N d'ordre : 1859

THSE

PRSENTE

L'UNIVERSIT BORDEAUX I

COLE DOCTORALE DES SCIENCES-PHYSIQUES ET DE L'INGNIEUR

Par M. Bruno QUESSON

POUR OBTENIR LE GRADE DE

DOCTEUR

SPCIALIT : Instrumentation et Mesures


-----------
DVELOPPEMENTS MTHODOLOGIQUES
ET INSTRUMENTAUX APPLIQUS LA SPECTROSCOPIE
ET L'IMAGERIE PAR RSONANCE MAGNTIQUE NUCLAIRE
-----------


Soutenue le 20 janvier 1998

Aprs avis de MM. Serge AKOKA Rapporteurs
Luc DARRASSE

Devant la commission d'examen forme de :

MM. Jacques ROUCH, Professeur, Universit de Bordeaux I Prsident
Eric THIAUDIRE, Matre de Confrences, Universit V. Segalen Bordeaux Rapporteur
Serge AKOKA, Professeur, Universit de Nantes
Paul CANIONI, Professeur, Universit V. Segalen Bordeaux 2
Luc DARRASSE, Directeur de Recherche CNRS, Universit de Paris-sud
Jean-Marie TURLET, Professeur, Universit de Bordeaux I

-1998-

REMERCIEMENTS REMERCIEMENTS REMERCIEMENTS REMERCIEMENTS


Lensembledes travaux prsents dans cemmoireont traliss au sein delUnitde
RsonanceMagntiquedes Systmes Biologiques, Bordeaux. J etiens en premier lieu remercier le
Pr Paul Canioni pour mavoir accueilli au sein decelaboratoireen 1994 et pour mavoir guidet
soutenu dans mon travail pendant ces trois dernires annes. Quil soit galement remercipour la
confiancequil ma accorde.

J evoudrais exprimer toutema reconnaissanceau Pr J acques Rouch qui ma fait lhonneur de
prsider lejury decettethseainsi quau Pr J ean-MarieTurlet pour lesoutien quil ma apport
pendant ces annes. J eremerciegalement lePr SergeAkoka et leDr Luc Darrassepour les critiques
constructives quils ont apportes mon travail. J ai notamment apprcileur franchiseet la qualit
deleur jugement.

J etiens exprimer toutema reconnaissance mon matre, Eric Thiaudire, sans qui ce
travail neserait pas cequil est. Il a toujours tdisponiblepour maider ou meconseiller, et a
manifestun profond intrt mon gard. Son enthousiasmeet la rigueur deson esprit critiquene
peuvent trequun exemplepour moi. Quil soit assurdetoutemon estimeet demon amitisincre.

J adressegalement mes plus vifs remerciements ChristopheDelalandeet Marc Biran pour
mavoir enseignles rudiments dela RMN mon arriveau sein delquipe.

J aimerais aussi remercier tous les membres du laboratoire, anciens ou nouveaux, qui ont
manifestdeprs ou deloin un intrt mon travail ou moi-mme. Quils sachent quils ont
toujours tdun grand soutien et mont permis daccomplir cettethsedans la joieet la bonne
humeur.

Mes dernires penses vont naturellement ma familleet mes amis, qui ont su mencourager
tout au long deces annes. Quils trouvent dans cettethsela marquedema reconnaissanceet de
mon affection. Enfin, un dernier mot en lhonneur decellequi partagema vie, Valrie, et qui ma
toujours apportlerconfort ncessairedans les moments difficiles. Quelleen soit remercie jamais.


Table des Matires

AVANT PROPOS..................................................................................................................... 3
DEVELOPPEMENTS EN INSTRUMENTATION - METHODES ................................... 7
1 Instrumentation........................................................................................................ 8
1.1 Introduction............................................................................................................................ 8
1.2 Aimant et fourreaux de gradients ........................................................................................... 9
1.3 Construction dun ergomtre pour ltude de lnergtique musculaire................................. 9
1.4 Mise au point dun dispositif danesthsie pour les petits animaux...................................... 15
1.5 Antennes radiofrquences (RF)............................................................................................ 17
2 Mthodologie RMN............................................................................................... 40
2.1 Obtention d'une image.......................................................................................................... 40
2.2 Mesure des temps de relaxation ........................................................................................... 47
2.3 Description physique du transfert d'aimantation .................................................................. 50
2.4 Spectroscopie musculaire..................................................................................................... 56
2.5 Edition htronuclaire ........................................................................................................ 65
IMAGERIE PAR TRANSFERT DAIMANTATION SUR LE CERVEAU DE RAT I N
VI VO......................................................................................................................................... 89
1 Introduction............................................................................................................ 90
2 Images du cerveau de rat........................................................................................ 94
3 Mesure des temps de relaxation............................................................................. 95
3.1 Mesure du T
2
....................................................................................................................... 95
3.2 Mesure du T
1
et du T
1
SAT
................................................................................................... 96
4 Mesures du taux de transfert ltat stationnaire .................................................. 99
4.1 Cerveau de rat sain............................................................................................................... 99
4.2 Modle du gliome implant................................................................................................ 106
5 Evaluation de la puissance dpose - calcul du SAR.......................................... 114
6 Discussion............................................................................................................ 116
7 Evolution du taux de transfert hors de ltat stationnaire.................................... 121
7.1 Protocole exprimental....................................................................................................... 122
7.2 Validit des approximations. .............................................................................................. 122


7.3 Evolution du rapport signal sur bruit en fonction de D, , et
1
........................................ 126
7.4 Contrastes........................................................................................................................... 128
8 Discussion............................................................................................................ 130
SPECTROSCOPIE DE LEXERCICE MUSCULAIRE ................................................. 134
1 Introduction.......................................................................................................... 135
2 Application ltude du mtabolisme nergtique.............................................. 138
2.1 Rsultats prliminaires -Tests de reproductibilit .............................................................. 138
2.2 Application la radaptation fonctionnelle........................................................................ 146
2.3 Conclusion ......................................................................................................................... 150
3 Application ltude du mtabolisme du glycogne........................................... 151
3.1 Introduction........................................................................................................................ 151
3.2 Rsultats............................................................................................................................. 152
3.3 Conclusion ......................................................................................................................... 155
EDITION HETERONUCLEAIRE..................................................................................... 157
1 Introduction.......................................................................................................... 158
2 Etude sur un chantillon ...................................................................................... 160
3 Discussion............................................................................................................ 168
CONCLUSION ET PERSPECTIVES ............................................................................... 171

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES........................................................................... 175

1
Liste des Figures

FIGURE 1.1 ........................................................ 12
FIGURE 1.2 ........................................................ 16
FIGURE 1.3 ........................................................ 20
FIGURE 1.4 ........................................................ 26
FIGURE 1.5 ........................................................ 28
FIGURE 1.6 ........................................................ 30
FIGURE 1.7 ........................................................ 31
FIGURE 1.8 ........................................................ 33
FIGURE 1.9 ........................................................ 34
FIGURE 1.10 ...................................................... 36
FIGURE 1.11 ...................................................... 38
FIGURE 1.12 ...................................................... 41
FIGURE 1.13 ...................................................... 43
FIGURE 1.14 ...................................................... 45
FIGURE 1.15 ...................................................... 57
FIGURE 1.16 ...................................................... 58
FIGURE 1.17 ...................................................... 62
FIGURE 1.18 ...................................................... 63
FIGURE 1.19 ...................................................... 67
FIGURE 1.20 ...................................................... 69
FIGURE 1.21 ...................................................... 74
FIGURE 1.22 ...................................................... 77
FIGURE 1.23 ...................................................... 79
FIGURE 1.24 ...................................................... 81
FIGURE 1.25 ...................................................... 82
FIGURE 1.26 ...................................................... 84
FIGURE 1.27 ...................................................... 87
FIGURE 2.1 ........................................................ 95
FIGURE 2.2........................................................ 96
FIGURE 2.3........................................................ 97
FIGURE 2.4........................................................ 98
FIGURE 2.5...................................................... 101
FIGURE 2.6...................................................... 104
FIGURE 2.7...................................................... 105
FIGURE 2.8...................................................... 108
FIGURE 2.9...................................................... 109
FIGURE 2.10.................................................... 111
FIGURE 2.11.................................................... 112
FIGURE 2.12.................................................... 114
FIGURE 2.13.................................................... 124
FIGURE 2.14.................................................... 125
FIGURE 2.15.................................................... 127
FIGURE 2.16.................................................... 129
FIGURE 3.1...................................................... 139
FIGURE 3.2...................................................... 141
FIGURE 3.3...................................................... 142
FIGURE 3.4...................................................... 144
FIGURE 3.5...................................................... 148
FIGURE 3.6...................................................... 149
FIGURE 3.7...................................................... 150
FIGURE 3.8...................................................... 153
FIGURE 3.9...................................................... 154
FIGURE 4.1...................................................... 164
FIGURE 4.2...................................................... 166
FIGURE 4.3...................................................... 167


2
Liste des Tableaux

TABLEAU 1.1..................................................... 17
TABLEAU 1.2..................................................... 83
TABLEAU 2.1..................................................... 99
TABLEAU 2.2................................................... 102
TABLEAU 2.3................................................... 110
TABLEAU 2.4................................................... 113
TABLEAU 2.5................................................... 126
TABLEAU 2.6................................................... 131
TABLEAU 3.1................................................... 146
TABLEAU 4.1................................................... 161

3
Avant propos

Depuis la dcouverte en 1946 du phnomne de Rsonance Magntique Nuclaire (RMN)
par F. Bloch et E. M. Purcell (Prix Nobel de Physique en 1952), cette technique s'est impose
dans des domaines de recherche et d'analyse trs varis, qui englobent la physique, la chimie, la
biochimie, la mdecine, la gologie, la minralogie, etc Les premiers spectres des solides puis
des composs en solution ont t raliss sur des aimants rsistifs en effectuant un balayage en
champ. La dcouverte de la supraconductivit a permis de remplacer ces aimants faible champ
par des aimants haut champ (plusieurs tesla) qui permettent d'amliorer la sensibilit de la
technique (Nelson, 1964). A l'heure actuelle, la structure des spectromtres est relativement
"fige" et les seules amliorations notables concernent la course au champ (la valeur limite
actuelle se situant autour de 20 T) et le dveloppement de l'informatique.
Paralllement, la mise au point de la RMN impulsionnelle (Ernst, 1966a) ainsi que
l'utilisation de la transforme de Fourier (Ernst, 1966b) ont favoris la mesure des temps de
relaxation et permis l'obtention de spectres de bonne qualit en rduisant considrablement le
temps d'acquisition. Avec le dveloppement de techniques multidimensionnelles (Aue, 1976a;
Aue, 1976b; Wthrich, 1982), la dtermination de la structure des protines est devenue
ralisable par cette mthode non destructrice qui concurrence l'heure actuelle les techniques
d'analyses par diffraction des rayons X. Depuis quelques dcennies, les spectroscopies RMN du
proton, du phosphore-31 et du carbone-13 sont devenues des outils d'investigation non-invasifs
pour obtenir des informations sur le mtabolisme des organismes vivants (de Certaines, 1992;
Gadian, 1995; Gillies, 1994).
Bien aprs la dcouverte du phnomne RMN et le dveloppement de ses applications
spectroscopiques, les mthodes d'imagerie par transformation de Fourier ont t dcrites au dbut
des annes 1970 (Damadian, 1971; Lauterbur, 1973; Mansfield, 1973). Le principe repose sur la
diffrentiation des frquences de rsonances des spins nuclaires des protons de l'eau en faisant
varier spatialement la valeur de l'induction statique l'aide de bobines de gradients. Les progrs

4
raliss dans la construction de ces gradients de champ magntique ainsi que dans le filtrage et le
traitement numrique des signaux a permis le dveloppement de ces techniques d'imagerie pour le
milieu mdical au dbut des annes 80. En outre, la mise au point d'un trs grand nombre de
techniques d'imagerie rapide (Hennig, 1986; Liu, 1993; Mansfield, 1977) a rduit
considrablement le temps d'acquisition (jusqu' quelques millisecondes par image). Ceci
explique pourquoi la plupart des hpitaux sont l'heure actuelle quips d'aimants pour le
diagnostic mdical. A titre d'exemple, la rgion Aquitaine qui reprsente 3 millions d'habitants
possde 7 appareils d'IRM.
Un des thmes principaux dvelopps au sein de L'unit de Rsonance Magntique des
Systmes Biologiques (RMSB) que j'ai intgre en 1994 est l'tude du mtabolisme in vivo par
Rsonance Magntique Nuclaire. Pour dvelopper de nouvelles techniques d'investigation en
imagerie et en spectroscopie sur l'animal et l'Homme, le laboratoire s'est quip en 1994 d'un
aimant exprimental Bruker dont l'induction vaut 4.7 T et qui offre un diamtre d'accs de 50 cm.
Cependant, peu de dtecteurs adapts aux tudes envisages ont t fournis par le
constructeur. Un effort particulier a donc t fait pour construire des rsonateurs permettant de
mener bien les tudes inities par les biochimistes, les biologistes et les mdecins qui font partie
ou collaborent avec notre laboratoire. Celles-ci portent notamment sur les diffrentes voies
mtaboliques intervenant au cours d'un exercice musculaire. En effet, celui-ci induit des
variations des concentrations de certains mtabolites qui sont observes par la spectroscopie
RMN du Carbone-13 et/ou du Phosphore-31. Pour raliser cet exercice, un appareillage
(ergomtre) spcifique notre aimant a t dvelopp en partenariat avec une entreprise,
paralllement la mise au point de squences d'impulsions adaptes.
En outre, nous nous sommes largement intresss l'imagerie par transfert d'aimantation
(TA), puisque cette technique est trs utilise pour le diagnostic en milieu hospitalier, notamment
pour les maladies associes une dmylinisation (sclrose en plaques, ). Cependant, les
contrastes que l'imagerie par TA permet d'obtenir peuvent varier considrablement en fonction
des paramtres d'acquisition et il apparat de plus en plus ncessaire d'uniformiser les protocoles

5
exprimentaux. Nous avons donc essay de dvelopper une mthode permettant de prvoir
l'volution des signaux observs sur le cerveau de rat in vivo 4.7 T, quelles que soient les
conditions exprimentales utilises.
Les mcanismes intervenant dans le mtabolisme intermdiaire sont l'heure actuelle
gnralement tudis ex vivo sur des extraits obtenus aprs perfusion d'un animal avec un substrat
enrichi spcifiquement en Carbone-13, comme le Glucose par exemple (Kanamatsu, 1994;
Knnecke, 1993). Pour complter les connaissances biochimiques obtenues par cette mthode
invasive, il est ncessaire d'tudier "en direct" ces phnomnes de marquage isotopique sur un
organe dfini, dans un animal vivant. Cependant, la ralisation exprimentale de ce type
d'investigation en spectroscopie du
13
C est difficile puisque la sensibilit inhrente cette
technique est relativement faible. Une alternative consiste utiliser la sensibilit optimale du
proton, en mettant profit certaines interactions qui existent entre les spins nuclaires du proton
et du Carbone-13. Dans cet objectif, nous avons dvelopp une squence permettant d'obtenir un
spectre proton localis ne prsentant que des rsonances refltant la prsence de mtabolites
enrichis en
13
C. Elle devrait permettre d'tudier les diffrentes voies mtaboliques en observant
les produits issus de la dgradation de divers composs enrichis en
13
C injects par voie veineuse.

6


7

Chapitre 1

Dveloppements en instrumentation - Mthodes



8
1 Instrumentation
1.1 Introduction
Raliser des expriences de Rsonance Magntique Nuclaire ncessite une instrumentation
spcifique, mais les besoins d'un laboratoire qui utilise cette technique sont trs variables en
fonction de la nature des tudes envisages. On peut en effet considrer qu'un laboratoire qui
effectue des mesures sur des objets inertes (chimie, minralogie) possde ds l'achat de l'aimant
un outil fonctionnel adapt, puisque les aimants haut champ, qui sont notamment utiliss pour
dterminer la structure des protines, ne ncessitent qu'un nombre rduit de rsonateurs (3 ou 4
gnralement) fournis par le constructeur et des squences d'acquisition relativement bien
standardises fonctionnant en routine.
A l'inverse, un laboratoire dont les axes de recherche sont orients vers l'tude des
organismes vivants doit dvelopper une instrumentation spcifique. En effet, tant donne la
grande varit des investigations effectues sur des modles animaux ou l'Homme, il est
impossible que le constructeur puisse fournir tout l'appareillage ncessaire. Les dveloppements
instrumentaux effectus peuvent tre de nature trs varie et loigns de l'instrumentation propre
la RMN. Il s'agit par exemple de mettre au point un circuit de perfusion pour conserver un
organe prlev dans des conditions physiologiques proches de celles de l'organisme dont il
provient, ou de construire un systme d'anesthsie permettant de maintenir un animal au repos
pendant plusieurs heures, etc En outre, l'instrumentation spcifique la RMN qu'il faut
construire concerne gnralement les systmes d'mission/rception qui doivent tre adapts la
taille de l'organe et au(x) noyau(x) tudi(s). Par consquent, la mise en place de chaque nouveau
projet implique la plupart du temps une phase de dveloppement et de rglages, plus ou moins
longue et fastidieuse.
Nous nous proposons dans ce premier chapitre de prsenter les principaux dveloppements
instrumentaux qui ont t effectus pour raliser les tudes dcrites dans les chapitres suivants.

9
En effet, un ergomtre a t construit et mis au point pour permettre ltude de lnergtique
musculaire (cf. Chapitre 3, p. 134) sur lhomme et de nombreuses antennes radiofrquences ont
t dveloppes pour la spectroscopie et limagerie. Leurs caractristiques techniques sont
prsentes de faon dtaille. En outre, la construction dun dispositif danesthsie a t
ncessaire pour faciliter les tudes en imagerie par transfert daimantation sur le cerveau de rat.

1.2 Aimant et fourreaux de gradients
Toutes les tudes prsentes dans ce qui suit ont t ralises sur un spectromtre/imageur
exprimental Bruker 47/50. Il sagit dun aimant supraconducteur (plac lintrieur dune cage
de Faraday en cuivre) dont linduction statique vaut 4.7 T, interfac avec une lectronique Bruker
ABX11. Son diamtre daccs est de 50 cm, ce qui autorise des investigations sur lHomme ainsi
que sur lanimal (souris, rat, lapin, chien,...). Il est quip dun bobinage de gradients sur les 3
axes dont la valeur maximale est de 24 mT/m. Le temps ncessaire pour atteindre cette valeur est
denviron 800 s. De plus, une autre bobine de gradients Bruker (BGA12) peut tre insre
lintrieur du fourreau principal. Cette bobine offre un diamtre daccs plus rduit (12 cm) mais
peut gnrer des gradients beaucoup plus intenses (200 mT/m) avec un temps de monte plus
court (~ 200 s). Ce fourreau de gradients est donc adapt ltude de petits animaux (rats) et
permet dutiliser des squences dimagerie rapide et/ou damliorer la rsolution spatiale des
images obtenues.

1.3 Construction dun ergomtre pour ltude de lnergtique musculaire
1.3.1 Objectif
Certains aspects du mtabolisme nergtique humain peuvent tre tudis par la
spectroscopie RMN du Phosphore-31, en modifiant ltat physiologique du muscle. Pour obtenir
des informations en temps rel sur lvolution des concentrations des diffrents mtabolites

10
phosphors, des spectres de RMN sont enregistrs avant, pendant et aprs un effort musculaire.
Cependant, les caractristiques de l'preuve d'effort doivent tre connues avec prcision afin
d'assurer la reproductibilit dun individu lautre. Dans cet objectif, un ergomtre a t mis au
point en collaboration avec la socit SEDIS
1
, dans le cadre d'un programme soutenu par le Ple
GBM (Rgion Aquitaine). Plusieurs contraintes ont t respectes pour que lappareil ralis soit
utilisable dans laimant 4.7 T dont dispose le laboratoire. En effet, tous les matriaux qui le
constituent sont amagntiques et ses dimensions sont adaptes au diamtre daccs du fourreau de
gradients principal. De plus, son fonctionnement est totalement automatis.

1.3.2 Caractristiques techniques - principe de fonctionnement
Caractristiques techniques
L'exercice qui a t choisi consiste a effectuer des flexions plantaires en basculant une
pdale mobile relie un vrin pneumatique soumis de lair sous pression. Un automate
(SIEMENS 95U, cf. Figure 1.1) situ hors de la cage de Faraday permet dajuster cette pression et
donc de moduler volont la force effectuer. Cet automate possde un afficheur et un pav
numriques facilitant sa programmation. Il pilote la totalit de la cintique de leffort. Il est en
effet possible deffectuer huit paliers successifs, lintrieur desquels les paramtres suivants
sont rglables:
-Le nombre de basculements (N), qui est limit 99.
-La force (F) exercer sur la pdale, qui peut varier de 10 N 1000 N.
-Le temps de rptition entre chaque mouvement de pdale (T
REP
), qui est compris entre 1 s
et 99 s.

1
Socite SEDIS:Europarc- 7, av. L. de Vinci
33660 - Pessac

11
Un schma dtaill de cet appareil est prsent sur la Figure 1.1Figure 1.1.


12

CALE DE GENOUX
ALIMENTATION D'AIR
MATELAS
OREILLER
SANGLES DE LA PEDALE
CORDON DU POTENTIOMETRE
SANGLE DE GENOUX COURROIE
CRANTEE
VERIN POTENTIOMETRE LIT
A
B
ARRET D' URGENCE
MARCHE/ARRET
REGULATEUR
DE PRESSION
PANNEAU DE
COMMANDE
FILTRE A AIR
HAUT PARLEUR
RESERVOIR
D' AIR
ELECTROVANNE
MANOMETRE
PURGE DU
RESERVOIR
ERGOMETRE
COMPRESSEUR DU
LABORATOIRE
C
PEDALE
2.50 m
0
.
3
5

m
1.20 m

Figure 1.1
Schma de principe de lergomtre dvelopp pour ltude de l'nergtique musculaire.
A. vue de profil.
B. vue de dessus.
C. Schma de lautomate Siemens 95U pilotant lergomtre.



13
Principe de fonctionnement.
Mesure du nombre de basculements.
Le vrin pneumatique est reli la pdale par une courroie crante. Lorsque la pdale est
bascule, la courroie actionne une poulie relie un potentiomtre variable. Celui-ci est connect
un circuit diviseur de tension sur lequel est envoye une tension dentre continue (Ve)
damplitude fixe. Le mouvement de basculement de la pdale correspond une variation de la
rsistance du potentiomtre qui modifie la valeur de la tension de sortie (Vs) du potentiomtre.
Celle-ci est mesure et envoye comme signal dentre lautomate. Le nombre de basculements
effectus est ainsi incrment jusqu N. Lorsque la pdale est en position haute, la tension Vs
doit tre proche de zro. Si ce nest pas le cas, un ajustement manuel du potentiomtre est opr
avant lexprience.

Cadence de leffort.
Une impulsion sonore est envoye chaque T
REP
sur un haut-parleur situ dans la cage de
Faraday pour indiquer au patient la cadence de leffort. De plus, la tension Vs mesure en sortie
du potentiomtre est convertie en signal sonore par lautomate. La frquence de ce signal
(100 5000 Hz) est fonction de lamplitude de Vs. Il est envoy sur ce mme haut parleur afin
que le patient et l'exprimentateur aient une ide de lamplitude du mouvement qui vient dtre
effectu.

Rglage de la force exercer.
Pour ajuster la force exercer pour actionner le vrin pneumatique reli la pdale, il est
ncessaire de connatre la pression de lair qui lui est appliqu. Lautomate qui gre ce paramtre
ne possde pas de compresseur interne mais utilise lair sous pression (~ 7 bar) dlivr par le
compresseur gnral du laboratoire. Cet air comprim est inject dans une cuve qui possde un
systme rgulateur de pression (une lectrovanne situe lentre de la cuve). Celui-ci ajuste la

14
pression de lair lintrieur de la cuve en fonction de lintensit de la force demande. La
pression est transmise au vrin par un tuyau souple tanche.

Installation du patient - Mouvement de la pdale.
Le socle de lergomtre est adapt la taille du lit coulissant de laimant. Le patient est
allong sur le dos et le pied est maintenu sur la pdale laide de deux sangles rglables. De plus,
deux autres sangles situes hauteur du genou permettent dempcher toute flexion de celui-ci
pendant leffort et limitent galement les mouvements latraux. La hauteur entre la base de la
pdale et son axe de rotation peut tre ajuste de manire faire concider ce dernier avec laxe
de rotation du pied. De cette manire, seule la rotation du pied peut faire basculer la pdale, ce
qui fait travailler essentiellement les muscles du mollet. Une antenne radiofrquence est donc
place sur ce dernier pour acqurir des spectres RMN. La position du lit coulissant est alors
ajuste pour que lantenne soit au centre de laimant.
Lorsque le vrin est sous pression, la pdale est amene en position haute. Langle form
entre le pied et la jambe est alors approximativement de 90. Lamplitude angulaire de la pdale a
t limite 25 par lintroduction dune bute que le patient doit atteindre chaque mouvement.

Dtermination de l'effort maximal (EM).
Chaque individu, en fonction de son entranement physique, est capable deffectuer une
pousse sur le pdalier jusqu une valeur limite (effort maximal, EM). Afin de normaliser le
travail fourni par chaque patient, lEM est dtermin avant chaque tude, en incrmentant la force
exerce par le vrin jusqu ce que le basculement du pdalier soit impossible raliser. La force
exercer pendant le protocole est ensuite calcule relativement lEM (typiquement 30% et 50%,
cf. 2, p. 138). Sur un groupe dhommes (ge compris entre 30 et 50 ans) nayant pas
dentranement physique particulier, la valeur de lEM est assez uniforme et se situe aux environs
de 600-750 N. De plus, plusieurs mesures de lEM effectues sur un mme patient ont donn des

15
valeurs trs voisines (variations infrieures 10 %), ce qui indique que la valeur de la force
exerce par le vrin de lergomtre est assez reproductible dune exprience lautre.
Lergomtre et lautomate qui le commande ont une excellente fiabilit puisque nous avons
ralis ce jour plusieurs dizaines dexpriences de spectroscopie sans incidents majeurs. De
plus, la simplicit dinstallation et dutilisation de cet appareil en ont fait un outil performant pour
ltude du mtabolisme nergtique (cf. 2, p. 138).

1.4 Mise au point dun dispositif danesthsie pour les petits animaux
Pour raliser des expriences RMN sur un animal, il est ncessaire de procder une
anesthsie. En effet, tout mouvement de celui-ci entrane une dtrioration importante des
signaux observs. Cette anesthsie peut tre ralise par une injection (ex: pentobarbital sodique -
1 ml / kg -), ce qui autorise un temps dexamen denviron 90 minutes.
Pour raliser des expriences dune dure suprieure, un dispositif danesthsie
lHalothane gazeux a t mis au point. Cette mthode danesthsie offre lavantage dtre moins
traumatisante pour les animaux et diminue le risque de mortalit.

Dispositif dvelopp.
LHalothane liquide (Belamont) est mlang de lair sous pression (P ~ 2 bar) dans une
cuve mdicale calibre, puis ce mlange est administr lanimal en continu (dbit ~ 5 L/minute
avec 1% 5% dHalothane). Afin dviter aux manipulateurs tout accident d la toxicit
hpatique du produit, lanimal est plac dans une enceinte close dont la taille est adapte au
fourreau de gradients BGA12 ( 1.2, p. 9). Le gaz expir par lanimal est rcupr en sortie et
pig par un filtre charbons actifs (Aldabsorber) ouvert lair libre.
Un schma du dispositif danesthsie est prsent sur la Figure 1.2.


16
BOUCHON
DE SORTIE
FILTRE
ECHAPPEMENT
A L' AIR LIBRE
BOUCHON
D' ENTREE
MELANGE AIR
HALOTHANE
ANTENNE RADIOFREQUENCE
FOURREAU DE GRADIENTS
BRUKER BGA12
0
5%
HALOTHANE
LIQUIDE
CUVE
CALIBREE
AIR SOUS
PRESSION


Figure 1.2
Schma du dispositif danesthsie lhalothane.

Ce dispositif a t principalement utilis sur le rat, notamment pour limagerie du cerveau
par transfert daimantation. Les rats anesthsis sont installs en position dcubitus ventrale, la
tte place au centre de lantenne (cf. 1.5, p. 17). Une couverture en laine entoure lanimal pour
limiter la chute de la temprature corporelle. Lantenne est alors place dans le fourreau de
gradients BGA12 dont les extrmits sont obtures laide de terminaisons en PVC qui se vissent
sur des supports adapts au diamtre du fourreau (12 cm). Ltanchit du systme est assure par
des joints en caoutchouc. Deux connecteurs radiofrquences relient lintrieur et lextrieur de
cette enceinte close afin de pouvoir brancher deux antennes. De plus, les terminaisons en PVC
sont munies dun systme de branchement pour recevoir les tuyaux darrive et de rcupration
des gaz.


17
1.5 Antennes radiofrquences (RF)
1.5.1 Gnralits
Pour perturber ltat dquilibre des spins soumis une induction statique B
O
, il faut crer
une induction oscillante (B
1
), perpendiculaire B
O
, laide dune antenne approprie. En effet,
linduction B
1
bascule les spins situs dans la rgion tudier dans le plan transversal et ces
derniers mettent une induction radiofrquence (de frquence
O
) lors de leur retour lquilibre.
Ce signal est capt par lantenne, puis amplifi, dmodul, numris et trait. La frquence de
rsonance (
O
) du signal observ dpend linairement de linduction statique B
O
:

O
= B
O
, o B
O
est exprim en Tesla (T) [1.1]

o (exprim en MHz.T
-1
) est le rapport gyromagntique du noyau observ. Dans les
applications prsentes dans ce travail, les trois lments qui nous intressent sont le proton (
1
H),
le Phosphore-31 (
31
P) et le Carbone-13 (
13
C) dont les caractristiques sont regroupes dans le
Tableau suivant:

Noyau / MHz.T
-1

O
/ MHz ( 4.7 T) abondance naturelle (%)
1
H 42.58 200.3 99.98
31
P 17.24 80.8 100
13
C 10.70 50.3 1.13
Tableau 1.1
Caractristiques RMN des noyaux tudis.

Pour observer les signaux RMN provenant de ces noyaux, il est donc ncessaire davoir des
antennes oprant des frquences proches de
O
. On ralise pour cela des rsonateurs RF
constitus de circuits rsonants R, L ,C. Pour obtenir un rapport signal sur bruit convenable, il

18
faut que la rsistance R du circuit soit la plus faible possible. Par consquent, des matriaux de
bonne conductivit (tel que le cuivre ou largent) sont employs et il est bien entendu que les
matriaux magntiques sont exclure car ils peuvent altrer lhomognit de linduction statique
B
O
, et donc dtruire la qualit des signaux observs.
Linductance L de la bobine est fonction de sa gomtrie. Diverses formes dantennes sont
utilises en fonction du profil dexcitation souhait et du type dinvestigation ralis (cf. 1.5.4,
p. 25). Les capacits C (type ATC 100E, Pyrecap
2
), qui servent rendre le circuit rsonant, sont
amagntiques et possdent des tensions de claquage leves.

Accord en frquence - adaptation dimpdance
La frquence de rsonance (
RES
) de ces circuits R, L, C est fonction des valeurs
respectives de L et C:

LC
RES

2
1
[1.2]

Elle correspond limpdance minimum de lantenne (la partie imaginaire de limpdance
complexe est nulle, ie: LC
2
RES
=1). Le moyen le plus simple de faire concider les valeurs de

RES
et de
O
est de faire varier C laide de capacits ajustables (0.8 - 18 pF), puisque la valeur
de L est fonction des caractristiques gomtriques (taille et forme) de lantenne. On ralise ainsi
un accord en frquence.
A la rsonance, limpdance de ces circuits R,L,C doit tre adapte limpdance
caractristique de la ligne de mesure (50 ). Cette adaptation est obtenue pour toutes les antennes
que nous avons ralises laide dun circuit capacitif symtris plac en srie entre lantenne et
le reste de la ligne.

2
Pyrecap: 5, place Salvator Allende
91124 Palaiseau Cedex

19

Rglage de laccord et de ladaptation
Le montage exprimental le plus communment utilis pour observer la rponse
frquentielle dune sonde utilise un gnrateur dont la frquence varie en fonction du temps, un
pont de rflexion et un oscilloscope en mode XY. Un schma du montage est prsent sur la
Figure 1.3:


20
Y
X
0
oscilloscope
V1 V2
gnrateur de
frquences variables
pont de
rflexion
C (adaptation)
C (accord)
antenne
V2
V1
2
=

Figure 1.3
Schma du montage ralis pour observer la rponse frquentielle dune antenne. La courbe
affiche sur lcran de loscilloscope est la bande passante en transmission du rsonateur,
lorsque ce dernier est adapt 50 et accord
O
.

Principe de fonctionnement:
Le gnrateur envoie une tension dont la frquence varie de manire cyclique de
min

max

pendant un intervalle de temps . Le pont de rflexion transmet la moiti de cette tension aux
bornes de lantenne et lautre moiti est envoye sur une rsistance de 50 . La tension rflchie
par cette rsistance est dphase de par le pont de rflexion et est alors ajoute la tension

21
rflchie par lantenne. Si les deux impdances sont identiques, la tension de sortie du pont de
rflexion qui est envoye sur loscilloscope est nulle.
Lutilisation de ce dernier en mode XY permet de faire correspondre laxe horizontal aux
frquences envoyes par le gnrateur. On visualise ainsi directement la (ou les) frquence(s)
pour laquelle (ou lesquelles) le circuit est rsonant. Il suffit dajuster la valeurs des capacits
daccord et dadaptation pour amener la rsonance de lantenne la frquence dsire et
optimiser ladaptation 50 .


Rglage des impulsions radiofrquences - angles de basculement des spins.
Une impulsion radiofrquence de profil rectangulaire et damplitude B
1
est applique
pendant une dure D (typiquement quelques dizaines de s). Elle fait basculer les spins dun
angle dont la valeur est:
= B
1
D, o est le rapport gyromagntique du noyau considr.
Le dclin de prcession libre (Free Induction Decay, FID) produit par le retour des spins
vers leur tat dquilibre est alors enregistr. Cette procdure est rpte pour diffrentes valeurs
de la tension applique aux bornes de lantenne. Une transforme de Fourier est ensuite applique
sur chaque FID, et tous les spectres ainsi obtenus sont phass lordre zro avec le mme angle.
Lamplitude du signal change de signe pour un angle de basculement des spins suprieur 180
degrs et limpulsion dinversion correspond donc au signal damplitude nulle. La dtermination
de la tension de rfrence correspondant cette inversion de population des spins est dtermine
au dbut de lexprience lorsque celle-ci ncessite des angles prcisment rgls. Les tensions
respectives de toutes les impulsions radiofrquences de la squence employe sont alors ajustes
en fonction de leurs caractristiques (forme et dure) et des angles dimpulsions recherchs.



22
Evaluation de la qualit dune antenne - puissance dpose sur lchantillon.
La qualit dune antenne peut se caractriser par son coefficient de surtension Q et son
facteur de remplissage . Ces deux nombres sans units sont dfinis comme suit (Confort, 1984):
Q = nergie stocke dans la bobine/nergie perdue par cycle = L/R
= nergie stocke dans lchantillon/nergie totale stocke par la bobine

Q reflte donc laptitude qua la bobine emmagasiner de lnergie et son couplage avec
lchantillon. On peut montrer que le rapport signal sur bruit (S/B) dune antenne est
proportionnel au produit Q (Confort, 1984; Hoult, 1976). La valeur de est relie au profil
dexcitation de lantenne, ce qui rend sa mesure difficile. En effet, lintroduction dun chantillon
conducteur (ce qui est le cas des tissus biologiques) dans la bobine peut modifier sa carte de
champ. En revanche, la valeur du facteur de qualit peut tre mesure facilement laide du
montage prsent sur la Figure 1.3 (p. 20), puisqu'elle dpend des caractristiques lectriques (R
et L) de lantenne:

0 0
2
R
L
Q [1.3]

o
0
est la frquence de rsonance de lantenne et reprsente la bande passante mesure
loscilloscope 2 / 1 de la hauteur de la rsonance.
Avec cette seule valeur, il nest pas possible de rendre compte de la qualit de lantenne,
puisque reste inconnue. Cependant, il est possible de comparer deux antennes entre elles en
ralisant des mesures RMN. En effet, en suivant la procdure dcrite p. 21, on peut dterminer la
tension quil faut appliquer aux bornes de la bobine pour raliser une inversion de population.
Plus cette valeur est basse, meilleure est la qualit de lantenne. Nous avons d'ailleurs compar les
deux antennes ralises pour limagerie du cerveau de rat 4.7 T (cf. p. 25) par cette mthode.


23
Evaluation de la puissance dpose:
La puissance dpose P
Dep
dans un chantillon au cours dune exprience de RMN dpend
de lantenne utilise. Une faon simple dvaluer P
Dep
est de mesurer loscilloscope le facteur
de qualit de lantenne, accorde et adapte, vide Q
V
(sans lchantillon) et en charge Q
C
(avec
lchantillon). Lexpression de P
Dep
est alors donne par la relation suivante:

P
Dep
= P
E
D (1 - Q
C
/Q
V
)/T
R
en Watts [1.4]

o P
E
est la puissance mise en sortie de lamplificateur radiofrquence (U
2
/R, R = 50 ),
D est la dure de l'impulsion et T
R
est le temps de rptition.
A partir de la valeur de P
Dep
, il est possible de calculer le taux dabsorption spcifique
(Specific Absorption Rate, SAR). Il est obtenu en divisant P
Dep
par la masse (m) de la zone
irradie:
SAR = P
Dep
/ m en (W/kg) [1.5]
Les normes de scurits concernant les valeurs de SAR en application clinique sont fixes
par la Food and Drug Administration (FDA) et se situent lheure actuelle autour de:
-10 W/kg pour le corps entier.
- 1.5 W/kg pour la tte.
Les calculs des valeurs du SAR pour les applications prsentes par la suite seront donnes
dans les chapitres correspondants.


1.5.2 Critres de construction
Plusieurs choix doivent tre oprs avant de construire une antenne radiofrquence. En
effet, la rgion de lchantillon dans laquelle lantenne met et reoit ainsi que la qualit des

24
signaux obtenus (rapport Signal/Bruit, S/B) varient fortement en fonction du type de rsonateur
utilis.
La faon la plus simple de raliser une antenne est de fermer une boucle circulaire
dinductance L par une capacit C. Le rsonateur ainsi form est appel bobine de surface. Elle
permet dobtenir dexcellents rapports S/B puisquelle ne reoit pas de signaux parasites
provenant des tissus loigns de la zone observe, mais le profil spatial de linduction quelle cre
lintrieur de lchantillon est trs inhomogne, ce qui rend par consquent difficile la
gnration dangles dimpulsion trs prcis. Or dans certaines expriences telles que linversion-
rcupration (cf. 2.2.2, p. 48), les angles dimpulsions doivent tre dtermins avec la meilleure
prcision possible, ce qui ncessite lutilisation de rsonateurs dont la gomtrie est trs
diffrente (cage d'oiseau, selle de cheval,). Linconvnient de telles antennes est quelles ont
gnralement de moins bons rapports S/B.
De plus, plusieurs antennes peuvent tre utilises simultanment au cours dune mme
exprience (dcouplage, dition htronuclaire, etc...) et il est ncessaire quelles interagissent
entre elles le moins possible.
Il faut donc faire des compromis concernant la gomtrie du rsonateur en fonction de
lobjectif recherch et des dimensions de l'chantillon analyser.

1.5.3 Homognit de linduction - cartes de champ
Il est intressant de modliser le profil spatial de linduction gnre par une antenne
radiofrquence pour estimer a priori la qualit de son homognit spatiale. La loi de Biot-et-
Savart exprime linduction B cre au point P par un lment de circuit dl situ au point M et qui
est parcouru par un courant dintensit I:

3 4 MP
MP dl
I
dB
o

Loi de Biot et Savart [1.6]

25

avec:
0
= 4 10
-7
H.m
-1

Lintgration de cette quation sur les trois directions X, Y, Z permet de dterminer
linduction B en tout point de lespace.
Nous avons dvelopp une procdure qui ralise une intgration numrique de cette
quation pour diffrentes gomtries dantennes et nous avons ainsi pu modliser le profil de
linduction quelles gnrent. Ce programme nous a aid choisir les caractristiques
gomtriques des rsonateurs que nous avons dvelopps (cf. 1.5.4 p. 25).


1.5.4 Antennes ralises

Transfert daimantation
Les tudes en imagerie par transfert daimantation in vivo sur le cerveau de rat prsentes au
Chapitre 2 (p. 89) ont ncessit la construction dantennes RF accordes la frquence de
rsonance du proton 4.7 T (200 MHz). Nous avons choisi de dvelopper des rsonateurs dont le
champ radiofrquence est homogne sur le volume du cerveau de rat (~ 2 cm
3
pour un rat de
150 g), afin dutiliser des squences dcho de spins et faciliter la mesure des temps de relaxation
longitudinale et transversale. En effet, ces squences contiennent des impulsions dinversion
(180) qui doivent tre correctement rgles pour obtenir des rsultats satisfaisants (cf. 2.2,
p. 47).

Antenne cage doiseau.
Le premier rsonateur construit est une cage doiseau (Hayes, 1985) en configuration passe-
bas dont les dimensions sont adaptes ltude du cerveau de petit rat (100-200 g). Cest une

26
antenne symtrie cylindrique (en cuivre) qui est constitue de deux cercles de 4.5 cm de
diamtre relis entre eux par deux tiges de 7 cm de longueur (cf. Figure 1.4, p. 26). Ces dernires
sont coupes en leur milieu pour insrer les capacits variables permettant la ralisation de
laccord en frquence (cf. p. 18).


X
Y
Z
O

Figure 1.4
Schma de lantenne en cage doiseau dveloppe pour ltude du cerveau de rat par
transfert daimantation.

Modlisation de lantenne.
Pour une antenne cage doiseau symtrique en configuration passe-bas possdant N
branches (N pair), il a t dmontr (Tropp, 1989) que le nombre de frquences de rsonances est
gal N/2. De plus, seule la frquence de rsonance la plus faible permet dobtenir une induction
homogne et lamplitude du courant I
i
circulant dans la i
me
branche possde une distribution
sinusodale (Pimmel, 1990). Pour lantenne dveloppe, N vaut 2, ce qui conduit une seule
rsonance et des courants opposs dans chaque branche. Linfluence des deux cercles C1 et C2
terminant lantenne peut tre nglige. En effet, linduction quils crent est oriente
principalement suivant laxe z (colinaire B
O
). Or, seule la composante transversale du champ
(B
X,Y
) intervient dans les modifications de population des spins. On peut donc assimiler

27
linduction produite par cette antenne celle rsultant de deux fils parallles (F
1
, F
2
) de longueur
L parcourus par des intensits damplitudes opposes.
Lutilisation de la loi de Biot-et-Savart permet de calculer, de manire analytique, les
composantes de linduction produite par un fil parallle laxe z, situ en (x
0
,y
0
) et de longueur
z
B
-z
A
:

) (
) (
4
) , , (
2
0
c b a
y y I
z y x B
o
X

, ) (
) (
4
) , , (
2
0
c b a
x x I
z y x B
o
Y

, 0 ) , , ( z y x BZ
[1.7]
avec:

0
= 4 10
-7
H.m
-1
= z - z
A

a
2
= (x - x
0
)
2
+ (y - y
0
)
2
2 2 a b +
= z - z
B
2 2 a c +

Le rsultat de la simulation est prsent sur la Figure 1.5, en supposant que le courant I vaut
1 ampre. Les nombres donns sur les courbes de niveaux sont les valeurs du module de
linduction, exprimes en T/A.


28
-3
-2
-1
0
1
2
3
Y

/

c
m
-3 -2 -1 0 1 2 3
X / cm
37
34
31
28
25
22
19
16
13
6
5
4
3
2
1
0
Z

/

c
m
-2 -1 0 1 2
Y / cm
31
28
16
22
10
7
4

Figure 1.5
Rsultat du calcul de linduction cre par 2 fils de longueur identiques en leur milieu,
reprsent sous formes de courbes de niveaux. Linduction statique B
O
de laimant est
colinaire laxe Z.

Ces graphiques montrent que ce type dantenne cre une induction relativement homogne
au centre, sur toute la longueur de la bobine (plan yOz). Dans le plan transversal (xOy),
linduction est cependant moins homogne, bien quelle permette dexplorer sans difficult des
rgions stendant sur 1-2 cm de part et dautre du centre de la bobine. Elle est donc adapte
ltude en imagerie par transfert daimantation sur le cerveau de rat, puisque les champs de vue
typiquement utiliss sont de lordre de 4 cm. Lhomognit de linduction peut tre grandement
amliore en insrant davantage de branches (N > 2). Cependant, la distribution sinusodale de
lamplitude de lintensit du courant (I
N
) dans chaque branche implique que N doit tre suprieur
4, puisque les deux fils rajouts sont parcourus par un courant dintensit nulle. Etant donn la
taille de lantenne (4.5 cm de diamtre), il est techniquement difficile dinsrer dautres fils. De
plus, le rglage de laccord en frquence serait plus ardu, puisque les valeurs des capacits situes
sur chaque branche doivent tre identiques. Nous avons donc conserv cette configuration deux
branches.

29
Caractristiques de lantenne:
Les facteurs de qualit vide (Q
V
) et en charge (Q
C
) ont t mesur loscilloscope. De
plus, la valeur de la tension appliquer pour crer une inversion de population des spins U
180
est
donne. Elle a t mesure sur le cerveau de rat in vivo laide de la squence de spectroscopie
localise STEAM (Frahm, 1987) sur un petit volume V (V 1 cm
3
) entourant le cerveau, en
cherchant minimiser l'amplitude de la rsonance de l'eau. Les valeurs suivantes ont t trouves:
- Q
V
210
- Q
C
130.
- U
180
230 V, pour une impulsion de forme sinus cardinal, limit aux 3 lobes principaux,
dune dure de 1 ms.

Antenne de Helmholtz.
Les rats mles Wistar qui ont reu des cellules tumorales, ont t suivis par IRM sur une
priode de 2 semaines environ. Leur masse la fin de cette tude approche les 300 g et lantenne
cage doiseau dcrite p. 25 est trop petite pour raliser cette tude et un rsonateur de taille
suprieure a donc t construit. Nous avons vu au paragraphe prcdent que la ralisation d'une
antenne cage d'oiseau de petite taille est difficile lorsque le nombre de brins utiliss est suprieur
2. Par consquent, nous avons choisi de raliser une bobine de Helmholtz constitue de deux
ellipses (7 cm de longueur par 6 cm de largeur) en cuivre places en vis--vis (cf. Figure 1.6). En
effet, la ralisation de ce type de rsonateur est relativement simple et ils permettent d'obtenir une
induction relativement homogne spatialement. Pour une antenne de helmholtz circulaire, il est
admis que lhomognit de linduction est satisfaisante si lcartement entre les spires est gal au
rayon de chaque cercle. Nous avons vrifi ce point laide du programme de simulation des
cartes de champ dcrit au 1.5.3 (p. 24). Par consquent, pour obtenir une antenne homogne
dont laccs est denviron 5-6 cm, il faudrait des spires de 10-12 cm de diamtre. Une telle
gomtrie ne permet pas dinsrer ce rsonateur dans le fourreau de gradients BGA12 (12 cm
daccs) dont lavantage est de pouvoir utiliser des squences dimageries rapides (cf. p. 45). Pour

30
contourner ce problme, nous avons choisi de construire une bobine de Helmholtz dont les deux
lments elliptiques ne sont pas coplanaires mais incurvs (cf. Figure 1.6).

A B


Figure 1.6
A.Schma de lantenne Helmholtz dveloppe pour ltude du gliome implant par transfert
daimantation (cf. 4, p. 99).
B. Modle gomtrique simplifi permettant de simuler son induction (cf. Figure 1.8,
p. 33).

Pour calculer le profil de linduction que gnre cette antenne, il faut connatre la fonction
f(X, Y, Z) qui reprsente de manire analytique la forme du conducteur du rsonateur. Pour
simplifier le problme, on peut supposer que chaque ellipse incurve peut se modliser par deux
arcs de cercles relis entre eux par des fils parallles de longueur identique (cf. Figure 1.6 B,
p. 30). Lexpression de linduction que produit un fil de longueur L est donne p. 25 et celle
dune portion dun arc de cercle (de rayon R) dfini entre les angles
1
et
2
et situ la cote
z = Z
C
est la suivante:

+ +

2
1
2 / 3 2 2 2 2
0
) ( 4
) , , (

c b a
d
R
z z
I
z y x B
C
radial [1.8]

+ +

2
1
2 / 3 2 2 2 2
0
) ( 4
) , , (

c b a
ad
R
I
z y x Baxial [1.9]

31
o:
-B
axial
est la composante perpendiculaire au plan de la spire alors que B
radial
est la
composante parallle ce plan, exprime en coordonnes polaires.
10
4
7 -
0
H.m
-1
, sin cos 1 a
R
Y - Y
R
X - X C C
, sin cos b
R
X - X
R
Y - Y C C
et
R
Z Z C
c

.
Il suffit donc de dterminer le rayon (R) de chaque arc de spire constituant le rsonateur,
ainsi que les coordonnes (X
C1,2
, Y
C1,2
) de leur centre. Pour cela, on mesure les dimensions (L et
H) de chaque spire ainsi que lcartement (D) entre les deux spires (cf. Figure 1.7, p. 31).

X
Y
spire infrieure
de rayon R
X
Y
spire suprieure
de rayon R
X
Y
antenne vue
de face
L
D
H

Figure 1.7
Vue de face (plan xOy) de lantenne ralise: chaque extrmit des spires de lantenne est
assimile un arc de cercle (de rayon R), dfini par les angles
1
et
2
. Les coordonnes
des centres C1 et C2 de chaque spire, ainsi que les valeurs de
1
,
2
et R sont calcules
daprs les mesures de L, D et H (cf. ci-dessous).

En utilisant les rgles de gomtrie plane, on dmontre aisment les relations suivantes:
8H
4H + L
R
2 2


( )
2R
L
cos a 1

1 2

32

R H
2
D
c Y c Y 2 1 +

Dans la configuration que nous avons adopte, nous avons mesur les dimensions
suivantes: H = 1 cm, L = 6 cm et D = 3 cm. On obtient donc les valeurs suivantes:
R = 5 cm pour chaque portion de spire.
(
1
,
2
) = (53, 127) et (X
C1
, Y
C1
) = (0, -2.5 cm), pour la partie suprieure de
lantenne.
(
1
,
2
) = (233, 307), et (X
C2
, Y
C2
) = (0, 2.5 cm), pour la partie infrieure de
lantenne
Cette antenne Helmholtz de gomtrie particulire porte le nom de selle de cheval. Il a t
dmontr (Hoult, 1978) que la gomtrie permettant dobtenir linduction la plus homogne est
dfinie par:
|
1
-
2
| = 120 et L/E = 2, o E est lcartement maximal entre les spires, qui est gal
D+2H avec nos conventions. Pour un cartement de 5 cm, cela conduit une antenne de 10 cm de
largeur, qui serait inadapte la taille de la tte de rat. En utilisant les valeurs numriques
donnes ci-dessus, nous avons simul linduction mise par ce rsonateur. Le rsultat est prsent
sur la Figure 1.8 (p. 33).


33
-4
-2
0
2
4
Y

/

c
m
-4 -2 0 2 4
X / cm
18
16
18
20
16
16
14
16
18
18
3
2
1
0
-1
-2
-3
Y

/

c
m
7 6 5 4 3 2 1 0
Z / cm
18
16
20
20
18
16
16
18
14 12

Figure 1.8
Courbes de niveaux reprsentant les intensits en T/A de lantenne ralise. Linduction
statique B
O
de laimant est colinaire laxe Z.

Lhomognit de linduction est excellente sur une surface qui couvre la totalit du
cerveau du rat. En effet, B
1
varie denviron 10% lorsquon sloigne de 2 cm de part et dautre du
centre de lantenne. Pour comparer les cartes dinduction de cette antenne avec une antenne
Helmholtz classique offrant le mme accs, nous avons galement effectu le calcul de
linduction de cette dernire, en utilisant les paramtres suivants:
-Rayon de chaque spire: 3 cm.
-Ecartement entre les spires: 5 cm.
Le rsultat de la simulation est prsent sur la Figure 1.9 (p. 34) sous forme de courbes de
niveaux, en supposant quun courant de 1 A circule dans chaque spire.


34
8
6
4
2
0
Y

/

c
m
-4 -2 0 2 4
Z / cm
22
20
26 24
16
22
20
20
22
18
8
6
4
2
0
Y

/

c
m
-4 -2 0 2 4
X / cm
22
20
26 24
16
22
20
20
22
18

Figure 1.9
Courbes de niveaux reprsentant les intensits en T/A de linduction gnre par une
antenne Helmholtz offrant le mme accs que lantenne ralise. Linduction statique B
O
de
laimant est colinaire laxe Z.

On remarque que lamplitude de linduction est du mme ordre de grandeur que celle de
lantenne prcdente (cf. Figure 1.8, p. 33). Cependant, linduction est moins homogne,
puisqu'elle varie de 25 % environ lorsquon sloigne de 2 cm de part et dautre du centre de la
bobine. La gomtrie particulire de lantenne que nous avons dveloppe est bien adapte la
ralisation dimages du cerveau de rat laide de squences dcho de spins dans le fourreau de
gradients BGA12. En effet, elle gnre une induction trs homogne sur la totalit du cerveau de
lanimal, en offrant un faible encombrement. La qualit cette homognit a pu tre valide
exprimentalement en effectuant des mesures du T
1
l'aide d'une squence d'inversion-
rcupration (p. 48), puisque cette squence utilise des impulsion 180 qui doivent tre
correctement calibres pour obtenir de bons rsultats (cf. Figure 2.3, p. 97).

Caractristiques de lantenne construite:
- Q
V
210, Q
C
160.
- U
180
200 V.

35
La valeur de la tension de rfrence U
180
reporte ci-dessus a t obtenue dans les
conditions exprimentales dcrites p. 22.
Spectroscopie de RMN du
31
P et du
13
C sur le mollet humain
Lantenne utilise pour la spectroscopie musculaire est une bobine de surface multi-accord
BRUKER (
1
H,
13
C et
31
P) de 5 cm de diamtre, possdant deux connecteurs distincts. Le premier
est reli une bobine qui permet lacquisition de signaux phosphore ou carbone et le second est
reli au rsonateur proton. Cette antenne est donc adapte lacquisition de spectres du carbone
dcoupl du proton. Le choix de la tension appliquer aux bornes dune antenne de surface est
dlicat. En effet, langle de basculement des spins varie en fonction de leur position puisque
linduction cre par ce type de rsonateur est trs inhomogne. Ce point est illustr par la Figure
1.10 (p. 36) qui prsente le rsultat de la simulation en utilisant les formules donnes au 0 (p. 25).



36
8
6
4
2
0
Y

/

c
m
-4 -2 0 2 4
Z / cm
26
22
18
14
10
6
2

Figure 1.10
Courbes de niveaux reprsentant les intensits en T/A de linduction gnre par une
bobine de surface de 5 cm de diamtre dans le plan yOz. Linduction statique B
O
de
laimant est colinaire laxe Z.

Il est par consquent difficile de dfinir une tension correspondant une inversion de
population des spins (U
180
). Trois ou quatre spectres sont enregistrs au dbut de chaque
exprience en appliquant des tensions diffrentes aux bornes de lantenne. La mesure du rapport
signal sur bruit des spectres obtenus permet dajuster la valeur de la tension utilise par la suite.
Cette valeur est denviron 120 V pour la spectroscopie
13
C et 35 V pour la spectroscopie
31
P
(impulsion d'une dure de 100 s et d'amplitude constante). Des valeurs trs voisines ont t
trouves pour chaque exprience (variation denviron 10 %). Les rsultats obtenus sont prsents
au Chapitre 3 (p. 134).


37
Caractristiques des antennes:
1
H
31
P
13
C
Q
V
660 800 500
Q
C
270 400 290

Spectroscopie Htronuclaire multi-quanta.
La spectroscopie htronuclaire multi-quanta ncessite lutilisation simultane dune
antenne
1
H (200 MHz) et dune antenne
13
C (50.3 MHz). De plus la squence prsente au 2.5
(p. 65) contient des impulsions 90 et 180 pour ces deux noyaux, ce qui implique lutilisation
dantennes dont linduction est la plus homogne possible. En outre, linduction mutuelle entre
ces deux antennes doit tre minimale pour viter dinduire du bruit supplmentaire sur les
signaux observs. Pour satisfaire ces contraintes exprimentales, nous avons opt pour la
construction de deux antennes en cage doiseau.
Lantenne proton est celle dcrite sur la Figure 1.4 (p. 26). Autour de celle-ci, une antenne
13
C de taille suprieure mais de gomtrie identique a t rajoute. Ses caractristiques
gomtriques sont les suivantes:
- diamtre des cercles: 6.5 cm
- longueur des branches: 9 cm
Ces deux antennes ayant le mme axe de symtrie (axe z de laimant), il est possible de les
orienter perpendiculairement lune par rapport lautre de manire minimiser les couplages par
induction mutuelle.

38
Ant e nne
13
C Ant e nne
1
H
Z
X
Y
B(
13
C)
B(
1
H)
B
O

Figure 1.11
Schma des antennes utilises pour la spectroscopie htronuclaire multiquanta.


En utilisant le banc de mesure prsent p. 19, nous avons vrifi que dans cette
configuration la frquence de rsonance de chaque antenne est trs proche (variation de 0.1 MHz
devant plusieurs dizaines de MHz) de celle observe lorsque les antennes sont loignes lune de
lautre. En outre, les facteurs de qualits mesurs dans ces deux conditions taient identiques pour
chaque bobine.
Le profil de linduction cre par cette antenne nest pas report ici car il est analogue celui
de lantenne proton dcrite prcdemment (cf. Figure 1.4, p. 26).
Etant donn la faible sensibilit de ce noyau la RMN, il est difficile dobtenir directement
la tension de rfrence U
180
. Une solution consiste effectuer une mesure sur un tube contenant
des composs enrichis en
13
C forte concentration. Nous avons prfr utiliser la squence
HMQC ( 2.5,p. 65) pour dterminer U
90
, en cherchant obtenir le meilleur rapport signal sur

39
bruit du spectre proton dit. Limpulsion utilise est une onde continue de 100 s. La valeur de
U
90
mesure par cette mthode a t multiplie par deux pour obtenir U
180
.
Caractristiques de lantenne:
-Q
V
500.
- Q
C
350.
- U
180
320 V.

1.5.5 Conclusion
Plusieurs autres antennes (une dizaine environ) de gomtrie varies (bobine de surface,
selle de cheval, Helmholtz, cage doiseau, ...) ont t construites pour chaque application
dveloppe sur laimant dont dispose le laboratoire. Nous avons volontairement restreint le
chapitre consacr aux antennes radiofrquences en prsentant les rsonateurs utiliss pour les
expriences dcrites dans les paragraphes suivants. Les cartes dinduction ont t donnes pour
chacune dentre elles, bien que le programme permettant de raliser ces simulations ne tienne pas
compte des pertes dnergie dans lchantillon, ainsi que de linfluence de lenvironnement de
lantenne (proximit dun plan de masse par exemple). De plus, les capacits daccord situes sur
le rsonateur peuvent galement modifier localement le profil spatial de linduction. Cependant,
ce programme nous a t trs utile pour choisir a priori la gomtrie des antennes que nous avons
ralises.


40
2 Mthodologie RMN
2.1 Obtention d'une image
Slection d'une tranche d'un objet:
De nombreuses expriences cherchent obtenir des informations provenant seulement
d'une petite partie d'un objet, appele rgion d'intrt (ROI). Il est donc prfrable d'exciter
slectivement les spins contenus dans la ROI afin de ne pas recueillir de signaux parasites
provenant des rgions environnantes. Ceci peut tre obtenu en appliquant simultanment une
impulsion radiofrquence I et un gradient de champ magntique G. En effet, au profil temporel
I(t) de l'impulsion utilise correspond un profil frquentiel I() (s'tendant entre les frquences

min
et
max
) donn par la transforme de Fourier de I(t). L'application d'un gradient de champ
magntique G(x, y, z) permet de faire varier la frquence de rsonance des spins en fonction de
leur position. En effet, son expression est la suivante:

2
z) G y G x G (B z) y, (x, z y x O + + + [1.10]
Par consquent, seuls les spins dont la frquence de rsonance est comprise entre
min
et

max
seront excits. On slectionne ainsi une tranche d'paisseur E la position P, dont
l'orientation est perpendiculaire la direction d'application du gradient G (cf. Figure 1.12).


41
G
1
G
2
t
Impulsion
radiofrquence
Gradient de
champ magntique
X
G
1
G
2
P
1
E
1
0
E
2
P
2
rf
max
T.F.
min

Figure 1.12
Principe de la slection d'une tranche perpendiculaire l'axe X l'aide d'une impulsion
radiofrquence et d'un gradient de champ magntique. Les deux gradients G
1
et G
2
sont
donns pour illustrer l'influence de l'amplitude de G sur la taille (E
1
, E
2
) et la position (P
1
,
P
2
) de la coupe slectionne.

Le dphasage induit par l'application d'un gradient de champ magntique est annul en
appliquant un gradient de signe oppos et dont l'intgrale (

0
) ( dt t G ) est gale la moiti de celle
du gradient d'excitation.
La position P et l'paisseur de la coupe E sont fonction des caractristiques de l'impulsion
(
rf,

min
et
max
) ainsi que de l'intensit du gradient:
G
E
min max

G
P
o rf

[1.11]
o
O
est la frquence de rsonance des spins pour G = 0.

Profil des impulsions radiofrquences:

42
Le profil de la coupe slectionne dpend des formes respectives de l'impulsion et du
gradient. On utilise gnralement un gradient d'amplitude constante et une impulsion de forme
sinus cardinal en ne conservant que les lobes principaux (3 ou 5 lobes), puisque la transforme de
Fourier d'une telle impulsion possde un profil frquentiel pratiquement rectangulaire (cf. Figure
1.12). La dure typique de ces impulsions est de l'ordre de quelques millisecondes et leur
amplitude est ajuste en fonction des angles d'impulsions dsirs.

Gradients de champ magntique:
Les systmes de gradients dont nous disposons contiennent chacun 3 bobines de gradients
indpendantes qui permettent de faire varier la valeur de B
O
sur les axes x, y et z respectivement.
Les caractristiques techniques de ces systmes de gradients sont dtailles au 1.2 (p. 9).
En envoyant des courants d'amplitudes diffrentes sur chaque bobine, on peut crer un
gradient dans n'importe quelle direction et slectionner ainsi une tranche oriente de manire
quelconque. La qualit des signaux mesurs peut tre grandement altre lorsque les gradients
n'ont pas le profil dsir. Ceci survient lorsqu'on fait varier rapidement et de manire importante
le courant l'intrieur des bobines de gradient, au cours d'une squence d'imagerie rapide par
exemple. En effet, des forces contre-lectromotrices (f.c.e.m.) sont cres dans les parties
mtalliques du gradient et de l'aimant, ce qui induit des courants parasites (courants de Foucault)
opposs au sens du courant parcourant la bobine de gradient et modifie sensiblement le profil de
celui-ci:


43
profil idal
profil rel
t

Figure 1.13
Influence des courants de Foucault sur le profil des gradients.

Il peut galement se crer des courants parasites dans les antennes radiofrquences qui se
traduisent par des distorsions de la forme des rsonances et l'apparition de bruit plus ou moins
intense. On modifie alors l'intensit envoye dans chaque bobine de gradient, en utilisant un
programme de rglage propos sur l'appareil dont nous disposons. Un gradient relativement
intense (~ 50 % de la valeur maximale) est appliqu pendant plusieurs dizaines de millisecondes
puis est ramen zro dans le minimum de temps. On enregistre alors plusieurs FID
squentiellement et on ajuste la valeur des courants dans les bobines pour essayer d'obtenir des
signaux identiques. Cette procdure est ralise sur chaque bobine de gradient, pour chaque
antenne construite.

Obtention d'une image:
La grande quantit d'eau que contiennent les tissus biologiques (> 60 %) ainsi que la
sensibilit leve de la RMN du proton ont rendu possible l'obtention d'images d'organes de
manire non-invasive. Le principe de cette technique repose sur la notion d'espace de Fourier. En
effet, un lment de volume dV (situ au point P de coordonnes x, y, z) d'un objet uniforme est
dcrit par sa densit d'aimantation dM(x, y, z)/dxdydz et le signal RMN lmentaire dS provenant
de celui-ci peut se mettre sous la forme:
dV z)e y, M(x, dS t j [1.12]
o = B
O
est la pulsation du vecteur reprsentant les spins au point P. Par consquent, si
B
O
est fonction des coordonnes de l'espace par le biais de gradients de champs magntiques
G
x,y,z
(cf. ci-dessus), alors l'est galement et on peut slectionner spatialement les spins en

44
fonction de leur pulsation. En effet, le signal total S recueilli par l'antenne s'exprime de la faon
suivante:
dxdydz z)e y, M(x, = dS S(t)
-
t z) G + y G + x (G j z y x

objet
[1.13]
Cette expression est une transforme de Fourier spatiale si on note k
x
= G
x,y,z
t. En oprant
une transforme de Fourier inverse, on obtient immdiatement M(x, y, z). Si on excite les spins
situes dans une coupe dtermine (cf. Figure 1.12, p. 41), l'image de celle-ci peut ainsi tre
obtenue en faisant varier les gradients de champs magntique sur deux axes perpendiculaires
entre eux et contenus dans le plan de la coupe. Pour explorer diffrentes valeurs de k, il est
possible de faire varier l'amplitude G et la dure t du gradient utilis. On applique gnralement
sur un des axes un gradient d'amplitude fixe (gradient de lecture) pendant l'enregistrement du
signal RMN et sur l'autre axe un gradient de dure fixe et d'amplitude variable (gradient de
phase). Le gradient de lecture permet de balayer une ligne complte de l'espace de Fourier et le
gradient de phase permet de passer d'une ligne la suivante (cf. Figure 1.14). Deux types de
squences sont utilises, l'cho de gradient et l'cho de spin. Dans le premier cas, une seule
impulsion est utilise et l'cho enregistr est form par la refocalisation du gradient de lecture.
Dans le second cas l'cho est form l'instant t par une impulsion d'inversion applique l'instant
t/2. Le temps d'cho correspond la dure sparant la premire excitation et le sommet de l'cho.


45
G
P
G
C
G
L
A
Slection d'une
coupe
G
cho de gradient
Lecture
P
h
a
s
e
k
B

Figure 1.14
A.Principe d'obtention d'une image l'aide d'une squence d'cho de gradient. G
C
, G
P
et G
L

dsignent respectivement les gradients de slection de Coupe, de Phase et de Lecture. Le
gradient de signe ngatif plac avant la lecture (axe G
L
) est ensuite refocalis pour former
un cho.
B. Balayage de l'espace de Fourier.

Les caractristiques du plan de Fourier (k
min
, k
max
et k) dpendent de la taille du champ de
vue (Field Of View, FOV) et du nombre N de pixels choisis, puisque k = 1 / FOV et k
max
= -
k
min
= N/2FOV.
On peut galement obtenir une image en 3 dimensions, en faisant varier les gradients sur
trois axes orthogonaux. Le codage par la frquence est ralis par le gradient de lecture sur un axe
pendant l'enregistrement de l'cho alors qu'un gradient de phase est appliqu sur chaque autre axe.

2.1.1 Squences dimageries utilises
I magerie par cho de spins - squence RARE

46
Les squences dimageries utilises pour tudier les mcanismes de transfert daimantation
sur le cerveau de rat sont des squences d'cho de spins. Les spins sont amens dans le plan
transversal par une impulsion 90, puis une impulsion dinversion (180) applique linstant
/2 induit leur refocalisation au bout dun temps additionnel /2. Un gradient de lecture est
appliqu pendant lenregistrement de lcho form linstant , pour balayer une ligne de lespace
de Fourier. Le gradient de phase est incrment pendant lintervalle /2 sparant les deux
impulsions radiofrquence. Le temps ncessaire pour obtenir une image est donc gal au temps de
rptition multipli par le nombre de pas de codage en phase.
Pour diminuer la dure dacquisition, une version rapide de cette squence dcho de spins
a t utilise. Il sagit de la squence RARE (Rapid Acquisition with Relaxation Enhancement),
prsente par Hennig et al. (Hennig, 1986). Lide est dacqurir N lignes de lespace de Fourier
au cours dun mme temps de rptition. Avec cette technique, le gain en temps est donc amlior
dun facteur N, encore appel facteur RARE. Sur le cerveau de rat vivant, un facteur RARE de 32
peut tre utilis pour acqurir des images dont les contrastes sont comparables ceux obtenus
laide dune squence d'cho de spin standard. Cependant, des artefacts plus ou moins marqus
peuvent altrer la qualit des images obtenues, en fonction du codage de la direction de phase. En
effet, les chos successifs lintrieur du mme T
R
sont pondrs diffremment cause de la
relaxation transversale. Si deux lignes adjacentes de lespace de Fourier sont enregistres avec
des pondrations respectives trs diffrentes, des artefacts trs prononcs apparaissent sur limage
aprs transforme de Fourier. Dans les expriences reportes ici, la mthode utilise pour coder
les 128 lignes dans la direction de phase avec un facteur RARE de 32 est la suivante:
-Le premier pas de codage est -0.15*k
max
-Lincrment de phase k entre deux chos successifs vaut k
max
/16.
En outre, un temps de rptition (T
R
) relativement long a t utilis pour obtenir une
relaxation longitudinale (T
1
) quasi totale entre deux acquisitions successives.


47
Lintrt des squences dcho de spins rside dans la qualit des images obtenues. En effet,
les inhomognits de linduction statique B
O
sont limines par limpulsion de refocalisation
(180). Cependant, il est ncessaire que ces angles soient bien rgls pour obtenir un rsultat
satisfaisant. Cela impose lutilisation dantennes radiofrquences dont linduction B
1
est
homogne sur lchantillon tudi. Les rsonateurs construits pour ltude du transfert
daimantation (cf. 1.5, p. 17) ont t spcialement dvelopps pour satisfaire cette contrainte
exprimentale.

I mpulsion de Transfert daimantation
Un motif prparatoire est insr avant la squence dimagerie en cho de spins (cf. p. 45)
afin dexciter les protons lis macromolcules, ce qui provoque une modification des contrastes
cause du phnomne de transfert daimantation. Ce motif est compos dune impulsion
radiofrquence continue damplitude constante (
1
) et de dure (D) applique la frquence

transfert
On dfinit comme lcart entre
transfert
et la frquence de rsonance des protons de
leau (
0
) qui est choisie comme rfrence.

2.2 Mesure des temps de relaxation
Pour mettre en vidence linfluence du transfert daimantation sur les contrastes observs, il
est prfrable de minimiser les effets ds la relaxation transversale (contraste T
2
) et la
relaxation longitudinale (contraste T
1
). La dtermination des paramtres exprimentaux
satisfaisant ces conditions ncessite donc la connaissance pralable des valeurs des T
1
et T
2
du
cerveau de rat, 4.7 T.


48
2.2.1 Dtermination du T
2
- exprience dcho de spins.
Lintgration des quations de Bloch relatives lvolution des spins dans le plan
transversal donne:

)
2
(
O
y x,

T / -
) ( sin M ) ( M e

[1.14]

o est l'angle de basculement les spins. Les mesures ont t ralises sur le cerveau de rat
in vivo en imagerie laide dune squence dcho de spins, afin de saffranchir des
inhomognits de linduction statique B
O
. Un ajustement non-linaire en fonction de lquation
[1.14] est ensuite effectu sur les intensits mesures. De plus, il est prfrable dutiliser un T
R

long par rapport au T
1
(T
R
> 3 T
1
) pour attnuer les effets de la saturation longitudinale.

2.2.2 Dtermination du T
1
- exprience dinversion-rcupration.
Lquation de Bloch qui rgit lvolution de laimantation longitudinale est la suivante:


1

z o z
T
(t) M M
dt
(t) M

d
[1.15]
Lintgration de cette quation conduit :

( )
)
1
T t / (-
z
0 0 Z
e (0) M - M - M (t) M [1.16]

o M
z
(0) reprsente la composante longitudinale de laimantation t = 0 et M
O

laimantation lquilibre thermodynamique. En appliquant, linstant initial, une impulsion
radiofrquence dinversion correspondant un angle de basculement des spins de 180 degrs,
M
z
(0) est alors gal -M
O
. Aprs un dlai dattente , laimantation longitudinale vaut:


49

,
_

)
1
T / (-
2 1 M ) ( M e o z

[1.17]

Une impulsion de lecture ramne alors les spins dans le plan transversal afin de mesurer
M
z
(). Cette mthode est connue sous le nom dinversion-rcupration. On relve lamplitude du
signal pour diffrentes valeurs du temps dinversion , puis on ralise un ajustement non-linaire
des donnes obtenues en utilisant lquation [1.17].
Dans la pratique, la mesure du temps de relaxation longitudinal a t ralise laide dune
squence dimagerie pour permettre la dtermination des T
1
dans diffrentes rgions du cerveau
de rat. Afin de minimiser tout effet de saturation qui pourrait perturber la qualit de la mesure, il
est prfrable de travailler en condition totalement relaxe (T
R
~ 5T
1
). Par consquent,
lobtention dune image contenant 128 pas de codage en phase avec un T
R
de 5 secondes requiert
plus de 10 minutes dacquisition pour chaque valeur du dlai dinversion. Deux heures
dexprience environ sont donc ncessaires pour obtenir une dizaine de points exprimentaux
correspondant diffrentes valeurs de . Cette dure peut tre rduite en ralisant lacquisition de
plusieurs lignes de lespace de Fourier par T
R
, grce la squence RARE (cf. p. 45). Compte
tenu des valeurs des T
2
sur le cerveau de rat in vivo, il est possible, avec un temps dcho de 5 ms,
dacqurir 32 lignes de lespace de Fourier par T
R
en obtenant une pondration comparable
celle dune densit de protons en imagerie conventionnelle. Avec ces paramtres dacquisition, le
gain en temps est donc amlior dun facteur 32. Une vingtaine dimages du cerveau de rat
correspondant diffrentes valeurs de ont t ralises en deux heures environ, en procdant 2
ou 4 accumulations afin d'amliorer le rapport signal sur bruit. Les T
1
ont t mesurs par cette
mthode avec un T
R
de 6 s, en faisant varier entre 10 ms et 3.8 s. Lajustement des paramtres a
t ralis en utilisant lquation dinversion-rcupration rapide qui tient compte de la saturation
partielle du signal (exp - T
R
/T
1
). Son expression est la suivante:

[ ] ) T / TR - ( exp + ) T / - ( exp 2 - 1 M ) ( M

1 1 O Z
[1.18]

50

Compte tenu des valeurs relatives des T
1
et T
R
, le dernier terme de cette quation na que
peu dimportance sur la qualit de lajustement et lquation [1.17] peut tre utilise.

2.2.3 Dtermination du T
1
SAT

Lorsqu'on applique pendant une dure D variable une impulsion de transfert d'aimantation
d'amplitude
1
et de frquence constantes, l'amplitude du signal observ dcrot de faon
exponentielle en fonction de D. La constante de temps ainsi trouve est conventionnellement
appele T
1
SAT
(cf. 2.3.4, p. 56). Pour dterminer sa valeur, on ralise plusieurs expriences en
augmentant la valeur de D, puis on effectue un ajustement non-linaire sur les intensits
observes.

2.3 Description physique du transfert d'aimantation

2.3.1 Equations du transfert daimantation
Dans le modle deux compartiments (Henkelman, 1993), lvolution de laimantation de
A et B se caractrise par un temps de relaxation longitudinale (T
1
A,B
= 1/R
1
A,B
) et transversale
(T
2
A,B
). De plus, linteraction entre A et B peut se reprsenter par une constante dchange R
entre les deux compartiments. Le terme RM
O
B
reprsente la constante de vitesse de la raction A-
>B alors que RM
O
A
reprsente la constante de vitesse de la raction inverse. Avec cette
dfinition, le taux dchange entre A et B est RM
O
B
M
O
A
dans les deux directions. Les quations
ci-dessous dcrivant lvolution des aimantations longitudinale et transversale de A et B sont les
quations de Bloch auxquelles se rajoutent des termes de relaxation croise. De plus, les
paramtres de limpulsion de transfert daimantation (dure, amplitude et frquence) sont
galement pris en compte.

51


B A,
y
1
A B,
z
B A,
O
B A,
z
A B,
O
B A,
z
B A,
O B A,
B A,
z
M M M R M M R - ) M - (M R =
dt
dM
+ + [1.19]


M 2 -
T
M
-
dt
dM B A,
y
B A,

B 2A,
B A,
x
B A,
x
[1.20]


B A,
z

1
B A,
x
B A,

B 2A,
B A,
y
B A,
y
M - M 2 +
T
M
-
dt
dM
[1.21]


Dans ces quations:
R est exprime en s
-1

M
O
A
et M
O
B
sont les populations de spins de chaque espce lquilibre
thermodynamique.
R
A
et R
B
sont les constantes de vitesse (1/T
1
).

1
= B
1
est lamplitude de limpulsion de transfert daimantation, exprime en
rad/s.

A, B
est lcart entre la frquence de rsonance de lespce considre et la frquence
excitatrice de limpulsion de transfert. Il est gnralement admis que les protons libres de leau et
ceux des macromolcules ont la mme frquence de rsonance. Par consquent,
A
=
B
= . En
outre, mme si
A
et
B
sont lgrement diffrentes, leur diffrence reste ngligeable par rapport
aux valeurs de utilises (de l'ordre du kilohertz).


52
2.3.2 Solution ltat stationnaire
Pour simplifier ces quations, on peut dans un premier temps supposer que limpulsion de
transfert est suffisamment longue pour que les aimantations des espces A et B soient ltat
stationnaire. En supposant donc que dM/dt=0, laimantation dans le plan transversal devient:
B A,
z
2
B 2A,
B A,

B 2A, 1

B 2A,
B A,
B A,
x B A,
y M
) T (2 + 1
T -
T 2
M -
M

[1.22]

On dfinit:


) T (2 + 1
T
R
2
B 2A,
B A,

B 2A,
2
1
B) rf(A,

[1.23]

Le paramtre R
rfb
reflte la forme de la rsonance des protons lis des macromolcules.
Cest a priori une Lorentzienne dont la largeur mi-hauteur est trs importante, puisque les T
2
B

sont trs petits (quelques s) par rapport aux T
2
A
(> 10 ms). Cependant, plusieurs auteurs
(Henkelman, 1993; Morrison, 1995a; Morrison, 1995b; Swanson, 1992; Tzou, 1997) ont rapport
que le modle dcrit mal les donnes exprimentales lorsque R
rfb
est lorentzien. Ce phnomne a
dj t observ (Cohen-Tannoudji, 1992) en RMN des solides, ce qui semble cohrent puisque
linteraction dipolaire se manifeste de manire beaucoup plus marque dans la matire trs
organise. Pour contourner cette difficult, une alternative consiste choisir une forme de raie
diffrente pour les protons des macromolcules. Plusieurs fonctions ont t proposes, notamment
les fonctions gaussiennes (Henkelman, 1993) et superLorentziennes (Bloom, 1977; Wennerstrm,
1973). Leurs expressions mathmatiques respectives sont reportes ci-dessous:

fonction gaussienne:

[ ]
,
_

2
T 2 exp T
2
R

B
2
B
2
2
1
rfb

[1.24]

fonction superLorentzienne:

53

,
_

1
]
1

2 /
0
2
B
2
2
B
2 2
1
2

1 cos 3
T 2
2 exp sin d
1 cos 3
T
2 R

rfb

[1.25]

En reportant R
rf(a, b)
dans les quations [1.19] et en rordonnant les termes obtenus, il est
possible de supprimer M
Z
B
dans ces mmes quations. Lexpression du taux de transfert ltat
stationnaire M
SS
A
scrit alors:


M M R - ) R + R + RM ( ) R + R + RM (
RM R + ) R + R + M ( R
M
M
M
B
O
A
O
2
rfb B
A
O rfa A
B
O
B
O B rfb B
A
O A
A
O
A
z A
SS
R
[1.26]

Cette expression a t rapporte par le groupe dHenkelman (Henkelman, 1993). La valeur
de M
SS
A
est fonction des six paramtres (R
A
, R
B
, R, M
O
B
, T
2
A
, T
2
B
) ainsi que des
caractristiques de limpulsion de transfert daimantation ( et
1
) via le paramtre R
rfa,b
. Afin de
simplifier cette expression, on peut approximer R
rfa
par (
1
/2)
2
/T
2A
. En effet, le temps de
relaxation transversale des protons libres 4.7 T dans le cerveau de rat est de l'ordre de quelques
dizaines de millisecondes. Par consquent, en prenant 10 ms comme valeur limite, le second
terme du dnominateur de R
rfa
est suprieur 100 pour = 160 Hz. Puisque nous avons effectu
des mesures pour = 500 Hz, l'approximation est valide et lquation [1.26] devient, en
normalisant M
O
A
1:


) R + R + R ( )
T R
1
2
+ 1 ( +
R
RM
) R + R (
R + R + R +
R
RM
R
M

B rfb
2A A
2
1

A
B
O
B rfb

B rfb
A
B
O
B
A
SS

,
_

1
]
1

1
]
1

[1.27]


54
M
SS
A
ne dpend plus alors que des cinq paramtres (R, R
B
, RM
O
B
/R
A
, 1/R
A
T
2
A
et T
2
B
).
Les rsultats exprimentaux obtenus ltat stationnaire sur le cerveau de rat ont t modliss
laide de cette quation (cf. 4, p. 99).

2.3.3 Solution hors de ltat stationnaire
Pour expliquer l'volution des intensits observes en transfert d'aimantation en fonction de
la dure D de l'impulsion utilise, nous avons gnralis les quations obtenues par Henkelman et
al., en supposant que laimantation transversale est proche d'un tat stationnaire. En toute rigueur,
si M
X
et M
Y
ne varient pas dans le temps, il en est forcment de mme pour M
Z
. Cependant, si
nous considrons les valeurs respectives des T
1
OBS
et des T
2
(cf. p. 95), nous pouvons supposer
que l'aimantation transversale varie beaucoup moins que l'aimantation longitudinale pour des
valeurs de D suffisamment importantes par rapport T
2
(D > 5 T
2
). Dans la limite de validit de
cette approximation, on dduit de l'quation [1.22] une expression simplifie de la variation des
aimantations longitudinales des protons A et B (quations [1.19]):

A B,
z
B A,
O
B A,
O B A,
B A,
z
b a,
B A,
z
M M R M R + M =
dt
dM
+ [1.28]

expression dans laquelle

) R RM R ( =
b) rf(a,
A B,
O B A, b a,
+ + [1.29]

Ces deux quations diffrentielles ont pour solution une fonction bi-exponentielle et on
montre que lexpression de laimantation longitudinale des protons libres est la suivante:


m m
R - M M R R
t) (m exp c + t) (m exp c = (t) M
2 1
A b
A
O
B
O B
2 2 1 1
A
z

+ [1.30]

55

avec
2
M M 4R ) (
= m
A
O
B
O
2 2
b
a
b
a
2 1,
+ t +
[1.31]


Daprs lexpression des quations [1.31], on peut facilement montrer que m
1
et m
2
sont
ngatifs. Ceci implique quil sagit bien dune dcroissance exponentielle et que le troisime
terme de lquation [1.30] reprsente la valeur limite de M
Z
A
lorsque la dure de limpulsion non-
rsonante est suffisamment longue par rapport (m
1,2
)
-1
. De plus, ce terme est identique
lexpression de M
SS
A
obtenue ltat stationnaire (quation [1.26]). En outre, si m
2
/m
1
et c
1
/c
2

sont suffisamment grands devant 1, il est possible de ngliger le second terme de lquation
[1.30]. La justification de ces approximations sera donne au 7.2 (p. 122). Lquation de M
Z
A

en fonction de la dure (D) de limpulsion de transfert, de son amplitude (
1
) et de sa frquence
dexcitation () est alors:

2 1
A b
A
O
B
O B
1 1
A
z
m m
R - M M R R
t) (m exp c = (t) M

+ [1.32]

A
SS 1
A
SS
A
O
A
z M + t) (m exp ) M - (M = (t) M [1.33]

Pour dcrire correctement lvolution de M
Z
A
pendant lirradiation et en normalisant M
O
A

1, il est donc ncessaire de connatre les six paramtres suivants: R
A
, R
B
, R, M
O
B
, T
2
A
, T
2
B
.
Daprs ce qui a t dit au 2.3.3 (p. 52) concernant ltat stationnaire, le nombre de paramtres a
t rduit cinq (R, R
B
, RM
O
B
/R
A
, 1/ R
A
T
2
A
et T
2
B
) en supposant que R
rfa
peut tre approxim
(
1
/2)
2
/T
2A
. Il est donc ncessaire de dterminer R
A
pour calculer m
1,2
. Or, le temps de
relaxation longitudinal mesur (T
1
OBS
) par une exprience dinversion-rcupration (cf. 2.2.2)
par exemple, est diffrent du T
1A
cause des phnomnes de relaxation croise. La relation qui lie

56
R
A
R
A
OBS
peut tre facilement dduite de lquation [1.31], en supposant que
1
est gal zro.
On obtient le rsultat suivant:


) R R

R ( R
)

R

R ( M R
1

R
R
obs
A B
A
obs
A B
B
O
obs
A
A
+

+
[1.34]

De plus, dans le cas o R >> (R
B
- R
A
), la relation se simplifie:

)

R

R (
R
M R
1
R
R
obs
A B
A
B
O
obs
A
A
+
[1.35]
Cette quation est identique celle dmontre par Henkelman (Henkelman, 1993) en
intgrant les quations [1.19] en labsence dimpulsion de transfert.

2.3.4 Dfinition de T
1
SAT

Lquation [1.33] dcrit lvolution du taux de transfert en fonction de la dure D de
l'impulsion comme une dcroissance exponentielle dont la constante de temps est gale (m
1
)
-1
.
Ce temps de relaxation longitudinal apparent appel T
1
SAT
, plus court que le vritable T
1A
et
T
1
OBS
, est fonction des temps de relaxation du tissus tudi ainsi que des caractristiques de
limpulsion de transfert (
1
, ).


2.4 Spectroscopie musculaire
2.4.1 Phosphore-31
Protocole d'effort et squence d'acquisition:

57
L'ergomtre prsent au 1.3 (p. 9) est utilis pour effectuer des flexions plantaires en
basculant une pdale. Une bobine de surface (prsente p. 35) accorde la frquence de
rsonance du
31
P est place face au jumeau interne qui est mis contribution pendant cet
exercice. Des spectres sont ainsi enregistrs avant, pendant et aprs l'effort. L'effort maximal
(EM, cf. 1.3) que peut fournir le patient est dtermin au dbut de chaque exercice. L'exercice
consiste ensuite effectuer 120 basculements espacs de 4.3 s. les 60 premiers sont raliss
30 % de l'EM et les suivants 50 % de l'EM. La dure totale de l'effort est donc de 8 min 30 s, ce
qui correspond environ l'enregistrement de 35 spectres. Les 25 spectres restants permettent
d'observer les modifications mtaboliques intervenant pendant la priode de repos. La Figure 1.15
prsente le chronogramme type de l'exprience ralise.

spectroscopie
1 spectre:
4 accum. / 4.3 s
30 % EM
50 % EM
effort rcupration
ergomtre
60 rep. / 4.3 s 60 rep. / 4.3 s
t
t
35 spectres 25 spectres

Figure 1.15
Protocole d'effort utilis pour tudier le mtabolisme nergtique in vivo.


58
La squence utilise est compose d'une impulsion radiofrquence de profil rectangulaire
(100 s), immdiatement suivie par l'acquisition du FID:

Dlai de relaxation
FID
Temps de rptition

Figure 1.16
Squence utilise pour acqurir des spectres
31
P sur le mollet humain.

Pour obtenir une quantification exacte des mtabolites, il est ncessaire de connatre l'angle
de basculement des spins, ce qui est difficile avec la bobine de surface employe, ainsi que le
temps de relaxation longitudinal (T
1
) de chaque mtabolite, moins de travailler en condition
relaxe (T
R
~ 5 T
1
). Cependant, cette dernire condition limite la rsolution temporelle de
l'exprience et rend difficile l'observation des cintiques des ractions du mtabolisme
nergtique. Un compromis a t opr en choisissant un T
R
de 4.3 s et en procdant 4
accumulations pour chaque spectre. Pour valuer le facteur de saturation sur chaque mtabolite
( 1 R/T T e ), un spectre comportant le mme nombre d'accumulations est obtenu au dbut de chaque
exprience en utilisant un T
R
de 20 s. Les intensits des diffrentes rsonances des deux spectres
obtenus avec un T
R
de 4.3 s et 20 s sont pratiquement identiques, ce qui montre que le facteur de
correction peut tre nglig.
L'antenne utilise est une bobine de surface dcrite p. 35, pour laquelle les angles sont
ajusts en oprant deux ou trois spectres tmoins avant le dbut de l'exercice. La tension
applique correspond un angle d'environ 45 au centre de la bobine. Chaque spectre est obtenu
en effectuant quatre accumulations, ce qui donne une rsolution temporelle de 17.2 s. La dure
d'acquisition est de 340 ms (la fentre spectrale est de 3 kHz pour 1024 points). Le signal de

59
dpart de l'exercice est choisi de telle manire que le basculement de la pdale ne soit pas effectu
pendant l'acquisition du dclin de prcession libre.

Traitement des donnes:
Chaque FID est multipli par une exponentielle dcroissante avant d'oprer une transforme
de Fourier, afin d'amliorer le rapport signal sur bruit. La constante de temps de cette fonction est
de 16 ms, ce qui correspond un largissement de chaque rsonance d'environ 20 Hz. Les
spectres obtenus sont phass de telle manire que la partie relle de la transforme de Fourier soit
un spectre d'absorption. Ces spectres sont ensuite traits automatiquement l'aide d'un logiciel
dvelopp au laboratoire. Il effectue une dconvolution de chaque spectre en 5 fonctions
lorentziennes correspondant aux rsonances du phosphate inorganique (Pi), de la phosphocratine
(Pcr) et des trois rsonances de l'adnosine tri-phosphate (ATP
, ,
). L'intensit de chaque
rsonance est ensuite calcule et porte en fonction du temps. Les concentrations absolues sont
dtermines en admettant que la concentration en ATP est de 8.2 mM (Taylor, 1986a).
L'volution de la PCr au cours de la phase de rcupration est paramtre par une fonction
exponentielle, afin de calculer le temps caractristique (
PCr
) de la resynthse de ce mtabolite.
La dure totale du traitement des donnes sur un micro ordinateur (Power Macintosh) est
infrieure 5 minutes. Les rsultats obtenus sont prsents au 3.2 (p. 152).

Mesure du potentiel hydrogne (pH):
Le pH est mesur partir du dplacement chimique () de la rsonance du phosphate
inorganique (Pi). Les deux formes ionises du Pi (basique: H
2
PO
4
2-
et acide: HPO
4
2-
) ont des
dplacement chimiques diffrents
min
et
max
et leurs concentrations relatives (C
1
et C
2
) sont
fonction du pH du milieu. Ces deux composs sont en change chimique rapide et on observe sur
un spectre RMN qu'une seule rsonance dont la position est le barycentre des concentration C
1
et
C
2
.

60
La correspondance entre les dplacement chimiques et le pH est donne par l'quation de
Henderson-Hasselbach:
Pi max
min Pi

log pK pH

+ [1.36]
o:
pK = 6.75,
min
= 3.27,
max
= 5.69 (Taylor, 1986a) et
Pi
est la valeur du dplacement
chimique du Pi. En pratique, il suffit donc de mesurer la position de la rsonance du Pi sur chaque
spectre pour dterminer les variations du pH musculaire en fonction du temps. Dans cette mesure,
le dplacement chimique de la PCr est choisi comme rfrence interne.

Calcul de la concentration en ADP:
La concentration en ADP est calcule en supposant que la raction catalyse par la cratine-
kinase est l'quilibre.
ATP + Cr ADP PCr + H+

+
La constante d'quilibre K
eq
de cette raction 37 est connue et vaut:
[ ][ ]
[ ][ ][ ]
66 . 1
ADP PCr H
ATP Cr
Keq
+
M
-1

En supposant que la concentration de la cratine totale (C
T
= Cratine + Phosphocratine)
est constante et qu'elle vaut 42.5 mM dans le muscle (Taylor, 1986a), il est possible d'exprimer la
concentration en ADP en fonction de celles de l'ATP, de la PCr et du pH:
[ ]
[ ]
[ ]
1.66
10
ATP 1 -
PCr
10 42.5
ADP
pH
3 -

,
_

[1.37]

Calcul de la variation d'enthalpie libre (Gp) de la raction d'hydrolyse de l'ATP:
+ 2 H + Pi + ADP O H ATP

+
la constante d'quilibre de cette raction est la suivante:
[ ][ ][ ]
[ ]
[ ][ ]
[ ]
pH - eq 10
ATP
ADP Pi
ATP
H ADP Pi
K
+

et la valeur de l'enthalpie libre de la raction est :

61
( ) eq 0 K ln RT G Gp + [1.38]
o:
R est la constante des gaz (8.314 J.Mol
-1
.K
-1
) et T la temprature absolue (310 K).
La valeur de G
0
de la raction pH 7.0 et 310 K est calcule partir de la valeur de
l'enthalpie libre donne par Taylor et al. (Taylor, 1986a), qui n'a pas pris en compte le H+ dans la
raction d'hydrolyse de l'ATP. La valeur numrique est de -31.8 kJ.Mol
-1
, la constante d'quilibre
K'
eq
est donne par:
RT
3 10 31.8 '
eq

K
e
La valeur exacte de G
0
310 K est donc donne par la relation:
[ ] ( ) Mol kJ/ 9742 H K ln RT G eq ' 0 + .
Les rsultats de ces diffrents calculs sont ensuite ports en fonction du temps (cf. 2,
p. 138).

2.4.2 RMN du Carbone-13
Protocole d'tude:
Pour observer une diminution de la concentration en glycogne musculaire, il est ncessaire
d'effectuer un exercice arobie de longue dure. Diffrentes tudes (Moriarty, 1994; Perseghin,
1996; Price, 1991; Price, 1994a; Price, 1994b; Van Den Berg, 1996) ont montr que la dure de
cet exercice doit tre beaucoup plus importante que celle utilise pour l'tude du mtabolisme
nergtique. Pour des raisons videntes de confort du patient, nous n'avons pas utilis l'ergomtre
pour effectuer cet exercice. Cependant, l'ergomtre est insr dans l'aimant, afin de sangler le pied
et le genou du patient sur le dispositif et viter ainsi tout changement de position de la jambe
pendant la phase de rcupration suivant l'exercice. Aprs avoir test diffrents protocoles
d'effort, nous avons opt pour un exercice consistant effectuer des flexions plantaires jambes
tendues en position debout.


62

Figure 1.17
Mouvement effectu pour consommer le glycogne musculaire du mollet.

Ce mouvement est ralis une frquence d'environ 0.5 Hz, jusqu' ce que les flexions ne
soient plus ralisables. La dure de l'exercice est donc diffrente d'un individu l'autre, en
fonction de ses aptitudes physiques, mais se situe autour de 90 10 min (moy ESM).
Ds l'exercice termin, le patient est install sur l'ergomtre qui est insr dans l'aimant,
puis des spectres de RMN du
13
C sont enregistrs intervalles rguliers durant 3h30 environ, afin
de mesurer la cintique de resynthse du glycogne musculaire. Ces spectres sont alors compars
aux spectres de rfrence obtenus avant le dbut de l'exercice.

Squence utilise:
Une impulsion d'amplitude constante est envoye pendant 100 s sur la bobine de surface
(dcrite p. 35) accorde la frquence de rsonance du
13
C 4.7 T. Elle est immdiatement
suivie de l'enregistrement du FID et un dlai de relaxation trs court (~ 30 ms environ) spare
chaque acquisition. De plus, afin d'amliorer la lisibilit des spectres, une impulsion
radiofrquence de "dcouplage" est envoye sur l'antenne proton pendant l'acquisition. Cette
impulsion est constitue d'impulsions lmentaires d'amplitude constante spares par des dlais
trs courts. Elles ont pour effet d'annuler l'volution due aux couplages scalaires htronuclaires
"J
CH
" (cf. 2.5, p. 65) carbone-proton, qui se traduisent sur les spectres par l'apparition de
rsonances multiples. L'intensit du singulet ainsi obtenu est gale la somme des intensits de

63
chaque rsonance du multiplet. Il est donc particulirement intressant d'utiliser une squence de
dcouplage pour amliorer le rapport signal sur bruit, tant donne la trs faible sensibilit du
13
C
la RMN. L'impulsion de dcouplage est applique pendant un tiers de la dure de l'acquisition
(soit 15 ms environ), pour limiter la puissance dpose. Sa frquence porteuse est applique la
frquence de rsonance de l'eau et son amplitude est ajuste jusqu' disparition des rsonances des
multiplets.

0
J
A
13
C
1
H
t
1
H
13
C
t
T.F.
B

Figure 1.18
Squence utilise pour obtenir des spectres
13
C dcoupls
1
H, sans (A) et avec (B)
dcouplage proton.

Chaque FID est obtenu en 5 min environ, puisqu'ils sont constitus de 4500 accumulations
obtenues avec un T
R
de 0.075 s, une fentre spectrale de 12 kHz et 512 points.
Etant donn la faible concentration du glycogne musculaire, nous avons choisi d'accumuler
un grand nombre de FID avec un T
R
court, plutt que de travailler en condition relaxe
(T
R
~ 5 T
1
). Le signal recueilli est donc partiellement satur et dpend des valeurs relatives du T
R
,
du T
1
et de l'angle d'impulsion () utilis. On montre, en supposant que l'aimantation transversale
a disparu entre 2 acquisitions successives, que l'amplitude de ce signal a pour expression:
) /T (-T
) /T (-T
O
R
Z
1 R
1 R
e cos - 1
e - 1
sin
M
) (T
M

[1.39]

64
La drive de cette expression en fonction de donne langle optimal dimpulsion
opt

(angle de Ernst):
) /T (-T opt 1 R e cos [1.40]
Les T
1
du glycogne ont t estims 140 ms sur le foie par Zang et al (Zang, 1990). Ces
auteurs ont montr que le T
1
du glycogne mesur in vivo est trs proche de celui obtenu in vitro.
D'autre part, ils ont propos un modle qui permet d'estimer les valeurs du T
1
et ils ont montr
que le temps de relaxation longitudinal varie essentiellement en fonction de la valeur de
l'induction statique B
O
. Par consquent, il nous semble raisonnable de supposer que le T
1
qu
glycogne musculaire est voisin de celui obtenu dans le foie 4.7 T. En utilisant cette valeur de
140 ms et un T
R
de 75 ms, on aboutit, en utilisant l'quation [1.40], un angle optimal de 53
environ. Cependant, l'antenne de surface utilise ne permet pas de dterminer avec prcision
l'angle d'impulsion, puisque l'induction qu'elle gnre est trs inhomogne (cf. 0, p. 35). Nous
avons donc choisi d'ajuster la valeur de la tension aux bornes de l'antenne en effectuant plusieurs
spectres au repos.
Pour amliorer le rapport signal sur bruit, les FID sont multiplis par une exponentielle
dcroissante dont la constante de temps vaut environ 5 ms, ce qui correspond un largissement
des rsonances de 60 Hz.

Traitement des donnes
L'intensit de la rsonance des CO (172 ppm) est utilise comme rfrence interne pour
normaliser l'intensit de la rsonance du glycogne tout au long de l'exprience. Le programme de
dconvolution automatique des spectres utilise pour la spectroscopie du
31
P ne donne pas de
bons rsultats, car l'amplitude de la rsonance du glycogne est trs faible. Celle-ci est donc
mesure par intgration du spectre entre 105 ppm et 90 ppm, aprs avoir corrig manuellement
les distorsions de la ligne de base. Cette opration est ralise en choisissant des points situs
dans le bruit de fond sur diffrentes rgions du spectre. Un programme automatis cr alors une
fonction Y(i) en chaque point abscisse X(i) du spectre, en ralisant une interpolation de type

65
"spline" entre les diffrents points slectionns. La courbe obtenue est ensuite soustraite du
spectre de dpart et l'intgrale de la rsonance du glycogne est mesure.
L'volution du rapport glycogne/CO est ensuite porte en fonction du temps. Les rsultats
obtenus sont prsents au 3 (p. 151).

2.5 Edition htronuclaire
2.5.1 Principe
Avant de prsenter la squence utilise pour raliser une dition htronuclaire, il est
ncessaire de mettre en place le formalisme employ. Celui-ci permet en effet d'expliquer
l'volution temporelle de deux spins A (proton) et X (carbone-13) coupls scalairement. Ce type
d'interaction est la consquence d'un couplage entre les lectrons de liaisons qui sont apparis
dans les systmes diamagntiques. Lorsqu'on soumet une induction magntique un systme de n
spins coupls scalairement, l'hamiltonien total H est alors compos de deux termes, la
contribution Zeeman H
z
et le terme de couplage scalaire, not H
J
.
J z H H H + [1.41]
avec:

n
i 1
i
z
i z
I
H et

>


n
i j i , 1
j i
ij J
I I
J H [1.42]
o

i I est le spin du noyau i et J

ij
est la constante de couplage entre les spins i et j. Dans le
cas des couplages
1
H-
13
C, les valeurs de J sont de l'ordre de la centaine de Hz. Par consquent, le
terme Zeeman est prpondrant par rapport H
J
, puisque les frquences de rsonances 4.7 T
sont de l'ordre de la centaine de mgahertz. Nous allons donc dans un premier temps dterminer
une base de vecteurs propres |
(k)
> de H
Z
, ainsi que les nergies correspondantes. Les

66
modifications apportes par le terme de couplage scalaire H
J
seront ensuite calcules sur cette
base de vecteurs propres, en ayant recours la mthode des perturbations.

Le systme considr est donc constitu de n spins 1/2 sans couplages J. Il est facile de
construire la base de vecteurs propres |
(k)
> de H
Z
, en crivant tous les produits possibles des
vecteurs propres individuels de chaque spin:
|
(k)
> = |
1
(k)

2
(k)

3
(k)

i
(k)

n-1
(k)

n
(k)
>, avec
i
(k)
=
i
ou
i
(niveaux
d'nergies fondamental et excit du spin i).
Cette base est orthonorme puisque tous les |
i
(k)
> sont tous norms et orthogonaux entre
eux. Le calcul de H
Z
sur cette base donne les valeurs suivantes de l'nergie E
(k)
:

n
i
2
E
i (k)
i (k)

[1.43]
avec
i
(k)
= 1 ou -1, pour |
i
(k)
> = |
i
> ou |
i
> respectivement. Pour un systme de deux
spins 1/2, on obtient donc 4 vecteurs propres |
(k)
> et quatre niveaux d'nergies E
(k)
.


67
A X
A X
A X
A X
E
(
13
C) (
1
H)
X A
E
E E

Figure 1.19
Niveaux d'nergie d'un systme de deux spins 1/2 sans couplages J. Les flches indiquent
les transitions permises.

Les transitions permises entre ces niveaux sont obtenues en appliquant l'oprateur de
monte
+
n
i
I
F
i
+ sur chaque vecteur propre, puis en valuant le produit scalaire <'
(k)
|F
+
|
(k)
>. Si

68
cette valeur est diffrente de zro, la transition est permise entre les niveaux d'nergies E
(k)
et
E'
(k)
, correspondants aux vecteurs propres |
(k)
> et |'
(k)
>. Les rsultats de ces calculs pour 2 spins
1/2 A (
1
H) et X (
13
C) montrent qu'il existe 4 transitions permises. Elles sont gales 2 2 et les
frquences correspondantes sont gales
A
et
X
.

Calcul des perturbations.
Le calcul de l'influence du couplage J sur les frquences de rsonance du systme fait appel
la thorie des perturbations au premier ordre. On montre en effet que le terme au second ordre
est ngligeable devant celui au premier ordre, en considrant les valeurs respectives de J et des
frquences de rsonance (couplage faible) 4.7 T. Le dveloppement des calculs de l'Hamiltonien
H
J
sur les vecteurs propres |
(k)
> permet de montrer que seul le produit des oprateurs I
z
i
I
z
j

conduit un rsultat non nul. Pour le systme de deux spins 1/2, le calcul du produit scalaire
<
(k)
| I
z
A
I
z
X
|
(k)
> montre que l'nergie des niveaux E
1
et E
4
est augmente de hJ/4 (o h est la
constante de Planck) alors que celle des niveaux E
2
et E
3
est diminue de hJ/4. Les transitions
permises sont identiques celles dtermines prcdemment et on observe donc 4 transitions aux
4 frquences:
A
+J/2,
A
-J/2,
X
+J/2,
X
-J/2:


69
A X
A X
A X
A X
E
(
1
H)
A
(
13
C)
X
E
E E
+J/4
-J/4
-J/4
+J/4
E' E'
E' E'
E' /h E' /h E' /h E' /h
J=0 J0
J J

Figure 1.20
Comparaison entre les niveaux d'nergie d'un systme de deux spins 1/2 sans et avec
couplage J. Les flches indiquent les transitions permises. h est la constante de Planck qui
vaut 6.62 10
-34
J.s.

Consquences sur un spectre RMN:
Dans le cas d'un spin d'un noyau
13
C (rsonant la frquence
X
) coupl scalairement un
spin d'un noyau
1
H (rsonant la frquence
A
), les frquences de rsonances du systme ainsi

70
form sont donc
C
J/2 et
H
J/2. Deux rsonances espaces de J Hz sont donc observes
autour des frquences de rsonance
C
et
H
(cf. Figure 1.18, p. 63). L'application d'une onde
radiofrquence la frquence
H
permet donc de saturer les rsonances du proton et d'annihiler
tout effet d aux couplages scalaires. Le systme de spins est alors quivalent un ensemble de n
spins sans couplages, pour lequel nous avons dmontr que les quatre rsonances sont identiques
2 2 (cf. Figure 1.19, p. 67). En appliquant une impulsion de dcouplage, le doublet carbone
devient alors un singulet la frquence
C
, dont l'intensit est la somme des intensits de chaque
rsonance du doublet.

Evolution temporelle de 2 spins 1/2 coupls scalairement.
Pour dcrire compltement l'tat d'un systme constitu de deux spins 1/2 coupls
scalairement, on fait appel au formalisme de l'oprateur densit . L'tat du systme de spins
l'instant t est dcrit par une fonction d'onde (t) qui se dcompose sur les tats propres |
(k)
>:
>
2n 2
i
(k) k | (t) c (t) [1.44]

les lments de la matrice densit qui reprsente l'oprateur sont dfinis par:

ij
= c
i
c
j
* [1.45]
Les termes diagonaux
kk
reprsentent la population du niveau k. Les termes non-diagonaux
reprsentent quant eux les cohrences de phases qui peuvent exister (si
ij
? 0) entre les tats
propres |
(i)
> et |
(j)
>. Ces cohrences sont classes en fonction de la diffrence des valeurs
propres de l'oprateur
n
i
z I
Fz .

71
L'volution temporelle de l'oprateur est donne par l'quation de Liouville-Von Neuman:
[ ] H(t) , 2i
dt
d

[1.46]

Par consquent, si on dtermine l'hamiltonien H(t) pour diffrents vnements (une priode
de prcession libre ou une impulsion radiofrquence) et si on connat la valeur de tous les
ij

l'instant t=0, on est en mesure de prvoir l'tat du systme de spins n'importe quel instant.
Il est cependant ncessaire de trouver une base sur laquelle dvelopper l'oprateur . Celle-
ci doit comporter 2
2n
(=16 pour 2 spins 1/2) vecteurs propres et tre orthonorme. On peut
montrer qu'il est possible de construire une base cartsienne e(x, y, z) partir des combinaisons
des tats propres des spins A et X. Ceci donne, pour un systme de deux spins 1/2:
e(x, y, z) = {I
X
A
, I
Y
A
, I
Z
A
, E
A
}{I
X
X
, I
Y
X
, I
Z
X
, E
X
} = e
A
(x, y, z) e
X
(x, y, z), o E est
l'oprateur identit.
Les 16 vecteurs propres ainsi forms sont donc constitus des oprateurs produits:
2I
X
A
I
X
X
2I
X
A
I
Y
X
2I
X
A
I
Z
X
I
X
A
E
X

2I
Y
A
I
X
X
2I
Y
A
I
Y
X
2I
Y
A
I
Z
X
I
Y
A
E
X

2I
Z
A
I
X
X
2I
Z
A
I
Y
X
2I
Z
A
I
Z
X
I
Z
A
E
X

E
A
I
X
X
E
A
I
Y
X
E
A
I
Z
X
E
A
E
X
.
Le facteur 2 est introduit pour satisfaire la condition de normalisation.

Cette base permet donc de dcrire le systme de spins en fonctions des coordonnes de
l'espace. Cependant, la notion de cohrence n'apparat pas dans cette formulation. Celle-ci peut
tre mise en vidence en effectuant un changement de base appropri. En effet, les oprateurs E
j


72
et I
i
j
(avec i=x, y, z et j= A, X) peuvent s'exprimer en fonction des oprateurs de monte et
descente (I
+
j
et I
-
j
) ainsi que des oprateurs de population I

j
(avec
j
=
j
ou
j
) des niveaux
d'nergie:

I
Z
A
= (I

A
- I

A
)/2 I
X
A
= (I
+
A
+ I

A
)/2 I
Y
A
= (I
+
A
- I

A
)/2i E
A
= (I

A
+ I

A
)/2
I
Z
X
= (I

X
- I

X
)/2 I
X
X
= (I
+
X
+ I

X
)/2 I
Y
X
= (I
+
X
- I

X
)/2i E
X
= (I

X
+ I

X
)/2

La base forme par les oprateur I
+
j
, I
-
j
, I

j
et I

j
est appele base des lments simples.
On rappelle que seul un oprateur de monte ou de descente correspond une transition
d'nergie entre deux tats propres. De plus, on peut exprimer chacun de ces oprateurs sur la base
des vecteurs propres |
j
>= |
j
> ou |
j
> sous la forme de projecteurs, puisque:
I

A
= |
A
><
A
| I

A
= |
A
><
A
| I
+
A
= |
A
><
A
| I

A
= |
A
><
A
|
I

X
= |
X
><
X
| I

X
= |
X
><
X
| I
+
X
= |
X
><
X
| I

X
= |
X
><
X
|

Un oprateur produit entre ces 2 de ces oprateurs s'crit donc, dans la base des vecteurs
propres |
(k)
> = |
A

X
> du systme de deux spins 1/2 (cf. Figure 1.20, p. 69):

X X ' ' j
A
i I I A A
X

avec:
i et j = , , + ou -

A
et '
A
=
A
ou
A
, en fonction de i.

73

X
, '
X
=
X
ou
X
, en fonction de j.
Pour dterminer le degr p de cohrence (p = 0, 1, 2), il suffit de compter le nombre de "+"
et de "-" dans l'oprateur produit I
i
A
I
j
X
. Par exemple, l'oprateur I
+
A
I

X
correspond une
cohrence 0 quantum, alors que I
+
A
I

X
et I

A
I

X
correspondent une cohrence 1 quantum
(observables) et que I

A
I

X
et I
+
A
I
+
X
sont des cohrences 2 quanta. Les 16 oprateurs produits
de cette base sont donc regroups en quatre classes, correspondant aux cohrences 0, 1 et 2
quanta et aux termes de population (pas d'oprateur de monte ou descente, comme I

A
I

X
):

74
x
y
z
A
1
A
2
x
y
z
x
y
z
X
1
X
2
A X
E/2 I
A
Z
I
X
Z
I
X
Z
I
A
Z
2
POPULATIONS
x
y
z
x
y
z
x
y
z
x
y
z
A
1
A
2
A
1
A
2
X
1
X
2
X
1
X
2
I
A
X
I
A
Y
I
X
Y
I
X
X
x
y
z
x
y
z
x
y
z
x
y
z
A
X X
A X
A
A
X
I
A
Z
I
X
X
2
x
y
z
x
y
z
x
y
z
x
y
z
A
2
A
1 A
1
A
2
X
1
X
1
X
2
X
2
x
y
z
x
y
z
x
y
z
x
y
z
A
X
X
A
X
A
A
X
COHERENCES A 1 QUANTUM
COHERENCES A 0 ET 2 QUANTA
I
A
Y
I
X
Z
2 I
A
X
I
X
Z
2 I
A
Z
I
X
Y
2
I
A
X
I
X
X
2 I
A
X
I
X
Y
2 I
A
Y
I
X
X
2 I
A
Y
I
X
Y
2

Figure 1.21
Reprsentation des 16 oprateurs produits de la base cartsienne. Seules les cohrences
1 quantum sont observables. Les flches en caractres gras sont une reprsentation
"globale" du systme. Les vecteurs A
1
, A
2
, X
1
et X
2
reprsentent les aimantations suivant

75
les axes x, y et z des transitions d'nergie E'
2
= h(
A
+ J/2), E'
4
= h(
A
- J/2),
E'
1
= h(
X
+ J/2) et E'
3
= h(
X
- J/2), respectivement.

La base cartsienne est utilise pour dterminer les aimantations des spins suivant les axes
x, y et z, alors que la base des lments simples permet de dterminer les cohrences ou les
observables correspondant chaque oprateur produit.

2.5.2 Evolution pendant une priode de prcession libre
Lorsque l'hamiltonien du systme est indpendant du temps, l'intgration de l'quation de
Liouville-Von-Neuman conduit l'expression suivante pour (t):

Ht) (i2 Ht) i2 ( e (0) e (t) [1.47]

avec ) I I 2 ( J + I H
j
Z
j < i
i
Z j
i
i
Z i i et
i
est la frquence de rsonance du spin i, dans le repre
tournant.
On applique l encore le changement de base vers la base des lments simples, puisque
l'expression des valeurs propres de I

i,j
, I

i,j
, I
+
i,j
et I
-
i,j
dans la base des |
(k)
> sont connues. La
transformation d'un oprateur produit s'crit donc dans cette base:

t i
I I e
j i, j i,

, avec +
<j i
j i j i ij
i
i i i ) m m m' (m' J 2 ) m (m' 2 [1.48]

o i, j dsignent A et X et m
i
, m'
i
, m
j
, m'
j
= 1/2, en fonction des valeurs de
i,j
et
i,j
:
I

i,j
= |
i,j
><
i,j
| m
i,j
= 1/2 et m'
i,j
= 1/2
I

i,j
= |
i,j
><
i,j
| m
i,j
= -1/2 et m'
i,j
= -1/2

76
I
+
i,j
= |
i,j
><
i,j
| m
i,j
= 1/2 et m'
i,j
= -1/2
I

i,j
= |
i,j
><
i,j
| m
i,j
= -1/2 et m'
i,j
= 1/2
Effet de dplacement chimique:
Le premier terme de reprsente l'effet du dplacement chimique. Les transformations
apportes par ce terme seul conduisent aux relations suivantes:
I
X
i
-> I
x
i
cos(
i
t) + I
y
i
sin(
i
t), avec
i
= 2
i

I
Y
i
-> -I
x
i
sin(
i
t) + I
y
i
cos(
i
t)
I
Z
i
-> I
z
i


Effet du couplage scalaire:
Le second terme de reprsente l'effet du couplage scalaire. Pour un systme de deux spins
1/2, ce terme se rsume 2 J (m'
A
m'
X
- m
A
m
X
). D'aprs cette expression, on voit
immdiatement que les termes de population donnent une phase nulle, puisque les valeurs propres
m
i,j
=m'
i,j
pour chaque oprateur I

i,j
et I

i,j
. De mme, les cohrences 0 et 2 quanta conduisent
=0, puisque m
i,j
= -m'
i,j
. Les modifications de phase concernent donc seulement les cohrences
1 quantum. Pour dterminer l'volution temporelle d'un oprateur produit exprim dans la base
cartsienne, il suffit donc d'crire ce dernier dans la base des lments simples et de calculer la
phase de chacun des lments. On rarrange ensuite le rsultat obtenu pour former une
combinaison d'oprateurs produits de la base cartsienne.

Par exemple, l'oprateur I
X
A
qui est un doublet en phase du spin A (
1
H) align suivant l'axe
x, se transforme de la manire suivante:
I
X
A
I
X
A
cos() + 2I
Y
A
I
Z
X
sin (), avec =Jt
C'est une combinaison d'observables pour le spin A, que l'on peut donc reprsenter dans le
plan xOy du repre tournant:


77
X
Y
A
1
A
2
X
Y
A
2
A
1
t=1/2J
t=0
X
Y
A
2
A
1
t=1/J
X
Y
A
2
A
1
= Jt
t quelconque
I
X
A
2I
Y
A
I
Z
X
-I
X
A
I
X
A
cos ( ) +2I
Y
A
I
Z
X
sin )

Figure 1.22
Evolution aprs une priode d'volution d'un doublet en phase (A
1
, A
2
) suivant x t=0,
sous l'effet de l'Hamiltonien de couplage scalaire uniquement. La reprsentation est donne
dans le repre tournant.

A t=0, le doublet est en phase suivant x, puis se transforme en doublet anti-phase suivant y
t=1/2J. On peut ainsi dterminer l'tat du systme de spin n'importe quel instant en effectuant
les calculs de phase sur chaque oprateur de la base cartsienne.

Conclusion:
Les rsultats obtenus peuvent se rsumer de la faon suivante:
-Les termes de population (E
A
E
X
, E
A
I
Z
X
, I
Z
A
E
X
et 2I
Z
A
I
Z
X
) n'voluent pas.
-Les cohrences 1 quantum (2I
X
A
I
Z
X
, 2I
Y
A
I
Z
X
, 2I
Z
A
I
X
X
, 2I
Z
A
I
Y
X
, I
Y
A
E
X
, I
X
A
E
X
, E
A

I
X
X
, E
A
I
Y
X
) auxquelles sont associs des doublets A ou X prcessent aux frquences J/2
dans le repre tournant (cf. Figure 1.22). Il faut galement tenir compte de l'effet de
dplacement chimique dans le calcul du dphasage.

78
-Les cohrences 0 et 2 quanta (2I
X
A
I
X
X
, 2I
X
A
I
Y
X
, 2I
Y
A
I
X
X
, 2I
Y
A
I
Y
X
) voluent en
fonction du dplacement chimique de chaque spin (v
A
et
X
), cause du premier terme de
l'hamiltonien H (cf. Prcdemment).

2.5.3 Impulsion radiofrquences
L'Hamiltonien H
rf
d'une impulsion radiofrquence peut s'crire dans le repre tournant:

i
i
x
1i i
rf
I
2
B
H

[1.49]
Cette expression est indpendante du temps et il est possible d'utiliser l'quation [1.47]. Par
souci de concision, les dtails des calculs ne sont pas reports ici. On montre que le rsultat est
analogue au modle vectoriel des quations de Bloch. En effet, il suffit d'appliquer une rotation
d'angle appropri chaque terme des oprateurs produits exprims dans la base cartsienne. Une
impulsion non slective agira sur les vecteurs A et X, alors qu'une impulsion slective agira
spcifiquement sur A ou X.
Par exemple, une impulsion d'inversion non slective aligne suivant l'axe x (
X
)
transforme l'oprateur 2I
X
A
I
Z
X
en -2I
X
A
I
Z
X
. On observe alors un doublet en phase et ngatif
align sur l'axe x du repre. Si cette impulsion est applique uniquement sur le spin X, on aboutit
au mme rsultat. Par contre, si elle est applique uniquement sur A, l'oprateur 2I
X
A
I
Z
X
reste
inchang et le doublet observ est en phase et align suivant +x:

79
X
y
z
A
x
2I
X
A
I
Z
X
(
x
)
X
(
x
)
A
x
y
A
1
A
2
X
y
z
A
x
x
y
A
1
A
2
-2I
X
A
I
Z
X
x
y
A
1
A
2
X
y
z
A
x
X
y
z
A
x
x
y
A
1
A
2
2I
X
A
I
Z
X
(
x
)
A,X

Figure 1.23


Effet d'une impulsion d'inversion applique suivant l'axe x du repre cartsien sur
l'oprateur produit 2I
X
A
I
Z
X
, en fonction de sa slectivit, dans le repre tournant.

2.5.4 Influence d'un gradient de champ magntique
Il a t dmontr (Hurd, 1991b; Ruiz-Cabello, 1992; Van Zijl, 1993) que le dphasage
i

d'une cohrence induit par un gradient de champ magntique G est le suivant:

0
i i j j i dt (t) r ). (t G ) p ( [1.50]
o p
j
est la cohrence d'ordre -1, 0 ou 1 du noyau de rapport gyromagntique
i
situ au
point dfini par le vecteur r
i
(t). En supposant que la dure du gradient () d'amplitude constante G
est suffisamment courte pour considrer que la position du spin i est fixe, l'expression prcdente
devient:

j
G r ) p ( j j i [1.51]

80
dans le cas d'un couplage
1
H-
13
C, soumis une succession de gradients G
i
, la phase totale
s'crit:

+
i
o
i i X X A A
i
i
dt t G r p p

) ( ) ( i [1.52]
Par exemple, l'oprateur produit I
+
A
I
+
X
est dphas de (
A
+
X
) G r par un gradient G de
dure , alors que l'oprateur I
+
A
I
-
X
sera dphas de (
A
-
X
) G r .
La condition pour refocaliser une cohrence est =0.

2.5.5 Squence d'dition htronuclaire utilise dans ce travail
Nous rappelons que les objectifs poursuivis sont les suivants:
-Localiser un signal proton l'intrieur d'un volume d'intrt de taille et de position
ajustables.
-Supprimer la rsonance de l'eau ainsi que celles des protons lis aux
12
C.
Nous allons dans un premier temps prsenter le principe de slection spatiale, puis nous
expliquerons la squence d'dition htronuclaire et nous prsenterons pour finir la squence que
nous avons dveloppe.

Slection de la rgion d'intrt: ROI
La localisation spatiale est obtenue l'aide de la squence PRESS (Bottomley, 1987). Elle
est constitue de 3 impulsions radiofrquences successives (90-
1
-180-
2
-180) pendant
lesquelles un gradient de champ magntique est appliqu sur 3 directions orthogonales entre elles:


81
40
30
20
10
0
S

/

B
3000 2000 1000
40
30
20
10
0
3000 2000 1000
40
30
20
10
0
S

/

B
3000 2000 1000
Dlai d'inversion / ms
40
30
20
10
0
3000 2000 1000
Dlai d'inversion / ms
CC NG
LT T

Figure 1.24
Squence PRESS, permettant de raliser une slection spatiale.

On slectionne ainsi successivement une tranche perpendiculaire Z, puis Y et enfin X.
Les deux impulsions d'inversions (180) induisent ainsi une refocalisation des spins uniquement
dans le volume dfini par l'intersection des trois tranches. Un cho de spin est ainsi observ
l'instant 2
2
. Nous avons choisi d'utiliser cette squence plutt que la squence STEAM qui est
compose de 3 impulsions d'amplitudes identiques, puisque nous utilisons une antenne dont
l'induction est homogne. De plus, une tude comparative des sensibilits de ces deux mthodes a
montr que la squence PRESS permet thoriquement d'obtenir un meilleur rapport signal sur
bruit que la squence STEAM (Moonen, 1989). Cependant, dans la pratique, il se peut que le gain
escompt ne soit pas obtenu, notamment cause des diffrences de profil d'excitation des
impulsions 90 et 180.


82
Slection des cohrences
La squence gnralement utilise pour diter spcifiquement les rsonances des protons
coupls aux
13
C est drive de la squence Heteronuclear Multiple Quantum Coherence
(HMQC), prsente ci-dessous:

FID
1 / 2 J 1 / 2 J t
1
t
1
5
90
2
90
4
13
C
1
H
Impulsion radiofrquence d' angle et de phase

180
3
90
1

Figure 1.25
Chronogramme de la squence HMQC permettant de raliser un dition htronuclaire.
L'tat du systme est indiqu dans le Tableau 1.2 (p. 83) conformment au formalisme des
oprateurs produits exprims dans la base cartsienne.

La succession d'impulsions 90-180 du canal
1
H permet de former un cho de spin
l'instant 1/J + 2t
1
. L'influence du dplacement chimique sur la phase des signaux est nulle,
puisque le dphasage induit pendant le premier intervalle est compens par celui du second
intervalle, grce l'impulsion d'inversion (180). Une impulsion 90 est ensuite applique la
frquence de rsonance du
13
C, aprs un dlai correspondant 1/2J. Un dlai de relaxation t
1

ajustable est ensuite laiss entre cette impulsion et l'impulsion (180)
Y
proton. Aprs un autre
dlai t1 identique, une impulsion 90
13
C est nouveau applique suivant l'axe x du repre. La
phase de celle-ci est inverse (x) d'une acquisition l'autre. Aprs un dlai 1/2J, le signal est
enregistr en lui appliquant une phase identique celle de la seconde impulsion
13
C. L'intrt
d'une telle squence peut tre compris en dterminant l'tat du systme form par 2 spins 1/2
coupls scalairement, en fonction de la phase de l'impulsion
13
C. Le Tableau 1.2 suivant donne

83
l'tat d'un systme de 2 spins A (
1
H) et X (
13
C) coupls scalairement chaque instant
caractristique de la squence HMQC (cf. Figure 1.25).

Evnement Spins 1/2 A et X coupls scalairement (J)
(90)
x

1
H I
Y
A

dlai de relaxation 1/2J -2I
X
A
I
Z
X

(90)
x

13
C -2I
X
A
I
Y
X

dlai de relaxation t
1
2 [-I
X
A
cos(
2
) + I
Y
A
sin(
2
)] [I
Y
X
cos(
1
) + I
X
X
sin(
1
)]
(180)
y

1
H 2 [I
X
A
cos('
2
) + I
Y
A
sin('
2
)] [I
X
X
cos('
1
) + I
Y
X
sin('
1
)]
dlai de relaxation t
1
2I
X
A
I
X
X
sin(") + 2I
X
A
I
Y
X
cos(")
(90)
x

13
C
ou (90)
-x

13
C
- 2I
X
A
I
Z
X
cos(") + 2I
X
A
I
X
X
sin(")
2I
X
A
I
Z
X
cos(") + 2I
X
A
I
X
X
sin(")
dlai de relaxation 1/2J
- 2I
Y
A
I
Z
X
cos(") + (pas observable)
2I
Y
A
I
Z
X
cos(") + (pas observable)
Tableau 1.2
Evolution des tats de 2 spins 1/2 A et X, en fonction des impulsions et des dlais de
relaxation de la squence HMQC. Pour l'tat final, seuls les oprateurs correspondant des
observables sont donns. Les valeurs des angles
1
et '
1
sont de 2
X
t
1
alors que
2
et '
2

valent 2
A
t
1
et " 2
X
(2t
1
).

On obtient donc dans les 2 cas un doublet en phase proton, ngatif ou positif
( 2I
Y
A
I
Z
X
cos(2
X
(2t
1
))) et align suivant l'axe y du repre. En oprant la diffrence des
signaux obtenus d'une acquisition l'autre, on obtient toujours l'tat 2I
Y
A
I
Z
X
cos(2
X
(2t
1
)). Par
contre, les signaux protons provenant des spins non coupls scalairement des noyaux
13
C se
soustraient, puisque leur aimantation est toujours aligne suivant +y. La squence HMQC permet
donc d'diter uniquement les rsonances des protons coupls au
13
C. La modulation de
l'amplitude du signal observ est sinusodale et dpend de la diffrence entre la frquence
porteuse
13
C et le dplacement chimique du mtabolite diter.

84

Utilisation de gradients de champ magntique: squence ge-HMQC
L'utilisation de la squence HMQC ncessite l'accumulation de deux signaux conscutifs
avec des phases opposes. Etant donne la trs grande quantit d'eau des tissus biologiques,
l'limination de cette rsonance par cette mthode n'est pas suffisante pour observer des
mtabolites dont la concentration est trs faible. On utilise alors plusieurs gradients d'amplitudes
diffrentes, choisies de telle manire que le signal de l'eau soit dphas. Il est bien entendu
ncessaire que le dphasage induit par ces gradients soit nul pour les mtabolites dits. Plusieurs
solutions ont t proposes et nous avons retenu la mthode "gradient enhanced heteronuclear
multiple quanta coherences" (ge-HMQC) (Ruiz-Cabello, 1992; Van Zijl, 1993), prsente sur la
Figure 1.26.

FID
1 / 2 J 1 / 2 J
5
90
2
90
4
13
C
Grad. X
Grad. Y
Grad. Z
1
H
Gradient de slection de cohrence
Gradient d' limination d' eau
Impulsion radiofrquence d' angle et de phase

t
1
t
1
G
2
G
1
G
3
G
4
180
3
90
1

Figure 1.26
Chronogramme de la squence ge-HMQC, permettant d'amliorer l'limination de l'eau.


85
-Calcul du dphasage apport par les Gradients G
1
et G
2
:
D'aprs les calculs prsents dans le Tableau 1.2 (p. 83), l'tat du systme juste aprs la
premire impulsion 90
13
C est dcrit par l'oprateur produit -2I
X
A
I
Y
X
. Cet oprateur est une
combinaison des cohrences 0 quantum (I
+
A
I
-
X
, I
-
A
I
+
X
) et 2 quanta (I
+
A
I
+
X
, I
-
A
I
-
X
). A la fin du
premier gradient G
1
de dure , chaque oprateur produit le dphasage induit est le suivant:

I
+
A
I
-
X
I
+
A
I
-
X
r )G i( 1 X A e [1]
I
-
A
I
+
X
I
-
A
I
+
X
r )G i(- - 1 X A e + [2]
I
+
A
I
+
X
I
+
A
I
+
X
r )G i( 1 X A e + [3]
I
-
A
I
-
X
I
-
A
I
-
X
r )G i(- 1 X A e [4]

L'impulsion d'inversion 180 proton a pour effet d'changer les oprateurs I
-
A
et I
+
A
, ce qui
donne:
I
+
A
I
-
X
r )G i( 1 X A e I
-
A
I
-
X
r )G i( 1 X A e [1']
I
-
A
I
+
X
r )G i(- - 1 X A e + I
+
A
I
+
X
r )G i(- - 1 X A e + [2']
I
+
A
I
+
X
r )G i( 1 X A e + I
-
A
I
+
X
r )G i( 1 X A e + [3']
I
-
A
I
-
X
r )G i(- 1 X A e I
+
A
I
-
X
r )G i(- 1 X A e [4']

Le dphasage total, induit par le gradient G
2
l'issue du second dlai de relaxation t
1

conduit aux 4 relations suivantes:

1
= (
A
-
X
)G
1
r + (-
A
-
X
)G
2
r [1"]

2
= (-
A
-
X
)G
1
r + (
A
+
X
)G
2
r [2"]

3
= (
A
+
X
)G
1
r + (-
A
+
X
)G
2
r [3"]

4
= (-
A
-
X
)G
1
r + (
A
-
X
)G
2
r [4"]

pour que toutes les cohrences soient refocalises, il faut que les dphasages
1
,
2
,
3
,
4
,
soient nuls, ce qui donne deux les 2 quations suivantes:
(
A
-
X
) G
1
- (
A
+
X
) G
2
= 0 cohrences zro quantum refocalises

86
(
A
+
X
) G
1
- (
A
-
X
) G
2
= 0 cohrences 2 quanta refocalises
Ces deux relations conduisent G
1
/G
2
=(
A
+
X
)/(
A
-
X
) et G
1
/G
2
=(
A
-
X
)/(
A
+
X
)
respectivement. On note donc qu'il est impossible de refocaliser en mme temps les cohrences
0 et 2 quanta, puisque les 2 relations prcdentes ne peuvent tre satisfaites simultanment. Les
protons qui ne sont pas coupls scalairement un
13
C ne peuvent galement pas tre refocaliss,
puisque les gradients G
1
et G
2
ne sont pas gaux. L'utilisation de gradients de champ magntique
permet donc d'amliorer l'limination des signaux parasites (eau et protons lis aux
12
C) mais
attnue le signal observable d'un facteur 2, puisque une des cohrences n'est pas rephase. Nous
avons choisi d'utiliser la combinaison G
1
/G
2
=(
A
-
X
)/(
A
+
X
), qui refocalise les cohrences 2
quanta et dphase les cohrences 0 quantum. Compte tenu des valeurs respectives des rapports
gyromagntiques du
1
H et du
13
C, le rapport prcdent est peu prs gal 3/5. Cependant, les
valeurs exactes des gradients ont t dtermines en utilisant les valeurs prcises de
H
et
C
, afin
de respecter les conditions de refocalisation.
De plus, l'utilisation de gradients de slection de cohrence permet de s'affranchir des
phases des impulsions proton et carbone et l'dition est ainsi ralise en une seule acquisition.

-Calcul du dphasage apport par les Gradients G
3
et G
4
:
L'utilisation de gradients additionnels G
3
et G
4
pendant les dlais de relaxation 1/2J se
justifie si l'impulsion d'inversion
1
H n'est pas rigoureusement gale 180. Ils introduisent alors
un dphasage supplmentaire de la rsonance de l'eau et permettent donc d'amliorer la qualit de
l'dition. Leur valeur est ajuste empiriquement jusqu' obtention d'une limination juge
acceptable de la rsonance de l'eau.

Squence finale: PRESS-ge-HMQC.
La squence que nous avons dvelopp pour raliser une dition htronuclaire localise
est prsente sur la Figure 1.27:

87
FID
13
C
1/2J 1/2J
4
Grad. X
Grad. Y
Grad. Z
1
H
Slection
spatiale:
PRESS
90
1
90
2
180
3
Gradient de slection de cohrence
Gradient d' limination d' eau
Impulsion radiofrquence d' angle et de phase


Figure 1.27
Squence d'impulsion dveloppe pour raliser une dition htronuclaire localise.

Elle est compose d'un motif prparatoire PRESS, qui permet de localiser le signal
l'intrieur d'un volume de taille et de position ajustables. La dernire impulsion 180 de la
squence PRESS amne les spins de ce ROI dans le plan transversal, puis la squence ge-HMQC
permet d'diter les rsonances dsires. Le choix des paramtres d'acquisition (temps de
rptition, temps d'cho, dure des impulsions, amplitude des gradients,) et les rsultats
obtenus sont prsents au Chapitre 4 (p. 157).

88


89

Chapitre 2
Imagerie par transfert daimantation sur le cerveau de rat in
vivo


90
Introduction
Lorsqu'on compare les temps de relaxation de l'eau contenue dans un organe ceux d'un
chantillon d'eau pure, on constate des diffrences importantes. Il existe donc des interactions
entre les diffrentes molcules d'un tissu, qui dpendent de sa structure et de son degr
d'organisation. L'Imagerie par Rsonance Magntique Nuclaire (IRM) met profit les
diffrences entre les temps de relaxation de l'eau des diffrents tissus pour modifier les contrastes
d'une image. Pour accentuer ces derniers, des produits de contrastes tels que le Gadolinium (Gd)
ou le Sinerem peuvent injects par voie intraveineuse. Les lments paramagntiques quils
contiennent modifient les temps de relaxation des spins dans les zones o ils saccumulent. Une
alternative cette mthode invasive consiste utiliser le phnomne de transfert daimantation
(TA). Celui-ci a t observ pour la premire fois en spectroscopie du proton par Forsen et
Hoffman (Forsen, 1963), qui ont modlis l'change chimique entre le salicylaldhyde et le 2-
hydroxyactophnone. Lchange chimique met en jeu une raction entre plusieurs espces, par
exemple AB + C. Si on sature les spins de la molcule B et que ceux-ci sont incorpors dans la
molcule A, il est vident que laimantation de A sera affecte. Ce phnomne de transfert de
saturation a t mis profit pour tudier les cintiques dchange chimique de certaines ractions
du mtabolisme nergtique, grce la spectroscopie du Phosphore-31(Brindle, 1989; Campbell,
1985; Ugurbil, 1986).
D'autre part, Edzes et Samulski (Edzes, 1977) ont montr l'existence d'interactions
dipolaires entre les protons libres de leau (compartiment A) et ceux des macromolcules dont
la mobilit est plus restreinte (compartiment B). Linteraction dipolaire entre les spins de A et de
B dpend des positions et des orientations relatives des diples magntiques qui leur sont
associs. Elle se manifeste donc prfrentiellement dans les milieux organiss, notamment dans
les macromolcules qui constituent le matriel biologique. Ce processus est gnralement
suppos tre prdominant dans les phnomnes de relaxation des tissus vivants (Ceckler, 1992),
ce qui explique son utilisation de plus en plus frquente en imagerie mdicale.

91
Les quations diffrentielles qui rgissent les volutions temporelles des aimantations des
compartiments A et B sont les quations de Bloch auxquelles se rajoutent des termes de
couplages entre les aimantations longitudinales M
Z
A
et M
Z
B
. Linteraction entre ces
compartiments se traduit donc par un terme de relaxation croise, ce qui signifie que les
volutions temporelles des aimantations A et B sont interdpendantes. L'interaction dipolaire se
traduit par lapparition dun doublet dont lcart en frquence est fonction de langle entre
linduction statique B
O
et la droite qui joint les deux noyaux (Cohen-Tannoudji, 1992). Dans les
tissus biologiques, cet angle peut prendre nimporte quelle valeur et la rsonance des protons lis
aux macromolcules est donc une raie large, due la superposition de doublets de sparation
variable. Pour prendre en compte ce phnomne, des formes de rsonance non Lorentziennes ont
t proposes pour les protons lis, telles que les fonctions gaussiennes ou superLorentziennes
(Henkelman, 1993; Morrison, 1995a; Morrison, 1995b; Tzou, 1997).
Afin dobserver les phnomnes de transfert daimantation (TA), il est ncessaire de
perturber slectivement les spins dun compartiment et de mesurer les effets produits sur lautre
compartiment. En imagerie, une onde radiofrquence excite assez slectivement les protons des
macromolcules, ce qui entrane une saturation partielle de laimantation des protons de leau
dans les rgions o se manifeste le TA. Lextinction du signal est par consquent beaucoup plus
forte dans les tissus organiss que dans les vaisseaux sanguins, ce qui fait du transfert
daimantation une technique de choix pour langiographie (Edelman, 1992; Pike, 1992). De plus,
le TA a t largement utilis en prsence dagents de contrastes pour dtecter la prsence de
tumeurs crbrales (Kurki, 1992; Matthews, 1995). Une autre application potentielle du transfert
daimantation est lestimation de la quantit de myline (Balaban, 1992; Dousset, 1992). En effet,
de nombreuses maladies, comme la sclrose en plaques, se traduisent par une dtrioration de
cette substance trs organise. Une image pondre en transfert daimantation permet donc une
visualisation directe des tissus altrs, puisque ceux-ci se manifestent par un signal plus intense.
Dune manire plus gnrale, le transfert daimantation devrait tre une technique de choix pour
mettre en vidence les dtriorations de la structure tissulaire. Dans cette optique, de nombreuses

92
quipes cherchent corrler les pathologies aux signaux observs sur des images pondres en
TA (Dousset, 1995; Dousset, 1992; Gass, 1994; Lexa, 1994; Thorpe, 1995). Pour cela, deux
images sont obtenues dans les mmes conditions exprimentales, avec et sans transfert
daimantation. Un rapport dintensit, appel taux de transfert, est ensuite opr entre ces deux
images, afin de gommer linfluence des contrastes ds aux phnomnes de relaxation transversale
et longitudinale. Cependant, ce taux varie en fonction des caractristiques de limpulsion de
transfert, puisque la forme de cette impulsion radiofrquence, sa dure, son amplitude ainsi que sa
frquence porteuse sont autant de paramtres qui influencent lintensit des signaux mesurs.
Deux types d'impulsions sont gnralement utilises dans les expriences de transfert
d'aimantation. La premire consiste appliquer la frquence de rsonance de l'eau une
impulsion "binomiale" (Hore, 1983) de quelques millisecondes, constitue d'un ensemble
d'impulsions lmentaires de dure, d'amplitude et de phase diffrentes. Le dlai entre chaque
impulsion lmentaire est choisi de telle manire que l'aimantation des protons de l'eau ne soit
pas affecte la fin de l'impulsion de transfert. En revanche, pour les spins dont le temps de
relaxation transversale est trs court (quelques s), l'aimantation longitudinale et transversale
devient nulle la fin de l'impulsion. Cette mthode permet donc de slectionner les spins en
fonction de leur temps de relaxation. Cependant, il a t dmontr que les caractristiques des
impulsions lmentaires doivent tre correctement ajustes pour observer un transfert
d'aimantation (Pachot-Clouard, 1995) et minimiser les effets de saturation directe de l'eau libre.
L'autre mthode consiste appliquer une onde radiofrquence continue une frquence
suffisamment loigne de celle de l'eau pour minimiser les effets de saturation directe.
Cependant, les rsultats obtenus sont fonction de sa dure et son amplitude. Cette complexit
pose un problme de standardisation des protocoles dimagerie et complique la corrlation
apparente entre le taux de transfert et le type de pathologie tudi.
Afin de rsoudre ce problme, il est ncessaire de connatre a priori tous les paramtres
gouvernant les mcanismes du phnomne de TA. Dans le modle le plus simple, prsent par
Forsen et Offman (Forsen, 1963), les aimantations des deux compartiments A et B ont chacune

93
des temps de relaxation longitudinale et transversale et linteraction entres ces compartiments est
reprsente par une constante dchange R. Une amlioration du modle consiste introduire les
paramtres de limpulsion de transfert dans les quations de Bloch. Les solutions des six
quations diffrentielles ainsi obtenues ont t prsentes (Chai, 1996; Hu, 1992; Listerud, 1997;
Pike, 1996; Yeung, 1993; Yeung, 1992) en fonction des caractristiques de l'impulsion de
transfert, mais peu d'expriences ont t rapportes pour les valider in vivo. De plus, d'autres
quations diffrentielles ont t proposes comme alternative aux quations de Bloch, conduisant
des modles comportants un grand nombre de paramtres indpendants (Adler, 1996; Adler,
1993; Yeung, 1994; Yeung, 1992). Il est par consquent difficile de dterminer les valeurs de ces
paramtres, cause du grand nombre de degrs de liberts du systme. Une approche diffrente a
t propose par le groupe d'Henkelman, en supposant que limpulsion de transfert est une onde
continue suffisamment longue pour considrer que les aimantations des compartiments A et B ont
atteint un tat stationnaire (Henkelman, 1993; Morrison, 1995a; Morrison, 1995b). Cette mthode
permet d'obtenir une quation du taux de transfert qui est fonction des paramtres de relaxation
des spins des deux compartiments, de la constante dchange R entre ces compartiments, ainsi
que de lamplitude et de la frquence porteuse de limpulsion de transfert. Il est donc ncessaire
de raliser un grand nombre dexpriences dans diffrentes conditions exprimentales pour
caractriser le TA dans un milieu organis.
Dans ce travail, nous avons mis en uvre deux tudes ltat stationnaire en imagerie sur
le cerveau de rat in vivo 4.7 T, afin d'essayer de caractriser les paramtres du transfert dans
diffrentes rgions crbrales. La premire a t ralise sur des animaux sains et la seconde sur
des animaux porteurs de gliomes implants. Cependant, lutilisation dimpulsions de transfert
dune dure de plusieurs secondes peut conduire des nergies dposes trs importantes, ce qui
compromet lutilisation de telles conditions exprimentales au cours dun examen clinique de
routine. Il nous donc est apparu important dessayer de modliser lvolution des intensits
observes lorsque la condition dtat stationnaire nest pas satisfaite. Une solution des quations

94
du modle deux compartiments est propose, en supposant que seule laimantation transversale
ait atteint un tat stationnaire la fin de limpulsion de transfert.

2 Images du cerveau de rat
La Figure 2.1 (p 95) prsente diffrentes images de cerveau de rat en coupe transversale,
obtenues partir de squences dcho de spins. Linfluence du transfert daimantation sur les
contrastes 4.7 T peut tre apprcie en comparant les images A et B, enregistres dans les
mmes conditions dacquisition, sans (image A) et avec transfert daimantation (image B). Les
effets des relaxations transversale et longitudinale sont trs peu prononcs puisque le temps
dcho est court par rapport aux T
2
des diffrents tissus (cf. Tableau 2.1, p. 99) et que le T
R
est
relativement long par rapport aux T
1
. Par consquent, limage A peut tre assimile une image
en densit de protons. Sur cette image, les contrastes lintrieur du cerveau sont trs faibles, ce
qui est en accord avec les valeurs relatives des temps de relaxation des diffrents tissus (cf.
Tableau 2.1, p. 99). Lorsque le temps dcho est augment, la relaxation transversale modifie les
contrastes obtenus (image non prsente ici). Cependant lamlioration des contrastes par cette
technique est faible puisque les temps de relaxation transversale des diffrents tissus tudis sont
trs proches les uns des autres. A loppos, limage B permet de distinguer diffrentes rgions du
cerveau pour lesquelles leffet du transfert daimantation est plus marqu. Puisque le T
R
et le T
E

sont identiques ceux employs pour obtenir limage A, les contrastes ne peuvent rsulter que de
leffet de limpulsion de TA. Afin dtudier quantitativement lvolution des signaux en fonction
des caractristiques de cette impulsion, trois rgions dintrt (ROI) ont t slectionnes dans le
cerveau. Il sagit du corps calleux (CC), des noyaux gris (NG) et du lobe temporal (LT). CC et
NG sont principalement constitus de substance blanche alors que le LT est essentiellement de la
substance grise. En comparant les images A et B, il parat logique de choisir ces rgions puisque
leffet du TA semble tre plus important dans le CC et les NG que dans le LT.


95

Figure 2.1
Coupes transversales du cerveau de rat obtenues laide de squences dimagerie en cho
de spins (3 mm dpaisseur, 4 cm de champ de vue, taille de la matrice: 256x256):
- image A: image en densit de protons (T
R
/T
E
= 2500/18 ms).
- image B: image en transfert daimantation (T
R
/T
E
= 2500/18 ms), pour une amplitude de
limpulsion de transfert (
1
) de 750 Hz une frquence () de 3000 Hz.
Trois rgions d'intrt (Region Of Interest, ROI) ont t slectionnes, correspondant au
corps calleux (CC), aux noyaux gris (NG) et au Lobe Temporal (LT).



3 Mesure des temps de relaxation
Une optimisation de l'homognit de linduction statique B
O
est systmatiquement opre
dans un petit volume dintrt (~ 1 cm
3
) entourant le cerveau laide de la squence de
spectroscopie localise STEAM. La largeur mi-hauteur de la rsonance de leau est typiquement
de lordre de 20-30 Hz.

3.1 Mesure du T
2

Une squence dcho de spins avec un temps dcho variable (5 ms-200 ms) a t employe
pour dterminer les T
2
des tissus tudis. Un T
R
de 3.0 s a t utilis, afin de minimiser les effets
de saturation, tout en gardant un temps dexprience raisonnable. Un ajustement par une

96
exponentielle dcroissante a t opr sur les intensits observes. Ces courbes sont prsentes
sur la Figure 2.2 (p. 96).

25
20
15
10
5
0
C
C
N
G
25
20
15
10
5
0
L
T
200 150 100 50
T
200 150 100 50
Temps d'cho / ms Temps d'cho / ms

Figure 2.2
Evolution des intensits observes en imagerie par cho de spins en fonction du temps
dcho, dans diffrentes rgions du cerveau de rat: corps calleux (CC), Noyaux Gris (NG),
Lobe Temporal (LT) et Tumeur (T). Les courbes continues sont le rsultat de lajustement
non linaire, en utilisant lquation [1.14] donne au 2.2.1 (p. 48).Les valeurs des T
2
sont
donnes dans le Tableau 2.1 (p. 99).


3.2 Mesure du T
1
et du T
1
SAT

La squence RARE, laquelle une impulsion dinversion t ajoute, a t utilise pour
dterminer les T
1
du cerveau de rat in vivo 4.7 T, en faisant varier le temps dinversion (cf.
2.2.2, p. 48) entre 0.4 s et 3.9 s. Cette impulsion 180 est un sinus cardinal (1 ms) appliqu

97
simultanment un gradient dans la direction de coupe, afin dinverser les spins uniquement dans
la coupe tudie. Les rsultats obtenus sur diffrentes rgions du cerveau de rat sont prsents sur
la Figure 2.3 (p. 97). Dans ces expriences le T
R
a t maintenu 6 s et le T
E
5 ms pour viter
les effets de saturation longitudinale et minimiser la relaxation transversale.

40
30
20
10
0
S

/

B
3000 2000 1000
40
30
20
10
0
3000 2000 1000
40
30
20
10
0
S

/

B
3000 2000 1000
Dlai d'inversion / ms
40
30
20
10
0
3000 2000 1000
Dlai d'inversion / ms
CC NG
LT T

Figure 2.3
Evolution des intensits observes en imagerie par inversion-rcupration, en fonction du
dlai dinversion, dans diffrentes rgions du cerveau de rat: corps calleux (CC), Noyaux
Gris (NG), Lobe Temporal (LT) et Tumeur (T). Les courbes continues sont le rsultat de
lajustement non linaire, en utilisant lquation [1.17] donne au 2.2.2 (p. 48). Les
valeurs des T
1
OBS
sont donnes dans le Tableau 2.1 (p. 99).

Un exemple de la mesure du T
1
SAT
est donn sur la Figure 2.4 (p. 98). Limpulsion de
transfert daimantation damplitude constante,
1
= 660 Hz, est applique =10 kHz au dessus
de la frquence de rsonance de leau avant lacquisition de limage laide de la squence

98
RARE. La dure (D) de cette onde continue varie entre 0 et 4 s. Un ajustement par une
exponentielle dcroissante est opr sur les intensits observes dans diffrents ROI.

1.00
0.95
0.90
0.85
0.80
0.75
0.70
S
i
g
n
a
l

n
o
r
m
a
l
i
s

4 3 2 1 4 3 2 1
1.00
0.95
0.90
0.85
0.80
0.75
0.70
S
i
g
n
a
l

n
o
r
m
a
l
i
s

4 3 2 1
Dure de l'impulsion / s
4 3 2 1
Dure de l'impulsion / s
CC NG
LT
T

Figure 2.4
Evolution des intensits observes en imagerie par transfert daimantation, en fonction de la
dure de limpulsion de transfert, dans diffrentes rgions du cerveau de rat: corps calleux
(CC), Noyaux Gris (NG), Lobe Temporal (LT) et Tumeur (T). Dans cet exemple,
1
vaut
660 Hz et vaut 10 kHz. Les courbes continues sont le rsultat de lajustement non linaire
effectu en utilisant une exponentielle dcroissante de constante de temps T
1
SAT
. Les
valeurs des T
1
SAT
ainsi obtenues sont donnes dans le Tableau 2.1 (p. 99).


99
CC NG LT Tum
T
2
/ ms 53 2 50 2 61 2 58 2
T
1
/ ms 1040 50 1050 70 1100 80 1200 70
T
1
SAT
/ ms 550 30 730 30 820 40 820 70
Tableau 2.1
Temps de relaxations dans diffrentes rgions du cerveau de rat 4.7 T. Les dtails des
procdures de mesures sont donns au 2.2 (p. 47).

4 Mesures du taux de transfert ltat stationnaire
Les rsultats des mesures ltat stationnaire sont prsents dans lordre chronologique de
leur obtention. La premire tude porte sur la dtermination des paramtres caractrisant le de
transfert daimantation sur le cerveau de rat sain. La seconde partie du travail est une tude
similaire sur le gliome implant avec utilisation d'une squence d'imagerie rapide.

4.1 Cerveau de rat sain
4.1.1 Protocole exprimental.
Quinze rats ont t anesthsis par une injection de pentobarbital car le dispositif
danesthsie au gaz ntait pas encore mis au point. Lantenne utilise est une cage doiseaux,
dcrite p. 25, pour laquelle les angles dimpulsion taient calibrs avant chaque exprience
(cf. p 21). Les mesures ont t effectues en imagerie dcho de spins dans le fourreau de gradient
principal (50 cm; 24 mT/m).
Pour que les aimantations atteignent un tat stationnaire (condition de validit du modle
dHenkelman), il est ncessaire dappliquer une onde radiofrquence dune dure suffisante. Dans
la squence que nous avons employe, il ny a pas de dlai de relaxation entre la fin de

100
lacquisition et le dbut de limpulsion de transfert suivante. Par consquent, le temps de
relaxation qui doit tre pris en compte est le T
1
SAT
. Daprs les valeurs donnes dans le Tableau
2.1 (p. 99), la dure de limpulsion de transfert a t fixe 2.4 s, ce qui conduit des facteurs de
saturation ) e (1
SAT
1
T / R T -
de 98%, 96% et 94% pour CC, NG et LT respectivement.
Bien que les valeurs de T
1
SAT
soient fonction de lamplitude et de la frquence de
limpulsion de transfert (cf. 2.3.3, p. 54), on peut considrer que les aimantations sont ltat
stationnaire, puisque une nouvelle impulsion de saturation est applique juste aprs lacquisition
dune ligne de lespace de Fourier. De plus, le temps dcho a t maintenu 18 ms (minimum
possible avec cette squence et ce fourreau de gradients), de manire pondrer au minimum en
T
2
limage obtenue. Le temps de rptition valait 2.5 s, afin de garder un temps dexprience
raisonnable (environ 5 minutes par image). Plusieurs heures taient donc ncessaires lobtention
des 60 points exprimentaux. Compte tenu de la dure danesthsie (90 minutes), il ntait donc
possible dacqurir, sur chaque animal, quun jeu de douze images pondres en transfert
correspondant une valeur de
1
. Lexprience tait ensuite rpte sur un animal diffrent ou sur
un mme animal aprs son rveil et une nouvelle anesthsie, pour une autre amplitude de
limpulsion de transfert (cf. 4.1.2, p 100).
Des images transversales ont t obtenues pour les combinaisons suivantes damplitudes
(
1
) et dcart de frquence de limpulsion de transfert:
- Douze valeurs de reparties de manire logarithmique entre 500 Hz et 20000 Hz
- Cinq valeurs de
1
: 500 Hz, 750 Hz, 1250 Hz, 1930 Hz et 4200 Hz.

4.1.2 Taux de transfert.
Les intensits M
Z
A
obtenues dans chaque ROI ont t normalises par rapport lintensit
de limage de rfrence M
O
A
(
1
=0) obtenue sur chaque animal, afin de former le taux de
transfert. Leffet de saturation longitudinale a t minimis en choisissant un T
R
de 3 s pour
acqurir cette image de rfrence. De plus, un facteur de correction a t appliqu la valeur

101
mesure de M
O
A
. Celui-ci tient compte du retour incomplet vers son tat dquilibre de
laimantation longitudinale et vaut 1 R/T T e - 1 .
Lvolution du taux de transfert en fonction de
1
et est prsent sur la Figure 2.5
(p. 101). Un ajustement des cinq paramtres du modle dHenkelman a t effectu, en utilisant
lquation [1.27] prsente au 2.3.2 (p. 52). Il repose sur une minimisation successive de lcart
quadratique moyen
2
, sur les 60 points exprimentaux.

1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
5 6
10
3
2 3 4 5 6
10
4
CC
5 6
10
3
2 3 4 5 6
10
4
NG
5 6
10
3
2 3 4 5 6
10
4
LT
Frquence de l'impulsion de transfert / Hz
M
Z
A

/

M
O
A

Figure 2.5
Evolution du taux de transfert dans le corps calleux (CC), les noyaux gris (NG), et le lobe
temporal (LT), en fonction de la frquence de limpulsion de transfert daimantation ().
Les valeurs de lamplitude de limpulsion de transfert (
1
) sont les suivantes: 500 (), 750
(), 1250 (q), 1930 (v) et 4200 () Hz. Les courbes continues sont le rsultat de
lajustement des paramtres du modle dHenkelman, en supposant une forme
superLorentzienne pour les protons lis . Les paramtres dtermins par ce calcul sont
donns dans le Tableau 2.2 (p. 102).



102
La qualit de lajustement a t estime en fonction du
2
, pour diffrentes formes de
rsonance (cf. 2.3.2, p. 52) des protons lis aux macromolcules. Les fonctions Lorentziennes,
gaussiennes et superLorentziennes ont t testes. Les lignes continues qui sont le rsultat du
calcul sont superposes aux donnes exprimentales sur la Figure 2.5 (p. 101), afin dapprcier la
concordance entre le modle et les mesures. Les valeurs des paramtres dtermins par cette
mthode, pour les fonctions gaussiennes et superLorentziennes, ainsi que les
2
correspondants
sont regroups dans le Tableau 2.2 (p. 102).



forme de raie R (s
-1
) RM
0
B
/R
A
1/R
A
T
2A
T
2B
(s) R
B
(s
-1
)
2

CC
S
G
16.3 1.8
17.0 2.4
2.82 0.2
2.3 0.2
99.3 17
138 25
9.4 0.8
20.2 0.7
1.12 0.3
0.77 0.6
0.039
0.069
NG
S
G
16.8 1.8
21.1 3.2
2.4 0.13
2.3 0.11
100 14
124 20
8.7 0.6
19.9 1.3
1.32 0.3
1.06 0.8
0.027
0.057
LT
S
G
12.3 2.0
22.4 3.2
2.1 0.13
2.08 0.17
100 11
111 15
8.5 0.6
12.2 1.4
2.9 0.5
0.91 0.7
0.028
0.051
Tableau 2.2
Valeurs des paramtres du modle dHenkelman, dtermins par la procdure de
minimisation du
2
en supposant une rsonance de forme Gaussienne (G) et
superLorentzienne (S).

Il apparat que les meilleurs rsultats sont obtenus en supposant une fonction
superLorentzienne pour les protons lis. La valeur du temps de relaxation transversale des protons
lis (T
2B
) est assez uniforme dun ROI lautre et sa faible valeur est cohrente puisquelle
traduit la prsence dune rsonance trs large. De mme, la valeur de 1/R
A
T
2A
est pratiquement
constante, ce qui est en accord avec la faible dispersion des valeurs des temps de relaxation

103
transversale et longitudinaux donnes dans le Tableau 2.1 (p. 99). Le seul paramtre qui semble
significativement diffrent dun ROI lautre est RM
0
B
/R
A
, puisquil dcrot dun facteur 1.3
entre CC et LT. Lincertitude sur R
B
est grande (suprieure 17% dans tous les cas), ce qui
signifie que linfluence de ce paramtre sur la qualit de lajustement (la valeur de
2
) est faible.


4.1.3 Contrastes
A partir des valeurs des intensits de chaque rgion du cerveau, il est possible de calculer
les contrastes relatifs entre deux ROI, en formant la quantit C
ij
dfinie comme suit:
C
ij
= | S
i
- S
j
| / bruit
o S
i
et S
j
reprsentent les intensits mesures.
Les courbes obtenues pour diffrentes valeurs de
1
et sont prsentes sur la Figure 2.6.


104
7
6
5
4
3
2
1
0
6 8
10
3
2 4 6 8
10
4
2
A
6 8
10
3
2 4 6 8
10
4
2
C
6 8
10
3
2 4 6 8
10
4
2
B
Frquence de l'impulsion de transfert / Hz
C
o
n
t
r
a
s
t
e
s

m
e
s
u
r

s

Figure 2.6
Contrastes observs entre CC et NG (A), LT et NG (B), et CC et LT (C), en fonction de la
frquence de limpulsion de transfert daimantation, pour trois valeurs de
1
: 500 (),
1250 (q), et 4200 () Hz.

Lincertitude sur les contrastes est grande puisque la dispersion sur les valeurs des taux de
transfert est relativement importante (cf. Figure 2.5, p. 101). Cette figure ne peut donc donner que
des informations qualitatives sur lvolution des contrastes en fonction des caractristiques de
limpulsion de transfert:
- les contrastes les plus forts sont obtenus entre le corps calleux (CC) et le lobe temporal
(LT) alors que de plus faibles valeurs sont observes entre CC et NG ou NG et LT. Ceci semble
cohrent avec limage B prsente sur la Figure 2.1 (p. 95).
- il semble que les meilleurs contrastes sont obtenus pour les valeurs de
1
les plus faibles.
- un
1
donn, le contraste semble atteindre un plateau en fonction de , qui se situe
autour de 2-3 kHz.


105
4.1.4 Evaluation de la saturation directe.
Lapplication dune impulsion radiofrquence perturbe ltat du systme de spin, mme si
elle est non-rsonante. Ce phnomne de saturation directe intervient ncessairement puisque
limpulsion de transfert est applique pendant plusieurs secondes avec une amplitude
relativement leve (jusqu' plusieurs kilohertz). Il est intressant dessayer dvaluer linfluence
de la saturation directe sur le taux de transfert apparent, en fonction des caractristiques de
limpulsion non-rsonante (
1
, ). Leffet de la saturation directe peut se calculer en supposant
que le systme nest pas soumis au phnomne de transfert, ce qui revient fixer R et RM
O
B
/R
A

zro. Une faon simple dvaluer linfluence relative de la saturation directe sur les signaux
observs est de faire la diffrence entre les courbes obtenues en considrant leffet direct (R ? 0 et
RM
O
B
/R
A
? 0) et celles obtenues en supposant R et RM
O
B
/R
A
nuls. Les rsultats du calcul en
fonction de
1
et sont prsents sur la Figure 2.7, sous forme de courbes de niveaux. La valeur
maximale de cette diffrence est conventionnellement appele MAX-TA.

8000
6000
4000
2000
20 15 10 5

0.54
0.29
0.24
0.44
0.14
0.34
0.49
0.19
0.39
A
20 15 10 5

0.5
0.25
0.4
0.35 0.2
0.3 0.15
0.45
0.1
B
20 15 10 5

0.48
0.4
0.2 0.08
0.36
0.44
0.16 0.28 0.04
0.12 0.24
0.32
C
Frquence de l'impulsion de transfert / kHz

1

/

H
z

Figure 2.7
Courbes de niveaux prsentant la diffrence entre le calcul de leffet direct
(R = RM
O
B
/R
A
= 0) et les valeurs thoriques du taux de transfert (R et RM
O
B
/R
A
? 0), en

106
fonction de lamplitude et de la frquence de limpulsion de transfert, pour le corps calleux
(A), les noyaux gris (B) et le lobe temporal (C).

MAX-TA est atteint pour des valeurs de
1
et trs diffrentes de celles correspondant au
contrastes optimums (cf. Figure 2.6, p. 104). De plus, les valeurs de MAX-TA sont plus
importantes dans les ROIs o leffet de transfert est plus marqu (CC et NG).

4.2 Modle du gliome implant

4.2.1 Implantation des gliomes.
La culture des cellules de la ligne C6 et leur implantation dans le noyau caud du cerveau
de rat ont t ralises au laboratoire par A.K. Bouzier et M. Merle. La tumeur est induite par
injection strotaxique de 10 L (1 2.10
6
cellules), suivant une technique drive de celles
dcrites par Kobayashi et al. (Kobayashi, 1980) et Kaye et al. (Kaye, 1986) Le site dimplantation
des cellules se situe 3.5 mm gauche du point de Bregma, une profondeur de 5.5 mm. Les
gliomes induits dans le cerveau de rat ont t observs par transfert daimantation entre le 14
me

et le 25
me
jour aprs limplantation des cellules C6. La taille du gliome varie significativement
en fonction de lge de la tumeur. Son volume est typiquement de lordre de 20 mm
3
quinze
jours aprs limplantation des cellules et peut atteindre 100 mm
3
la fin de la troisime semaine.

4.2.2 Protocole exprimental
Plusieurs amliorations du protocole exprimental ont facilit ltude des mcanismes de
transfert daimantation sur le modle du gliome implant. Tout dabord, la mise au point du
systme danesthsie lHalothane (cf. 1.4, p 15) a permis dobtenir un jeu complet de donnes
exprimentales sur chaque rat. De plus, le fourreau de gradients Bruker insrable (BGA12)

107
permet dutiliser des temps dcho plus courts (environ 5 ms) et favorise par consquent
lutilisation de la squence dimagerie rapide RARE. Cette dernire, pondre en transfert
daimantation, a diminu considrablement (facteur rare = 32) la dure dacquisition par rapport
limagerie en cho de spins utilise sur les rats sains dans le fourreau principal. Ce gain de temps
a t mis profit pour amliorer le rapport signal sur bruit des images pondres en transfert
daimantation, en oprant deux ou quatre accumulations pour chaque couple (,
1
). Dans ces
expriences, une seule coupe axiale a t enregistre pour viter tout effet de saturation
additionnel (due lapplication dimpulsions non rsonantes) et garder un temps dcho minimal.
Pour cette tude, lantenne radiofrquence employe est une bobine de Helmholtz,
prsente au 0 (p. 25).

4.2.3 Images du gliome.
Les images A et B de la Figure 2.8 sont des coupes transversales du cerveau de rat dans
lequel un gliome C6 a t induit (cf. 4.2.1, p. 106). On notera que lutilisation dune squence
dimagerie rapide permet dobtenir des images dune qualit comparable, sinon meilleure, celles
obtenues en cho de spins traditionnelle (cf. Figure 2.1, p. 95). La tumeur apparat dans les trois
cas sous la forme dun hypersignal, mais limage obtenue en transfert daimantation permet de
cerner avec beaucoup plus de prcision ses contours (image B) que celles pondres en densit de
protons (A).


108

Figure 2.8
Coupes transversales dun cerveau de rat contenant une tumeur implante (15 jours aprs
injection des cellules C6), obtenues laide de la squence dimagerie rapide RARE (3 mm
dpaisseur, 4 cm de champ de vue, taille de la matrice 128x128, facteur rare 32,
T
R
/T
E
= 3500/5 ms):
Image A: image obtenue sans impulsion de transfert (densit de protons).
Image B: image obtenue en prsence dune impulsion de transfert daimantation de
1000 Hz damplitude (
1
) applique une frquence () de 3000 Hz.

Le transfert daimantation semble donc tre une technique performante pour mettre en
vidence la prsence dune tumeur crbrale. Il parat donc intressant dtudier de manire
quantitative lvolution du taux de transfert et des contrastes, en fonction de
1
et .

4.2.4 Mesure du taux de transfert.
Les conditions exprimentales de limpulsion de transfert sont les suivantes:
- 3 secondes dirradiation.
- 5 valeurs diffrentes damplitude:
1
= 660, 1000, 1400, 2300 et 6000 Hz.
- 11 carts de frquence () rpartis de manire logarithmique entre 750 Hz et
20000 Hz.
Trois rgions du cerveau ont t slectionnes pour tudier qualitativement lvolution du
taux de transfert en fonction des paramtres de limpulsion de transfert. Il sagit des Noyaux Gris
(NG), rgion dans laquelle les cellules tumorales ont t implantes, du Lobe Temporal (LT) et de

109
la tumeur (T). Le traitement des donnes obtenues est identique celui ralis sur le cerveau de
rat sain. Les courbes reprsentant lvolution du taux de transfert (mesure et calcul) en fonction
des valeurs de
1
et sont prsentes sur la Figure 2.9 (p. 109).



10
3
2 3 4 5 6
10
4
2

T


10
3
2 3 4 5 6
10
4
2

LT
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0

10
3
2 3 4 5 6
10
4
2

NG
Frquence de l'impulsion de transfert / Hz

M
Z
A


/

M
O
A

Figure 2.9
Evolution du taux de transfert dans les noyaux gris (NG), le lobe temporal (LT), et la
Tumeur (T), en fonction de la frquence de limpulsion de transfert daimantation (). Les
valeurs de lamplitude de limpulsion de transfert (
1
) sont les suivantes: 660 (), 1000
(), 1400 (q), 2300 (v) and 6000 () Hz. Les courbes continues sont le rsultat de
lajustement des paramtres du modle dHenkelman, en supposant une forme
superLorentzienne pour les protons lis . Les paramtres dtermins par ce calcul sont
donns dans le Tableau 2.3 (p. 110).

Lamlioration du protocole exprimental (cf. 4.2.2, p. 106) par rapport celui utilis
pour l'tude ralise sur le cerveau sain avec une squence standard d'cho de spins se traduit par
une diminution spectaculaire de la dispersion des intensits observes, pour chaque ROI
slectionn. La qualit de lajustement des paramtres est donc amliore, ce qui se traduit par
des valeurs de
2
beaucoup plus faibles. Les valeurs des paramtres sont regroupes dans le

110
Tableau 2.3. Ce sont les valeurs moyennes des paramtres obtenus sur tous les rats examins,
diffrents stades dvolution du gliome. Les dviations standard (SD) autour de ces moyennes ont
t prises comme incertitude.
La concordance entre le calcul et les valeurs mesures est la meilleure si on suppose que la
forme de la rsonance des protons lis est superLorentzienne. Pour cette raison, les rsultats
obtenus en utilisant les fonctions Lorentziennes ou Gaussiennes ne sont pas reportes ici.

R (s
-1
) RM
0
B
/R
A
1/R
A
T
2A
T
2B
(s) R
B
(s
-1
)
2

NG
(n=6)
27.0 4.8 3.58 0.4 81 11 9.35 0.5 1.33 0.14 0.012
LT
(n=7)
34.8 6.3 3.14 0.41 67.3 14 8.3 0.5 1.59 0.24 0.013
T
(n=9)
41.4 6.4 2.39 0.26 56.5 11 7.51 0.41 1.2 0.25 0.011
Tableau 2.3
Valeurs moyennes des paramtres obtenus laide du modle dHenkelman pour les
Noyaux gris (NG), le Lobe Temporal (LT) et la Tumeur (T), en supposant une forme de
rsonance superLorentzienne pour les protons lis .

La qualit des rsultats obtenus a permis de raliser une tude statistique sur les valeurs des
paramtres trouvs sur chaque rat entre les diffrents ROI, en utilisant un test-t non appari. La
diffrence entre les paramtres est considre significative pour P < 0.05. Les rsultats de cette
tude montrent que T
2B
, RM
O
B
/R
A
, R et 1/R
A
T
2A
sont diffrents entre la tumeur et les noyaux
gris (P < 0.001). Il en est de mme pour T
2B
et RM
O
B
/R
A
entre la Tumeur et le Lobe Temporal
(P < 0.05). R
B
est en fait le seul paramtre pour lequel aucune diffrence significative ne peut tre
mise en vidence. Ces remarques sont en accord avec les observations faites au 4.1.2 (p. 100).



111
4.2.5 Contrastes
Les contrastes mesurs entre NG, LT et T sont prsents sur la Figure 2.10. La qualit des
courbes obtenues permet de prciser les observations faites au 4.1.3 (p. 103):
- les meilleurs contrastes sont obtenus pour de faibles valeurs de lamplitude de l'impulsion
de transfert.
- pour une valeur de
1
donne, le contraste atteint un maximum en fonction de et la
position de celui-ci crot lorsque
1
augmente.

10
3
2 3 4 5 6
10
4
2
C
10
3
2 3 4 5 6
10
4
2
B
8
6
4
2
0
10
3
2 3 4 5 6
10
4
2
A
Frquence de l'impulsion de transfert / Hz
C
o
n
t
r
a
s
t
e
s

m
e
s
u
r

s

Figure 2.10
Contrastes observs entre NG et LT (A), LT et T (B), NG et T (C), en fonction de la
frquence de limpulsion de transfert, pour diffrentes valeurs de
1
(660 (), 1000 (),
1400 (q), 2300 (v) et 6000 () Hz).

En utilisant les paramtres du Tableau 2.3, il est possible de calculer les contrastes entre les
ROI correspondant aux diffrentes conditions dacquisition utilises, puisque les valeurs du
rapport signal sur bruit de limage de rfrence (S
i
ref
) sont connues. En effet, la valeur du
contraste C
ij
entre deux ROI i et j est donn par la formule suivante:

112

C
ij
= | S
i
calc
.S
i
ref
- S
j
calc
.S
j
ref
| / B
ref

o:
- S
i,j
calc
est le taux de transfert calcul laide des paramtres du Tableau 2.3 (p. 110).
- S
i,j
ref
est la valeur de lintensit mesure sur limage de rfrence.
- B
ref
est la valeur moyenne du bruit de limage de rfrence.
Ce calcul a t effectu pour des plages de valeurs de et
1
trs larges, afin de trouver les
conditions exprimentales permettant dobtenir les meilleurs contrastes. La Figure 2.11 prsente
les rsultats obtenus, sous forme de courbes de niveaux.

10
3
2 3 4 5 6 7
10
4

8.5
8
7.5
6.5
6
5.5
C
7
5
4.5
4
10
3
2 3 4 5 6 7
10
4

4.8
4.4
4
B
3.2
3.6
2.8
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
10
3
2 3 4 5 6 7
10
4

4.2
3.8
3.4
3
2.6
2.2
1.4
1
0.6
A
1.8
Frquence de l'impulsion de transfert / Hz

1

/

H
z

Figure 2.11
Courbes de niveaux reprsentant les contrastes calculs entre NG et LT (A), LT et T (B),
NG et T (C), en fonction de la frquence et de lamplitude
1
de limpulsion de transfert.

Les paramtres de limpulsion de transfert permettant dobtenir les contrastes maximums
(CM) ltat stationnaire sont donns dans le Tableau 2.4.

113

LT-NG T-LT NG-T
CM 4.2 4.8 8.5

1
/ Hz 300 700 500
/ Hz 3000 3000 3000
Tableau 2.4
Valeurs maximales des contrastes calculs (CM) entre les diffrents ROI tudis. Les
paramtres dacquisition correspondants sont galement prsents.


4.2.6 Evaluation de la saturation directe.
Le calcul opr est identique celui donn au 4.1.4 (p. 105) et les rsultats, en fonction
des caractristiques de limpulsion de transfert, sont prsents sur la Figure 2.12 sous forme de
courbes de niveau.


114
20 15 10 5

0.5
0.45
0.4
0.2
0.1
0.15
0.25
0.3
0.35
C
20 15 10 5

0.54
0.44
0.49
0.14
0.19
0.34
0.29
0.39 0.24
B
8000
6000
4000
2000

20 15 10 5

0.56
0.31 0.46 0.16
0.51
0.36
0.41
0.21
0.26
A
Frquence de l'impulsion de transfert / kHz

1

/

H
z

Figure 2.12
Courbes de niveaux prsentant la diffrence entre le calcul de leffet direct
(R = RM
O
B
/R
A
= 0) et les valeurs thoriques du taux de transfert (R et RM
O
B
/R
A
? 0), en
fonction de lamplitude et de la frquence de limpulsion de transfert, pour les noyaux gris
(A), le lobe temporal (B) et la tumeur (C).

Les valeurs de MAX-TA sont plus fortes dans les noyaux gris et le lobe temporal que dans
la tumeur, ce qui est en corrlation avec les rgions o leffet de transfert se manifeste davantage.
MAX-TA semble donc tre un paramtre permettant de rendre compte de limportance du
phnomne de transfert dans chaque rgion tudie.

5 Evaluation de la puissance dpose - calcul du SAR
La formule permettant dvaluer la valeur de la puissance dpose (P
Dep
) sur lchantillon
et du taux dabsorption spcifique (SAR) sont donnes p. 22:
Elle est fonction des caractristiques des impulsions radiofrquences utilises ainsi que des
facteurs de qualit des bobines utilises. Les valeurs de Q vide et en charge des deux antennes
ayant servi raliser ces tudes sont donns p. 25.

115
Dans les expriences de transfert daimantation ltat stationnaire, lnergie dpose sur
lchantillon est principalement due limpulsion continue damplitude
1
, applique pendant
plusieurs secondes. En effet, la contribution des impulsion 90 et 180 peut tre nglige car leur
dure nest que de quelques millisecondes.

Les calculs de P
Dep
pour une amplitude
1
de 1 kHz donnent les rsultats suivants:
-ancienne squence, ancienne antenne:

1
= 1 kHz quivaut U
eff
= 6.2 V et P
E
= 0.77 W.
Limpulsion de transfert est applique pendant D = 2.4 s et le T
R
vaut 2.5 s.
De plus, Q
V
= 210 et Q
C
= 130, ce qui conduit :
P
Dep
= 0.28 W

-nouvelle squence, nouvelle antenne:

1
= 1 kHz quivaut U
eff
= 5.3 V et P
E
= 0.56 W.
Limpulsion de transfert est applique pendant D = 3 s et le T
R
vaut 3.5 s,.
De plus, Q
V
= 210 et Q
C
= 160, ce qui conduit :
P
Dep
= 0.115 W

Ces deux antennes irradient toute la tte de lanimal et si on value la masse de celle-ci
20 grammes environ, les valeurs de SAR trouves pour les deux tudes ralises sont
respectivement de 14 W/kg et 5.75 W/kg. Ces valeurs sont leves par rapport aux normes
actuelles imposes par la FDA (voir p. 22). La diffrence entre les valeurs de la puissance
dpose (P
Dep
) montre que lantenne Helmholtz est de meilleure qualit que lantenne cage
doiseau. Ceci explique en partie lamlioration de la qualit des rsultats obtenus sur le modle
du gliome implant par rapport ceux obtenus sur le cerveau de rat sain.


116
6 Discussion
Les deux tudes prsentes dans ce qui prcde tentent danalyser de manire quantitative
lvolution du taux de transfert ltat stationnaire dans diffrentes rgions du cerveau de rat
4.7 T, en fonction de lamplitude (
1
) et de la frquence () de limpulsion de transfert. La dure
de celle-ci a t choisie suffisamment longue pour que les aimantations des spins soient ltat
stationnaire, qui est une condition de validit du modle utilis. Lacquisition dimages laide
de squences dcho de spins a permis dapprcier linfluence du transfert daimantation sur les
contrastes observs. Les paramtres dacquisition ont en effet t choisis de telle manire que les
contributions des relaxations transversales et longitudinales soient minimales. Pour cela, des
mesures pralables des temps de relaxation ont t effectues dans les diffrents tissus crbraux
tudis (le corps calleux, les noyaux gris, le lobe temporal et la tumeur).
Les intensits obtenues en transfert daimantation pour des valeurs trs diffrentes de
1
et
ont t interprtes laide d'un modle deux compartiments de protons, prcdemment
valid sur des mesures ralises sur diffrents chantillons biologiques ex vivo (Morrison, 1995a;
Morrison, 1995b). Diffrents modles ont dj t proposs pour expliquer les mcanismes du
transfert daimantation, comportant plusieurs (2 ou 3) compartiments en interaction mutuelle, et
pouvant inclure un rservoir dipolaire (Adler, 1996; Balaban, 1992; Caines, 1991; Edzes, 1977;
Eng, 1991; Forsen, 1963; Henkelman, 1993; Koenig, 1993a; Koenig, 1993b; Leigh, 1971;
McLaughlin, 1972; Morrison, 1995a). Nous avons choisi dutiliser le modle le plus simple
deux compartiments, car le nombre de paramtres ajustables quil contient est relativement
restreint par rapport aux modles prcdemment cits. Il est certain que ces derniers auraient pu
dcrire correctement les donnes prsentes ici, mais la dtermination des paramtres ainsi que
leur interprtation seraient sans doute plus dlicate.
La qualit des courbes obtenues laide de lajustement effectu est satisfaisant. Ltude
sur le cerveau de rat sain, avec une squence standard d'cho de spins, a dmontr la faisabilit
dune telle investigation in vivo en imagerie et a permis la dtermination des paramtres du

117
modle dans chaque rgion tudie. Par la suite, lutilisation de la squence dimagerie rapide
RARE et du dispositif danesthsie au gaz ont favoris lobtention dun jeu complet de donnes
sur un mme animal. Il sen suit que la dispersion des intensits mesures sur le modle du
gliome implant est bien meilleure (comparer la Figure 2.5 et la Figure 2.9) et que linterprtation
des rsultats obtenus est plus prcise (comparer le Tableau 2.2 et le Tableau 2.3). Il ressort de ces
tudes que lvolution du rapport M
Z
A
/M
O
A
, en fonction des caractristiques de limpulsion de
transfert, prsente une allure gnrale comparable pour chaque ROI. Les valeurs des diffrents
paramtres issus de l'ajustement ralis sont du mme ordre de grandeur en imagerie par cho de
spin standard ou en utilisant la squence rapide RARE, bien que la prcision obtenue soit bien
meilleure lorsque cette dernire est utilise.
De plus, la qualit de lajustement ralis dpend de la fonction choisie pour reprsenter la
rsonance des protons lis. Les meilleurs rsultats ont systmatiquement t obtenus en supposant
une forme superLorentzienne. Cette observation a dj t rapporte par Morrison sur diffrents
chantillons biologiques ex vivo (Morrison, 1995a). Cependant, la justification thorique de cette
fonction nest pas tablie, puisque lintgration des quations diffrentielles prsentes au 2.3.2
(p. 52) ne peut conduire qu une fonction Lorentzienne. La dfinition dun paramtre R
rfa,b

dcrivant la forme de la rsonance a seulement permis dintroduire des fonctions de forme
arbitraire. Dautres formes de rsonances ont dailleurs t proposes, dont les expressions
peuvent tre analytiques ou numriques (Kubo, 1954; Li, 1997). Elles nont pas t utilises dans
ce travail, car certaines dentre elles sont ajustes pour minimiser lcart quadratique moyen sur
lensemble dun jeu de donnes exprimentales. Elles sont donc trs sensibles la qualit des
mesures et introduisent des paramtres supplmentaires.
Daprs les rsultats exprimentaux, il semble qu'un taux de transfert plus important soit
observ pour le corps calleux que pour les noyaux gris et le lobe temporal, alors quun taux de
transfert plus faible est obtenu sur la tumeur. Cette hirarchie est corrle aux valeurs du
paramtre RM
O
B
/R
A
, puisquil dcrot dans le mme sens. Les valeurs trouves sont du mme

118
ordre de grandeur que celles trouves par Morrison et al. (Morrison, 1995b) sur de la matire
blanche lyophilise puis rhydrate, une concentration de lordre de 12-24 %.
Les valeurs des temps de relaxation transversale des protons lis (T
2B
), ont t galement
dtermins de manire relativement prcise et sont du mme ordre de grandeur que ceux
rapports par dautres quipes sur diffrents chantillons. En effet, Henkelman et al. (Henkelman,
1993) ont obtenu 12.7 s sur des gels dagar, Swanson et al. 9 s (Swanson, 1992) sur de
lalbumine, Grad et Bryant 10 s sur du srum albumine bovine (Grad, 1990), Adler et al. 12.1 s
sur le cartilage humain et 10.4 s sur de la matire blanche ex vivo (Adler, 1996). Des valeurs
plus importantes ont t dtermines sur le muscle du rat (58 s) ex vivo (Caines, 1991) et sur le
rein de lapin (200 s) in vivo (Wolff, 1989).
La dtermination de la valeur du temps de relaxation longitudinal des protons lis R
B
ne
semble pas aise, puisque son influence sur la qualit de lajustement est relativement faible.
Certains auteurs ont dailleurs fix la valeur de R
B
1 s
-1
(Morrison, 1995b) et nont procd un
ajustement que sur les autres paramtres.
La valeur du paramtre 1/R
A
T
2A
est trs diffrente de celle obtenue partir des valeurs
mesures des temps de relaxation longitudinale (T
1
OBS
) et transversale (T
2
). De plus, elle est trs
suprieure celle obtenue sur des chantillons ex vivo. Cette diffrence pourrait tre due un T
1A

long ou un T
2A
court. En supposant que la valeur de 1/R
A
T
2A
soit correcte et que la valeur de
T
2A
mesure soit bien de 50 ms, cela conduit des valeurs de T
1A
de lordre de plusieurs
secondes, ce qui nest pas raliste pour des chantillons biologiques in vivo. Au contraire, si on
suppose que T
1A
est de lordre de 1 s, cela conduit des valeurs de T
2A
denviron 10 ms. Cela
impliquerait que la relaxation transversale puisse tre multi-exponentielle. Un comportement bi-
exponentiel de la relaxation transversale a dj t observ par Harrison et al. (Harrison, 1995)
sur de la matire blanche in vitro 1.5 T. Les temps de relaxation rapports sont respectivement
de 15 ms et 108 ms. La valeur de T
2A
que nous avons dtermine pourrait donc correspondre un
temps de relaxation moyen , bien quune relaxation bi-exponentielle nait pas t mise en
vidence sur le cerveau de rat in vivo 4.7 T. En effet, la dtermination de temps de relaxation de

119
lordre de 10 ms en imagerie nest pas facile, cause des contraintes instrumentales auxquelles
nous sommes confronts (temps dcho minimal de 5 ms, incertitude sur les mesures, ...).
Ltude du transfert daimantation en imagerie implique lobtention dun nombre important
dimages pondres en transfert daimantation, pour des valeurs de
1
et trs diffrentes, ce qui
implique des dures dexpriences relativement longues. Lutilisation dune squence dimagerie
rapide (RARE) nous a permis de rduire ce temps 2 heures environ, et a favoris lamlioration
du rapport signal sur bruit en oprant plusieurs accumulations. Des squences dimageries plus
rapides auraient pu tre utilises, telles que les squences EPI (Mansfield, 1977) ou PRESTO
(Liu, 1993). Cependant, elles sont beaucoup plus sensibles aux inhomognits de linduction
statique ainsi quaux artefacts de mouvement (respiration, flux sanguins, ...) et aux effets de
susceptibilit magntique (interface os-tissus mous).
Le point critique de ces tudes rside dans la mthode de calcul permettant la dtermination
des cinq paramtres indpendants du modle utilis. En effet, elle repose sur une minimisation
successive de lcart quadratique moyen mais ne permet pas daffirmer que les paramtres
obtenus correspondent la solution optimale. Il est en effet possible dimaginer quun jeu
diffrent de paramtres puisse correspondre des valeurs de
2
comparables. De plus,
lincertitude sur les paramtres dpend de la qualit de la mesure. Cependant, bien que la validit
du modle ne soit pas totalement dmontre, ce dernier dcrit de manire satisfaisante les
donnes exprimentales et il nous a permis dtudier quantitativement les contrastes entre les
diffrents ROIs, en fonction des caractristiques de limpulsion de transfert. Les conditions
exprimentales permettant dobtenir les meilleurs contrastes ont t dtermins en utilisant les
paramtres issus de lajustement. Ils sont obtenus entre le gliome et les tissus sains, pour de
faibles valeurs de lamplitude de limpulsion de transfert (300 - 700 Hz) une frquence
denviron 3 kHz. Il est cependant possible que de meilleurs rsultats puissent tre obtenus pour
des dures dimpulsion plus courtes, mais dans cette configuration, la condition d'tat stationnaire
n'est plus satisfaite et le modle utilis dans ce travail nest donc plus applicable. Ltude
statistique ralise sur les rat pathologiques montre que les paramtres dtermins par

120
lajustement varient peu en fonction de lge de la tumeur. Limagerie pondre en transfert
daimantation ne permet donc pas de dterminer le degr davancement dun gliome C6, ce qui
est en accord avec l'observation rapporte par Kurki et al. (Kurki, 1995). Cependant, la taille du
gliome est un indicateur suffisamment prcis pour dterminer l'tat de dveloppement de la
tumeur.
La connaissance des valeurs des diffrents paramtres du modle nous a permis dvaluer
linfluence relative de la saturation directe sur les signaux observs en transfert daimantation. Le
rsultat du calcul montre que leffet maximum du transfert daimantation (MAX-TA) ne
correspond pas aux conditions exprimentales permettant dobtenir les meilleurs contrastes.
Cependant, le calcul opr est une diffrence entre la saturation directe (en supposant R = 0) et
leffet de transfert (R ? 0), ce qui suppose que les deux phnomnes sont distincts. Cette
hypothse est discutable puisque le phnomne de transfert daimantation intervient
ncessairement dans les processus de relaxation ds quune impulsion radiofrquence est
applique. Il convient donc dtre prudent dans interprtation des rsultats obtenus. On peut
nanmoins remarquer que MAX-TA varie dans le mme sens que RM
O
B
/R
A
, que les valeurs
trouves sont diffrentes pour chaque ROI et quelles sont comparables celles trouves par
Morrison et al. (Morrison, 1995a; Morrison, 1995b) sur de la matire blanche lyophilise une
concentration denviron 8%.
En supposant que les paramtres issus de lajustement ont des valeurs ralistes, il est
possible de calculer la fraction molaire des protons lis M
O
B
. Ceci pourrait tre particulirement
intressant dans ltude de certaines maladies du systme nerveux central, comme la sclrose en
plaques par exemple. En effet, la destruction des structures des tissus devrait tre corrle avec
une diminution de M
O
B
. Cependant, le modle utilis dans ce travail ne permet pas la daccder
directement la valeur de ce paramtre. On peut cependant lvaluer partir de RM
O
B
/R
A
,
condition de connatre R et R
A
. La valeur de R est dtermine par lajustement et R
A
peut tre
calcule partir du temps de relaxation longitudinal mesur (T
1A
= 1/R
1A
OBS
) en inversion-
rcupration. En effet, lquation [1.34] du 2.3.3 (p. 54) donne la correspondance entre R
A
et

121
R
A
OBS
. R
A
vaut donc 0.760.08, 0.900.09, 0.800.08 et 0.820.08 s
-1
pour CC, NG, LT et T
respectivement. Le calcul de M
O
B
donne alors environ 15%, 14%, 7% et 5% pour les ROI
correspondants (valeurs moyennes sur toutes les expriences ralises). Adler et al. (Adler, 1996)
ont trouv des valeurs similaires sur le cartilage humain, mais avec un modle diffrent alors que
des valeurs beaucoup plus faibles ont t obtenues sur des gel dagar 7 % (Henkelman, 1993)
avec le modle que nous avons utilis. De plus, une diffrence trs importante a t trouve par
Chai et al. (Chai, 1996) entre la matire blanche (43%) et la matire grise (3%) du cerveau
humain. Ceci est la consquence du mode de calcul indirect de M
O
B
, qui est dpendant des
incertitudes de chaque paramtre. Nous avons estim lincertitude relative sur M
O
B
environ 25 -
30 %. Ceci montre que la mthode employe pour dterminer la valeur de ce paramtre permet
seulement davoir une ide qualitative sur la structure du tissu tudi. Cependant, nous pouvons
remarquer que les valeurs les plus fortes de M
O
B
sont obtenues pour le corps calleux et les
noyaux gris, tissus pour lesquels le transfert daimantation est le plus marqu, alors que de plus
faibles valeurs sont obtenues pour le lobe temporal et la tumeur, qui apparaissent plus clairs sur
les images pondres en transfert daimantation (cf. 2, p. 94 et 4.2.3, p. 107).
Lextension dune telle tude la recherche clinique est limite par les valeurs relativement
importantes de lnergie dpose sur lchantillon (cf. 5, p. 114). Un moyen de contourner ce
problme est d'augmenter le temps de rptition, au dtriment de la dure de lexprience. Une
autre alternative consiste acqurir moins dimages correspondant aux couples (
1
, ), mais au
dtriment de la prcision sur les paramtres issus de lajustement.


7 Evolution du taux de transfert hors de ltat stationnaire
Les tudes prsentes au 4 (p. 99) ont montr que lvolution du rapport M
Z
A
/M
O
A

ltat stationnaire en fonction de lamplitude (
1
) et de la frquence () de limpulsion de
transfert peut tre modlis laide dun systme possdant deux compartiments de protons (libre

122
et lis) en interaction. Les contrastes obtenus entre diffrentes rgions du cerveau (corps calleux,
lobe temporal, noyaux gris et tumeur) ont t analyss de manire quantitative. Cependant, on
peut se demander si de meilleurs rsultats pourraient tre obtenus en rduisant la dure (D) de
limpulsion de transfert daimantation. De plus, les normes de scurit relatives au dpt
d'nergie sur l'chantillon interdisent l'application d'impulsions radiofrquences de plusieurs
secondes avec des amplitudes importantes pour des protocoles cliniques. Cependant, le modle
que nous avons considr prcdemment nest valide que si les aimantations des spins sont
ltat stationnaire. Pour contourner cette limitation, nous avons propos une solution des
quations diffrentielles dcrivant le systme (cf. 2.3.1, p. 50) en supposant que seule
laimantation transversale des spins est proche d'un tat stationnaire. La formulation des
quations obtenues est donne au 2.3.3 (p. 54).

7.1 Protocole exprimental
Pour observer lvolution du transfert daimantation en fonction de , D et
1
dans le corps
calleux, les noyaux gris et le lobe temporal, des images du cerveau de rat sain en coupe
transversale ont t enregistres en faisant varier les caractristiques de cette impulsion de la
manire suivante:
- 5 dures dirradiation D = 0.3, 0.6, 0.9, 1.2 et 1.5 s.
- 3 amplitudes
1
= 660, 1300 et 3000 Hz.
- 5 frquences = 750 , 1700, 3000, 5700 et 8500 Hz.

7.2 Validit des approximations.
7.2.1 Relaxation transversale.
La formulation que nous avons propose pour expliquer l'volution des aimantations
longitudinales en fonction de D repose sur l'hypothse que les aimantations transversales des

123
deux compartiments de spins ont atteint un tat quasi-stationnaire (dM
X,Y
/dt 0) la fin de
l'impulsion de transfert. Compte tenu des temps de relaxation des protons lis (T
2B
~ 10 s), il est
fort pobable que l'aimantation transversale de ce compartiment satisfasse cette hypothse pour les
valeurs de D que nous avons choisies (D = 300 ms). Cette remarque est galement valable pour
l'aimantation transversale des protons libres, puisque les valeurs des T
2A
des diffrents tissus
tudis sont de l'ordre de 50-60 ms, ce qui conduit D = 5 T
2A
. De plus, la frquence minimale
de l'impulsion de transfert d'aimantation a t fixe 750 Hz, ce qui est relativement loign de la
frquence de rsonance de l'eau si on considre la bande passante de cette impulsion (quelques
Hz). Nous avons donc pens qu'il tait a priori raisonnable de considrer que l'aimantation
transversale des protons des 2 compartiments puisse tre l'tat stationnaire aprs 300 ms
d'irradiation.


7.2.2 Dcroissance exponentielle.
Les quations du 2.3.3 (p. 54) supposent un comportement exponentiel de l'aimantation
longitudinale des protons libres en fonction de la dure de l'impulsion (D):
) (D M D) (m exp c + D) (m exp c = (D) M
A
SS 2 2 1 1
A
z +
Le dernier terme de cette quation reprsente l'tat stationnaire obtenu lorsque D est
suffisamment long devant (m
1,2
)
-1
. Cette dcroissance bi-exponentielle de M
Z
A
a t simplifie
en supposant que le second terme est ngligeable devant le premier. En effet, des mesures du
rapport M
Z
A
/M
O
A
en fonction de D, pour diffrentes valeurs de
1
et ont toujours pu tre
correctement interprtes l'aide d'une exponentielle dcroissante (cf. Figure 2.4, p. 98). La
constante de temps de cette dcroissance est appele T
1
SAT

(T
1
SAT
= m
1
-1
) et dpend des valeurs
de et
1
, ainsi que des paramtres R, R
A
, R
B
, T
2A
, T
2B
et M
O
B
.
Pour valider cette hypothse, nous avons calcul les valeurs de |m
1
| ainsi que le rapport
m
2
/m
1
en fonction de et
1
, en utilisant les paramtres du transfert d'aimantation dtermins par

124
les tudes ralises l'tat stationnaire en imagerie rapide. Les rsultats de ces simulations pour le
corps calleux, les noyaux gris et le lobe temporal sont prsents sur la Figure 2.14 (p. 125).

8
10
3
2 4 6 8
10
4
2
1.1
0.9
0.5
0.7
0.3
0.4
0.2
0.1
8
10
3
2 4 6 8
10
4
2
1.1
0.9
0.7
0.5
0.3
0.4
0.2
0.1
6000
5000
4000
3000
2000
1000
0
8
10
3
2 4 6 8
10
4
2
1.1
0.9
1.3
0.7
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
Frquence de l'impulsion de transfert / Hz

1

/

H
z
A B C

Figure 2.13
Calcul de la valeur de m
1
pour le corps calleux (A), les noyaux gris (B) et le lobe temporal
(C), en fonction de et
1
.


125
10
3
2 3 4 5 6
10
4
2
110
90
70
50
40
40
30
20
8
10
3
2 4 6 8
10
4
2
90
80
70
60
50
40
30
30 20
100
6000
5000
4000
3000
2000
1000
0
8
10
3
2 4 6 8
10
4
2
110
90
70
50
40
30
30
20
Frquence de l'impulsion de transfert / Hz
A B C

1

/

H
z

Figure 2.14
Calcul du rapport m
2
/m
1
pour le corps calleux (A), les noyaux gris (B) et le lobe temporal
(C), en fonction de et
1
.

Ces courbes montrent que l'approximation ralise est justifie, puisque m
2
est toujours trs
suprieur m
1
en valeur absolue, quelles que soient les valeurs de la frquence et de l'amplitude
de l'impulsion de transfert. De plus, les valeurs calcules de m
2
sont comprises entre 2 ms et
25 ms pour les amplitudes (
1
compris entre 660 et 3000 Hz) et les frquences ( compris entre
750 et 20000 Hz) de l'impulsion de transfert que nous avons utilises dans les mesures effectues
sur le cerveau de rat. Comme la dure minimale de l'impulsion que nous avons utilise est de
300 ms, on peut donc considrer que le second terme de l'quation prcdente est proche de zro.
Nanmoins, si l'amplitude du second terme (c
2
) est trs grande devant celle du premier (c
1
), il se
pourrait que l'approximation ne soit pas exacte. Les mesures que nous avons ralises, ainsi que
celles rapportes dans plusieurs tudes (Eng, 1991; Hajnal, 1992; Henkelman, 1993) n'ont jamais
permis de mettre en vidence un tel phnomne.


126
7.3 Evolution du rapport signal sur bruit en fonction de D, , et
1

En considrant que les diffrentes hypothses simplificatrices sont valides, nous avons
confront les rsultats exprimentaux la simulation. Les valeurs du rapport signal sur bruit en
fonction des caractristiques de l'impulsion de transfert sont prsentes sur la Figure 2.15 (p.
127). En utilisant les quations donnes au 2.3.2 (p. 52), il est possible de simuler lvolution
du rapport signal sur bruit (S/B) en fonction des caractristiques de limpulsion de transfert (
1
,
, D), condition de connatre les valeurs de R, R
A
, R
B
, T
2A
, T
2B
et M
O
B
. Cependant, les tudes
l'tat stationnaire ne permettent pas de dterminer indpendamment les valeurs des ces
paramtres, mais donnent les valeurs de R, RM
O
B
/R
A
, R
B
, T
2B
, et 1/R
A
T
2A
. Il est donc ncessaire
de connatre la valeur de R
A
pour effectuer la simulation. Elle peut tre calcule partir du temps
de relaxation longitudinal T
1
OBS
dtermin par une exprience d'inversion-rcupration par
exemple, en utilisant l'quation [1.35] du 2.3.3 (p. 54). Les valeurs des T
1
OBS
du corps calleux,
des noyaux gris et du lobe temporal sont donnes dans le Tableau 2.1 (p. 99). En utilisant les
valeurs des paramtres donnes dans le Tableau 2.3 (p. 110), on trouve les valeurs suivantes:

Rgion du cerveau Calcul de R
A
/ s
-1

Corps Calleux 0.76 0.08
Noyaux Gris 0.90 0.08
Lobe temporal 0.80 0.08
Tableau 2.5
Valeur calcule de la vitesse de relaxation des protons libres.

Pour raliser la simulation, il est galement ncessaire de connatre la valeur du rapport
Signal/Bruit dans chaque ROI tudi, lorsque limpulsion de transfert nest pas applique. Pour
cela, des images de rfrences (
1
= 0) ont t obtenues dans les mmes conditions
exprimentales (T
R
= 4 s, T
E
= 5 ms) que prcdemment.


127
B
Frquence de l'impulsion de transfert / kHz
0.3 s
0.6 s 0.9 s 1.2 s 1.5 s
S
i
g
n
a
l

/

B
r
u
i
t
50
40
30
20
10
0
2 4 2 2 2 4 4 4 6 6 6 6 6 8 8 8 8
8
8 2 4
50
40
30
20
10
0
50
40
30
20
10
0
A
C

Figure 2.15
Evolution du rapport signal sur bruit en fonction de la frquence de limpulsion de
transfert, pour le corps calleux (A), les noyaux gris (B) et le lobe temporal (C). Chaque
colonne correspond la dure D dirradiation indique au dessus des courbes. Les

128
amplitudes de l'impulsion sont respectivement de 660 (O), 1300 (v) et 3000 Hz (). Les
barres derreur correspondent aux dviations standard des intensits mesures sur les
images. Les courbes continues sont le rsultat du calcul effectu (cf. texte) et les traits
horizontaux reprsentent le rapport signal sur bruit de l'image de rfrence (
1
=0).

La simulation et les mesures sont en accord, puisque pratiquement toutes les valeurs
calcules sont contenues dans les barres d'erreurs reprsentant les incertitudes sur les intensits
moyennes mesures. Ce modle relativement simple permet donc dterminer a priori l'volution
des signaux observs en transfert d'aimantation en fonction de la dure, de l'amplitude et de la
frquence de l'impulsion. L'tape suivante consiste dterminer les caractristiques de
l'impulsion de transfert (, D et
1
) permettant d'obtenir les meilleurs contrastes.

7.4 Contrastes
Les contrastes relatifs entre deux ROI i et j ont t calculs en utilisant la formule donne
au 4.2.5 (p. 111):
C
ij
= | S
i
calc
.S
i
ref
- S
j
calc
.S
j
ref
| / B
ref
Les rsultats obtenus sont prsents sur la Figure 2.16, sous forme de courbes de niveaux.


129
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
8000 4000
3
2.6
2.4
2.2
1.4
2
2.8
1.8
1.2
1.6
6000 4000 2000
3.1 2.9
2.7
2.5
2.3
1.5
1.9
8000 4000
4.5
4.2
3.9
3.3
3
3.6
2.7
2.4
2.1
D

/

s
Frquence de l'impulsion de transfert / Hz
A B C

Figure 2.16
Rsultat du calcul des contrastes entre CC et NG (A), NG et LT (B), CC et LT, en fonction
de la frquence () et de la dure D de l'impulsion de transfert, pour l'amplitude
correspondant aux valeurs de C
ij
les plus leves:
1
vaut 400 Hz, 700 Hz et 730 Hz pour A
, B et C respectivement.

Les contrastes maximaux sont obtenus pour des amplitudes de l'impulsion de transfert
relativement faibles (400-730 Hz) dans les trois cas. La valeur maximale de C/N est autour de 3
entre le corps calleux et les noyaux gris ainsi qu'entre le lobe temporal et les noyaux gris et atteint
4.6 entre le corps calleux et le lobe temporal. Les conditions d'acquisitions correspondantes sont
trs diffrentes suivant les ROIs considrs:
1
= 400 Hz, > 10 kHz et D > 3 s pour CC-NG,

1
= 700 Hz, = 2 kHz et D = 1.1 s pour LT-NG,
1
= 730 Hz, = 5 kHz et D = 3 s pour LT-
CC. Il est noter qu'entre NG et CC, les valeurs maximales du contraste sont peu prs
identiques celles obtenues sans transfert.
Des mesures complmentaires ont t effectues dans les conditions permettant d'obtenir
les meilleurs contrastes entre NG et LT puis CC et LT, en oprant 4 accumulations. Les valeurs
de C/N ainsi obtenues sont de 3.7 0.7 pour NG-LT et 4.2 0.8 pour CC-LT, du mme ordre de
grandeur que les valeurs calcules.

130
8 Discussion
L'utilisation d'une squence d'imagerie rapide pondre en transfert d'aimantation nous a
permis d'tudier de manire quantitative l'volution du rapport M
Z
A
/M
O
A
en fonction de la dure,
de l'amplitude et de la frquence de l'impulsion de transfert. Plusieurs tudes ont dj t
prsentes pour expliquer l'volution de ce rapport lorsque les aimantations des deux
compartiments ne sont pas l'tat stationnaire. En effet, Yeung et al (Yeung, 1994) ont propos
une reformulation des quations de ce modle en utilisant la thorie de Redfield-Provotorov et
ont montr que l'utilisation d'une rsonance de forme gaussienne pour les protons mobilit
rduite amliore la qualit de l'ajustement entre le modle et les donnes exprimentales. Adler et
al (Adler, 1996) ont quant eux interprt des mesures effectues sur du cartilage par un modle
3 compartiments et une fonction gaussienne. Il semble clair que ces modles auraient pu tre
utiliss pour interprter nos mesures, puisqu'ils contiennent un nombre de paramtres
indpendants suprieur celui du modle 2 compartiments. Etant donn que les mesures
ralises in vivo sont plus disperses que celle prsentes dans ces diffrentes tudes, nous avons
choisi d'utiliser le modle qui contient le nombre minimum de paramtres indpendants. Ces
derniers ont t dtermins partir des mesures effectues l'tat stationnaire et nous ne
discuterons pas ici leur validit (cf. 6 p. 116).
Bien que l'utilisation de la fonction superLorentzienne ne soit pas totalement justifie, le
bon accord obtenu entre la simulation et les donnes exprimentales permet de considrer que le
modle 2 compartiments permet de dcrire correctement l'volution des signaux hors de l'tat
stationnaire.
Une des hypothse avance pour simplifier la rsolution des quations du transfert
d'aimantation est que l'aimantation transversale des protons lis (M
X,Y
B
) et des protons libres
(M
X,Y
A
) aient atteint un tat stationnaire. Dans le premier cas, on peut considrer que M
X,Y
B
est
nul aprs quelques millisecondes d'irradiation, puisque le temps de relaxation transversale des
protons lis est de l'ordre de 10 s. D'un autre cot, M
X,Y
A
devrait avoir atteint un tat

131
stationnaire aprs quelques centaines de millisecondes d'irradiation, ce qui justifie l'utilisation
d'une dure d'irradiation minimale de 0.3 s dans les expriences que nous avons ralises sur le
cerveau de rat. Par chance, les contrastes optimaux ont t obtenus pour des temps d'irradiation de
l'ordre de 1 seconde.
Dans la limite de validit des approximations effectues, l'intgration des quations
diffrentielles est relativement aise et conduit un comportement bi-exponentiel de M
Z
A
. En
utilisant les paramtres dtermins l'tat stationnaire, nous avons montr qu'une des
composantes de cette relaxation pouvait tre nglige devant l'autre, ce qui conduit un dclin
monoexponentiel de M
Z
A
en fonction de la dure d'irradiation. D'autre part, aucun phnomne bi-
exponentiel n'a pu tre mis en vidence dans nos mesures de T
1
SAT
, ainsi que dans celles
rapportes dans diverses tudes (Eng, 1991; Hajnal, 1992; Henkelman, 1993).
Le modle que nous avons utilis permet de prvoir les contrastes relatifs entre les
diffrents ROIs slectionns. Puisque les conditions exprimentales permettant d'obtenir les
contrastes optimaux diffrent en fonction des rgions slectionnes, un compromis doit tre
opr, suivant l'objectif recherch. En utilisant les paramtres du Tableau 2.3 (p. 110) relatifs aux
mesures effectues sur le gliome C6, nous avons calcul les valeurs de
1
, et D conduisant aux
meilleurs contrastes. Celles-ci sont reportes dans le Tableau 2.6

1
/ Hz
/ Hz D / s
(C/N)
Max

CC-TUM 670 4100 2.2 12.9
NG-TUM 730 3000 1.0 13.8
LT-TUM 900 3700 0.8 8.7
Tableau 2.6
Caractristiques de l'impulsion de transfert permettant d'obtenir les meilleurs contrastes
entre la tumeur et le corps calleux (CC-TUM), la tumeur et les noyaux gris (NG-TUM), la

132
tumeur et le lobe temporal (LT-TUM). Les valeurs des contrastes correspondants sont
donns dans la dernire colonne.

Ces conditions exprimentales sont proches de celles calcules sur les tissus du cerveau de
rat sain (NG-CC, LT-CC, NG-LT), mais les contrastes maximaux sont suprieurs pour la tumeur.
Ceci confirme que le transfert d'aimantation est une technique de choix pour dtecter la prsence
d'un gliome 4.7 T.
Une application possible de la formulation que nous avons propose pour expliquer
l'volution du rapport M
Z
A
/M
O
A
sur le cerveau de rat est de prvoir les contrastes observs
1.0 T sur le cerveau humain, partir des rsultats de Chai et al (Chai, 1996). Ces auteurs donnent
en effet une liste des paramtres de relaxation dtermins partir d'expriences de transfert
d'aimantation ralises l'aide d'impulsions binomiales. Nous avons ralis des mesures 1.5 T
(Siemens Magnetom de l'Hpital Pellegrin) afin de connatre les densits de protons dans la
matire blanche (MB) et la matire grise (MG). Le rapport signal sur bruit mesur dans ces deux
ROIs tait de 44.4 et 50.6 respectivement. En prenant {R (s
-1
), M
O
B
, R
B
(s
-1
), R
A
(s
-1
), T
2B
(s),
T
2A
(ms)} = {21, 0.03, 0.85, 1.05, 12, 73} et {25.5, 0.435, 1.6, 1.9, 10, 91} pour (MG) et (MB)
respectivement (voir Table 2 de (Chai, 1996)), un contraste optimum de 34 a t dtermin,
correspondant
1
= 6.4 kHz, D = 0.25 s et = 13.7 kHz. Une telle amplitude de l'impulsion de
transfert n'est pas utilisable en condition d'imagerie clinique, cause des problmes de SAR. De
plus, les valeurs de M
O
B
rapportes dans cette publication ont t donnes avec une grande
incertitude. Il serait donc ncessaire d'effectuer des expriences complmentaires pour affiner les
valeurs des diffrents paramtres de relaxation.
Une autre voie explorer est l'utilisation du transfert d'aimantation en prsence d'agents de
contrastes. En effet, il a dj t montr que le cette technique, applique la dtection de
tumeurs crbrales en imagerie, permet de rduire la dose de Gadolinium injecte (Finelli, 1994).
Il est d'ailleurs probable que le TA pourrait se substituer l'utilisation d'agents de contrastes,
puisqu'il est extrmement simple mettre en uvre et totalement non-invasif, mise part la

133
puissance RF dpose sur l'chantillon. Cependant, il se pourrait que la prsence d'agents
paramagntiques modifie les conditions d'acquisition conduisant aux meilleurs contrastes et
permette ventuellement de rduire la dure et/ou l'amplitude de l'impulsion radiofrquence non-
rsonante. Le type d'tude que nous avons ralise sur le cerveau de rat ainsi que la gnralisation
des quations du modle 2 compartiments constitue donc une base de travail utile pour
optimiser les caractristiques de l'impulsion de transfert en prsence d'agents de contraste.

134


Chapitre 3

Spectroscopie de lexercice musculaire



135
Introduction
En parallle aux donnes anatomiques obtenues par IRM, la spectroscopie de RMN in vivo
chez l'Homme a apport depuis une vingtaine d'annes quantit d'informations mtaboliques. Le
caractre totalement non-invasif de cette technique explique que de nombreuses investigations
ont t dveloppes sur diffrents organes comme le cerveau, le foie, le coeur et le muscle
squeletique notamment. Elles visent essentiellement amliorer la comprhension des
mcanismes de diffrentes voies mtaboliques.
Les recherches portant sur le cerveau humain portent essentiellement sur la spectroscopie
localise du
1
H et du
31
P. Diffrentes squences d'acquisition ont t proposes dans la littrature
pour obtenir des informations mtaboliques provenant de volumes d'intrt de quelques
centimtres cubes. On constate d'ailleurs que la spectroscopie de RMN de ces deux noyaux sur le
cerveau humain a donn lieu un nombre consquent de publications, dont il serait illusoire de
vouloir donner ici une liste exhaustive. Ces investigations ont permis par exemple d'tablir des
corrlations entre les donnes spectroscopiques obtenues et divers types de troubles associs la
prsence de tumeurs (Bruhn, 1989; Maris, 1985; Negendank, 1992; Segebarth, 1987). D'autre
part, les concentrations relatives de divers mtabolites prsents dans le cerveau de l'enfant ont t
mesures en fonction de l'age de celui-ci (Cady, 1983; Hope, 1984) et il a t montr que ces
rapports d'intensits varient en fonction de l'ge du nourisson. De nombreux travaux portant sur la
souffrance neurologique nonatale ont d'ailleurs t rapports dans la littrature (Ashwal, 1996;
Cady, 1996; Frahm, 1996; Hashimoto, 1995; Martin, 1996; Penrice, 1996; van der Knaap, 1990).
Nous avons dvelopp une tude similaire en collaboration avec le D
r
J-F Chateil en mettant au
point un protocole de recherche utilisant la spectroscopie du
1
H sur un aimant de l'Hopital
Pellegrin (CHU de Bordeaux) oprant 1.5 T. A ce jour, une cinquantaine de nourissons ont t
suivis sur une anne environ et les rsultats sont en cours d'analyse.
La bionergtique cardiaque a galement t abondamment tudie par la spectroscopie du
31
P sur des modles animaux, en vue d'tablir par exemple les consquences mtaboliques d'une

136
ischmie prolonge (Pantely, 1990; Schaefer, 1989; Zhang, 1993b) ou d'une hypertrophie
myocardique (Zhang, 1993a). Les tudes cliniques sont beaucoup plus dlicates mettre en
uvre cause des mouvements engrendrs par les contractions du coeur ainsi que par les
problmes lis la localisation du signal. Cependant, il a t montr que le rapport d'intensit
(Phosphocratine)/(Adnosine di-phosphate) est significativement plus faible chez les sujets sains
(Menon, 1992) que chez certains patients atteint d'une myopathie cardiaque (Gober, 1990; Hardy,
1991). La spectroscopie du
13
C a galement t dveloppe sur des modles animaux pour l'tude
du mtabolisme intermdiaire. La mthode consiste injecter des composs enrichis
spcifiquement en
13
C, afin de suivre leur dgradation par les diffrentes voies mtaboliques.
Cette procdure a notamment permis de proposer un modle permettant d'expliquer
l'enrichissement des rsonances du glutamate C2 et C4 (Malloy, 1988; Malloy, 1990a; Malloy,
1990b; Weiss, 1992). Cependant, la difficult exprimentale ainsi que le cot des isotopes
enrichis en
13
C rendent trs difficile la ralisation de telles investigations in vivo chez l'Homme.
Le mtabolisme hpatique chez l'Homme a t largement tudi par la spectroscopie de
RMN du Phosphore-31 (Cox, 1991; Cox, 1992; Meyerhoff, 1990; Oberhansli, 1986; Oberhansli,
1990; Segebarth, 1991). Des corrlations ont d'ailleurs t tablies entre les intensits des
rsonances observes et certaines pathologies provoquant une dysfonction de cet organe
(Bourdel-Marchasson, 1996). La spectroscopie du
13
C prsente quant elle un intrt particulier
puisque les mtabolismes du glycogne, des acides gras libres, de l'ure, etc peuvent
thoriquement tre tudis de manire non-invasive par cette technique. Certains de ces axes de
recherche sont d'ailleurs dvelopps au sein du laboratoire sur le modle du foie de rat perfus ex
vivo. D'autre part, plusieurs travaux effectus sur le foie humain ont t publis (Jue, 1989b),
notamment en imagerie spectroscopique (Thiaudire, 1994), mais cette technique n'est encore que
peu employe, en raison notamment des temps d'examen relativement longs et de la faible
sensibilit de la technique.
Une des applications les plus rpandues de la spectroscopie RMN est l'tude du
mtabolisme nergtique du muscle squeletique par le
31
P (Taylor, 1986b) (Chance, 1980;

137
Chance, 1981). Cette technique est de plus en plus utilise pour essayer d'tablir des corrlations
entre d'ventuelles modifications mtaboliques et des pathologies affectant le fonctionnement du
mtabolisme nergtique. En effet, certains composs phosphors (phosphocratine, adnosine
di-phosphate, adnosine tri-phosphate, phosphate inorganique,) entrent en jeu dans plusieurs
ractions diffrents endroits de la cellule (mitochondrie, cytoplasme). Pour observer les
cintiques de dgradation et/ou de synthse de certains de ces composs, il est ncessaire de
perturber l'tat physiologique du muscle en effectuant un exercice, et en enregistrant des spectres
31
P simultanment. Cependant, les rsultats obtenus peuvent varier de manire importante en
fonction de l'entranement physique du sujet, de son ge et de son tat de sant. Le protocole
d'effort doit donc tre adapt chaque patient, en fonction de ses aptitudes. D'un point de vue
biochimique, le travail musculaire est li l'hydrolyse de l'ATP qui produit de l'ADP et du Pi:
+ 2 H + Pi + ADP O H ATP

+
L'ADP ragit avec la phosphocratine pour produire de la cratine et de l'ATP.
ATP + Cr ADP PCr + H+

+
Au cours de l'exercice, on s'attend donc observer des variations des intensits relatives des
rsonances correspondantes. Cependant, au cours d'un effort de faible intensit, la consommation
en ATP est compense par la dgradation de la PCr, la phosphorylation oxydative, le catabolisme
glucidique et lipidique et on atteint alors un tat stationnaire pour ce mtabolite. Un compromis
sur le protocole d'effort doit donc tre opr pour observer des variations spectroscopiques, sans
pour autant inhiber l'une ou l'autre de ces ractions. En outre, l'acquisition des spectres doit tre
effectue de telle manire que la rsolution temporelle soit suffisante pour calculer les constantes
de temps caractristiques des ractions chimiques mises en jeu avant et aprs l'effort.
La spectroscopie du
13
C permet d'observer en abondance naturelle ou en prsence d'un
enrichissement spcifique les chanes carbones de molcules plus ou moins complexes, qui
entrent en jeu lors de l'activation de diverses voies du mtabolisme intermdiaire. Les composs
les plus intressants sont notamment les sucres avec le glucose, le glycogne, les lipides,
puisqu'ils interviennent dans les nombreuses ractions chimiques du catabolisme. De nombreuses

138
applications potentielles ont d'ailleurs t explores dans notre laboratoire et ont dj permis
d'tudier quantitativement les diffrentes voies du mtabolisme du glucose dans le systme
nerveux central, en mesurant les enrichissements spcifiques de divers composs suite une
injection de glucose marqu spcifiquement en
13
C par exemple (Merle, 1996). Le glycogne
constitue quant lui une rserve nergtique puisqu'il permet au foie de rguler la concentration
de glucose sanguin, par le biais des ractions de glycognolyse et de glycognognse. Le muscle
squeletique possde lui aussi une quantit non ngligeable de glycogne. Nous nous sommes
proposs d'tudier la mobilisation de cette rserve au cours de l'effort, puis sa rcupration avec
l'apport de divers substrats. Nous avons donc mis au point un protocole d'tude comprenant une
phase d'activit musculaire suivie d'une priode de repos pendant laquelle des spectres de RMN
du
13
C sont enregistrs intervalles rguliers. La rsolution temporelle de cette exprience est
moins exigeante que pour les mesures effectues en spectroscopie de RMN du
31
P, puisque les
mcanismes permettant la synthse du glycogne sont beaucoup plus lents que ceux intervenant
dans la synthse des mtabolites phosphoryls.

2 Application ltude du mtabolisme nergtique
Nous allons dans un premier temps prsenter les test qui nous ont permis de valider le
protocole d'effort utilisant l'ergomtre dvelopp au laboratoire, puis nous prsenterons une
application la radaptation fonctionnelle de sujets prsentant des troubles cardiaques
(coronariens).

2.1 Rsultats prliminaires -Tests de reproductibilit
2.1.1 Rsultats obtenus sur des tmoins.
Pour valider le protocole exprimental prsent au 2.4.1 (p. 56), et tester la fiabilit de
l'ergomtre, nous avons ralis plusieurs expriences prliminaires sur des volontaires. Un

139
exemple typique des rsultats que l'on peut obtenir par la spectroscopie de RMN du
31
P est
prsent ci-dessous. Le protocole utilis est dcrit au 2.4.1 (p. 56). Quatre spectres (composs
de 4 accumulations espaces de 4.3 s) obtenus diffrents temps caractristiques de l'exprience
sont prsents sur la Figure 3.1.

-25 -20 -15 -10 -5 0 5
ppm
1
2
3
4
5
6
A
B
C
D

Figure 3.1
Spectres obtenus diffrents temps caractristiques de l'exprience:
Avant l'effort (A), la fin (B) du premier palier (30 % de l'EM), la fin (C) du second
palier (50 % de l'EM et la fin de la rcupration (D).
L'attribution des rsonances est la suivante: 1-Phosphate inorganique (Pi), 2-Phospho di-
Ester (PDE), 3-Phosphocratine (PCr), 4-Adnosine Tri-Phosphate (ATP) ATP

, 5-ATP

et
6-ATP

.

Le rapport signal sur bruit est suffisamment important pour obtenir des informations
quantitatives sur l'volution des concentrations des diffrents mtabolites. Les modifications les
plus importantes concernent la PCr dont l'intensit de la rsonance dcrot de manire importante

140
pendant l'effort, puis revient son amplitude initiale la fin de la priode de repos. L'volution
inverse est observe pour la rsonance du Pi qui augmente pendant l'effort puis diminue pendant
la priode de repos. De plus, la position de la rsonance du Pi s'est dcale vers les hauts champs
pendant l'effort avant de revenir sa position initiale par la suite, ce qui indique une variation du
pH au cours de l'effort. Les trois rsonances de l'ATP semblent quant elles demeurer constantes
tout au long de l'exprience, ce qui indique que l'ATP est l'tat stationnaire.
La Figure 3.2 obtenue l'aide du programme de dconvolution automatique (cf. Chapitre 1)
permet de visualiser de manire plus prcise l'volution des concentrations de la PCr et du Pi en
fonction du temps. Les intensits des rsonances de l'ATP ne sont pas reportes ici, puisqu'elles
restent constantes.


141
40
30
20
10
0
P
C
r

/

m
M
1000 800 600 400 200 0
C
B
A
40
30
20
10
0
P
i

/

m
M
1000 800 600 400 200 0
Temps / s
A B C
effort rcupration

Figure 3.2
Evolution des intensits des rsonances de la PCr et du Pi en fonction du temps: (A)-dbut
de l'effort, (B) fin du premier palier et (C) fin de l'effort.

La dispersion des intensits est plus importante pendant l'effort que pendant la priode de
repos. Ceci est d aux mouvements du sujet pendant l'exercice. Il se peut en effet que celui-ci ait
des difficults conserver la cadence de l'effort et effectue un basculement de la pdale pendant
une acquisition. Dans ces conditions, l'homognit de l'induction statique B
O
n'est plus optimale
et les rsonances du spectre s'largissent. Cependant, on observe nettement une dcroissance

142
continue de la PCr ds le dbut de l'effort (A), avec une cassure correspondant au changement de
palier (B). A partir de la fin de l'effort, une remonte continue s'amorce, jusqu' atteindre une
valeur proche de l'intensit initiale. Cette remonte a t ajuste par une fonction exponentielle de
constante de temps
PCr
. Dans l'exemple ci-dessus
PCr
vaut 68 5 s et la vitesse initiale de
remonte de la Pcr est de 0.43 0.04 mM.s
-1
.
Le Pi augmente pendant l'effort, jusqu' atteindre une valeur moyenne de 22 mM, puis
revient sa valeur initiale (2-3 mM) au cours de la priode de repos.
Le calcul du pH est ensuite effectu partir des valeurs du dplacement chimique de la
rsonance du Pi (cf. 2.4.1, p. 56). Les rsultats obtenus sont prsents sur la Figure 3.3.

7.0
6.8
6.6
6.4
p
H
1000 800 600 400 200 0
Temps / s
C
A B

Figure 3.3
Evolution du pH en fonction du temps: A-dbut de l'effort, B-fin du premier palier et C-fin
de l'effort. Les point manquants sont soit aberrants, soit non dtermins (impossibilit de
dconvoluer correctement la rsonance du Pi)

Le pH reste constant pendant le premier palier (30 % de l'EM), puis une acidification
importante du muscle est observe pendant le second palier (50 % de l'EM), avec un pH de 6.55
environ la fin de l'effort. Cette baisse du pH se prolonge aprs l'effort pendant 2 min 30 s

143
environ pour atteindre 6.35, puis remonte vers sa valeur de dpart. Cette baisse est attendue
puisque un proton est libr pour resynthtiser une molcule de PCr. Certains auteurs (Gillies,
1994) ont tabli empiriquement des relations entre le rapport des concentrations de la PCr et du Pi
la fin de l'exercice, en analysant les donnes sur un grand nombre d'individus. Ils ont montr
qu'il existe une relation linaire entre ce rapport et l'acidose observe:
12.5 pH 08 . 2
Pi
PCr
c , o pH
c
est la valeur du pH la fin de l'effort (point C).
De plus, il a galement t suggr que la glycolyse est stoppe quand le rapport
PCr/(PCr + Pi) (Taylor, 1986b) atteint une valeur de 0.4 environ, ce qui correspond un rapport
PCr/Pi de 2/3. Si on reporte ce nombre dans l'quation prcdente, cela conduit un pH
c
de 6.33.
Cette valeur est infrieure celle obtenue la fin de l'effort, ce qui confirme que la glycolyse n'est
pas inhibe et peut contribuer la rgnration de l'ATP pendant l'effort.
Les calculs de la concentration en ADP ainsi que du Gp sont ensuite effectus pour tous
les points o le pH est dtermin. Les rsultats sont prsents sur la Figure 3.4:


144
0.15
0.10
0.05
0.00
A
D
P

/

M
400 300 200 100 0
Temps / s
-65
-60
-55
-50

G
P

/

k
J
.
M
o
l
-
1
800 600 400 200 0
Temps / s
A
B
C

Figure 3.4
A-Variations de l'Adnosine Di-Phosphate (ADP) pendant la phase de rcupration. La
courbe continue du graphique de gauche est obtenue en ralisant un ajustement l'aide
d'une fonction exponentielle.
B-variation d'enthalpie libre Gp de la raction d'hydrolyse de l'ATP.

La variation de l'ADP pendant l'effort n'est pas reporte car nous cherchions calculer la
vitesse initiale de dgradation de l'ADP (V
i
ADP
) pendant la priode de rcupration. Celle-ci est
obtenue en ajustant les points exprimentaux l'aide d'une exponentielle dcroissante de
constante de temps
ADP
. Dans l'exemple propos, V
i
ADP
vaut 16.7 2 M.s
-1
. Il convient
cependant d'tre prudent sur cette valeur car peu de points dfinissent la chute de l'ADP.
Le calcul de l'enthalpie libre montre clairement l'existence de deux paliers correspondant
aux modifications de l'effort fournir.
La valeur de Gp au repos est de l'ordre de -64 kJ.Mol
-1
et atteint -48 kJ.Mol
-1
la fin de
l'effort. De plus, le Gp revient sa valeur initiale a la fin de l'exercice.

La qualit des rsultats obtenus sur cet exemple montre qu'une investigation in vivo chez
l'homme est ralisable en utilisant les paramtres d'acquisition prsents au 2.4.1 (p. 56). Le
choix du protocole d'effort (deux paliers 30 % et 50 % de l'EM) semble bien adapt l'objectif

145
recherch, savoir l'tude du mtabolisme nergtique en condition arobie. En effet, le premier
palier permet au patient de s'accoutumer l'effort et le second induit une dpltion significative
de la Phosphocratine ainsi qu'une acidose. Effectuer un seul palier 30 % de l'EM ne semble pas
suffisant pour obtenir ce rsultat (cf. Figure 3.2, p. 141), moins peut-tre d'effectuer un effort
d'une dure beaucoup plus longue. A l'oppos, un palier 50 % est trop violent et les patients
examins dans ces conditions n'ont pu mener leur effort jusqu' son terme. Notre protocole
semble donc tre un bon compromis pour obtenir une dpltion importante de la rsonance de la
Phosphocratine en satisfaisant la condition d'arobie. Les rsultats obtenus sont similaires
ceux rapports par Taylor et al (Taylor, 1986b). La dfinition temporelle (17.2 s) de l'exprience
est suffisante pour calculer le temps caractristique de la remonte de la PCr. De plus, les
variations du pH et du Gp sont dtermines avec une bonne prcision. En outre, le traitement
automatis des donnes prsente l'avantage d'tre rapide et de limiter l'intervention de
l'exprimentateur dans la mesure des intensits des mtabolites. Pour valider compltement le
protocole, il reste dmontrer que les rsultats obtenus sont reproductibles (cf. 2.1.2).

2.1.2 Tests de reproductibilit.
Un tmoin volontaire a effectu quatre fois le mme exercice quelques jours d'intervalle,
afin de tester la reproductibilit des rsultats obtenus. Pour les quatre expriences, les valeurs de
l'EM ont t dtermines 600-650 N. Dans les deux premires expriences du tableau ci-
dessous, nous avons normalis les intensits des forces des deux paliers en supposant que l'EM
vaut 600 N, alors que dans les deux suivantes, l'EM a t choisi 700 N. De cette manire,
l'influence de l'EM sur les rsultats a pu tre apprcie. Les valeurs des diffrentes grandeurs
dtermines par le programme de dconvolution sont reportes dans le tableau ci-dessous.


146

PCR
/ s pH
initia
l

pH
final
Gp
initial
kJ.Mol
-1
Gp
final
kJ.Mol
-1
EM / N
Exp. 1 56 4 7.01 6.8 -64 -52 600
Exp. 2 49 4 7.00 6.75 -63 -52 600
Exp. 3 85 6 7.02 6.2 -66 -48 700
Exp. 4 78 5 6.99 6.15 -65 -49 700
Tableau 3.1
Valeurs des diffrentes grandeurs dtermines de manire reproductible au cours de 4
expriences diffrentes, sur un mme patient.

Ce tableau montre clairement que les valeurs du pH, de la constante de temps de la
remonte de la PCr et du Gp sont reproductibles sur un mme individu lorsqu'on choisit un
protocole d'effort dtermin. La variation la plus importante entre les deux groupes d'expriences
dcrites ci-dessus concerne le pH la fin de l'effort dont la valeur semble dpendre des intensits
de chaque palier.

2.2 Application la radaptation fonctionnelle
2.2.1 Introduction
Cette tude, ralise en collaboration avec le CHU de Bordeaux (Hpital cardiologique du
Haut Lvque, Service du P
r
Broustet), la Facult de mdecine de Picardie et notre laboratoire,
vise tudier les modifications mtaboliques induites par un entranement physique chez des
sujets atteint d'une affection cardiaque (coronariens). Il est dj connu que l'entranement
physique chez un sujet sain a pour consquence une amlioration des performances myocardiques
et respiratoires ainsi qu'une meilleure irrigation musculaire et une extraction d'oxygne accrue
pour un dbit sanguin identique.

147
L'objectif est de comparer les rponses cardio-respiratoires et mtaboliques sur les sujets
prsentants une pathologie cardiaque, avant et aprs un sjour d'une dure de 20 jours en
moyenne altitude (2000 - 3000 m). Les tests l'effort ainsi que les nombreux contrles (tension,
pouls, lectrocardiogramme, frquence respiratoire, saturation en oxygne, etc...) raliss pendant
ce sjour ne sont pas reports ici.
Nous avons ralis des investigations spectroscopiques en
31
P avant et aprs ce sjour, afin
d'obtenir des informations quantitatives sur les modifications du mtabolisme nergtique que cet
entranement pourrait induire. Le protocole employ est celui dcrit au 2.4.1 (p. 56). L'effort
maximal a t dtermin pour chaque patient avant le sjour. La valeur obtenue a t garde pour
les deux mesures effectues, puisque nous avons dmontr au paragraphe prcdent que la
modification de l'EM sur un mme patient pouvait induire des modifications importantes sur les
rsultats obtenus, notamment en ce qui concerne le pH. Chaque personne est ainsi son propre
tmoin. De plus, le groupe des sujets cardiaques, compos de 4 personnes, a t compar un
groupe de cinq tmoins sains ayant subi le mme entranement.

2.2.2 Rsultats
Nous avons montr au 2.1.2 que les paramtres caractristiques de l'effort, mesurables de
manire reproductible par RMN du
31
P, sont:
-Le temps de rcupration de la PCr (
PCr
).
-La variation du pH.
-La variation du Gp entre le dbut et la fin de l'effort.

Le temps de rcupration
PCr
avant et aprs le sjour en montagne est port sur la Figure
3.5, pour chaque patient:


148
180
160
140
120
100
80
60
40
20

P
C
r

/

s
Sujets sains Patients

Figure 3.5
Evolution du temps de remont de la PCr pour les sujets sains (A) et les patients (B), avant
(!) et aprs (") le sjour en montagne.

Le temps caractristique de rcupration de la PCr (
PCR
) avant le sjour est plus lev pour
le groupe des coronariens que pour le groupe des tmoins sains. L'tude statistique par l'analyse
de variance univarie montre que la radaptation moyenne altitude diminue significativement

PCR
chez les patients (p< 0.05). De mme, la diminution du
PCR
induite par le stage en moyenne
altitude est significativement plus importante chez les patients que chez les sujets contrles
(p<0.005).
Les valeurs du pH au repos sont trs proches les unes des autres (7.0) avant et aprs le
sjour, et nous avons donc choisi de reporter sur la Figure 3.6 la diffrence de pH (pH) entre le
dbut de l'effort et la valeur minimale de celui-ci, pour chaque groupe:


149
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
p
H
(
r
e
p
o
s
)

-

p
H
(
e
f
f
o
r
t
)
Sujets sains Patients

Figure 3.6
Diffrence de pH entre le repos et le pH minimal pour les sujets sains et les sujets
cardiaques, avant (") et aprs (!) le sjour en montagne.

La valeur de pH est du mme ordre de grandeur pour chaque groupe avant le sjour. Aprs
l'entranement, pH a diminu pour tous les individus, mais pas de diffrence significative entre
les deux groupes n'a pu tre mise en vidence. Il est noter cependant que le patient coronarien
dont la variation de pH est la plus importante est galement celui dont la constante de temps

PCR
a le plus diminu (cf. Figure 3.5, p. 148).
La diffrence entre Gp au repos et la fin de l'effort est reporte sur la Figure 3.7.


150
-18
-16
-14
-12
-10
-8
-6
Sujets sains
Patients

G
p
(
r
e
p
o
s
)

-

G
p
(
e
f
f
o
r
t
)

/

k
J
.
M
o
l
-
1

Figure 3.7
Diffrence de Gp entre le repos et la fin de l'effort pour les sujets sains et les patients,
avant (") et aprs (!) le sjour en montagne.

Pour le groupe tmoin, les diffrences d'enthalpie libre entre le dbut et la fin de l'effort
sont du mme ordre de grandeur avant et aprs le sjour en montagne. En revanche, une variation
significative est observe pour chaque individu du groupe des coronariens (p < 0.05).

2.3 Conclusion
La mise au point d'un ergomtre amagntique compatible avec l'aimant Bruker 47/50 nous a
permis de raliser une tude spectroscopique quantitative sur deux groupes de patients (tmoins
sains et coronariens). La spectroscopie
31
P prsente l'avantage d'tre totalement non-invasive et
permet le suivi des concentrations des diffrents mtabolites avec une dfinition temporelle
convenable. Des diffrences significatives ont pu tre mises en vidence entre des sujets sains et
des sujets atteints d'une affection cardio-vasculaire. La comparaison entre les rsultats obtenus
avant et aprs un sjour en montagne montre clairement que cet entranement permet d'amliorer
la rsistance l'effort. L'exploitation des rsultats des mesures physiologiques (pouls, tension,
VO
2
, ) effectus pendant le sjour est en cours. L'existence d'ventuelles corrlations entre ces

151
rsultats et nos mesures pourraient permettre d'avancer des hypothses quant aux variations
observes entre les individus d'un mme groupe.

3 Application ltude du mtabolisme du glycogne
3.1 Introduction
Les patients diabtiques prsentent des troubles importants de la glycmie, dont la cause
peut tre associe un dficit en insuline (diabte insulino-dpendant). Une diminution de
synthse de cette hormone hypoglycmiante a pour consquence une diminution du transport de
glucose vers l'intrieur de la cellule, une diminution du stockage de glucose sous forme de
glycogne et une augmentation de la production hpatique de glucose par activation de la
noglucognse. Il en rsulte donc une hyperglycmie. Cependant, chez les sujets diabtiques
non-insulino-dpendant (DNID), cette hyperglycmie est observe alors que l'insulinmie est
initialement normale. Un phnomne d'insulinorsistance priphrique, c'est--dire de diminution
des effets de l'insuline sur ses tissus cibles, semble en tre essentiellement responsable. Pour
expliquer ce phnomne, Randle (Randle, 1963) a formul une hypothse selon laquelle les
substrats glucidiques et lipidiques sont en comptition dans les processus d'oxydation. Il en
rsulte que la consommation de l'un est augmente lorsque la disponibilit de l'autre est rduite.
Or, les patients DNID sont classiquement hypertriglycridmiques. Par consquent,
l'augmentation des acides gras libres (AGL) induirait une augmentation d'actylCoA et de citrate
ainsi qu'une diminution du NAD
+
. Il en rsulterait une inhibition de certaines enzymes de la
glycolyse et en retour une diminution du transport du glucose dans la cellule. Au total, le stockage
glycognique musculaire se trouverait diminu d'autant plus que les AGL inhiberaient
directement la glycogne synthase. Ainsi, chez tous les DNID, le cycle de Randle semble fournir
une explication physiopathologique d'ordre mtabolique leur insulinorsistance, au cot de
facteurs gntiques et/ou environnementaux pralables ou surajouts.

152
Nous avons mis au point un protocole d'tude, en collaboration avec le P
r
H. Gin et le
D
r
MC Delmas-Beauvieux, qui gnre cette insulinorsistance chez des sujets sains jeun, en
injectant par voie veineuse une mulsion lipidique. Pour observer l'influence de
l'insulinorsistance sur la synthse du glycogne, il convient pralablement d'induire une
consommation de celui-ci en effectuant un exercice musculaire, puis d'observer sa resynthse en
prsence ou non de l'apport lipidique, l'aide de la spectroscopie du carbone-13, puisque cette
technique permet l'tude cintique des variations du glycogne musculaire en abondance naturelle
(Jue, 1989a; Jue, 1989c; Price, 1996; Price, 1991; Roden, 1996; Taylor, 1992).
Les rsultats de cette tude devraient permettre d'obtenir des informations sur les
perturbations mtaboliques des patients DNID.

3.2 Rsultats
Le protocole exprimental utilis est dcrit au 2.4.2 (p. 61). Des spectres de RMN du
13
C
typiques obtenus sur le mollet avant et aprs l'exercice sont prsents sur la Figure 3.8.


153
200 150 100 50 0

200 150 100 50 0

120 110 100 90 80 70
ppm
120 110 100 90 80 70
ppm
A B
3
3
3 3
1
6
2
5
4
7

Figure 3.8
Spectres caractristiques obtenus avant (A) et aprs (B) l'exercice effectu. L'attribution des
rsonances est la suivante: 1: R-O-CO-chanes grasses (171.7 ppm). 2: -*CH=CH-chanes
grasses. 3: Glycogne C-1 (100.4 ppm). 4: glucides et triglycrides (70.5 75.5 ppm),
Glycrol (C1, C2, C3: 62.2 et 69.5 ppm). 5: CH
2
-N-Cratine (CH
3
)
3
-N-Choline, etc(53
57 ppm). 6: liaisons CH, (20 37 ppm). 7: *CH
3
-CH2-chanes grasses (14.5 ppm).

La plupart des intensits des rsonances ne prsentent pas de diffrences significatives entre
le repos et la fin de l'effort, except celle attribue au glycogne. Des spectres ont t obtenus
toutes les 15 min dans les mmes conditions d'acquisition, afin de suivre la cintique de remonte
de la rsonance du glycogne. Pour limiter les erreurs de quantification d'un spectre l'autre,
l'intensit de cette rsonance a t normalise par rapport celle de la rsonance des carbonyles
(172 ppm), qui est dmontre constante au cours de l'exprience, pour chaque individu. Le
pourcentage de glycogne restaur est ensuite exprim chaque heure de la rcupration post-
exercice en fonction de la valeur de rfrence mesure la fin de l'effort, en effectuant une
moyenne sur quatre spectres conscutifs.

154
Cette exprience est effectue 2 fois sur chaque patient 5 semaines d'intervalle, en
prsence d'une mulsion lipidique base de triglycrides (Ivlip 10 %) ou de Glycrol 10 %,
afin que chaque individu soit son propre tmoin et que la seule variable soit, par diffrence,
l'apport d'AGL.
La dispersion des valeurs obtenues est relativement importante, cause de la faible
sensibilit du
13
C la technique RMN. Il est donc ncessaire d'effectuer un assez grand nombre
d'expriences pour obtenir un chantillon statistique suffisant. A ce jour, 6 sujets ont t examins
et les rsultats obtenus sont prsents sur la Figure 3.9.

30
25
20
15
10
5
0
-5
%

g
l
y
c
o
g

n
e

r

c
u
p

3 2 1 0
rcupration / h

Figure 3.9
Moyenne ( ESM) de la rcupration du glycogne musculaire (exprim en % de la valeur
la fin de l'effort, arbitrairement fixe 0), en prsence de glycrol (!) et d'Ivlip ("), chaque
heure de la rcupration.

On observe que le taux de rcupration est plus faible quand le substrat inject est base
d'acides gras libres (Ivlip) que lorsqu'il s'agit de glycrol. Un test statistique bas sur l'analyse de

155
variance a permis de mettre en vidence un taux de rcupration significativement infrieur
(p = 0.01) la deuxime heure de rcupration, en prsence de l'apport lipidique.

3.3 Conclusion
La mise au point du protocole a permis de dfinir une squence d'effort trs standardis, qui
induit une consommation de glycogne reproductible. En accord avec l'hypothse de Randle, nous
avons montr que la prsence d'AGL rduit la glycognognse et permet d'induire une insulino-
rsistance, dmontre paralllement par des dosages plasmatiques. En effet, nos rsultats mettent
clairement en vidence une resynthse moindre de glycogne en prsence d'acides gras libres
durant la phase de rcupration insulinodpendante. L'extrapolation au patient DNID reste une
perspective de travail. D'autre part, ce retard de glycognognse lors d'un apport de substrat
lipidique peut trouver des applications dans le domaine de l'alimentation du sportif aprs l'effort.

156

157


Chapitre 4

Edition Htronuclaire



158
Introduction
La spectroscopie de RMN du proton est aujourd'hui largement utilise pour tudier le
mtabolisme crbral, puisqu'elle permet de mesurer les concentrations relatives de divers
mtabolites (Cratine, Choline, Glutamate, Glutamine, Lactate, N-Actyl Aspartate, etc), en
offrant une sensibilit optimale. Cependant la spectroscopie de RMN du
1
H prsente plusieurs
handicaps. En effet, la gamme de dplacement chimiques s'tend sur quelques ppm seulement
(10 ppm environ, soit 2000 Hz 4.7 T), ce qui se traduit par des rsonances trs rapproches les
unes des autres et complique par consquent l'interprtation des spectres obtenus. De plus, la
rsonance de l'eau est extrmement intense dans les organismes vivants et masque donc un grand
nombre de mtabolites. Diverses techniques ont t proposes pour attnuer cette rsonance, en
saturant une bande spectrale de quelques Hertz centre sur la frquence de rsonance de l'eau,
l'aide d'une onde radiofrquence d'une dure suffisamment longue (d'une manire analogue ce
qui a t utilis en transfert d'aimantation (cf. Chapitre 2, p. 89)). Il est galement possible
d'exciter slectivement cette mme rsonance puis de la dphaser l'aide de gradients de champ
magntique suffisamment intenses (squence CHESS, (Haase, 1985)). Cependant, ces techniques
ne permettent pas d'observer les mtabolites dont le dplacement chimique est trs proche de
celui de l'eau (4.74 ppm), comme le glucose par exemple.
Un des mtabolites proton les plus intressants dans la dtection de tumeur crbrale est le
lactate, puisqu'il a t observ qu'une augmentation de la concentration de ce mtabolite (ainsi
qu'une diminution du N-actyl aspartate) peut tre corrle la prsence d'un gliome (Frahm,
1991; Negendank, 1992). Cependant, le lactate possde un dplacement chimique proche de celui
des lipides qui sont trs prsents dans les tissus crbraux, notamment dans la myline. Pour
supprimer la rsonance des lipides et raliser ainsi une dition homonuclaire spcifique du
lactate, diverses squences ont t proposes (Bloch, 1995; Bunse, 1995; Counsell, 1985;
Croizier, 1990; de Graaf, 1993; De Graaf, 1995; Dreher, 1995; Dumoulin, 1986; Duyn, 1995;

159
Jouvensal, 1996; jung, 1993; Kingsley, 1994; Knttel, 1989; Lee, 1995; MCKinnon, 1988; Nosel,
1989; Sotak, 1988; Van Zijl, 1990; Wilman, 1995).
Paralllement la spectroscopie
1
H, le
13
C permet d'obtenir des informations biochimiques
sur le mtabolisme intermdiaire (cf. 3, p. 151). Cependant, la faible sensibilit de ce noyau la
technique RMN ainsi que son abondance naturelle rduite (1.1 %) rendent difficile l'obtention de
spectres de bonne qualit avec des temps d'acquisition relativement courts. Par consquent, les
cintiques de dgradation du glucose par les diffrentes voies du mtabolisme crbral sont
difficiles tudier. Une solution consiste augmenter artificiellement la concentration des
certains mtabolites en injectant des composs enrichis en
13
C (glucose marqu sur le carbone 1
par exemple) et mesurer spcifiquement les variations des concentrations des produits du
catabolisme de ce substrat sur des extraits ex vivo (Cerdan, 1990; Kanamatsu, 1994; Knnecke,
1993; Merle, 1996).
Une alternative cette solution invasive consiste utiliser la sensibilit optimale du proton,
puisqu'il existe des couplages scalaires "J
CH
" entre les spins du proton et ceux du carbone-13 qui
se manifestent par l'apparition de multiples rsonances sur les spectres
1
H et
13
C (cf. 2.5, p. 65). Il
est donc astucieux d'essayer d'obtenir des informations sur le
13
C l'aide de la spectroscopie
proton, en mettant profit ces interactions. Ces mthodes d'dition htronuclaire permettent
donc thoriquement d'observer in vivo les mcanismes intervenant dans les processus de
dgradation du glucose et notamment d'tudier les ractions biochimiques associes aux
pathologies malignes, telles que le gliome C6 par exemple. Diverses squences d'dition
htronuclaire permettent effectivement d'obtenir ce rsultat (Artemov, 1995; Hurd, 1991a;
Hurd, 1991b; Inubushi, 1993; Jarvet, 1996; Liu, 1995; Mattila, 1995; Parelle, 1995; Ruiz-
Cabello, 1992; Shachar-Hill, 1996; Van Zijl, 1993) et leur utilisation a dj t prsente in vivo.
Un autre aspect important de concerne la localisation du signal l'intrieur d'un petit
volume d'intrt (ROI). En effet, il est par exemple ncessaire de supprimer celui provenant des
tissus musculaires pour tudier le mtabolisme crbral. Deux techniques sont gnralement
utilises, qui consistent oprer une excitation slective (squences PRESS (Bottomley, 1987),

160
STEAM (Kimmich, 1987), ISIS (Ordidge, 1986), ) ou saturer les signaux extrieurs la
rgion d'intrt (squence OVS (Connelly, 1988)).
Dans cet objectif, nous avons travaill la mise au point d'une technique d'dition
htronuclaire localise spatialement. Le choix de la squence et des rsonateurs, ainsi que
diverses contraintes techniques auxquelles nous avons t confronts sont prsents et discuts
dans les paragraphes suivants.

2 Etude sur un chantillon
La squence PRESS-ge-HMQC utilise dans ce qui suit est prsente au 2.5.5 (p. 80). Il
s'agit d'une version localise de la squence ge-HMQC (Ruiz-Cabello, 1992; Van Zijl, 1993), qui
utilise des gradients de champ magntique pour optimiser la qualit de l'dition. Les
dveloppements thoriques permettant de comprendre le processus d'dition htronuclaire
qu'elle effectue sont donns dans le Tableau 1.2 (p. 83).
Cette squence utilise des angles d'impulsions 90 et 180 pour le proton et 90 pour le
carbone, ce qui ncessite des rsonateurs relativement homognes sur l'ensemble de l'chantillon.
Nous avons donc construit 2 rsonateurs de type cage d'oiseau pour raliser cette tude 0 (p.37).
Il a dj t dmontr que la squence ge-HMQC peut tre sensible ou non diffrentes
sources de perte de signal, notamment cause des phnomnes de diffusion ou de mauvais
rglage des angles d'inversion, suivant les valeurs respectives des gradients utiliss dans la
slection des cohrences (Ruiz-Cabello, 1992). Aprs examen des diffrentes sources de
perturbation dcrites au Tableau 5 de cette publication, nous avons opt pour la squence ge-
HMQC avec la combinaison de gradient 3/5 qui refocalise les cohrences 2 quanta et dphase
les cohrences 0 quantum (cf. 2.5.5, p. 80).
Afin de tester et de mettre au point la squence PRESS-ge-HMQC, nous avons ralis des
mesures sur diffrents chantillons (tubes cylindriques de 5 ml: = 1 cm x 5 cm de longueur),
dont la composition est dtaille ci-dessous:

161

-chantillon n 1:
50 mM de glucose enrichi en
13
C sur le 1
er
carbone (1-
13
C glucose), 25 mM de Lactate
enrichi en
13
C sur le 3
me
carbone (3-
13
C Lactate) et 500 mM de glucose
12
C, le tout dilu dans
du D
2
O.

-chantillon n 2:
5 mM d'actate enrichi sur le 2
nd
carbone (2-
13
C actate) dilus dans de l'eau distille.

Les caractristiques RMN de ces composs sont donns dans le tableau suivant.

J
CH
/ Hz (
1
) / ppm (
13
C) / ppm
Lactate 127 1.29 21.2
Glucose 162 5.2 96.5
Glucose 168 4.6 93
Actate 130 1.9 24.4
Tableau 4.1
Constantes de couplages J
CH
, dplacements chimiques protons et carbone des composs
utiliss.

Ces deux chantillons sont ensuite placs cte cte l'intrieur des antennes. Celles-ci
sont insres dans le fourreau de gradients principal (50 cm, 24 mT/m), puis accordes et
adaptes. L'optimisation de l'homognit de l'induction statique B
O
est alors effectue et la
largeur mi hauteur de la rsonance de l'eau obtenue est typiquement de l'ordre de 10-15 Hz. Une
image en coupe transversale est ensuite ralise, afin de positionner correctement la ou les
rgion(s) d'intrt (ROI) dans laquelle (lesquelles) une dition htronuclaire devra tre ralise.


162
Rsultats
Etant donn le grand nombre de paramtres ajustables (gradients, impulsions, frquence
d'excitation, dlais de relaxation T
E
, T
M
et ) de la squence ge-HMQC, nous avons enregistr
tout d'abord des spectres dits sur des ROIs suffisamment volumineux pour englober l'ensemble
des deux tubes. Ceci permet d'obtenir un signal plus important et par consquent de raccourcir la
dure d'acquisition. Les rglages successifs ont t raliss dans l'ordre suivant:

Impulsions radiofrquences:
-
1
H: L'ajustement des valeurs des tensions appliques aux bornes de l'antenne
1
H est ralis
l'aide de la squence de spectroscopie localise STEAM (Kimmich, 1987). L'impulsion utilise
est un sinus cardinal de 1 ms limit aux 3 lobes principaux. La bande passante (~ 6 kHz) de cette
impulsion est en effet suffisante pour raliser une excitation de l'intgralit du spectre proton
(10 ppm environ, soit 2000 Hz 4.7 T).

-
13
C: La tension aux bornes de l'antenne carbone est ajuste en ralisant plusieurs spectres
HMQC, jusqu' obtention d'une dition correcte. L'criture des tats du systme de spins montre
que l'amplitude des rsonances dites est module par une fonction cosinus dont l'argument
dpend de la diffrence entre la frquence porteuse d'excitation et le dplacement chimique du
compos tudi (cf. Tableau 1.2, p. 83), ainsi que de la valeur de . Nous avons donc fait
concider les valeurs de ces frquences, en fonction du compos diter (cf. Tableau 4.1, p. 161).

Rglages de l'amplitude des gradients de champ magntique:
Des expriences d'dition prliminaires ont t ralises sur l'intgralit des tubes afin
d'avoir un rapport signal sur bruit suffisant. Dans un premier temps, les amplitudes des gradients
d'limination d'eau sont fixes 0, afin d'apprcier l'influence des gradients de slection de
cohrence uniquement.

163
Ces derniers ont t appliqus pendant 1 ms sur les trois axes X, Y et Z en utilisant
diffrentes combinaisons, tout en respectant le rapport d'intensit de gradients permettant de
refocaliser les cohrences 2 quanta. Aprs plusieurs essais, nous avons choisi d'appliquer les
gradients de slection de cohrence uniquement sur l'axe Z, avec des amplitudes respectives
gales 13 mT/m et 21.73 mT/m Le dlai de relaxation entre les 2 impulsions 90
13
C a t
maintenu au minimum qui correspond la dure des gradients de slection de cohrence ajoute
celle de l'impulsion 180
1
H.
L'amplitude des gradients d'limination d'eau a ensuite t dtermine empiriquement,
jusqu' disparition de la rsonance de l'eau (4.74 ppm). Cependant l'amplitude de ces gradients ne
doit pas tre trop importante, afin de limiter l'apparition de courants de Foucault (cf. Figure
1.13, p. 43). Dans les mesures effectues sur les deux chantillons, un bon compromis se situe
autour de 10 mT/m. Ces gradients d'limination d'eau sont appliqus pendant 1 ms sur l'axe x.

Dlais de slection de cohrence: T
M
= (2p +1)/2J
Des expriences prliminaires ont t ralises en utilisant un T
M
de 1/2J (cf. spectre A de
la Figure 4.1, p. 164). Par la suite, nous avons utilis un T
M
de 3/2J pour attnuer le bruit parasite
d aux courants de Foucault.

Aprs avoir ajust successivement les amplitudes des gradients et des impulsions
radiofrquences ainsi que la valeur du T
M
, un spectre est ralis sur chaque tube afin de tester la
qualit de la slection spatiale obtenue par la squence PRESS. Les rsultats obtenus sont
prsents sur la Figure 4.1 (p. 164). Dans ces expriences, deux intervalles de temps identiques
(T
E
) sont laisss entre les trois impulsions proton de la squence PRESS. Le dclin de prcession
libre (FID) est enregistr puis multipli par une exponentielle dcroissante afin d'amliorer le
rapport Signal sur Bruit aprs transformation de Fourier. L'largissement spectral (E) des
rsonances induit par ce filtrage est indiqu dans la lgende de la figure ci-dessous.

164
6 5 4 3 2 1
ppm
eau
1
2
6 5 4 3 2 1
ppm
1
2
3
4
5
6
A B
[
13
C-1] Glucose 50 mM
[
13
C-3] Lactate 25 mM
[
12
C] Glucose 500 mM
D
2
O
[
13
C-2] Actate 5 mM
H
2
O

Figure 4.1
Spectres protons dits localiss (1x1x1 cm
3
) des chantillons 1 (A) et 2 (B).
spectre A: 200 scans, T
R
= 3 s, T
E
= T
M
= 1/2J
glucose
= 3.12 ms, E = 10 Hz.
1 et 3: rsonances du 1-
13
C Glucose (); 2 et 4: rsonances du 1-
13
C Glucose (); 5 et 6:
rsonances du 3-
13
C Lactate.
Spectre B: 256 scans, 16 pr-scans, T
R
= 0.6 s, T
E
= 20 ms, T
M
= 3/2J
Lactate
= 11.5 ms,
E = 20 Hz.
1 et 2: rsonances du 2-
13
C Actate.

On observe les rsonances des protons correspondant au glucose, au Lactate et l'actate.
De plus, on remarque que sur le spectre A les rsonances du Lactate sont observes, alors que

165
celles des protons associs aux
12
C glucose sont invisibles. En outre, bien que le T
M
employ
corresponde la constante de couplage du glucose, les rsonances du Lactate sont correctement
dites.
La rsonance de l'eau est parfaitement limine sur l'chantillon B constitu principalement
d'eau. Aucune rsonance parasite du spectre A (ou B) n'est observable sur le spectre B (ou A), ce
qui tend montrer que la localisation est correctement effectue. Pour le spectre (B), un tat
stationnaire est obtenu aprs 16 excitations pralables, puisque le temps de relaxation
longitudinal T
1
de l'eau est certainement de plusieurs secondes. Le spectre B montre qu'une
concentration de 5 mM d'un compos enrichi en
13
C est la limite infrieure de dtection du signal
en 2 min 30 s.
De plus, bien que le spectre A prsente un rapport signal sur bruit bien meilleur que celui
du spectre B, il est ncessaire de procder un nombre suffisant d'accumulations pour attnuer le
bruit parasite (courants de Foucault) localis autour de la frquence de rsonance de l'eau.

Dcouplage carbone:
Pour amliorer le rapport signal sur bruit, nous avons envisag d'appliquer une squence de
dcouplage la frquence du
13
C pendant l'acquisition du signal proton. En effet, cette mthode
permet d'annihiler les processus de relaxation ds aux couplages J et permet donc d'obtenir un
singulet dont l'intensit est la somme des intensits du doublet non dcoupl correspondant
(cf. 2.5, p. 65). L'impulsion de dcouplage
13
C est constitue d'une succession d'impulsions
lmentaires de 100 s. Leur nombre est ajust pour couvrir la moiti de la dure d'acquisition.
Cependant, l'application de cette onde radiofrquence intense 50 MHz gnre du bruit parasite
200 MHz pendant l'acquisition. Pour liminer cette perturbation, nous avons ralis un filtre
passe bande accord 50 MHz et adapt 50 . Il est constitu de 3 cellules en places en
srie:


166
C
1
V
e
V
s
L L L
C
2
C
3
C
4

Figure 4.2
Schma lectrique du filtre passe bande insr sur le canal
13
C.

Les inductances sont des solnodes forms de fil de cuivre fin (1 mm de diamtre) enroul
autour d'un cylindre de 3 cm de diamtre. La sortie du filtre est connecte une rsistance de
50 et l'accord et l'adaptation sont rgls en ajustant les valeurs des capacits variables l'aide
du montage utilis pour les antennes radiofrquences (cf. Figure 1.3, p. 20). Bien que ce filtre
soit adapt l'impdance caractristique de la ligne de mesure, il induit une lgre attnuation de
tension aux bornes de l'antenne
13
C (environ 1 dB) et la valeur de la tension applique aux bornes
de celle-ci a donc t rajuste en consquence. Un spectre dit localis et dcoupl obtenu sur
l'chantillon contenant le mlange d'actate (5 mM) et d'eau distille est prsent sur la Figure
4.3.


167
6 5 4 3 2 1
ppm
eau
A
B

Figure 4.3
Spectres dits proton de l'actate non dcoupl (A) et dcoupl (B)
13
C. Les conditions
d'acquisition et de traitement sont identiques celles du spectre (B) de la Figure 4.1.

Malgr l'utilisation de ce filtre, le rapport signal sur bruit obtenu est du mme ordre de
grandeur avec et sans dcouplage
13
C, alors qu'un gain d'un facteur 2 tait thoriquement espr.
Des observations similaires ont t mentionnes par van Zijl et al. (Van Zijl, 1993).

Des essais d'dition htronuclaire ont ensuite t ralis sur le cerveau de rat. Une
perfusion en continu a t opre l'aide d'un pousse seringue mdical calibr, aprs avoir pos
un cathter souple dans une veine de la queue. Ces tentatives se sont rvles infructueuses
puisque nous n'avons pas russi diter correctement les rsonances du glucose. Cependant, une
mesure non prsente ici effectue en spectroscopie du
13
C dcouple proton non localise
(5 minutes / spectre) sur la tte de rat (cerveau plus muscles) montre clairement un
enrichissement des rsonances du glucose et du glycogne aprs 30 minutes de perfusion environ.
Le problme de visibilit en spectroscopie ge-HMQC s'explique par l'apparition de bruit parasite
trs important apparaissant dans une bande spectrale relativement large (2 ppm) centre sur la
frquence de rsonance de l'eau, masquant les ventuelles rsonances diter. Ces perturbations

168
ont t attribues l'existence de courants de Foucault ds l'intensit relativement importante
des gradients utiliss. De plus, des mesures effectues en haute rsolution sur des extraits obtenus
partir de cerveaux de rat dans les mmes conditions de perfusion ont montr que les
concentrations maximales obtenues sont de l'ordre de 5 mM, ce qui correspond la limite
infrieure que nous avons russi dtecter sur les chantillons.

3 Discussion
Diffrentes tudes ont dj dmontr la possibilit de raliser une dition htronuclaire in
vivo, sur le cerveau de chat (Van Zijl, 1993) ou sur le cerveau humain 2T dans plusieurs ROIs
adjacents (Watanabe, 1997). Cependant, les dimensions des volumes d'intrt utiliss dans ces
publications sont relativement importantes par rapport celles que nous envisageons d'utiliser sur
le cerveau de rat puisque la taille typique d'un hmisphre est de l'ordre 1 cm
3
. La squence
PRESS-ge-HMQC que nous avons mise au point permet de raliser une dition htronuclaire
localise dans un volume de 1 cm
3
en 2 minutes et demi (cf. Spectre B de la Figure 4.3).
Cependant, ceci pose un problme de sensibilit pour des expriences ralises in vivo. En effet,
des mesures effectues ex vivo en spectroscopie
13
C haut champ (9.4 T, Bruker) sur des extrait
perchloriques de cerveau de rat ayant reu par voie intraveineuse du glucose enrichi en
13
C en
continu pendant une heure montrent que les concentrations des diffrents mtabolites est
infrieure 5 mM. Il est donc ncessaire d'amliorer la sensibilit de la dtection. Une premire
ide consiste utiliser une combinaison de gradients G
1
et G
2
diffrente de celle que nous avons
adopte. En effet, en permutant les valeurs de ces gradients, on refocalise les cohrences 0
quantum et on dphase les cohrences 2 quanta. Par consquent, l'intensit du signal devrait tre
identique celle que nous avons obtenue, mais le gradient le plus intense serait alors davantage
loign de la priode d'enregistrement du signal, ce qui pourrait permettre d'attnuer l'amplitude
du bruit parasite provenant des courants de Foucault. La qualit des spectres que nous avons
obtenus sur des chantillons dpend en effet de l'importance des courants de Foucault et nous

169
avons d procder un grand nombre d'accumulations pour attnuer le bruit parasite qui est
principalement localis autour de la bande spectrale correspondant la rsonance de l'eau. Malgr
plusieurs essais d'optimisation des surintensits de gradients permettant de corriger les courants
de Foucault (cf. Figure 1.13, p 43), nous n'avons pu obtenir de rsultat satisfaisant. Nous avons
donc choisi d'utiliser le fourreau de gradient insrable BGA12 qui permet une meilleure
correction de ces courants parasites grce un blindage plus efficace et qui autorise de gradients
d'amplitudes beaucoup plus importantes. Cependant, nous ne sommes pas parvenu un rsultat
plus probant cause d'un problme d'homognit de l'induction statique B
O
. En effet, la largeur
mi-hauteur de la rsonance de l'eau n'a pu tre amene en dessous de 20-25 Hz sur les
chantillons. Nous avons donc suspect la prsence d'un objet magntique l'intrieur du
fourreau. Pour mettre en vidence ce phnomne, nous avons mesur la frquence de rsonance
de l'eau (
0
) diffrents endroits l'intrieur de la bobine BGA12, en utilisant une antenne de
1 mm de diamtre fournie par le constructeur. Une chute trs importante (~1.5 kHz) de
0
a t
observe dans une rgion trs localise, correspondant la position d'un capteur de temprature
inhrent au systme de gradient. Ce thermocouple permet en effet de mesurer chaque instant la
temprature de la bobine et interrompt le fonctionnement du gradient lorsque la valeur limite
impose par le constructeur est atteinte. Aprs dmontage du fourreau, le caractre magntique de
ce capteur a t reconnu par le constructeur et un second systme BGA12 nous a t fourni trs
rcemment. Cependant, nous n'avons pas eu le temps de mettre au point la squence d'dition
htronuclaire. En outre, une carte de champ dtaille de ce fourreau de gradients devrait tre
ralise, afin de valider la qualit d'homognit de ce systme de gradients.
Un autre facteur limitant la qualit des spectres obtenu est la sensibilit intrinsque du
rsonateur proton utilis. En effet, nous avons vu au premier chapitre que la bobine de surface est
le rsonateur qui permet d'obtenir le meilleur rapport signal sur bruit. Cependant, la squence
PRESS-ge-HMQC ncessite l'emploi d'impulsions relativement bien rgles. L'utilisation
d'impulsions radiofrquences adiabatiques avec une antenne de surface est une solution
intressante qui a dj t explore par Garwood et al (De Graaf, 1995). Cependant, une bobine

170
de surface adapte la taille du cerveau de rat (soit un diamtre d'environ 1 cm) ne permet
d'exciter convenablement des rgions crbrales situes en profondeur. Nous pensons qu'une
alternative intressante repose sur l'utilisation de deux antennes protons distinctes. La premire
pourrait tre de gomtrie adapte la cration d'angles uniformes (cage d'oiseau ou selle de
cheval par exemple) alors que la seconde serait une petite antenne de surface, ralisant la
rception du signal RMN, situe proximit du cerveau. Cependant, il est ncessaire de raliser
un circuit permettant de dcoupler activement ces antennes, afin que l'induction radiofrquence
mise par la bobine d'excitation ne soit pas absorbe par l'antenne de rception. Diffrents
systmes ont dj t prsents dans la littrature pour supprimer les phnomnes d'induction
mutuelle (Pimmel, 1990). Le principe consiste dsaccorder ou dsadapter un rsonateur lorsque
l'autre fonctionne, en utilisant un rseau de diodes par exemple. Par manque de temps, nous
n'avons pas pu mettre au point un tel systme de rsonateurs.
D'aprs la littrature, il est possible d'obtenir in vivo des spectres localiss et dits sur de
trs petits volumes l'intrieur d'un cerveau de rat. A ce propos, l'tude publie par deGraff et al
(De Graaf, 1995) montre une dition homonuclaire du lactate en imagerie spectroscopique
4.7 T sur une tumeur implante, avec des volumes lmentaires de 1.5 L. Ces rsultats peuvent
tre jugs comme "exceptionnels", puisque 4 acquisitions seulement ont t ncessaires pour
obtenir une image mtabolique. Compte tenu de l'exprience de notre laboratoire en spectroscopie
RMN haute rsolution sur des chantillons de 200 l dont les spectres sont obtenus 9.4 T
(DPX 400 Bruker), l'obtention de rsultats analogues sur notre aimant 47/50 est juge
inaccessible.

171
Conclusion et Perspectives

De nombreuses mises au point de techniques instrumentales permettant la ralisation
d'investigations en spectroscopie et en imagerie par RMN ont t effectues au cours de ces trois
annes passes au laboratoire. Ces diffrents dveloppements s'inscrivent parfaitement dans les
objectifs de l'unit RMSB qui s'intresse la fois l'aspect mthodologique et aux applications
biologiques et mdicales de cette technique.
Une partie importante de ce travail a t consacre l'imagerie par transfert d'aimantation
4.7 T. L'volution des intensits obtenues dans diverses rgions du cerveau de rat en fonction des
caractristiques de l'impulsion de transfert ont t analyses l'aide d'un modle relativement
simple contenant deux compartiments de protons en interaction. Aprs avoir dduit des
expriences ralises l'tat stationnaire les paramtres caractristiques de ce modle, nous avons
dmontr qu'il tait possible de prvoir les contrastes observs, quelles que soient la dure,
l'amplitude et la frquence de l'impulsion utilise. Deux applications de ce travail sont possibles:
d'une part, une tude systmatique du transfert d'aimantation in vivo chez le patient pourrait tre
conduite aux champs magntiques utiliss pour les applications cliniques (B
O
= 1.5 T), afin de
dterminer les conditions exprimentales permettant d'obtenir les meilleurs contrastes entre les
tissus sains et les tissus lss. Cette investigation devrait tre relativement aise, en raison du fait
que les contrastes obtenus dans le cerveau humain avec les imageurs hospitaliers sont
naturellement beaucoup plus importants que ceux que nous avons observs chez le rat 4,7 T.
Cependant, le choix des puissances RF de l'excitation hors-rsonance est crucial pour une tude
l'tat stationnaire, en raison des contraintes de SAR. Ainsi, il faudra sans doute limiter le nombre
de points exprimentaux pour dresser les spectres Z. D'autre part, comme nous l'avons dcrit dans
le chapitre 2, le transfert d'aimantation peut tre appliqu avec succs chez l'animal pour dtecter
une pathologie. Ainsi, l'tude d'un modle exprimental de lsion dmylinisante chez le rat a t
initie au laboratoire, en collaboration avec l'quipe du P
r
Brochet. Il s'agit dans un premier temps

172
d'essayer de corrler les informations obtenues en histologie celles que l'on peut observer en
imagerie par transfert d'aimantation. Par la suite, la cintique de rgnration de la myline suite
un traitement thrapeutique devrait galement tre value par cette technique.
Par ailleurs, une contribution des travaux qui ne sont pas rapports dans ce mmoire a
port sur l'imagerie de diffusion. Cette technique est l'heure actuelle principalement applique
l'tude du rein de rat in vivo en collaboration avec le D
r
H. Trillaud. Nous avons galement
effectu des mesures prliminaires sur des reins de porc prlevs post mortem. Pour ces dernires
investigations, un systme tanche de rsonateurs proton et phosphore a t mis au point,
autorisant un suivi en imagerie et en spectroscopie de RMN du
31
P basse temprature (4 C), ce
qui devrait permettre d'obtenir des informations sur l'volution physiologique du greffon rnal
humain dans son milieu de conservation pendant la priode sparant le prlvement de la
transplantation. Une premire tude devrait concerner dans un proche avenir le greffon rnal de
porc, pour lequel les informations anatomiques et mtaboliques recueillies grce la RMN seront
compares aux rsultats physiologiques aprs transplantation et l'analyse biochimique fine des
mitochondries des cellules rnales. En effet, une meilleure comprhension du fonctionnement
rnal pendant les diffrentes phases de la transplantation permettra d'amliorer les protocoles de
conservation du rein. Ce projet, qui terme sera transpos l'organe humain, s'inscrit dans les
thmatiques abordes par l'Institut Fdratif de Recherche "Biologie des Greffes".
Nous avons galement dtaill dans ce mmoire les caractristiques techniques et le
principe de fonctionnement de l'ergomtre qui a t dvelopp en collaboration avec l'entreprise
SEDIS. Les spectres de RMN du phosphore-31 enregistrs pendant l'exercice musculaire ralis
sur cet appareil permettent d'observer en direct les modifications mtaboliques induites et
autorisent donc l'tude in vivo de diffrents facteurs affectant les capacits musculaires. Il s'agit
par exemple d'observer, chez l'homme, les consquences de maladies perturbant le mtabolisme
nergtique (myopathie notamment) et/ou d'effectuer un suivi thrapeutique ou encore de tester
les effets secondaires de certains mdicaments. Parmi ceux-ci, l'almitrine, molcule utilise chez
les insuffisants respiratoires est souponne d'altrer le mtabolisme nergtique: une tude

173
prliminaire mene au laboratoire en collaboration avec le D
r
M.L. Choukroun chez le sujet
normal a effectivement montr un effet de l'almitrine sur la rcupration de la phosphocratine
aprs un exercice arobie. Il est prvu de rechercher les effets possibles de ce mdicament chez
l'insuffisant respiratoire. Une autre application de la RMN du phosphore et de notre ergomtre est
d'apprcier comment la radaptation segmentaire, c'est--dire par des exercices musculaires
localiss sur certains membres, de sujets coronariens, amliore l'tat nergtique et la tolrance
l'effort de ces patients.
Les informations obtenues par la spectroscopie de RMN du
13
C en abondance naturelle sont
beaucoup plus dlicates interprter, cause de la faible sensibilit inhrente la technique.
Cependant, elle demeure une des seules mthodes non invasive qui permette d'apprhender le
mtabolisme du glycogne. Nous avons pu observer les variations des cintiques de resynthse du
glycogne musculaire en fonction de diffrents substrats injects par voie veineuse. La mthode
pourra sans aucun doute tre applique des pathologies, notamment du domaine nutritionnel.
Une alternative la spectroscopie de RMN du
13
C consiste utiliser l'dition
htronuclaire afin de mettre profit la sensibilit optimale du proton. En outre, cette mthode
prsente l'avantage de conduire des spectres localiss l'intrieur d'une rgion bien dtermine.
Cependant, nous avons montr que cette technique est extrmement exigeante d'un point de vue
exprimental, puisqu'elle ncessite des systmes de gradients performants. Les quipements
actuels du laboratoire ne nous ont pas permis d'enregistrer des spectres dits de bonne qualit in
vivo. L'amlioration des fourreaux de gradient par le constructeur devrait dans un premier temps
constituer une avance dans ce thme de recherche. De plus diverses options permettront de
progresser dans l'acquisition de spectres dits in vivo. Premirement l'utilisation de squences du
type CSI (imagerie de dplacement chimique) met en jeu des gradients d'induction magntique
beaucoup moins levs qu'un motif prparatoire PRESS, ce qui diminue l'influence nfaste des
courants de Foucault. Cette squence d'acquisition prsente en outre l'avantage de recueillir
simultanment des informations spectroscopiques de plusieurs lments de volumes et permet
donc de comparer les intensits relatives de chaque mtabolite en fonction de leur position dans

174
l'organe tudi. Cependant, la dure d'acquisition de ces squences est relativement longue et
complique l'tude des cintiques des ractions du catabolisme. Une autre piste explorer pour
diter spcifiquement les rsonances de certains protons est l'utilisation de squences
multidimentionnelles du type 2D_HMQC ou 2D_COSY. En effet, elles permettent d'obtenir des
cartes 2 dimensions sur lesquelles les rsonances des noyaux non coupls (notamment l'eau)
sont localises sur une des diagonales principale du plan ainsi form, alors que les rsonances
dites apparaissent de part et d'autre de cette diagonale. L'information contenue dans un spectre
une dimension est par consquent tale sur un plan, et les recouvrements parasites entre les
diffrentes rsonances sont attnus. Cependant, ces diffrentes squences d'acquisition
impliquent des dures d'acquisition beaucoup plus longues et ncessitent donc une amlioration
pralable des conditions d'acquisition. La spectroscopie d'dition htronuclaire reste nanmoins
promise un bel avenir, notamment pour l'tude du mtabolisme crbral. Elle devrait permettre
d'amliorer la caractrisation biochimique de troubles du cerveau, qu'il s'agisse de la prsence
d'une tumeur ou des consquences d'une ischmie par exemple.
Paralllement l'amlioration des techniques d'acquisition, nous envisageons de dvelopper
des mthodes nouvelles de traitement du signal. En effet, il a t trs rcemment montr que
l'utilisation de la transforme en ondelettes pour l'analyse des dclins de prcession libre permet
d'extraire chaque composante spectrale individuelle (Barache, 1997; Serrai, 1997). L'application
de cette technique d'analyse temps-frquence aux donnes spectrales d'dition htronuclaire
pourrait donc tre une alternative intressante aux squences utilises pour liminer la rsonance
rsiduelle de l'eau. L'ide est de diminuer l'intensit des gradients d'limination d'eau et/ou de
slection de cohrence et par l mme d'attnuer les distorsions dues aux courants de Foucault. Le
signal obtenu pourrait ensuite tre filtr en ondelette pour extraire les rsonances des mtabolites
dits.


175
Rfrences Bibliographiques

Adler, R S, Swanson, S D et Yeung, H N, "A three-component model for magnetization transfer.
Solution by projection-operator technique, and application to cartilage"
J. Magn. Reson. 110, 1-8 (1996).

Adler, R S et Yeung, H N, "Transient Decay of Longitudinal Magnetization in Heterogeneous
Spin Systems under Selective Saturation III. Solution by Projection Operators"
J. Magn. Reson. 104, 321-330 (1993).

Artemov, D, Bhujwalla, Z M et Glickson, J D, "In vivo selective measurement of {1-13C}-
glucose metabolism in tumor by heteronuclear cross polarization"
Magn. Reson. Med. 33, 151-155 (1995).

Ashwal, S, Holshouser, B A, Hinshaw, D B, Schell, R M et Bailey, L, "Proton magnetic
resonance spectroscopy in the evaluation of children with congenital heart disease and acute
central nervous system injury."
Journal of thoracic and cardiovascular surgery. 112, 403-414 (1996).

Aue, W P, Bartholdi, E et Ernst, R R, J. Chem. Phys. 64, 4226-4227 (1976a).

Aue, W P, Bartholdi, E et Ernst, R R, J. Chem. Phys. 64, 2229-2246 (1976b).

Balaban, R S et Ceckler, T L, "Magnetization transfer contrast in magnetic resonance imaging"
Magn. Res. Quarterly. 8, 116-137 (1992).

Barache, D, Antoine, J P et Dereppe, J M, "The continuous wavelet transform, an analysis tool
for NMR spectroscopy"
J. Magn. Reson. 128, 1-11 (1997).

Bloch, G, Jouvensal, L et Carlier, P G, "
1
H NMR determination of lactate
13
C-enrichment in
skeletal muscle: Using a double quantum filter for the simultaneous editing of
13
C-coupled and
13
C-uncoupled methyl protons resonance"
Magn. Reson. Med. 34, 353-358 (1995).

Bloom, M, Burnell, E E, Roeder, W B W et Valic, M I, "Nuclear magnetic resonance shapes in
lyotropic liquid cristals and related systems"
J. Chem. Phys. 66, 3012-3020 (1977).

Bottomley, P A, "Spatial localization in NMR spectroscopy in vivo."
Ann. N. Y. Acad; Sci. 508, 333-348 (1987).


176
Bourdel-Marchasson, I, Biran, M, Thiaudire, E, Delalande, C, Decamps, A, Manciet, G et
Canioni, P, "31P Magnetic resonance spectroscopy of human liver in ederly patients: changes
according to nutritional status and inflamatory state."
Metabolism. 45, 1059-1061 (1996).

Brindle, K M, Blackledge, M J, Challiss, R A J et Radda, G, "
31
P NMR magnetization transfer
measurements of ATP turnover during steady-state isometric muscle contraction in the rat hind
limb in vivo."
Biochemistry. 28, 4887-4893 (1989).

Bruhn, H, Frahm, J et Gyngell, M L, "Noninvasive differentiation of tumors withuse of localized
1HMR spectroscopy in vivo. Initial experience in patients with cerebral tumors."
Radiology. 172, 541 (1989).

Bunse, M, Jung, W-I, Schick, F, Dietze, G J et Lutz, O, "HOPE, a new lactate editing method"
J. magn. Reson. B. 109, 270-274 (1995).

Cady, E B, "Metabolite concentrations and relaxation in perinatal cerebral hypoxic-ischemic
injury."
Neurochemical Research. 21, 1043-1052 (1996).

Cady, E B, Costello, A M d L, Dawson, M J, Delpy, D T, Hope, P L, Reynolds, E O R, Tofts, P S
et Wilkie, D R, "Non-invasive investigation of cerebral metabolism in newborn infants by
phosphorus nuclear magnetic resonance spectroscopy"
Lancet. i, 1059 (1983).

Caines, G H, Schleich, T et Rydzewski, J M, "Incorporation of magnetization transfer into the
formalism for rotating-frame spin-lattice proton NMR relaxation in the presence of an off-
resonance-irradiation field"
J. Magn. Reson. 95, 558-566 (1991).

Campbell, S L, Jones, K A et Shulman, R G, "In vivo 31P nuclear magnetic resonance saturation
transfer measurements of phosphate exchange reactions in the yeast Saccharomyces cerevisiae"
FEBS lett. 193, 189-193 (1985).

Ceckler, T L, Wolff, S D, Yip, V, Simon, S A et Balaban, R S, "Dynamic and chemical factors
affect water proton relaxation by macromolecules"
J. Magn. Reson. 98, 637-645 (1992).

Cerdan, S, Knecke, B et Seelig, J, "Cerebral metabolism of [1, 2-13C]acetate as detected by in
vivo and in vitro 13C NMR."
J. Biol. Chem. 265, 12916-12926 (1990).


177
Chai, J W, Chen, C, Chen, J H, Lee, S K et Yeung, H N, "Estimation of in vivo proton intrinsic
and cross-relaxation rates in human brain"
Magn. Reson. Med. 36, 147-152 (1996).

Chance, B, Eleff, S et Leigh, J S, "Noninvasive, nondestructive approaches to cell bioenergetics."
Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 77, 7430-7434 (1980).

Chance, B, Eleff, S, Leigh, J S, Sokolow, D P et Sapega, A A, "Mitochondrial regulation of
phosphocreatine/inorganic phosphate ratios in exercising human muscle: A gated 31P NMR
study."
Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 78, 6714-6718 (1981).

Cohen-Tannoudji, C, Diu, B et Lalo, F, "Mcanique Quantique."
Collection enseignement des sciences. Hermann-diteurs des sciences et des arts. 1 et 2, (1992).

Confort, S, "Instrumentation et mthodologie en Rsonance Magntique Nuclaire in vivo.
Perspectives pour l'imagerie spectroscopique."
Thse de l'Universit scientifique et mdicale de Grenoble. (1984).

Connelly, A, Counsell, C, Lohman, J A B et Ordidge, R J, J. Magn. Reson. 78, 519 (1988).

Counsell, C J R, Levitt, M H et Ernst, R R, "The selection of coherence-transfer pathways by
inhomogeneous z pulses"
J. Magn. Reson. 64, 470-478 (1985).

Cox, I J, Coutts, G A, Gadian, D G, Ghosh, P, Sargentoni, J et Young, I R, "saturation effects in
31P MRS in the human liver."
Magn. Reson. Med. 17, 53-61 (1991).

Cox, I J, Menon, D K, Sargentoni, J, Bryant, D J, Collins, A G, Coutts, G A, Iles, R A, Bell, J D,
et al., "Phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy of the human liver using chemical shift
imaging techniques."
J. Hepatol. 14, 265-275 (1992).

Croizier, s, Brereton, I M, Rose, s E, Field, J, Shannon, G F et Doddrell, D, "Application of
volume-selected, two dimensional multiple quantum editing in vivo to observe cerebral
metabolites"
Magn. Reson. Med. 16, 496-502 (1990).

Damadian, R, "Tumor detection by nuclear magnetic resonance."
Science. 171, 1151-1153 (1971).


178
de Certaines, J D, Bove, W M M J et Podo, F, "Magnetic Resonance Spectroscopy in Biology
and Medicine."
Pergamon Press. (1992).

de Graaf, A A, Luyten, P R, den Hollander, J A, heindel, W et Bove, W M M J, "Lactate
imaging of the human brain at 1.5T using a double-quantum filter"
Magn. Reson. Med. 30, 231-235 (1993).

De Graaf, R A, Luo, Y, Terpstra, M et Garwood, M, "Spectral editing with adiabatic pulses"
J. Magn. Reson. B. 109, 184-193 (1995).

Dousset, V, Brochet, B, Vital, A, Gross, C, Benazzouz, A, Boullerne, A, Bidabe, A-M, Gin, A-M,
et al., "Lysolecithin-induced demyelination in primates: preliminary in vivo study with MR and
magnetization transfer"
Am. J. Neuroradiol. 16, 225-231 (1995).

Dousset, V, Grossman, R, Ramer, K N, Schnall, M D, Young, L H, Gonzalez-Scarano, F, Lavi, E
et Cohen, J A, "Experimental allergic encephalomyelitis and multiple sclerosis: lesion
characterization with magnetization transfer imaging"
Radiology. 182, 483-491 (1992).

Dreher, W et Leibfritz, D, "On the use of two-dimensional-J NMR measurements for in vivo
proton MRS: Measurement of homonuclear decoupled spectra without the need for short echo
times"
Magn. Reson. Med. 34, 331-337 (1995).

Dumoulin, C L et Vatis, D, "Water suppression in 1H magnetic resonance images by the
generation of multiple-quantum coherence"
Magn. Reson. Med. 3, 282-288 (1986).

Duyn, J H, Frank, J A et Moonen, C T W, "Incorporation of lactate measurements in multi-spin-
echo proton spectroscopic imaging"
Magn. reson. Med. 33, 101-107 (1995).

Edelman, R R, Ahn, S S, Chien, D, Li, W, Goldmann, A, Mantello, M, Kramer, J et Kleefield, J,
"Improved time-of-flight MR angiography of the brain with magnetization transfer contrast."
Radiology. 184, 395-399 (1992).

Edzes, H T et Samulski, E T, "Cross-relaxation and spin diffusion in the proton NMR of hydrated
collagen"
Nature. 265, 521-523 (1977).

Eng, J, Ceckler, T L et Balaban, R S, "Quantitative 1H magnetization transfer imaging in vivo"

179
Magn. Reson. Med. 17, 304-314 (1991).

Ernst, r R, Adv. Magn. Reson. 2, 1 (1966a).

Ernst, R R et Anderson, W A, Rev. Sci. Instrum. 37, 93 (1966b).

Finelli, D A, Hurst, G C, Gullapali, R P et Bellon, E M, "Improved contrast of enhancing brain
lesions on post-gadolinium, T1-weighted spin-echo images with use of magnetization transfer"
Radiology. 190, 553-559 (1994).

Forsen, S et Hoffman, R A, "Study of moderately rapid chemical exchange reactions by means of
Nuclear Magnetic double resonance"
J. Chem. Phys. 39, 2892-2901 (1963).

Frahm, J, Bruhn, H, Hanicke, W, Merboldt, K-D, Mursch, K et Markakis, E, "Localized proton
NMR spectroscopy of brain tumors using short-echo time Steam sequences."
J. Comput. Assist. Tomogr. 15, 915-922 (1991).

Frahm, J et Hanefeld, F, "Localized proton magnetic resonance spectroscopy of cerebral
metabolites."
Neuropediatrics. 27, 64-69 (1996).

Frahm, J, Merboldt, K-D et Hanicke, W, "Localized proton spectroscopy using stimulated
echoes."
J. Magn. Reson. 72, 502 (1987).

Gadian, D G, "NMR and its applications to living systems."
Oxford Science Pulblications. (1995).

Gass, A, Barker, G J, Kidd, D, Thorpe, J W, MacManus, D, Brennan, A, Tofts, P S, Thompson,
A J, et al., "Correlation of magnetization transfer ratio with clinical disability in multiple
sclerosis"
Ann. Neurol. 36, 62-67 (1994).

Gillies, R J, "NMR in Physiology and Biomedicine."
Academic Press. (1994).

Gober, J R, Schwartz, G C, Twieg, D B, Weiner, M W et Massie, B, "In vivo phosphorus-31
spectroscopic imaging in patients with global myocardial disease."
Am. J. Cardiol. 65, 1154-1161 (1990).

Grad, J et Bryant, R G, "Nuclear magnetic cross-relaxation spectroscopy"
J. Magn. Reson. 90, 1-8 (1990).

180

Haase, A, Frahm, J, Hnicke, W et Matthaei, D, "1H NMR chemical shift selective (CHESS)
imaging."
Phys. Med. Biol. 30, 341-344 (1985).

Hajnal, J V, Baudouin, C J, Oatridge, A, Young, I R et Bydder, G M, "Design and
implementation of magnetization transfer pulse sequences for clinical use"
J. Comput. Assist. Tomogr. 16, 17-18 (1992).

Hardy, C J, Weiss, R G, Bottomley, P A et Gerstenblith, G, "Altered myocardial high-energy
phosphate metabolites in patients with dilated cardiomyopathy"
Am. Heart J. 122, 795-801 (1991).

Harrison, R, Bronskill, M J et Henkelman, R M, "Magnetization transfer and T2 relaxation
components in tissue"
Magn. Reson. Med. 33, 490-496 (1995).

Hashimoto, T, Tayama, M, Miyazaki, M, Fujii, E, Harada, M, Miyoshi, H, Tanouchi, M et
Kuroda, Y, "Developme,ntal brain changes investigated with proton magnetic resonance
spectroscopy."
Developmental Medicine and Child Neurology. 37, 398-405 (1995).

Hayes, C E, Edelstein, W A, Schenck, J F, Mueller, O M et Eash, M, J. Magn. Reson. 63, 622
(1985).

Henkelman, R M, Huang, X, Xiang, Q, Stanisz, G J, Swanson, S D et Bronskill, M J,
"Quantitative interpretation of magnetization transfer"
Magn. Reson. Med. 29, 759-766 (1993).

Hennig, J, Nauerth, A et Friedburg, H, "RARE imaging: A fast imaging method for clinical MR"
Magn. Reson. Med. 3, 823-833 (1986).

Hope, P L, Costello, A M d L, Cady, E B, Delpy, D T, Tofts, P S, Chu, A, Hamilton, P A et
Reynolds, E O R, "Cerebral energy metabolism studied with phosphorus NMR spectroscopy in
normal and birth-asphyxiated infants."
Lancet. ii, 366 (1984).

Hore, P J, "Solvent suppression in Fourier transform nuclear magnetic resonance"
J. Magn. Reson. 55, 283-300 (1983).

Hoult, D I, Progress in NMR spectroscopy. 12, 41 (1978).


181
Hoult, D I et Richards, R E, "The signal-to-noise ratio of the nuclear magnetic resonance
experiment"
J. Magn. Reson. 24, 71-85 (1976).

Hu, B S, Conolly, S M, Wright, G A, Nishimura, D G et Macovski, A, "Pulsed saturation transfer
contrast"
Magn. Reson. Med. 26, 231-240 (1992).

Hurd, R E et John, B K, "Gradient-enhanced proton-detected multiple quantum coherence
spectroscopy"
J. Magn. Reson. 91, 648-653 (1991a).

Hurd, R E et John, B K, "Three-dimensional gradient-enhanced relay-edited proton spectroscopy,
GREP-HMQC-COSY"
J. Magn. Reson. 92, 658-668 (1991b).

Inubushi, T, Morikawa, S, Kito, K et Arai, T, "
1
H-detected in vivo 13C NMR spectroscopy and
imaging at 2T magnetic field: Efficiency monitoring of 13C-labeled metabolites in the rat brain
derived from 1-13C-glucose"
Biochemical and Biophysical researh communications. 191, 866-872 (1993).

Jarvet, J et Allard, P, "Phase-sensitive two-dimensional heteronuclear zero- and double-quantum-
coherence spectroscopy"
J. Magn. Reson. B. 112, 240-244 (1996).

Jouvensal, L, Carlier, P G et Bloch, G, "Practical implementation of single-voxel double quantum
editing on a whole-body NMR spectrometer: Localizated monitoring of lactate in the human leg
during and after exercise"
Magn. reson. Med. 36, 487-490 (1996).

Jue, T, Rothman, D L, Shulman, G I, Tavitain, B A, DeFronzo, R A et Shulman, R G, "Direct
observation of glycogen synthesis in human muscle with 13C NMR"
Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 86, 4489-4491 (1989a).

Jue, T, Rothman, D L, Tavitian, B A et Shulman, R G, "Natural abundance 13C study of
glycogen repletion in human liver and muscle."
Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 86, 1439-1442 (1989b).

Jue, T, Rothman, D L, Tavitian, B A et Shulman, R G, "Natural-abundance 13C NMR study of
glycogen repletion in human liver and muscle"
Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 86, 1439-1442 (1989c).

jung, W-I, "Localized flip-angle based editing of lactate proton NMR spectra using PRESS"

182
MAGMA. 1, 5-9 (1993).

Kanamatsu, T et Tsukada, Y, "Measurement of amino acid metabolism derived from [1-
13C]glucose in the rat brain using 13C magnetic resonance spectroscopy."
Neurochem Res. 19, 603-612 (1994).

Kaye, A H, Morstyn, G, Gardner, I et Pyke, K, "Development of a xenograph glioma model in
mouse brain."
Cancer Res. 16, 1367-1373 (1986).

Kimmich, R et Hoepfel, D, "Volume selective multipulse spin echo spectroscopy."
J. Magn. Reson. 72, 379-384 (1987).

Kingsley, P B, "Scalar coupling and zero-quantum coherence relaxation in STEAM: implications
for spectral editing of lactate"
Magn. Reson. Med. 31, 315-319 (1994).

Knttel, A et Kimmich, R, "Double-quantum filtered volume-selective NMR spectroscopy"
Magn. reson. Med. 10, 404-410 (1989).

Kobayashi, N, Allen, N, Clendenon, N R et Ko, L W, "An improved rat brain tumor model."
J. Neurosurg. 53, 808-815 (1980).

Koenig, S H, Brown, R D et Ugolini, R, "Magnetization transfer in cross-linked bovine serum
albumin solutions at 200 Mhz: A model for tissues"
Magn. Reson. Med. 29, 311-316 (1993a).

Koenig, S H, Brown, R D et Ugolini, R, "A unified view of relaxation in protein solutions and
tissue, including hydratation and magnetization transfer"
Magn. Reson. Med. 29, 77-83 (1993b).

Kubo, R et Tomita, K, "A general theory of magnetic resonance absorption"
J. Phys. Soc. Jpn. 9, 888-919 (1954).

Knnecke, B, Cerdan, S et Seelig, J, "Cerebral metabolism of [1,2-13C]3-hydroxybutarate in rat
brain as detected by 13C NMR spectroscopy."
NMR in Biomed. 6, 264-277 (1993).

Kurki, T, Lundbom, N, Kalimo, H et Valtonen, S, "MR classification of brain gliomas: value of
magnetization transfer and conventional imaging"
Magn. Reson. Imaging. 13, 501-511 (1995).


183
Kurki, T J, Niemi, P T et Lundbom, N, "Gadolinium-enhanced magnetization transfer contrast
imaging of intracranial tumors"
J. Magn. Reson Imaging. 2, 401-406 (1992).

Lauterbur, P C, "Image formation by induced local interactions: Examples of employement of
NMR."
Nature. 242, 190-191 (1973).

Lee, H K, Yaman, A et Nialcioglu, O, "Homonuclear J-refocused spectral editing technique for
quantification of glutamine and glutamate by 1H NMR spectroscopy"
Magn. Reson. Med. 34, 253-259 (1995).

Leigh, J S, "Relaxation times in systems with chemical exchange: some exact solutions"
J. Magn. Reson. 4, 308-311 (1971).

Lexa, F J, Grossman, R I et Rosenquist, A C, "MR of wallerian degeneration in the feline visual
system: characterization by magnetization transfer rate with histopathologic correlation"
Am. J. Neuroradiol. 15, 201-212 (1994).

Li, J G, Graham, S J et Henkelman, R M, "A flexible magnetization transfer line shape derived
from tissue experimental data"
Magn. Reson. Med. 37, 866-871 (1997).

Listerud, J, "Off-resonance pulsed magnetization transfer in Clinical MR imaging: Optimization
by analysis of Transients"
Magn. Reson. Med. 37, 693-705 (1997).

Liu, G, Sobering, G, Duyn, J et Moonen, C T W, "A functional MRI technique combining
principles of echo-shifting with a train of observations (PRESTO)."
Magn. Reson. Med. 30, 764-768 (1993).

Liu, M, Farrant, R D, Nicholson, J K et Lindon, J C, "Selective detection of 1H NMR resonances
of CHn groups using a heteronuclear-maximum-quantum filter and pulsed fiel gradients"
J. Magn. Reson B. 106, 270-278 (1995).

Malloy, C R, Sherry, A D et Jeffrey, F M H, "Evaluation of carbon flux and substrate selection
through alternate pathways involving the citric acid cycle og the heart by 13C NMR
spectroscopy."
J. Biol. Chem. 263, 6964-6971 (1988).

Malloy, C R, Sherry, A D et Jeffrey, F M H, "Analysis of tricarboxylic acid cycle of the heart
using 13C NMR spectroscopy."
Am. J. Physiol. 259, H987-H995 (1990a).

184

Malloy, C R, Thompson, J R, Jeffrey, F M H et Sherry, A D, "Contribution to exogenous
substrates to acetyl coenzyme A: Measurement by 13C NMR under nonsteady-state conditions."
Biochemistry. 29, 6756-6761 (1990b).

Mansfield, P, "Multi-planar image formation using NMR spin echoes"
J. Phys. C. 10, L55-L58 (1977).

Mansfield, P et Grannell, P K, "NMR "diffraction" in solids?"
J. Phys. C: Solid state phys. 6, L422-L426 (1973).

Maris, J M, Evans, A E, McLauglin, A C, D'angio, G J, Bolinger, L, Manos, M et Chance, B,
"31P-nuclear magnetic resonance spectroscopic investigation of human neuroblastoma in situ."
New Engl. J. Med. 312, 1500-1505 (1985).

Martin, E, Buchli, R, Ritter, S, Schmid, R, Largo, R, Boltshauser, E, Fanconi, S, Duc, G, et al.,
"Diagnostic and pronostic value of cerebral 31P magnetic resonance spectroscopy in nepnates
with perinatal asphyxia."
Pediatric Research. 50, 749-758 (1996).

Matthews, V P, Elster, A D, King, J C, Ulmer, J L, Hamilton, C A et Strottmann, J M,
"Combined effects of magnetization transfer and gadolinium in cranial MR imaging and MR
angiography"
Am; J. Roentgenol. 164, 169-172 (1995).

Mattila, S, Koskinen, A M P et Otting, G, "Long-range HSQC with spin-lock purge pulses for the
observation of heteronuclear correlations with 1H detection and low t1 noise"
J. magn. Reson. B. 109, 326-328 (1995).

MCKinnon, G C et Boesiger, P, "A one-shot lactate-editing sequence for localized whole-body
spectroscopy"
Magn. reson. Med. 8, 355-361 (1988).

McLaughlin, A C et Leigh, J S, "Relaxation times in systems with chemical exchange:
Approximate solutions for the nondilute case"
J. Magn. Reson. 9, 296-304 (1972).

Menon, R S, K, Xu, X et Ugurbil, K, "31P NMR spectroscopy of the human heart: Detection of
substantially uncontaminated spectra and differentiation of subepicardium and subendocardium"
Magn. Reson. Med. 16, 368-376 (1992).

Merle, M, Martin, M, Villgier, A et Canioni, P, "[1-13C]glucose metabolism in brain cells:
isotopomer analysis of glutamine from cerebellar astrocytes and glutamate from granule cells."

185
Dev. Neusci. 18, 460-468 (1996).

Meyerhoff, D J, Karczmar, G S, Matson, G B, Boska, M D et Weiner, M W, "Non-invasive
quantitation of human liver metabolites using image-guided 31P NMR spectroscopy."
NMR Biomed. 3, 17-22 (1990).

Moonen, C T W, von Kienlin, M, van Zijl, P C M, Cohen, J, Daly, P et Wolf, G, "Comparison of
single-shot localization methods (STEAM and PRESS) for in vivo proton NMR spectroscopy."
NMR Biomed. 2, 201-208 (1989).

Moriarty, K T, McIntyre, D G O, Bingham, K, Coxon, R, Glover, P M, Greenhaff, P L,
Macdonald, I A, Bachelar, H S, et al., "Glycogen resiynthesis in liver and muscle after exercise:
measurement of the rate of resynthesis by 13C magnetic resonance spectroscopy."
MAGMA@. 2, 429-432 (1994).

Morrison, C et Henkelman, R M, "A model for magnetization transfer in tissues"
Magn. Reson. Med. 33, 475-482 (1995a).

Morrison, C, Stanisz, G J et Henkelman, R M, "Modeling magnetization transfer for biological-
like systems using a semi-solid pool with a super-lorentzian lineshape and dipolar reservoir"
J. Magn. Reson. 108, 103-113 (1995b).

Negendank, W, "Studies of human tumors by MRS: A review."
NMR Biomed. 5, 303-324 (1992).

Nelson, F A et Weaver, H E, Science. 146, 223 (1964).

Nosel, W, Trimble, L A, Shen, J F et Allen, P S, "On the use of double-quantum coherence from
an AX3 system (protons in lactate) for spectral editing"
Magn. Reson. Med. 11, 398-404 (1989).

Oberhansli, R D, Galloway, G J, Taylor, D J, Bore, P J, Rajagopalan, B et Radda, G K, "First year
of experience with 31P magnetic resonance studies of human liver."
Magn. Reson. Imaging. 4, 413-416 (1986).

Oberhansli, R D, Rajagopalan, B, Galloway, G J, Taylor, D J et Radda, G K, "Study of human
liver disease with31P magnetic resonance spectroscopy."
Gut. 31, 463-467 (1990).

Ordidge, R J, Connely, A et Lohman, J A B, "Image-Selected in vivo spectroscopy (ISIS). A new
technique for spatially selective NMR spectroscopy."
J. Magn. Reson. 66, 283-294 (1986).


186
Pachot-Clouard, M et Darrasse, L, "Optimization of T2-selective binomial pulses for
Magnetization transfer"
Magn. Reson. Med. 34, 462-469 (1995).

Pantely, G A, Malone, S A, Rhen, W S, Anselone, C J, Arai, A, Bristow, J et Bristow, J D,
"regeneration of myocardial phosphocreatine in pigs despite continued moderate ischemia"
Circ. Res. 67, 1481-1493 (1990).

Parelle, T, Sanchez-ferrando, F et Virgili, A, "Gradient-based editing of proton spectra according
to carbon-13 multiplicities"
J. Magn. Reson B. 109, 88-92 (1995).

Penrice, J, Cady, E B, Lorek, A, Wylezinska, M, Amess, P N, Aldridge, R F, Stewart, A, Wyatt, J
S, et al., "Proton magnetic resonance spectroscopy of the brain in in normal preterm and term
infants, and early changes after perinatal hypoxia-ischemia."
Pediatric Research. 40, 6-14 (1996).

Perseghin, G, Price, T B, Petersen, K F, Roden, M, Cline, G W, Gerow, K, Rothman, D L et
Shulman, G I, "Increased glucose transport-phosphorylation and muscle glycogen synthesis after
exercise training in insulin-resistant subjects"
N Engl. J. Med. 335, 1357-1362 (1996).

Pike, G B, "Pulsed magnetization transfer contrast in gradient echo imaging: a two-pool analytic
description of signal response"
Magn. Reson. Med. 36, 95-103 (1996).

Pike, G B, Hu, B S, Glover, G H et Enzmann, D R, "Magnetization transfer time-of-flight
magnetic resonance angiography."
Magn. Reson. Med. 25, 372-379 (1992).

Pimmel, P, "Les antennes en rsonance magntique nuclaire: fonctionnement et ralisation.
Rsonateurs pour l'imagerie et la spectroscopie in vivo."
Thse de l'Universit Claude Bernard-Lyon. (1990).

Price, T B, Perseghin, G, Duleba, A, Chen, W, Chase, J, Rothman, D L, Shulman, R G et
Shulman, G I, "NMR studies of muscle glycogen synthesis in insulin-resistant offspring of
parents with non-insulin-dependent diabetes mellitus immediately after glycogen-depleting
exercise"
Pro. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 5329-5334 (1996).

Price, T B, Rothman, D L, Avison, M J, Buonamico, P et Shulman, R G, "13C-NMR
measurements of muscle glycogen during low-intensity exercise."
J. Appl. Physiol. 70, 1836-1844 (1991).

187

Price, T B, Rothman, D L, Taylor, R, Avison, M J, Shulamn, G I et Shulman, R G, "Human
muscle glycogen resynthesis after exercise: insuli-dependent and independent phases"
J. Appl. Physiol. 76, 104-111 (1994a).

Price, T B, Taylor, R, Mason, G F, Rothman, D L, Shulman, G I et Shulman, R G, "Turnover of
human muscle glycogen with low-intensity exercise"
Med. Sci. Sports Exerc. 26, 983-991 (1994b).

Randle, P J, Garland, P B, Hales, C N et Newsholme, E A, "The glucose fatty acid cycle: its role
in insulin sensitivity and the metabolic disturbances of diabetes mellitus."
Lancet. 1, 785-789 (1963).

Roden, M, Price, T B, Perseghin, G, Petersen, K F, Rothman, D L et Cline, G W, "Mechanism of
free fatty acid-induced insulin resistance in humans"
J. Clin. Invest. 97, 2859-2865 (1996).

Ruiz-Cabello, J, Vuister, G W, Moonen, C T W, Van Gelderen, P, Cohen, J S et Van Zijl, P C M,
"Gradient-enhanced heteronuclear correlation spectroscopy. Theory and experimental aspects"
J. Magn. Reson. 100, 282-302 (1992).

Schaefer, S, Camacho, S A, Gober, J, Obregon, R G, de Groot, M A, Bovinik, E H, Massie, B et
Weiner, M W, "Response of myocardial metabolites to graded regional ischemia: 31P NMR
spectroscopy of porcine myocardium in vivo."
Circ. Res. 64, 968-976 (1989).

Segebarth, C, Grivegne, A R, Longo, R, Luyten, P R et Den Hollander, J A, "In vivo monitoring
of fructose metabolism in the human liver by means of 31P MRS."
Biochimie. 73, 105-108 (1991).

Segebarth, C M, Baleriaux, D F, Arnold, D L, Luyten, P R et den Hollander, J A, "MR image-
guided 31P MR spectroscopy in the evaluation of brain tumor treatment."
Radiology. 165, 215 (1987).

Serrai, H, Senhadji, L, De Certaines, J D et Coatrieux, J L, "Time-domain quantification of
amplitude, chemical shift, apparent relaxation time T2*, and phase by wavelet-transform
analysis.Application to biomedical magnetic resonance spectroscopy."
J. Magn. Reson. 124, 20-34 (1997).

Shachar-Hill, Y, Pfeffer, P E et Germann, M W, "Following plant metabolism in vivo and in
extracts with heteronuclear two-dimensional nuclear magnetic resonance spectroscopy"
Analytical Biochemistry. 243, 110-118 (1996).


188
Sotak, C H, "A volume-localized, two-dimensional NMR method for the determination of lactate
using zero-quantum coherence created in a stimulated echo pulse sequence"
Magn. Reson. med. 7, 364-370 (1988).

Swanson, S D, "Proc, SMRM, 11th Annual Meeting, p. 265"
(1992).

Taylor, D J, Styles, P, Matthews, P M, Arnold, D A, Gadian, D G, Bore, P et Radda, G K,
"Energetics of human muscle: exercise-induced ATP depletion"
Magn. Reson. Med. 3, 44-54 (1986a).

Taylor, D J, Styles, P M, Matthews, P M, Arnold, D A, Gadian, D G, Bore, P et Radda, G K,
"Energetics of human muscle: exercise-induced ATP depletion"
Magn. Reson. Med. 3, 44-54 (1986b).

Taylor, R, Price, T B, Rothman, D L, Shulman, R G et Shulman, G I, "Validation of 13C NMR
measurement of human skeletal muscle glycogen by direct biochemical assay of needle biopsy
samples"
Magn. Reson. Med. 27, 13-20 (1992).

Thiaudire, E, Biran, M, Delalande, C, Bouligand, B et Canioni, P, "In vivo 13C chemical shift
imaging of the human liver."
MAGMA. 2, 425-428 (1994).

Thorpe, J W, Barker, G J, Jones, S J et al, e, "Magnetization transfer ratios and tranverse
magnetization decay curves in optic neuritis: correlation with clinical findings and
electrophisiology"
J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 59, 487-492 (1995).

Tropp, J, "The theory of the bird-cage resonator"
J. Magn. Reson. 82, 51-62 (1989).

Tzou, D-L, Lee, S-M et Yeung, H N, "Temperature dependance and phase transition of proton
relaxation of hydrated collagen in intact beef tendon specimens via cross-relaxation
spectroscopy."
Magn. Reson. Med. 37, 359-365 (1997).

Ugurbil, K, Petein, M, Maidan, R, Michurski, S et From, A H L, "Measurement of an individual
rate constant in the presence of multiple exchanges: application to myocardial creatine kinase
reaction"
Biochemistry. 25, 207-212 (1986).


189
Van Den Berg, A J, Houthman, S, Heerschap, A, Reher, N J, van der boogert, H, Oesebuirg, B et
Hopman, M T E, "Muscle glycogen recovery after exercise during glucose and fructose intake
monitored by 13C-NMR."
J. Appl. Physiol. 81, 1495-1500 (1996).

van der Knaap, M S, Grond, v d, Van Rijen, P C, Faber, J A, J, V et Willemse, K, "Age-
dependent changes in localized proton and phophorus MR spectroscopy of the brain."
Radiology. 176, 509 (1990).

Van Zijl, P C M, Moonen, C T W et von Kienlin, M, "Homonuclear J refocusing in echo
spectroscopy"
J. Magn. reson. 89, 28-40 (1990).

Van Zijl, P C M, Scott Chesnick, A, DesPrres, D, Moonen, C T W, Ruiz-Cabello, J et Van
Gelderen, P, "In vivo proton spectroscopy and spectroscopic Imaging of {1-13C}-glucose and its
metabolic products"
Magn. Reson. Med. 30, 544-551 (1993).

Watanabe, H, Umeda, M, Ishihara, Y, Okamoto, K, Oda, M, Oshio, K, Kanamatsu, T et Tsukada,
Y, "Multivoxel 1H-13C HSQC spectroscopy using Multislice techniques with a 2IzSz state."
ISMRM 5th scientific meeting and exhibition- Vancouver, BC, Canada . (1997).

Weiss, R G, Gloth, S T, Kalil-Filho, R, Chacko, V P, Stern, M D et Gerstenblith, G, "Indexing
tricarboxylic acid cycle flux in intact hearts by carbon-13 nuclear magnetic resonance."
Circ. Res. 70, 392-408 (1992).

Wennerstrm, H, "Proton nuclear magnetic resonance lineshapes in lamellar liquid cristals"
Chem. Phys. Let. 18, 41-44 (1973).

Wilman, A H et Allen, P S, "Yield enhancement of a double-quantum filter sequence designed
for the edited detection of GABA"
J. Magn. Reson B. 109, 169-174 (1995).

Wolff, S D et Balaban, R S, "Magnetization Transfer Contrast (MTC) and Tissue Water Proton
Relaxation in Vivo"
Magn. Reson. Med. 10, 135-144 (1989).

Wthrich, K, Wider, G, Wagner, G et Braun, W, J. Mol. Biol. 155, 311-319 (1982).

Yeung, H N, "Transient response of a heterogeneous spin-system to binomial pulse saturation"
J. Magn. Reson A. 102, 8-15 (1993).


190
Yeung, H N, Adler, R S et Swanson, S D, "Transient Decay of Longitudinal Magnetization in
Heterogeneous Spin Systems under Selective Saturation IV. Reformulayion of Spin-Bath-Model
equations by the Redfield-Provotorov Theory"
J. Magn. Reson. 106, 37-45 (1994).

Yeung, H N et Swanson, S D, "Transient Decay of Longitudinal Magnetization in Heterogeneous
Spin Systems under Selective Saturation"
J. Magn. Reson. 99, 466-479 (1992).

Zang, L H, Laughlin, M R, Rothman, D L et Shulman, R G, "13C NMR relaxation times of
hepatic glycogen in vitro and in vivo"
Biochemistry. 29, 6815-6820 (1990).

Zhang, J, Merkle, H, hendrich, K, Garwood, M, From, A H L, Ugurbil, K et Bache, R J,
"Bioenergetics abnormalities associated with severe left ventricular hypertrophy."
J. Clin. Invest. 92, 993-1003 (1993a).

Zhang, J, Path, G, Chepuri, V, Xu, Y, Yoshiyama, M, Bache, R J, From, A H L et Ugurbil, K,
"Response of myocardial high energy phosphates and wall thickening to prolonged regional
hypoperfusion induced by subtotal coronary stenosis."
Magn. Reson. Med. 30, 28-37 (1993b).