Journal de Mycologie Médicale 15 (2005) 211–219

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ARTICLE ORIGINAL/ORIGINAL ARTICLE

Activité antifongique d’une souche

d’Actinomadura d’origine saharienne
sur divers champignons pathogènes et toxinogènes
Antifungal activity of a saharan Actinomadura
strain against various pathogenic
and toxinogenic fungi
B. Badji a, A. Riba b, F. Mathieu c, A. Lebrihi c, N. Sabaou a,*
a
Laboratoire de recherche sur les produits bioactifs et valorisation de la biomasse,
école normale supérieure de Kouba, BP 92, 16 050 Vieux-Kouba, Alger, Algérie
b
Faculté des sciences biologiques et agronomiques, université Mouloud-Mammeri, Tizi-ouzou, Algérie
c
Laboratoire de génie chimique UMR 5503 (CNRS/INPT/UPS), école nationale supérieure agronomique
de Toulouse, INPT, 1, avenue de l’Agrobiopôle, BP 107, F31326 Castanet-Tolosan cedex, France
Reçu le 16 mai 2005 ; accepté le 4 juillet 2005

Disponible sur internet le 15 septembre 2005

MOTS CLÉS Résumé

Antifongique ; Objectif. – Étude de l’activité antifongique d’une souche d’actinomycète nommée AC
Actinomadura ; 170, isolée à partir du sol de la palmeraie d’Adrar, oasis du Sud-Ouest algérien.
Sol saharien ; Méthodes. – Sur la base des caractéristiques morphologiques et chimiques, la souche AC
Champignons
170 étudiée est rattachée au genre Actinomadura. Elle a la particularité de ne pousser
pathogènes
que sur des milieux solides. La production d’antibiotiques est testée sur cinq milieux.
L’activité antimicrobienne est meilleure sur les milieux GYEA (Glucose–extrait de levure
agar) et ISP1 (Tryptone–extrait de levure agar). L’extrait butanolique est testé vis-à-vis de
11 souches fongiques pathogènes et toxinogènes dont Candida albicans et sept espèces
d’Aspergillus.
Résultats. – Les résultats obtenus montrent que l’activité antifongique produite par cette
souche est très importante. Une seule zone active est localisée par bioautographie. Le
spectre UV-visible de l’extrait butanolique montre l’absence de polyènes. Les réactions
chromogéniques laissent supposer que la molécule active est de nature aromatique.
Conclusion. – L’ensemble de ces données préliminaires permet de penser que l’antifon-
gique produit par la souche AC 170 est un composé aromatique. Son identification est en
cours.
© 2005 Elsevier SAS. Tous droits réservés.

* Auteur correspondant.
Adresse e-mail : sabaou@yahoo.fr (N. Sabaou).

1156-5233/$ - see front matter © 2005 Elsevier SAS. Tous droits réservés.
doi: 10.1016/j.mycmed.2005.07.001
212 B. Badji et al.

Abstract
KEYWORDS Objective. – Study of the antifungal activity of an actinomycete strain AC 170 isolated
Antifungal drugs; from a Saharan palm grove soil collected at Adrar, South-West Algeria.
Actinomadura; Methods. – Based on morphological and chemical characteristics, the isolate studied was
Saharan soil;
identified as Actinomadura sp. This strain grew only on the solid media. Antibiotic
Pathogenic fungi
production was tested on five solid culture mediums. The GYEA (Yeast extract-glucose
agar) and ISP1 (tryptone-yeast extract agar) media enabled satisfactory production. The
butanolic extract was tested against 11 pathogenic and toxinogenic fungi including
Candida albicans and seven Aspergillus species.
Results. – The results showed a strong antifungal activity of the strains studied against all
the species tested. Chromatographic bioassay revealed that the crude butanolic extract
contained one active compound.
Conclusion. – The UV–visible spectrum and the chromogenic reactions of this active
compound suggested a non-polyenic nature and probably aromatic structure. Investiga-
tion of this molecule is now in progress.
© 2005 Elsevier SAS. Tous droits réservés.

Introduction tirésistances, l’industrie pharmaceutique et les

Les champignons microscopiques sont responsables
d’un grand nombre d’affections chez l’homme, les
animaux et les végétaux. Ils sont aussi la cause de
nombreux dégâts occasionnés aux bois, aux pro-
duits agricoles, aux denrées alimentaires et à divers
supports [5].
Les mycoses ont augmenté de façon drastique au
cours de la dernière décennie et se classent au
quatrième rang des infections nosocomiales [3].
Elles peuvent être superficielles ou profondes et
dans ce dernier cas, elles sont responsables d’un
taux de mortalité important chez les patients aux
défenses immunologiques diminuées. Près de 90 %
des mycoses humaines sont provoquées par des
espèces appartenant aux genres Aspergillus, Can-
dida, Cladosporium, Epidermophyton, Microspo-
rum et Trichophyton [12]. Candida albicans et cer-
taines espèces d’Aspergillus telles que A.
fumigatus, A. flavus ainsi que A. niger, A. nidulans
et A. terreus sont responsables de la majorité des
mycoses invasives [6,7].
Les métabolites fongiques tels les mycotoxines
[10] et les composés organiques volatils [14] sont
également susceptibles d’entraîner de nombreux
effets nocifs sur la santé des individus.
Les molécules antifongiques disponibles à
l’heure actuelle ne réunissent pas les critères défi-
nissant l’antibiotique idéal : toxicité spécifique
vis-à-vis du champignon pathogène, bonne diffu-
sion dans l’organisme, large spectre d’activité in
vivo, absence de problèmes liés à l’apparition de
souches résistantes et absence d’effets secondaires
[15].
Au vu de l’éventail restreint des molécules utili-
sées en fongithérapie et avec l’apparition des mul-
chercheurs se sont tournés vers la recherche de
nouveaux antifongiques plus performants et moins
agressifs pour l’organisme. La grande majorité des
antifongiques naturels est d’origine microbienne et
près de la moitié est synthétisée par les actinomy-
cètes, en particulier par les Streptomyces, le genre
le plus répandu dans l’environnement [9]. Les re-
cherches actuelles tiennent beaucoup plus compte
des actinomycètes peu fréquents ou rares, prove-
nant de diverses niches écologiques ignorées ou peu
exploitées. Ces actinomycètes, dits « rares » dont
le genre Actinomadura, se sont révélés être une
source intéressante d’antibiotiques [16,19].
Nos travaux précédents ont montré la richesse
des sols sahariens d’Algérie en actinomycètes d’ha-
bitude rarement ou peu fréquemment isolés de par
le monde [23]. Ainsi, plusieurs dizaines de souches
autres que Streptomyces furent isolées à partir de
ces sols en utilisant des méthodes sélectives mises
au point [24,27].
Le présent travail a pour objectif d’étudier l’ac-
tivité antifongique d’une souche d’actinomycète
rare d’origine saharienne contre plusieurs champi-
gnons pathogènes et toxinogènes.
Matériel et méthodes
Souche d’actinomycète étudiée et germes
cibles
L’échantillon de sol (non rhizosphérique) provient
d’Adrar, une oasis du Sud-Ouest algérien. Les ana-
lyses physicochimiques ont montré que ce sol est
légèrement alcalin (pH = 7,6), pauvre en carbone
Activité antifongique d’Actinomadura sp. sur des champignons pathogènes et toxinogènes
(1,07 %), moyennement salé (conductivité électri-
que au 1/5 = 2,70 ms) et de texture limonosa-
bleuse.
La souche a été isolée sur milieu « chitine-vita-
mines B » de Hayakawa et Nonomura [11], addi-
tionné de pénicilline (25 mg/l), de cyclosérine
(10 mg/l) et d’acide nalidixique (20 mg/l). Deux
antifongiques, la nystatine à 30 mg/l et l’actidione
à 50 mg/l, sont ajoutés afin d’inhiber tout dévelop-
pement fongique. La méthode d’ensemencement
utilisée est celle des suspensions–dilutions. Les boî-
tes ensemencées sont incubées à 28 °C durant trois
semaines.
Les germes cibles utilisés pour la mise en évi-
dence de l’activité antimicrobienne de la souche
étudiée sont les suivants : des champignons fila-
menteux (Alternaria sp., Ascochyta lentis, A. pisi,
Aspergillus sp., Botrytis fabae, B. cinerea, Clados-
porium sp. Fusarium culmorum, F. equiseti,
F. oxysporum f. sp. albedinis, Mucor ramannianus,
Phoma sp. et Pythium irregulare), des levures
(Rhodotorula mucilaginosa et Saccharomyces cere-
visiae) et des bactéries à coloration de Gram posi-
tive (Bacillus subtilis et Micrococcus luteus) ou
négative (Alcaligenes faecalis, Escherichia coli,
Pseudomonas fluorescens et Pseudomonas aerugi-
nosa).
Les germes cibles utilisés pour tester l’activité
de l’extrait organique sont des champignons patho-
gènes et toxinogènes : une levure (Candida albi-
cans) et dix champignons filamenteux : Aspergillus
(A. candidus, A. carbonarius, A. fumigatus, A. ni-
ger, A. ochraceus, A. terreus et Aspergillus. sp.),
Penicillium (Penicillium sp. no 1 et no 2) et Fusa-
rium oxysporum f. sp. albedinis. Ces microorganis-
mes (collection de notre laboratoire) sont ense-
mencés dans le milieu de culture de telle sorte à
avoir un inoculum de 104 ufc/ml. C. albicans et A.
fumigatus sont pathogènes pour l’homme et F.
oxysporum f. sp. albedinis est pathogène pour le
palmier dattier. Les souches d’A. carbonarius et
surtout d’A. ochraceus sont, d’après nos expérien-
ces (résultats non publiés), fortement productrices
d’ochratoxine A.
Identification de la souche d’actinomycète
étudiée
Caractéristiques culturales
et micromorphologiques
Les caractéristiques morphologiques sont détermi-
nées sur les milieux ISP1 (tryptone–extrait de levu-
re–agar), ISP2 (extrait de levure–extrait de mal-
t–glucose–agar), ISP3 (farine d’avoine–agar) et ISP4
213
(amidon–sels minéraux–agar) recommandés par
Shirling et Gottlieb [25], ainsi que GYEA (extrait de
levure–glucose–agar) préconisé par Athalye et al.
[1]. Les caractéristiques micromorphologiques sont
déterminées au microscope optique et au micros-
cope électronique à balayage (Stereoscan S240
Cambridge).
Analyse chimique des constituants cellulaires
L’analyse chimique des constituants cellulaires est
effectuée selon la méthode préconisée par Becker
et al. [2] pour la détermination de l’isomère de
l’acide diaminopimélique (formes LL ou DL) et la
présence ou non de glycine, la technique de Leche-
valier et Lechevalier [17] pour la mise en évidence
des sucres et la méthode de Minnikin et al. [22]
pour la caractérisation des phospholipides.
Activité antimicrobienne, production
et extraction des principes actifs
de la souche d’actinomycète étudiée
Mise en évidence de l’activité antimicrobienne
L’activité antimicrobienne de l’isolat AC 170 est
mise en évidence par la méthode des stries croisées
sur milieu ISP2. Vingt et un germes cibles ont été
utilisés, dont 13 champignons filamenteux, deux
levures et six bactéries.
Choix du milieu de production des activités
antimicrobiennes
La production d’antibiotiques a été entreprise sur
milieux solides. Afin de déterminer le meilleur,
cinq milieux ont été testés : ISP1 (tryptone : 5 g/l,
extrait de levure : 3 g/l), ISP2 (extrait de levure :
4 g/l ; extrait de malt : 10 g/l ; glucose : 4 g/l),
GYEA (extrait de levure : 10 g/l, glucose : 10 g/l),
Bennett (peptone : 2 g/l, extrait de viande :1 g/l,
extrait de levure : 1 g/l, glucose : 10 g/l) et gélose
nutritive (peptone : 5 g/l, extrait de levure : 5 g/l,
NaCl : 5 g/l). Le pH a été ajusté à 7,2 et chaque
milieu a été additionné d’agar à raison de 16 g/l.
L’actinomycète est ensemencé en touche de
10 mm de diamètre, au centre d’une boîte de pétri
contenant l’un des milieux gélosés. Après dix jours
d’incubation à 28 °C, les cultures sont recouvertes
par 8 ml de milieu ISP2 contenant 10 g/l d’agar,
préalablement ensemencé avec un germe cible (un
champignon, Mucor ramannianus ou une bactérie,
Bacillus subtilis). Après solidification de la
deuxième couche, les boîtes sont réincubées à
28 °C et la taille des zones d’inhibition est mesurée
en mm après 24 heures pour la bactérie et 48 heu-
res pour le champignon.
214
Choix du solvant d’extraction et cinétique
de production des antibiotiques
Afin de choisir le meilleur solvant d’extraction, la
souche AC 170 est ensemencée en stries très ser-
rées à la surface du meilleur milieu de production
d’antifongiques, coulé dans des boîtes de pétri de
9 cm de diamètre. Après trois semaines de culture à
28 °C, le milieu contenu dans une seule boîte est
découpé en petits cubes lesquels sont placés dans
un Erlenmeyer contenant 40 ml d’un des solvants
organiques suivants : N-hexane, dichlorométhane,
N-butanol et acétate d’éthyle. L’extraction est ef-
fectuée sous agitation pendant deux heures à tem-
pérature ambiante. L’extrait organique obtenu est
filtré puis évaporé sous vide à 45 °C à l’aide d’un
évaporateur rotatif. Le résidu sec est ensuite repris
dans 5 ml de méthanol et l’activité antimicrobienne
est évaluée en utilisant des disques de papiers de
6 mm de diamètre (50 ll contre M. ramannianus et
25 ll contre B. subtilis). Les disques imbibés sont
stérilisés aux ultraviolets durant 15 minutes et dé-
posés à la surface du milieu ISP2 préensemencé
avec le germe cible. Les boîtes sont ensuite mises à
4 °C pendant deux heures puis incubées à 28 °C. Le
diamètre des auréoles d’inhibition est mesuré
après 24 et 48 heures.
Une cinétique de production de la souche a été
suivie pendant 25 jours sur le milieu solide choisi.
Ainsi, le milieu contenu dans une boîte de pétri est
prélevé quotidiennement pour être extrait par le
meilleur solvant organique. Les activités sont me-
surées par la méthode des disques (méthode dé-
crite ci-dessus).
Activité de l’extrait organique contre
des germes pathogènes et toxinogènes
Le meilleur solvant d’extraction est utilisé pour
extraire les cultures contenues dans cinq boîtes de
pétri (100 ml de milieu au total) et poussant sur le
meilleur milieu de production. L’extrait organique
est séché au rotavapor puis solubilisé dans 5 ml de
méthanol. Les activités sont alors mesurées par la
méthode des disques tel que décrit précédemment,
en mettant 50 ll d’extrait par disque. Les lectures
sont effectuées après 48 heures d’incubation à
28 °C en mesurant le diamètre d’inhibition.
Essais de caractérisation de(s) principe(s)
actif(s)
Localisation des activités par bioautographie
et révélations chimiques
La localisation des taches actives a été réalisée par
bioautographie [4] sur des plaques de chromatogra-
B. Badji et al.
phie sur couches minces de gel de silice GF254
(Fluka).Vingt-cinq microlitres d’un échantillon pro-
venant du meilleur milieu de production extrait par
le meilleur solvant sont déposés sur la plaque de gel
de silice. Les systèmes de solvants utilisés pour la
migration sont les suivants : B.A.E : N-butanol–
acide acétique–eau (3 :1 :1, v/v), AM : acétate
d’éthyle-méthanol (100 :15, v/v) et E.A.E : éthano-
l–ammoniaque–eau (8 :1 :1, v/v). Après développe-
ment, les plaques sont recouvertes de milieu
ISP2 contenant 8 g/l d’agar, préalablement ense-
mencé avec un germe cible (M. ramannianus ou
B. subtilis). La lecture des résultats consiste en la
détection des zones d’inhibition des germes cibles
et au calcul de leur Rapport frontal (Rf).
Les révélations chimiques sont réalisées parallè-
lement aux bioautographies sur des chromato-
grammes développés dans les mêmes conditions.
Les révélateurs utilisés [20] sont les suivants : la
ninhydrine, le naphtorésorcinol–H2SO4, la nitro-4-
aniline, la vanilline–H2SO4, le chlorure de fer ferri-
que (FeCl3) et la formaldéhyde–H2SO4.
Spectre UV-visible
Le spectre UV-visible de l’extrait butanolique est
réalisé à l’aide d’un spectrophotomètre Shimadzu
UV- 1605.
Résultats
Identification de la souche d’actinomycète
étudiée
Caractéristiques culturales
et micromorphologiques
L’isolat AC 170 a la particularité d’avoir une crois-
sance assez lente. Le diamètre des colonies n’at-
teint que 3 à 5 mm après 15 à 20 jours d’incubation
à 28 °C. La croissance est meilleure sur GYEA et
ISP1, moindre sur ISP2 et ISP3 et faible sur ISP4. Le
mycélium aérien, de couleur blanche, est peu pro-
duit et uniquement sur le milieu ISP3. Des pigments
diffusibles de couleur brune sont sécrétés sur les
milieux et sont particulièrement abondants sur
GYEA et ISP2.
Du point de vue micromorphologique, la souche
AC 170 produit un mycélium du substrat non frag-
menté surmonté par un mycélium aérien où l’on
note la présence de chaînes de spores (3 à 10 par
chaîne) portées par de courts sporophores. Les
chaînes sont droites ou disposées en crochets, en
boucles ou en spires (un à deux tours). Les spires
Activité antifongique d’Actinomadura sp. sur des champignons pathogènes et toxinogènes 215

Tableau 1 Activité antimicrobienne de la souche Actinoma-

dura sp. AC 170.
Table 1 Antimicrobial activity of Actinomadura spp. strain
AC 170.
Germes cibles Inhibition (mm)
• Champignons filamenteux
Alternaria sp. 18
Ascochyta lentis 43
Ascochyta pisi 42
Aspergillus sp. 20
Botrytis fabae 42
Botrytis cinerea 12
Cladosporium sp. 31
Fusarium culmorum 31
F. equiseti 26
Figure 1 Observation par microscopie électronique à balayage F. oxysporum f.sp. albedinis 9
de la micromorphologie de la souche Actinomadura sp. AC Mucor ramannianus 21
170 poussant sur milieu ISP3. Courtes chaînes de spores à surface Phoma sp. 45
rugueuse arrangées en crochets et en spirales. Pythium irregulare 14
Figure 1 SEM observation of micromorphology of the strain • Levures
Actinomadura spp. AC 170 grown on ISP3 medium. Rhodotorula mucilaginosa 5
Saccharomyces cerevisiae 18
peuvent parfois confluer pour former des masses • Bactéries à Gram positif
globuleuses. Une observation au microscope élec- Bacillus subtilis 34
tronique à balayage montre des spores ovoïdes à Micrococcus luteus 27
surface rugueuse (Fig. 1). * La souche n’est pas active contre les bactéries à coloration
de Gram négative suivantes : Alcaligenes faecalis, Escheri-
chia coli, Pseudomonas fluorescens et Pseudomonas
Analyse chimique des constituants cellulaires
aeruginosa.
Les résultats des analyses des constituants cellulai-
res ont montré que l’isolat AC 170 contient dans sa mucilaginosa (entre 5 et 9 mm). Concernant l’acti-
paroi de l’acide diaminopimélique sous la forme vité antibactérienne, la souche est fortement ac-
isomérique DL (meso DAP) mais pas de glycine. Le
tive contre les deux bactéries à coloration de Gram
sucre caractéristique présent en quantité impor-
positif testées mais inactive contre les quatre bac-
tante dans les cellules est le madurose (ou
téries à coloration de Gram négatif.
3-O-methylgalactose). Les phospholipides azotés
(phosphatidyl–éthanolamine et phospholipides
contenant de la glucosamine) sont absents. Choix du milieu de production des activités
antimicrobiennes
Activité antimicrobienne, production La souche AC 170 a la particularité de ne pas croître
et extraction des principes actifs dans les milieux liquides. En effet, lors d’expérien-
ces préliminaires, plusieurs milieux liquides, com-
de la souche d’actinomycète étudiée
plexes et synthétiques, en conditions agitées ou
non, ont été utilisés à cet effet, mais sans succès.
Mise en évidence de l’activité antimicrobienne
Les activités aussi bien antifongiques qu’antibac-
Les résultats des tests d’antagonisme ont révélé tériennes sont décelées sur les cinq milieux testés,
une importante activité antimicrobienne de la sou- avec cependant, une meilleure production, pour les
che, en particulier contre les champignons filamen- milieux GYEA et ISP1. Le milieu GYEA a été retenu
teux (Tableau 1). En effet, son activité est très en tant que milieu de production (Fig. 2).
forte contre les deux espèces d’Ascochyta, Phoma
sp., Botrytis fabae, Fusarium culmorum et Clados-
porium sp. (zones d’inhibition comprises entre Choix du solvant d’extraction et cinétique
31 et 45 mm), forte contre Fusarium equiseti, M. de production des antibiotiques
ramannianus, Aspergillus sp., Alternaria sp. et Sac- La Fig. 3 montre les activités antimicrobiennes
charomyces cerevisiae (entre 18 et 30 mm), extractibles avec différents solvants non miscibles
moyenne contre Botrytis cinerea et Pythium irre- avec l’eau. C’est dans l’extrait butanolique que les
gulare (entre 10 et 14 mm) et faible contre Fusa- activités contre M. ramannianus et B. subtilis sont
rium oxysporum f. sp. albedinis et Rhodotorula les meilleures. Le N-butanol a été donc choisi
216
Figure 2 Production d’antibiotiques par la souche Actinomadura
sp. AC 170 sur différents milieux solides. Les valeurs des activi-
tés représentent les diamètres d’inhibition vis-à-vis de Mucor
ramannianus (M.r.) et de Bacillus subtilis (B.s.), y compris le
diamètre des colonies de la souche AC 170 (10 mm).
Figure 2 Antibiotic production of Actinomadura spp. AC 170 on
various culture media.
Figure 3 Choix du solvant d’extraction des activités antibioti-
ques produites sur milieu GYEA solide par la souche Actinoma-
dura sp. AC 170. Les valeurs représentent les diamètres d’inhi-
bition en mm (y compris celui du disque qui est de 6 mm)
vis-à-vis de Mucor ramannianus (M.r.) et de Bacillus subtilis
(B.s.).
Figure 3 Choice of extraction solvent of antibiotics produced by
Actinomadura spp. strain AC 170 on GYEA solid medium.
Hex = n-hexane ; DM = dichlorométhane ; But = n-butanol ;
AE = acétate d’éthyle.
comme solvant d’extraction pour suivre l’évolution
de l’activité antimicrobienne en fonction du temps.
La cinétique de production a ainsi été réalisée
sur le milieu GYEA. L’extraction des substances
actives est effectuée par le N-butanol et les zones
d’inhibition ont été mesurées par la méthode des
disques de papier. Les activités antifongiques et
antibactériennes n’apparaissent qu’au sixième jour
d’incubation (Fig. 4). Elles augmentent progressi-
vement pour atteindre leurs maxima au 21e jour et
restent plus ou moins stables par la suite.
Activité de l’extrait organique contre
des germes pathogènes et toxinogènes
Les résultats des tests antibiographiques de l’ex-
trait butanolique vis-à-vis des germes cibles patho-
gènes et toxinogènes, sont présentés dans la Fig. 5.
Les 11 germes pathogènes testés sont tous sensibles
à l’effet des antibiotiques produits par cette sou-
B. Badji et al.
Figure 4 Cinétique de production des activités antimicrobiennes
de la souche Actinomadura sp. AC 170 sur milieu solide GYEA. La
mesure des diamètres d’inhibition vis-à-vis de Mucor ramannia-
nus (M.r.) et de Bacillus subtilis (B.s.) est effectuée par la
méthode des disques en papier (50 ll d’extrait par disque pour
M.r. et 25 ll pour B.s.). Les valeurs représentent les diamètres
d’inhibition en mm, y compris celui des disques qui est de 6 mm.
Figure 4 Time course of antibiotic production of Actinomadura
spp. strain AC 170 on GYEA solid medium.
che. Cependant les souches d’Aspergillus, en parti-
culier A. ochraceus, A. fumigatus et Aspergillus.
sp., ainsi que les souches de Penicillium, sont les
plus sensibles (zones d’inhibition de 37 à 42 mm).
L’activité contre Candida albicans est également
importante (21 mm) même si elle reste inférieure à
celles obtenues pour les espèces d’Aspergillus, de
Penicillium et de Fusarium. Les activités restent
stables après un mois ; aucune diminution du dia-
mètre des zones d’inhibition n’a été constatée.
Essais de caractérisation de(s) principe(s)
actif(s)
Localisation des activités par bioautographie
et révélations chimiques
La révélation microbiologique de l’extrait butano-
lique nous a permis de mettre en évidence une
seule tache active sur les trois systèmes de solvants
utilisés. Cette tache, de couleur brun-orange à
l’œil nu, sombre à 254 nm et orange vif à 365 nm,
est douée d’une forte activité antifongique (le dia-
mètre de l’auréole d’inhibition est de 28 mm) et
antibactérienne (le diamètre de l’auréole d’inhibi-
tion est de 35 mm). Son Rf est de 0,65 sur BAE,
0,51 sur EAE et 0,13 sur AM.
Les tests des réactions chromogéniques effec-
tués sur BAE sont négatifs pour la ninhydrine, le
naphtorésorcinol–H2SO4 et la vanilline–H2SO4 et po-
sitifs pour le FeCl3, la nitro-4-aniline et le
formaldéhyde–H2SO4. La tache active devient brun
très foncé en présence de FeCl3, orange vif avec la
nitro-4-aniline et se décolore en présence de
formaldéhyde–H2SO4.
Spectre UV-visible
Le spectre UV-visible de l’extrait butanolique brut
n’a pas montré les pics d’absorption caractéristi-
Activité antifongique d’Actinomadura sp. sur des champignons pathogènes et toxinogènes 217

Figure 5 Activité antifongique de l’extrait butanolique de la souche Actinomadura sp. AC 170 vis-à-vis des champignons pathogènes
et toxinogènes. Cinquante microlitres d’extrait brut sont déposés par disque. Les valeurs représentent les diamètres d’inhibition en
mm, y compris celui des disques qui est de 6 mm.
Figure 5 Antifungal activity of butanolic extract of Actinomadura spp. strain AC 170 against various pathogenic and toxinogenic fungi.
Aspergillus candidus (A. can) ; A. carbonarius (A. car) ; A. fumigatus (A. fum) ; A. niger (A. nig) ; A. ochraceus (A. och) ; A. terreus
(A. ter) et Aspergillus sp. (A. sp.) ; Candida albicans (C. alb) ; Fusarium oxysporum f. sp. albedinis (Foa) ; Penicillium sp. no 1 (Pen
1) et Penicillium sp. no 2 (Pen 2).

ques des polyènes. Les maxima d’absorption sont
obtenus à 210, 262,5 et 326 nm (Fig. 6).
Discussion
L’utilisation du milieu « chitine-vitamines B » addi-
tionné de pénicilline comme antibiotique sélectif
nous a permis d’isoler à partir d’un échantillon de
sol saharien une souche d’actinomycète nommée
AC 170. L’étude chimiotaxonomique de cette sou-
che a montré que celle-ci possède dans ses cellules
l’isomère DL de l’acide diaminopimélique (sans gly-
cine) et du madurose comme sucre caractéristique.
Ce résultat correspond au chimiotype III B défini par
Lechevalier et Lechevalier [17]. De plus, l’analyse
des phospholipides membranaires a montré l’ab-
sence de phospholipides azotés tels que la phospha-
tidyl–éthanolamine et des phospholipides conte-
nant de la glucosamine. Cela permet de déduire
que la souche AC 170 possède des phospholipides de
type PI selon Lechevalier et al. [18]. Ces données,
ainsi que les caractéristiques morphologiques de la
souche (courtes chaînes de spores sur le mycélium
aérien) nous permettent de rattacher cette der-
nière au genre Actinomadura [21].
En ce qui concerne la production d’antibioti-
ques, des exemples de souches d’actinomycètes
poussant sur milieux liquides mais ne produisant
pas de substances actives, ont été rapportés par
certains auteurs [13,26]. Ces derniers ont remarqué
que la production apparente ne se fait que sur
milieux solides et le passage aux milieux liquides
pose quelquefois des problèmes quant à la produc-
tion d’antibiotiques. Ils expliquent cela par le fait
que la répartition des nutriments dans les milieux
liquides varie avec le temps de fermentation alors
que leur distribution autour des colonies poussant
sur les milieux solides ne varie pas ou varie très

Figure 6 Spectre UV-visible de l’extrait butanolique brut de la souche Actinomadura sp. AC 170.
Figure 6 UV-visible spectrum of butanolic extract of Actinomadura spp. strain AC 170.
218
peu. Cependant, nous sommes en présence d’un
cas très différent puisque la souche AC 170 a la
particularité de ne pas croître dans les milieux
liquides, aussi bien complexes que synthétiques et
dans n’importe quelles conditions (aération, tem-
pérature, pH, lumière, etc.). Ce phénomène n’a
jamais été signalé chez les actinomycètes. Le résul-
tat que nous avons obtenu est toutefois intéressant
car il pourrait supposer une éventuelle originalité
de la souche AC 170 du point de vue espèce (à
confirmer ultérieurement par des études molécu-
laires).
La production d’antibiotiques de la souche AC
170 est très importante sur les milieux gélosés
testés, les meilleurs étant les milieux GYEA et ISP1.
Il faut signaler toutefois que nous nous sommes
contentés dans ce travail, d’une recherche empiri-
que de milieux menant à une production accepta-
ble d’antibiotiques. Une étude d’optimisation des
milieux de production devrait être menée s’il
s’avère que les antibiotiques produits sont nou-
veaux.
Même si la souche AC 170 ne pousse pas en milieu
liquide, cela ne représente pas un handicap pour la
production de substances actives. En effet, la quan-
tité d’extrait brut issue de cinq boîtes de pétri (soit
80 mg pour 100 ml de culture) est l’équivalent de la
quantité d’extrait brut issu de 5 à 10 l de milieu
liquide (en fermenteur) obtenu dans le cas de nos
autres souches d’actinomycètes.
L’extrait butanolique brut a montré une activité
antifongique très importante contre les 11 champi-
gnons pathogènes et toxinogènes testés. Le spectre
d’action large et la forte activité des antifongiques
produits par l’isolat AC 170, pourraient ouvrir des
perspectives quant à leur utilisation dans le traite-
ment des maladies fongiques et même bactérien-
nes.
La bioautographie de l’extrait butanolique a ré-
vélé une seule tache active sur trois systèmes de
solvants, ce qui suggère que l’on est en présence,
soit d’un seul antibiotique, soit d’un complexe
d’antibiotiques à structure chimique très proche et
inséparable par la méthode utilisée.
Les réactions chromogéniques ont permis de ré-
véler la présence de phénols et d’aromatiques poly-
cycliques. En revanche, les résidus aminés, glucidi-
ques, stéroïdiques et éthérés sont absents.
L’analyse de l’extrait butanolique brut par spec-
trophotométrie UV-visible a montré que cet extrait
ne contient pas de substances de nature polyéni-
que, lesquelles sont caractérisées par la présence
de trois maxima très caractéristiques entre 291 et
405 nm [8]. Ce résultat est intéressant car les
B. Badji et al.
molécules polyéniques sont indésirables dans les
programmes de screening de nouvelles molécules
antifongiques en raison des problèmes liés à leur
toxicité, à leur instabilité et à leur mauvaise solu-
bilité.
L’ensemble de ces données préliminaires nous
permet de penser que l’antibiotique produit par la
souche AC 170 est un aromatique. La purification et
la détermination de la structure de cet antibiotique
antifongique sont en cours de réalisation.
Références
[1] Athalye M, Goodfellow M, Lacey J, White RP. Numerical
classification of Actinomadura and Nocardiopsis. Int J Syst
Bacteriol 1985;35:86–98.
[2] Becker B, Lechevalier MP, Gordon RE, Lechevalier HA.
Rapid differentiation between Nocardia and Streptomyces
by paper chromatography of Whole cell hydrolysates. J
Appl Microbiol 1964;12:421–3.
[3] Beck-Sagué C, Jarvis WR. Secular trends in the epidemiol-
ogy of nosocomial fungal infections in the United States
1980-1990. J Infect Dis 1993;167:1247–51.
[4] Betina V. Bioautography in paper and thin layer chroma-
tography and its scope in the antibiotic field. J Chromatogr
1973;78:41–51.
[5] Breton A. Moisissures nuisibles. In: Botton B, Breton A,
Fevre M, Gauthier S, Guy P, Larpent JP, et al., editors.
Moisissures utiles et nuisibles : Importance industrielle.
Paris: Masson Paris; 1990. p. 210–25 (Dans).
[6] Carle S. Les antifongiques dans le traitement des infections
invasives. Pharmactuel 2003;36:25–41.
[7] Couturaud F. Aspergillus et poumon. Rev Fr Allergol Immu-
nol Clin 2004;44:83–8.
[8] Dinya ZM, Sztaricskai FJ. Ultraviolet and light absorption
spectrometry. In: Aszolas A, editor. Modern analysis of
antibiotics, editor. New York: Copyright by Marcel Dekker,
Inc; 1986. p. 19–96.
[9] Eckwall EC, Schottel JL. Isolation and characterization of
an antibiotic produced by the scab disease-suppressive
Streptomyces diastatochromogenes strain Pon SSII. J Ind
Microbiol Biotechnol 1997;19:220–5.
[10] Etzel RA. Mycotoxins. JAMA 2002;287:425–7.
[11] Hayakawa M, Nonomura H. Humic acid-vitamins agar, a
new medium for the selective isolation of soil actino-
mycetes. J Ferment Technol 1984;65:501–9.
[12] Huet J. Généralités sur les médicaments antifongiques. In:
Afect, editor. Principaux antifongiques et antiparasitaires,
Tome 1 (5): Antifongiques. Traité de chimie thérapeu-
tique. Paris: Tec et Doc, Lavoisier; 1999 (Dans).
[13] Iwai Y, Omura S. Culture conditions for screening of new
antibiotics. J Antibiot 1982;35:123–41.
[14] Korpi A, Kasanen JP, Alarie Y, Kosma VM, Pasanen AL.
Sensory irritating potency of some microbial volatile
organic compounds (MVOCs) and a mixture of five MVOCs.
Arch Environ Health 1999;54:347–52.
Activité antifongique d’Actinomadura sp. sur des champignons pathogènes et toxinogènes
[15] Lacroix C, Dubach M, Feuilhade M. Les échinocandines :
une nouvelle classe d’antifongiques. Med Mal Infect 2003;
33:183–91.
[16] Lazzarini A, Cavaletti L, Toppo G, Marinelli F. Rare genera
of actinomycetes as potential producers of new antibiot-
ics. Antonie Van Leeuwenhoek 2001;79:399–405.
[17] Lechevalier HA, Lechevalier MP. Composition of whole-cell
hydrolysates as a criterion in the classification of aerobic
actinomycetes. In: Prauser H, editor. The Actinomyc-
etales, editor. Jena: Fischer G; 1970. p. 393–404.
[18] Lechevalier MP, de Bievre C, Lechevalier HA. Chemotax-
onomy of aerobic actinomycetes: phospholipid composi-
tion. Biochem Syst Ecol 1977;5:249–60.
[19] Maskey RP, Li FC, Qin S, Fiebig HH, Latsch H. Chandranani-
mycins A~C: Production of novel anticancer antibiotics
from a marine Actinomadura sp. Isolate M048 by variation
medium composition and growth conditions. J Antibiot
2003;56:622–9.
[20] Merck E. Révélateurs pour la chromatographie en couches
minces et sur papier. Darmstadt; 1975.
[21] Meyer J. New species of the genus Actinomadura. Z Allg
Mikrobiol 1979;19:37–44.
219
[22] Minnikin DE, Patel PV, Alshamahony L, Goodfellow M. Polar
lipid composition in the classification of Nocardia and
related bacteria. Int J Syst Bacteriol 1977;27:104–17.
[23] Sabaou N, Hacène H, Bennadji A, Bennadji H, Bounaga N.
Distribution quantitative et qualitative des actinomycètes
dans les horizons de sol de surface et profonds d’une
palmeraie algérienne. Can J Microbiol 1992;38:1066–73.
[24] Sabaou N, Boudjella H, Bennadji A, Mostefaoui A,
Zitouni A, Lamari A, et al. Les sols du Sahara algérien,
source d’actinomycètes rares producteurs d’antibiotiques.
Sécheresse 1998;9:147–53.
[25] Shirling EB, Gottlieb D. Methods for characterization of
Streptomyces species. Int J Syst Bacteriol 1966;16:313–40.
[26] Shomura T, Yoshida J, Amano S, Kojima M, Inouye S,
Niida T. Studies on Actinomycetales producing antibiotics
only on agar culture. I. Screening, taxonomy and morphol-
ogy productivity relationship of Streptomyces halstedii,
strain SF 1993. J Antibiot 1979;32:425–7.
[27] Zitouni A, Lamari L, Boudjella H, Badji B, Sabaou N,
Gaouar A, et al. Saccharothrix algeriensis sp.nov., isolated
from Saharan soil. Int J Syst Evol Microbiol 2004;54:
1377–81.