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Sommaire
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Biologie Moléculaire et Génétique / UIR / Faculté de Médecine Dentaire / Pr. Youness TABOZ
Chapitre I
La mitose et la méiose
Introduction
Organismes et cellules
Une cellule est une solution contenant différentes molécules entourée d’une membrane
Caractéristiques de la cellule
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Les chromosomes
Un chromosome est formé de deux brins d'ADN reliés par le centre, ce qui donne l'apparence
d'un X.
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I. La mitose
Généralités :
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Etapes de la mitose :
• Interphase
• Prophase
• Métaphase
• Anaphase
• Télophase
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Interphase :
• Phase G1 : Croissance
Prophase :
• Formation du fuseau
• Condensation de la chromatine en chromosomes
• Fragmentation de la membrane du noyau
• Disparition du nucléole
• Les fibres du fuseau permettent une bonne répartition des chromosomes dans les
cellules lors de la division. Donc indispensables à un bon développement cellulaire
Métaphase :
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Anaphase :
• Les chromatides sœurs (copies de chromosomes) se séparent.
• Les copies sont tirées par les fibres du fuseau et migrent aux extrémités de la cellule.
Télophase :
• Les chromosomes se « déroulent » et forment à nouveau de la chromatine.
• La membrane du noyau et le nucléole se reforment.
• Cytocinèse:
La membrane cellulaire se contracte à l’équateur de la cellule pour diviser la
cellule en deux (cellules animales).
Il se forme une membrane cellulaire et une nouvelle paroi à l’équateur de la
cellule (cellules végétales).
• Ces fibres se contractent. Elles réalisent un sphincter qui resserre le diamètre de la
cellule au niveau de l'équateur
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Haploïde / Diploïde :
Une phase diploïde
Les cellules possèdent des chromosomes en deux exemplaires.
Le nombre de chromatides par type de chromosome dans une cellule est indiqué par un
chiffre, suivi de la lettre C
Quelques exemples :
Une cellule diploïde à deux chromatides sera donc notée : « 2N-2C »
Une cellule diploïde à quatre chromatides: « 2N-4C »
Une cellule haploïde à deux chromatides: « 1N-2C »
Une cellule haploïde à une chromatide: « 1N-1C »
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II. La méiose
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Chacun des deux parents ne transmet à son enfant qu'un seul de chacun de ses
chromosomes homologues
Les gamètes, spermatozoïdes ou ovules, ne contiennent qu'un seul exemplaire de
chaque paire d'homologues
Cellule somatique : 46 chromosomes
Gamètes : 23 chromosomes
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Dans la méiose il y’a deux divisions qui permettent d’obtenir des gamètes haploïdes
(23 chromosomes) à partir de cellules diploïdes (46 chromosomes)
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Prophase I :
• De nombreux phénomènes se produisent pendant cette prophase de la première
division, ce qui explique qu'elle soit si longue
• Elle couvre à elle seule 90% de la durée totale de la méiose
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Métaphase I :
Anaphase I :
Télophase I :
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La spermatogenèse :
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L’ovogenèse :
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Un des follicules devient beaucoup plus gros que les autres = follicule De Graaf
Le follicule De Graaf fait pression sur la paroi de l'ovaire et éclate en laissant échapper
l'ovocyte = ovulation
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Mitose Méiose
Division équationnelle qui sépare les Une première division, réductionnelle:
chromatides sœurs sépare les chromosomes homologues
• Une deuxième division, équationnelle:
sépare les chromatides sœurs
Une cellule-mère produit deux cellules-filles par Une cellule-mère produit 4 gamètes par cycle
cycle
Tous les produits portent la même information L'information héréditaire diffère d'un produit à
héréditaire l'autre:
• recombinaisons génétiques
Les cellules issues de la mitose sont en Les cellules issues de la méiose ne peuvent
général capables de subir de nouvelles subir une autre méiose, mais éventuellement
mitoses bien des mitoses
La mitose se produit généralement dans La méiose ne se produit que dans les cellules
presque toutes les cellules somatiques spécialisées de la lignée germinale
Les mitoses commencent dès le stade du La méiose ne se produit qu'à maturité chez
zygote et continuent tant que l'organisme est les organismes supérieurs (animaux, plantes
en vie à fleurs…), mais elle apparaît dans le zygote
de nombreuses algues et champignons
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Chapitre II
Les acides nucléiques
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Acide phosphorique
4 bases azotées:
Sucre: Désoxyribose
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Acide phosphorique
4 bases azotées:
Sucre: ribose
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Les nucléotides sont liés les uns aux autres par leur désoxyribose et leur groupement
phosphate
Deux chaînes de nucléotides peuvent s'unir l'une à l'autre si leurs bases sont
complémentaires
Bases complémentaires: A T et C G
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Groupe phosphate
Le groupe phosphate est constitué de phosphore
et d’oxygène (PO4)
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purines ou pyrimidines
• Adénine
• Guanine
• Cytosine
Le sucre
Le sucre à cinq carbones, aussi nommés pentoses, détermine si l’acide nucléique est ADN ou
ARN
L’ADN contient un sucre désoxyribose, tandis que l’ARN contient un sucre ribose
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• On numérote les carbones comme étant 1’ à 5’, commençant tout juste à la droite de
l’atome d’oxygène
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Directions de l’ADN :
• N’importe quel brin d’ADN, peu importe la longueur, possède toujours un groupe
phosphate 5’ libre à un bout, et un groupe hydroxyle 3’ à l’autre
• Cette différence nous permet de référer sans ambiguïté à un bout particulier de la
molécule; en autres, on peut parler du bout 5’ ou du bout 3’ sans porter de confusion
• On dit ainsi que l’ADN possède des directions
• La séquence des bases d’ADN est habituellement exprimée dans une direction 5’ à 3’
5’ 3’
3’ 5’
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2. La méiose
3. La mitose
1. La replication :
• Le mécanisme de réplication est le suivant : Dégrafage des 2 hélices par rupture des
liaisons hydrogène entre les bases azotées
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La replication
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• La transcription
• La traduction
1. La transcription
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ARN polymérase
• L'ARN polymérase est un complexe enzymatique responsable de la synthèse de l'acide
ribonucléique, ou ARN, à partir d'une matrice d'ADN
• L'ARN-polymérase se déplace toujours dans le même sens sur un brin et dans le sens
opposé sur l'autre brin
• Elle se détache sur un site présentant des caractéristiques particulières signalant la fin
du gène
• Ensuite, lorsque l'ARN-polymérase s'est détachée, les deux brins d'ADN s'associent de
nouveau au fur et à mesure de l'avancé de l'enzyme, et se retrouvent comme ils étaient
avant la synthèse d'ARN
• Le brin d'ARN messager ainsi synthétisé est complémentaire du brin d'ADN transcrit
• L'information contenue dans l'ARN messager est identique à celle du brin d'ADN non
transcrit
• Le nucléotide uracile (U) occupe dans l'ARN la place du nucléotide thymine (T) de
l'ADN
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• Initiation
• Elongation
• Terminaison
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• Un promoteur
• Une succession d’exons et d’introns
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Des parties de l’ARN pré-messager (introns) sont donc éliminées après la transcription
Les introns sont les parties éliminées et les exons les parties conservées au cours de ces
modifications post-transcriptionnelles :
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La coiffe :
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La queue poly A :
Epissage alternatif :
- l’ARN pré-messager
- les ARN messagers à l’origine de la synthèse de la calcitonine et de la CGRP
• L’ARN pré-messager résultant de la transcription du gène Calc-1 est constitué de:
6 exons et 5 introns
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E1 E2 E3 E4 E5 E6 I1 I2 I3 I4 I5
ARN pm
+ + + + + + + + + + +
ARNm
+ + + + - - - - - - -
Calcitonine
ARNm
+ + + - + + - - - - -
CGRP
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2. La transcription
La synthèse de la protéine (assemblage des acides aminés) se fait au niveau des ribosomes
Les ribosomes :
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Les protéines :
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Le code génétique:
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Code génétique
Codon stop
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ARN de transfert:
ARNt = brin d'ARN qui se replie sur lui-même pour former une structure en 3D
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• Les ARN de transfert (ARN t) sont des molécules qui se placent sur les sites du
ribosome où va être lu l'ARN messager
• En effet, il n'existe aucune affinité entre les ARN messagers et les acides aminés, ni in
vivo ni in vitro
• La jonction entre le code et ce qu'il spécifie se fait par l'intermédiaire de ces molécules
adaptatrices que sont les ARN de transfert
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Mécanisme de la traduction :
• Chaque ARNt se fixe par son anticodon sur trois nucléotides de l’ARNm
qui constituent ce qu’on appelle un codon
• Après leur fixation, les acides aminés qu’ils transportent sont reliés entre eux
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Chapitre III
• Ce sont des changements qui affectent l’information génétique contenue dans les
cellules reproductrices d’un organisme, appelés mutations des cellules germinales, qui
vont se transmettre. On a deux cas:
• Les mutations qui se produisent dans les autres cellules d’un organisme pendant la
durée de sa vie sont des mutations des cellules somatiques
• Les générations futures n’héritent pas de mutations somatiques
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I. Mutations ponctuelles :
• Un nucléotide qui est remplacé par un autre et qui n’a pas d’effet sur le métabolisme
cellulaire est une mutation silencieuse
• Les effets sont en général mineurs car on ne change qu’un nucléotide mais l’acide
aminé reste identique :
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• Translocation réciproque
• Translocation robertsonienne
• Cas particulier de translocation: Insertion
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• Toutes les cellules subissent des mutations spontanées. Elles arrivent de façon
naturelle dans le métabolisme de la cellule
• À l’origine de ces mutations, on note le mauvais appariement de bases par l’ADN
polymérase pendant le processus de réplication de l’ADN
• Certains facteurs peuvent augmenter le nombre de mutations. On appelle ces facteurs
des mutagènes et ils amènent une mutation induite
• Lorsqu’on dit qu’elle est induite, on veut dire que les mutations sont dues à des agents
extérieurs de la cellule
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Chapitre IV
Généralités :
• Une maladie génétique est une maladie due à une ou plusieurs anomalies
• sur un ou plusieurs chromosomes qui entrainent un défaut de fonctionnement de
certaines cellules de l'organisme
• L'activité et la structure de chaque protéine est déterminée par l'information
génétique contenue dans un gène
• Si le gène est altéré, il entraîne la cellule dans un dysfonctionnement, qui peut se
révéler, à tout âge de la vie, avec l'expression d'une maladie
• Lorsque les maladies génétiques touchent les cellules germinales, elles peuvent donc
être transmises des parents aux enfants et constituent ainsi des maladies héréditaires
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Arbres généalogiques :
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Exemple: la mucoviscidose :
• Le risque de "transmettre" la maladie pour une personne homozygote saine (A/A) est
nul.
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Exemple : Hémophilie :
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- Les hommes atteints "transmettront" la maladie à toutes leurs filles mais à aucun de leurs
garçons.
- A chaque grossesse d'une mère atteinte, le risque que l'enfant, fille ou garçon, soit malade
est de 50%.
- Les enfants sains ne "transmettent" pas la maladie.
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Chapitre V
Les techniques génétiques et moléculaires
1. Le caryotype :
Un caryotype est simplement une photo des chromosomes d’une personne après qu’ils ont été
répliqués. Essentiellement, c’est une photo des dyades.
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• C’est le classement des chromosomes d’une cellule afin d’en vérifier le nombre et la
structure
• C’est l’étude morphologique du matériel chromosomique se présentant sous la forme
de chromosomes dans les cellules des eucaryotes
• L’étude du caryotype correspond au dénombrement et à l’identification de tous les
chromosomes:
- cellules en métaphase (prophase)
- anomalies de nombre et anomalies de structure
Chromosomes visibles que pendant une courte période du cycle cellulaire: division
Des cellules en multiplication active soit spontanément soit par une culture
Prélèvements
• Sang
• fibroblastes
• cellules amniotiques
• sang fœtal
• moelle osseuse
• tissu tumoral
• Stérilité +++
• Milieu de culture stérile avec des antibiotiques et antifongiques
• Milieu de culture : milieu synthétique enrichi en sels minéraux, glucose et acides
aminés auquel on additionne du sérum de veau fœtal (SVF)
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Les sondes
Pour les sondes, on distingue:
• Les sondes composées de séquences spécifiques d’ADN. Elles sont de petite taille et
s’hybrident sur des séquences spécifiques (centromères par exemple)
• Les sondes composées de séquences uniques. On distingue les sondes spécifiques
d’un emplacement très précis et les sondes spécifiques d’un bras chromosomique ou
d’un chromosome entier
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Le principe de la technique (FISH) est basé sur le fait que l’ADN est une molécule double
hélice formée de deux brins complémentaires.
La technique FISH s’articule autour de trois étapes:
Dénaturation
Hybridation
Révélation
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Etape de dénaturation
Ces deux brins peuvent être séparés par la chaleur et / ou par un traitement acide ou alcalin
Etape d’hybridation
Une sonde d’acide nucléique contenant une séquence complémentaire au simple brin d’ADN,
peut alors former un hybride spécifique avec l’ADN simple brin
Etape de révélation
Cette sonde est marquée avec un ou plusieurs fluorochromes, l’hybridation des séquences
nucléiques complémentaires peut être visualisée en fluorescence (chromosomes ou noyaux)
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C’est une technique qui permet aussi de préciser l’origine d’un chromosome marqueur
surnuméraire.
Inconvénients de la FISH :
• Technique lourde nécessitant des traitements différents selon la nature de l’échantillon
à analyser (métaphases, noyaux, tissus)
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• De ce fait, la taille d’un segment chromosomique remanié peut être déterminée avec
précision ce qui permet de connaître son contenu génique et donc de faciliter
l’établissement des corrélations phénotype – génotype
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• Un traitement statistique des données est ensuite réalisé grâce à des logiciels
dédiés et les résultats sont donnés sous forme de représentation graphique
• L’existence d’un gain ou d’une perte d’un segment génomique du patient sera
détectée par une variation du rapport d’intensité de fluorescence
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• A la suite d’un prélèvement, pour étudier l’ADN, il faut évidement l’extraire. Cela se
fait principalement grâce à la centrifugation
• Après cette opération on obtient un surnageant, une suspension qui représente l’ADN
qui sera étudié. Cependant, cette suspension est en quantité minimale et ne permet
aucune véritable étude
• Il faut donc amplifier cet ADN retrouvé par PCR
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• La phase de dénaturation
• La phase d'hybridation ou phase d'appariement des amorces
• La phase d'élongation
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On obtient donc deux fragments d’ADN qui vont ensuite être dénaturés, puis des amorces se
fixeront sur les quatre brins d’ADN, et les polymérases synthétiseront les brins
complémentaires. On obtient quatre fragments d’ADN double-brin…
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