Amplification de l’ADN par PCR

(Polymerase Chain Reaction)

 Principe :
•Technique qui permet d’augmenter exponentiellement la
concentration en ADN à partir d’une faible quantité de départ

•Utilisée en: médecine (diagnostic), médecine légale

(identification), paléontologie…

•Amplification d’une séquence cible du génome à partir de deux

amorces qui encadrent cette séquence du coté 3’OH (sont
complémentaires aux extrémités 3’ de chaque brin cible)
Séquence cible
• ADN génomique extrait

• dnTP

• Amorces qui encadrent la séquence cible

• Taq polymérase 🡪 ADN polymérase

thermorésistante *
Mix de PCR Thermocycler

* Extraite à partir de la bactérie Thermus aquaticus qui vit dans les sources thermales
Programmer le thermocycler selon 3
phases:
•1.Phase de dénaturation (100°)/ 3min

•2.Phase d’hybridation (56°)/1min

•3.Phase d’élongation ou polymérisation (72°)/3-4min

Cycle 1
Cycle 2
 Amplicon

Amplicon = séquence obtenue à partir du 3ème cycle d’amplification qui a la taille de la séquence cible voulue
 n
•Nombre de molécules filles obtenue a chaque cycle = 2

•n étant le numéro du cycle ex: 3ème cycle: 23 = 8 molécules

filles
C’est encore mieux quand c’est animé !
Révélation des résultats de la PCR par
électrophorèse

Puit 1: une bande principale large ayant le plus

petit pM (celui de la séquence cible)🡪 correspond
aux amplicons (PCR réussie)

Puit 2: une bande principale ayant un pM différent

de celui de la séquence cible 🡪 amplification
érronnée (PCR ratée)

Puit 3: aucune bande visible 🡪 pas d’amplification

🡪 donc pas de séquence cible (cas de diagnostic
viral ou parasitaire)

Note : si on obtient le profil 2 on doit refaire la PCR avec des amorces de taille plus grande
D’autres types de PCR:

PCR en temps réel : permet de connaitre la concentration en

amplicons durant le déroulement de la technique (grâce à des
agents fluorescents)

RT-PCR: est réalisée sur les génomes à ARN (rétrovirus),

consiste à rétro-transcrire l’ARN en ADN (rétro-transcriptase)
puis amplifier une séquence cible par une PCR classique