UNIVERSITE DE M’HAMED BOUGARA_BOUMERDES

FACULTE DES SCIENCES

DEPARTEMENT DE BIOLOGIE
L2 SCIENCE BIOLOGIQUE
MODULE : MSTEV

Examen de Semestre 04 de module de MSTEV

Nom : BELKACEMI

Prénom : Hiba

Groupe : 01

Matricule : 181831029997

1. Les différentes étapes classiques de la préparation des tissus destinées à l’observation en

microscopie électronique à transmission :

1
1/ Prélèvement :

* Au niveau de l’animal  -anesthésier l’animal.

-Disséquer l’animal et prélever une partie de l’organe à étudier.

* Au niveau du végétal : - Disséquer le végétal et prélever une partie de l’organe à

étudier.

2/Fixation : Afin de conserver des ultrastructures cellulaires sans altération, on fixe les cellules
in vivo à l’aide de :

-Produits fixateurs : tetroxyde d’osmium, glutaraldéhyde.

-Agents physiques : propane liquide (-196°C).

Donc, il s’agit d’une étape critique qui conditionne le succès de l’étude cytologique.

3/ Rinçage : l’élimination de fixateur en lui substituant une solution de même PH ;

Plusieurs rinçages successifs sont à réaliser.

4/Déshydratation : C’est débarrasser les pièces de leurs eaux en les plongeant dans des bains
d’alcool à concentrations croissantes ou dans l’acétone.

Dernier solvant : oxyde de propylène : solvant de résine.

5/ Inclusion : Le durcissement des échantillons après le remplacement du milieu intracellulaire

aqueux par un milieu solide (résine).

6/ Durcissement des coupes ultra minces :

-Fragmenter l’échantillon en coupes de 500 à 700 °A d’épaisseurs.

-Taille des blocs.

-Ultramicrotomie.

-Confection des coupes automatiques.

-Recueil des coupes sur une grille métallique.

7/ Coloration : Augmenter le contraste des objets biologiques en leur associant des sels de
métaux lourds (acétate d’uranyle, citrate de plomb, nitrate d’argent …).

2. La différence entre la préparation des tissus destinées à l’observation en

microscopie électronique à transmission (cytologie) et la préparation des tissus
destinées à l’observation en microscopie photonique (histologie) :

2
 Technique histologique de
préparation de coupes.
Microscopie Microscope photonique
(MP)
Fixation 1/ Préservation définitive
des structures dans un état
proche du vivant.
Rinçage Pas de rinçage.
Déshydratation 1/ déshydratation de la
pièce dans un bain d’alcool
de degrés croissant afin de
remplacer l’eau par
l’alcool.
2/ remplacement d’alcool
par un solvant organique.
Inclusion 1/ dans la paraffine .
Les coupes 1/ la pièce est découpée en
fines tranches (2 à 8
microns) ‘coupes mince’.
2/ L’utilisation d’un
microtome.
3/ Déposition des coupes
sur une lame de verre
imprégnée d’eau, qui les
colle à la lame.
Coloration 1/ coloration soit :
-Topographiquement
- Cytochimiquement
Etude Sur des tissus.
Observation Une structure des cellules
microscopique
Technique cytologique ou
technique de coupes
minces.
Microscope électronique
(ME)
1/ Conservation des
structures cellulaires sans
altération.
Réalisation de plusieurs
rinçages par une solution de
même PH .
1/ il s’agit de débarrasser
les pièces de leurs eaux en
les plongeant dans des
bains d’alcool à
concentrations croissantes
ou dans l’acétone.
1/ dans la résine.
1/ Faire des coupes de 500
à 700 A° d’épaisseurs
(coupes ultra minces).
2/ Ultramicrotomie.
3/ Confection des coupes
automatiques.
4/ Recueil des coupes sur
une grille métallique.
1/ Augmenter le contraste
des objets biologiques en
leurs associant des sels de
métaux lourds,
Sur des cellules.
Une ultrastructure d’une
cellule.