UNIVERSITE D'ANTANANARIVO -----------------------------FACULTE DES SCIENCES --------------DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE FONDAMENTALE ET APPLIQUEE

MEMOIRE DETUDES APPROFONDIES DE BIOCHIMIE (OPTION : BIOCHIMIE APPLIQUEE AUX SCIENCES MEDICALES)

ETUDE CHIMIQUE ET BIOLO5IQUE DEXTRAITS TOXIQUES DE OLAX LANCEOLATA (OLACACEAE6

prsen e p!r

RAHELINIAINAMANDIMBY Lovasoa Matre es Sciences

S"# en#e $e %& !'r($ %))* +e'!n $! C",,(ss("n +'E-!,en .",p"se +e / Prsident Rapporteur Examinateurs : Pr"0esse#r ANDRIANTSIMAHAVAND1 A2e$ / D". e#r RA3OTO - RANOROMALALA D4A4D / Pr"0esse#r RAHERIMANDIMB1 M!rs"n : D". e#r RANDRIANIERENANA An+"

Re.",,!n+e "n s"r 7 $E erne$8 ,e s en $#( ! ."n0(!n.e8 e ($ !9(r!4

Ps!#,es *: / &.

A mon mari, que cet ouvrage soit pour toi un tmoignage de notre amour fidle.

A mes parents, que ce travail soit un tmoignage de ma reconnaissance pour votre affection et vos sacrifices.

A mes surs et mon frre, le courage est primordial pour russir.

A mon fils ador, que ce travail soit un exemple pour ton avenir.

A toute ma famille.

A tous mes amis

A tous !eux "ui me sont !#ers$

REMERCIEMENTS Le prsent travail a t ralis au : dicales du !partement de

Laboratoire de Biochimie Applique aux Sciences d#Antananarivo,

Biochimie "ondamentale et Applique de la "acult des Sciences de l#$niversit Laboratoire d#%&gine Alimentaire au Laboratoire de l#'nvironnement, (e voudrais adresser toute ma gratitude ) onsieur le *rofesseur ('A++,!A -ictor, .hef du !partement de Biochimie "ondamentale et Applique, /esponsable de la formation en troisime c&cle de Biochimie, encadreur de mon stage, pour m#avoir accueillie dans son laboratoire. /eceve0, de ce mmoire, malgr vos lourdes et multiples t1ches. (#exprime galement ma profonde reconnaissance ) !oll, adame le !octeur /A2,3, onsieur, mes trs vifs remerciements pour vos conseils et votre aide durant l#laboration et la finition icrobiologie de

a4tre de confrences, co5encadreur de mon stage pour les conseils et les suggestions

qu#elle m#a prodigus tout au long de ce travail ainsi que son apport prcieux dans la ralisation du prsent manuscrit, malgr ses nombreuses occupations. 6ue mmoire. (#adresse mes vifs et sincres remerciements ) adame le !octeur arson qui onsieur le *rofesseur A+!/7A+3S7 A%A-A+!8 Abel trouve ici mes

chaleureux remerciements pour avoir bien voulu me faire l#honneur de prsider le 9ur& de ce

/A+!/7A+7'/'+A+A Ando et

onsieur le *rofesseur /A%'/7 A+!7 B8

ont aimablement accept d#examiner le fruit de mes recherches et d#apporter leur critiques. (#exprime toute ma reconnaissance ) : onsieur le !octeur /A A/,S,+ Luciano, .hef du Laboratoire de icrobiologie

de l#'nvironnement du .+/' pour m#avoir autorise ) effectuer les travaux sur les germes pathognes et les proprits anti5microbiennes des toxines dans son tablissement.

adame le !octeur /A(' 7A/7 ,'L7S,A .lara "., !irecteur des *harmacies et Laboratoires du inistre de la sant pour l#tude de l#anatomie pathologique. onsieur /A+!/7A+A/7-, %./., les amis (e tiens ) remercier toutes les personnes qui ont apport une aide technique pour la ralisation de ce travail, en particulier, galement l#quipe du L. .' du ..+./.'. (#adresse spcialement toute ma reconnaissance affectueuse ) mon mari, ) mes parents, ) mon frre, ) mes s:urs et ) mon fils pour leur affection, le soutien moral et financier pendant la ralisation de ce mmoire. 'nfin, mes remerciements vont galement ) tous ceux qui, de prs ou de loin, ont contribu ) l#laboration de ce mmoire. chercheurs ainsi que l#quipe du Laboratoire de Biochimie "ondamentale et Applique et

ABREVIATIONS ANP B/A/E C CCM C&'( cm CNRE !a !&'( EB ./.I.A : Actate Neutre de Plomb : Butanol/ Acide actique/ Eau : !e"r Cel#iu# : C$romato"ra%$ie #ur couc$e mince : Concentration ltale '() : Centim*tre : Centre Nationale de Rec$erc$e #ur l+En,ironnement : !alton : !o#e ltale '() : E-trait brut : .oibem0%irenena amin+n1 .i2aro$ana amin+n1 .am%andro#oana en1 Ambani,o$itra " : 3ramme $ : 4eure i.% : Intra%ritonale 2" : 5ilo"ramme 2m : 5ilom*tre l. : &itre &ABASM : &aboratoire de Bioc$imie A%%lique au- Science# Mdicale# &4A : &aboratoire d+41"i*ne Alimentaire &ME : &aboratoire de Microbiolo"ie de l+En,ironnement m : M*tre M. : Molarit m" : Milli"ramme min : Minute ml : Millilitre mm : Millim*tre N. : Normale nm : Nanom*tre
PM / P"(+s ,"$.#$!(re

%/% %/, q#% # ,/, 9" 9m

: Poid#/ %oid# : Poid#/ ,olume : 6uantit #u77i#ante %our : Seconde

UV
: 8olume %ar ,olume : Micro"ramme : Microm*tre

: Ultraviolet

5LOSSAIRE
C"n'#$s("ns .$"n(;#es : alternance de contraction et de rela-ation de# mu#cle#:

con,ul#ion# #accade#: br*,e# et r%te# ; court# inter,alle# C<!n"se : coloration bleu<tre de la %eau lor# d+une maladie En"p= !$,(e : 7ermeture de# "lobe# oculaire# E-"p= !$,(e : #aillie anormale de# "lobe# oculaire# H<perpne : au"mentation de la 7rquence re#%iratoire P($"re. ("n : $ri##ement de# %oil# V!(sse!#- ."n9es (0s : ,ai##eau- dilat#

INTR/!ICTI/N 3ENERA&E &e# %oi#on# ou to-ine# #ont de# #ub#tance# %ou,ant %roduire de# %erturbation# ou la mort. &eur admini#tration dan# un or"ani#me entra=ne de# trouble# %lu# ou moin# "ra,e# ou l+arr>t du 7onctionnement de di,er# or"ane#. &+into-ication: #elon la #ub#tance em%lo1e et la do#e: %eut >tre ai"u? #ui,ie d+une mort ra%ide: ou #ubai"u? a,ec #ou,ent arr>t dan# l+,olution: ou c$ronique. &a connai##ance et l+utili#ation de# to-ine# remontent ; de# tem%# tr*# ancien#. Mal"r le# ri#que# li# ; la mani%ulation de# %oi#on#: l+$omme a tou@our# #u e-%loiter leur# %ro%rit# dan# la ,ie quotidienne. !+une %art: il# #ont de#tin# ; %lu#ieur# u#a"e# comme la c$a##e: la %>c$e: la lutte contre le# animau- nui#ible#: ou la @u#tice %o%ulaire mai#: d+autre %art: il# %eu,ent >tre em%lo1# ; de# 7in# t$ra%eutique#. &a to-icolo"ie: une #cience qui tudie le# e77et#: la caractri#ation ain#i que le# utili#ation# de# %oi#on#: e#t tributaire du d,elo%%ement d+autre# di#ci%line# #cienti7ique# telle# que la mdecine: la c$imie: la bioc$imie: la %$armacolo"ie: la %$1#iolo"ie ain#i que la biolo"ie molculaire. &a rec$erc$e de to-ine# d+ori"ine naturelle Aanimale: ,"tale ou microbienne) %eut aboutir ; l+i#olement de nou,elle# molcule# acti,e# dont le# %ro%rit# %ourraient >tre e-%loite# dan# la t$ra%eutique de certaine# maladie# comme le cancer et dan# la com%r$en#ion de# mcani#me# biolo"ique# com%le-e# comme le tran#%ort membranaire. &e# ,"tau- con#tituent une #ource im%ortante de to-ine#. !e nombreu- %oi#on#: de nature c$imique ,arie AalcaloBde#: $tro#ide#: #a%onine#: acide# amin#: %rotine# et autre#) et %o##dant di77rente# %ro%rit# biolo"ique# Aneuroto-ique#: cardioto-ique#: c1toto-ique#: antibiotique#...) ont t i#ol# de di77rente# %lante#. &a 7lore mal"ac$e e#t ric$e en e#%*ce# to-ique# APERNET et MECER: DE'F G B/ST: DEHD G !EBRAC et coll.: DEFD G B/ITEAI: DEFE et DEEJ). Ce%endant: la %lu%art de ce# %lante# n+ont %a# encore 7ait l+ob@et d+in,e#ti"ation# c$imique# et biolo"ique# a%%ro7ondie#.

C+e#t %our ce# di77rente# rai#on# que le &aboratoire de Bioc$imie A%%lique auScience# Mdicale# A&ABASM) a orient #e# tra,au- de rec$erc$e ,er# l+i#olement: l+tude c$imique et biolo"ique de %rinci%e# to-ique# de# %lante#. Plu#ieur# %lante# to-ique# a%%artenant ; di77rente# 7amille# ont d@; donn lieu ; de# tra,au- a%%ro7ondi# dan# ce laboratoire. /n %eut citer ; titre d+e-em%le# dan# : &a 7amille de# C/NNARACEAE : /ourea orientalis ARA5/T/ 0 RAN/R/MA&A&A: DEKL) G .nestis glabra et .nestis pol&ph&lla AMEANN/!A: DEKH). &a 7amille de# EIP4/RBIACEAE : Aleurites fordii ARAMA/NARI8/NC: DEKL) et .roton mongue ARA&IS/N: DEKF). &a 7amille de# B/&ETACEAE : Boletus affinis ARANANAMPARANC: DEKF). &a 7amille de# 3ENTIANACEAE : 3achiadenus longiflorus ARA5/T/0 RAN/R/MA&A&A: DEKE). &a 7amille de# .ABACEAE : Albi0ia lebbec; AAN!RIANTS/A:DEKJ) G Albi0ia arenicola ARAN!RIANARI8/: DEEH) G Albi0ia pol&ph&lla ARAMEMIARIM/0 E&IS/A: DEEH et RA5/T/N!RAS/A: O((() G Albi0ia species ARAMAM/NMIS/N: DEEK) G Albi0ia bernieri ARA4ARIS/A: DEEE) G Albi0ia boivini ARA4ERINIAINA: DEEE et ARIS/A: O((D) et Albi0ia odorata ARAMEMIARIM/E&IS/A: O(((). &a O((( ). &a 7amille de# &ECCT4C!ACEAE : Barringtonia butonica ARATIARI8E&/: O(((). &a 7amille de# ASC&EPIA!ACEAE : *entatropis madagascariensis A4ARINMAT/8/: O((D). &a 7amille de# AMARANTACEAE : %enonia scoparia ARAMA4A.A&C: O((O). Pour notre %art: nou# nou# #omme# intre##e au- %rinci%e# acti7# de# 7euille# de ,lax lanceolata =,LA.A.'A'>: une %lante endmique de Mada"a#car. !i77rente# rai#on# ont @u#ti7i notre c$oi- : &a %lante e#t endmique. Elle e#t relati,ement abondante #ur la cPte /ue#t de l+Ile. Mi#e ; %art la de#cri%tion botanique: la %lante n+a %a# encore 7ait l+ob@et d+tude# 7amille de# CICIRBITACEAE : <erosic&os dangu&i ARA5/T/N!RANANA5A: DEEE ) et <erosic&os perrieri ARAN!RIAMI4ARIS/A:

c$imique# ou biolo"ique#. !+a%r*# une communication %er#onnelle: #ui,ie ultrieurement de di#cu##ion# a,ec le# ,illa"eoi# #ur le# lieu- de rcolte: la %lante contiendrait de# %rinci%e# to-ique#. Par ailleur#: on lui conna=t quelque# utili#ation# dan# la t$ra%eutique traditionnelle. En e77et: dan# la %artie Sud de l+Ile: le# "uri##eur# du ,illa"e l+utili#ent %our arr>ter le# trouble# d+ori"ine# di,er#e# comme la 7ati"ue et %our 7aciliter la cicatri#ation de# %laie#. C+e#t au##i une %lante rituelle utili#e %our %rot"er contre le mau,ai# #ort. &e but de notre tude con#i#te ; mettre en ,idence la to-icit de# 7euille# de ,lax lanceolata: de %r%arer de# e-trait# #u77i#amment %uri7i# a7in de caractri#er le# %rinci%e# to-ique# #ur le %lan c$imique et de %ro#%ecter certaine# de leur# %ro%rit# biolo"ique#. Nou# %r#enteron# le# r#ultat# de no# tra,au- en deu- %artie# : la %remi*re %artie #era con#acre au- r#ultat# de l+i#olement et de la caractri#ation c$imique de# %rinci%e# to-ique# et la deu-i*me ; l+tude de leur# %ro%rit# biolo"ique#.

> - INTRODUCTION !+a%r*# la littrature: ,lax lanceolata n+a %a# encore 7ait l+ob@et d+tude# c$imique# a%%ro7ondie#. &a to-icit de# 7euille# et de# ti"e# de la %lante a t dmontre %ar de# e##ai# %rliminaire# #ur #ouri#. !an# la %r#ente %artie de ce mmoire: nou# a,on#: mi# au %oint un %rocd d+e-traction et de %uri7ication qui %ermettrait en#uite d+obtenir un e-trait to-ique $autement %uri7i ; %artir de 7euille# tudi le# %ro%rit# %$1#ico0c$imique# du Aou de#) %rinci%eA#) to-iqueA#) et en7in e##a1 de dterminer #a Aou leur) nature c$imique. % ? MATERIELS ET METHODES %4> - MATERIELS %4>4> ? LA PLANTE %4>4>4> ? C$!ss(0(.! ("n AMABBER&EC : DEKF) R*"ne Embranc$ement Sou#0embranc$ement Cla##e Sou#0cla##e /rdre .amille 3enre E#%*ce : 8E3ETA& : SPERMAP4CTES : AN3I/SPERMES : !IC/TC&E!/NES : R/SI!AE : SANTA&A&ES : /&ACACEAE : ,lax : lanceolata .av et 2er

%4>4>4% ? Des.r(p ("n 2" !n(;#e &a de#cri%tion botanique du "enre ,lax et de l+e#%*ce lanceolata Afigure ?) e#t donne en dtail en annexe ?. %4>4>4* ? D(s r(2# ("n 9"9r!p=(;#e e $(e# +e r."$ e &a carte de la figure @ montre la di#tribution "o"ra%$ique de ,lax lanceolata. Cette

%lante %ou##e #ur le# terrain# calcaire#: cri#tallin# et #ablonneu-.

'

.ruit

"igure ? : $n rameau de Olax lan!eolata.

"igure @ : !istribution gographique de ,lax lanceolata d#aprs .A*$/,+ =?ABC>.

Elle %ou##e dan# la 7or>t #em%er,irente $umide: et #ub0$umide de%ui# le ni,eau de la mer @u#qu+; DH((m d+altitude ain#i que #ur l+en#emble de la 7or>t et du 7ourr dcidu# #ec# et #ub0aride# de%ui# Rano%i#o ; l+oue#t de .ort0!au%$in @u#qu+; !i"o0SuareQ. &e# nom# ,ernaculaire# #ont Ambihotse, %a0ompas&, %a0omposa: 2irandrambaiav&, aintsoririna, aitsoririna, /atsara, /emaitso, 3sa;aloa: 3si;aloa. ACAPIR/N: DE'F).

%4>4>4@ - Or9!nes # ($(ss Nou# a,on# utili# %our notre tude de# 7euille# rcolte# dan# la 7or>t d+Ambo$ima$a,elona #itue ; O'2m ; l+E#t de Toliar1 au moi# d+A,ril O((D: c+e#t0 ;0 dire %endant la %riode de 7lorai#on de la %lante. !+autre %art: de# 7euille# rcolte# au moi# de Se%tembre O((D ; Moronda,a: ont #er,i de matriel %our une tude de la to-icit en 7onction du c1cle de la %lante. %4>4>4& ? Prp!r! ("n e ."nser'! ("n +# ,! r(e$ '9 !$ &e# 7euille# 7ra=c$e# #ont la,e# ; l+eau di#tille %ui# #c$e# ; l+air libre %endant une #emaine. Elle# #ont en#uite bro1e# ; l+aide d+un mortier. &a %oudre 7ine obtenue %ar tami#a"e du bro1at con#titue notre matriel de d%art G elle e#t con#er,e au con"lateur A0O( C). %4>4% ? LES PRODUITS CHIMIQUES &a %lu%art de# %roduit# c$imique# utili## %our rali#er ce tra,ail #ont %ur#: de qualit %our anal1#e Amarque MERC5: PR/&AB/ ou B!4). &e# %laque# de "el de #ilice utili#e# %our la c$romato"ra%$ie #ur couc$e mince AH(.O'L: de dimen#ion# O( - O(cm) #ont de marque MERC5. &e "el de #ilice %ai# de (:Omm e#t tal #ur 7euille %la#tique. %4% ? METHODES %4%4> ? METHODES DEXTRACTION %4%4>4> ? Dp(9,en ! ("n +# ,! r(e$ '9 !$ &a %oudre de 7euille# #*c$e# e#t %lace dan# une cartouc$e en %a%ier 7iltre: %ui# d%i"mente %ar e-traction %ar l+actone au #o-$let ; F( C %endant JH ; LK $eure#. &a

%oudre ain#i traite e#t #c$e ; l+air libre.

%4%4>4% ? E- r!. ("n 7 0r"(+ &a %oudre de 7euille# e#t mi#e en #u#%en#ion dan# le #ol,ant d+e-traction Al+eau di#tille ou l+t$anol ab#olu): #elon le ra%%ort D/D( A%/,). &a #u#%en#ion e#t en#uite #oumi#e ; une a"itation ma"ntique %endant J$ ; la tem%rature ambiante: %ui# lai##e macrer ; L C %endant une nuit. &e macrat e#t 7iltr #ur L %ai##eur# de "aQe %our liminer le# tourteau-. &e 7iltrat obtenu e#t centri7u" ; OO(( tour#/min %endant J(min. &e #urna"eant e#t en#uite concentr %ar ,a%oration du #ol,ant d+e-traction A,oir mt$ode de concentration % DD): tandi# que le culot e#t limin. Ine #econde centri7u"ation ; OO(( tour#/min %endant D'min e#t 7aite %our liminer le %rci%it a%%aru au cour# de la concentration. %4%4>4* ? E- r!. ("n 7 .=!#+ &a %oudre de 7euille# e#t dla1e dan# de l+eau di#tille ou de l+t$anol ab#olu #ui,ant le ra%%ort D/D( A%/,). &e mlan"e e#t #oumi# ; un c$au77a"e ; re7lu- #ou# a"itation ma"ntique %endant O$ ; H( C %ui# lai## macrer ; L C %endant une nuit. &e macrat e#t 7iltr #ur L %ai##eur# de "aQe: %ui# le 7iltrat obtenu e#t centri7u" ; OO(( tour#/min %endant J(min. &e #urna"eant e#t concentr %ar ,a%oration et le culot e#t limin. %4%4% ? METHODES DE PURIFICATION %4%4%4> ? Pr.(p( ! ("n p!r $!. ! e ne# re +e p$",2 (ANP6 %4%4%4>4> ? Pr(n.(pe &+actate neutre de %lomb: comme la %lu%art de# #el# de mtau- lourd#: %ermet la d7cation d+e-trait# biolo"ique#: %ar %rci%itation de# macromolcule# telle# que le# %rotine#: le# acide# nuclique#: le# %ol1#acc$aride# ain#i que d+autre# molcule# comme le# acide# or"anique#. %4%4%4>4% ? M"+e "pr! "(re In ,olume dtermin d+une #olution aqueu#e d+actate neutre de %lomb ; O(% A%/,) e#t ,er# dan# l+e-trait ; traiter #ou# a"itation ma"ntique. &e %rci%it 7orm e#t limin %ar centri7u"ation ; OO(( tour#/min %endant D'min. &+addition d+un ,olume dtermin d+une
D(

#olution aqueu#e de %$o#%$ate di#odique ; D(% A%/,) %ermet d+liminer l+e-c*# de %lomb dan# le #urna"eant. &e %rci%it e#t limin de nou,eau %ar centri7u"ation ; OO(( tour#/min %endant D'min. &e #urna"eant e#t recueilli. %4%4%4% ? F($ r! ("n s#r .=!r2"n !. (0 %4%4%4%4> ? Pr(n.(pe &e c$arbon acti7 e#t un #u%%ort c$romato"ra%$ique qui %ermet d+ad#orber toute# le# #ub#tance# ; #tructure aromatique. Son %ou,oir ad#orbant e#t tr*# le,. %4%4%4%4% ? M"+e "pr! "(re &a tec$nique utili#e e#t celle mi#e au %oint %ar MEANN/!A ADEKH). Ine couc$e de c$arbon acti7 e#t d%o#e dan# un entonnoir au0de##u# d+un bouc$on 7orm de 7ibre# de ,erre ta##e#. &+entonnoir e#t ada%t ; une 7iole relie ; une %om%e ; ,ide. &a #olution ; traiter e#t 7iltre #ou# %re##ion rduite #ur la couc$e de c$arbon acti7 %ralablement im%r"ne d+eau di#tille. &e traitement e#t #ui,i de %lu#ieur# rinRa"e# ; l+eau di#tille. &+e-trait incolore obtenu e#t 7iltr #ur %a%ier 7iltre %our liminer le# 7ine# %articule# de c$arbon. Il e#t concentr %ar ,a%oration #ou# %re##ion rduite. %4%4%4* ? Pr.(p( ! ("n p!r $ =!n"$ &)% %4%4%4*4> ? Pr(n.(pe Cette tec$nique e#t ba#e #ur la diminution de la %olarit et du %ou,oir di##ol,ant d+un milieu aqueu- a%r*# un a@out de #ol,ant or"anique mi#cible ; l+eau. &e# molcule# %eu #oluble# et le# "ro##e# molcule# %rci%itent. %4%4%4*4% ? M"+e "pr! "(re !e l+t$anol ab#olu e#t additionn %etit ; %etit A,/,) ; un ,olume dtermin d+un e-trait aqueu-: #ou# a"itation ma"ntique. &e mlan"e e#t lai## re%o#er %endant D'min ; L C. &e %rci%it a%%aru e#t en#uite limin %ar centri7u"ation ; OO(( tour#/min %endant D'min. &+alcool e#t ,a%or du #urna"eant tandi# que le culot e#t re%ri# dan# de l+eau di#tille.
DD

%4%4%4@ ? D(!$<se %4%4%4@4> ? Pr(n.(pe Cette tec$nique %ermet la #%aration de# #ub#tance#: en utili#ant leur ca%acit re#%ecti,e ; 7ranc$ir le# %ore# calibre# d+une membrane arti7icielle a%%ele membrane de dial1#e qui #e %r#ente #ou# 7orme de c1lindre allon" ou boudin de dial1#e. 3r<ce ; #a %ermabilit #lecti,e: cette membrane %ermet le %a##a"e de %etite# molcule# ,er# le milieu e-trieur et la rtention de "ro##e# molcule# en im%liquant le %$nom*ne d+o#mo#e. &e# #olut# di77u#ent de la #olution la %lu# concentre ,er# la #olution la %lu# dilue. Ce %$nom*ne #+arr>te d*# que le# concentration# dan# ce# deu- com%artiment# #ont "ale# AMA4INIER et 4AM/N: DEE( et 5AM/IN: DEED). &e# 7acteur# qui %eu,ent in7luencer la ,ite##e de la dial1#e #ont : la tem%rature le diam*tre de# %ore# de la membrane le %4 le tem%# de contact la di77rence de concentration entre le# deu- milieu%4%4%4@4% ? M"+e "pr! "(re *rparation du boudin de dial&se &e# "l1crine#: le# com%o## #ul7ur# et le# mtau- lourd# %r#ent# ; la #ur7ace de la membrane de dial1#e doi,ent >tre limin#. &a tec$nique u#uelle con#i#te ; bouillir la membrane dan# de l+eau di#tille %endant D'min: l+eau e#t en#uite limine %ui# le traitement e#t r%t J ; L 7oi#. &a membrane ain#i %r%are e#t con#er,e dan# de l+eau di#tille ; L C. A,ant c$aque utili#ation: la membrane doit >tre rince ; l+eau di#tille. ise en :uvre de la dial&se &e 7ra"ment de boudin ; dial1#e contenant l+e-trait ; dial1#er e#t 7erm ; c$aque e-trmit %ar un nSud. Il e#t introduit dan# le liquide de contre0dial1#e AD(( 7oi# le ,olume de l+e-trait) et l+en#emble e#t #oumi# ; une a"itation ma"ntique a7in d+,iter la 7ormation d+un "radient de concentration au ,oi#ina"e du boudin. &e liquide de contre0dial1#e e#t renou,el 7rquemment %our acclrer la di77u#ion et maintenir la di77rence de concentration entre le# deu- milieu-.
DO

%4%4%4& ? Tr!( e,en p!r $! .=!$e#r %4%4%4&4> ? Pr(n.(pe Cette mt$ode e#t utili#e %our liminer certaine# macromolcule# telle# que le# %rotine# qui coa"ulent #ou# l+e77et de la c$aleur. %4%4%4&4% ? M"+e "pr! "(re &+e-trait ; traiter e#t c$au77 dan# un bain0marie bouillant %endant D'min ; EH C. &e %rci%it 7orm e#t cart %ar centri7u"ation ; OO(( tour#/min %endant D'min. &e #urna"eant e#t recueilli et le culot e#t limin. %4%4%4A ? Fr!. ("nne,en p!r $e n ? 2# !n"$ %4%4%4A4> ? Pr(n.(pe C+e#t une mt$ode d+e-traction liquide0liquide ba#e #ur le tran#7ert d+un ou de %lu#ieur# con#tituant# d+une %$a#e liquide A%$a#e aqueu#e) ,er# une autre %$a#e liquide e-tracti,e A%$a#e butanolique) qui e#t non mi#cible ; la %rcdente A5AM/IN: DEFF). %4%4%4A4% ? M"+e "pr! "(re &+e-trait ; traiter e#t mlan" ,olume ; ,olume au n0butanol dan# une am%oule ; dcanter. A%r*# une 7orte a"itation: le mlan"e e#t lai## re%o#er @u#qu+; la #%aration totale de deu- %$a#e# : une %$a#e #u%rieure butanolique et une %$a#e in7rieure aqueu#e. &a %$a#e aqueu#e #ubit de nou,eau quatre 7ractionnement# #ucce##i7#. &e# ' %$a#e# or"anique# ain#i obtenue# #ont ra##emble# %ui# 7iltre# #ur %a%ier 7iltre %our liminer le# lment# in#oluble#. &e 7iltrat e#t en#uite ,a%or a%r*# addition d+eau di#tille. &e butanol r#iduel de la %$a#e aqueu#e e#t "alement ,a%or a%r*# addition d+eau di#tille. %4%4* ? METHODES DE CONCENTRATION Toute# le# o%ration# d+,a%oration de #ol,ant# et de rduction de ,olume #ont rali#e# au mo1en d+un ,a%orateur rotati7 4EI!/&P4 ; la tem%rature '( T '' C. &a %re##ion e#t rduite ; l+aide d+une %om%e ; ,ide.

DJ

%4%4@ ? METHODES DANAL1SE %4%4@4> ? C=r",! "9r!p=(e s#r ."#.=e ,(n.e %4%4@4>4> ? Pr(n.(pe &a c$romato"ra%$ie #ur couc$e mince e#t un %rocd d+anal1#e au cour# duquel le# #ub#tance# ; #%arer mi"rent #ui,ant une direction dtermine. &a ,ite##e de d%lacement de# #ub#tance# d%end de leur a77init %our la %$a#e mobile or"anique d+une %art et de# 7orce# d+ad#or%tion due# au #u%%ort d+autre %art. %4%4@4>4% ? M"+e "pr! "(re

!pDt des chantillons

&e# e-trait# #ont anal1## #ur une %laque %r>te ; l+em%loi dcou%e au- dimen#ion# ,oulue#. Il# #ont d%o## ; l+aide d+un ca%illaire ; D:'cm du bord in7rieur et ; %artir de D:Jcm de# bord# latrau-: en tiret# de Fmm de lar"e: e#%ac# de Hmm. &e# d%Pt# #ont #c$# au mo1en d+un #c$oir ; main.

!veloppement
&a c$romato"ra%$ie a#cendante #e droule dan# une cu,e ; c$romato"ra%$ie !ESA3A: %ralablement #ature %ar le# ,a%eur# du #ol,ant de mi"ration "r<ce ; l+a%%lication de %a%ier 7iltre im%r"n du #ol,ant contre #e# %aroi# interne#. &e #1#t*me de #ol,ant# utili# comme #ol,ant de mi"ration e#t le Butanol / Acide actique / Eau AB/A/E): H(/O(/O( A%/%). &or#que le 7ront du #ol,ant #e trou,e ; (:'cm du bord #u%rieur de la %laque: la c$romato"ra%$ie e#t arr>te. &a %laque e#t en#uite retire de la cu,e %ui# #c$e ; l+aide d+un #c$oir ; main. /vlation des chromatogrammes &e# c$romato"ramme# #ont r,l# %ar deu- mt$ode# : 0 &a mi"ration de# #ub#tance# e#t ,i#uali#e #ou# lumi*re ultra,iolette de lon"ueur# d+onde O'Lnm et JHHnm. 0 &e# tac$e# a%%arue# #ont r,le# %ar %ul,ri#ation d+un racti7 #%ci7ique : le racti7 ; la nin$1drine ou le racti7 ; la ,anilline #ul7urique. Com%o#ition de# racti7# :

DL

R!. (0 7 $! n(n=<+r(ne Nin$1drine ................................ J " Collidine...................................J( ml Acide actique........................D(( ml Et$anol ab#olu .............q.#.% D((( ml &a %ul,ri#ation de ce racti7 entra=ne l+a%%arition de tac$e# ro#e# ou ,iolette# quelque# minute# a%r*# #c$a"e ; l+air c$aud. R!. (0 7 $! '!n($$(ne s#$0#r(;#e 08anilline.............................................(:' " 0Acide #ul7urique concentr ............D(( ml A%r*# %ul,ri#ation de ce racti7: de# tac$e# ro#e# a%%arai##ent et de,iennent noire# a%r*# c$au77a"e ; l+tu,e ; DO( C %endant 'min. %4%4@4% - Cr(2$!9e p=< ".=(,(;#e Pour c$aque o%ration de dtection: Dml de l+e-trait ; tudier e#t ,a%or ; #ec. %4%4@4%4> - Les !$.!$"B+es acration chlorh&drique &e r#idu obtenu %ar ,a%oration ; #ec e#t macr dan# Jml de 4Cl ON: la #olution e#t en#uite 7iltre #ur %a%ier 7iltre. &e 7iltrat e#t r%arti dan# L tube# ; e##ai dont le %remier #er,ira de tmoin. &e# troi# autre# tube# #ont utili## %our le te#t de# alcaloBde# en utili#ant troi# racti7# : racti7# de MACER: de UA3NER et de !RA3EN!/R... &a com%o#ition de ce# racti7# e#t donne en annexe @. !roulement des tests Cinq "outte# de racti7 de MACER #ont a@oute# dan# un tube. &+o%ration e#t r%te %our le# O autre# racti7#. &+a%%arition d+un %rci%it ou d+une 7loculation indique la %r#ence d+alcaloBde# dan# l+e-trait ; te#ter AC/R!E&: DEKD G BRINET/N: DEEJ).

D'

%4%4@4%4% ? Les 0$!'"n"B+es e $es $e#."!n =".<!nes % % & % % ' ( )la*ono+des : Test de ,-L.TATER (Test la !/anidine6 &e r#idu #ec e#t di##ou# dan# Jml d+t$anol K(% %ui# 7iltr #ur %a%ier 7iltre. &a #olution obtenue e#t r%artie dan# L tube# ; e##ai dont un #ert de tmoin. !an# le deu-i*me tube: (:'ml d+acide c$lor$1drique concentr et O tournure# de ma"n#ium #ont a@out#. !an# le troi#i*me tube: en %lu# de# con#tituant# mi# dan# le deu-i*me tube: Dml d+eau di#tille et Dml d+alcool i#oam1lique #ont ,er##. &e c$an"ement de la coloration dan# le #econd et le troi#i*me tube traduit la %r#ence de 7la,onoBde# : coloration rou"e %our le# 7la,one# coloration rou"e ,iolace %our le# 7la,onone# coloration %our%re %our le# 7la,onol# % % & % % % ( Leu!oant#o!/anes : Test de 0ATE 1 .2-T3 Au quatri*me tube de l+e-%rience %rcdente e#t a@out (:'ml d+acide c$lor$1drique concentr: %ui# le mlan"e e#t %lac dan# un bain marie bouillant %endant J(min. A%r*# re7roidi##ement: l+a%%arition d+une coloration rou"e indique la %r#ence de leucoant$oc1ane# A./N3 et coll.: DEFF). %4%4@4%4* ? Les !n(ns e $es p"$<p=n"$s &e r#idu d+,a%oration e#t re%ri# dan# Jml d+eau di#tille c$aude. &e mlan"e e#t %arta" dan# L tube# ; e##ai. &e %remier tube e#t utili# comme tmoin tandi# que le# J dernier# tube# #ont r#er,# au- J di77rent# te#t#. % % & % 4 ' ( Test la 5latine 6uatre "outte# de "latine ; D% A%/,) #ont a@oute# dan# le deu-i*me tube. &a %r#ence de tanin# $1dro#oluble# de t1%e catc$ique dan# l+e-trait e#t montre %ar la 7ormation d+un %rci%it blanc. % % & % 4 % ( Test la 5latine sale 6uatre "outte# de "latine #ale A"latine aqueu#e ; D% V NaCl D(% ) #ont a@oute# dan# le troi#i*me tube. &a %r#ence de tanin# conden## de t1%e %1ro"allique #e traduit %ar

DH

l+a%%arition d+un %rci%it. % % & % 4 4 ( Test au !#lorure ferri"ue 6uatre "outte# de c$lorure 7errique AD(%) en #olution mt$anolique #ont additionne# dan# le quatri*me tube. In %rci%it de couleur bleu ,erd<tre caractri#tique a%%ara=t %our le# tanin# de t1%e# catc$ol# tandi# qu+une coloration bleu<tre r,*le la %r#ence de tanin# de t1%e# %1ro"allol#. Ine raction n"ati,e ; la "latine #ale accom%a"ne d+une coloration ,erte ou bleu noir %our le te#t au c$lorure 7errique #ont due# ; la %r#ence d+autre# com%o## %$nolique# A4EMIN3UAC et 5ARC4ESC: DEKE). %4%4@4%4@ ? Les !n =r!;#(n"nes / Tes +e BORNTRC5ER In ,olume de benQ*ne e#t additionn d+un m>me ,olume de la #olution aqueu#e du r#idu #ec. &e mlan"e e#t %lac dan# une am%oule ; dcanter. A%r*# une 7orte a"itation: ce mlan"e e#t lai## au re%o#. &a 7ormation de deu- %$a#e# e#t ob#er,e : la %$a#e aqueu#e et la %$a#e or"anique benQnique. Cette derni*re e#t recueillie %ui# a@oute de ' "outte# d+ammoniaque O'%. A%r*# a"itation: la %r#ence d+ant$raquinone# dan# l+e-trait e#t indique %ar le ,ira"e de la coloration de la %$a#e alcaline A%$a#e in7rieure) en rou"e. %4%4@4%4& ? Les s!p"n(nes &e r#idu #ec e#t di##ou# dan# Dml d+eau di#tille. &a #olution obtenue e#t #oumi#e ; une a"itation ner"ique %endant J(#. &+a%%arition d+une mou##e de Jcm de $auteur: %er#i#tant %endant J(min indique la %r#ence de #a%onine# dan# l+e-trait A./N3 et coll.: DEFF). %4%4@4%4A ? Les s r"B+es e $es r( erpDnes &e r#idu #ec e#t re%ri# dan# Jml de c$loro7orme. &e mlan"e e#t 7iltr %ui# di#tribu dan# J tube# ; e##ai dont le %remier #ert de tmoin. % % & % 6 ' ( Test de L-E0ER2ANN ( 07RC3AR8 !an# le deu-i*me tube: O "outte# d+an$1dride actique #ont a@oute#. A%r*# une

DF

a"itation l"*re: un a@out de quelque# "outte# d+acide #ul7urique e#t e77ectu. &+a%%arition d+un anneau rou"e ou ,iolet %rou,e la %r#ence de triter%*ne# tandi# que le d,elo%%ement d+une coloration ,erd<tre dan# la %$a#e aqueu#e #u%rieure e#t #%ci7ique de# #troBde#. &e# deu- %$nom*ne# %eu,ent >tre ob#er,# #imultanment. % % & % 6 % ( Test de .AL9O,.9In ml d+acide #ul7urique e#t additionn dan# le troi#i*me tube inclin. &a %r#ence de #trol# in#atur# dan# l+e-trait# e#t ,ri7ie %ar la 7ormation d+un anneau rou"e: ,iolet ou mau,e ; l+inter7ace AN/4ARA:DEKE).

%4%4@4%4: ? Les +s"-<"ses / Tes +e 3ELLER ? 3ILIANI &e r#idu #ec e#t re%ri# dan# une #olution aqueu#e de c$lorure 7errique ; D(% additionne d+acide actique "lacial. &e mlan"e e#t a"it l"*rement %ui# de l+acide #ul7urique concentr e#t a@out ,olume ; ,olume en inclinant le tube. &+e-trait contient de# d#o-1o#e# lor#qu+un anneau %our%re #e 7orme ; l+inter7ace A./N3 et coll.: DEFF). %4%4@4%4E ? Les (r(+"B+es &e r#idu d+,a%oration e#t di##ou# dan# Dml d+eau di#tille. &a #olution obtenue e#t a"ite %ui# additionne de (:'ml d+acide c$lor$1drique concentr. &e mlan"e e#t c$au77 au bain marie bouillant %endant J(min. &a %r#ence de# iridoBde# e#t montre %ar l+a%%arition d+une coloration bleue a%r*# re7roidi##ement. * - RESULTATS

&e# e-%rience# %rliminaire# #ur le# 7euille# et le# ti"e# de ,lax lanceolata ont montr la %r#ence de %rinci%e# to-ique#. Ce%endant: nou# a,on# c$oi#i d+tudier le# %rinci%e# to-ique# de# 7euille# d+abord: ; cau#e de l+abondance de ce matriel. Toute# le# e-%rience# #ont rali#e# ; la tem%rature ambiante.

DK

*4> ? EXTRACTION A,ant l+ta%e d+e-traction: nou# a,on# %rocd ; la d%i"mentation de la %oudre %ar traitement %ar l+actone au #o-$let ; F( C %endant JH ; LK$ A,oir mt$ode W O.O.D:C7 % F). Ce%endant: cette ta%e a t limine %our de# rai#on# conomique# car le# c$romato"ra%$ie# #ur couc$e mince de# e-trait# d%i"ment# et non d%i"ment# n+ont montr aucune di77rence #i"ni7icati,e. !+autre %art: la couleur de ce# e-trait# ain#i que leur to-icit #ont com%arable#. !eu- t1%e# d+e-traction ont t e77ectu# : une e-traction ; 7roid et une e-traction ; c$aud. Pour c$acune d+elle#: deu- #ol,ant# d+e-traction ont t utili## : l+eau di#tille et l+t$anol. *4>4> ? EXTRACTION A FROID *4>4>4> ? E- r!. ("n !;#e#se Cinquante "ramme# de %oudre de 7euille #ont mlan"# ; '((ml d+eau di#tille. &e# di77rente# ta%e# de l+e-traction #ont dcrite# au %ara"ra%$e O.D.D.O:C7. % K. &e #urna"eant de couleur brune de,ient trouble a%r*# concentration. Ine deu-i*me centri7u"ation ; OO(( tour#/min %endant D'min e#t 7aite. &e nou,eau #urna"eant obtenu: de couleur brun ca7 et de %4 H:FL: con#titue l+e-trait brut to-ique. *4>4>4% ? E- r!. ("n =!n"$(;#e En utili#ant la mt$ode dcrite au %ara"ra%$e O.O.D.O: C7. % K: nou# a,on# obtenu un e-trait brut alcoolique to-ique: de couleur ,erte: ,i#queu-: de %4 H:'F. *4>4% ? EXTRACTION A CHAUD *4>4%4> ? E- r!. ("n !;#e#se &a mt$ode d+e-traction dcrite dan# le %ara"ra%$e O.O.D.J: C7. % K %ermet d+obtenir un e-trait brut non to-ique de couleur marron 7onc: lim%ide: de %4 H:HO. *4>4%4% ? E- r!. ("n =!n"$(;#e Par cette mt$ode d+e-traction indique au %ara"ra%$e O.O.D.J: C7. % K : un e-trait brut to-ique ,ert 7onc: trouble: de %4 ':HH: e#t obtenu. &e# caractri#tique# de# e-trait# brut# obtenu# %ar ce# di77rente# tec$nique#

DE

d+e-traction #ont r#ume# dan# le tableau ?. 3ableau ? : caractristiques des extraits bruts. EXTRACTION %4 de l+e-trait brut Couleur A#%ect To-icit Aen tem%# AQUEUSE A FROID H:FL Brun ca7 &im%ide ALCOOLIQUE A FROID H:'F 8ert 8i#queuAQUEUSE A CHAUD H:HO Marron 7onc &im%ide ALCOOLIQUE A CHAUD ':HH 8ert 7onc Trouble

O ; J$ ' ; H$ Non to-ique Plu# de OL$ de #ur,ie)X X ,oir mt$ode dcrite au %ara"ra%$e O.O.D.D.D: C7. % OF !+a%r*# le tableau ci0de##u#: l+e-traction ; 7roid donne le# meilleur# r#ultat# du %oint de ,ue de# %ro%rit# %$1#ico0c$imique# et to-ique# de l+e-trait obtenu. &e c$romato"ramme ACCM) de# e-trait# aqueu- %r#ente moin# de contaminant# %ar ra%%ort au- e-trait# alcoolique#. !e %lu#: l+e-trait brut alcoolique ; 7roid e#t di77icile ; tra,ailler ; cau#e de #a ,i#co#it. Par con#quent: nou# a,on# ado%t la mt$ode d+e-traction aqueu#e ; 7roid %our la #uite de notre tra,ail. *4% ? PURIFICATION &a %uri7ication du ou de# %rinci%e# to-ique# ; %artir de l+e-trait brut e#t rali#e ; l+aide de tec$nique# courante# ba#e# #ur de# di77rence# de %ro%rit# telle# que la #olubilit: l+ad#or%tion ain#i que le %oid# molculaire. !e# %ro%rit# %$1#ico0c$imique# de no# %roduit# ont t mi#e# en ,idence "r<ce ; ce# mt$ode# m>me #i certaine# d+entre elle# n+ont %a# t retenue# dan# le %rocd de %uri7ication ; cau#e de leur 7aible %er7ormance. &a %uri7ication #+e77ectue en J ta%e# : une dial1#e: un traitement %ar la c$aleur et un 7ractionnement %ar le n0butanol. Toute# le# ta%e# de la %uri7ication #ont "uide# %ar de# te#t# de to-icit #ur la #ouri#: et l+$omo"nit de# e-trait# e#t a%%rcie %ar c$romato"ra%$ie #ur couc$e mince. A c$aque ta%e de la %uri7ication: l+e-trait to-ique obtenu e#t ,a%or %ui# %e#. *4%4> ? PRECIPITATION PAR LANP &+e-trait brut de ,olume ' ml e#t #oumi# ; un traitement %ar (:' ml d+ANP ; O() #elon la mt$ode dcrite au W O.O.O.D:C7. % K. &+e-c*# de %lomb e#t limin %ar (:D ml de %$o#%$ate di#odique ; D(). In e-trait de couleur @aune %aille: lim%ide: e#t obtenu. Cette tec$nique %ermet d+liminer %lu#ieur# contaminant# d+a%r*# l+anal1#e %ar CCM: ce%endant elle ne %eut %a# >tre maintenue dan# le %rotocole de %uri7ication d7initi7 car l+e-trait obtenu n+e#t %a# to-ique tant donn que la to-ine e#t %rci%ite %ar l+ANP.

O(

*4%4% ? FILTRATION SUR CHARBON ACTIF &+e-trait brut A'ml) e#t 7iltr #ur une couc$e de c$arbon acti7 en a%%liquant la mt$ode dcrite au %ara"ra%$e O.O.O.O. C7. % E. In e-trait lim%ide de couleur @aune %aille e#t obtenu. Son in@ection %ro,oque de# #1m%tPme# d+into-ication #an# entra=ner la mort de# #ouri#. &e# %rinci%e# to-ique# #ont donc retenu# en "rande %artie #ur le c$arbon acti7. Par con#quent: nou# n+a,on# %a# ado%t ce %rocd %our la %uri7ication. *4%4* ? PRECIPITATION PAR LETHANOL &) % En a%%liquant la tec$nique de %rci%itation dcrite au %ara"ra%$e O.O.O.J:C7. % E ; l+e-trait brut de ,olume D(ml: nou# a,on# obtenu un #urna"eant lim%ide de couleur brun noir qui e#t to-ique #ur #ouri#. En outre: un e-trait non to-ique de couleur @aune ,erd<tre a t obtenu %ar la re%ri#e du culot dan# de l+eau di#tille. Cette tec$nique n+a %a# t utili#e dan# le %rotocole de %uri7ication car la to-icit du #urna"eant e#t in7rieure ; celle de# autre# e-trait# Atem%# de #ur,ie %lu# lon"). Par con#quent: une %artie de la to-icit a t limine %ar %rci%itation %ar l+t$anol '(%. *4%4@ ? DIAL1SE &+e-trait brut A'( ml) e#t dial1# contre de l+eau di#tille A,oir mt$ode %ara"ra%$e O.O.O.L:C7. % E). &e liquide re#t ; l+intrieur du boudin a%%el adial1#at a une couleur brun noir. Son ,olume e#t de O((ml. Ce ,olume e#t concentr ; '(ml %ar ,a%oration. &e liquide ; l+e-trieur du boudin a%%el dial1#at ou liquide de contre dial1#e: de couleur @aune et de ,olume total "al ; '(((ml: e#t concentr @u#qu+; un ,olume 7inal de '(ml. &e# te#t# #ur #ouri# montrent que le# %rinci%e# to-ique# #e trou,ent dan# le dial1#at. Ce dernier de couleur @aune oran": d+a#%ect lim%ide: con#titue l+e- r!( E>. &a %remi*re ta%e de %uri7ication que nou# a,on# ado%te e#t la dial1#e car elle %ermet d+liminer le# "ro##e# molcule# de %oid# molculaire #u%rieur ; D' ((( !a A#euil de la membrane) et d+obtenir un e-trait clari7i. *4%4& ? TRAITEMENT PAR LA CHALEUR &+e-trait ED de ,olume '( ml e#t c$au77 ; EH C %endant D' min. &e traitement t$ermique #e %our#uit #elon la mt$ode dcrite au %ara"ra%$e O.O.O.':C7. % D(. &e #urna"eant obtenu: de couleur marron clair: d+a#%ect lim%ide et de ,olume "al ; '(ml: #+a,*re to-ique #ur #ouri#. Il con#titue l+e- r!( E%. *4%4A ? FRACTIONNEMENT PAR LE N ? BUTANOL '(ml d+e-trait EO #ont mlan"# a,ec '(ml de n0butanol. Cinq 7ractionnement# #ont
OD

e77ectu# #elon la mt$ode dcrite au %ara"ra%$e O.O.O.H:C7. % DD. &a %$a#e or"anique de couleur @aune %aille e#t non to-ique tandi# que la %$a#e aqueu#e de couleur brune e#t to-ique #ur #ouri# et con#titue l+e- r!( E*. &e# di77rente# ta%e# de la %uri7ication de# %rinci%e# to-ique# #ont r#ume# #ur la 7i"ure J. POUDRE DE FEUILLES SECHES &)9 E-traction aqueu#e ; 7roid

EXTRAIT BRUT (EB6 @8>9 D(!$<se ."n re +e $e!# +(s ($$e

DIAL1SAT FEXTRAIT E> %8>9

Tr!( e,en p!r $! .=!$e#r pen+!n

>& ,(n 7 GA HC

SURNA5EANT F EXTRAIT E% >8%9

Fr!. ("nne,en p!r $e n-2# !n"$ PHASE AQUEUSE F EXTRAIT E* )8: 9 "igure E : Schma rcapitulatif du procd d#extraction et de purification des principes toxiques de ,lax lanceolata. Les chiffres indiquent le poids des rsidus d#vaporation ) sec des extraits.

OO

*4%4: ? RENDEMENT A %artir de '(" de 7euille# de ,lax lanceolata, (:F" de r#idu #ec de EJ e#t obtenu. &e rendement en to-ine calcul %ar ra%%ort au matriel de d%art e#t donc ,alu ; D:L % et le rendement de %uri7ication calcul ; %artir de l+e-trait brut e#t de l+ordre de DF:(F%. *4%4E ? DE5RE DHOMO5ENEITE DES PRODUITS &e c$romato"ramme de la figure F montre l+,olution de l+$omo"nit de# di77rent# e-trait# obtenu# au cour# de la %uri7ication. A%r*# a,oir t ob#er,# ; la lumi*re ultra,iolette de lon"ueur d+onde YO'L nm: le# c$romato"ramme# #ont r,l# %ar le racti7 ; la ,anilline #ul7urique A,oir W.O.O.L.D:C7. % DD). &+e-trait brut com%orte #e%t bande# ma@eure# r,lable# tandi# que l+e-trait EJ n+en %r#ente que troi#. &a %uri7ication e#t donc im%ortante car quatre bande# ma@eure# ont t limine#.

> @

"igure F : .. des diffrents extraits toxiques de ,lax lanceolata ? : 'xtrait brut G @ : 'xtrait '? =dial&se> G E : 'xtrait '@ =traitement par la chaleur> G F : 'xtrait 'E =traitement par le n5butanol>.

OJ

*4* ? PROPRIETES PH1SICO ? CHIMIQUES &e com%ortement de# #ub#tance# to-ique# de# 7euille# de ,lax lanceolata au cour# de la %uri7ication: a %ermi# de dterminer certaine# de leur# %ro%rit# %$1#ico0c$imique#: &e r#idu de l+e-trait EJ #e %r#ente comme une %oudre 7ine de couleur @aune brun<tre G &+e-trait a une odeur %iquante et un "oZt l"*rement amer G &e# %rinci%e# to-ique# #ont #oluble# dan# l+eau. Ine %artie de# %rinci%e# to-ique# e#t #oluble dan# l+t$anol G Il# #ont in#oluble# dan# le butanol G Il# #ont t$ermo#table# car il# r#i#tent ; de# tem%rature# le,e# G &e# o%ration# de con"lation et de dcon"lation r%te# ne c$an"ent %a# leur acti,it to-ique G Il# #ont %rci%itable# %ar l+actate neutre de %lomb G Ce #ont de %roduit# de 7aible %oid# molculaire car il# tra,er#ent la membrane ; dial1#e de #euil D' (((!a G Il# #ont ad#orb# %ar le c$arbon acti7. *4@ ? NATURE CHIMIQUE &e# r#ultat# du cribla"e %$1toc$imique de l+e-trait brut et de l+e-trait E J #ont montr# dan# le tableau @. 3ableau @ : .riblage ph&tochimique de l#extrait brut et de l#extrait 'E. F!,($$e .=(,(;#e Tes s E- r!( 2r# E- r!( E*

MACER A&CA&/[!ES UA3NER !RA3EN!/R.. .&A8/N/[!ES UI&STATER &EIC/ANT4/CCANES BATE T SMIT4 3latine D% TANINS ET 3latine #ale P/&CP4EN/&S C$lorure 7errique ANTRA6IIN/NES B/RNTR\3ER SAP/NINES Indice de Mou##e STER/[!ES ET &IEBERMANN0 TRITERPENES BIRC4AR! STER/&S INSATIRES SA&5/US5I !ES/]C/SES 5E&&ER05I&IANI IRI!/[!ES 4Cl concentr a c$aud
V : te#t %o#iti7 . 0 : te#t n"ati7

V V V 0 0 0 0 0 0 V V 0 V 0

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 V 0 V 0

OL

Ce tableau montre que l+e-trait brut et l+e-trait EJ contiennent de# d#o-1o#e#: de# #troBde# et de# triter%*ne#. !+autre %art: l+e-trait brut ra"it %o#iti,ement au- te#t# de# alcaloBde# et de# #a%onine#. *4& ? ETUDE COMPARATIVE &e# to-icit# #ur #ouri# de# e-trait# brut# obtenu# ; %artir de# 7euille# rcolte# au moi# d+A,ril et au moi# de Se%tembre ne montrent aucune di77rence #i"ni7icati,e.

@ ? DISCUSSIONS ET CONCLUSIONS

&e# r#ultat# de l+tude c$imique ont %ermi# de mettre en ,idence la to-icit de# 7euille# de ,lax lanceolata. !e# te#t# de to-icit #ur de# c$antillon# de 7euille# rcolte# ; deu- moment# di77rent# de l+anne ne montrent aucune di77rence #i"ni7icati,e. Mai# de# tude# #u%%lmentaire# #ur la ,ariation de la teneur en %rinci%e# to-ique# en 7onction du c1cle ,"tati7 de la %lante doi,ent >tre entre%ri#e# ultrieurement. A %artir de l+e-trait brut: un %rocd de %uri7ication #im%le com%ortant une dial1#e: un traitement %ar la c$aleur et un 7ractionnement %ar le n0butanol: a %ermi# d+obtenir un e-trait to-ique #u77i#amment %uri7i. &e rendement en to-ine e#t de D:L) et le rendement de %uri7ication de DF:(F). &e# tec$nique# que nou# n+a,on# %a# retenue# dan# le %rocd de %uri7ication a%%ortent de# in7ormation# utile# #ur le# %ro%rit# %$1#ico0c$imique# de# %rinci%e# to-ique#. Ain#i : &e traitement %ar l+ANP montre que le# %rinci%e# to-ique# #ont de# molcule# %rci%itable# %ar le# mtau- lourd#. Il %ourrait #+a"ir d+acide# or"anique#. !+a%r*# le# r#ultat# de la 7iltration #ur c$arbon acti7: une ou de# %artie# de %rinci%e# to-ique# #ont retenue# %ar ce c$arbon: donc ce# %rinci%e# to-ique# ont %robablement de# #tructure# aromatique#.

O'

Ine %artie de# %rinci%e# to-ique# e#t %rci%ite %ar l+t$anol '( ). !+a%r*# le# r#ultat# du cribla"e %$1toc$imique: l+e-trait brut et l+e-trait EJ

contiennent de# d#o-1o#e#: de# #troBde# et de# triter%*ne#. !e %lu#: l+e-trait brut ra"it %o#iti,ement au- te#t# de# alcaloBde# et de# #a%onine#. &e# #ub#tance# de nature alcaloBdique mi#e# en ,idence dan# l+e-trait brut ont t limine# lor# de la %uri7ication. &e# %ro%rit# %$1#ico0c$imique# et le# r#ultat# du cribla"e %$1toc$imique %ortent ; %en#er que le# %rinci%e# to-ique# %ourraient >tre de# = r"s(+es a,ec une "nine de nature s r"B+(;#e ou r( erpDn(;#e4

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C/NC&ISI/N 3ENERA&E ET PERSPECTI8ES En !on!lusion: le# r#ultat# %rliminaire# que nou# a,on# obtenu# dan# ce mmoire : .ourni##ent le# %remi*re# in7ormation# #ur le# %ro%rit# %$1#ico0c$imique#: la nature c$imique et le# %ro%rit# biolo"ique# de# %rinci%e# to-ique# %r#ent# dan# le# 7euille# de ,lax lanceolata: Con7irment e-%rimentalement la to-icit que de# rumeur# attribuent ; la %lante: Con#tituent de# r7rence# #ur le# %o##ibilit# d+orienter le# rec$erc$e# 7uture# #ur la %lante: Re%r#entent %our notre laboratoire une %remi*re a%%roc$e dan# l+tude de# /&ACACEAE to-ique#. 8ans l:a*enir; nous en*isa5eons : !+amliorer le %rocd d+e-traction a7in d+obtenir le# %rinci%e# to-ique# de# 7euille# de la %lante ; l+tat %ur: !e %our#ui,re l+tude de leur# %ro%rit# %$1#ico0c$imique# et la dtermination de leur nature c$imique: !+tudier la %roduction en to-ine# de la %lante au cour# de di77rente# %riode# de l+anne: !+tudier et de com%arer la to-icit de# di77rent# or"ane# de la %lante: !+a%%ro7ondir le# %ro%rit# biolo"ique# d@; mi#e# en ,idence: d+en e-%lorer d+autre#: et de rec$erc$er leur# %o##ibilit# d+a%%lication: !+lucider le# mcani#me# d+action de# %rinci%e# to-ique#. !e %ro#%ecter le# ,entuelle# %ro%rit# %$armacolo"ique# de# alcaloBde# %r#ent# dan# l+e-trait brut.

OF

BIBLIO5RAPHIE >4 AN!RIANTS/A RANA.IMA&A&A 4. Contribution ; la %uri7ication et ; la caractri#ation d+un %rinci%e antimicrobien d+une l"umineu#e Albi0ia lebbec;. ^Mmoire de !EA : Bioc$imie_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: DEKJ. %4 ARIS/A A. Etude c$imique et biolo"ique d+e-trait# to-ique# de 7ruit# de Albi0ia boivini AMimo#oBdae: .abaceae). ^Mmoire de !EA :Bioc$imie_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: O((D. *4 B/ITEAI P. Prci# de mati*re# mdicale# mal"ac$e#. Antananari,o : la &ibrairie de Mada"a#car: DEFE G EF%. @4 B/ITEAI P.: A&&/R3E B/ITEAI &. Plante# mdicinale# de Mada"a#car. Pari# ACCT et dition 5art$ala: DEEJ G DJ'%. &4 B/NNET 4.: NE8/T A. Tra,au- %ratique# de bactriolo"ie: L*me d. Pari# : Ma##on et Cie diteur#: DE'' G OD(%. A4 B/ST R P$armaco%e mal"ac$e. Mem. In#t. Sci. M/car. Pari# : &A4IRE: DEHD G D'E0OJL. :4 B/IR!/N M.&.: PI&ET C.: T/MA B. et MARC4A& N. Tec$nique# bactriolo"ique#. !oin diteur: DEFJG JOJ%. E4 B/C!. .undamental# o7 immunolo"1 . L*me d .Ne` Cor2 : Uile1 and #on#: DEHH. G4 BRINET/N M. Elment# de %$1toc$imie et de %$armaco"no#ie. Pari# : Tec$nique et documentation &a,oi#ier: DEEJ G 'K'%. >)4 BRINET/N M. P$armaco"no#ie: %$1toc$imie: %lante# mdicinale#. Pari# : Tec$nique et documentation &a,oi#ier: DEEJ GKEJ%. >>4 CAPIR/N. Mada"a#car Tree .lora . DO Mont$ Pro"re## Re%ort. DE'F G J(E0JDO. >%4 CAPIR/N. Introduction ; l+tude de la 7lore 7ore#ti*re de Mada"a#car. Antananari,o G DE'F G KL0K'. >*4 CA8AC/ A.: 5ERAI!REN M. 'E*me .AMI&&E0/lacace#. A.lore de Mada"a#car et
OK

de# Comore#). Pari# : Mu#eum National d+4i#toire Naturelle: DE'' G LO%. >@4 C/R!E&& 3.A. Introduction to al2aloBd#: a bio"enetic a%%roac$. Ne` Cor2 : Mo$n Uile1: DEKD. >&4 !EBRAC M.: MAC6IEMIN 4.: RANA.IN!RAMBA/ R. Contribution ; l+in,entaire de# %lante# mdicinale# de Mada"a#car. Antananari,o : /RST/M: DEFD . >A4 !E&ARIE M.: &AIM/NIER R. Pat$olo"ie #%ciale. Pari# : Edition mdicale .lammarion: DEHE G D(JK%. AAnatomie %at$olo"ique: TO). >:4 !IEB/&! M.: CAMI&&ARIM P.: RECNES M.: CA&&AR! P. Anatomie Pat$olo"ie "nrale: O*me d. Pari# : Tec$nique et documentation &a,oi#ier: DEED G JJD%. >E4 !I8A& M.: S/ISSC C. M. Antibiot$ra%ie: L*me d. Pari# : Ma##on: DEE( G DKK%. >G4 .ERR/N A. Bactriolo"ie mdicale: D'*me d. Pari# : C et R: DEEL G LFO%. %)4 ./N3 4.4.S.: TIN. U.A.M. and .ARNSU/RT4 N.R. P$1toc$emical #creenin". Re,ie`. C$ica"o : Ini,er#t1 o7 Illinoi#: DEFF. %>4 4ARINMAT/8/ 4. Etude c$imique et biolo"ique d+e-trait# to-ique# de 7euille# de *entatropis madagascariensis AA#cl%iadace#). ^Mmoire de !EA : Bioc$imie_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: O((D. %%4 4E&&ER R.: ESNAI&T T.R. : &ANCE C. P$1#iolo"ie ,"tale. Pari# G Milan G Barcelone : !,elo%%ement: DE'' G O. %*4 4EMIN3UAC R.U.: 5ARC4ESC M. M. C$emi#tr1 and #i"ni7icance o7 conden#ed tanin#. Ne` Cor2 : Plenum Pre##: DEKE. %@4 4/I&! R. Tec$nique# d+$i#to%at$olo"ie et de c1to%at$olo"ie. Pari# : Edition Maloine: DEKL. %&4 MEANN/!A 8. Etude c$imique: biolo"ique et to-icolo"ique du %rinci%e con,ul#i,ant de# Connarace# de Mada"a#car. ^T$*#e de !octorat d+Etat : Science#_. Stra#bour" : Ini,er#it &oui# Pa#teur de Stra#bour": DEKH.

OE

%A4 5AM/IN P. A%%areil# et Mt$ode# en bioc$imie. Pari# .lammarion: DEFF G OJF%. %:4 5AM/IN P. A%%areil# et Mt$ode# en bioc$imie. J*me d. Pari# : .lammarion: DEED G JHJ%. %E4 &E MIN/R &.: RIC4AR! C. Mt$ode# de laboratoire %our l+identi7ication de# entrobactrie#. Pari# : In#titut Pa#teur: DEEJ. %G4 &E MIN/R &.: 8ER/N M. Bactriolo"ie mdicale: O*me d. Pari# : Mdecine 0Science# .lammarion: DEEE. *)4 MABBER&EC !.M. T$e %lant boo2 . D*re0H*me d. Cambrid"e : Cambrid"e Ini,er#it1 Pre##: DEKF G K'K%. *>4 MA4INIER 3.: 4AM/N M. Mt$ode# de #%aration: O*me d. Pari# : Ma##on: DEE( G OHO%. AAbr" de c$imie anal1tique :TO) *%4 MARC4A& N.: B/IR!/N M. &e# milieu- de culture %our l+i#olement et l+identi7ication bioc$imique de# bactrie#. Pari# : !oin diteur: DEKF. **4 MIE&&ER M.4.: 4INT/N M. Milieu de culture . Proc. Soc. E-%. Biol. Med. DELD GLK: JJ(0JJJ. *@4 N/4ARA T. Anal1#i# o7 #teroid and anot$er biolo"icall1 #i"ni7icant #teroid# . San !ie"o : Ne#. U.!. et Pari#$ E.M. : DEKE G DDE0DJO. *&4 PERNET R.: MECER 3. P$armaco%e# de Mada"a#car. Publication de l+In#titut de Rec$erc$e Scienti7ique de Mada"a#car : DE'F G KH%. *A4 RA4ARIS/A N. Contribution ; l+tude c$imique et biolo"ique# de# %rinci%e# to-ique# d+Albi0ia bernieri AMimo#oBdae0.abaceae). ^Mmoire de !EA : Bioc$imie_. Antananari,o: DEEE. *:4 RA4ERINIAINA C. Contribution ; l+tude c$imique et biolo"ique de# %rinci%e# to-ique# d+Albi0ia boivini AMimo#oBdae0.abaceae). ^Mmoire de !EA : Bioc$imie_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o :DEEE.

J(

*E4 RAMA/NARI8/NC M. Contribution ; l+tude de# %rinci%e# to-ique# de nature %rotique de l+Aleurites fordii AEu%$orbiaceae). ^Mmoire de !EA : Bioc$imie_ Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: DEKJ. *G4 RAMEMIARIM/E&IS/A C. Contribution ; l+tude c$imique et biolo"ique de# %rinci%e# acti7# d+Albi0ia pol&ph&lla AMimo#oBdae: .abaceae). ^Mmoire de !EA : Bioc$imie_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: DEEH. @)4 RAMEMIARIM/E&IS/A C. I#olement: caractri#ation c$imique et biolo"ique du %rinci%e to-ique de Albi0ia odorata AMimo#oBdae: .abaceae). ^T$*#e de !octorat de J*me c1cle : Bioc$imie_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: O(((. @>4 RA5/T/N!RAS/A N. Etude c$imique et biolo"ique de# %rinci%e# to-ique# de# 7euille# d+Albi0ia pol&ph&lla AMimo#oBdae: .abaceae). ^Mmoire de !EA : Bioc$imie_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: O(((. @%4 RA5/T/ T RAN/R/MA&A&A !. Puri7ication et caractri#ation %artielle du %rinci%e to-ique de /ourea orientalis AConnaraceae). ^Mmoire de !EA : Bioc$imie_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: DEKL. @*4 RA5/T/ T RAN/R/MA&A&A !. Puri7ication et tude de# %ro%rit# %$1#ico0 c$imique# et biolo"ique# de# %rinci%e# to-ique# de 3achiadenus longifloris A3entianaceae). ^T$*#e de doctorat de J*me c1cle : Science#_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: DEKE. @@4 RA5/T/N!RANANA5A &. Contribution ; l+tude c$imique et biolo"ique de# %rinci%e# to-ique# de <erosic&os dangu&i ACucurbitaceae). ^Mmoire de !EA :Bioc$imie_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: DEEE. @&4 RA&IS/N C. I#olement et tude bioc$imique: to-icolo"ique et biolo"ique de la mon"uine: %rinci%e to-ique du .roton mongue AEu%$orbiaceae). ^T$*#e de !octorat d+Etat : EES Science#_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: DEKF. @A4 RAMA4A.A&C R. Etude c$imique et biolo"ique d+e-trait# to-ique# de rameau- de %enonia scoparia AAmarant$ace#). ^Mmoire de !EA : Bioc$imie_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: O((D . @:4 RAMAM/NMIS/A !. Contribution ; l+tude du %rinci%e to-ique de# "raine# d+Albi0ia
JD

species AMimo#oBdae0.abaceae). ^Mmoire de !EA : Bioc$imie_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: DEEK. @E4 RAN!ERAT4 5. C$romato"ra%$ie #ur couc$e# mince#. Pari# : dition 3AIT4IER8I&&ARS: DEHL G OEH%. @G4 RAN!RIAMI4ARIS/A .. Etude c$imique et biolo"ique d+e-trait# to-ique# de 7euille# de <erosic&os perrieri ACururbitaceae). ^Mmoire de !EA : Bioc$imie_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: O(((. &)4 RAN!RIANARI8/ 4. Puri7ication et caractri#ation %artielle de# %rinci%e# acti7# d+Albi0ia arenicola AMimo#oBdae0.abaceae). ^Mmoire de !EA : Bioc$imie_. Antananari,o: DEEH. &>4 RATIARI8E&/ 8. Etude c$imique et biolo"ique d+e-trait# to-ique# de Barringtonia butonica A&ec1t$1daceae). ^Mmoire de !EA : Bioc$imie_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: O(((. &%4 RANANAMPARANC &. Puri7ication et tude de# %ro%rit# %$1#ico0c$imique# et biolo"ique# de la bola77inine: to-ine %rotique e-traite de Boletus affinis *ec; ABoletaceae). ^T$*#e de !octorat d+Etat G EES #cience#_. Antananari,o : Ini,er#it d+Antananari,o: DEKF. &*4 REE! &.: MIENC4 4.A. Sim%le met$od o7 e#timatin" 7i7t1 %er cent %oint#. Am. M. 41". DEJK: OF GOEJ%. &@4 8ERNE M. Prci# d+$i#tolo"ie: '*me d. Pari# : Ma##on et Cie diteur#: DEH( G HK'%.

JO

RESUME $ne activit toxique a t mise en vidence dans les extraits de feuilles de ,lax lanceolata, une ,LA.A.'A' endmique de adagascar.

$ne prparation partiellement purifie a t obtenue ) partir d#un extrait aqueux de feuilles ) l#aide d#un procd de purification simple comportant une dial&se, un traitement par la chaleur et un fractionnement par le n5butanol. Les principes actifs sont thermostables, solubles dans l#eau et l#thanol, mais insolubles dans le butanol. 7ls ont un poids molculaire infrieur ) ?B HHH !a et sont prcipitables par l#actate neutre de plomb. L#extrait ragit positivement aux tests caractristiques des dsox&oses, des stroIdes et des triterpnes, ce qui suggre que les principes actifs pourraient Jtre des htrosides avec une gnine de nature stroIdique etKou triterpnique. L#extrait provoque che0 la souris des s&mptDmes d#intoxication accusant une atteinte du s&stme nerveux =dmarche titubante, convulsions> et des altrations tissulaires caractrises par des dilatations capillaires et des nappes hmorragiques au niveau du cerveau, du c:ur, du foie, de l#estomac et du poumon. La !LBH, estime par deux mthodes se situe entre ?LB,@ mgK;g et @HH,@ mgK;g de souris. L#extrait brut provoque la l&se des hmaties du mouton ) des concentrations suprieures ou gales ) H,B mgKml. L#extrait brut est galement toxique pour les tJtards de grenouille =.LBH M H,HE@mgKml> et les alevins de carpe =.LBH M H,H@NmgKml>. 'nfin, l#extrait inhibe la germination de graines de ri0, de haricot, de persil chinois, de la carotte, de basilic, d#oignon rouge et de laitue et la croissance du bourgeon axillaire des 9eunes plantules de petit pois. ots cls : OLACACEAE; Olax lan!eolata; prin!ipes toxi"ues; #trosides; p#/totoxine; l/se !ellulaire; i!#t/otoxi"ue; 5ermination des 5raines

JJ

ANNEXE >
DESCRIPTION BOTANIQUE

Des.r(p ("n 2" !n(;#e +# 9enre Olax &e "enre ,lax a%%artient ; la 7amille de# /&ACACEAE ACA8AC/ et 5ERAI!REN : DE'') qui %r#ente '( e#%*ce# di#tribue# dan# le# r"ion# c$aude# de l+A7rique: de l+A#ie et de l+Au#tralie. 4uit e#%*ce# dont #e%t endmique# et une introduite: #ont %r#ente# ; Mada"a#car. !+a%r*# CA8AC/ et 5ERAI!REN ADE''): le "enre ,lax %o##*de le# caractri#tique# #ui,ante# : Ce #ont de# arbre# ou arbu#te#: %ar7oi# "rim%ant# comme de# liane#: ; ramille# an"uleu#e# #ou,ent en 7orme de Qi"Qa": &e# 7euille# #ont alterne#: "nralement %tiole#: di#tique#: &e# in7lore#cence# #ont de t1%e a-illaire: #olitaire# ou di#%o#e# en "ra%%e#: le# 7leur# #ont tri0 ; $e-am*re#: &e# 7ruit# #ont de# dru%e# c$arnue# ind$i#cente# ne contenant qu+une #eule "raine albumine Des.r(p ("n 2" !n(;#e +e $espD.e Olax lan!eolata Cette e#%*ce %eut >tre dcrite de la mani*re #ui,ante : C+e#t un arbre de %etite ou "rande taille attei"nant H ; K m*tre# de $auteur et O(cm de diam*tre: &e# 7euille# #ont alterne#: #im%le# ou lancole#. &e limbe me#ure 'cm de lon" et Dcm de lar"e en mo1enne. &e# 7euille# #ont aile# ain#i que l+corce: &+corce de# ti"e# e#t colore en ,ert a,ec de# ra1ure# blanc$e#: &e# 7leur# @aun<tre# #ont #olitaire# ou di#%o#e# en "ra%%e: &e# 7ruit# #ont dru%ac# ind$i#cent#.

ANNEXE %
COMPOSITION DES REACTIFS DE DETECTION DES ALCALOIDES Racti7 de MACER : c$lorure mercurique ...................DJ:' " Iodure de %ota##ium....................H( " Eau di#tille........................q#% D(( ml Racti7 de UA3NER : Iodure de %ota##ium .....................O " Iode...............................................D:OF " Eau di#tille........................q#% D(( ml Racti7 de !RA3EN!/R.. : S"$# ("n A Silicate de Bi#mut$......................D:F " Acide tartrique concentr...........O( " Eau di#tille...............................J( ml

S"$# ("n B Iodure de %ota##ium...................D( " Eau di#tille................................L( ml

&e# deu- #olution# #ont mlan"e# ,olume ; ,olume %ui# le mlan"e e#t a@out de D(" d+acide tartrique et d+eau di#tille Aq#% D((ml).

ANNEXE4* LES MILIEUX DE CULTURE (MUELLER e HINTON 8 >G@> JMARCHAL e BOURDON 8 >GE:6 M($(e#- # ($(ss p"#r $(s"$e,en e $! p#r(0(.! ("n +es s"#.=es ,(.r"2(ennes Le 2"#($$"n n# r( (0 C+e#t un milieu liquide utili# %our la croi##ance de# bactrie# #an# e-i"ence %articuli*re. Ce milieu #ert ; relancer la culture de# #ouc$e# microbienne#. Com%o#ition en "/l : Pe%tone de ,iande .................D( Citrate de ,iande .....................' P$o#%$ate di#odique................O C$lorure di#odique..................J E-trait de le,ure......................K Eau di#tille ...............q#% D((( ml %4 ...........................................F:L L! 9$"se n# r( ('e C+e#t un milieu #olide utili# %our i#oler: contrPler la %uret et con#er,er le# colonie# microbienne#. Com%o#ition en "/l : E-trait de bSu7 ......................J( Pe%tone .....................................' 3lo#e......................................D' Eau di#tille...................q#% D((( ml %4 .............................................H:K M($(e# +e MUELLER- HINTON &e milieu de MIE&&ER04INT/N e#t une "lo#e de tonicit normale utili#e %our la culture de "erme# et le# te#t# d+antibio"ramme. Com%o#ition en "/l :

E-trait de ,iande......................................J Pe%tone....................................................'

Pe%tone tr1%#ique de ca#ine.................D(

C$lorure de #odium.................................' !e-tro#e A"luco#e)..............................a.O

A"ar ......................................................D(
Eau di#tille ...............................q#% D((( ml %4 ...........................................................F:L M($(e#- +(+en (0(.! ("n +es 2!. r(es 5RAM n9! (0 (Le MINOR e RICHARD 8 >GG*64 M($(e# +e SIMMONS / C( r! e +e S"+(#, C+e#t un milieu #olide qui %ermet de mettre en ,idence le# bactrie# 3RAM n"ati7 en utili#ant le citrate de #odium comme #eule #ource de carbone et d+ner"ie. Son indicateur de %4 e#t le bleu de bromot$1mol. Com%o#ition en "/l : Citrate de Sodium ..................................D C$lorure de Sodium................................' Sul7ate de Ma"n#ium ............................(:O P$o#%$ate monoammoniaque..................D P$o#%$ate di%ota##ique............................D

Bleu de Bromot$1mol..............................(:(K
A"ar .......................................................D' Eau di#tille ................................q#% D((( ml %4..............................................................F:D M($(e# M!nn( "$ - M"2($( - N( r! e Ce milieu e#t utili# %our la mi#e en ,idence de la 7ermentation du mannitol: la mobilit de# bactrie# et la rduction du nitrate en nitrite A&e MIN/R et 8ER/N : DEEE). &e# Entrobactrie#: le# 8ibrionac#: le# Proteu# et le# bacille# #ont identi7i# "r<ce ; ce milieu. Son indicateur de %4 e#t le rou"e de %$nol.

Com%o#ition en "/l : 41drol1#at tr1%#ique de ca#ine ...........D( Nitrate de Potassium................................1 Mannitol .................................................F:' Rou"e de %$nol ; D% ...........................(:(L A"ar ........................................................J:L Eau distille ...............................qsp 1000 ml %4 ...........................................................F:H M($(e# HAKNA ? 3LI5LER / L!. "se 9$#."se H%S C+e#t un milieu #olide %ermettant d+ob#er,er la 7ermentation du "luco#e: la 7ermentation du lacto#e et la %roduction de "aQ et de #ul7ure d+$1dro"*ne %ar la bactrie. Son indicateur de %4 e#t le rou"e de %$nol. Com%o#ition en "/l : Pe%tone ............................................aD' E-trait de ,iande de bSu7 ..............a...J E-trait de le,ure ...................................J Pe%tone %e%#ique de ,iande..................' C$lorure de #odium...............................' Sul7ate 7erreu-.......................................(:O T$io#ul7ate de #odium...........................(:J &acto#e................................................D( 3luco#e ................................................D Rou"e de %$nol...............................a(:(OL

Agar.................................................
Eau di#tille.................................q#% D((( ml %4 .........................................................F:' M($(e# L<s(ne ? Fer

C+e#t un milieu #olide ric$e en l1#ine utili# %our la rec$erc$e de la %roduction de #ul7ure d+$1dro"*ne et la 7ermentation du "luco#e. Son indicateur de %4 e#t le %our%re de bromocr#ol. Com%o#ition en "/l : Pe%tone bactriolo"ique ..........................' E-trait de le,ure ......................................J 3luco#e ....................................................D &0 l1#ine .................................................D(

!itrate "e #er a$$oniacal........................%&'

T$io#ul7ate de #odium..............................(:(L Pour%re de bromocr#ol...........................(:(O

3lo#e.....................................................DL:' Eau di#tille..................................q#% D((( ml

%4..............................................................H:F M($(e# Ure ? (n+"$e C+e#t un milieu liquide qui %ermet la mi#e en ,idence de l+ura#e et de la tr1%to%$ane d#amina#e ain#i que la %roduction d+indole. Son indicateur de %4 e#t le rou"e de %$nol. Com%o#ition : & T Tr1%to%$ane.......................................(:J" P$o#%$ate mono%ota##ique ......................(:D" P$o#%$ate di%ota##ique.............................(:D" C$lorure de #odium...................................(:'" Ire...........................................................O" Alcool ; E' ..............................................Dml Rou"e de %$nol D% .................................(:O'ml

Ea( "istill)e ....................................*s+ %%$l

TAB&E !ES MATIERES REMERCIEMENTS LLLLLLLLLLLLLLLLLLLL LLLLL444 ABRE8IATI/NS aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaa... 5LOSSAIRE LLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLL LLLL444 RESIME aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaaa. INTR/!ICTI/N 3ENERA&E aaaaaaaaaaaaaaaa aaaaa ETUDE CHIMIQUE DES PRINCIPES TOXIQUES D 0 INTR/!ICTI/N aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaa. O 0 MATERIE&S ET MET4/!ES aaaaaaaaaaaaaaa aaaaa O.D 0 Matriel# aaaaaaaaaaaaaaa..aaaaaaaa aaaa. O.D.D 0 &a %lante aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaa.. O.D.D.D 0 Cla##i7ication aaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaa. O.D.D.O 0 !e#cri%tion botanique aaaaaaaaaaaaaaa aaaa.... O.D.D.J 0 !i#tribution "o"ra%$ique et lieu de rcolte aaaaaaa aaaa.. O.D.D.L 0 /r"ane# utili## aaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaa.. O.D.D.' 0 Pr%aration et con#er,ation du matriel ,"tal aaaaa aaaa.... O.D.O 0 &e# %roduit# c$imique# aaaaaaaaaaaa..aaaa aaaa. O.O 0 Mt$ode# aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa aaaa.. O.O.D 0 Mt$ode# d+e-traction aaaaaaaaaaaaaaaa aaaaa. O.O.D.D 0 !%i"mentation du matriel ,"tal aaaaaaaaaa aaaa.. O.O.D.O 0 E-traction ; 7roid aaaaaaaaaaaa..aaaaa aaaa. O.O.D.J 0 E-traction ; c$aud aaaaaaaaaaaaaaaaa L L L L L L L F F F F F F K K K K K K E E E E E E E E D( D( D( DD DD DD DD , ,ii ,iii iD