Université de Jijel

Faculté des Sciences de Nature et de la Vie

Département de biologie moléculaire et cellulaire
Master I Pharmacologie Expérimentale
Module : Méthodes Histologiques et anatomopathologiques appliquées en pharmacologie et toxicologie
Chargée de Module : Dr Lamia BENGUEDOUAR
Mme Hadjer KEMEL

Tp 02 : Réalisation d’une coupe histologique

But :
Préparation des coupes histologiques pour observation au microscope optique.

Matériel :

Matériel Réactifs et produits chimiques

Etuve Formol
Microtome Ethanol 50°, 70°, 80°. 90° et 100°
cassettes Xylène
lames et lamelles Paraffine
Microscope optique Hématoxyline
Eosine

Méthodes :

1. Fixation
 Fixation des tissus dans le formol.
2. Déshydratation et inclusion :
 Passage des tissus dans des bains successifs d’alcool de concentrations croissantes de l’alcool à
50° jusqu’à l’alcool absolu 100°.
 Plongement des tissus dans des bains de xylène.
 Inclusion dans la paraffine fondue (chauffée à 56° C) et la réalisation des blocs.
3. Microtomie et étalement :
 Réalisation des coupes de 5µm d’épaisseur à l’aide d’un microtome.
 Etalement sur des lames.
 Emplacement des lames dans une étuve à une température entre 40-45°C pendant une nuit.
4. Déparaffinage et réhydratation :
 e déparaffinage consiste, comme son nom l’indique, à éliminer la paraffine. Les lames sont
placées sur une plaque chauffante (à 45-60°C) pendant 15 min, afin d’obtenir la liquéfaction.
 Déparaffinage des coupes dans deux bains successifs de xylène.
 réhydratation des coupes dans des bains d’alcools de concentrations décroissantes et un bain
d'eau distillée.
5. Coloration des coupes par l’hématoxyline / éosine (HE) :
 Plongement des coupes dans des bains successifs de : l’hématoxyline (3 min), dans l’eau distillée
(2min), puis dans un bain d’éosine (2 min) suivie d’un bain d’eau distillée (2 min).
 Séchage des lames à une température ambiante
6. Observation microscopique :
Observation des coupes par microscope optique.