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MILIEUX EN BOÎTES DE
PÉTRI PRÊTS A L'EMPLOI
APPLICATION
La gélose BD Mueller Hinton Fastidious Agar (MH-F) est destinée aux antibiogrammes des
isolats cliniques d'organismes exigeants, conformément à la norme de l'European Committee on
Antimicrobial Susceptibility Testing (Comité européen sur les tests de sensibilité aux
antibiotiques, EUCAST).1 Ce milieu est constitué d'une gélose Mueller Hinton complétée de 5 %
de sang de cheval défibriné mécaniquement et de 20 mg/L ß-NAD (ß-nicotinamide adénine
dinucléotide). Les directives actuelles de l'EUCAST recommandent d'utiliser la MH-F pour les
microorganismes exigeants, notamment Streptococcus pneumoniae, Haemophilus ssp.,
Moraxella catarrhalis, Campylobacter jejuni et coli, les streptocoques du groupe viridans, les
streptocoques des groupes A, B, C et G, Listeria monocytogenes, Pasteurella multocida, ainsi
que Corynebacterium spp.2
REACTIFS
BD Mueller Hinton Fastidious Agar (MH-F)
Formule* par litre d'eau purifiée
Extrait de viande 2,0 g
Hydrolysat acide de caséine 17,5 g
Amidon 1,5 g
Gélose 17,0 g
Sang de cheval, défibriné mécaniquement 5%
ß-NAD 0,02 g
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pH 7,3 ± 0,1
*Ajustée et/ou complétée en fonction des critères de performance imposés.
PRECAUTIONS
À usage professionnel uniquement.
Ne pas utiliser de boîte de Pétri présentant des signes de contamination microbienne, de
décoloration, de dessiccation, de fissure ou d’autres signes de détérioration. Tout dessèchement
entraînant la contraction excessive du milieu risque de fausser les résultats du test de
sensibilité.
Consulter le document MODE D'EMPLOI GENERAL pour plus d'informations concernant les
protocoles de manipulation aseptique, les risques biologiques et l'élimination des produits
usagés.
METHODE
Matériaux fournis
BD Mueller Hinton Fastidious Agar. Milieu contrôlé microbiologiquement.
Matériaux non fournis
1. Sérum physiologique à 0,9 % (volumes de 5 mL) pour la préparation de l'inoculum
standard.
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2. Standard de comparaison du sulfate de baryum (0,5 mL de BaCl 2 [1,175 % p/v
BaCl 2 2H 2 O] 0,048 M à 99,5 mL de H 2 SO 4 [1 % v/v] 0,18 M [0,36 N]) ou
3. Un photomètre, pour ajuster la turbidité de l’inoculum en suspension afin qu’elle soit
équivalente au standard McFarland 0,5.
4. Il est possible d’utiliser le système d’ensemencement BD Prompt Inoculation System
(dispositif de préparation volumétrique de l’inoculum) à la place des éléments mentionnés
ci-dessus (1-3).10
5. Culture de contrôle - Streptococcus pneumoniae ATCC 49619, Haemophilus influenzae
ATCC 49766 et Campylobacter jejuni ATCC 33560/DSM 4688.
6. Des disques de papier imprégnés d’une quantité déterminée d’agents antimicrobiens, par
exemple les disques pour test de sensibilité BD Sensi-Disc.
7. Un dispositif de distribution de disques, tels que le distributeur auto-applicateur BD Sensi-
Disc Self-Tamping de 6 disques.
8. Une règle ou tout autre appareil permettant de mesurer les diamètres des zones en
millimètres.
9. Un incubateur, qui produit une atmosphère contenant 5 % de CO 2 , ou tout autre dispositif
permettant d’obtenir une atmosphère comparable enrichie en CO 2.
10. Milieux de culture auxiliaires, réactifs et matériel de laboratoire requis.
Types d'échantillons
Ce produit est destiné au test de sensibilité des cultures pures, isolées à partir d'échantillons
cliniques (voir également les sections CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCES ET
LIMITES DE LA PROCÉDURE).
Performances
Évaluation des performances internes
Les performances de la gélose BD Mueller Hinton Fastidious Agar ont été validées en
interne à l'aide des souches recommandées de contrôle de qualité (CQ)9 (voir le tableau 3) et
de 151 souches supplémentaires précédemment caractérisées (voir le tableau 4), notamment
Corynebacterium spp., des streptocoques du groupe viridans, Listeria monocytogenes,
Moraxella catarrhalis, des streptocoques des groupes A, B, C et G, Haemophilus ssp. et
Streptococcus pneumoniae.
Le tableau 3 récapitule les agents antimicrobiens validés pour les souches de CQ. Sauf
indication contraire, les diamètres des zones d'inhibition déterminées pour les agents
antimicrobiens validés sont comprises dans les plages de diamètres de zones d'inhibition
désignées par l'EUCAST.9 Pour H. influenzae ATCC 49766, l'association amoxicilline-acide
clavulanique présente des zones d'inhibition situées hors des plages recommandées par
l'EUCAST.9 Pour S. pneumoniae ATCC 49616, le céfépime, la cefpodoxime et le céfuroxime
présentent des zones d'inhibition situées hors des plages de diamètres recommandées par
l'EUCAST.9
Vancomycine 5
9
Indique des zones d'inhibition comprises dans les plages de l'EUCAST.
1
Les plages moyennes des zones d'inhibition se situent hors des plages de CQ recommandées
par l'EUCAST. Consulter les recommandations de CQ les plus récentes de l'EUCAST pour
9
effectuer les comparaisons. *L'organisme H. influenzae NCTC 8468 a été exclu des tableaux
de CQ en 2016 en raison de ses caractéristiques de croissance inhabituelles. H. influenzae
9
ATCC 49766 est plutôt recommandé pour le CQ de routine .
C. pseudodiphtheriticum
Viridans Streptococci
groupes A, B, C et G
Streptocoques des
L. monocytogenes
H. parainfluenzae
Contenu
C. afermentans
S. pneumoniae
C. amycolatum
Agent du
C. urealytikum
M. catarrhalis
H. aprophilus
H. influenzae
P. multocida
antimicrobien disque
C. jeikeium
C. striatum
C. xerosis
(µg)
C. jejuni
C. coli
19 6 1 19 41 22 7 9 4 3 3 2 1 2 1 6 4 3
Ampicilline 2
Amoxicilline-acide
2-1
clavulanique
Benzylpénicilline 1 unité
Céfaclor 30
Céfazoline 30
Céfépime 30
Céfixime 5
Céfotaxime 5
Cefpodoxime 10
Ceftaroline 5
Ceftibutène 30
Ceftriaxone 30
Céfuroxime 30
Chloramphénicol 30
Ciprofloxacine 5
Clindamycine 2
Doripénème 10
Ertapénème 10
Érythromycine 15
Gentamicine 10
Imipénem 10
Lévofloxacine 5
Linézolide 10
Méropenem 10
Minocycline 30
Moxifloxacine 5
Acide nalidixique 30
Nitrofurantoïne 100
Norfloxacine 10
Ofloxacine 5
Oxacilline 1
Rifampicine 5
Teicoplanine 30
Télithromycine 15
Tétracycline 30
Tigécycline 15
Trimétoprime 5
Trimétoprime- 1,.25-
Sulfaméthoxazole 23,.75
Vancomycine 5
Nb de Antibiotiques
Souche/Isolat
souches testés
Haemophilus influenzae 28 24
Streptococcus pneumoniae 32 27
Campylobacter jejuni 31 3
Streptococcus groups A, B, C and G 10 9
Viridans group streptococci 10 14
Moraxella catarrhalis 11 9
Pasteurella multocida 4 9
Pasteurella canis 1 9
Listeria monocytogenes 10 5
Campylobacter coli 10 3
Corynebacterium spp. 10 9
Haemophilus spp. 12 6
Nb total de souches 169
Limites de la procédure
Les tests de sensibilité réalisés par la méthode de diffusion sur disque sont destinés
uniquement aux cultures pures. Il est recommandé d’effectuer une coloration de Gram et une
identification présomptive de l’isolat avant de préparer le test de sensibilité.
Les contours de la zone d’inhibition sont parfois mal définis (des bords de zone flous ont été
observés avec S. pneumoniae) pour certaines associations d’agents antimicrobiens et de
microorganismes, ce qui peut conduire à une interprétation erronée. Consulter le guide de
lecture de l'EUCAST pour plus d'informations.11 Divers facteurs ont été identifiés comme
influençant les tests de sensibilité par diffusion sur disque. Ce sont notamment le milieu, la
profondeur de la gélose, l’activité des disques, la concentration et l’âge de l’inoculum, ainsi que
le pH.12
Toute concentration incorrecte de l’inoculum peut entraîner des résultats erronés. Les zones
d’inhibition risquent d’être trop petites si l’inoculum est trop concentré ou trop grandes et
difficiles à mesurer s’il ne l’est pas assez. Il est donc fortement conseillé de suivre les directives
de l'EUCAST relatives à la manipulation de l'inoculum et des boîtes de Pétri ensemencées afin
de limiter le risque de générer des résultats incorrects à la suite d'une erreur de manipulation.1
Une conservation inappropriée des disques antibiotiques peut entraîner une perte d’activité et
un résultat erroné de résistance. Toute contraction excessive du milieu due à de mauvaises
conditions de stockage risque de fausser les résultats du test de sensibilité.
La sensibilité in vitro d’un organisme à un agent antimicrobien donné ne signifie pas
obligatoirement que ce dernier sera également efficace in vivo. Pour obtenir des instructions
sur l’interprétation des résultats, consulter les documents de référence appropriés.12,13
CONDITIONNEMENT
BD Mueller Hinton Fastidious Agar
N° réf. Description
RÉF. 257491 Milieux en boîtes de Pétri prêts à l'emploi, 20 unités par carton
INFORMATIONS COMPLÉMENTAIRES
Pour plus d’informations, contacter le représentant local de BD.