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UE2 - 10 - Intégration-Apoptose
UE2 - 10 - Intégration-Apoptose
UE 2 : INTÉGRATION
Cours 10 - APOPTOSE
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A. Introduction
B. Les phases de l’apoptose
C. Différence entre nécrose et apoptose
A. Découverte de l’apoptose
B. Les médiateurs de l’apoptose
C. La voie extrinsèque
D. La voie intrinsèque
A. Le premier rôle
B. Le deuxième rôle
C. Le troisième rôle
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A) Introduction
L’apoptose est un processus de mort cellulaire actif mis en route par la cellule. Le terme
d’apoptose fait référence à la chute programmée des feuilles en automne. On a un programme
cellulaire actif. Elle peut être induite par 2 voies distinctes :
● des facteurs extérieurs qui vont activer des récepteurs cellulaires
● par des signaux intracellulaires.
Cette apoptose est un phénomène physiologique et peut avoir des conséquences en
physiopathologie. La mise en place de différentes structures de l’organisme résulte d’un
équilibre entre une prolifération à partir d’une cellule (cellule souche), une différenciation
mais également un contrôle du nombre de ces cellules qui se différencient et éventuellement
une mort de certaines cellules qui ont proliféré par apoptose, afin de contrôler le nombre de
cellules qui vont se différencier.
Ces différentes étapes de prolifération – apoptose – différenciation sont contrôlées par
différents mécanismes : des signaux de l’environnement, des gènes et des signaux
intracellulaires.
On passe donc d’une cellule souche à un organe entier de cette façon. Cette mort cellulaire
ordonnée, active et silencieuse procède par différentes phases :
● Phase de décision : la cellule reçoit ou décide de l’ordre de mort cellulaire. C’est un
évènement contrôlé par un certain nombre de voies de signalisation.
● Phase d’exécution : la décision est irréversible, la cellule va se dégrader en
particulier son matériel génétique et ses protéines ce qui va entraîner un certain
nombre de modifications morphologiques.
● Phase d’élimination de la cellule morte. Cette élimination ne laisse pas de traces,
n'entraîne pas de dommages pour les tissus. On n’a en particulier pas d’inflammation
locale.
Elle se fait par phagocytose, par des cellules voisines. Et surtout a priori,
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Dans la nécrose, phénomène désordonné, les cellules vont lyser leur membrane plasmique, se
gorger d’eau, exploser dans le milieu intracellulaire et générer une inflammation du tissu.
Les organites seront endommagés au cours des phénomènes de nécrose, l’ADN sera fragmenté au
hasard, il y aura une lyse des organites et une lyse de la cellule avec une lyse de la membrane
cellulaire. Cette explosion de la cellule, ce relargage d’organites, d’enzymes et autres autour de
cette cellule nécrosée entraîne une inflammation tissulaire.
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A) Découverte de l’apoptose
Les chercheurs ont réalisé des expériences de mutagénèse qui ont permis d’introduire dans le
matériel génétique de ce nématode des modifications qui ont entraîné un non fonctionnement
de gènes.
Une fois que ces expériences de mutagenèse ont été réalisées sur un certain nombre de gènes,
un peu au hasard, les chercheurs ont observé les éliminations normales devant intervenir au
cours de la formation de cette bébête. En éliminant certains gènes on n’a plus certains
mécanismes de suppressions de cellules qui normalement se font au cours du développement
de ce charmant animal.
Ces approches de mutagenèse dirigée ont permis de découvrir les gènes impliqués dans
l’apoptose. En éliminant ces gènes, de l’apoptose ou certains, on n’observe plus de processus
apoptotiques et les cellules qui sont normalement éliminées ne le sont plus. Ces gènes ont été
appelés les CED.
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Le schéma représente les différents gènes de l’apoptose chez le joli petit ver qui ont été mis en
évidence comme très importants.
Parmi les gènes et après traduction, les protéines produites, certains gènes, certaines
protéines ont été démontrées comme
pro-apoptotiques :
o ced-3
o ced-4
et d’autres permettant à l’inverse la survie cellulaire comme :
o ced-9
Les protéines présentent aussi des homologies de structures avec les protéines traduites à
partir des gènes pro ou anti apoptotiques mis en évidence chez le ver.
Le clonage des différents gènes qui présentent des homologies avec les gènes de l’homme a
révélé que ced-3 avait un équivalent chez les hommes pour un gène qui codait pour une
protéase à cystéine : une caspase, la caspase 9 pro apoptotique, que ced-4 avait un équivalent
humain codant pour une protéine humaine appelée Apaf-1 qui est également un gène et donc
une protéine inducteur d’apoptose. A l’inverse ced-9 a un équivalent chez l’homme, les
mammifères qui va coder pour une protéine appelée Bcl-2 qui est une protéine plutôt de
survie (anti apoptotique).
2- Les caspases
Les premiers effecteurs importants de l’apoptose, ce sont les caspases. Ce sont des
protéases à cystéine cytosoliques qui vont cliver de nombreux substrats protéiques et sont
donc responsables de la protéolyse qui signe l’apoptose.
Ces caspases, quand on transfecte un ADN supplémentaire dans une cellule qui a priori n’est
pas en apoptose, quand on transfère un ADN qui code pour une caspase dans une cellule, on
va induire l’apoptose de cette cellule.
Ces protéases à cystéine cytosolique existent sous forme de pro enzymes dans la cellule qui
sont activées par clivage dans un premier temps. Ces clivages vont se faire en cascades
activatrices. On a aussi activation par dimerisation : si on prend une pro enzyme on a un pro
domaine N-ter qui sera clivé dans l’enzyme active.
On a une grande sous unité et une petite sous unité , les deux seront clivées et on va avoir :
➢ une hétérodimersation pour former la caspase active
➢ une homodimérisation
Ces clivages se font en cascade activatrice. C’est la grande sous unité qui va porter le site actif.
Alors que l’homodimère va porter des régions régulatrices de cette pro caspases.
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de caspases
Ces caspases initiatrices vont aller cliver d’autres caspases et en
particulier des caspases sous forme de pro caspase et entraîner une cascade
de clivages. Elles présentent un prodomaine long. Ces prodomaines (DED
pour la caspase 8 et CARD pour la caspase 9) présentent des séquences
régulatrices pour contrôler leur activité. Ces caspases initiatrices sont les
premières à être activées. Leur rôle (notamment les caspases 8 et 9) est
d’activer les caspases effectrices. Une caspase initiatrice est activée au
départ du phénomène d’apoptose. Elle s’auto activera et ira activer par
clivage des caspases effectrices qui seront responsables des modifications
morphologiques.
Caspases effectrices
commes les caspases 3, 6 et 7 dont les pro-domaines sont courts, où le
substrat de l’enzyme est une protéine cellulaire.
ll existe un phénomène d’activation en cascade des caspases. Une caspase initiatrice s’auto
activera au départ du phénomène d’apoptose puis ira activer par clivage les caspases
effectrices qui seront responsables des modifications morphologiques de la cellule.
Cascade de caspases avec activation des caspases effectrices en fonction de deux grandes
voies :
- voie extrinsèque : induction de l’apoptose par des ligands extracellulaires
- voie intrinsèque : induction de l’apoptose par des signaux intracellulaire
En fonction de la voie, la caspase inductrice sera différente (caspase 8, caspase 9…), par contre
les caspases effectrices seront les mêmes.
Le clonage de ced-9 chez le nématode, il existe un gène homologue chez l’homme qui code
pour une protéine anti apoptotique, BCL-2.
Il a été reconnu comme étant un membre fondateur d’une douzaine de familles impliquée s
dans l’apoptose au sens général : soit dans la survie (BCL-2, Bcl-xl), soit dans l’apoptose (Bak,
Bax, Bad..). Ces protéines même si elles présentent des actions apparemment antagonistes
présentent des similitudes de séquences.
Le rôle principal de BCL - 2 est d’empêcher la sortie du cytochrome C à partir de la
mitochondrie.
Ces différentes protéines : d’un côté BCL-2 anti apoptotique et de l’autres des protéine spro
apoptotiques de la même famille vont former des homo et des hétérodimères et c’est le
rapport entre le niveau des protéines pro et anti apoptotiques de cette famille qui va
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Globalement Bcl-2 et BAx, qui ont des fonctions opposées, sont capables de se dimériser, de
s’associer et globalement en se liant elles se neutralisent. Leur association se fait sur la
membrane de la mitochondrie.
La survie ou la mort cellulaire dépend du ratio de ces protéines sur la mitochondrie. L’excès
de BCL-2 va déterminer la survie cellulaire. L’excès de Bax va déterminer la mort cellulaire.
C’est l’équilibre entre les niveaux d’expression des membres de cette famille, pro apoptotique
ou anti apoptotique qui règle la décision de déclenchement de l’apoptose.
C) La voie extrinsèque
Des ligands de type TNF, FASL (FAS ligand) se fixent sur des récepteurs dits de mort. (FAS : se lie
sur le récepteur membranaire FAS, TNF ). La liaison de ces ligands sur leurs récepteurs
membranaires va entraîner la mort cellulaire par l’activation d’une première caspase initiatrice à
prodomaine long qui est la caspase 8.
Au cours de cette activation, au niveau de la membrane, on aura pour activer la pro caspase 8 en
caspase 8 la formation d’un complexe appelé le complexe DISC. Le complexe DISC. Ce complexe
DISC va permettre la transduction des signaux apoptotiques à partir des liaisons du ligand sur le
récepteur membranaire et surtout l’activation de la caspase initiatrice, caspase 8.
Ses récepteurs présentent un domaine particulier appelé le domaine DD (death domain). Après
liaison du ligand sur le récepteur, ce domaine de mort fixe une protéine adaptatrice qui va mettre
en contact le domaine de mort du récepteur avec les domaines DED qu’on retrouve au niveau du
prodomaine de la procaspase 8. Cette protéine adaptatrice présente des domaines homologues
au death domaine et homologues au domaine de type DED localisé sur le prodomaine de la
caspase 8.
Cette protéine adaptatrice fait lien entre le récepteur qui a lié le ligand (qui présente un domaine
DD) et la procaspase 8 dont le prodomaine possède un prodomaine DED homologue à celui de la
protéine adaptatrice. C’est ce qu’on appelle le complexe DISC
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Elle sera mise en place par exemple si des mutations de l’ADN sont détectées et non réparées, la
cellule va entraîner l’apoptose. Cette voie peut aussi intervenir lorsqu’il y a absence de facteurs de
croissance.
Cette voie intrinsèque est une voie mitochondriale. Le phénomène majeur initial de cette voie
mitochondriale est la libération, la sortie du cytochrome C de la mitochondrie. Ce cytochrome va
former par interaction avec une protéine APAF-1 (codée par un gène homologue ced-4 comme on
l’a vu tout à l’heure) avec la procaspase 9 pour former l’apoptosome (cytochrome c +
prosacaspase 9+ APAF-1) et le but de la formation de l’apoptosome est d’activer la procaspase 9
en caspase 9. La caspase 9 est la caspase initiatrice de la voie mitochondriale.
Si la concentration de Bax augmente par exemple, on n’aura plus formation d’hétérodimères Bax-
BCL 2 mais d’homodimères Bax-Bax par exemple. Ceci entraînera la libération du cytochrome C
dans le cytosol. On en revient donc au ration BCL-2 / Bax qui, dans un sens, oriente vers la mort
(homodimères Bax/Bax en concentration très importante) et dans l’autre sens oriente vers la
survie (BCL2/BCL2 en concentration très importante). BCL-2 bloque la sortie du cytochrome C.
Dans les conditions normales BCL-2 inhibe la sortie du cytochrome C. Dans les conditions
apoptotique, le niveau d’expression des protéines pro apoptotiques a largement augmenté. Le
rôle de BCL-2 n’existe plus et le cytochrome C peut sortir de la mitochondrie.
Il y a donc quand on regarde les deux voies : externes et intrinsèque, on a des caspases effectrices
qui sont les mêmes. La plus fréquemment décrite est la caspase 3. Elles ont un effet protéolytique
qui va aller dégrader des protéines.
A) Premier rôle
Un des premiers rôles de l'apoptose est un rôle important dans le développement embryonnaire
et en particulier elle permet l’élimination des structures cellulaires inutiles ou mal formées et va
assurer qu’un nombre correct de cellules de type souches se différencient.
L’exemple type est l’exemple de la main : on va former la main, les doigts par des phénomènes
d’apoptose qui vont modeler globalement la main et former des doigts. De la même façon la
transformation de têtard en grenouille. On peut donc avoir formation d’une nouvelle structure ou
suppression de structures éventuelles.
B) Deuxième rôle
L’apoptose à un rôle dans le développement de certaines cellules neuronales. Seules vont survivre
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les cellules nerveuses, neuronales, qui vont entrer en contact avec leurs cellules cibles. Celles-ci
produisent un facteur dit de survie, qui lorsque la cellule normale la rencontrera, permettra la
survie de cette cellule nerveuse. Les autres cellules incapables d’atteindre la cellule cible qui
sécrètent le facteur de survie vont mourir par apoptose. Au cours du développement du système
nerveux le système apoptotique mettra en place exactement le nombre de cellules nerveuses qui
sécrètent le facteur de survie. Les autres mourront par apoptose..
C) Troisième rôle
On a vu que BCL-2 antiapoptotic. Si on altère l’expression cette protéine on aboutit à des tumeurs
comme des lymphomes B.
Deuxième notion, un certain nombre d’agents anticancéreux peuvent exercer leur action en
induisant l’apoptose éventuellement de cellules tumorales. Toujours dans le même ordre d’idée,
l’efficacité d’une thérapie anti tumorale est souvent liée, corrélée à la capacité de la cellule
tumorale à répondre à l’apoptose. C’est un corollaire.
Ces mécanismes d’apoptose jouent un rôle très important dans le développement mais aussi
d’élimination de cellules tumorales avec toutes les conséquences que ça implique.
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A TOI DE JOUER
ACC : l’apoptose
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Décembre 2014
QUESTION N°43
Au cours de l’apoptose, quelle(s) est (sont) la (les) modification(s) cellulaire(s)
observées?
A. fragmentation de l’ADN au hasard
B. absence de lyse de la membrane plasmique
C. clivage des protéines par protéolyse
D. présence de molécules de phosphatidylsérine sur le feuillet externe de la
membrane plasmique
E. présence d’un processus inflammatoire
QUESTION N°44
Au cours de l’apoptose, quelle(s) est (sont) la (les) réponse(s) exacte(s) ?
A. l'apoptose peut être induite par des agents cytotoxiques
B. l’apoptose est un mécanisme physiologique de contrôle du nombre de cellules d’un
organisme
C. l’apoptose peut être induite par FasL (Fas ligand).
D. la résistance à l’apoptose est souvent une caractéristique des cellules tumorales
la voie intrinsèque de l’apoptose s’accompagne d’une sortie du cytochrome c de la
mitochondrie
Décembre 2013
QUESTION N°58
A propos de l’apoptose, quelle(s) est (sont) la(es) réponse(s) exacte(s) ?
A. C’est une mort cellulaire programmée
B. C’est l’unique mort cellulaire connue
C. Elle n’est induite que par des facteurs environnementaux
D. Elle joue un rôle dans le contrôle du nombre de cellules normales au cours du
développement
E. Au cours de l’apoptose, il y a une lyse de la membrane plasmique de la cellule
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QUESTION N°59
A propos des caspases, quelle(s) est (sont) la(es) réponse(s) exacte(s) ?
A. La surexpression d’un ADNc codant pour une caspase dans une cellule induit
l’apoptose
B. L’action d’une caspase peut entraîner un gain de fonction d’une protéine
C. La caspase 8 est initiatrice
D. La caspase 3 a un prodomaine long
E. Les substrats des caspases effectrices sont des protéines cellulaires
QUESTION N°60
A propos de l’apoptose, quelle(s) est (sont) la(es) réponse(s) exacte(s) ?
A. L’altération d’un gène codant pour une protéine anti-apoptotique peut être
impliquée dans le processus de transformation tumorale d’une cellule
B. Certains agents anti-cancéreux exercent leur action en induisant l’apoptose de la
cellule tumorale
C. L’efficacité d’une thérapie anti-cancéreuse peut être corrélée à la capacité de la
cellule tumorale cible à répondre à l’apoptose.
D. L’apoptose joue un rôle dans l’élimination des cellules anormales
E. La protéine p53 peut induire l’apoptose
QUESTION N°61
Au cours de l’apoptose, quelle(s) est (sont) la (les) modification(s) cellulaire(s)
morphologique(s) ?
A. Condensation de la chromatine
B. Lyse des organites
C. Formation de corps apoptotiques
D. Lyse de la membrane plasmique des corps apoptotiques
E. Absence de processus inflammatoire
Décembre 2012
QUESTION N°44
L'apoptose :
A. Peut être induite par une carence en facteurs de croissance
B. Peut être induite par des agents cytotoxiques
C. Peut être induite par FasL (Fas ligand)
D. N’est pas induite par des mutations de l’ADN de la cellule
E. S’accompagne d’une sortie du cytochrome p450 de la mitochondrie
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QUESTION N°45
Parmi les gènes CED (Cell Death Genes) impliqués dans l’apoptose et mis en évidence
chez C. Elegans, quelle(s) est (sont) la (les) réponse(s) exacte(s) ?
A. Ced-3 est pro-apoptotique
B. Ced-4 est pro-apoptotique
C. Ced-9 code pour une protéine homologue à la protéine Bcl-2 chez l’Homme
D. Ced-4 code pour une protéine homologue à la protéine Apaf-1 chez l’Homme
E. Ced-9 est pro-apoptotique
QUESTION N°46
Au cours de l'apoptose, quelle(s) est (sont) la (les) réponse(s) exacte(s) ?
A. La cellule dégrade son matériel génétique et ses protéines
B. L’ADN est dégradé au hasard
C. Les organites sont endommagés
D. Les procaspases effectrices ont un pro-domaine long
E. Le substrat d’une caspase initiatrice est une autre caspase
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