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2020-2021

BIOLOGIE CELLULAIRE

Fiche de cours n ~ f:

Le noyau

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48 04 90 50
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COMPMl1MENt
• Concentrer les réactions NOYAU PAR MICROSCOPIE El!qJpNIQUI Al'RAN$MIS,gON
• (Ao,,reehet 1es p1ctéine, la, wRo, do, autr;ot pet11 que les • Plus il y a de matière, plus c'est noir.
Mies de 11
rffttlons se rea11senr-
compartimentation Obtention • tchelle beaucoup plus petite que la microscopie à fluorescence
• 611119êeher que d aatr@5 protél::e, PL'iP1te1fà1e11t aoec les

0
d'une image o Meilleure visualisation des détails. ~
~éeonil111es cellulai1e;1] en noir et blanc • Donne une idée de l'organisation subcellulaire.

,,
• Est protubérant : • <w,11,•loo®ooya,~d~=mbra,e,
o Représente 6% du volume de la cellule hépatique.
Le noyau : un
compartiment
subceUul■lre
• Contient de I'ADN organisé en chromosomes.
• Est le site principal de la synthèse d'ADN et d'ARN.
• Est visible par coloration au DAPI 0 : L_"- .()_ ,\. ~ \:::
~ v; ,
Cellule
o Interaction du DAPI avecl'ADN , .l.t~E>I ..,)- ~ , n ~
d'embryon
o Fluorescence dans le bleu ~ de souris q

• Noyaux répartis de manière non

homogène :
a.lems o Zones où les no sont concentrés, ~
• Membrane Interne ~ n ntact avec le
C.-,ons donc avec ellules. nucléopiasme.
o Zones sont moins • Membrane externe n œ~ ct ~ c le cytosoi.
conce
• Séparation des deu mb ~ par l'!!5pace
péri nucléaire. ~

noyau • En co~iihité c le réticulum

. ~ x, donc quatre cellules e~ opl{ ~
ns l~ p observé.
ë nne aucune Information sur la forme
u i"à"'taille de la cellule
• Tap~ e i'lu~
• Perfo~
nterne par la lamina 0 .
pores nucléaires.
--
-. ;,;:,w-1
~ ..,J~~:----
~- .:,:., -w.n
,n : ....
•• ,· 1
Vue
transversale
en MET
• Nucléoplasme du côté de la chromatine
• Cytosol du côté des ribosomes
, :=::-- 1 .., _ _ _

?-1., .. ,a - -.....
~ 1

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'°)''t""':., ~

PORE NUCLEAI •' ' ~., .

LocaUsation • Canal aqueux traversant l'enveloppe nucléaire.

• Associés à l' enveloppe nucléaire par des protéines transmembranalres.
• Associés à la chromatine par des protéines.

~
Fonction • Passage de certaines moléculël du noyau vers le cytoplasme et inversement.

• rvariable selon les cellules : : : :i~: ~ exclusivement dans~I• .,,..., g,t m : ''"''" ~
o Plus il y a de pores, plus les échanges sont importants
• 3500 pores nucléaires dans l'enveloppe nucléaire d' une cellule de mammifère. •LamineB ~ 1
~ ~:;: t
• Un anneau cytosollque. • lamine C : i~~ïilJilEiii~a-~..._~Pl~iili îf
• Un anneau nucléoplasmlque. i!è.'·:'.<1ti!f.'L,'i;!!!il o Issue du même gànl\ ' f\
quelalamlneA _ . . - 1-.a.cJ ~ ,

• 8 ray se projettant radialement

depuis la pa · du pore et entourant
le transp 1.
Structure • 8 fllame
protéique de l' anneau

c~pe
nucWoporlnes cytosol.
• Filaments n aires attachés-fi"--:)
l'annea ucléoplasmique se ,j{ J.~ Membrane int erne
r · gnant pour former le panl~ •
Par- nucléaire d'un ovocyte de XénoP,e
• Absence de symétrie entre les côté~ ayant un a aspect de filet=~ -
cytoplasmique et nucléoplasmique ,
du pore. \

• Principe·
o Marqua r le DAPI
Par. . . • o Ma • age lamlne et des nucléoporines (Nup) par des ant icorps
Obse~ de es • creux ou ~ ·. ~ orochromes de couleurs différentes
am ✓• orrespondent aux
~ la ées au niveau des NP : Pon, nuclblro 0

ri!\~ es. nce de lamine au niveau des pores nucléaires.

~~ ~ ("t.. ,,.,ë:ft.l)ÀC'(.,
,f.encr.. /l'Yl\l(~; -
/\':,~ b\)6' c\e
uu_...

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-..- .

1 _ ) ~.... - -- - - - - .-~....,. -·--.-

■ Vlellllssement précoce menant à une mort prématurée. o De par la faible osmolarité, l!ntrée d'eau dans les cellules plus salées pour rééquilibrer
~ les concentrations.
• M utation du gène de la lamine A • Gonflement, puis explosion des cellules
• Accès au cont enu cellulaire.
• Désorganisation :
o Des lamines. • Formation de trous dans les membranes et dans l'enveloppe nucléaire:
o De l'enveloppe nucléaire : o Destruction du noyau.
- Présence de boursoufflures, de bourgeonnements de l'èrlVeloppe.
o De la chromatine : • Ensemble de molécules chargées négativement repoussant I' ADN chargé négàtlvement:
- Perte de l'association de la chromatine à l'envelôel>e nudi !ire. o Permet l'étalement d e I' ADN.
- Risque de dérégulation de l'expression des g~nes.
• Se réalise au travers du saccharose
• Formation de d usters ♦ ♦
o Cluster = Zones où les pores nucléaires §ont tràs relW)upés
o Perturbations des échanges ent re ,.,:;iiû et eytosol. • Mise en évidence de 2 images de la ! ""§::
chromatine correspondant à 2 o iv : •
différents de compaction de l'AD :
o (A) Chromatine compactée.
:
o (B) Chromatine relativement lâct.l-t_:__.
~-
:rl"'r,-;:::':. -
t.,~-! ,_
._.
... ...1..
- ••
_ •

Complexe formé d'ADN (acide désoxyri...l!!?Jlucléique), d' hlstones et de prcitiHnes non-

histones présents dans le ~o_x;u d' une cellule eucaryote
appelée colller de pertes ~ :7 - '.. .. _
L.J

o L'ADN dans les mitocbàndries,e;est pas appelé chromatine.

• Forme le chromosome :
• Chez l' Homme :
ol 2,85 billions d~~ cléot!dès ch!? l'Homme.
o 46 chrOfl'losomes.

• la chromatine apparait en sombre.

• 'Mpartftton non homogène de la chromatine dans
le noyau des cellules de mammifère.

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:nNE

--•i1'1 • L' ADN entrant et I'ADN sortant

__
• ADN enro ulé de 2 tours autour d' un nucléosome ne se croisent pas :
complexe d' un octaml!re d'histones o Les nucléosomes qui se suivent ne sont donc

__ ----
Organisat'K>n
= 2 (H2A + H28 + H3 + H4) pas sur une même ligne, mais e n zlpag:>
• Hist one Hl s'intercale entre 2 brins • Permis par fhlstone Hl, en plus de I'octamère
d 'ADN pour former la fibre de 30nm , d'histones :
o Hl se place au niveau du pincement entre
1 . .. _ 1 I' ADN entrant et I' ADN sortant de chaque
nucléosome.

m
l. Digest ion de I' ADN par une enzyme, la nucléase :
o Coupe les fragments d'ADN entre 2 octamères d' histooes.

Composition
mise en
o Ne peut pas attaquer I' ADN enroulé autour des ti,Jstones.
2. Libération du nudéosome Isolé. • Le rôle de H~ s le zigzag serait de déplacer rn
~ncepar
Isolement
3 . Dissociat ion par une forte concent ration de sel :
o Séparation de l'octamère d' his~ n es et de la ~ ubleh éllce d'ADN.
les queues de H3, les rendant libres de leur
interaction avec I' ADN. -~--
-- ........~
.....,, c... ..
~ Ml.a .
4 . Dlssociatlon des protéines histones :

.• ,/,,. ..
o Obtention de 2 x H2A + 2 x H2B + 2 x H3 + 2.x H4. lat _ ..1

• Présent sous 2 formes :

o Structure en .solénoide : environ
30nm.
o Structure en • colller. de tierles • :
1
atiques entre I'ADN et les histones.
environ.irim .
Stnrhn I r + ~ • ROie des extrémités N-terminales des historil,s dans les grandes fonctions nucléaires :
o Transcription.
o Réplication.
o Réparation de I' ADN.
Auoci. ·
fwst~ura1,on
es nud~mH

-· c-
,..,.__
•dlltllndue.

JK01f1nn
~ rfgul,.tlon

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• Gène de pigmentation rouge de l' œll de Drosophile

Nlveaucle
• Plus ou moins conclenSH, • Plus ou moins décondenSH 0
situé à une certalne~ ance je
rhétérochromatlne :
CDndensltlon compacte. o Présence d' une 41 barrière ,. déterminant la position
•CDm de l'hétérochromatlne.
Oenslt6aux • Plus dense aux électrons. • Moins dense aux électrons. • Par déplacement de la « l:tarrlère 1.
6IICtr0nl
• Par rapprochement entre le gène de pigmentation et
• Partiellement "'riphérique ~ l'hétérochromatine.
• Préférentiellement sous la

La 1 11111"
membrane interne de l'enveloppe
nucléaire.
• Peut-ètre retrouvée
nucléoplasme.
dans le
• Dispersée dans te nu,
--
Je.
• Obtention de drosophiles avec des yeux présentant un
défaut de pigmentation dans certaines régions :
o Les cellules présentes dans ces rélions sont des
cellules où le gène de pigmentation
exprimé.
1iîa s'est pas

• Dépourvue de gènes. , Riche en gènes. l'hétéroéh!i_mi H et àu gène de

pigmentation a entraîné une a~ d'expression
• Chromatine constitutive, non (transcription) de ce g e.
transcrite, retrouvée à ditférents
niveaux du chromosome :
o Centromères.
o Télomère.s. • Chromatine pouvant être
o Chromosome X. transcrite.

• Chromatine facullatlve, non

transatte, ma!\_avec la capacité de
se transfoaler eq_eudlromatine et
ainsi-d'être tqNisc~
•~ ation au microscope ne permet d'établir le degré de
COlllllliiiAtion de rADN[eer la Aoya:1 ai;t Qétri.,it];
~ aY.'e lien entre les fibres de 11 / 30 nm obtenues et euchromatine/
hét érochromatine O.
• !\Jchromatlne et hétérochromat lne se définissent à partir du noyau intact.
r ~-i:...........-----------------------------· ········-···------------------·····--·-------

i ~;
. .,,~~r:/~r·~ ;~
\~
t ., <,# -,:.
--■;;· '.6
Ï
Hétirod1romatlne
j Euchromatlne j

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: r--·--
TERRITOIRES OIROMOSOMIQUES
• FISH • Hybridation ln slru fluorescente.
:. - ............__. ---0-b-0- 1-t-..1
. ,. ,, .
• Technique utilisant des sondes à ADN marquées à
l'aide d'un marqueur fluorescent et reconnaissant • Chromatine= ADN décompactéM do.i~ ~~-P~ _;:-•-:;, J EJr,:•
Mlseen des séquences sur I' ADN spécifiques des diffé rents
• 11
...~ i ( (.WlC,
°""' ,~/-oll., [' --
_,.._ ~ ,;..i C,

r--=..- m,r0
6vldenœ~r '\J • l41uelette proülque :
chromosomes 14 IJ JI
11 technique o Correspond aux protéines non-histones : -
du ~
c(séqucnct de la soiide ldeiitlqce è eella de l' ADN
~] 1
1
IJ
associées à l'AON, i
• Permet d'identifier les différentes paires de
chromosomes numérotés sur la figure.
!f.S 1 - - - ; ·- 1
1\
• Chromosomes dispersés dans l'ensemble du noyau :
Olrtributlon
o Formatio'l de territoires.
des
Chromosomes homologues localisés à des endroits
chromosomes • Chromosomes non indivluallsables.
différents. ~

23 paires de chromosomes indivi

... - ,'"'- •, . . . . - . '
~ .Ji;'_ '

•.,..r•·
o ~ paires d'autosom! s + lï
.• "~J,Jc~..... -: . - , ~\ • ' ~,. _... ' .. , ,, .,. -Î r,,i-....~ r exuelsL _
·- . ~- -
o Niveau maximum ile cond
Enveloppe
chromatine
nuclé1lre
nu .. • Chromosomes et gènes proche de
l'enveloppe nucléaire. OuomosomM
Chromosomes dupliqués
Présence de ü lôiiMres ·
liiôniïiJëlës
homolosues
• Chromatine assodée 'à de o some avec une
l'hMérochroratine. ~ et {épllquée
s'j;;;,
Gène

Enveloppe ra Jt u chromosome
nucléa Ire hromatldes sœurs en51!mble.
tlon du kln~och~
• • bp~ des chromosomes
0,romosomes
-.,.otogues vers la zone centrale
homoloeues

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• Structure dans le noyau 0

NUCUOLE
-- -
Locallsatlon

Fonctions
• N'est pas entou~ de membrane 00 .
• N'est pas un organite 0 .

• Lieu de
r
• Correspond plutôt à de euchromatlne.

transcription 0
rlbosomique = ARNr 00 .
de I' ARN
o Copie des lntrons et des exons.
• Par une enzyme = ARN ll(llyrMrase Il.

• Par exdslon des lntrons et llj)issa1e (=

collage des exons).
• Par ajout d'une coiffe et d' une queue
~
--
,-=-
,
--
• ll@u d'assemblage des sous-unltfs des
polyA.,à chaque eJCtrémité.
,_
- - -i-
--
ribosomes.

• Organisé autour des Organisateurs • Traduction en protéine par

Nudiolalres 00 ribosomes.
o Correspondent à des boucles (régions)
chromosomiques Con, trlct K>n .econdalre
:...--- • orpniuteut nud~olairf'
o Comportent les gènes des ARNr 47S 0 0 .

X
o Correspondent à i'ADN 00 des - (f'ntrom~re
• Composé de 2 molécules d'ADN.
constrktlons secondaires. • constriction pr1mii1e • Protéines codées à partir des exons
• Chez l' homme, les constrictions secondaires uniquement :
sont situées sur les chromosomes 13, 14, 15, l.=.J o Une toute petite fraction
Chromatide chromosome donne naissance à une
21et22 00 :
o 10 boucles au total, soit 10 organisateurs protéine.
nudiolalres dans un nucléole de cellule
humaine.

• ARN polymérase Il située

l' intersection de I' ADN et du pré-
ation ARNm :
• En fonction des phases du cycle, plusieurs de
l!llalutlan o Déplacement de la droite vers la
nucléoles peuvent se regrouper en 1 seul. n par
gauchi! .
.. f.11Jo",h1Y1 J.w ~ ~(J) c:\J o.:t'-<1 t
.f.Q. ""ce~ c.~ ~ c}.~ FQ_,, • Le gène est ici transcrit paf2ARN
polymérases qui travaillent l'une
derrière l' autre, ce qui explique que les
transcrits soient de tailles différentes.

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1 ~ \•
1'

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fonctions du noyau : [)(PRESSION DES GENES

TltANSCRITPION DES ARN RIIOSOMIQUES • ARNr

• Dans le nucléole.
• Plusieurs ARN polymérases
Action de

. ,....,
rARN fonctionnent en même temps sur le
glmc :
o Copies du gène 47S en ARNr qui ne
codent pas pour des prot éines.

• Coupure des ARNr en pet it s morceaux : • Par étalement moléculaire d'un

o Formation de la petite et de la grosse noyau d'une cellule en phase S.
0ewnlr del sous;:.,.°G-'~ d~~es.:.Q:of...i,.v, • M1l!lll1 : Existence
ARNr • ~ des sous-unit és horf'J'~"novau réplication
pour permettre la t raduction (=
synthèse) des protéines dans le cytosol.

• Centre fibrillaire (CF) :

• Formation d' yeux de réplication :

--
brins-
o Espaceurs intergéniques non
o Zone d'écartement de la doubl~
transcrits, entre 2 • sapins de Noël •·
hélice au niveau de laquelle ·de
Corn osant fibrillaire dense (CFD) : nouveaux brins sont en cours de
complhwtarn
o · de maturation des ARNr. synthèsé.
• Frontière • Fin de réplication :
o Obtention de 2
• Composant granulair CG) :

.
Cffltreflbribire
o Lieu de stockage des pa ·cules pré-
ribosomiques avant leur exp ation ,~
........
vers le cytosol, et de dive
protéines rlbosomales 00 .

• Image en « sapin de el " : ,,.. -~1

o Tronc (centr = gène de )' ARN 47S. '
. -..,
~
G~n< 47S

ranche = ARNr en cours de

fibre nucWosomique
• collier do portos
istence de plusieurs centaines de
~

copies du gène 47S pour permettre la

synthèse de nombreux ribosomes
nécessaires à la traduction.

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FONCTIONS DU NOYAU
11IANSPORTS NUCLEOCYTOPWMIQUES
• Injection dans des cellules de
mammifère d'une molécule de 19kDa
qui fluoresce en vert ou d'une protéine
• large » qui fluoresce en rouge.
• Observation par microscopie à
Mise en fluorescence :
~dence o Accumulation des 2 protéines dans iwc.,e.u, d'lmpoltatlDn
.,tmentale le noyau au cours du temps : • Prot · qui aide au transport
- Capacité des 2 protéines à oplasme vers le noyau.
rentrer dans le noyau.
o Entrée dans le noyau de la molécule
de 19 kDa plus rapide que celle de la • ·ARN polymérases.
protéine« large ». • Protéines constitutives des ribosomes.

• Diffusion libre de molécules de poids moléculaire Inférieur ou égal à 40 kDa :

Deux types de o Ne nécessite pas d'apport d'énergie
transport via le
pore nucléllre • Transport actif de molécules dont le poids moléculaire est supérieur à 40 kDa :
rh."~ or {' è4b -<. oiJ G-ïP~ ft)f or

• Cellules transfectées avec un plasmide codant une

protéine « cytosollque ».
• Analyse par immunofluorescence :
o Fluorescence exclusivement détectée dans le
cytoplasme.

• Cellules transfectées avec un plasmide codant une

protéine « évtosolique + séquence signal NLS ».
• Analyse par immunofluorescence :
o Fluorescence localisée exclusivement dans le
noyau!

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TRANSPORTS NUCLEOCYTOPlASMIQUES
EXPORTATION D'UNE PROntNE HORS DU NOYAU

Cargo= molécule transportée.

Acteurs • Sig I d'exportation hors du noyau= signal NES.

1. Interaction du car portant un NES avec :

Ran-GTP et le récepteu 'exportation dans !
le noyau. ' S
.. 4
2. Interaction du
GTP/récepteu r d'exportation
nucléoporines du pore nuclé · e.
Différentes 3. Sortie du noyau vers le
étapes 4. Hydrolyse de Ra Pen Ran-GDP :
u cargo et de Ran-GDP dans le

5. L écepteur d'exportation interagit avec les

nutléoporines du pore nucléaire.
6. Le récepteur d'exportation retourne dans le
noyau.

• E~ tion faisant
\in,te~ e récepteur
d' ~ortation et des
\ :prot'€ines associ~~s.
JF •) Po-' R~fVJ
• Utilisent le Ran-GTP pour sortir du noyau.

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