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Dtermination du statut de HER2

dans les cancers du sein :


quavons-nous appris en 10 ans?

Anne Vincent-Salomon
Dpartement de Biologie des Tumeurs et INSERM U830
Institut Curie
Paris
1

PLAN

Quest-ce quERBB2/HER2 ? Mcanismes dactivation

Dtermination
Mthodes (FISH/ SISH / CISH/ DISH)
Scores et cas quivoques (score 2+)

Contrle de qualit et recommandations

Stabilit du statut de ERBB2 au cours du processus mtastatique

Diversit des carcinomes HER2 amplifis en fonction du statut des RO, du


stroma et du niveau damplification de ERBB2

Paramtres de rponse aux Anti-HER2

Perspectives

ERBB2/ Neu/HER2

Gne: oncogne, situ sur le chromosome 17q12


Protine = rcepteur tyrosine-kinase trans-membranaire

ACTIVATION de ERBB2/HER 2 dans les cancers


du sein
par amplification du gne

Mthodes de dtermination du statut de HER2


Analyse du gne :
Sur coupes tissulaires
Sur un microscope fluorescence: FISH
En lumire optique,
CISH ou en Dual ISH en une seule coupe
SISH sur deux coupes (une pour le centromre du chr 17, une pour
ERBB2)

Par PCR quantitative sur ADN extrait du bloc paraffine

Analyse de la protine par immunohistochimie


A ajuster sur le statut du gne
Contrle de qualit indispensable au long cours

CISH

SISH

FISH

Inform Dual SISH


7
DNA probe (Ventana)

Dfinition des scores de limmunohistochimie


Score

Marquage

Indication Herceptin

Absence de marquage ou
< 10% de cellules

non

Marquage faible et incomplet


de >10% de cellules

non

++

Marquage faible ou modr et


complet de > 10% de cellules

Oui seulement si
amplification prouve
par FISH/CISH/SISH

+++

Marquage fort et complet de


> 30% de cellules

oui

Wolff et al, JCO 2007

Signature molculaire commerciale pour la


dtermination du statut de HER2 ?

Sur matriel fix, par RT PCR quantitative


Test commercial Oncotype DX
Dtermination inexacte du statut de ERBB2

seuls 10 des 28 cas 3+ sont considrs + par le test.


(Dabbs et al, JCO Nov 2011)

Signature molculaire commerciale pour la


dtermination du statut de HER2 ?

Sur matriel fix, par RT PCR quantitative


Test commercial Oncotype DX
Dtermination inexacte du statut de ERBB2

seuls 10 des 28 cas 3+ sont considrs + par le test.


(Dabbs et al, JCO Nov 2011)

Calibration de la technique et
interprtation des marquages
Conditions de raction dimmunohistochimie calibres sur le
statut du gne (FISH ou SISH) concordance > 95%

Utilisation indispensable de tmoins multi-tissulaires


au nombre de copies du gne HER2 connu.
Contrle de qualit interne et externe, importance du pranalytique
Nombre de cas tests par an suffisants (250 cas)
Interprtation adquate des marquages (en fonction de
lintensit du tmoin du jour)
Recommandations du GEFPICS, Annales de Pathologie 2011
Wolff et al JCO 2007

Calibration de la technique et
interprtation des marquages
Conditions de raction dimmunohistochimie calibres sur le
statut du gne (FISH ou SISH) concordance > 95%

Utilisation indispensable de tmoins multi-tissulaires


au nombre de copies du gne HER2 connu.
Contrle de qualit interne et externe, importance du pranalytique
Nombre de cas tests par an suffisants (250 cas)
Interprtation adquate des marquages (en fonction de
lintensit du tmoin du jour)
Recommandations du GEFPICS, Annales de Pathologie 2011
Wolff et al JCO 2007

Tmoins bloc multi-tissulaire (0, 2+, 3+)


Glandes Normales

3+
2+
demander
centre expert
ou dfinir par FISH/SISH

Tumeur 2 copies dHER2

Faux ngatifs rares si pr-traitement par la chaleur

14

Prparation des blocs tmoins


Choix des zones dintrt

Forage blocs donneurs

15

Taux dHER2 (3+) diffrents en fonction


des types histologiques et du stade
Canalaires
T1a, b (<1cm) 9%
< 2 cm
10 -15%
> 2 cm
20 -25%

grade I
grade II
grade III
NN+ 1-3:
N+ > 4:

5%
10-17%
29%
9-20%
16-21%
28%

Autres types
Lobulaire
Tubulaire
Mdullaire, basal-like
BRCA1
BRCA2

< 5%
0%
0%
0%
6%

Cancer inflammatoire
Cancer du sein Homme

30%
11% 30%

Bartlett et al , JCO 2007


Penault-Llorca et al, 2008
Rodrigues et al JCO 2010
Ignatiadis Nat Rev Clin Oncol Janv 2012

Variation de la proportion de cancers du sein


HER2 surexprims entre 1996 et 2005
(Finlande)

(Koninki et al Br Can Res 2009)

Bien identifier les cas quivoques


Cest dire ceux analyser par FISH/CISH
CAS 2+ (5 15% des cas):
Marquage complet
soit non uniforme soit faible
avec un marquage evident circonfrentiel membranaire
>10% des cellules

Cas htrognes (exceptionnels <1% des cas)


Marquage complet et intense
de >10% et < 30 % des cellules carcinomateuses infiltrantes

Surexpression modre Score 2+ =

5 15% des cas

Faible niveau d amplification:


15 30% des cas

19

Pas damplification 70 85% des cas

Surexpression htrogne de HER2 : rare


1,4% des cas dans lessai HERA (O Stoss et al)
Moins de 1 cas par mois lInstitut Curie (Cottu et al Annals of Oncology 2008)
Evaluation du statut HER2 sur :
Ganglions mtastatiques axillaires et / ou
Mtastases viscrales.

Carcinome canalaire infiltrant HER2 htrogne


Biopsie initiale
Mastectomie
aprs chimiothrapie
et trastuzumab

Slection sous traitement


des clones HER2 ngatifs

HetHER2
Iurisci et al, SABCS, 2009, poster n6034

Stabilit du statut HER2 entre


tumeur primaire et mtastase viscrale et /ou ganglionnaire

Tumeur
Primaire 3+

Mtastase
HER2 3+
bronchique

mdullaire

Stabilit HER2 entre


tumeur primaire et mtastases
tude

Patientes

Technique

Concordance(%)

Edgerton et al. (2000)

93

FISH/IHC

80

Gancberg et al. (2001)

100

FISH/IHC

93/94

Lower et al. (2001)

44

IHC

90

Namer et al. (2000)

104

IHC

90

Tanner et al. (2001)

12

CISH/IHC

100/100

Vincent Salomon et al. (2002)

44

IHC

60
43 RL et 17 MD

FISH

81%
100% pour 3+
97%
98 RL1 94%MD

Tapia et al. (2007)

105

FISH

92.4

Umeroglu et al. (2008)

153

IHC/FISH

94.7

Gong Y (2005)

Surexpression de HER 2 stable


aprs chimiothrapie ou
ttt anti HER2 si reliquat tumoral
avant
chimiothrapie

aprs
chimiothrapie

Herceptin en noadjuvant

Tumeur mammaire
avant traitement

Reliquat aprs traitement

Amplicon dHER2 sur le chr 17q

85kb

Marchio et al J Pathol, 2008


Kalleoniemi et al, Am J Pathol 2004
Staaf et al Br Can Res 2010

HER2

27
Co-amplification du centromre chromosome 17 et HER2

Autres amplicons associs lamplification d HER2


0

20

20

40

40

60

80

100

100

120

120

140

140

160

160

180

180

200

200

220

220

240

240

12

20

20

20

20

20

20

40

40

40

40

60

80

60
80

20

60

80

100

100

120

140
160

120
140

140
160

14

15
0

20

20

180

5
16

20

40

20

18
0

40

40

60

60

60

80

80

80

100

100

120

120

80

60

40

17q23.3 PPM1D, BCAS3

10

11

19

20

21

22

100

40

60

100

80

20

20

20q13.31
ZNF217

40

80

100

20

60

80

120

17q21.32 Topo2A
40

60

80

100

11q13.5
CCND1

20

60

80
100

40

40

60

11q13.3

40
40

20

17q12ERRB2/HER2
20

60

120

CHR 17

40

20

140

120

160

40

8q24.1
MYC

100

120

160

80

100

180
200

80

140

180

60

100

120

140

40

60

80

20
20
FGFR1/PPAPDC1B

40

60

80

100

120

13
0

60

8p12

60

40

60

17
18
(Vincent-Salomon Clin Can Res 2008; Burkhardt Br Can Res and TTT, 2009 Jonsoon Br Can res 2010; Staaf Br Can Res 2010)

Altrations gnomiques des carcinomes HER2

Incluant les HER2 3+


RO- et les
HER2 3+/ RO+

Guedj et al
Oncogene 2011

Anomalies de nombre du centromre du chromosome 17 :


4 centromres et 4 copies de HER2

30

Deux grands groupes de carcinomes HER2


En fonction du statut des RO

RO Basal-like

HER2

Mutations de p53
> 90% basal-like
75% HER2/ RO 5% luminal grade 1

RO +
Luminal B , C,

Luminal A

HER2 15%

Sorlie et al, PNAS 2001


De Cremoux, JNCI 1999
Vincent-Salomon, Br Cancer Res 2007
Mani et al, Cancer Research 2009

Carcinome HER2 : diffrents types de stroma


Stroma non lymphode

Stroma lymphode

Prdiction de la rponse aux anti HER2


Statut HER2 dtermin par IHC ou HIS :
trs bon marqueur prdictif ngatif
HER2 0/1+ pas de traitement anti HER2

44 50% des HER2 (3+)


Pas de rponse au anti HER2

Vogel et al, 2002, Slamon et al, 2001, Yu et al, 2000


Seidman et al JCO 2008
Esteva et al Nat Rev Clin Oncol 2010

Diffrents niveaux damplification dHER2


Fort niveau damplification >10 copies)

Faible niveau damplification (6-10 copies)

Sur 50 patientes, 56% de pCR

Sur 27 patientes, 22% de pCR

Arnould et al, Clin Can Res 2007

Mchanismes de non rponse aux anti-HER2


Tyrosine
Kinase

src

IRS1

src
p110

p85

Mutations
Dans 22 33% des cas
HER2 RO+

GRP
SOS
RAS
RAF
MEK1/2

PTEN

Dltions
Dans 30 45% des HER2

MAP Kinase

Akt

p27
p27
cdk2

Apoptose

P
p27

Cycline

Prolifration

dgradation
de p27

Angiognse

Mchanismes de non rponse au Trastuzumab


Altrations de PTEN
PTEN (Chr 10q23)
Dltion de PTEN dans les carcinomes HER2 ~ 30 45%
Expression diminue dans 8 50%

PTEN -

PTEN +

Nagata et al Cancer Cell 2004

Tokunaga et al Br Can Res and TTT 2007


Berns et al, Cancer Cell 2007

Conclusions : en 10 ans
quavons-nous appris sur les carcinomes HER2 (3+) ?
9 30% des cancers infiltrants (stade et type histologique)
Cancers HER2 = Plusieurs entits (RO+ / RO-; Stroma inflammatoire ou
non)

Rponse aux anti-ERBB2 :


fonction du niveau damplification du gne
fonction des altrations molculaires associes
Autres amplicons (CCND1, sur le 20q, le 11q, le 17q)

Mutations de p53, PI3KCA, PTEN


Importance de la calibration et du contrle de qualit de la technique de
dtermination du statut de HER2

Transposition en pratique clinique de la


classification molculaire
Luminal A

Luminal B

RO+ Ki67 >14%


RO+
Haut grade
Bas grade
Ki67<14% CCND1 , chr 8p, 17q, 20q
Mutations TP53
1q+, 16qERBB2 + possible
BCL2 +
ERBB2-

ERBB2
ROERBB2
3+
Haut
grade

Triple-zro/ basal-like

RO- RP- ERBB2Proliferation Ki67 haut


Haut grade
Alterations chromosomiques
Alterations BRCA1
mutations TP53