannabinoïdes par un "effet d'entourage". Comme le type et la
quantité des terpènes diffèrent d'une lignée de cannabis à l'autre (par
exemple Cannabis sativa, Cannabis indica et Cannabis ruderalis), des méthodes
analytiques robustes et des normes sont nécessaires pour identifier les cultivars et
valider scientifiquement leur propriétés médicinales et pharmacologiques. [9]

Il existe également, des preuves concernant les bienfaits thérapeutiques des

flavonoïdes et des cannabinoïdes (tels que le THC, le CBD, le THC/CBD) dans de
nombreux symptômes et maladies, en particulier dans le traitement des douleurs
chroniques, des migraines et des maux de tête. Toutefois, des études
supplémentaires sont nécessaires pour déterminer les meilleurs ratios thérapeutiques
des cannabinoïdes, terpènes, flavonoïdes et autres composés [10].

2- Méthodes et protocoles expérimentaux

Préparation des échantillons [11]

Les plantes fraîches sont séchées à température ambiante et à l’abri de la

lumière pendant quelques jours, ou séchées à 70 °C jusqu’à ce que les feuilles
deviennent cassables. A ce stade, le taux d’humidité est entre 8 et 13 %. Les feuilles
et les sommités fleuries sont triées, broyées et ensuite tamisées (maille 100 µm).

Protocole d’extraction [11]

Préparation de la solution d’extraction

Dans une fiole jaugée de 1L, mettre successivement :

- 0,5 g de Tribenzylamine,
- Compléter au trait de jauge avec l’éthanol.
- Placer la solution dans un bain ultrason à T° amb. Pendant 30 min.
- Cette solution se conserve au réfrigérateur (4° - 6° C).

Préparation de l'extrait de l’échantillon

- Dans un flacon de 20 mL, peser 100 mg de l’échantillon préparé,

- Rajouter 10 mL de la solution d’extraction,
- Placer dans un bain ultra-son pendant 15 min à T° amb.,
- Sécher sur sulfate de sodium anhydre,
 - Filtrer sur coton,
- Transférer 500 µL de cette solution dans un flacon de 2 mL en verre fumé,
- Rajouter 1 mL d’éthanol absolu et vortexer.

Extraction des cannabinoides

- Placer dans un tube, 100 mg de poudre préparée et extraire par 5ml de solution
d’extraction (35 mg de SI squalène/100 ml d’hexane)
- Placer dans un bac ultrasons pendant 20 min
- Centrifuger 5 min à 3000 tours/min
- Injecter 1ul de surnageant dans un GCFID

Conditions chromatographiques

- Colonne 5% phényl-méthyl-siloxane 30m x 0.32mm x 0.22um

- Tfour 200°C-280°C
- Tinj 280°C
- Tdet 300°C
Analyse des Terpènes dans le cannabis et produits dérivés

Cette analyse permet d‘identifier les concentrations en terpènes identifiables et quantifiables à

savoir

 monoterpènes (alpha-pinene, beta-pinene, limonène, myrcène, linalol)

 Sesquiterpènes principaux (beta-caryophyllène, humulène)

Cette analyse est effectuée par chromatographie gazeuse ajoutée à un détecteur d’ionisation
de la flamme (GC/FID).

V- Planning

Thèse prévue en 4 ans à partir de l’hiver 2022

Année 1 Année 2 Année 3 Année 4

Expérimentation Conception et Suivi Suivi expérimental Fin des suivis
Mise en place expérimental expérimentaux et
des méthodes évaluation
d’analyse
Modélisation Réflexion sur le Modélisation à Paramétrage/Modélis Modélisation et
choix d’une partir des ation à partir des extrapolation des
méthode de résultats résultats résultats
représentation expérimentaux expérimentaux éxpérimentaux
des processus
étudiés
Rédaction Rédaction d’un Rédaction de Rédaction de d’un Rédaction de la thèse
compte rendu de d’un compte compte rendu la Rédaction d’un article
la méthodes et rendu la méthodes et 2
expérimentation méthodes et expérimentation
 expérimentation Rédaction d’un
Rédaction d’un article 2
article 1

VI- Références

-- 1. Observatoire européen des drogues et des toxicomanies. Rapport européen sur les
drogues, tendances et évolutions. OEDT 2017.
-- 2. Principale substance psychoactive du cannabis. En dix ans, le THC de la résine aurait
plus que doublé, passant d’une moyenne de 9% en 2006 à 22% en 2015. Cadet-Taïrou A. et
al. Substances psychoactives, usagers et marchés: les tendances récentes (2015-2016).
Tendances, no115, OFDT.
-- 3. Afsahi K. La construction socio-économique du cannabis au Maroc: le kif comme
produit traditionnel, produit manufacturé et produit de contrebande. Tempo Social 2017, sous
presse.
-- 4. Benabud A. Psycho-pathological aspects of the cannabis situation in Morocco: statistical
data for 1956. Bulletin of Narcotics 1957 ; 4.
-- 5. Office des Nations unis contre la drogue et le crime (ONUDC). Maroc. Enquete sur
le cannabis 2003, Vienne. United Nations Office on Drugs and Crime (UNODC). World drug
report 2017. New York: United Nations.
-- 6. Chouvy PA, Afsahi K. Hashish Revival in Morocco. Int J Drug Policy 2014;25(3).
-- 7. La «pakistana» est la plus célèbre des variétés introduites au début des années 2000.
-- 8. Afsahi K. Ketama et Amsterdam. Les acteurs transnationaux de la circulation des savoirs
dans la production de haschich. Revue Autrepart 2017, sous presse.
-- 9. Grovel R. La préservation des fore?ts du Rif centro-occidental: un enjeu de
développement de la montagne rifaine. Revue de géographie alpine, 1996 ; 4: 75-94.

-- 10.Baron, E.P. Medicinal Properties of Cannabinoids, Terpenes, and Flavonoids in

Cannabis, and Benefits in Migraine, Headache, and Pain: An Update on Current Evidence and
Cannabis Science,2018

--11. Méthodes recommandées pour l’identification et l’analyse du cannabis et des produits du

cannabis UNODC ST/NAR/40 2010

VII- Financement

Le financement de la thèse fait l’objet d’un co-financement entre l’Institut

National de la Recherche Agronomique (INRA), l’Agence Nationale de
Réglementation des Activitées liées au Cannabis (L’ANRAC) et l’Agence de
Développement Pour le Nord (L’ADPN).