EXAMEN MACROSCOPIQUE ET MICROSCOPIQUE DES CULTURES BACTRIENS

Introduction: Observation macroscopique des colonies:C'est l'tude de l'aspect

des colonies.Une colonie est l'amas, visible lil nu, constitu par des milliards
de descendants d'une seule cellule bactrienne et dont la taille, la forme, la
couleur, la consistance sont caractristiques de c aque esp!ce."'tude de
l'aspect des colonies ncessite l'observation lil nu, en lumi!re naturelle et
artificielle, par claira#e direct et par transparence des colonies.

ation microscopique:"'observation microscopique permet de faire une tude

morpolo#ique des cellules d'une esp!ce microbienne.$lle comprend l'e%amen
l'tat frais &e%amen entre lame et lamelle des bactries vivantes l'e%amen
apr!s coloration &le plus souvent sur frottis scs et fi%s

P. N 3
EXAMEN MACROSCOPIQUE ET MICROSCOPIQUES DES CULTURES BACTERIENNES
A- LEXAMEN MACROSCOPIQUE DES COLONIES
L'examen macroscopique des cultures est le premier examen effectu partir de
l'isolement aprs incubation. L'aspect des colonies dpend du milieu utilis de la
dure et de la temprature de l'incubation.
Il ne pourra tre dcrit convenablement qu' partir de colonies bien isoles. La
colonie peut apparatre la surface du milieu de culture pour les germes
arobies, ou tre en profondeur pour les germes anarobies
1. Aspect des colonies en surface sur milieu solide
1.1. La taille
Elle peut tre mesure l'aide d'une rgle gradue pour les grandes colonies. Il
est possible aussi d'utiliser le microscope au grossissement le plus faible pour
mesurer la taille des petites colonies en utilisant de micromtres oculaires.
1.2. La forme
1. Rgulire (ronde) en forme de lentille,
2. irrgulire (de formes diffuses).
3. filiformes
4. lgrement envahissantes avec bords onduls
5. lgrement envahissantes avec bord rod

6. envahissante
1.3. L'aspect de la surface
La surface dune colonie bactrienne peut tre lisse, rugueux, renvoyer la lumire
de faon leur donner un reflet mtallique ou un aspect iris.
1.4. L'opacit
Les colonies sont dcrites comme :
Opaques (ne laissent pas passer la lumire)
Translucides (laissent passer la lumire mais on ne voit pas les formes au
travers, comme le verre dpoli)
Transparentes (laissent passer la lumire et voir les formes au travers, comme
le verre.
1.5. Le relief
Les colonies sont dcrites comme ayant un relief:
aplaties, surface bombe (concave), demi-bombe.
Centre : parfois surlve, parfois ombilique (en creux ou concave)
1.6. Allure de contours (Le bord)
Les colonies sont dcrites comme ayant un bord:
dentel, ou lisse, dchiquets, irrguliers
Uniforme
Filamenteux
1.7. La consistance
Au moment du prlvement il est possible d'apprcier si les colonies sont
grasses, crmeuses (on obtient facilement des suspensions homognes), sches
ou encore muqueuses (on obtient difficilement des suspensions homognes).
1.8. La couleur et/ou pigment
Plusieurs colonies nont pas une couleur bien dfinie (blanc, gris). Par contre,
certaines bactries produisent un pigment insoluble qui donnent un aspect bien
caractristique la colonie (rose, jaune, rouge ), tandis que dautres produisent
un pigment soluble qui diffuse et colore le milieu
B- LEXAMEN MICROSCOPIQUE DES BACTRIES
Lobservation microscopique permet de faire une tude morphologique des
cellules dune espce bactrienne. Elle comprend :

I. EXAMEN A LETAT FRAIS

Cest lexamen microscopique de bactries vivantes, en milieu liquide. Il permet
dapprcier leur mobilit (ou immobilit) et leur morphologie.
Prparation :
1. A partir dune culture en milieu liquide :
Dposer sur une lame propre soit le contenu dune anse de platine soit une
petite goutte laide dune pipette Pasteur. Recouvrir la goutte dune lamelle.
2. A partir dune culture sur milieu solide :
Dposer une gouttelette de liquide (milieu liquide ou eau) sur la lame. Prlever
une trace de culture lanse de platine et lmulsionner dans le liquide.
Recouvrir dune lamelle.
1. Flamber lanse de platine
2. Dposer une goutte de la suspension bactrienne
3. Recouvrir d'une lamelle
4. Observer au microscope
II. EXAMEN APRS COLORATION
Lexamen aprs coloration permet dobserver des bactries tues fixes sur une
lame et ayant subi laction dun ou plusieurs colorants. Les colorations, ralises
sur des frottis secs et fixs, sont classes en :
-

Coloration simple (un seul colorant)

Coloration diffrentielle type Gram

Colorations spciales des structures bactriennes (capsules, spores.).

Remarque :
La ralisation de frottis de bonne qualit est une condition pralable toute
coloration.
1. Ralisation du frottis :
Les frottis doivent tre tals sur la lame de verre en couche mince et rgulire,
puis schs et fixs selon les tapes suivantes.
1. Notez la rfrence de lchantillon sur une lame parfaitement propres et
dgraisses. Prlevez strilement laide dune anse de platine une goutte de
culture bactrienne et talez un film mince,

2. Schage : Le schage est effectu auprs de la flamme dun bec bunsen

jusqu ce que le frottis prsente un aspect mat.
3. Fixation du frottis sec :
Cette tape consiste tuer les bactries et les coller sur la lame, sans en altrer
la structure. La fixation seffectue soit par:
La chaleur : la lame, tenue par une pince (frottis situ sur le dessus) est
place devant (pas sur) la flamme du bec Bunsen. Laisser refroidir avant
dentreprendre la coloration.
-

Flambage lalcool.

2. Coloration la fuchsine
La coloration la fuchsine peut apporter des informations concernant la
morphologie des germes.
Mode opratoire :
Sur le frottis fix et refroidi :
- Faire couler la solution de fuchsine jusqu' ce que tout le frottis soit recouvert.
- Laisser agir 1 minute.
- Rincer abondamment la lame avec le jet d'une pissette d'eau distille, ou
l'eau du robinet jusqu' limination des colorants en excs.
- Scher dlicatement entre deux feuilles de papier filtre (ou buvard), sans frotter.
- Examiner au microscope, objectif immersion.
3. Rsultats
Les bactries sont colores en rose. Cette coloration est intressante pour
l'observation rapide des frottis mais elle permet seulement l'tude de la
morphologie des bactries qui peut se prsenter comme suit :
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