Code : SQ-P-03

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Procédure d’étalonnage du
pipette Date : 05/03/2024

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SOMMAIRE :

1. Introduction……………………………………………………………………………………………………………………2
2. L’objectif…………………………………………………………………………………………………………………………2
3. Matériel……………………………………………………………………………………………………………………………2
4. Méthode……………………………………………………………………………………………………………………………3

Rédacteur Vérificateur Approbateur

GOUMRI Fatima BOUKHOUIMA BOUALAM
Nom et prénom Ezzahraa Salma Ghizlane
Responsable
Fonction Laboratoire Responsable Qualité Directeur Générale
Date et visa 05/03/2024 07/03/2024 15/3/2024

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1. Introduction :
Les pipettes sont des outils de mesure de volumes essentiels en laboratoire, utilisés pour
prélever et délivrer avec précision des volumes. La précision et la fiabilité des résultats
expérimentaux dépendent en grande partie de la justesse des pipettes utilisées. Cependant,
avec une utilisation prolongée, les pipettes peuvent subir des variations de performance qui
compromettent leur exactitude.

Pour garantir des résultats précis et reproductibles, il est impératif de les étalonner
régulièrement. L'étalonnage consiste à ajuster et à vérifier la précision des pipettes en les
comparant à des normes de référence connues. Cette procédure permet de corriger tout écart
potentiel dans les volumes délivrés, assurant ainsi la fiabilité des résultats expérimentaux.

2. L’objectif

L'objectif de cette procédure est de fournir des instructions détaillées pour l'étalonnage précis
des pipettes, garantissant ainsi leur exactitude et leur fiabilité dans les manipulations
volumétriques. En suivant rigoureusement ces étapes, les utilisateurs peuvent maintenir la
qualité des résultats expérimentaux et assurer la conformité aux normes de qualité et de
précision requises dans les environnements de laboratoire.

3. Matériel et équipement :
Pipettes
Eau Distillée de qualité 3
Béchers Propres
Thermomètre
Balance de précision rapide avec une lecture d’au moins 0.001g

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4. Méthode :
 Etape 1 : Utilisez le thermomètre pour fixer la température de l’eau distillée.
Insérez le thermomètre dans l'eau distillée et laissez-le pendant au moins 60 secondes. Si le
thermomètre se déplace toujours, on doit attendre une minute de plus. On attend jusqu’au la
température devient 23°C.

 Etape2 : Placez le béchers propre et vide sur la balance & Tarez le poids du
bécher.
La balance doit disposer d'une portière et d'une chambre isolée. Mettez le bécher dans la
chambre et fermez-la. Appuyez sur le bouton Zéro ou Tare et attendez que l'écran affiche
zéro.
 Etape3 : Préparer la pipette et commencer l’opération de pipetage
Essuyez-la d'abord avec de l'éthanol. La pipette est tenue verticalement et le geste est doux et
lent, l’extrémité ne touchant pas la paroi intérieure du réservoir contenant l’eau prélevée. Il
convient de respecter un temps d’attente en fin de remplissage selon le volume prélevé, ainsi
qu’une valeur de profondeur d’immersion adaptée à la pipette concernée.
Le tableau ci-après donne pour des plages de volume, des fourchettes de profondeur
d’immersion et des temps d’attente raisonnables :

Faites attention à ne pas créer de bulles d’air dans le bécher ou dans la pipette.
N.B : Le liquide étalon à utiliser pour la méthode gravimétrique est de l'eau au minimum de
qualité 3 selon la norme NF EN ISO 3696 : Eau pour laboratoire à usage analytique
Spécification et méthodes d'essai

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 Etape 4 : Dispensez l’eau distillée dans le bécher en utilisant la pipette & Utilisez
la balance pour mesurer le poids de l’eau distillée.

Premièrement dispensez l’eau distillée dans le bécher, puis fermez la portière de la balance.
Attendez que les chiffres ne défilent plus sur l'écran avant de noter le poids.

 Etape 5 : Répétez 10 fois, en enregistrant chaque mesure

Mettre la balance à zéro, aspirer le même volume, distribuer le liquide, puis enregistrer le
poids. Noter le poids d'eau distillée pour le même volume, puis calculer la moyenne de tous
les poids que vous avez enregistrés.
 Etape6 : Calculer l’incertitude
 Etape 7 : Calculer les résultats

La formule pour calculer le volume de liquide libéré par la pipette est V = w x Z

W : le poids de l'eau,
Z : le coefficient de conversion, (pour 23°C la valeur du Z est de 1,003)
V : le volume d'eau libéré,

 Etape 8 : Calculez le volume moyen de tous les essais

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Etape 9 : Calcul l’erreur de justesse

Calculez les corrections nécessaires pour ajuster les volumes aspirés et déposés en fonction des
écarts observés.

Exemple :
Supposons que vous mesurez le volume délivré par une pipette de 10 ml et que vous

Obtenez les résultats suivants pour cinq répétitions :

mesure 1 2 3 4 5
Résultat(ml) 9,95 10,02 9,97 9,98 10,00

Calculez les écarts pour chaque mesure :

mesure 1 2 3 4 5
Ecart(ml) -0,05 +0,02 -0,03 -0,02 0

Calculez la moyenne des écarts :

Moyenne des écarts = (-0,05 ml - 0,03 ml - 0,02 ml + 0,02 ml + 0 ml) / 5 = -0,016 ml
Dans cet exemple, la moyenne des écarts est de -0,016 ml. Cela signifie que la pipette délivre en
moyenne 0,016 ml de moins que le volume nominal prévu de 10 ml.

Ensuite, vous devez ajuster les volumes délivrés par la pipette en ajoutant cette correction à chaque
volume délivré. Donc, dans ce cas, vous devrez ajouter 0,016 ml à chaque volume délivré pour
corriger cet écart.

 Etape 10 :Calculez l’incertitude de la pipette

Utilisez l'équation A = 100 x Vmoy/V0 pour calculer la précision de la pipette.
A :la précision de la pipette,
Vmoy : la moyenne du volume calculée,
V0 : représente la valeur définie sur la pipette,
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N.B : Vous devriez obtenir entre 95 et 100 % de précision.

Si la pipette est bien étalonnée, la valeur calculée devrait avoisiner la valeur réelle définie sur
la pipette. Calculer la capabilité vous devrez la trouvez supérieur à 3. Dans ce cas la pipette
doit être identifié par une étiquette.

Si vous trouvez une valeur qui est inférieur à 3, vous devez essayer une autre méthode d’essai,
si encore la capabilité reste inférieure à 3 càd la pipette est non conforme dans ce cas il faut
éliminer cette pipette.