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EFFICACIT ET MODE DACTION DUNE NOUVELLE PHYTASE

EN ALIMENTATION DES VOLAILLES


Debicki-Garnier Anne-Marie1, Sands Jason1, Pron Alexandre1, Messager Bertrand2
1

DANISCO ANIMAL NUTRITION - Marlborough - Wiltshire, SN8 1XN, UK


2

CEVA - La Ballastire - 33500 Libourne

RSUM
Le dveloppement de lutilisation des phytases exognes a permis une meilleure utilisation du phosphore
alimentaire, ce qui a induit une diminution de lutilisation de phosphore inorganique dans les aliments pour les
volailles et une rduction des rejets dans lenvironnement. Lobjectif de cette tude tait, partir dun essai
ralis en dindons, dvaluer lefficacit dune 6-phytase issue dEscherichia coli et produite par
Schizosaccharomyces pombe, et de la comparer une phytase dorigine fongique Aspergillus niger prise comme
rfrence. Les dindons femelles de souche Nicholas Large White taient nourris de 1 21 jours dge avec un
aliment base de mas/soja rduit en phosphore et calcium par rapport aux besoins. Le rgime tait supplment
avec des doses de phytases de 0, 250, 500 et 1000 FTU/kg daliment. Les performances de croissance et la
qualit de la minralisation osseuse ont t mesures 21 jours dge et un coefficient de rtention du phosphore
et du calcium calcul entre 15 et 19 jours dge. Lajout de phytase au rgime carenc en phosphore et calcium a
permis une amlioration significative de la croissance et de la qualit de la minralisation osseuse exprime en
taux de cendres des orteils et des tibias due une augmentation de la rtention du phosphore et du calcium. La
rponse tait de type exponentiel avec plateau. Une diffrence notable entre la phytase S. pombe et la phytase A.
niger a t mise en vidence dans cette tude, en particulier pour les doses de 250 et 500 FTU/kg daliment, o le
niveau de phosphore dans laliment est infrieur aux besoins des animaux. Ces rsultats corroborent dautres
rsultats obtenus en poulets, poules pondeuses et canards. Parmi les diffrents facteurs qui dterminent le mode
daction dune phytase, il a t montr que la phytase S. pombe possdait une activit relative en fonction du pH
suprieure aux phytases A. niger et P. lycii, et quelle tait plus rsistante linactivation par les protases
endognes du tube digestif. Ces deux paramtres sont essentiels pour une activit leve dans la premire partie
du tube digestif o les phytates sont solubles et donc accessibles la phytase.
ABSTRACT
The use of exogenous phytase in animal nutrition has enabled better phosphorus utilization by animals, allowing
a reduction in inorganic phosphorus addition to the diets hence less negative impact on the environment. The aim
of this study was to evaluate the efficacy of a 6-phytase from E. coli, produced by Schizosaccharomyces pombe
and to compare its efficacy to a fungal phytase Aspergillus niger in a trial carried out in turkeys. Nicholas Large
White females were fed a corn-based diet reduced in phosphorus and calcium levels compared to required levels,
from 1 to 21 days of age. The feed was supplemented with phytases at 0, 250, 500 and 1000 FTU/kg feed.
Performance and bone mineralization were measured at 21 days of age and phosphorus and calcium retention %
calculated between 15 and 19 days of age. Phytase addition to the phosphorus and calcium deficient diet led to a
significant growth improvement and a bone mineralization (expressed as toe and tibia ash %) improvement due
to an increase in phosphorus and calcium retention. Response curves were plotted using an exponential decay
curve fit. A difference in efficacy between S. pombe and A. niger was observed in this trial, especially with lower
phytase doses (250 and 500 FTU/kg feed) where dietary phosphorus level is below requirement of the birds.
Similar results have been observed in broilers, laying hens and ducks. Phytases from different sources possess
different structural and biochemical properties that determine their mode of action. Key biochemical
characteristics of S. pombe phytase were compared to A. niger and P. lycii. S. pombe had a wider pH activity
profile and was more resistant to breakdown by the animals own proteases. These two properties are essential
for high activity in the upper portion of the gastrointestinal tract where phytates are soluble and therefore
accessible to phytase.

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INTRODUCTION
Le phosphore est un lment mtabolique et
structurel indispensable la vie. Un apport adquat
de phosphore dans laliment est dterminant pour
assurer la croissance et le dveloppement osseux
des volailles. Dans les aliments pour le btail base
de crales, plus de la moiti du phosphore prsent
est organique, sous forme de phytates. Toutefois,
les volailles ne possdant pas de phytases
endognes intestinales en quantit suffisante, le
phosphore phytique leur est en grande partie
indisponible. Pour satisfaire les besoins en
phosphore de loiseau, les aliments sont donc
supplments avec des sources de phosphore
inorganique. Suivant les matires premires
utilises et la proportion de phosphore inorganique
ajout, seulement 18 40 % du phosphore ingr
est retenu par lanimal. Le dveloppement rcent de
lutilisation des phytases dorigine microbienne a
permis une meilleure utilisation du phosphore
alimentaire, induisant une rduction des rejets dans
lenvironnement. Ces dernires annes, les progrs
raliss en biotechnologie et en fermentation
industrielle ont permis de produire des phytases
plus efficaces et un cot significativement moins
lev.
Lobjectif de cette tude tait, travers un essai
ralis en dindon, dvaluer lefficacit dune 6phytase issue dEscherichia coli produite par
Schizosaccharomyces pombe, et de la comparer
une phytase dorigine fongique actuellement
autorise dans lUnion Europenne, Aspergillus
niger, prise comme rfrence.
1. MATRIELS ET MTHODES
1.1. Dispositif exprimental
210 dindons femelles de souche Nicholas Large
White taient rpartis en 7 traitements, chacun
comprenant six cages de cinq dindons. Les animaux
taient nourris pendant 21 jours avec un aliment
prsent sous forme de farine et contenant 51.2 %
de mas, 43.4 % de tourteau de soja, de lhuile, des
vitamines, des minraux et de loxyde de chrome,
utilis comme marqueur indigestible. Les
principales caractristiques nutritionnelles du
rgime
taient :
2800
kcal/kg
dnergie
mtabolisable, 27.5 % de protine et 1.68 % de
lysine. Laliment contenait aussi 0.93 % de
calcium, 0.55 % de phosphore total et 0.26 % de
phosphore digestible (CVB, 1999), soit des apports
bien infrieurs aux recommandations (NRC, 1994 :
Ca 1.2%, phosphore non phytique 0.6%). De plus,
le rgime tait supplment avec des activits de
phytases, S. pombe ou A. niger, de 0, 250, 500 et
1000 FTU/kg daliment, ajustes partir de lots
contenant respectivement 5145 et 5536 FTU/g. Les
animaux taient pess individuellement 1 et 21

jours dge. Pour chaque cage, une collecte des


excrta tait ralise entre 15 et 19 jours dge.
21 jours dge, tous les dindons taient sacrifis et
les orteils et les tibias taient prlevs.
1.2. Mesures et dterminations
Pour chaque traitement, les gains de poids, les
consommations daliment et les indices de
consommation ont t mesurs entre 1 et 21 jours
dge. Les teneurs en calcium, phosphore et oxyde
de chrome ont t mesures dans les aliments et les
excrta et, pour chacun des 7 traitements, un
coefficient de rtention du phosphore et du calcium
a t calcul en utilisant la mthode des marqueurs
indigestibles. La qualit de la minralisation
osseuse a t tudie par lanalyse du taux de
cendres des orteils et des tibias (Li et al., 2000). Les
donnes ont t analyses par une analyse de
variance et les moyennes inter-traitement ont t
compares en utilisant une analyse par contraste
un degr de libert.
2. RSULTATS
2.1. Performances 1-21 jours
Les rsultats des performances de croissance sont
prsents en table 1. Le gain de poids des dindons
du traitement tmoin carenc en phosphore est de
298 g. Lajout de phytase, quelque soit le taux
dincorporation,
permet
une
amlioration
significative des performances de croissance. Le
gain de poids lors de lajout de phytase S. pombe
atteint un plateau 500 FTU/kg, aprs une
augmentation trs prononce par rapport au tmoin
250 FTU/kg. Une reprsentation graphique de la
croissance permet de mettre en vidence une
rponse de type exponentielle. Dans la partie la plus
sensible de la courbe (faibles doses de phytase), le
taux damlioration du gain de poids est deux fois
suprieur avec S. pombe quavec A. niger. Avec A.
niger lamlioration de la croissance se poursuit
jusqu la dose de 1000 FTU/kg, le gain de poids
tant alors quivalent celui obtenu avec S. pombe
250 FTU/kg. Lindice de consommation du
tmoin est de 1.89. Les observations dcrites pour
le gain de poids en prsence de phytase tendent
sappliquer aussi lindice de consommation, mais
les diffrences entre S. pombe et A. niger ne sont
pas significatives.
2.2. Minralisation osseuse
Le taux de cendres des orteils du traitement tmoin
est de 8.68 % (tableau 1). Lajout de phytase
amliore significativement le taux de cendres. La
phytase S. pombe montre une amlioration trs
prononce du taux de cendres en premire partie de
courbe, puis atteint un plateau. La phytase A. niger

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montre une augmentation du taux de cendres


beaucoup plus lente, et atteint 1000 FTU/kg un
taux de cendres quivalent celui obtenu avec S.
pombe 250 FTU/kg. Les observations faites sur le
taux de cendres des tibias (tableau 1 et figure 1)
sont similaires celles dcrites avec le taux de
cendres des orteils. Les diffrences en taux de
cendres des tibias et des orteils entre S. pombe et A.
niger sont significatives P<0.05 pour les doses de
250 et 500 FTU/kg.
2.3. Rtention du phosphore et du calcium
Le taux de rtention du phosphore obtenu avec
laliment tmoin est de 37.1 %. Lajout de phytase
permet une amlioration significative du taux de
rtention, pour atteindre une valeur proche de 53 %.
Laddition de la phytase S. pombe entrane une
amlioration trs rapide du taux de rtention du
phosphore, avec un plateau atteint ds 250 FTU/kg,
tandis que lamlioration avec A. niger se fait
progressivement. La phytase S. pombe, mme
utilise faible dose (250 FTU/kg), permet une
libration de phosphore (et sa digestibilit)
suffisante pour satisfaire les besoins des dindons
21 jours dge.
En ce qui concerne le taux de rtention de calcium,
il est de 27 % pour laliment tmoin. Lajout de
phytase permet une augmentation significative de
ce taux, les amliorations tant similaires dans cet
essai quelle que soit la phytase incorpore. Un
plateau est atteint ds 500 FTU/kg et la rtention
maximum est denviron 39 %.
3. DISCUSSION
Les besoins des volailles en phosphore et calcium
sont particuilrement levs en priode de
dmarrage (Hocking et al., 2002; Lescoat et al.,
2005). La rduction de ces deux lments dans les
aliments dlevage a des rpercussions importantes
sur la croissance et le dveloppement osseux.
Laddition de phytase exogne permet damliorer
lutilisation du phosphore et, de faon indirecte,
celle du calcium. Dans cet essai, effectu en
dindons, lincorporation de doses croissantes de
phytase dans un aliment sub-carenc en phosphore
et calcium a permis une amlioration significative
des performances de croissance, de la
minralisation osseuse et de la rtention du
phosphore et du calcium. Pour la phytase S. pombe,
la reprsentation graphique de cette amlioration
met en vidence une rponse de type exponentiel
avec plateau. Lamlioration de la rtention
apparente du phosphore et du calcium se traduit par
une diminution des rejets, associe une meilleure
minralisation et une plus grande valorisation de
la ration.
Une diffrence notable defficacit pour le gain de
poids et la minralisation osseuse entre la phytase

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produite par S. pombe et celle produite par A. niger


a t mise en vidence dans cette tude, en
particulier pour les doses de 250 et 500 FTU/kg
daliment. Ces rsultats corroborent les nombreux
rsultats obtenus en poulets, pondeuses et canards.
Les phytases de diffrentes sources ont chacune des
proprits physiques et chimiques qui dterminent
leur mode daction. Parmi les principaux facteurs,
citons lactivit relative en fonction du pH, la
temprature, le Km ou constante de Michaelis, la
sensibilit aux protases endognes et la stabilit
dans laliment et pendant la fabrication de celui-ci.
Il a t montr que la phytase S. pombe possdait
une activit relative en fonction du pH suprieure
aux phytases A. niger et P. lycii, permettant une
activit en continu pour des valeurs de pH de 2.0
5.5 (Kumar et al., 2003). Dautre part, la sensibilit
in-vitro des phytases S. pombe, A. niger et P. lycii a
aussi t value (Kumar et al., 2003). Les rsultats
ont dmontr une plus grande rsistance de S.
pombe linactivation par les protases endognes
du tube digestif de lanimal.
CONCLUSION
Lutilisation de phytase exogne dans les aliments
des volailles permet une rduction des rejets en
phosphore tout en maintenant ou en amliorant les
performances de croissance et la robustesse des os.
La 6-phytase issue dE. coli et produite par S.
pombe savre plus efficace que les phytases
fongiques actuellement sur le march. Des tudes
rcentes ont aussi permis une meilleure
comprhension dautres effets positifs associs
lutilisation de phytase exogne chez les oiseaux
dlevage, tels que la diminution des pertes
endognes en acides amins et en sodium
(Cowieson et al., 2004 et 2006; Ravindran et al.,
2006). Toutefois, des travaux complmentaires
seront ncessaires afin de mieux comprendre le rle
de la phytase dans lamlioration de la disponibilit
dautres minraux et son implication dans les
modifications de la balance ionique.
RFRENCES BIBLIOGRAPHIQUES
Cowieson A.J., Acamovic T., Bedford M.R., 2004.
Brit. Poult. Sci., (45), 101-108
Cowieson A.J., Acamovic T., Bedford M.R., 2006.
Poult. Sci., (85), 1389-1397
Hocking P.M., Robertson G.W., Nixey C., 2002.
Brit. Poult. Sci., (43), 607-614
Kumar V., Miasnikov A., Sands J.S., Simmins
P.H., 2003. Proceedings Australian Pig Science
Association, p164
Lescoat P., Travel A., Nys Y., 2005. INRA Prod.
Anim., 18(3), 193-201
Li Y.C., Ledoux D.R., Veum T.L., Raboy V., Ertl
D.S., 2000. Poult. Sci., (79), 1444-1450
Ravindran V., Morel P.C.H., Partridge G.G., Hruby
M., Sands J.S., 2006. Poult. Sci., (85), 82-89

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Tableau 1. Performances de croissance (1-21 jours), minralisation osseuse (21 jours) et rtention du phosphore
et du calcium (15-19 jours) de dindons nourris avec un aliment base de mas/soja
Phytase et
dose FTU/kg
daliment

Gain de
poids, g

Consommation
daliment, g

Indice de
consommation

Tmoin
S. pombe 250
S. pombe 500
S. pombe 1000
A. niger 250
A. niger 500
A. niger 1000

298
440
482
478
374
416
438

562
724
769
756
652
700
724

1.89
1.65
1.60
1.58
1.75
1.68
1.66

Contraste
T vs phytases
***
***
Sp vs An 250
***
**
Sp vs An 500
***
**
Sp vsAn 1000
**
NS
T : tmoin
Sp : Schizosaccharomyces pombe
An : Aspergillus niger

Taux de
cendres
des
orteils %
8.68
14.74
14.64
14.77
12.87
13.61
14.70

Taux de
cendres
des tibias
%
31.6
41.6
43.2
42.9
37.1
40.1
42.2

Probabilit
***
***
NS
***
NS
***
NS
NS
*** P<0.001
** P<0.01
NS non significatif

***
***
**
NS

Rtention
de
phosphore
%
37.1
52.7
52.0
52.6
45.0
50.6
51.2

Rtention
de
calcium
%
27.0
36.1
36.8
39.1
37.2
37.4
38.6

***
***
**
NS
NS
NS
NS
NS
S. pombe: Phyzyme XP
A. niger : Natuphos

Figure 1. Effet des phytases S. pombe et A. niger sur la teneur en cendres des tibias de dindons gs de 21 jours

50

R2 = 0.998
45

S. pombe

Teneur en
cendres des
tibias %

40

A. niger
R2 = 0.999

35

30
0

200

400

600

800

1000

Phytase FTU/kg
S. pombe
A. niger

y = 31.6 + 11.5*(1-exp(-0.008*x))
y= 31.6 + 11.4*(1-exp(-0.003 *x))

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