Encéphalopathie Spongiforme Bovine

Maladie de la Vache Folle

ESB
Mad Cow Disease
‫جنونا لبقر‬
 Définition
 L'Encéphalopathie Spongiforme
Bovine (ESB) est une maladie
transmissible affectant le cerveau
des bovins caractérisée par une
dégénérescence spongiforme du
système nerveux central.
Les maladies à
prions
K Peoc’h
Des Maladies D’un Genre Nouveau

- Agents infectieux ni viraux, ni bactériens, ni

parasitaires encore appelés ATNC
- Accumulation dans le SNC de la protéine
prion
anormale ou PrPSc

- Neurodégéneratives
- D’évolution lente
- Mortelles
- Touchant l’homme et l’animal
- Rares chez l’homme
Trois Prix Nobel pour un agent mystérieux

Une maladie virale lente liée

au cannibalisme?

Une proteine !

Une protéine aux propriétés étranges

 Un Agent atypique

1 Pas d’agent conventionnel : hypothèse du prion

2 Une protéine co-purifiée avec l’infectiosité

3 PrPSc: une copie déformée de la PrPC présente

à la surface des cellules qui diffère par la structure tridimensio
et les propriétés physico-chimiques

4 PrPSc est très résistante

 Qu’est ce qu’un prion?

Une particule
infectieuse protéique
extrêmement
résistante constituée
majoritairement si ce
n’est uniquement de
l’isoforme anormale
d’une protéine
cellulaire
PrPc (« normale ») PrPSc (« pathologique »

Protéinase K Protéinase K

Digestion complète

Transconformation Maladies à
hélices  feuillets  prions
 Des Caractéristiques Communes

- Dégénérescence rapide du SNC

- Incubation longue

- Lésions neuropathologiques:
- Gliose
- Spongiose
- Perte neuronale

- Aucun syndrome infectieux:

ni réponse inflammatoire,
Astrogliose
ni réponse immunitaire
 Les maladies à prions animales

La tremblante du mouton ou scrapie

L’encéphalopathie bovine spongiforme ou ESB

Les autres Encéphalopathies spongiformes

subaigues transmissibles (ESST) chez les
félins,
le vison, les cervidés.
 L'Encéphalopathie Spongiforme
Bovine (ESB)

• Incubation de l'ordre de 5 ans.

• Modifications du comportement et troubles
locomoteurs : nervosité, anxiété, peur,
agressivité, démarche hésitante et
vacillante, tremblements.
• L'état général des animaux se détériore. "maladie de la
vache folle"
• Durée d’évolution 6 à 8 semaines
• Pas de diagnostic de certitude sur des
animaux vivants en incubation. Diagnostic
de certitude post mortem
 Les maladies à prions humaines

Kuru acquise

Maladie de Creutzfeldt-Jakob génétique

(MCJ) sporadique
acquise

Syndrome de Gerstmann-Sträussler génétique

-Scheinker (GSS)

Insomnie fatale familiale génétique

(IFF)
 La Maladie de Creutzfeldt-Jakob

Rare
Neurodégénérative
Mortelle
Accumulation de PrPSc

- Formes sporadiques (85%)

- Formes génétiques Examen Histologique d’un
- Formes acquises cerveau de patient
présentant une MCJ
 
Facteurs génétiques (codon 129 de PRNP)

EEG
présentant
des ondes
pseudo-
périodiques
IRM
 La MCJ sporadique

Touche des patients d’environ 60 ans en moyenne

Hommes et femmes touchés de manière identique

-Myoclonies
-Ataxie cérébelleuse
-Démence d’évolution rapide
-Troubles oculaires
-Troubles neurologiques (pyramidaux ou extra-
pyramidaux)

Evolution en quelques mois vers la mort

Pas de traitement disponible
 Les MCJ iatrogènes

Liées
- à une greffe : cornée, dure mère
- à une injection d’hormones : hormone de croissance
- à un acte chirurgical : électrodes stéréotaxiques

Durée d’incubation longue – plusieurs années..-

Signes cliniques variables en fonction de la voie
d’inoculation de l’agent (centrale, périphérique..)
Démence d’évolution plus lente pouvant s’étaler sur
plusieurs années
 V-MCJ ou variante de la MCJ

Environ 170 cas à ce jour dont 155 environ en GB,et

11 en France

Liée à la contamination par l’agent de l’ESB

Touche des patients jeunes (moyenne d’age 30 ans)

Prédominance des signes psychiatriques
Evolution plus longue que dans la forme sporadique

Aspect neuropathologique caractéristique: plaques

en marguerite
 Le diagnostic différentiel

Chez les patients jeunes et âgés

Encéphalites infectieuses et notamment virales

Chez le patient âgé

Maladie d’Alzheimer
Démences
Néoplasies et paranéoplasies

Chez le patient jeune

Troubles psychiatriques sévères
 Diagnostic des maladies à prions

• Chez l’animal • Chez l’homme

– Ante mortem – Ante mortem:
• Clinique • Diagnostic clinique,
– Post mortem biologique, et
• Mise en évidence neuroimagerie
de PrPSc par WB ou – Post mortem
ELISA • Examen
• Transmission à neuropathologique
l’animal et mise en évidence
de PrPSc par WB ou
ELISA
 Détection de la protéine 14-3-3 dans le LCR
MCJ

1 2 3 4 5 6 7
8

30
p131 kD
p130

anti- 14-3-3b (K19)

Bande à 30 kD correspondant à la protéine 14-3-

vMCJ: détection de PrPSc dans les amygdales

Immunohistochimie Western Blot

Hill et al., 1999

 Un Agent très résistant

R S

- Chaleur sèche
Procédés - Ultrasons - Chaleur humide
physiques - Ultra violets 134°C, 20 minutes
- Radiations ionisantes 3 bars

- Gaz, glutaraldéhyde, - Eau de Javel 12°,

Procédés éthanol, peroxyde 1 heure
chimiques d’hydrogène, - Soude molaire,
iodophores 1 heure
 Médicaments et ESB

• 1992: interdiction des préparations

magistrales, des médicaments
homéopathiques à base de tissus bovins
• 1993: Interdiction de dons de
placentas des patients traités par GH
• 2000 AMM : conformité a la
monographie de la pharmacopée
européenne relative aux risques des
ESST
 caractérisée par une vacuolisation des
neurones d'où le terme spongiforme. Ils
ne sont pas cultivables in vitro. La seule
façon de les étudier consiste à inoculer à
l'animal d'expérience, au singe, un extrait
de cerveau qui reproduit chez le singe
une maladie analogue à la maladie
humaine, après une incubation très
prolongée dépassant un an, voire
même 10 ans.
 Par ailleurs, des animaux souffrent
et meurent d'encéphalopathies
spongiformes distinctes, dues à des
agents différents, les plus connues
étant la tremblante du mouton et
de la chèvre (ou scrapie, ou gratte),
le dépérissement chronique des
cervidés (aux USA) et la maladie
de la vache folle.
 Ils se situent à part, au-delà des
frontières de la virologie :
invisibles, même au microscope
électronique, ils résistent de façon
extraordinaire aux procédés
d'inactivation physico-chimiques
qui détruisent le pouvoir infectieux
des bactéries et des virus; chaleur,
formol, ultraviolets.
 Ils résistent une heure à 100° C

 les pièces anatomiques cérébrales

conservées des années dans le
formol, non seulement restent
infectantes, mais voient leur
résistance à l'inactivation
augmentée.
 En revanche, ces agents sont
sensibles aux 3 mesures
"drastiques" suivantes :
 la chaleur humide (autoclavage) à
134°C pendant 1/2 heure,
 la soude 1N durant 1 heure à 20°C,
 l'eau de Javel diluée au demi (6°
chlorimétriques) durant 1 heure à
20°C.
 Kuru
• Cannibal culture of Papua New Guinea.
• Affected mostly women and children, with a
small amount of men. anywhere from 5 to 10
percent of the population died each year from
kuru.1
• When loved one died, men ate muscle portions
and women and children were left with the
lesser organs and brain, where we now know
prions tend to cluster.
• The rare male cases occurred because of the
possible 20 to 30 year dormancy period of
prions where the infectious agents were
ingested as children.
Kuru (continued)

• Analyzed by New Yorker Carleton Gajdusek

and Lithuanian Dr. Vincent Zigas (both in
photo) in 1957.
• Initially believed to be a virus causing
encephalitis (swelling of the brain), with the
same symptoms as Parkinson's, Alzheimer's,
and MS. However these were degenerative,
not infectious diseases, and not epidemic as
kuru was.
• After autopsy, Gajdusek made the
connection of brain damage to recently
discovered CJD.
• No treatment was ever found, and when
cannibalism was eventually phased out of
the culture, so too came the disappearance
of kuru.
Creutzfeldt-Jakob Disease (CJD)
• Discovered in 1921by Dr. Hans Gerhard
Creutzfeldt and Dr. Alfons Jakob, colleagues at
the University of Hamburg Germany.
• Now more common than rabies.

• Physical attributes of the affected brain:

– Enlarged astrocytes- Star shaped cells
attached to blood vessels in brain.
– Holes where neurons used to be.
– Amyloid Plaques-flower shaped protein
waxy buildup.

Microscope slide of brain

affected by CJD
 CJD Symptoms:
(first 7 same as BSE)
• restlessness.
• aggressiveness (biting and hitting).
• loss of motor function.
• loss of appetite.
• convulsions.
• blindness.
• self mutilation.
• inability to swallow.

90% of deaths usually occur within one year of

diagnosis, difficult to confirm diagnosis until post
mortem.
 CJD Transmission:
• Humans can acquire the prion by
exposure to meat that has come
in contact with the brain or spinal
column of the animal.
• Surgical equipment can be
unknowingly infected by use on
a patient with CJD, and because
sterilization techniques do not
In common slaughtering practices, the kill the prion, they are
animal is often sliced at least once transmitted to the other patients
through the torso, severing the spinal
column and exposing all the the in subsequent procedures.
surrounding flesh to the infectious agent.
 New Variant CJD (vCJD)
• Much earlier onset but same
symptoms as classic CJD, often with
prolonged life expectancy.
• A recent test on surgical equipment
used for tonsillectomies in the U.K.
revealed that 50% of tools were
infected with vCJD, even after
sterilization and autoclaving. (The
Jonathan was diagnosed with vCJD at
tonsils are one of the major glands 17 and treated with the drug Pentosan
polysulphate (PPS) , commonly used as
where the body stores prions.) an arthritis treatment for dogs. This
extended his life by several years, but
did not cure him.
Other Forms of Transmissible
Spongiform Encephalopathies
 Scrapie
• Known to have existed for at least
200 years without being
transmitted to humans, while being
endemic in sheep populations all
over the world.
• There are 23 variations of prion
mutation possible, each with a
different incubation period as well
as patterns of amyloid plaque in the
brain.
• Each variation is known by a
unique symptom, such as
“drowsy”, “hyper”, or “fat
building”.
 Domestic and Exotic Felines
• The first case of domestic Feline Spongiform Encephalopathy was
discovered in the U.K. in May of 1990. Max was a 5 year old Siamese
cat. The FSE was discovered in a rare autopsy (which are thought to
be too costly and unnecessary by most pet guardians).
• Lab tested cats are not susceptible to scrapie but extremely
susceptible to BSE. These results reinforced the findings that it was
possible for a species (such as humans) to be susceptible to BSE
without being susceptible to scrapie, despite their overwhelming
similarities.

A Puma and 3 cheetahs

died from FSE in 1989
at the London Zoo from
rendered food.
 Other Zoo Animals

Arabian Oryx Gemsbok

From 1986 to 1989. The London Zoo lost several varieties of hoofed
ruminants (cud chewing animals), including Nyala, Gemsbok, Kudu,
Eland and Arabian Oryx, (all similar to antelope or deer), to spongiform
encephalopathy. These animals had all been fed rendered protein.
 Mink
• Wisconsin is the largest U.S. producer
of mink.
• Known as sentinel species, mink often
show disease before other animals
because they are fed stock animals
unfit for human consumption from
slaughterhouses and farms.
• Contract many bovine diseases-
anthrax, botulism, tuberculosis.
• Outbreaks of MSE common,
devastating to ranchers. “ a single
outbreak could wipe out all of the
animals on an entire mink ranch.”1
100% fatal to mink exposed to
contaminated feed.
• Isolated prion from autopsy Ranched for their fur, these carnivorous
indistinguishable from scrapie. animals are extremely susceptible to Mink
Spongiform Encephalopathy from eating other
infected animals.
 Chronic Wasting Disease
(Deer and Elk)
• Chronic Wasting Disease is the
spongiform encephalopathy most
similar to scrapie.
• The infected animals exhibit more
progressive degeneration (similar
to Alzheimer's) than other TSE’s.
• Most likely not contracted by
ingesting infected proteins, but
through everyday contact with
other infected animals in their
herds.
 Agent Pathogène
 Dans la cervelle de bovins infectés, une
protéine spécifique de l’ESB ou « maladie
de la vache folle », peut être détectée.
 Cette protéine, qui est nommée
 PrPres, est une forme modifiée de la protéine
prion normalement présente dans les cellules
nerveuses, PrPc.
 La PrPres est soit l’agent transmissible de
l'ESB, soit une partie de l'agent infectieux.
 Elle fait des ATNC des agents
extraordinaires, composés uniquement
d'une protéine résistante aux
protéases (PrPres ou PrPr), cette
protéine étant une "forme isomorphe"
(c’est-à-dire pliée anormalement) d'une
protéine cellulaire normale, PrPc. Celle-ci,
codée par le génome de l'hôte, est
ubiquitaire mais surexprimée sur les
neurones.
 PrPc et PrPres ont la même
séquence, mais la PrPres a plusieurs
feuillets béta que n'a pas la PrPc, à la
place d'hélices alpha de la PrPc,
expliquant ses nouvelles propriétés :
 résistance,
 insolubilité,
 non-métabolisation et agrégation en
fibrilles.
 La PrPres aurait la propriété de
convertir, par simple contact la PrPc
en PrPres, forçant la PrPc à prendre
la forme PrPres, par
"transconformation",
transformation d'hélices alpha en
feuillets béta. Donc propagation
d’une information plutôt que d’une
molécule.
 L’accumulation dans les neurones
de l'indestructible PrPres donne les
vacuoles caractéristiques (avec
"perte neuronale") et des plaques
amyloïdes, expliquant les troubles
neurologiques.
 Trois hypothèses sont émises

 Hypothèse 1 :
 La protéine LRP, (Laminin Receptor
Protein) récepteur de la PrPc normale,
interviendrait dans son internalisation.
Avec la PrPres anormale, le processus
serait accéléré, d’où son accumulation
dans la cellule provoquant l’apoptose.
 Hypothèse 2 :
 La protéine LRP pourrait être un
récepteur pour la PrPres infectieuse.
 Hypothèse 3 :
 La protéine LRP serait un corécepteur
de la PrPc normale, permettant ainsi la
liaison de la PrPres, voire d'un virus.
C’est la liaison des 2 molécules qui
engendrerait un site accepteur.
 Il reste bien des mystères
 A quoi sert la PrPc, glycoprotéine localisée à la
surface de nos cellules ?

 Les souris dépourvues génétiquement de PrPc

(souris "knock-out", "invalidées" pour la PrPc) se
portent bien et sont totalement insensibles à
l'inoculation de l'agent du scrapie.

 L'injection de la PrPres seule ne transmet pas les

encéphalopathies spongiformes !

 Faut-il un cofacteur (ac nucléique ?) pour la

transconformation ? pour transmettre
l’encéphalopathie ?
L’HYPOTHÈSE DU PRION ou de la
"PROTÉINE SEULE"
REPARTITION GEOGRAPHIQUE

 L’épisode principal, de source

unique, est survenue en Grande-
Bretagne. Des cas d’ESB ont été
enregistrés dans d’autres pays par
suite de l’exportation par la Grande-
Bretagne de bovins infectés ou de
farines de viande et d’os
contaminées.
“Protein Concentrates”: rendered
animal protein feed
• This inexpensive, high protein food is sold as granules
or dry food pellets to animal farmers for vigorous
animal growth.
• It is sold in greatest quantities to cattle farmers because
administration of hormones such as RGBH to their cows
for increased milk production requires them to increase
the cow’s protein consumption.
• This feed is also given to:
– Pigs
– Turkeys, chicken and ducks
– Horses
– Catfish, salmon and shrimp
– Domestic animals (cats and dogs)
– Zoo animals
 Rendered Protein Ingredients:
Animals unfit for human
consumption such as:

– Sick cows
– Sick pigs
– Sick turkeys, chicken and
ducks
– Horses
– Sick catfish, salmon and
shrimp
– Cats and dogs
– Zoo animals
– Road kill
 More ingredients:

– Frying oil from restaurants

– Brains, spinal cords, feathers,
hooves, skins, hair, fur, whiskers,
bones, teeth, etc. remaining from
slaughterhouses
– Sewage sludge
– Manure
– Sawdust/wood scraps
– Newspaper
– Cement dust
– Maggot infested grains
Rendering Process: Health and Environmental
Effects
The animals and other ingredients
are processed into smaller pieces in a
“Double Screw Press” (top left) and
then boiled down in huge vats
(bottom left) at extremely high
temperatures with dangerous
chemicals. “Infected tissue from a
single animal has the potential to
mingle with tissues from thousands
of others, and then be distributed
widely in feed.”1
 Recycling?
The rendering industry defends their work as a form of
“recycling”-

• 1.3 million tons in the U.K. in 19881

• 15 million tons in the U.S. in 19922

This is waste that would have otherwise gone into landfill.

But is the risk belong taken worth the tradeoff?

1. (Rhodes, 176) 2. (Rampton, 63) 59

Symptoms of Bovine Spongiform
Encephalopathy
restlessness
aggressiveness
loss of motor function
loss of appetite
convulsions
blindness
self mutilation
• On July 7, 1988, a settlement was
offered by British Agriculture of
payment for 50% of the worth of the
cow if reported to the government.
• This in fact gave the ranchers an
incentive not to report suspicious cases,
as they would make the full profit from
sneaking past inspection and selling the
meat into the market versus reporting
the problem and only receiving 50%
compensation.
• Not only did ranches lose money from
BSE reports, they lost credibility as
well as their customer base, and in
effect became “blacklisted.”
 The effect of BSE in the E.U.

Millions of suspect animals

in the UK and across Europe
have been destroyed since
1986, but the disease is still
very much present.
Causative agent of BSE: What is a
Prion?
 prions
• Identified by Dr. Stanley Prusiner, who in 1997 won the
Nobel Prize for his research on prions.
• Does not contain RNA or DNA (therefore not technically
alive like other infectious agents like viruses or bacteria)
• Does not evoke any detectable immune response or
inflammatory reaction in host animals.
• In most animals, 3-7 years dormant incubation where the
animal is asymptomatic.
• Average age of cows in the U.S. is 4 years old, meaning
that the animal may be infected but still asymptomatic at
time of slaughter.
 Prions in the body
Found in mainly in the brain, spinal cord and nervous tissue, with increasing
research discovering prions in glands and blood as well.

Physical Attributes of the affected brain:

– Enlarged astrocytes- Star shaped cells attached

to blood vessels in brain.
BSE Brain

– Holes where neurons used to be.

– Amyloid Plaques-flower shaped protein waxy

buildup.
 Prion protein is indestructible
by heat up to 1000° F (350° C)
Hot enough to melt lead.
In 1986, 4.5 million cows were incinerated in the U.K. after the
discovery of BSE. The ashes, stored in underground concrete
containers, were retested again in 1998 and found to still be infected
with active prions.
Transmission
 Animal Transmission
• Reasons for emergence
under debate
− Feed contaminated with
scrapie or unknown BSE
− Spontaneous
− Changes in feed processing
• Maternal transmission
− Possible, low risk
− Retrospective offspring culling
• Current thought
− Spread via ingestion of BSE contaminated feed
 Human Transmission
• Humans consuming cattle
products infected with BSE
can develop vCJD
− Brain and spinal tissue
• Dose required not known
• Genetic susceptibility
− All
human cases have been
homozygous for methionine
at codon 129 of PrPC
 Human Transmission
• Possible modes
− Transmission from surgical instruments
used on tonsils, appendix, or
brain tissue
− Growth hormone injections
− Vaccines
 Human Transmission
• Unlikely modes
− Blood transmission
− Consumption of milk and milk products
− Gelatin products (when manufacturing
process is done correctly)
 vMCJ et risque transfusionnel?

Forme symptomatique
1996, patient agé de 62 ans transfusé avec 5 unités de culot
globulaire non déleucocyté.
Une des unités en provenance d’un donneur de 24 ans qui développa un
vCJD (décés 2000) 6,5 ans après la transfusion.
Le receveur développe un vCJD et décède 13 mois plus tard. (génotype
codon 129 PRNP 129MM). Lancet, 7 février 2004.

Forme asymptomatique
1999, patient âgé transfusé avec une unité de culot globulaire non
déleucocyté d’un donneur qui développe une vMCJ 18 mois après le
don.
Le receveur asymptomatique décède d’une rupture d’anévrisme de
l’aorte Autopsie : PrPres dans la rate, un ganglion mais pas dans le
cerveau.
(génotype codon 129 PRNP 129MV). Lancet, 7 août 2004.
Animals and BSE
 Clinical Signs
• Incubation: 2-8 years
• Initial neurological signs
− Apprehension, fear, easily startled,
depressed
• Final stages
− Excitable,hyperreflexia, hypermetria,
ataxia, muscle fasciculation, tremors
 Clinical Signs
• Terminal state
− Decreased rumination
− Loss of body weight
and condition,
despite good appetite
• There is no treatment for BSE
• Affected herds
− 2% morbidity
− 100% mortality
 Post Mortem Diagnosis
• Histopathology of brain tissue
− Spongiform changes in gray matter
• Detection of abnormal prion protein
 Post Mortem Tests for BSE
• All are based on antibodies to detect
prion protein in tissue
• Immunohistochemistry is considered
the gold standard
− Expensive
− Labor intensive
• Various rapid diagnostic tests have
been developed
− Western blotting
− ELISA
 Les mesures de prévention

Le retrait systématique des matériaux spécifiés

à risque

Un dépistage systématique à l’abattoir

  Le traitement des matières grasses animales

L’interdiction des farines animales

La gélatine contrôlée

Un système de traçabilité
Que sont les matériels à risque spécifiés (MRS) ?

Les matériels à risque spécifiés (MRS) sont des tissus qui,

en cas de contamination des ruminants par l’ESB et même en
l’absence de symptômes apparents, seraient susceptibles
d’être infectieux.

 Par souci de précaution, ils doivent donc être retirés de la

chaîne alimentaire humaine, et ne faire l’objet d’aucun
recyclage dans l’alimentation animale à travers les farines
animales.

Depuis 1996, les MRS sont systématiquement retirés à

l’abattoir et détruits par incinération.
 
 Eviter la diffusion de l’ESB

• Surveiller les cheptels

• Faire des tests sur les bovins
• Interdire les protéines animales dans leur
alimentation
• Eliminer les tissus à risque de l’alimentation
humaine
• Supprimer les troupeaux présentant des
bêtes malades
 Compléments alimentaires

• 1992: retrait et interdiction des

compléments renfermant des tissus
ovins et bovins (sauf muscle)
• 1997: extension aux caprins, aux
tissus et liquides d’origine
embryonnaire