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Analyse Gntique Cours 1

Philippe ROUSSEAU, Matre de confrence Laboratoire de Microbiologie et de Gntique Molculaire Tel: 05 61 33 59 16 - Mail: philippe.rousseau@ibcg.biotoul.fr Site: www.iefg.biotoul.fr - liens eseignements

Premire partie: Gntique Fondamentale (cours 1 et 2)


Rappels Notion de gne, expression, mutation, rparation La fonction du gne Relation un gne/une fonction: Beadle et Tatum La fonction dominante ou rcessive La complmentation de deux gnes

Deuxime partie: Gntique Mendlienne (cours 3 6)


Sgrgation indpendante Liaison gntique Interaction gnique Un gne, deux gnes Un gne li son centromre, deux gnes Epistasie et synergie

Troisime partie: Gntique molculaire (procaryote, cours 7 9)


Transformation bactrienne Echanges gntiques Echanges gntiques Rgulation gntique Transformation, recombinaison, Transductions localises et gnralises Conjugaison: facteur F Oprons

Quatrime partie: Gntique des populations (cours 10)


Hardy-Weinberg

Notion de gne
Gne: Unit fonctionnelle et physique lmentaire de lhrdit qui transmet linformation dune gnration la suivante. Un fragment dADN, constitu dune rgion transcrite et de squences rgulatrices.
Promoteur Stop

Licence2: Gntique - T2

Procaryote

Eucaryote

Promoteur

Intron

Stop

Exon1 Codant

Exon2

Fonction du gne

Licence2: Gntique - T3

Modle simple bactrien La structure du gne reflte sa fonction: Assurer lexpression du matriel gntique.
+1 -35 -10

Unit fonctionnelle: gne


Promoteur RNAP Stop

RNAP

Transcription Traduction Codon initiation Codon Stop

Promoteur: exemple E.coli

maturation

Larchitecture dune protine est la cl de la fonction des gnes.

Importance de larchitecture dune protine: Notion de site actif

Licence2: Gntique - T4

+ substrat enzyme enzyme

+ produit

La structure tridimensionnelle de la protine (enzyme) dfinit sa fonction biochimique.

Si la structure tridimensionnelle de la protine est modifie, sa fonction biochimique peut elle aussi tre modifie. La mutation du gne peut induire ce type de modification.

Mutation: au niveau de lADN

Licence2: Gntique - T5

Mutation: processus par lequel des gnes passent dune forme alllique une autre. Exemple dune mutation ponctuelle: Altration dune base. Etape facilite par les agents mutagnes: - rayons UV - rayons X - rayons beta et gamma - acide nitreux - nitrosoguanidine Altration dune base
*

Gnration 2 ACGTC TGTAG ACATC TGTAG rplication ACGTC TGCAG ACGTC TGCAG ACGTC TGCAG
*

Gnration 1 ACGTC TGTAG


*

ACGTC TGCAG

ACGTC TGCAG

rplication

Rparation
Rparation:

Licence2: Gntique - T6

- processus par lequel la plupart des lsions ou des mutations de lADN sont rpares - ce processus est enzymatique - la dfaillance dans un des ces processus enzymatique est la base dun phnotype hypermutateur ex: cancers de la peau ou du colon chez lhomme

Gnrat 1 Altration dune base

Gnrat 1

ACGTC TGTAG ACGTC TGCAG


*

ACGTC TGCAG ACGTC TGCAG


Rparation du msappariement

ACGTC TGCAG
Rparation de la lsion

ACGTC TGCAG
rplication

Mutation: au niveau protique


Promoteur Stop

Licence2: Gntique - T7

Dans une mutation ponctuelle, le changement de base peut induire un changement de codon.

Les mutations ponctuelles peuvent tre: - faux-sens: changement de codon et dacide amin - non-sens: changement de codon vers un codon stop - silencieuse: changement de codon sans changement dacide amin

TGT(Cys)

TCT(Ser)

TAC(Tyr)

TAA(Stop)

CCT(Pro)

CCC(Pro)

Autres exemples de mutations

Licence2: Gntique - T8

Insertion
Promoteur

Dltion
Stop

inversion

Le plus souvent ce type de mutation amne une destruction de la phase codante du gne et donc une perte de fonction.

Rversion et supression
Reversion: annulation de la mutation
mutation

Licence2: Gntique - T9

On parle de rversion ou de supression lorsquune mutation en annule une autre

reversion

- reversion vraie - reversion quivalente

AAA(Lys) TCC(Ser)

GAA(Glu) TGC(Cys)

AAA(lys) AGC(Ser)

Supression: annulation des consquences dune mutation - supression intragnique une autre mutation dans le gne qui restaure lintgrit de la fonction code.

ex: si la mutation 1 induit une dformation du site actif, la mutation suppressive induit une autre dformation qui compense celle induite par la mutation1. - supression extragnique la mutation dun autre gne qui annule les effets de la premire.

ex: si une mutation 1, dans un gne codant une sous-unit dune enzyme bipartite, une mutation suppressive dans le gne codant lautre sous-unit peut compenser la premire mutation.

Test de fluctuation: Luria & Delbrck


culture1
Analyse sur 108 bactrie par cultures de 1 ml inocules par 103 bactries.

Licence2: Gntique - T10

N culture

nb. Colonie T1R 1 4 0 0 12 0 0 9 120 0 14,6

1 mutant culture2 4 mutants culture3 0 mutant

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Moyenne

Il existe une grande fluctuation entre les expriences: les mutations arrivent par hasard.

Frquence de mutation: loi de Poisson

Licence2: Gntique - T11

loi de Poisson donne ici la frquence dapparition au hasard dune mutation : si si alors, i = nombre de cellules au dbut de la culture = 103 n = nombre de cellules la fin de la culture = 108 d = nombre de divisions pour passer de i n cellules d = n-i = 108 - 103 d~= n

Alors, si T = le taux de mutation par division On a: Donc

f(la classe 0) = e -Td


ln(f o) = -Td

f(la classe 0) = frquence des cultures


sans colonie T1R Cf. Diapo n:10

soit T = - (ln(f o)/d) = -(ln(5/10)/ 108) = 0,7 x 10-8

Isolement de mutants rsistants chez la E.coli

Licence2: Gntique - T12

Levure [drogueS]

Cette exprience est rpte autant de fois que lon veut de mutants indpendants

MC 103/ml

30C T 108/ml
MC + drogue +

talement de 1 ml soit ~108 E.coli

MC [drogue S] [drogue R] + +

30C, T

MC + drogue

F(drogueR) ~ 108

Isolement de mutants arg- chez E. coli

Licence2: Gntique - T13

Agent mutagne

Cette exprience est rpte autant de fois que lon veut de mutants indpendants.

MM + arg 103/ml

30C T 108/ml

Dilution 106 fois talement de 1 ml Soit ~100 E.coli

MM [arg-] [arg+] +

MM + arginine + +

30C, T

e u iq l p r

30C, T

MM + arg

MM

Analyse Gntique
Cours 2

Philippe ROUSSEAU, Matre de confrence Laboratoire de Microbiologie et de Gntique Molculaire Tel: 05 61 33 59 16 - Mail: rousseau@ibcg.biotoul.fr Site: www.iefg.biotoul.fr - liens eseignements

Premire partie: Gntique Fondamentale


Rappels Notion de gne, expression, mutation, fparation, Frquence La fonction du gne Relation un gne, une fonction: Beadle et Tatum La fonction dominante ou rcessive La complmentation de deux gnes

Deuxime partie: Gntique Mendellienne


Sgrgation indpendante Liaison gntique Interaction gnique Un gne, deux gnes Un gne li son centromre, deux gnes Epistasie, synergie de phnotype

Troisime partie: Gntique molculaire (procaryote)


Transformation bactrienne Echanges gntiques Echanges gntiques Rgulation gntique Transformation, recombinaison, aquisition de resistances Transductions localises et gnralises Conjugaison: facteur F Oprons

Quatrime partie: Gntique des populations


Hardy-Weinberg

Enzymes dficientes: dominance et rcessivit chez les diplodes


Enzyme active + substrat Enzyme active + substrat

Licence2: Gntique - T15

Enzyme inactive

+ Enzyme active substrat

Enzyme inactive

Enzyme inactive

Gnotypes

Homozygote sauvage a+/a+ [normal]

Htrozygote a+/a[normal] si haplo-suffisance [dficient] si haplo-insuffisance [intermdiaire] si co-dominance

Homozygote mutant a-/a[dficient]

Phnotypes

Consquence fonctionnelle des mutations: 1


perte de fonction: mutation qui inactive lenzyme.

Licence2: Gntique - T16

Enzyme active

Enzyme active

Enzyme inactive

Enzyme active

Enzyme inactive

Enzyme inactive

+/+ [actif]

+/m [?]

m/m [inactif]

Consquence fonctionnelle des mutations: 2


gain de fonction: mutation donnant une enzyme plus active ou ayant une activit diffrente.

Licence2: Gntique - T17

Enzyme active

Enzyme active

Enzyme active

Enzyme active

Enzyme active

Enzyme active

+/+ [actif]

+/m [actif et ?]

m/m [actif et ?]

Consquence fonctionnelle des mutations: 3


conditionnelle: mutation dont les effets ne se voient que dans certaines conditions physiologiques.

Licence2: Gntique - T18

Enzyme active

Changement de conditions
Enzyme active Enzyme active Enzyme inactive

Enzyme active

Enzyme inactive

Enzyme inactive

Changement de conditions
Enzyme active

Changement de conditions
Enzyme active

+/+ [actif]

+/m [?] [actif]

m/m [inactif]

[actif]

Croisement de mutants: la complmentation


Enzyme 1 inactive Enzyme 2 active Enzyme 1 inactive

Licence2: Gntique - T19

Enzyme 2 active

croisement Haplode (n) mutant 1 rcessif: [inactif]

Enzyme 1 active

Enzyme 2 inactive

Enzyme 1 active

Enzyme 2 inactive

Haplode (n) mutant 2 rcessif: [inactif]

Diplode (2n) [actif] Il y a complmentation, les parents nont pas de gne mutant en commun

Croisement de mutants: la non-complmentation

Licence2: Gntique - T20

Enzyme inactive

Enzyme inactive

croisement Haplode (n) mutant 1 rcessif: [inactif]

Enzyme inactive

Enzyme inactive

Haplode (n) mutant 2 rcessif: [inactif]

Diplode (2n): [inactif] Il ny a pas complmentation, les parents ont au moins un gne mutant en commun

Un gne <-> une enzyme


Beadle & Tatum: Chez Neurospora, isolement de trois groupes de
mutants incapables de synthtiser larginine en conditions naturelles. MM + Ornithine MM + Citruline MM + Arginine

Licence2: Gntique - T21

Biosynthse de larginine

milieux

MM

gne a
Prcurseur Enzyme A

Sauvage prototrophe Mutants auxotrophes groupe 1 Mutants auxotrophes Groupe 2 Mutants Auxotrophes Groupes 3

gne b
Enzyme B

Ornithine

+ -

+ +

gne c
Enzyme C

Citruline

Arginine

Analyse Gntique Cours 3

Philippe ROUSSEAU, Matre de confrence Laboratoire de Microbiologie et de Gntique Molculaire Tel: 05 61 33 59 16 - Mail: rousseau@ibcg.biotoul.fr Site: www.iefg.biotoul.fr - liens eseignements

Premire partie: Gntique Fondamentale (cours 1 et 2)


Rappels Notion de gne, expression, mutation, rparation La fonction du gne Relation un gne/une fonction: Beadle et Tatum La fonction dominante ou rcessive La complmentation de deux gnes

Deuxime partie: Gntique Mendlienne (cours 3 6)


Sgrgation indpendante Liaison gntique Interaction gnique Un gne, deux gnes Un gne li son centromre, deux gnes Epistasie et synergie

Troisime partie: Gntique molculaire (procaryote, cours 7 9)


Transformation bactrienne Echanges gntiques Echanges gntiques Rgulation gntique Transformation, recombinaison, Transductions localises et gnralises Conjugaison: facteur F Oprons

Quatrime partie: Gntique des populations (cours 10)


Hardy-Weinberg

La reproduction sexue: brassage gntique

Licence2: Gntique

2n Sordaria macrospora

2n

Levure

Humain

fcondation

n n 2n

2n

mose

La miose: lieu du brassage gntique


La miose fcondation rplication mioseI miose II

Licence2: Gntique

2n

2n (x 2)

n (x 2)

Brassage interchromosomique
mioseI rplication fcondation

Licence2: Gntique

miose II

quiprobable

Pour 1 chromosome, il y a deux arrangements possibles la mtaphase de la miose I Tous les gamtes sont quiprobables

Brassage interchromosomique II
fcondation rplication mioseI miose II

Licence2: Gntique

quiprobable

Pour 2 chromosomes, il y a deux arrangements possibles la mtaphase de la mioses I, et 22 = 4 gamtes differents Tous les gamtes (parentaux P et recombins R) sont quiprobables

Brassage intrachromosomique

Licence2: Gntique

non quiprobable

crossing-over

Le crossing-over a lieu au niveau dun chiasma lors de lappariement des chromosomes homologues en mtaphase I Les gamtes (parentaux P et recombins R) ne sont pas quiprobables

Consquences du brassage gntique


n 2n n 1re loi de Mendel

Licence2: Gntique

ttrades
Arg+ Arg-

Sgrgation monognique: 1/2 Arg+ 1/2 Argchez les gamtes de l hybride

Arg+

Arg+

1/2

Arg-

Arg-

1/2

Les brassages inter et intra ny changent rien

Consquences du brassage gntique

Licence2: Gntique

Graine jaune

Graine verte

J/J

v/v

100%

F1

J/v

F2 = F1 x F1 75% 25% 3/4 1/4 J 1/2 V 1/2

J 1/2 J/J v/J

1/2

J/v v/v

Croisement test
J/J x v/v

Licence2: Gntique

F1: J/v F1 x F1 F2: J 1/2 v


1/2

Test cross F1 x v/v v


1/2

J 1/2 J/J v/J 1/4

J/v v/v

J 1/2 v
1

1/2

J/v

v/v

3/4

1/2

1/2

Lhrdit dignique

Licence2: Gntique

fcondation

Am Bm Bm
mioses

Am

Bm

Am

Ap Bp Am Bp Ap Bm
Gamtes descendants

P
parental

Ap Bp
Gamtes parentaux

Ap Bp

diplode

R
recombin

P = R indpendance gnique P > R liaison gnique

Haplode: 2 gnes indpendants / 2 caractres


Gal1 Gal1
diplode

Licence2: Gntique

1/4 1/4 1/4 1/4

Trp1 + Gal1, Trp1

P
parental

Trp1

R
recombin

Trp1+

Gal1-

Trp1+, Gal11/4 Trp1+, Gal1Trp1-, Gal1+ 1/4 Trp1-, Gal1+ quiprobable Trp1+, Gal1+ 1/4

Trp1-

Gal1+

Trp1+, Gal1+ Trp1-, Gal11/4 Trp1-, Gal1-

Haplode: Deux gnes pour un phnotype


[Arg-] [Arg-] [Arg+] [Arg-] [Arg-]

Licence2: Gntique

1/4 1/4 1/4 1/4

P
parental

diplode
[Arg+]

R
recombin

Arg1-

Arg2-

Arg1-, Arg21/4 Arg1-, Arg2Arg1+, Arg2+ 1/4 Arg1+, Arg2+ quiprobable Arg1-, Arg2+ 1/4

Arg1+

Arg2+

Arg1-, Arg2+ Arg1+, Arg21/4 Arg1+, Arg2-

Diplode: deux gnes indpendants

Licence2: Gntique

Graine jaune et lisse

Graine verte et ride

J, L J, L J, L v, r
parental J, L 1/4 J/J, L/L v/J, r/L J/J, r/L v/J, L/L v, r 1/4

v, r v, r

100%

F1

F2 = F1 x F1 9/16 3/16 3/16 1/16


J, L 1/4 v, r 1/4 J, r 1/4 v, L 1/4

recombin J, r 1/4 v, L 1/4 J/v, L/L v/v, r/L J/v, r/L v/v, L/L

J/v, L/r J/J, L/r v/v, r/r v/J, r/r

J/v, r/r J/J, r/r v/v, L/r v/J, L/r

Test-cross pour deux gnes indpendants

Licence2: Gntique

Graine Graine Jaune et lisse verte et ride

F1

Graine verte et ride

x
100% F1 Test-cross J, L v, r
parental

v, r v, r
recombin J, r 1/4 v/J, r/r v, L 1/4 v/v, r/L

F2 = F1 x F1
v, r 1

J, L 1/4 v/J, r/L

v, r 1/4 v/v, r/r

9/16 3/16

3/16 1/16

1/4 1/4

1/4 1/4

Analyse Gntique Cours 4

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Premire partie: Gntique Fondamentale


Rappels Notion de gne, expression, mutation, fparation, Frquence La fonction du gne Relation un gne, une fonction: Beadle et Tatum La fonction dominante ou rcessive La complmentation de deux gnes

Deuxime partie: Gntique Mendellienne


Sgrgation indpendante Liaison gntique Interaction gnique Un gne, deux gnes Un gne li son centromre, deux gnes Epistasie, synergie de phnotype

Troisime partie: Gntique molculaire (procaryote)


Transformation bactrienne Echanges gntiques Echanges gntiques Rgulation gntique Transformation, recombinaison, aquisition de resistances Transductions localises et gnralises Conjugaison: facteur F Oprons

Quatrime partie: Gntique des populations


Hardy-Weinberg

La prrduction: brassage interchromosomique

Licence2: Gntique

Haplode (n)

diplode (2n)

Haplode (n)

f f

c
Positionement alatoire des chromosomes la mtaphase I
2 asques possibles et quiprobables

La postrduction: brassage intrachromosomique


Haplode (n) diplode (2n)

Licence2: Gntique

Haplode (n)

f f

c
Crossing-over
4 asques possibles et quiprobables

Postrduction: la distance gne-centromre

Licence2: Gntique

1 2 3

La frquence dun crossing-over est proportionnelle la distance gntique qui spare les deux positions recombines. La frquence des asques post-rduits est proportionnelle la frquence des crossing-over entre un gne suivi et son centromre. La moiti des spores des asques post-rduits ont subit un crossing-over entre le gne suivi et son centromre. Donc:
dg-c = F (recomins) = comprise entre 0 et 33,3 cM F(recombins) = f (post-rduits) = ( post-rduit) / (pr-rduits + post-rduits)

Lhrdit multignique

Licence2: Gntique

fcondation

Am Bm
mioses

Am

Bm

Ap Bp
Gamtes parentaux

Am Bm Ap Bp
diplode

Ap Bp Am Bp Ap Bm
Gamtes descendants

P = R indpendance gnique P > R liaison gnique: dgenet = % R

Haplode: deux gnes lis


levures Gal2 Fcondation Trp1 Mioses
Diplode (+) Gal2 Gal2 Trp1 Trp1 Gal2 Gal2,Trp1 + Trp1

Licence2: Gntique

Gal2,Trp1 Gal2,Trp1 + +

DP
Gal2 et Trp1 sont chacun monognique DP > DR, le gne gal1 est li au gne trp1 d

DR

gal2-trp1

= (1/2 T + DR) / (T+DR+DP) x 100

Haplode: deux gnes lis

Licence2: Gntique

A chaque fois quon voit un DR, un DP et deux T arrivent par double crossing-over .

a A

B b

a A

B b

a A

B b

DP
a A B b a A B b

T
a A B b

DR

DP
Une formule plus raliste serait: d

a-b

= ( (T-2DR) + 4DR) / (DP+DR+T) x 100

Haplode: deux gnes lis

Licence2: Gntique

d (cM)
DP > DR 2 gnes lis: d = ( T + 3DR) / (T + DP + DR) x 100 0 < d < 50cM DP = DR 2 gnes indpendants: - 2 gnes sur deux chromosomes

a A

B b

a A

B b

- 2 gnes distants de plus de 50 cM

a A

B b

Diplode: deux gnes lis


B, V B, V
X

Licence2: Gntique

b, v b, v b, v b, v R = (1- P)
bV (1-P)/2 bV/bv 185 Bv (1-P)/2 Bv/bv 206

B, V b, v x F1 Test cross
bv1 BV P/2 BV/bv 965

P=P
bv P/2 bv/bv 944

965

944

206

185

d b-v = (1-P) x 100 = (f(b,V) + f(B,v) ) x 100 = ((206+185)/2300) x 100 = 17 cM

Distance gntique : rsum

Licence2: Gntique

Haplobiontiques spores non ordonnes ou ordonnes distance gne-gne :


d g-g = ( T + 3DR) / (T + DP + DR) x 100 < 50cM

Diplobiontiques distance gne-gne :

d g-g

= (1-P) x 100 < 50cM

Recombinaison intragnique: distance entre allles


n: [-]

Licence2: Gntique

Gamtes produits

a, [-] b, [-] ab, [-]

b
n: [-]

b
2n: [-] Pas de complmentation

++, [+]

P>>R

Analyse Gntique Cours 5

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Premire partie: Gntique Fondamentale


Rappels Notion de gne, expression, mutation, fparation, Frquence La fonction du gne Relation un gne, une fonction: Beadle et Tatum La fonction dominante ou rcessive La complmentation de deux gnes

Deuxime partie: Gntique Mendellienne


Sgrgation indpendante Liaison gntique Interaction gnique Liaison au sexe Un gne, deux gnes Un gne li son centromre, deux gnes Epistasie et synergie de phnotype

Troisime partie: Gntique molculaire (procaryote)


Transformation bactrienne Echanges gntiques Echanges gntiques Rgulation gntique Transformation, recombinaison, aquisition de resistances Transductions localises et gnralises Conjugaison: facteur F Oprons

Quatrime partie: Gntique des populations


Hardy-Weinberg

Variations sur le 9:3:3:1, interactions gnique

Licence2: Gntique

- 9 :7

Le phnotype apparat chez lhomozygote pour un des allles rcessifs.

- 9 :4 :3 - 9 :6 :1

Un allle du 1er gne cache les allles du 2me gne. Effet additif des allles rcessifs de 2 gnes contrlant 1 caractre.

- 15 :1

Le phnotype napparat que chez lhomozygote rcessif pour les deux gnes.

- 13 :3

Le phnotype rcessif du 1er gne est supprim par lallle rcessif du 2me gne.

Lhrdit lie au sexe

Licence2: Gntique

htrogamte

homogamte

Rgions homoloqgues entre X et Y Pseudo-autosomales

Autosomes

Chromosomes sexuels

Lhrdit lie au sexe

Licence2: Gntique

XR/XR x Xb/Y

F1

XR/Xb

XR/Y

50% 100%

50%

F2 = F1 x F1

XR 1/2 XR 1/2 XR/XR Xb


1/2

Y1/2 XR/Y Xb/Y

XR/Xb

Lhrdit lie au sexe

Licence2: Gntique

Xb/Xb x XR/Y

F1

Xb/XR

Xb/Y

50% 50%

50% 50%

F2 = F1 x F1

Xb

1/2

Y1/2 XR/Y Xb/Y

XR 1/2 Xb/XR Xb
1/2

Xb/Xb

Analyse Gntique Cours 6

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Premire partie: Gntique Fondamentale


Rappels Notion de gne, expression, mutation, fparation, Frquence La fonction du gne Relation un gne, une fonction: Beadle et Tatum La fonction dominante ou rcessive La complmentation de deux gnes

Deuxime partie: Gntique Mendellienne


Sgrgation indpendante Liaison gntique Interaction gnique Liaison au sexe Un gne, deux gnes Un gne li son centromre, deux gnes Epistasie et synergie de phnotype

Troisime partie: Gntique molculaire (procaryote)


Transformation bactrienne Echanges gntiques Echanges gntiques Rgulation gntique Transformation, recombinaison, aquisition de resistances Transductions localises et gnralises Conjugaison: facteur F Oprons

Quatrime partie: Gntique des populations


Hardy-Weinberg

Parasexualit chez les bactries: transfert de gnes


culture1
mutations = hasard brassage gntique

Licence2: Gntique

culture2

par transformation par transduction par conjugaison

batries comptentes Batriophages plasmides conjugatifs

Transfert de gnes : la transformation


Bactrie donneuse StrR

Licence2: Gntique

lyse lysat

Entre de lADN transformant qui peut porter le(s) gne(s) responsable(s) du phnotype StrR

Intgration de lADN transformant par recombinaison (rec)

rec

Bactrie rceptrice StrS

Bactrie transforme StrR Si une bactrie est transforme par deux gnes, il y a cotransformation On en dduit que ces deux gnes sont proches

Transfert de gnes : la transduction


La bactrie donneuse (StrR) est infecte par un bactriophage transducteur (ex: P1 infectant E. coli) Le lysat transducteur contient des bactriophages non virulents ayant encapsid de lADN de la bactrie donneuse

Licence2: Gntique

lyse

lysat

Infection de la bactrie rceptrice (StrS) par un des bactriophages non virulents. LADN inject peut porter le(s) gne(s) responsable(s) de StrR

Bactrie rceptrice StrS

Intgration par recombinaison (rec)

Bactrie transforme StrR

Si deux gnes sont transduits ensemble, il y a cotransduction On en dduit que ces deux gnes sont proches (d < 90 kpb dans le cas E.coli/P1)

Transfert de gnes : la conjugaison F


F

Licence2: Gntique

Une bactrie qui contient le plasmide F (facteur F) est dite F+ alors qune bactrie F- na pas le facteur F

les bactries F+ et F- sassocient (pilli)

Il y a mise en place dun systme de scrtion dADN (TypeIV) entre les bactries F+ et FLADN de F est alors rpliqu et inject dans la bactrie FCette rplication est initie OriT est se fait par cercle roulant Lentre dADN dans la bactrie F- est oriente (OriT puis a puis b) Une fois que tout LADN de F est entr, il est circularis La bactrie F- est devenue F+

Transfert de gnes : Les tats de F

Licence2: Gntique

F
rec

Bactrie FLintgration ou lxcision du F se fait par recombinaison entre des squences prsentes la fois sur le chromosome bactrien et sur le plasmide F (ex: transposon)

Bactrie F+ Intgration de F

rec

Bactrie F

Excision de F

Bactrie HFR

Transfert de gnes : la conjugaison HFR

Licence2: Licence2: Gntique Gntique

Une bactrie qui contient F intgr dans son gnome est dites HFR (High Frequency of Recombination)

les bactries HFR et F- sassocient (pilli)

Il y a mise en place du systme de scrtion, rpliquation et injection de lADN de F dans la bactrie FIci, ce transfert dADN initie OriT fait aussi entrer lADN chromosomique flanquant le F Le transfert est orient : OriT puis a puis lADN chromosomique (gne(s)) proche de a Les ADNs homologues sapparient et recombinent LADN de F ne peut entrer entirement La bactrie F- reste donc F-, mais acquiert de lADN chromosomique (gne(s)) de lHFR

Transfert de gnes : la conjugaison F


F

Licence2: Gntique

Une bactrie qui contient le plasmide F est equivalente une bactrie F+ (synthse de pilli et du systme de scrtion dADN). les bactries HFR et F- sassocient (pilli)

LADN de F est rpliqu et inject dans la bactrie FCette rplication est initie OriT et fait entr lADN de F ainsi que lADN chromosomique contenu dans le F Une fois que tout LADN de F est entr et rpliqu dans la bactrie F-, il est circularis La bactrie F- est devenue F+ Cette bactrie est dipode pour chromosomique contenu dans le F On parle de diplodie partielle stable Les ADNs homologues peuvent recombiner lADN

Analyse Gntique Cours 7

Philippe ROUSSEAU, Matre de confrence Laboratoire de Microbiologie et de Gntique Molculaire Tel: 05 61 33 59 16 - Mail: rousseau@ibcg.biotoul.fr Site: www.iefg.biotoul.fr - liens eseignements

Premire partie: Gntique Fondamentale


Rappels Notion de gne, expression, mutation, fparation, Frquence La fonction du gne Relation un gne, une fonction: Beadle et Tatum La fonction dominante ou rcessive La complmentation de deux gnes

Deuxime partie: Gntique Mendellienne


Sgrgation indpendante Liaison gntique Interaction gnique Liaison au sexe Un gne, deux gnes Un gne li son centromre, deux gnes Epistasie et synergie de phnotype

Troisime partie: Gntique molculaire (procaryote)


Transformation bactrienne Echanges gntiques Echanges gntiques Rgulation gntique Transformation, recombinaison, aquisition de resistances Transductions localises et gnralises Conjugaison: facteur F Oprons

Quatrime partie: Gntique des populations


Hardy-Weinberg

Analyse gntique de la dgradation du lactose chez E.coli Jacob & monod: Prix Nobel 1963

Licence2: Gntique

Isolement de trois gnes impliqus dans la dgradation du lactose chez E.coli Isolement de mutants [lac-] Tous sont localiss dans la mme rgion (co-transduction) Tous se rassemblent en trois groupes de complmentations (utilisation des F) lacZ: gne codant la bta-galactosidase lacY: gne codant la permase lacA: gne codant la trans-actylase lacZlacYlacA[lac-] [lac-] [lac-]

La mutation du gne lacI modifie lexpression de de lacZ, Y et A Dosage de lactivit du gne lacZ: souche lacI + Milieu avec lactose 100 UM 100 UM Milieu sans lactose 100 UM 0 UM
UM = Unit Miller Activit bta-galactosidase

Modle de la rgulation gntique de lopron lactose


Promoteur (P) Oprateur (O)

Licence2: Gntique

Sans lactose

lacI

ARNP

lacZ

lacY

lacA

Rpresseur actif

Avec lactose

Rpresseur inactif

lacI

lacZ

lacY

lacA

ARNP

Les phnotypes des mutants de lopron lactose vrifient le modle


Chez un diplode pour lopron lactose (ex: F lactose)
Promoteur (P) Oprateur (O)

Licence2: Gntique

Promoteur et Oprateur actifs en CIS lacY lacA


F lactose

lacI

lacZ

Represseur actif en CIS et en TRANS

lacI
Promoteur (P)

lacZ
Oprateur (O)

lacY

lacA
chromosome

Promoteur et Oprateur actifs en CIS

Analyse Gntique Cours 8

Philippe ROUSSEAU, Matre de confrence Laboratoire de Microbiologie et de Gntique Molculaire Tel: 05 61 33 59 16 - Mail: rousseau@ibcg.biotoul.fr Site: www.iefg.biotoul.fr - liens eseignements

Premire partie: Gntique Fondamentale


Rappels Notion de gne, expression, mutation, fparation, Frquence La fonction du gne Relation un gne, une fonction: Beadle et Tatum La fonction dominante ou rcessive La complmentation de deux gnes

Deuxime partie: Gntique Mendellienne


Sgrgation indpendante Liaison gntique Interaction gnique Liaison au sexe Un gne, deux gnes Un gne li son centromre, deux gnes Epistasie et synergie de phnotype

Troisime partie: Gntique molculaire (procaryote)


Transformation bactrienne Echanges gntiques Echanges gntiques Rgulation gntique Transformation, recombinaison, aquisition de resistances Transductions localises et gnralises Conjugaison: facteur F Oprons

Quatrime partie: Gntique des populations


Hardy-Weinberg

Gntique des Populations


Pour le gnticien une population est une communaut de reproduction.

Licence2: Gntique

La gntique des populations essaie de dfinir les frquences dallles dans une population. Cas simple du groupe sanguin humain MN
Dans une population de 208 bdouins, On a: [M] = M/M = 119 [M,N] = M/N = 76 [N] = N/N = 13

Cette population est idale:

- Tous les gnotypes se voient (pas de rcessivit). - Les individus se croisent librement (panmixie). - Aucune slection. Et on peut crire: F M = p = ((2 x 119) + 76) / (2 x 208) = 0,755 F N = q = (1-p) = 0,245 M/M = p2 = 0,57 (118,6) M/N = 2pq = 0,37 (76,9) N/N = q2 = 0,06 (12,5)

Alors les croisements donnent:

M(p) M(p) N(q) M/M(p2) M/N(pq)

N(q) M/N(pq) N/N(q2)

Loi de Hardy-Weinberg

Licence2: Gntique

Dans une population isole deffectif illimit, non soumise la slection et dans laquelle il ny a pas de mutation, les frquences allliques restent constantes. Si les accouplements sont panmictiques, les frquences gnotypiques se dduisent directement des frquences allliques selon la relation:

FM = p M/M = p2

et

FN = q N/N = q2

M/N = 2pq

On observe: Blancs USA P2 0,540 Noirs USA 0,532 Indiens USA 0,776 Esquimaux Groenland O,913 Aborignes Australie 0,178

Loi de Hardy-Weinberg si rcessivit

Licence2: Gntique

La mucoviscidose est une maladie rcessive monognique qui touche 1 enfant sur 2500 en France. Selon la loi de Hardy-Weinberg, on a:

a/a = q2 = 1/2500 = 0,0004 Donc q = 0,02 Donc p = 0,98 Et on a: A/A = p2 = 0,964 A/a = 2pq = O,O392 ~ 1/25

Loi de Hardy-Weinberg si rcessivit et liaison au sexe

Licence2: Gntique

L hmophilie est une maladie rcessive monognique lie au chromosome X qui touche 1 garon sur 10000 en France. Selon la loi de Hardy-Weinberg: On a chez les garons (XY): soit Xa/Y , soit XA/Y donc Fa = q = 10-4 et FA = p = (1-q) = 0,9999 Donc chez les filles (XX), on a: a/a = q2 = (10-4 )2 = 10-8 A/A = p2 = 0,9998 a/A = 2pq = 1,9998 10-4 ~ 1/ 5000

Loi de Hardy-Weinberg si multialllisme

Licence2: Gntique

Cas du groupe sanguin humain ABO: On a : [A] = A/A ou A/o; [B] = B/B ou B/o; [AB] = A/B; [O] = o/o Si on pose FA = p; FB = q ; Fo = r Avec p + q + r = 1 Selon la loi de Hardy-Weinberg: [A] = p2 + 2pr [B] = q2 + 2qr [AB] = 2pq [0] = r2

Limite de Loi de Hardy-Weinberg

Licence2: Gntique

La loi de Hardy-Weinberg nest applicable qu une population panmictique.

Cas de la consanguinit (rgime ferm): On observe ce phnomne chez les albinos o 15% (1/6) des individus atteints (a/a) proviennent de mariages entre cousins. Si la consanguinit navait aucun effet, on aurait seulement 0,5% (1/200) dindividus atteints qui viendraient de ce type dunions. En fait, la consanguinit induit: A/a < 2pq Il faut faire intervenir un coefficient de Consanguinit dans la loi de Hardyweinberg. Ne sont pas panmictiques, les: - Rgimes ferms = Autogamie, consanguinit, homogamie ( A/a < 2pq ) - Rgimes ouverts = htrogamie ( A/a > 2pq )

supplments

Rgulation gntique: cis & trans


Chez un diplode pour lopron lactose (ex: F lactose)

Licence2: Gntique

Promoteur (P)

Oprateur (O)

Promoteur et Oprateur actifs en CIS lacY lacA


F lactose

lacI

lacZ

Represseur actif en CIS et en TRANS

lacI
Promoteur (P)

lacZ
Oprateur (O)

lacY

lacA
chromosome

Promoteur et Oprateur actifs en CIS

Rpression catabolique de loperon lactose: Diauxie lactose-glucose


Promoteur (P) +1 Oprateur (O)

Licence2: Gntique

lacI
En prsence de lactose

CRP-AMPc ARNP transcription

lacZ

exclusion dinducteur

Represseur inactif
ARNP

CRP-AMPc

- glucose + lactose

En prsence de lactose
+1

CRP

+ glucose

lacI

lacZ

loperon lactose
Promoteur

Licence2: Gntique

stop

lacZ

lacY

lacA

ARN polymrase ARNP ribosome

Bta-galactosidase

permase

transactylase