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ou Le génie génétique :
Chapitre.4 Principe et techniques
Objectifs :
L’élève sera capable : -d’identifier les principes et les objectifs du génie génétique., de décrire les techniques et les
outils du génie génétique. , Et de Se rendre compte de l’intérêt du génie génétique et des domaines de son
application
Rappel: le transfert du gène GFP à l’origine de la synthèse de la protéine GFP ( Green Fluorescent Protein) de
la cellule d’une méduse et son intégration à l’ADN de la cellule œuf d’un lapin (et d’un animal en général)
nous donne un lapin modifié génétiquement qui émet à son tour de la lumière verte fluorescente quand il est
éclairé. Ce transfert du gène d’un organisme à un autre est appelé……………………, le gène transféré est
appelé …………………….ou gène d’………….et le lapin …………………..…ou………...
Document.1
Conclusion : Un gène particulier donne une protéine particulière qui donne à son tour un caractère particulier
En 1987 , deux équipes de recherche belge et américaine ont réussi l’introduction dans le génome de plante de
Tabac du gène codant pour la synthèse d’une protéine toxique pour les insectes. Ce gène est isolé d’une
bactérie Bacillus Thuringiensis utilisée en agriculture biologique pour remplacer les pesticides. Les plantes
transgéniques ainsi obtenues résistent aux insectes et provoquent leur mort.
S’interroger :
1- Quelles sont les principales applications dans les domaines médical et agronomique du génie
génétique ?
2- Quelles sont les étapes nécessaires pour obtenir un microorganisme ou un organisme transgénique ?
3- Quelles sont les techniques du génie génétique ?
4- Quels sont les outils utilisés en génie génétique ?
La galle du collet : Une transgénèse naturelle à la base du génie génétique
Activité.1
II-S’interroger ?
Agrobacterium tumefaciens (Fig.1,doc.3) est une bactérie qui se développe dans le sol. Elle est attirée par des
composés phénoliques dégagés par les plantes lorsqu’elles sont blessées(fi.2,Doc.3) Au niveau de cette
blessure, Agrobacterium est capable de se fixer sur les cellules du végétal et d’induire la formation d’une galle
(prolifération de tissus de la plante) lui fournissant des substrats’opines).
Fig.1 Fig.2
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Document.3
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………………..………………………………………………………………………….……………
III-Construire :
A- à quoi est due cette infection ?
1-Experience : L'inoculation de bactéries virulentes du genre Agrobacterium à des plantes saines sans
plasmide (fig.1) et avec plasmide(fig.2) donne les résultats représentés par le document.4
a-Décrire…………………………………………………..………
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………………………………………………………….. ……………
b-Déduire………………………….………………….…………
……………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………
Activité.1
B…………
…………
Document.5
a- Décrire :
Agrobacterium tumefaciens est une ………………………qui vit dans …………, elle est attirée par les
substances libérées par ……………………………….à la suite d’une…………………………….………….
Ag.tum est capable de se fixer sur la cellule végétale et de lui transférer un ………………………………...
De son plasmide pTi (ADN circulaire bactérien de petite taille),
Ce fragment d’ADN, appelé…………….. s’insère dans le génome (………) chromosomique de la cellule
végétale,
Une fois intégré à l’ADN de la cellule végétale, les gènes de ……………..de Ag.tum vont s’exprimer :
- Les uns vont permettre la synthèse de facteurs de…………………………… comme l’auxine, hormone de
croissance capable d’activer …………..……rapide des cellules au niveau de la blessure entrainant la
formation d’une ……………….. (la galle)
- les autres vont permettre la synthèse des acides aminés et fabriquer ………….. , protéine très utile pour
la vie de la bactérie (énergie…)
Document.6
3-De quoi est constitué le plasmide ? Structure du plasmide : Le plasmide pTi est un petit plasmide, de
215 000 paires de bases. Ce plasmide comporte plusieurs régions, le schéma ci-contre récapitule les régions
responsables de ses différentes propriétés (carte génétique du plasmide Ti )
ADN-T :Région transférée de la bactérie à la
cellule végétale :.
- Cette région est limitée par deux zones (FD à droite et FG
à gauche), importantes pour la réalisation du transfert.
- L'ADN-T comporte une région permettant le développement
de la tumeur ou la galle (par multiplication cellulaire) chez la
plante infectée.
- L'ADN-T comporte aussi les gènes permettant la synthèse et la
libération des opines par les cellules végétales.
Document.7
Vir :Région de virulence : Cette région comporte une série de gènes, qui permettent la fixation de la bactérie aux cellules
végétales et le transfert de l'ADN-T.
OCC : Région de catabolisme des opines. Cette région permet à la bactérie d'utiliser les opines libérées par le végétal suite à
son infection par l'ADN-T.
ORI : Région de réplication. Cette région permet au plasmide de se multiplier dans la bactérie
Activité.1
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1 – 2 – Les étapes de la transgénèse
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I –Comment obtenir le caractère voulu ? Document.9
Les techniques et les outils utilisés dans les étapes du génie génétique
Activité.2
I- Etape.1 : Identifier et isoler le gène d’intérêt à transferer.
Le point de départ est le choix du caractère que l’on veut obtenir, comme par exemple la résistance à certains
insectes, à certaines maladies, à des herbicides,…sachant qu’ à l’origine du caractère il y a une protéine donc il
faut obtenir le gène codant pour la protéine désirée, ou le gène d’intérêt, comment ?
Document.10
Décrire les techniques utilisées : pour isoler le gène d’intérêt, deux méthodes sont utilisées :
- Extraction de l’ADN du gène d’intérêt à partir d’une culture cellulaire, fragmentation ou découpage de
l’ADN par une enzyme ……………………. ( ciseaux moléculaires) et identification du fragment d’ADN
porteur du gène d’intérêt .grâce……………………………………………………
- Extraction de L’ARN messager codant pour la protéine désirée à partir des cellules contenant le gène
d’intérêt, synthèse du brin de l’ADN porteur du gène grâce à ……………… ‘’ la transcriptase réverse’’ et
duplication de ce brin d’ADN pour obtenir la molécule d’ADN double brin à transférer.
Document.11
Activité.2
2- Transcriptase reverse: enzyme d’origine virale qui permet d’obtenir un brin d’ADN à partir d’un brin
d’ARNm.
3- La sonde moléculaire radioactive : séquence de nucléotides permettant, après marquage radioactif d’un
atome qui entre dans la composition des nucléotides de repérer dans l’ADN une séquence de nucléotides
complémentaire avec laquelle elle s’hybride
II- Intégrer ou insérer le gène d’intérêt dans un plasmide d’une cellule hôte ( ex : bacterie ……..………)
A-Les Techniques utilisées (document.12).:
-Décrire :……………………………………
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Activité..2
III-Introduire des plasmides recombinés dans des bactéries et repérer les bactéries Transformées (doc.14)
Document.14
On mélange dans un milieu de culture des bactéries avec des plasmides recombinés, parmi ces bactéries,
certaines intègrent ce plasmide de façon spontanée alors que d’autres restent non transformés, pour distinguer
ces deux types de bactéries, on associe avec le gène greffé, un deuxième gène qui permet la résistance à un
antibiotique tel que la streptomycine. Les bactéries sauvages (naturels) sont sensibles à la streptomycine : elles
ne se développent pas en sa présence
La transformation biologique. Cette technique utilise une bactérie du sol, Agrobacterium, capable de
transformer génétiquement la plante. Ainsi, un gène d’intérêt introduit dans la bactérie sera transférée dans la
plante et intégrée à son génome(matériel génétique) . Cette technique est la plus couramment utilisée.
I- Exemple.1 : Les étapes de la réalisation d’une plante transgénique résistante aux insectes
A- Transformation biologique (document.16 ci-dessous)
Activité.3
II-Exemple.2 :Les étapes de la fabrication du vaccin contre l’hépatite B(document.18 ci-dessous)
III- Exemple. III : étapes de production des médicaments comme l’hormone de croissance, insuline …
(doc.19 ci-dessous)
le gène d'intérêt est isolé à partir du génome humain (1) puis inséré dans le plasmide d'une bactérie (2). Le plasmide
modifié est alors transféré dans la bactérie (3), qui se multiplie rapidement en colonie, laquelle produit la protéine
humaine d'intérêt en grandes quantités (4).(insuline, hormone de croissance ou autres protéine d’intérêt).