Traduit de Anglais vers Français - www.onlinedoctranslator.

com

Production de bioéthanol à partir de déchets de pains

Saccharomyces cerevisiae

P. Datta, S. Tiwari et LM Pandey

AbstraitDans cette étude, les déchets de pain ont été utilisés comme seule source de
nutriments pour la production de glucose en utilisantAspergillus nigeret par la suite la
production d'éthanol à partir de glucose parSaccharomyces cerevisiae. Fermentation à l'état
solide des déchets de pain parAspergillus nigerconduit à la production d'une solution
multienzymatique contenant des enzymes amylolytiques et protéolytiques. Les enzymes
glucoamylase et protéase sont ensuite extraites et les activités enzymatiques sont quantifiées.
Cet extrait enzymatique brut a été utilisé pour l'hydrolyse de déchets de pain à 55 °C à 300 tr/
min. Après hydrolyse, la quantité de glucose a été déterminée par la méthode colorimétrique
à l'anthrone, et l'azote aminé libre (FAN) a été déterminé par la méthode colorimétrique à la
ninhydrine. La solution résultante contient environ 145 g/l de glucose. L'hydrolysat de pain a
ensuite été utilisé pour produire de l'éthanol ayant une concentration de 54 ± 2 g/l. Le résultat
représente le rendement en éthanol à partir de glucose, YP/S, vaut 0,37, soit un rendement de
conversion de 72 %. Ce processus est important dans l'industrie chimique durable car il
convertit les déchets alimentaires en un produit à valeur ajoutée comme l'éthanol.

Mots clésProduction de glucose • Bioéthanol • Fermentation à l'état solide • Extraction

d'enzymes • Déchets de pain

P. Datta
Centre pour l'environnement, Indian Institute of Technology, Guwahati, Inde

S. Tiwari
Le Département des biosciences et de la bioingénierie, Indian Institute of Technology,
Guwahati, Inde

LM Pandey (*)
Centre pour l'environnement, Indian Institute of Technology, Guwahati, Inde

Le Département des biosciences et de la bioingénierie, Indian Institute of Technology,

Guwahati, Inde
e-mail:lalitpandey@iitg.ernet.in

© Springer Nature Singapour Pte Ltd. 2018 125

SK Ghosh (éd.),Utilisation et gestion des bioressources, DOI
10.1007/978-981-10-5349-8_12
126 P. Datta et al.

1 Introduction

Le bioéthanol est le biocarburant le plus utilisé au XXIe siècle, et il est pro- produit par la
fermentation et la saccharification de diverses biomasses dans des installations appelées
bioraffineries où tous les bioproduits tels que les biocarburants et les produits biochimiques sont
traités (Melikoglu et al.2013a,b). Le bioéthanol est essentiellement une source renouvelable de
énergie qui réduit l'effet de serre des détritus des combustibles fossiles, et sa production à partir de
déchets de biomasse alimentaire est l'une des techniques pratiques utilisées pour la production de
bioéthanol (Moukamnerd et al.2013). Alors que le gaspillage alimentaire apparaît comme l'un des
problèmes majeurs à l'échelle mondiale, en raison de l'augmentation de la population, on s'attend à
ce qu'elle double au cours des 25 prochaines années à venir. Les déchets alimentaires contiennent
également une grande partie des déchets solides municipaux dans des pays comme les États-Unis,
Hong Kong et Singapour. Parmi les nombreuses matières alimentaires qui sont gaspillées, le pain est
le plus courant dans les Pays européens et asiatiques. Au Royaume-Uni, le gaspillage alimentaire est
d'environ 1,2 millions de tonnes par an, alors qu'au Japon, il est d'environ 45,1 millions de tonnes par
an (Leung et al.2012; Melikoglu et al.2013a,b; Moukamnerd et al.2013; Kirane et al.2014).
Traditionnellement, le bioéthanol est fabriqué par différents procédés d'hydrolyse et de
fermentation qui comprennent de nombreuses étapes et procédés qui en font une affaire
coûteuse (Moukamnerd et al.2013). Par conséquent, pour réduire les coûts, une nouvelle
méthode impliquant l'hydrolyse enzymatique est utilisée, dans laquelle une partie des déchets
de pain est utilisée pour la fermentation à l'état solide. Plus tard, les pains restants sont
encore utilisés pour la production d'hydrolysat qui est ensuite fermenté pour produire de
l'éthanol. Cette méthode a été développée par l'Université de Manchester au Royaume-Uni
(Melikoglu et al.2013a,b).
Pour une production élevée d'éthanol, le glucose produit doit également être en grande quantité,
ce qui peut être obtenu en augmentant la concentration en enzyme, la température et la vitesse
d'agitation et également en augmentant son temps d'hydrolyse. Par rapport à la culture discontinue,
l'utilisation de la culture discontinue alimentée a théoriquement augmenté le rendement de
conversion du glucose de près de 92 %, et alternativement la fermentation à l'état solide peut être
utilisée pour réduire le risque de répression catabolique (Kiran et al.2014). Bien que des enzymes
disponibles dans le commerce puissent être utilisées pour l'hydrolyse enzymatique, cela augmente
les coûts inévitables. table. Le pain peut être considéré comme optimal pour la fermentation à l'état
solide en raison de sa structure poreuse et composition nutritive. La surface solide du pain qui est
riche en nutriments est sensible à la croissance de micro-organismes à sa surface (Melikoglu et al.
2013a,b).
L'enzyme glucoamylase, largement utilisée pour l'hydrolyse de l'amidon dans les
bioraffineries, est produite par un champignonAspergillus. Les fermentations à l'état solide
ressemblent beaucoup à l'habitat naturel desAspergillusoù il sécrète également une enzyme
protéase en quantités suffisamment élevées pour assimiler et consommer des substrats
protéiques (Leung et al.2012; Melikoglu et al.2013a,b). Ces enzymes sont utilisées pour
hydrolyser la farine sans gluten en flux riches en carbone et en azote. L'hydrolysat peut être
facilement converti en éthanol par le processus de fermentation à l'aide de levure de bière
Saccharomyces cerevisiaequi produit une grande quantité d'éthanol (Leung et al.2012).
Production de bioéthanol à partir de déchets de painsSaccharomyces cerevisiae 127

2. Matériels et méthodes

2.1 Micro-organisme

La souche fongiqueAspergillus nigera été utilisé pour la production de pains de déchets riches
en glucoamylase et en protéase qui ont ensuite été utilisés dans cette expérience. Les
informations concernant le stockage, la sporulation et la préparation de l'inoculum de cette
souche ont été étudiées dans une publication précédente.Saccharomyces cerevisiaea été
utilisé ici pour la production de bioéthanol.

2.2 Les déchets de pain comme matière première

Les déchets de pain ont été collectés à la cantine de l'Indian Institute of Technology,
Guwahati (IITG). La composition des déchets de pain (teneur en humidité, amidon, azote
organique total, protéines et phosphore total) a été obtenue à partir de cette publication
(Leung et al.2012).

2.3 Fermentation des déchets solides

Les tranches de pain perdu ont été coupées en tranches d'environ 1 cm3en taille. Quinze grammes de cubes
de pain ont été conservés dans une boîte de Pétri de 10 cm et stérilisés par autoclavage à 120 ° C pendant 30
minutes avant la fermentation à l'état solide. Les spores fongiques ont ensuite été diluées et réparties
uniformément sur les surfaces du pain et conservées pour incubation à 30 ° C pendant 3 à 4 jours.

2.4 Hydrolyse enzymatique

Un réacteur d'un litre avec une turbine d'agitation et un contrôleur de température automatique a
été utilisé à cette fin d'hydrolyse enzymatique. Une fois la configuration expérimentale
complètement stabilisée à la température souhaitée, différentes quantités de déchets de pain ont été
mélangées dans 500 ml d'eau pendant 20 min. Ensuite, les spores fongiques de la fermentation à
l'état solide ont été ajoutées dans le récipient de réaction. L'agitation a été réglée à 300 tr/min et la
température a été maintenue à 55°C. Un échantillon a été prélevé de ce mélange réactionnel toutes
les heures jusqu'à 24 h pour l'estimation du glucose et le calcul du FAN. Ensuite, les échantillons ont
été centrifugés à 10 000 tr/min à 15 °C et le surnageant a été filtré à l'aide de Papier filtre Whatman.
128 P. Datta et al.

2.5 Fermentation microbienne

Saccharomyces cerevisiaea été utilisé dans la fermentation pour la production de bioéthanol. La

fermentation a été réalisée avec 5% ainsi que 10% de taille d'inoculums pour contrôler une meilleure
production d'éthanol. L'hydrolysat de pain qui a été obtenu après l'hydrolyse enzymatique a été
traité comme milieu de production dans cette étape. Après le transfert de l'inoculum dans
l'hydrolysat, les flacons ont été maintenus dans un incubateur agitateur pour une fermentation à
28°C. Le régime était de 180 jusqu'à 12 h, qui a été réglé à 120 par la suite. Des échantillons ont été
prélevés toutes les 6 h pendant 24 h pour vérifier le moment optimal pour la production d'éthanol. Le
pH de chaque échantillon a été vérifié simultanément pour observer s'il y avait une quelconque
production d'acide. La densité optique de chaque échantillon a également été vérifiée.

2.6 Extraction enzymatique

Lorsque la fermentation à l'état solide est terminée, les déchets de pains ont été mis en
suspension dans eau distillée pour préparer un mélange de concentration 50 g/l. Le mélange
a été mélangé pendant 30 min puis centrifugé pendant 10 min à 2 500 g. Après cela, le
surnageant a été filtré par du papier filtre Whatman pour obtenir le filtrat qui contient les
enzymes (Melikoglu et al.2013a,b).

2.7 Techniques analytiques

2.7.1 Estimation du glucose par la méthode colorimétrique Anthrone

L'étalon de glucose a été préparé dans la plage de 1 à 10 mg/10 ml. Le réactif anthrone a été
préparé en dissolvant 200 mg d'anthrone dans 100 ml d'H concentré2DONC4. Quatre millilitres
de réactif anthrone ont été ajoutés dans chacune des solutions étalons de glucose et bien
mélangés. Après le mélange, la couleur de la solution vire au vert bleuâtre. Ensuite, les
échantillons ont été maintenus dans un bain d'eau bouillante pendant 10 minutes et refroidis
à température ambiante. La densité optique a été mesurée à 620 nm et la courbe standard a
été tracée (Sumbhate et al.2012).

2.7.2 Analyse de l'azote aminé libre (FAN)

La concentration en FAN a été mesurée en suivant la colorimétrie à la ninhydrine méthode.

Une solution de glycine dans l'eau a été utilisée comme solution standard (MB013-500G).
Selon le protocole de la convention européenne de la brasserie, 0,1085 g de pur glycine (C2H5
NON2; MW, 75,07 ; pureté, 99 %) a été dissous dans 100 ml d'eau déminéralisée
Production de bioéthanol à partir de déchets de painsSaccharomyces cerevisiae 129

de l'eau dans une fiole jaugée. Cette solution a une concentration en FAN de 200 ppm. A partir de
cette solution mère, des solutions à 100 ppm, 50 ppm et 25 ppm ont été diluées et une courbe
standard a été préparée. Ensuite, 1 ml de solution de ninhydrine a été ajouté à 5 ml d'échantillon,
suivi d'une agitation douce pendant 4 à 7 min à 80 à 100 ° C. La réaction de la ninhydrine avec les
acides aminés de l'échantillon a entraîné la formation d'un complexe de Ruhemann de couleur
violette. Après refroidissement à température ambiante dans un bain d'eau froide, l'absorbance a été
mesurée à 570 nm, et les concentrations des échantillons ont été calculées à partir de la courbe
standard (Lie1973).

2.7.3 Estimation de l'éthanol par méthode colorimétrique

Des solutions étalons d'éthanol ont été préparées dans la plage de 1,6 à 12,8 mg/ml. Cinq
millions 1 litre de solution de bichromate de sodium (4 g/100 ml) ont été ajoutés à chacun des
15 ml de solutions étalons. Puis 25 ml de H2DONC4a été ajouté dans chaque solution. Le pH de
la solution a été maintenu par 0,2 M de tampon acétate ayant une valeur de pH de 4,3.
Ensuite, le mélange a été secoué pendant 1 min et maintenu en incubation pendant 2 h. Après
cela, un produit de couleur verte a été observé, la DO des solutions a été prise à 578 nm et, à
partir des lectures, la courbe standard a été calibrée. Les échantillons expérimentaux ont été
traités de la même manière, suivis d'une mesure de la DO, puis la concentration d'éthanol a
été déterminée à partir de la courbe standard.

2.7.4 Quantification de l'activité enzymatique et de la précipitation de l'acétone

L'hydrolysat de pain contient principalement de la glucoamylase et de l'enzyme protéase. Une

unité d'activité glucoamylase peut être définie en mesurant la quantité d'enzyme nécessaire
pour libérer 1 g de glucose en 1 min dans les conditions de dosage. Une unité d'activité
enzymatique protéolytique peut être mesurée par la quantité d'enzyme nécessaire pour
libérer 1 mg d'azote aminé libre en 1 min dans des conditions de dosage.
Après la fermentation à l'état solide, l'extrait brut a été mis en suspension dans de
l'acétone dans des rapports de 1: 0, 5 à 1: 4 pour vérifier à quelle proportion la précipitation se
produit bien. Après 1 h lorsque l'extrait est complètement précipité, le mélange est centrifugé
à 10 000 g pendant 30 min à 4 °C. Après récolte, les enzymes précipitées ont été col- léché et
mis en suspension dans du tampon Tris-HCl (0,05 M, pH = 6,5) (Negi et Banerjee 2010).
130 P. Datta et al.

3 Résultat et discussion

3.1 Composition des déchets de pain

Les déchets de pain sont des déchets alimentaires très nutritifs, riches en carbone
organique et azote. Selon Delgado et al. (2009), 100 g de pain blanc contiennent
près de 50 g de glucides (47 g sous forme d'amidon), 37 g d'eau et environ 8 g de
protéines, soit 95 % du poids total du pain.

3.2 Production de glucose comme milieu de fermentation générique

Chiffre1montre le profil de génération de glucose par rapport au temps avec une

concentration de pain de 30 % (p/v). La production de glucose a presque atteint sa saturation
vers 20 h. Il suffit donc de poursuivre cette réaction à 55 °C pendant 24 h pour une
dégradation complète des nutriments principalement la dextrine qui est présente dans le
pain. La concentration en glucose en fin d'hydrolyse a été trouvée à 145 ± 10 g/l soit 0,59 g de
glucose par gramme de pain.

3.3 Analyse des données sur l'azote aminé libre pour mesurer
l'azote assimilable total

Chiffre2montre le profil de concentration d'azote aminé libre (FAN) avec le temps. La méthode
colorimétrique à la ninhydrine mesure l'azote total assimilable. Une concentration très faible
et également très élevée de FAN retarde la croissance de la levure et par la suite

160
140
Concentration de glucose (g/l)

120
100
80
60
40
20
0
0 5 dix 15 20 25 30
Temps (Heures)

Fig. 1Formation de glucose avec le temps lors de l'hydrolyse enzymatique des déchets de pain
Production de bioéthanol à partir de déchets de painsSaccharomyces cerevisiae 131

Figure 2Formation de FAN avec le temps lors de l'hydrolyse enzymatique des déchets de pain

la production d'éthanol (Wang et al.2007). Le FAN est donc un paramètre très important lorsque la
production de bioéthanol est la principale préoccupation. Ici, l'hydrolyse enzymatique des déchets de
pain entraîne la production de 270 ± 25 ppm de FAN à 55 °C avec une concentration de pain de 30 %.

3.4 Production de bioéthanol en utilisant l'hydrolysat de déchets de pain comme

substrat

Dans ce processus de fermentation, la levure et diverses enzymes convertissent les glucides

fermentescibles (dextrine, maltotriose, maltose, glucose) des déchets de pain en éthanol. D'autres
sous-produits comme l'acide lactique, l'acide acétique et l'acide carbonique sont également produits,
ce qui peut parfois augmenter le pH (Wang et al.2007)(Figue.3).

3.5 Génération de bioéthanol et profil de consommation de

glucose ultérieur

D'après les données, on observe que la production d'éthanol augmente progressivement avec le
temps et que la concentration de glucose diminue avec le temps. La concentration finale en éthanol
s'est avérée être de 54 ± 2 g/l. Cela indique le rendement de l'éthanol à partir du glucose, YP/S, de 0,37
par rapport à un rendement théorique de 0,511, soit un rendement de conversion de 72 %. En cas de
production d'éthanol, si le profil de pH est pris en compte, il y a une diminution presque progressive
du pH (voir Fig.4) en raison de la production de très petites quantités d'acide acétique, d'acide
butyrique et d'acétone (Yang et al.nd).
132 P. Datta et al.

Figure 3 Formation d'éthanol et épuisement du glucose avec le temps pendant la fermentation

Figure 4Modification de la DO et du pH pendant la fermentation de l'éthanol

3.6 Densité optique et profil de pH avec le temps

Chiffre4représente une augmentation initiale de la concentration de biomasse jusqu'à 6 h de concentration

d'éthanol correspondante de 8,4 ± 1 g/l, et après 6 h, la concentration de biomasse diminue
progressivement. On constate que la valeur du pH pendant la fermentation diminue avec l'augmentation du
temps, confirmant la production d'acides pendant la fermentation anaérobie de l'éthanol.
Production de bioéthanol à partir de déchets de painsSaccharomyces cerevisiae 133

3.7 Extraction et quantification d'enzymes

Après la fermentation à l'état solide des déchets de pain et la précipitation à l'acétone

des extraits bruts, l'extrait enzymatique brut a été quantifié et il était d'environ 5 ± 1 g.
L'activité de l'enzyme brute s'est avérée être de 0,01 unité.

4. Conclusion

L'article a démontré que les déchets alimentaires tels que le pain peuvent également être utilisés comme
unique matière première de fermentation pour produire de l'éthanol. Fermentation à l'état solide des
déchets de pain parAspergillus nigeront produit des enzymes brutes, qui ont été utilisées pour l'hydrolyse
des déchets de pain pour produire du glucose et du FAN. Après hydrolyse, 145 ± 10 g/l et 270 ± 20 g/l de
glucose et de FAN ont été produits, respectivement. L'hydrolysat de pain a ensuite été utilisé pour produire
de l'éthanol par fermentation de levure et a donné une concentration de 54 ± 2 g/l, c'est-à-dire un
rendement en éthanol à partir de glucose, YP/S, comme 0,37. Le rendement peut être encore amélioré en
optimisant le paramètre de fonctionnement. La présente étude démontre que non seulement l'éthanol, mais
d'autres produits à valeur ajoutée peuvent également être produits à partir de déchets de pain.

ReconnaissanceLes auteurs tiennent à exprimer leur profonde gratitude au Centre pour la Département de
l'environnement et des biosciences et de la bioingénierie de l'Institut indien de technologie pour avoir fourni
toutes les facilités nécessaires à la réalisation de ce travail.

Les références

Delgado R, Castro A, Vázquez M (2009) Une évaluation cinétique de l'hydrolyse enzymatique de

pomme de terre (Solanum tuberosum). LWT-Food Sci Technol 42(4):797–804
Kiran EU, Trzcinski AP, Ng WJ, Liu Y (2014) Bioconversion des déchets alimentaires en énergie : un examen.
Carburant 134:389–399
Leung CCJ, Cheung ASY, Zhang AY-Z, Lam KF, Lin CSK (2012) Utilisation des déchets de pain pour
production fermentative d'acide succinique. Biochimie Eng J 65: 10–15
Lie S (1973) La méthode EBC-NINHYDRINE pour la détermination de l'azote alpha-aminé libre.
J Inst Brew 79(1):37–41
Melikoglu M, Lin CSK, Webb C (2013a) Études cinétiques sur la solution multi-enzyme produite
par fermentation à l'état solide de déchets de pain par Aspergillus awamori. Biochem Eng J 80:76–82
Melikoglu M, Lin CSK, Webb C (2013b) Optimisation par étapes de la production d'enzymes dans
état de fermentation des déchets de pain. Processus Bioprod Alimentaire 91(4):638–646 Moukamnerd C,
Kawahara H, Katakura Y (2013) Étude de faisabilité de la production d'éthanol à
déchets alimentaires par fermentation solide continue consolidée. Système de bioénergie J Sustain
3(2):143–148
Negi S, Banerjee R (2010) Optimisation des paramètres de culture pour améliorer la production d'amylase
et protéase d'Aspergillus awamori en une seule fermentation.Afr J Biochem Res 4(3):73–80
134 P. Datta et al.

Sumbhate SV, Nayak S, Goupale D, Tiwari A, Jadon RS (2012) Colorimetric method for the esti-
ration d'éthanol dans les boissons alcoolisées. J Anal Tech 1(1):1–6
Wang R, Ji Y, Melikoglu M, Koutinas A, Webb C (2007) Optimization of innovative ethanol pro-
duction à partir du blé par la méthodologie des surfaces de réponse. Processus Saf Environ Prot 85(5):404–412
Yang J, Lee PJ, Di Gioia AJ (nd) Analyse HPLC rapide pour les procédés de fermentation d'éthanol