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Dr Jacqueline DUFFOUR
ONCOGENETIQUE
Le cancer une maladie de l’ADN
q
Le Processus de Cancérisation
La Transformation Cellulaire
Caractérisation d’une cellule cancéreuse
Etapes de la cancérisation
Epigénétiques
Hyperméthylation des promoteurs de certains gènes
Modifications des histones
Anomalies extrinsèques
Facteurs de risque initiateurs
Chimiques, physiques, biologiques
Facteurs de risque promoteurs
Chimiques, hormones, parasites
Caractères multi-étapes des cancers
Étapes de la transduction du signal de prolifération
Exemples: cancer colorectal
Les prédispositions génétiques aux cancers
Le Processus de Cancérisation
Le Processus métastatique
L’angiogénèse
Le processus de migration cellulaire
Perspectives thérapeutiques
La thérapie génique et l’immunothérapie
La Transformation cellulaire
La prolifération cellulaire
La différenciation ou la spécialisation irréversible des cellules
L’élimination
Par sénescence
Par apoptose
Dysplasie
Cancer in situ
C invasif
Métastase
La Transformation Cellulaire
3- Résistance à l’apoptose
condensation à la fois
du noyau et du cytoplasme
mitochondries
et noyau intacts Modifications
mitochondries
Condensation noyau
Corps apoptotiques
3/ Résistance à l’apoptose
fasR Apoptose
caspases
cytochrome c
dégradation de l’ADN
Absence d’ancrage
Mort des
cellules
Mitochondrie
Les télomères
Extrémités des chromosomes constituées de séquences répétées dont
l’intégrité est assurée par la télomérase
Activité de la télomérase
Definition
Formation de nouveaux vaisseaux sanguins à partir de
vaisseaux existants (capillaires et veinules)
= néovascularisation
Une tumeur solide ne peut pas se développer au-delà
d’une certaine taille (1 à 2 mm3) en l’absence de néo-
vascularisation» Judah Folkman
Angiogénèse normale
développement embryonnaire, croissance, cicatrisation,
menstruations
Angiogénèse pathologique
hémangiome
polyarthrite rhumatoïde
rétinopathies vaso-prolifératives
développement tumoral
La cellule cancéreuse
6/- Capacité d’invasion tissulaire et de diffusion
métastatique.
Interactions cellule-environnement
Interactions cellule-environnement perturbées
Conséquences
Plus un cancer est dépisté tôt, plus les chances de
guérison
La Transformation Cellulaire
Caractérisation d’une cellule cancéreuse
Etapes de la cancérisation
Epigénétiques
Hyperméthylation des promoteurs de certains gènes
Modifications des histones
Anomalies extrinsèques
Facteurs de risque initiateurs
Chimiques, physiques, biologiques
Facteurs de risque promoteurs
Chimiques, hormones, parasites
Caractères multi-étapes des cancers
Étapes de la transduction du signal de prolifération
Exemples: cancer colorectal
Les prédispositions génétiques aux cancers
II-Bases moléculaires de la cancérogénèse
Délétions chromosomiques
Translocations
Mutations
Par substitution, c’est à dire remplacement d’un
nucléotide par un autre
Par délétion, c’est à dire suppression d’un ou de
plusieurs nucléotides
Par insertion, c’est à dire addition d’un ou de
plusieurs nucléotides
Les délétions et insertions
de 1 ou 2 nucléotides, décalant le cadre de lecture (codons)
de 3 nucléotides, aboutissant à la suppression d’un acide
aminé dans la protéine exprimée
de grande longueur, pouvant supprimer l’expression d’un ou
de plusieurs exons, voire d’un gène entier.
Bases moléculaires de la cancérogénèse
Conséquences
Mutations sans changement du cadre de lecture
Silencieuses (codons codant pour le même AA ou de même
famille)
Faux-sens (AA différent)
Non-sens (codon stop)
Mutations au niveau des introns
Souvent sans conséquences mais parfois empêchent
l’excision-épissage et la fixation de facteurs de
régulation
Mutations pouvant modifier l’expression d’un gène
séquence régulatrice de la transcription
Initiation de la transcription
Mutations avec décalage du cadre de lecture
Graves car protéine complètement différente (non
fonctionnelle)
Bases moléculaires de la cancérogénèse
Oncogènes et proto-oncogènes
Virus oncogènes:
Virus à ARN:
HTLV (lymphomes à cellules T et leucémies)
HIV (sarcome de Kaposi)
Virus à ADN
HPV Papilloma V (cancer du col utérin)
EBV Herpes V ( mononucléose, Mal de Hodgkin, paludisme
Lymphome de Burkitt)
HBV Hépatite V (hépatocarcinome)
Proto-oncogènes et oncogènes
Rôle: Transduction du signal cellulaire
Facteurs de
croissance: EGF,
FGF, PDGF….
Récepteurs de FC
EGFR, PDGFR,
FGFR….
Les transducteurs
du signal de
prolifération
Protéines G
RAS, RAF, SRC,
RET….
Les Facteurs de
transcription:
Myc, Jun, Fos…..
Transduction du signal
Oncogènes
MUTATIONS PONCTUELLES
Oncogène Mutation Tumeur Oncoprotéine
AMPLIFICATION GENIQUE
famille myc
carcinome bronchique à petites cellules:
N-myc, L-myc
neuroblastome (+/- glioblastome): N-myc
Facteur pronostic
Oncogènes
Oncogènes
TRANSLOCATIONS
oncogène tumeur fonction
PDGFR LMC ‘’
Couples cyclines-cdk
(cycline dependent-kinase) ou déclenchent la
prolifération
Par cascades de phosphorylation
Inhibiteurs
des couples cycline-cdk
ou régulent
la prolifération
G0G1sous l’effet
de Facteurs de croissance
par levée de l’inhibition
exercée par la protéine Rb
(non phosphorylée)
Gènes suppresseurs de tumeurs
Activation cycle
cellulaire
CDKN2A
P16 CDK4
P14 contrôle
cellulaire via p 53
CDK4
Si muté cycle c/
Gènes suppresseurs de tumeurs
Gène APC
Localisé en 5q21 (15 exons, 8532 pb)
Inactivation somatique de
l’allèle fonctionnel restant
Activation constitutive de
La voie de signalisation
Wnt/-caténine/APC
Carcinogenèse colorectale
c-myc p21
Cycline D1
Gène APC/E-Cadhérine et β Caténine
Cancer
Hyperactivité des régulateurs + (cyclines et
cdk)
Amplification du gène de la cycline D1 ou A
Induction
Amplification
d’instabilité proliferation proliferation centrioles
chromosomique
progression progression
Effet synergique sur
l’immortalisaton cellulaire
Gènes contrôlant l’intégrité du
génome (+/- réparation ADN)
Gènes contrôlant l’intégrité du génome
Rôle de P 53
DSB MMR
Gènes de réparation DSB: cassure double brin
SYSTÈME MMR (MisMatch Repair)
= Système de réparation des mésappariements
SYSTÈME MMR (MisMatch Repair)
Réparation déficiente accumulation de nombreuses séquences de
microsatellites
Microsatellites:
séquences faites de répétitions (x20) en tandem de nucléotides ubiquitaires dans le
génome (AAA) ou (CACA..)
Si ces erreurs de réplication surviennent dans des régions non codantes pas de
conséquences graves
Détection de l’instabilité des MS (MSI) dans les tumeurs au niveau de
marqueurs (Bat 25 Bat 26 = zones introniques de l’ADN avec 25 ou 26 A ou NR
21, NR 22, NR 24, MONO 27)
La Transformation Cellulaire
Caractérisation d’une cellule cancéreuse
Etapes de la cancérisation
Epigénétiques
Hyperméthylation des promoteurs de certains gènes
Modifications des histones
Anomalies extrinsèques
Facteurs de risque initiateurs
Chimiques, physiques, biologiques
Facteurs de risque promoteurs
Chimiques, hormones, parasites
Caractères multi-étapes des cancers
Étapes de la transduction du signal de prolifération
Exemples: cancer colorectal
Les prédispositions génétiques aux cancers
Phénomènes épigénétiques
Définitions
En situation tumorale:
1/ Méthylation inversée:
H°méthylation le long du génome
Her méthylation au niveau des promoteurs
CpG méthylés = reconnus par des protéines MBD qui vont empêcher
la transcription (donc l’expression de certains gènes)
FT=F de
transcription
HAT=Protéines
acétylant
les Histones Promoteur
Chromatine relâchée
HDAC= Transcription
désacétylation
Des histones
DNMT=
Méthylation de l’ADN
Inaccessibilité aux
complexes de transcription
Phénomènes épigénétiques
2/ Modifications des Histones
Phénomènes épigénétiques: Gènes concernés par
l’inactivation au niveau des promoteurs
Phénomènes épigénétiques
L’âge est à l’origine d’hyperméthylation des promoteurs
(cancer colo-rectal)
Alcool?
Stress?
Etat psychologique ?
Le Processus de Cancérisation
La Transformation Cellulaire
Caractérisation d’une cellule cancéreuse
Etapes de la cancérisation
Epigénétiques
Hyperméthylation des promoteurs de certains gènes
Modifications des histones
Anomalies extrinsèques
Facteurs de risque initiateurs
Chimiques, physiques, biologiques
Facteurs de risque promoteurs
Chimiques, hormones, parasites
Caractères multi-étapes des cancers
Étapes de la transduction du signal de prolifération
Exemples: cancer colorectal
Les prédispositions génétiques aux cancers
EPIDEMIOLOGIE CANCERS
AGE
Facteurs endogènes
*Génétiques (5-10%) CANCER
*Hormonaux (12%)
Pollution Atmosph
(0.5%)
ENVIRONNEMENT
Comportement
Professionnel
(2%) M°Biologiques
Tabac (24%)
(15%)
Bactéries: Hélicobacter P, Alcool (7%)
Virus: HBV, HPV, EBV Alimentation
Parasites: Schistosomes (20%?)
UV
Bases de la cancérogénèse: II-2-anomalies extrinsèques
Carcinogènes chimiques
HAP (tabac, pétrole..)
amines aromatiques (colorants, caoutchouc)
agents alkylants
Aflatoxine B1
Nitrosamines
Chlorure de vinyl
Virus
HTLV, HIV,
Ebstein Barr (EBV) (lymphome de Burkitt) HPV, HBV
Radiations ionisantes: Rx et UV
Benzopyrène
N-Nitrosodiméthylamine
Chimiothérapies
(mitomycine, Mono-adduits, pontages intra et inter-
Cisplatine, brins
Cyclophosphamide)
II-2-2-Agents promoteurs:
Phénols?
Hormones: oestrogènes
Activation de la transcription par recrutement de co-
activateurs
Parasites: paludisme + EBV Lymphome de
Burkitt?
Autres contaminants chimiques (dioxines?)
Exemple d’agents
promoteurs: Hormones et
RECEPTEURS NUCLEAIRES
Bases de la cancérogénèse: anomalies extrinsèques
Agents Promoteurs:
Xénobiotiques et récepteurs AhR (récepteur cytosolique au
groupement aryl des hydrocarbures)
Dioxine AhR interférences avec Protéines
régulatrices: Src, NFkB, Rb
AhR ARNT (Ah Receptor Nuclear Translocator)
Dimérisation et Fixation sur XenobER transcription d
divers gènes
Enzymes impliqués dans métabolisme des xénobiotiques dont
les dioxines (cytochrome p 450)
Métabolisation des HAP Produits encore + cancérigènes
(stress oxydant)
Métabolisation des oestrogènes effet anti-oestrogénique
Potentiel de cancérogénicité
R
Le Processus de Cancérisation
La Transformation Cellulaire
Caractérisation d’une cellule cancéreuse
Etapes de la cancérisation
Epigénétiques
Hyperméthylation des promoteurs de certains gènes
Modifications des histones
Anomalies extrinsèques
Facteurs de risque initiateurs
Chimiques, physiques, biologiques
Facteurs de risque promoteurs
Chimiques, hormones, parasites
Caractères multi-étapes des cancers
Étapes de la transduction du signal de prolifération
Exemples: cancer colorectal et cancer broncho-pulmonaire
Les prédispositions génétiques aux cancers
II-3- Caractères multi-étapes des cancers
2/L’instabilité génétique à
l’échelle nucléotidique (15%
CCR)
•Liée à une inactivation de
certains gènes de réparation
de l’ADN (MMR)
•Ces mutations confèrent un
phénotype mutateur qui prédispose
à la survenue de mutations dans
des gènes comportant des
répétitions de nucléotides (
caténine, Bax, récepteur du TGF …)
et impliqués dans la prolifération
cellulaire perturbations du
contrôle de la prolifération
Cancérogénèse colique par instabilité chromosomique
2-Voie K RAS
Gènes RAS: H RAS, K RAS, N RAS
Gènes RAS code pour protéine p 21 transduction du
signal prolifération
Protéines RAS liées à GTP: activées
Protéines RAS liées à GDP: inactivées (grâce aux protéines G et Ras)
car la protéine RAS a une homologie de séquence avec la protéine G
Si mutation RAS: perte de l’activité GTPase des protéines RAS
Cancérogénèse colique par instabilité chromosomique
3- Voie TGF
P 53
4
Altérations génétiques et épigénétiques des cancers
colorectaux MSI.
II-3-3 Cancérogénèse broncho-pulmonaire
Myc Ras
Rb
p14ARF
Mutagénèse/lésions ADN
II-3-3 Cancérogénèse broncho-pulmonaire
Le Processus de Cancérisation
La Transformation Cellulaire
Caractérisation d’une cellule cancéreuse
Etapes de la cancérisation
Epigénétiques
Hyperméthylation des promoteurs de certains gènes
Modifications des histones
Anomalies extrinsèques
Facteurs de risque initiateurs
Chimiques, physiques, biologiques
Facteurs de risque promoteurs
Chimiques, hormones, parasites
Caractères multi-étapes des cancers
Étapes de la transduction du signal de prolifération
Exemples: cancer colorectal et cancer broncho-pulmonaire
Les prédispositions génétiques aux cancers
II-4 Les prédispositions génétiques aux cancers
Clinique
Manifestations coliques
Polypes adénomateux multiples:
100 – x1000 dans le côlon et le
rectum
Manifestatations extra-coliques
Lésions rétiniennes (taches
blanches) visibles au fond d’œil
(70% des cas)
= Hypertrophie de l’épithélium
pigmentaire rétinien (CHRPE)
Adénomes gastriques ou duodénaux
Tumeurs desmoïdes et conjonctives
Tumeurs de la thyroïde, du cerveau
PAF Polypose adénomateuse familiale
Mutation du gène APC
Epigénétiques
Hyperméthylation des promoteurs de certains gènes
Modifications des histones
Anomalies extrinsèques
Facteurs de risque initiateurs
Chimiques, physiques, biologiques
Facteurs de risque promoteurs
Chimiques, hormones, parasites
Caractères multi-étapes des cancers
Étapes de la transduction du signal de prolifération
Exemples: cancer colorectal
Les prédispositions génétiques aux cancers
Le Processus métastatique
L’angiogénèse
Le processus de migration cellulaire
Perspectives thérapeutiques
La thérapie génique et l’immunothérapie
III-1/ L’Angiogénèse
Définition: formation de
nouveaux vaisseaux
sanguins à partir de
vaisseaux existants
(capillaires et
veinules)
Switch angiogénique:
passage de la phase
latente à la phase
agressive
Processus de l’angiogénèse
L’Hypoxie est l’élément déclencheur de la translocation HIF α et β (Hypoxia
Inducible factor) promoteurs des gènes VEGF et PDGF
Oncogènes activés:
Ras,src
p 53 désactivée
La cellule cancéreuse
L’Angiogénèse Néovaisseau
Péricyte
FGF+++
angiopoiétine-1 Tie-2
Cellule
matrice
endothéliale
thymidine extracellulaire
phosphorylase
expression de la E-cadhérine
dans les cellules épithéliales et
dans les cellules mésenchymateuses
Modifications du
cytosquelette
Perte des cytokératines (cellules épithéliales)
Vimentine dans cellules mésenchymateuses
qui deviennent flexibles)
Sécrétion de protéases et
de la motilité cellulaire
Transition Epithélium-Mésenchyme
L’action des cellules stromales est modifiée par les cellules tumorales:
Les fibroblastes modifiés sont protumorigènes (mécanisme non encore
élucidé: modifications épigénétiques des cellules stromales?)
cellule cellule
différenciée tumorale
sans potentiel sans potentiel
de division de division
nombre
nombre limité
limité de divisions
de divisions
nombre nombre
illimité illimité
de divisions de divisions
Avancées grâce à la signature transcriptionnelle des tumeurs (par des puces à ADN)
Signature transcriptionnelle : combinaison d’expression particulière de milliers de gènes
simultanément
Ramaswamy S, Ross KN, Lander ES, Golub TR. A molecular signature of metastasis in primary solid tumors.
Nature Genet 2003;33:49-54
Minn AJ, Gupta GP, Siegel PM, Bos PD, Shu W, Giri DD, et al. Genes that mediate breast cancer metastasis to
lung. Nature 2005;436:518-24
1-Explication mécanistique
Piégeage par les capillaires (Foie)
4-Environnement favorable crée par le tissu cible (niche prête à accueillir les cellules
tumorales). Cellules osseuses libèrent TGFβ ou la PTH-RP qui stimulent les
cellules cancer sein et prostate
Micrométastases
Balance
Mitose/destruction
par système immunitaire Balance
Mitose/Apoptose
Evasion
Switch
immunitaire
angiogénique
Macrométastase
Le Processus de Cancérisation
La Transformation Cellulaire
Caractérisation d’une cellule cancéreuse
Etapes de la cancérisation
Epigénétiques
Hyperméthylation des promoteurs de certains gènes
Modifications des histones
Anomalies extrinsèques
Facteurs de risque initiateurs
Chimiques, physiques, biologiques
Facteurs de risque promoteurs
Chimiques, hormones, parasites
Caractères multi-étapes des cancers
Étapes de la transduction du signal de prolifération
Exemples: cancer colorectal
Les prédispositions génétiques aux cancers
Le Processus métastatique
L’angiogénèse
Le processus de migration cellulaire
2-L’hormonothérapie
4-Perspectives thérapeutiques
La thérapie génique et l’immunothérapie
IV 1-Les molécules cytotoxiques
Agents INTERCALANTS
Molécules caractérisées par plusieurs noyaux aromatiques condensés, de dimension et
structure telles qu'elles provoquent stabilisation des coupures double brin et donc:
- un empêchement de la progression des ARN et ADN polymérases
- une inhibition de la réplication et de la transcription
Ce sont des antibiotiques: Anthracyclines
Adriamycine (doxorubicine) MDR
Toxicité cardiaque +++
Epirubicine: -active mais - toxique
Molécules entraînant des coupures au niveau ADN
= Inhibiteurs enzymatiques
Inhibiteurs topo-isomérase II
Inhibiteurs intercalants = Anthracyclines
Inhibiteurs topo-isomérase I:
La topo-isomérase I permet des coupures simples-brins
indispensables à la réplication de l’ADN
Irinotécan: C colorectaux
Topotécan: C Ovaire
3/ACTION en AVAL de l’ADN
(sur le fuseau et les micro-tubules)
— ALCALOIDES de la PERVENCHE
— poisons du fuseau: se fixent sur la tubuline et inhibent la
polymérisation en µ°tubules
Vincristine(Oncovin*) (1960)
Vinblastine (Velbé*)
Vindésine (Eldisine*)
Vinorelbine (Navelbine*)
— TAXANES
— Stabilisent le fuseau en se fixant sur les microtubules et
inhibent leur dépolymérisation (1990)
Paclitaxel (Taxol*) (écorce)
Docétaxel (Taxotère*)
(épines) hypersensibilité ++
IV-2 L’HORMONOTHERAPIE
Tumeurs hormono-dépendantes
sein oestrogènes
prostate androgènes
(tumeurs endocrines digestives)
2 stratégies :
inhibition de la sécrétion de l'hormone endogène
blocage du récepteur
HORMONOTHERAPIE
Hypothalamus
LH-RH
FSH/LH ACTH
Hypophyse
Ovaires
Testicule Surrénales
Oestrogènes Oestrogènes
Progestérone Androstène dione
Testostérone Testostérone
SEIN
PROSTATE
HORMONOTHERAPIE
SEIN:
SUPPRIMER Sécrétion d’oestrogènes
Inhibiteurs compétitifs:
Tamoxifène (Sein)
MDV3100 (Prostate)
En phase pré-ménopausique:
anti-oestrogènes: Tamoxifène
En phase post-ménopausique:
Anti-oestrogènes et anti-aromatases
HORMONOTHERAPIE
SEIN:
Anti oestrogènes
Tamoxifène:
Effet antagoniste (recrutement de co-répresseurs)
=inhibiteur compétitif des oestrogènes au niveau du récepteur à
l’oestradiol dont l’action est plus complète
=Au niveau du sein, vagin et SNC
Le TAMOXIFENE
Rappel sur les récepteurs nucléaires et les
oestrogènes
Domaine LBD
(en 12 hélices)
AA 351: permet
le recrutement
des co-activateurs
HORMONOTHERAPIE
SEIN:
Inhibition de la biosynthèse des stéroïdes surrénaliens chez la femme ménopausée,
principale source d’oestrogènes
= Antiaromatases
Inhibiteurs multikinases
Petites molécules inhibant VEGF-R et
d’autres kinases (ITKs)
Inhibiteur sélectif (Sorafenib Nexavar
Sunitinib Sutent)
de EGF-R
(Erlotinib)Tarceva
Imatinib Glivec
Lapatinib
Tyverb
(Anti Her1 et Her2)
Rituximab Mabthera
Ac anti CD20
des L°cytes B (LNH)
Les Thérapies ciblées
Molécules ciblées =
Thérapeutiques ciblées =
Ac Monoclonal (Mabs)
Momab: Ac souris (1975)
Ximab: Ac chimérique (H/souris; 1984)
Zumab: Ac humanisé (1988-91)
Mumab: humain (1994-99)
=Grosses molécules
=Cible extracellulaire
=Administration injectable
=Action irréversible: destruction du récepteur
=petites molécules
=Cible intracellulaire
=Administration orale
=Action réversible
Récepteur PDGF
Les thérapeutiques anti tyrosine kinases:
Imatinib mésylate (Glivec)
bloque l’activité TK du récepteur de PDGF: LMC et GIST
Bloque également l’activité de 3 autres kinases: Bcr, Bcr-Abl et c-kit
Récepteurs de facteurs de croissance
Molécules Anti-VEGF
2 types de molécules:
Anticorps monoclonaux: Anti VEGF direct
Bevacizumab (Avastin)
C colorectal Tx de réponses de 35 à 45%
Facteurs d’angiogénèse
THERAPIES CIBLEES
Transduction du signal
Récepteur EGF
Mb cellulaire
ERK
Facteurs de transcription
P
THERAPIES CIBLEES
THERAPIES CIBLEES
THERAPIES CIBLEES
•Correction de mutations
•inhibition d’oncogène
•utilisation de gènes suppresseurs
•Chimiothérapie « moléculaire »
•gène suicide
•chimioprotection de tissus sains
•Oncolyse virale
PERSPECTIVES THERAPEUTIQUES
Thérapie Génique
•Correction de mutations
•Résultats +
sur cultures cel
PERSPECTIVES THERAPEUTIQUES
Thérapie Génique
•Chimiothérapie « moléculaire »
•gène suicide (Ganciclovir)
•Transfert de gènes rendant les cellules sensibles à une drogue
•Objectif: Activation d’une prodrogue non toxique en drogue toxique
(uniquement dans les cellules tumorales)
•Principe: transférer in vivo dans les cellules tumorales un gène codant pour
une enzyme normalement absente du patrimoine des cellules
•Etude expérimentale
prometteuse
Résultats mitigés
PERSPECTIVES THERAPEUTIQUES
Thérapie Génique
L’immunothérapie passive
Elle constitue un volet important de ce qu’on appelle maintenant les thérapies
ciblées. L’immunothérapie passive consiste en effet à administrer au malade des
anticorps artificiels (dits « monoclonaux ») destinés à viser une cible moléculaire
précise présente de façon plus ou moins spécifique à la surface des cellules
cancéreuses..
L’immunothérapie active.
Le principe de l'immunothérapie anti-tumorale est d'améliorer le fonctionnement du
système immunitaire en agissant sur l’ des défenses et la détection des tumeurs
« furtives ». L’immunothérapie active se pratique selon plusieurs modalités
Source: Nature Medicine 19 June 2011. DOI 10.1038/nm.2390 “Broad Antigenic Coverage Induced by Viral
cDNA Library-based Vaccination Cures Established Tumors”.
Bibliographie
http://lara.inist.fr/bitstream/handle/2332/1427/INSERM_cancer
envir2008_chap1-3.pdf?sequence=2