Immuno-analyse et biologie spécialisée (2011) 26, 176—181

REVUES GÉNÉRALES ET ANALYSES PROSPECTIVES

Quel est l’intérêt de la recherche des anticorps

anti-nucléolaires dans la sclérodermie systémique ?
What is the interest of the detection of antinucleolar autoantibodies in
the systemic scleroderma ?

P. Comacle , M. Padelli , Y. Renaudineau , P. Youinou ∗

Laboratoire d’immunologie, hôpital Morvan, CHU de Brest, BP 824, 29609 Brest cedex, France

Reçu le 4 mai 2011 ; accepté le 2 juin 2011

Disponible sur Internet le 22 juillet 2011

KEYWORDS Summary Detected by indirect immunofluorescence, antinucleolar autoantibodies (ANoA)

Scleroderma; constitute a heterogeneous group of autoantibodies, found in various autoimmune diseases.
Antinucleolar To assess their importance and clinical interest, we have selected 200 patients with positive
antibodies; ANoA detected between 2007 and 2010. ANoA represent 2.1% of the antinuclear antibodies
Anti-Scl70; conducted in the laboratory. ANoA are detected, half in autoimmune diseases (systemic sclero-
Anti-PM/Scl derma [SSc], lupus, rheumatoid arthritis. . .), and half in other diseases: thrombosis, transplant,
cancer. . . ANoA are rarely indicative of SSc (8,8%) unless they fulfill the following conditions: an
elevated titer (> 1/1280), a nucleolar homogeneous staining, and an associated speckled nucleus
staining. Such criteria are indicative of anti-PM/Scl or anti-Scl70, two ScS specific autoAb.
© 2011 Elsevier Masson SAS. All rights reserved.

Résumé Détectés par immunofluorescence indirecte, les autoanticorps (autoAc) anti-

MOTS CLÉS nucléolaires (AANuc) forment un groupe hétérogène d’autoAc retrouvés dans différentes
Sclérodermie ; maladies auto-immunes. Afin d’en évaluer l’importance et l’intérêt clinique, nous avons repris
Auto-anticorps de façon rétrospective 200 malades chez qui des AANuc avaient été mis en évidence entre
anti-nucléolaires ; 2007 et 2010. Les AANuc représentent 2,1 % des recherches d’autoAc anti-nucléaires réalisées
Anti-Scl70 ; par le laboratoire. Les AANuc ont été retrouvés, pour moitié dans des maladies auto-immunes
Anti-PM/Scl (sclérodermie systémique [ScS], lupus, polyarthrite rhumatoïde. . .) et pour moitié dans d’autres
pathologies telles que des thromboses, des greffes, des cancers. . . Les AANuc sont rarement
révélateurs d’une ScS (8,8 %) sauf s’ils remplissent les critères suivants : un titre élevé d’AANuc
(> 1/1280e ), une fluorescence homogène du nucléole, et une fluorescence moucheté du noyau.
Ces critères sont révélateurs d’autoAc anti-PM/Scl ou d’anti-Scl70, deux marqueurs spécifiques
d’une ScS.
© 2011 Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés.

∗ Auteur correspondant.
Adresse e-mail : youinou@univ-brest.fr (P. Youinou).

0923-2532/$ – see front matter © 2011 Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés.
doi:10.1016/j.immbio.2011.06.003
Recherche des anticorps anti-nucléolaires dans la sclérodermie systémique
Introduction
Entre autres maladies auto-immunes non spécifiques
d’organe, la sclérodermie systémique (ScS) touche priori-
tairement les femmes âgées de 45 à 60 ans. Sa prévalence
oscille en fonction de la localisation géographique entre
trois et 24 pour 100 000 habitants [1]. Cette maladie est
caractérisée par une sclérose qui associe des anomalies
microcirculatoires et des phénomènes de fibroses. Classi-
quement, la sclérose débute aux extrémités, s’étend au
niveau de la peau avant de gagner les viscères. Ce sont les
atteintes viscérales à l’origine d’une pneumopathie intersti-
tielle, d’une insuffisance rénale, d’une atteinte cardiaque
ou d’une atteinte gastro-intestinale qui sont responsables
des formes graves de ScS. Afin de tenir compte des diffé-
rentes présentations cliniques de la ScS, on en distingue
deux formes. La première forme est cutanée, limitée, de
bon pronostic, et touche 60 % des malades. Cette forme est
dominée par le syndrome de CREST (qui rend compte de la
présence d’une calcinose [C], d’un phénomène de Raynaud
[R], d’une atteinte œsophagienne [E], d’une sclérodactylie
[S] et de télangiectasies [T]). La seconde forme est cuta-
née, diffuse, de pronostic moins favorable, et touche 40 %
des malades. Une troisième forme, dite intermédiaire est
parfois reconnue [2].
Le diagnostic de ScS repose sur des critères cliniques,
morphologiques et biologiques. La biologie y joue un rôle
important puisque la présence des auto-anticorps (autoAc)
anti-centromère révèle un CREST dans 70 à 80 % des cas
alors que les autoAc anti-topo-isomérase I, ou anti-Scl70,
sont retrouvés pour 30 % à des ScS cutanées diffuses [3].
Enfin, pour 20 à 30 % de ces patients des autoAc dirigés
contre le nucléole des cellules sont retrouvés. Ces Ac
anti-nucléolaires (AANuc) ont été initialement associés aux
ScS mais ils sont actuellement négligés au prétexte qu’ils
manquent de sensibilité [4]. Toutefois, la caractérisation
des cibles des AANuc associée au développement d’examens
spécifiques a conféré à ces autoAc un regain d’intérêt [5].
Nous nous proposons donc de faire le point sur la recherche
des AANuc à visée diagnostique et pronostique dans le cadre
d’une ScS.
Le nucléole
La fonction principale du nucléole est d’apporter à la cellule
les ribosomes, un élément indispensable à la synthèse pro-
téique. Différentes étapes sont nécessaires pour aboutir à
la formation des deux sous-unités catalytiques du ribosome
(Fig. 1). Premièrement, la transcription d’un pré-ARN ribo-
somal (r) de 45S à partir de l’ADNr. Cette étape nécessite
la coopération entre l’ARN polymérase (RNAP)-I et le fac-
teur de transcription « nucleolar organising region » (NOR)
90. Deuxièmement, le pré-ARNr s’associe avec différentes
protéines pour donner des complexes de ribonucléopro-
téines (RNP). Ainsi, le complexe U3 sno-RNP qui comporte
pas moins de six protéines, dont la fibrillarine et une fraction
U3 de 55 kd, est chargé de méthyler le pré-ARNr. Troi-
sièmement, les pré-ARNr méthylés sont ensuite découpés
en trois fragments de 5,8S, 18S et 28S par les endonu-
cléases To/Th ou Twa. Quatrièmement, l’ARNr 5S transcrit
en dehors du nucléole par la RNAP-III rentre dans le nucléole
177
pour s’associer avec les ARNr 5,8S et 28S et former la
grosse sous-unité ribosomale. La petite sous-unité riboso-
male ne comprend que l’ARNr 18S. Cinquièmement, enfin,
il existe un système d’assemblage et de recyclage des ARNr
qui est assuré par le complexe PML/ScL et les protéines
B23/nucléophosmine et C23.
Chaque cellule compte dans son noyau plusieurs
nucléoles dont la taille et le nombre dépendent du degré
d’activation de la cellule et de la phase du cycle cellu-
laire. Les nucléoles disparaissent au cours de la mitose.
Le nucléole comporte trois zones, chacune est spécialisée
dans une étape de la synthèse des ribosomes. Tout d’abord
au centre on distingue une zone claire qui contient de
grandes boucles d’ADN qui renferment les gènes d’ADNr.
Cette organisation permet le regroupement des différents
gènes d’ADNr, on en compte 150 à 200 organisés en amas et
répartis sur cinq chromosomes et chez l’homme. Ensuite,
en périphérie on retrouve une zone plus dense siège des
processus de transcription des ARNr. Et enfin, toujours en
périphérie on retrouve des zones granulaires chargées de
l’assemblage et de la maturation des pré-ribosomes. La
maturation finale des ribosomes s’effectue dans le cyto-
plasme des cellules.
Auto-anticorps anti-nucléolaires
Prévalence et spécificité
Des AANuc existent chez 20 à 30 % des ScS [6]. L’état
d’activité des patients et la réponse au traitement sont
sans influence sur la positivité et le titre des AANuc. Les
AANuc apparaissent également dans d’autres pathologies
auto-immunes telles que le lupus érythémateux disséminé
(LED), le syndrome sec de Gougerot-Sjögren (SGS) et la poly-
arthrite rhumatoïde (PR), voire au décours d’un cancer ou
lors d’une maladie du greffon contre l’hôte (GVHD) qui peut
apparaître lors d’une greffe de moelle osseuse.
Les cibles des Ac anti-nucléolaires dans la ScS
Virtuellement tous les composants du nucléole peuvent être
la cible des AANuc. Citons les Ac anti-PM/SCL, les Ac anti-
U3, les Ac anti-fibrillarine, et les Ac anti-ARNP de type I à III
qui sont spécifiques de la ScS (Tableau 1). Pour les Ac anti-
NOR90, les Ac anti-Th/To et les Ac anti-B23, l’intérêt est
plus modéré car moins spécifique. Les Ac anti-Scl70 peuvent
être rattachés au groupe des AANuc car la cible de ces
autoAc, la topo-isomérase, est une protéine chargée de
l’organisation spatiale de l’ADN qui est présente dans le
noyau et les nucléoles des cellules. Les AANuc représentent
donc un groupe hétérogène d’autoAc qui possèdent la singu-
larité d’être mutuellement exclusifs et non retrouvés chez
les témoins normaux.
En termes de prévalence, les Ac anti-ARNP I prédominent
puisqu’ils sont retrouvés chez 8—20 % des ScS. Au niveau
clinique, les Ac anti-ARNP I sont associés avec des formes dif-
fuses caractérisées par des atteintes rénales et cardiaques
qui peuvent être sévères voire fatales. Les Ac anti-U3 et les
Ac anti-fibrillarine, souvent associés, sont retrouvés pour 3 à
8 % des patients dans des formes diffuses avec comme parti-
cularité d’être mis en évidence chez des patients jeunes où
178 P. Comacle et al.

Figure 1 Le nucléole est l’appareil de production des ribosomes dont la synthèse est très organisée et hiérarchisée. Virtuellement,
tous les composants du nucléole peuvent être la cible des autoanticorps anti-nucléolaires (AANuc).

prédomine une hypertension pulmonaire. Moins spécifiques
et moins fréquents car retrouvés chez 2 et 5 % des cas de
ScS, les Ac Th/To révèlent une forme intermédiaire qui va
associer un CREST avec une fibrose pulmonaire et/ou une
atteinte rénale. Enfin retrouvés chez seulement 2 % des ScS
et 8 % des polymyosites, les Ac anti-PM/Scl révèlent pour
80 % des patients une forme bénigne à la frontière entre la
ScS et la polymyosite. Ce syndrome de chevauchement est
très sensible aux corticoïdes.
À côté des AANuc purs, certains AANuc peuvent être
associés à une fluorescence du noyau ou du cytoplasme du
fait de la reconnaissance d’une cible commune. Citons trois
exemples : les Ac anti-ADN, les Ac anti-Ro/SSa et Ac anti-
La/SSB, et les Ac anti-ribosomes. L’ADN du nucléole peut

Tableau 1 Autoanticorps anti-nucléolaires et associations cliniques.

Cible Sclérodermie Autres pathologies

Anti-ARN polymérase I Forme diffuse, rein et cœur Rare

Anti-fibrillarine/anti-U3 Forme diffuse, poumon Rare
Anti-TH/TO Forme intermédiaire, poumon et rein Syndrome de Raynaud, LES, PR. . .
Anti-PM/Scl Syndrome de chevauchement Rare
Anti-Nor 90 Forme limitée, syndrome de Raynaud LES, PR, cancers. . .
Anti-Scl 70 Forme diffuse, poumon et cœur Rare (LES)
Anti-B23/nucléophosmine Forme diffuse, poumon LES, PR, cancers, médicaments
LES : lupus érythémateux systémique ; PR : polyarthrite rhumatoïde.
Recherche des anticorps anti-nucléolaires dans la sclérodermie systémique
Figure 2 Immunofluorescence indirecte sur cellules HEp-2 révélant différents aspects des autoanticorps anti-nucléolaires (AANuc)
selon la spécificité des sérums.
être la cible des Ac anti-ADN et, dans ce cas, la fluorescence
du noyau sera associée avec un marquage à renforcement
périphérique du nucléole. En présence d’Ac anti-Ro/SSA
et d’Ac anti-La/SSB, le noyau est moucheté tandis que la
fluorescence du nucléole est faible et homogène. Enfin, en
présence d’Ac anti-ribosomes, la fluorescence sera cytoplas-
mique et nucléolaire.
Recherche des Ac anti-nucléolaires sur cellules
HEp-2
Le dépistage des AANuc est réalisé au moment de la
recherche des Ac anti-nucléaires (AAN) et concerne 2 à 5 %
des sérums testés en routine sur cellules HEp-2 [7]. La lignée
cellulaire humaine HEp-2, obtenue à partir d’un carcinome
de larynx, présente l’avantage de disposer d’un noyau de
grande taille qui peut contenir jusqu’à cinq nucléoles faci-
lement identifiables.
En pratique, la recherche des AAN et des AANuc se
décompose en plusieurs étapes. Tout d’abord, le sérum du
179
patient est délicatement déposé sur des cellules HEp-2 qui
ont été préalablement fixées et perméabilisées. La présence
des AANuc est ensuite révélée par l’ajout d’une anti-
globuline couplée avec une molécule fluorescente telle que
l’isothiocyanate de fluorescéine (FITC). Enfin, l’appréciation
de l’aspect de la fluorescence ainsi que le titrage du sérum
s’effectuent au moyen d’un microscope à fluorescence.
Le titre des AANuc est exprimé en inverse de dilution
avec un seuil de positivité fixé au 1/160e comme pour
les AAN.
Un œil averti est capable de distinguer trois types de
fluorescences nucléolaires (Fig. 2, Tableau 2). Tout d’abord,
le nucléole peut apparaître homogène de façon isolée (Ac
anti-Th/To et anti-B23/nucléophosmine), ou couplé avec
une fluorescence mouchetée du noyau (anti-PM/Scl, anti-
Scl70). Ensuite, l’aspect du nucléole peut être moucheté
et formé soit de grains fins et centrés s’il s’agit d’Ac anti-
ARNP-I, soit de gros grains regroupés au centre s’il s’agit
d’Ac anti-fibrillarine et/ou d’Ac anti-U3. Enfin, la mise en
évidence de deux à cinq gros spots ou « dots » dans la zone
claire du nucléole est caractéristique des Ac anti-NOR90.
180 P. Comacle et al.

Tableau 2 Principaux autoanticorps anti-nucléolaires (AANuc) [8].

Cible Sclérodermie Aspect des AANuc

Prévalence (%) Spécificité

Anti-TH/TO 4—10 Moyenne Homogène

Anti-B23/nucléophosmine 10 Moyenne Homogène
Anti-PM/Scl 5 Forte Homogène
Anti-Scl 70 4—30 Forte Homogène
Anti-ARN polymérase 8—20 Forte Moucheté
Anti-fibrillarine 3—83—8 Forte Moucheté
Anti-U3 3—8 Forte Moucheté
Anti-Nor 90 2 Faible 2—5 spots

Tableau 3 Anticorps anti-nucléolaires (AANuc) et pathologies associées retrouvés au CHU de Brest entre 2007 et 2010.

Pathologies n = 113 AANuc ≥ 1/1280e AAN moucheté

Sclérodermie 10 6 (60 %) 9 (90 %)

Autres maladies auto-immunes 38 8 (21 %) 9 (23,7 %)
Thromboses et AVC 13 2 (15,4 %) 4 (30,8 %)
Greffe et GVHD 7 0 2 (28,6 %)
Maladies inflammatoires 9 2 (22,2 %) 3 (33,3 %)
Divers 36 6 (16,7 %) 7 (19,4 %)
AVC : accident vasculaire cérébral ; GVHD ; graft versus host disease.

Notons que lorsque la cellule est en mitose, le nucléole dis-
paraît et la fixation des AANuc peut s’observer au niveau de
la plaque équatoriale de la chromatine en division.
En pratique
Pour vérifier le bien-fondé pratique de ces notions théo-
riques, nous avons repris de façon rétrospective tous les
AANuc mis en évidence dans le laboratoire du CHU de
Brest pour les années 2007 à 2010. Ainsi avons-nous iden-
tifié 200 malades qui présentaient des AANuc, soit 2,1 % des
sérums adressés au laboratoire en quête d’AAN. Pour 132 sur
200 (66,0 %) d’entre eux, les AANuc étaient isolés, alors que
pour 68 sur 200 (34,0 %) des patients, une association avec
un AAN était rapportée. Pour 113 malades, outre l’examen
clinique initial, nous disposions également des résultats
sérologiques réalisés dans le cadre d’un bilan d’AAN posi-
tif à savoir des Ac anti ADN natifs, des Ac anti-histones,
des Ac anti-centromères et des Ac anti-antigènes solubles
(Ro/SSA, La/SSB, Sm, Sm-U1RNP, Scl70 et Jo-1). De plus,
pour ces patients une recherche d’Ac anti-PM/Scl et d’Ac
anti-Scl70 a également été réalisée par immunodot (Sclero-
polysynthetase kit, Ingen).
Qu’observe-t-on ? Les ScS ne représentent que 10 sur 113
(8,8 %) des AANuc mis en évidence (Tableau 3). Cepen-
dant, il est intéressant de noter que les ScS qui possèdent
des AANuc présentent trois caractéristiques (Tableau 4).
Premièrement, pour ces patients le titre des AANuc est
élevé. En effet, un titre supérieur à 1/1280e est observé
pour six sur dix (60 %) ScS contre 19 sur 103 (18,4 %) pour
les autres patients (p < 0,01 avec un test exact de Fisher).

Tableau 4 Anticorps anti-nucléolaires (AANuc) et sclérodermie.

Patient Âge Sexe AANuc aspect AANuc titre AAN AutoAc spécifique Clinique

1 47a F Homogène 1/1280 Moucheté PM/Scl Articulaire et pulmonaire

2 60a F Homogène 1/1280 Moucheté PM/Scl Syndrome de chevauchement
3 38a M Moucheté 1/320 Non — Syndrome de CREST
4 57a F Homogène 1/160 Moucheté Scl70 Syndrome sec et Raynaud
5 68a F Homogène 1/1280 Moucheté Scl70 Syndrome de CREST
6 47a F Homogène 1/1280 Moucheté Scl70 Fibrose pulmonaire
7 53a F Homogène 1/1280 Moucheté Scl70 Atteinte viscérale multiple
8 55a M Homogène 1/1280 Moucheté Scl70 Fibrose pulmonaire
9 62a M Homogène 1/320 Moucheté Scl70 Fibrose pulmonaire
10 49a F Homogène 1/640 Moucheté Scl70 Cutané et pulmonaire
Recherche des anticorps anti-nucléolaires dans la sclérodermie systémique
Deuxièmement, un aspect homogène des AANuc. Troisiè-
mement, une association avec un aspect moucheté des
AAN (9/10 versus 25/103, p < 0,01). Ces caractéristiques
s’expliquent par la mise en évidence d’Ac anti-PM/Scl ou
d’Ac anti-Scl70 pour neuf sur dix de ces patients. En d’autre
terme, l’association AAN—AANuc homogène dont le titre est
élevé doit faire évoquer des Ac anti-PM/Scl et des Ac anti-
Scl70 ce qui présente un intérêt pronostique majeur pour le
patient. Aucun autre autoAc recherché dans le cadre d’un
AAN positif n’a été mis en évidence dans le groupe des
patients ScS.
Pour d’autres patients, les AANuc sont retrouvés dans
différentes pathologies qu’elles soient auto-immunes (LED,
PR, syndrome de Gougerot-Sjögren. . .), associés avec des
thromboses ou des accidents vasculaires cérébraux, dans le
cadre d’une GVHD associée à une greffe ou dans diverses
pathologies. Notons que les AANuc, retrouvés dans un
contexte non auto-immun, présentent un aspect moucheté,
un titre faible (AAN ≤ 1/320e pour 39 sur 65) et qu’ils
ne sont pas associés avec un AAN (54 sur 65). Aucune
prédominance saisonnière n’a été retrouvée dans notre
étude.
En conclusion, l’identification des AANuc sur cel-
lules HEp-2 présente peu d’intérêt en première inten-
tion. Toutefois, devant une ScS cette identification
devient justifiée puisqu’elle va permettre de prédire
l’évolution de la ScS. Enfin, notons qu’une seule déter-
mination est suffisante puisque les taux demeurent
constants et que les différents AANuc sont mutuellement
exclusifs.
181
Déclaration d’intérêts
Les auteurs déclarent ne pas avoir de conflits d’intérêts en
relation avec cet article.
Remerciements
Les auteurs remercient vivement Nelly Fromont pour la par-
tie technique, ainsi que Simone Forest et Geneviève Michel
pour la dactylographie de cet article.
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