MILIEUX DE CULTURE Version 02

PCS04-LC-IT-05.02.090
SABOURAUD AGAR (SAB)
SABC Date de première mise en application : 01/09/2002 Page 1 sur 2

1. Objet

Préparation du milieu à pH acide pour l’isolement des champignons et des levures, lors du
contrôle sanitaire des eaux potables, polluées, résiduaires, des boissons gazeuses, des sirops,
en brasserie, par la technique des membranes filtrantes.

2. Domaine d’application

Détection des levures et moisissures dans les eaux.

3. Principe

 Les différents composants du milieu de culture sont pesés et mélangés.

 Le pH du milieu de culture étant très important, celui-ci est ajusté précisément.
 Le milieu sous forme liquide est réparti dans les flacons qui sont ensuite stérilisés dans un
autoclave.

4. Référence

4.1. Merck art. 8335

4.2. http://www.oxoid.com/fr/index.asp?mpage=iproductdetail&pre=CM0041&l=FR&x=

5. Responsabilité

L’opérateur est responsable du strict respect de l’application du protocole qui suit.

6. Fréquence

Suivant les exigences du plan de contrôle.

7. Réactifs

7.1. Sabouraud – 2 % Glucose – Agar Merck réf. 1.07315

7.2. Gentamicine Merck réf. 1.11977
7.3. NaOH 1N
7.4. HCl 1N

8. Appareillage

8.1. Verrerie courante de laboratoire

8.2. pH mètre équipée d’une électrode combinée en verre, précision 0,01 pH
8.3. Balance analytique, précision 0,1 mg
8.4. Flacons SVL à vis, 250 ml, exempts de micro-fissures, avec bouchons en bon état
8.5. Autoclave avec minuterie, réglé à 121 °C

9. Préparation des échantillons

Non applicable.

10. Mode opératoire

10.1. Dissoudre 47 g de poudre dans 1 litre d’eau distillée.

10.2. Mélanger jusqu’à obtention d’une suspension homogène.

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10.3. Porter à ébullition lentement, en agitant fréquemment jusqu'à dissolution complète.

10.4. Mesurer le pH et si nécessaire l’ajuster avec HCl ou NaOH à pH 5,6 + 0,1.

10.5. Répartir puis stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant15 min.

10.6. Refroidir à 50°C et ajouter pour 100 ml de milieu : ajouter 0,5 mL de solution stérile de
Gentamicine 50 mg ou 1mL de Gentamicine 25 mg

11. Expressions des résultats

Non applicable.

12. Notes

12.1. Le milieu en poudre peut irriter les yeux, la peau et les voies respiratoires. Ne pas inhaler,
se protéger et peser sous une hotte aspirante.
 En cas de contact avec les yeux et la peau, rincer immédiatement et abondamment à
l’eau.
 En cas d’inhalation, respirer l’air pur.

12.2. La gélose solidifiée doit être conservée en chambre froide et n’être fondue qu’une seule
fois pour être coulé en boîtes de pétri (un chauffage trop élevé ou prolongé plus que
nécessaire est préjudiciable à la qualité des milieux).

12.3. L’étiquetage du flacon doit indiquer la date de préparation, la date de péremption (3 mois
plus tard) et les initiales du préparateur.

12.4. Les flacons en stock ainsi que les bouchons doivent faire l’objet d’une inspection visuelle
une fois tous les 15 jours.

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