LECTROPHORSE

Article crit par Jean GUASTALLA, Jean MORETTI, Jean SALVINIEN

Prise de vue
En solution ou en suspension dans l'eau, une solution aqueuse ou certains autres liquides, des
macromolcules, des particules, des grains d'mulsion, des bactries mme tendent en gnral se
dplacer sous l'effet d'un champ lectrique: c'est l'lectrophorse, dcouverte en 1892 par S.E.Linder et
H.Picton.
L'importance du phnomne d'lectrophorse, outre son intrt thorique propre, rside dans
l'utilisation qu'on en fait, trs largement, des fins analytiques ou prparatives. On doit cette mthode la
dcouverte et l'identification de nombreux constituants des tissus animaux et vgtaux. La principale
application pratique est l'tude des srums pathologiques.
I-Principe de l'lectrophorse
L'lectrophorse suppose tout d'abord que la macromolcule ou la particule en cause possde une
charge lectrique. Dans le cas des macromolcules ionisables, l'origine de la charge lectrique est vidente,
mais, d'une faon plus gnrale, la surface d'un solide acquiert le plus souvent une charge lectrique au
contact de certains liquides qui favorisent l'ionisation. Ainsi, la surface de la silice ou du verre, au contact de
l'eau, se charge ngativement, en perdant des ions H
+
s'il s'agit de silice, des ions Na
+
s'il s'agit de verre.
Mme des corps qui ne sont pas capables de perdre des ions peuvent nanmoins acqurir au contact de ces
liquides une charge superficielle, qu'on attribue l'adsorption prfrentielle d'ions d'une nature donne ou
d'un signe donn prsents dans le liquide.
On suppose donc que la particule possde une charge lectrique localise sa zone superficielle. Le
principe d'lectroneutralit impose la prsence, autour de la particule, d'une couche d'ions de signe oppos
dont la charge lectrique compense exactement celle de la particule. Il faudrait en effet fournir un travail
considrable pour accumuler dans un volume donn ou sur une surface donne des charges lectriques de
mme signe, non compenses par des charges de signe oppos trs voisines; la charge lectrique totale
d'un petit lment de surface lectriquement charg et d'une fine tranche de solution contigu, contenant un
excs d'ions de signe oppos, doit tre pratiquement nulle.
Les thories classiques de l'lectrophorse reposent sur la structure de la couche double lectrique et
drivent des thories de l'lectro-osmose. L'lectro-osmose est le dplacement d'un liquide le long d'une
paroi solide, sous l'effet d'un champ lectrique parallle celle-ci.
Suivant l'ancienne conception prsente par H.L.F.Helmholtz, les ions compensateurs s'aligneraient en
une nappe parallle la paroi solide, une petite distance bien dfinie de celle-ci. Cette reprsentation s'est
rvle insuffisante: l'agitation thermique des ions compensateurs entre en comptition avec leur attraction
lectrostatique par la surface charge et leur interdit une distribution en nappe parallle cette surface.
D'aprs L.G.Gouy, les ions compensateurs se distribueraient en couche diffuse, de faible paisseur, avec
une rpartition de type atmosphrique partir de la surface solide. Selon Stern, une partie des ions
compensateurs se fixeraient nergiquement la paroi, le reste de ces ions constituant une couche diffuse de
type Gouy.
Couche double ionique
Schma d'une couche ionique: selon Helmholtz(a),
selon Gouy(b), selon Stern(c)(2005 Encyclopdia
Universalis France S.A.)
Dans un champ lectrique parallle la surface du solide suppos immobile, les ions compensateurs
mobiles de la couche diffuse tendent se dplacer en entranant le liquide et provoquent l'lectro-osmose.
L'hypothse primitive de Helmholtz permet des calculs simples. Soit l la distance (trs petite) entre la
couche mobile d'ions compensateurs et la surface du solide, la viscosit du liquide dans l'intervalle, la
densit de charge par unit de surface du solide. Dans un champ unit, chaque centimtre carr de la nappe
mobile d'ions compensateurs est soumis une force tangentielle f gale ; la vitesse
eo
de dplacement
de l'eau qu'ils entranent a pour valeur, d'aprs les lois de l'hydrodynamique:
Soit la diffrence de potentiel de passage travers la couche double lectrique constitue par les
charges superficielles du solide et la nappe d'ions compensateurs, la constante dilectrique du liquide
intercalaire. De la relation classique:
(dans le systme C.G.S.), on tire:
La valeur de la mobilit lectro-osmotique sera:
On peut dmontrer que la relation qui exprime la mobilit lectro-osmotique est la mme que ci-dessus
dans le cas d'une couche diffuse de type Gouy, reprsentant alors la variation de potentiel lectrique de
passage travers toute l'paisseur de la couche diffuse (dans le cas d'une couche de type Stern, le potentiel
sera compt partir du plan o les ions commencent tre mobiles jusqu' l'infini).
Dans l'lectrophorse, une particule, solide ou liquide, au contact d'une solution aqueuse par exemple,
acquiert une charge superficielle, tout comme la paroi solide dans l'lectro-osmose et pour des raisons
analogues; elle s'entoure d'un nuage diffus d'ions compensateurs. Mais, contrairement au cas d'une paroi
solide, la particule n'est pas immobilise: dans un champ lectrique, elle sera entrane vers l'lectrode de
signe oppos celui de sa charge superficielle; elle est toutefois ralentie dans ses dplacements par les ions
compensateurs mobiles qui viennent s'accumuler devant la particule en mouvement et se dplacent en
entranant le liquide, le long de la surface de la particule et en sens inverse du dplacement de celle-ci,
avant de se disperser derrire elle.
Particule charge
Schma d'une particule charge entoure de ses
ions compensateurs(2005 Encyclopdia Universalis
France S.A.)
Des calculs classiques conduisent exprimer la mobilit lectrophortique
eph
, en valeur absolue, par
une relation de la forme:
o pourrait prendre suivant les cas des valeurs comprises entre 4 et 6 ; cette relation est assez
analogue celle qui exprime la mobilit lectro-osmotique. En fait, si l'on mesure simultanment les
mobilits lectrophortique et lectro-osmotique sur une suspension faite de la matire mme de la paroi de
la cellule (voir ci-dessous), on constate bien que les deux mobilits, qui sont de signe oppos, sont peu
prs du mme ordre de grandeur en valeur absolue. D'autre part, dans les relations classiques, le rayon de la
particule s'introduit seulement dans un terme correctif: en fait, toutes choses tant gales par ailleurs, les
valeurs exprimentales des mobilits lectrophortiques sont peu prs indpendantes des dimensions des
particules.
Nanmoins, les thories actuelles laissent subsister des difficults d'interprtation de certains faits
exprimentaux. Le potentiel introduit dans les relations est une grandeur qui parat difficile mesurer
directement, de sorte que les relations thoriques ne peuvent pas tre contrles par l'exprience.
II-L'lectrophorse libre
Mesure de la mobilit lectrophortique
La mesure de la mobilit lectrophortique (vitesse de dplacement d'une particule ou d'une
macromolcule, dans un liquide donn une temprature donne, sous l'effet d'un champ lectrique unit)
peut s'effectuer par observation des particules sous microscope si les particules sont visibles l'aide de cet
appareil, au moins sous clairage ultramicroscopique; si les particules sont invisibles au microscope
(macromolcules en solution par exemple), on observe par des moyens optiques appropris le dplacement
dans le champ d'une frontire initialement cre entre la solution collodale et le solvant pur: la vitesse de
dplacement de cette frontire est celle des macromolcules.
Mesures sous microscope
Ces mesures, effectues dans des canaux trs fins, se compliquent du fait de la superposition de deux
phnomnes: l'lectrophorse (dplacement des particules par rapport au liquide) et l'lectro-osmose
(dplacement du liquide le long des parois du canal).
On opre souvent selon la mthode d'Ellis: deux petits rcipients communiquent par un canal
capillaire long de quelques centimtres, gnralement de section rectangulaire et de trs faible paisseur.
La cellule est compltement remplie de la suspension tudier; on introduit dans les petits rcipients des
lectrodes montes sur des bouchons qui assurent la fermeture tanche de la cellule.
Cellule d'lectrophorse
Schma d'une cellule d'lectrophorse sous
microscope(2005 Encyclopdia Universalis France
S.A.)
Une diffrence de potentiel lectrique connue est tablie entre les lectrodes: la valeur du champ
lectrique qui rgne dans le canal peut tre dduite de cette diffrence de potentiel ou, parfois, contrle
grce une paire d'lectrodes-sondes places aux extrmits du canal. Dans ce champ lectrique, le liquide
de suspension est entran par lectro-osmose le long des parois, mais, comme la cellule est close, ce liquide
reflue en sens inverse dans la portion axiale du canal. Dans le cas d'un canal de section rectangulaire et de
trs faible paisseur, les lois de l'hydrodynamique montrent que les vitesses du liquide par rapport aux
grandes parois sont reprsentes, en fonction de la distance l'une de ces parois, par un arc de parabole et
qu'il existe deux plans parallles aux grandes parois (plans stationnaires) au niveau desquels le liquide reste
immobile; les distances de ces plans l'une des grandes parois du canal sont approximativement gales
21p. 100 et 79p. 100 de l'paisseur du canal. Si l'on met un microscope exactement au point sur l'un des
deux plans stationnaires, la vitesse directement mesure sur les particules visibles avec nettet est leur
vitesse d'lectrophorse.
Canal capillaire d'une cellule d'lectrophorse
Coupe du canal capillaire d'une cellule
d'lectrophorse sous microscope: les flches
reprsentent, diffrentes profondeurs du canal, les
vitesses du liquide entran le long des parois avec
une vitesseVeo(2005 Encyclopdia Universalis
France S.A.)
La mobilit lectrophortique s'obtient en divisant la vitesse d'lectrophorse par la valeur du champ
lectrique dans le canal.
Mesures de la mobilit de macromolcules en solution
On utilise frquemment un appareil de type Tiselius, o l'paisseur des canaux des cellules est de l'ordre
de plusieurs millimtres.
La cellule, soigneusement thermostate, constitue, en position de mesure, un tube en U dans lequel sont
superposs la solution macromolculaire tudier et son solvant (par exemple une solution de protine dans
un tampon et le tampon pur); la solution de plus forte densit (en gnral la solution macromolculaire) doit
tre place au-dessous de la solution de plus faible densit. leur partie suprieure, les deux branches du
tube en U communiquent avec des rcipients contenant les lectrodes. Dans une portion verticale de
chacune des branches du tube en U, on cre, immdiatement avant de faire passer le courant lectrique,
une frontire aussi nette que possible entre la solution et son solvant. Il existe plusieurs techniques pour
crer ces frontires prcises. Dans l'appareil de Tiselius, le tube en U est sectionn en cinq tronons, dont
deux tronons verticaux solidaires l'un de l'autre, formant un bloc qui peut glisser comme un tiroir aux joints
parfaitement tanches entre la portion infrieure du tube en U et le bloc constitu par les deux portions
suprieures; la portion infrieure, indpendamment, peut aussi glisser le long de la base du tiroir
mdian. Grce un jeu convenable des parties mobiles, on emplit d'abord la portion infrieure du tube de
solution, puis l'un des tronons mdians de tampon pur et l'autre de solution, enfin les branches suprieures
de tampon pur; on pousse alors les tiroirs de faon reconstituer le tube en U; puis, en dplaant le liquide
dans le tube, on amne les deux frontires un niveau o leur examen optique est possible, c'est--dire
dans les tronons mdians. S'il n'existe en solution qu'une seule espce macromolculaire, ou si les mobilits
de toutes les espces prsentes sont de mme signe dans les conditions de l'exprience, un champ
lectrique donn dplacera l'une des frontires vers le haut (branche ascendante), l'autre vers le bas
(branche descendante); en mme temps, les frontires perdent de leur nettet initiale en raison de la
diffusion. Dans d'autres types d'appareils, on cre la frontire par aspiration latrale.
Appareil de Tiselius
Schma de la cellule de l'appareil de Tiselius(2005
Encyclopdia Universalis France S.A.)
Le dplacement de la frontire peut s'observer directement si la macromolcule est colore
(hmoglobine par exemple) mais, dans le cas gnral, on utilise divers procds optiques (interfromtrie,
dispositif de Philpot-Svensson) reposant sur la variation d'indice de rfraction de la solution
macromolculaire avec sa concentration, qui permettent de suivre le dplacement du plan o le gradient est
maximal; ces procds sont analogues ceux que l'on emploie pour suivre un dplacement de frontire
provoqu par ultracentrifugation.
Si la solution contient plusieurs types de macromolcules, de mobilits diffrentes, la frontire initiale se
rsout en gnral en plusieurs frontires qui se dplacent avec des vitesses diffrentes.
Remarquons que l'lectro-osmose le long des parois de la cellule ne dforme pratiquement pas
l'horizontalit des zones frontires dans les canaux verticaux et de large section des appareils de ce type,
condition toutefois qu'il y ait entre la solution et son solvant une diffrence de densit suffisante pour que les
effets hydrostatiques rtablissent chaque instant cette horizontalit.
La figure reprsente un diagramme d'lectrophorse obtenu l'aide du dispositif Philpot-Svensson,
relatif au srum sanguin humain.
Diagramme Philpot-Svenson
Calque d'un diagramme Philpot-Svensson (srum
sanguin humain normal)(2005 Encyclopdia
Universalis France S.A.)
Ordre de grandeur des mobilits lectrophortiques
Qu'il s'agisse de la mobilit des particules visibles au microscope, de particules submicroscopiques, de
micelles d'agents de surface, de macromolcules en solution, ou mme de bactries, les valeurs des
mobilits en solution aqueuse sont le plus souvent de l'ordre de quelques microns par seconde dans un
champ d'un volt par centimtre; cet ordre de grandeur est le mme que celui des mobilits des petits
ions des lectrolytes minraux comme l'ion Na
+
ou l'ion Cl
-
.
D'une faon gnrale, la mobilit lectrophortique diminue en valeur absolue quand la concentration
saline de la solution augmente.
S'il s'agit de macromolcules amphotres (c'est--dire portant des groupes acides et des groupes
amines), comme les protines, la mobilit varie avec le pH de la solution: nulle un pH caractristique de
l'espce molculaire considre, appel point isolectrique (pH
i
), elle est ngative c'est--dire que la
molcule migre vers l'lectrode positive lorsque le pH est suprieur au pH
i
, positive lorsque le pH est
infrieur au pH
i
.
Applications
Les mesures de mobilit lectrophortique des particules en suspension servent principalement des
recherches fondamentales concernant la charge lectrique des particules; elles peuvent s'appliquer la
prvision de la stabilit des suspensions collodales.
La mobilit de particules de silice couvertes d'une couche d'adsorption d'une protine donne est
pratiquement gale celle de la molcule elle-mme, place dans les mmes conditions de pH (Abramson).
Signalons aussi certains usages de l'lectrophorse en bactriologie. Des espces bactriennes
diffrentes peuvent ainsi tre spares si leurs mobilits lectrophortiques sont assez diffrentes.
L'lectrophorse des macromolcules en solution est employe souvent des fins analytiques et sert
dceler dans une solution protique (ou dans une solution de polylectrolytes en gnral) l'existence de
plusieurs espces de mobilits diffrentes, identifier ces espces grce la valeur de leur mobilit dans un
tampon de pH donn, doser approximativement chacune d'elles. Dans les appareils destins
l'lectrophorse prparative, on peut sparer en quantit notable une espce protique de plusieurs autres,
par exemple en se plaant un pH intermdiaire entre le point isolectrique de l'espce sparer et ceux
des autres espces: les molcules de l'espce sparer migrent alors en sens inverse des autres.
Dans une solution o l'on a cr un gradient de densit vertical l'aide d'un solut non-lectrolyte
(saccharose par exemple), une espce macromolculaire donne, sous l'action d'un champ lectrique
appropri, s'immobilisera un niveau o l'effet lectrique sera compens par un effet hydrostatique. On
ralise ainsi des sparations d'espces macromolculaires par zones.
Jean GUASTALLA
III-lectrophorse de zone sur support
Si l'lectrophorse dite libre, en veine liquide, permet une bonne dtermination des mobilits
lectrophortiques, elle prsente par contre certains inconvnients: non seulement elle ncessite un
appareillage coteux, une mise en uvre longue et dlicate, mais encore elle ne permet pas de distinguer,
d'isoler, ni de caractriser les fractions protiques autrement que par leur mobilit.
C'est pourquoi, partir de 1950, on a propos diffrents supports qui permettent d'effectuer une
lectrophorse de zone sur un support stabilisateur qui peut tre le papier-filtre (E.Durrum, D.Cremer et
A.Tiselius, W.Grassmann et K.Hannig, tous en 1950), l'actate de cellulose (J.Kohn en 1957), ou encore le
gel d'agar (C.A.Grabar et P.Williams en 1953, R.J.Wieme en 1959).
Ces supports ont connu un immense succs, car leur emploi est simple, rapide, peu onreux. En outre, il
ne ncessite que de trs petites quantits de substances. Ainsi, dans le cas d'un srum sanguin, quelques
microlitres suffisent.
Quel que soit le support, on utilise une cuve lectrophorse essentiellement constitue de deux
bacs contenant le tampon et une lectrode. Anode et cathode sont relies un gnrateur de courant
continu. Les extrmits du support solide trempent dans le tampon ou lui sont relies par des ponts en
papier filtre.
Cuve lectrophorse
Cuve lectrophorse. Les petits tubes de verre
renferment de la laine de verre ou du coton dont le
rle est, en arrtant les gros ions, de freiner le
changement de concentration du tampon d
l'lectrolyse.(2005 Encyclopdia Universalis France
S.A.)
lectrophorse sur papier et sur actate de cellulose
On dpose quelques microlitres de la solution tudier (mlanges d'enzymes, de protines sriques ou
d'autres substances charges) sous forme d'une ligne mince sur le support imbib de tampon. On le soumet
ensuite une lectrophorse; l'intensit du courant est voisine de 2mA par centimtre de largeur du
support.
Au bout de quelques heures, la feuille est sche. Les diffrentes fractions sont rvles par des
colorants spcifiques, qui permettent de caractriser, par exemple, les protines, les glycoprotines, les
lipoprotines. Quant aux enzymes, on peut les rvler en utilisant leur activit spcifique sur des substrats
convenablement choisis.
Le pouvoir de rsolution de cette technique n'est pas suprieur celui de l'lectrophorse en veine
liquide. Par exemple, partir du srum, on obtient six fractions: albumine,
1
,
2
,
1
,
2
et -globulines.
L'interaction entre le support et les protines n'est pas totalement ngligeable, c'est l un inconvnient.
Si elle est faible avec l'actate de cellulose, elle est plus marque avec le papier filtre. C'est pourquoi, dans
les conditions normales, on ne peut dceler, avec ce support, dans le cas d'un srum, les pralbumines, qui
devraient migrer plus vite que l'albumine, mais qui sont freines par leur adsorption par le papier. On y
parvient cependant, par exemple, en augmentant la quantit de protines dpose.
lectrophorse en gel d'agar (glose)
Le support est constitu l'aide d'une solution de glose (agar-agar) 1p. 100 dans le tampon choisi.
On la coule chaud sur une lame de verre o elle se solidifie par refroidissement. Le pouvoir de rsolution
est identique celui du papier. Mais le gel d'agarose purifie prsente l'avantage de ne pas produire
d'interaction avec les protines.
Pour augmenter le nombre de fractions protiques spares par l'lectrophorse, on a propos d'autres
supports qui se comportent comme des tamis molculaires. Il s'agit de gels poreux qui, par un phnomne
de friction, retardent d'autant plus la migration des protines que les dimensions de leurs molcules sont
plus grandes. Ainsi le groupe des
2
-globulines peut tre rsolu en une dizaine de constituants. On signalera
les deux principaux procds dans les paragraphes ci-dessous.
lectrophorse en gel d'amidon
Elle a t propose par Smithies en 1955. Elle utilise un amidon partiellement hydrolys avec lequel on
fait un gel contenant de 13 15g d'amidon pour 100ml de tampon. Le mlange, fluide l'bullition, est
coul dans un bac o il se prend en gel par refroidissement. On insre les protines sparer dans une fente
pratique dans le gel. Aprs lectrophorse, on coupe le gel dans son paisseur et on rvle les protines
par un des colorants habituels.
Avec un srum humain, on peut obtenir prs d'une vingtaine de bandes. L'opration complte demande
au minimum quinze heures.
lectrophorse d'un srum humain
lectrophorse d'un srum humain(2005
Encyclopdia Universalis France S.A.)
lectrophorse en gel d'acrylamide
Elle a t dcrite par S.Raymond et Weintraub en 1959, par B.J.Davis et L.Ornstein la mme anne.
C'est une mthode trs fine de sparation par simple lectrophorse sur support.
Une solution d'acrylamide, coule dans de petits tubes verticaux, forme un gel par polymrisation. Les
pores ont un diamtre de 5nm environ. Les protines sparer sont dposes une extrmit du gel dans
lequel elles se dplacent sous l'action du champ lectrique.
Aprs coloration, les protines sont visibles sous forme de disques parallles, superposs, d'o le nom de
Disc-electrophoresis utilis par les Anglo-Saxons.
Cette technique est rapide, prcise, reproductible, sensible. Un srum humain est rsolu en au moins une
vingtaine de fractions.
Le polyacrylamide ne donne aucune raction avec les colorants, ni les protines, ni les polysaccharides,
ni les lipides. Le gel est transparent. Il permet une valuation densitomtrique plus aise que celle obtenue
lorsqu'on utilise le papier comme support.
lectrophorses prparatives sur support
On a dcrit plusieurs procds qui permettent de sparer des groupes de protines (albumine,
1
,
2
,
1
,

2
, -globulines) en vue de prparer ces fractions partir, par exemple, d'un srum. cet effet, on utilise des
portoirs de grandes dimensions dans lesquels on met une pte d'amidon, ou de tout autre support neutre
comme le Pvikon (chlorure de polyvinyle), ou mme des gels (glose, amidon, etc.). L'opration termine,
on dcoupe le support en tranches d'o l'on lue les protines. Cette technique est videmment utilisable
pour prparer toute substance isole par l'lectrophorse sur ce genre de support.
lectrophorse haute tension
L'emploi de tensions leves de l'ordre de 3000 5000volts permet de sparer, par lectrophorse
une ou deux dimensions perpendiculaires, des substances telles que peptides et acides amins. On utilise
une feuille de papier de 3040cm, place entre deux plaques isolantes, refroidies +2
0
C pour viter que
la feuille ne se dessche et, finalement, ne se consume. L'appareillage ncessaire est assez onreux. Un
dispositif plus simple consiste immerger la feuille lectrophorse dans de l'ther de ptrole, lui-mme
refroidi par un serpentin.
La haute tension permet de sparer en une heure un mlange de substances comme les peptides
obtenus par hydrolyse enzymatique d'une protine. La carte obtenue par deux lectrophorses
perpendiculaires avec deux tampons diffrents (ou une chromatographie dans une direction suivie d'une
lectrophorse dans l'autre) constitue un diagramme caractristique comme l'est une empreinte digitale,
d'o le terme finger-print donn par les Anglo-Saxons cette technique.
Jean MORETTI
IV-Analyse immuno-lectrophortique
Les mthodes prcdentes, mme les plus efficaces, ne permettent pas toujours de sparer et
d'identifier des protines diffrentes lorsqu'elles ont la mme mobilit lectrophortique; en outre, des
composants trs peu abondants peuvent passer inaperus.
Grabar et Williams ont apport un perfectionnement remarquable aux mthodes de sparation et
d'analyse des protines en combinant l'lectrophorse et l'analyse immuno-chimique par diffusion.
Une fraction du mlange protique tudi, servant de mlange antignique, est injecte un animal
(cheval, lapin, chvre...), qui ragit en fabriquant des anticorps qu'il dverse dans son srum sanguin.
chaque composant du mlange protique correspond un anticorps qui ragit sur lui d'une faon troitement
spcifique. Dans des conditions convenables, la raction in vitro entrane la formation d'un prcipit bien
visible, d la formation d'un complexe antigne-anticorps.
Le mlange antignique subit d'abord, dans un gel de glose, une lectrophorse qui entrane une
sparation plus ou moins complte des constituants le long d'un axe Ox. On laisse ensuite ces constituants
diffuser normalement Ox contre le mlange d'anticorps qui provient d'un rservoir rectangulaire trs
allong et parallle Ox. Lorsqu'un constituant antignique rencontre son anticorps spcifique, il forme avec
lui une ligne fine de prcipit qui affecte le plus souvent la forme d'un arc elliptique dont la concavit est
tourne vers Ox. chaque protine du mlange tudi correspond une ligne et une seule.
Immuno-lectrophorse
Diagramme immuno-lectrophortique (en glose)
du srum sanguin d'un homme normal(2005
Encyclopdia Universalis France S.A.)
La mthode utilise donc successivement le pouvoir de rsolution de l'lectrophorse et la grande
spcificit des ractions immunochimiques. Elle permet ainsi des analyses qualitatives extrmement fines
qui rvlent parfois l'existence de traces de constituants.
Lorsque s'est dessine la figure de diffusion, on peut ajouter des colorants qui facilitent la caractrisation
des diverses protines formant les arcs de prcipit.
Il est possible de desscher la lame de glose de faon obtenir une pellicule transparente qui conserve
indfiniment les rsultats de l'analyse sous forme d'un diagramme naturel.
Cette lgante mthode a permis, entre autres, d'identifier tous les constituants protiques de nombreux
srums sanguins correspondant ou non des tats pathologiques.
Dans sa partie suprieure, la figure reproduit le diagramme immuno-lectrophortique, obtenu dans la
glose, du srum sanguin d'un homme normal.
Diagramme immuno-lectrophortique
Immuno-lectrophorse: schma de principe(2005
Encyclopdia Universalis France S.A.)
Paralllement ce diagramme, est figure la bande d'lectrophorse en gel d'amidon du mme srum.
Dans cette bande, la position relative des constituants antigniques du srum est sensiblement la mme que
celle qu'ils avaient dans la lame de glose aprs lectrophorse, mais avant diffusion. Les lignes
discontinues indiquent les correspondances et conduisent aux symboles des constituants responsables des
arcs de prcipit. De gauche droite, on reconnat aisment l'arc de la srum-albumine (symbole Alb), les
arcs des globulines et , l'arc trs allong des globulines . La figure permet d'apprcier sa juste valeur le
pouvoir de rsolution de l'analyse immuno-lectrophortique.
Jean SALVINIEN
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