Bourgeois 2016

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CR Chimie xxx (2016) 1e11
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Comptes Rendus Chimie
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Article complet/Mémoire
L'ortie (Urtica dioica L.) comme source de composés
phytochimiques antioxydants et antiâge pour les applications cosmétiques
L'ortie (Urtica dioica L.), une source de produits antioxydants et
^
phytochimiques antiâge pour des applications en cosm étique
un, b, 1
Capucine Bourgeois , Emilie A. Leclerc a, b, 1 , Cyrielle Corbin a, b, 1 , Jean ,
un, b, c
Valérie Serrano d Raymond Vanier Chantal e
€
Joël Doussot , ,
d un, b Pichon f, b Daniel Auguin Éric Laine a, b
JeanMarc Seigneuret , , , ,
Christophe Hano a, b, *
^
un
Laboratoire de Biologie des Ligneux et des Grandes Cultures, LBLGC EA 1207, Université d'Orléans, Pôle Universitaire d'Eure et Loir,
21, rue de LoignylaBataille, 28000 Chartres, France
b
Bioactifs et Cosmétiques, GDR 3711 COSMACTIFS, CNRS et Université d'Orléans, rue de Chartres, 45100 Orléans, France
c
Ecole Sciences Industrielles et Technologies de l'Information (SITI), Département Chimie Alimentation Santé Environnement Risque
(CASER), CNAM Paris, France
d
Alban Muller International, AMI, 9, rue JeanMonnet, 28630 FontenaysurEure, France
e
Plantes Médicinales et Aromatiques 28, PMA28, 1, place de l'Eglise, 28140 Varize, France
F
Centre de Biophysique Moléculaire, CBM UPR4301, CNRS Orléans, rue CharlesSadron, 45071 Orléans, France
informations sur l'article abstrait
L'ortie (Urtica dioica L.) est une plante herbacée vivace utilisée depuis des siècles dans la médecine
Historique des articles :
traditionnelle. Plus récemment, les extraits d'ortie ont également été utilisés en cosmétique en raison des
Reçu le 26 février 2016
nombreux avantages de leur application topique pour la santé de la peau. Leur action antiâge potentielle est
Accepté le 22 mars 2016
Disponible en ligne xxxx
particulièrement intéressante et est principalement attribuée à leur capacité antioxydante. Ici, en utilisant une
approche de conception expérimentale et une analyse de regroupement, nous avons lié la composition
phytochimique des extraits d'ortie à leurs activités biologiques. Cette approche a confirmé la capacité
antioxydante des extraits d'ortie et a fourni la première preuve d'un autre mécanisme de leur potentiel anti
âge impliquant l'inhibition des activités enzymatiques, telles que l'élastase et la collagénase. Nous avons
attribué ces effets inhibiteurs à l'acide ursolique et à la quercétine présents dans les extraits d'ortie. Nos
Mots clés:
résultats ont également démontré la possibilité d'extraire de manière différentielle l'acide ursolique, la
Antiâge
Antioxydant
quercétine et d'autres composés phénoliques pour obtenir un extrait avec une forte capacité antioxydante et
des activités antiâge à la fois visàvis de l'élastase et de la collagénase. Cela pourrait être particulièrement
Inhibiteur de la collagénase
Inhibiteur de l'élastase intéressant pour les applications cosmétiques des extraits d'ortie. © 2016 Académie des sciences. Edité par
Ortie (Urtica dioica) Elsevier Masson SAS. Ceci est un article en libre accès sous licence CC BYNCND (http://
Quercétine creativecommons.org/licenses/byncnd/4.0/).
Acide ursolique
* Auteur correspondant.
Adresse email : hano@univorleans.fr (C.Hano).
1
Ces auteurs ont participé à ce travail à part égale.
http://dx.doi.org/10.1016/j.crci.2016.03.019 16310748/
© 2016 Académie des sciences. Edité par Elsevier Masson SAS. Ceci est un article en libre accès sous licence CC BYNCND ( http://creativecommons.org/licenses/byncnd/4.0/ ).
Merci de citer cet article sous presse comme suit : C. Bourgeois, et al., L'ortie (Urtica dioica L.) comme source de phytochimiques antioxydants
et antiâge pour les applications cosmétiques, Comptes Rendus Chimie (2016), http://dx .doi.org/10.1016/j.crci.2016.03.019
2 C. Bourgeois et al. / CR Chimie xxx (2016) 1e11
CV
Mots clés :
L'ortie (Urtica dioica L.) est une plante herbacée vivace utilisée depuis des si ecles en médecine traditionnelle. Plus récemment, les extraits d'ortie ont été également
Acide ursolique
^
utilisés dans des produits cosmétiques en raison de nombreux effets bénéfiques en efiques de leurs applications topiques sur la santé de la peau. En particulier, leur
Antiâge
Antioxydant action potentielle antiâge présente un fort int er et et est essentiellement attribuée à leur fort pouvoir antioxydant.
^
Inhibiteurs de collagénase
^
Inhibiteurs d'élastase
Ortie (Urtica dioica) Dans cette étude, en utilisant un plan d'expérience et une analyse hiérarchisée, nous avons connecté la composition phytochimique d'extraits d'ortie à leurs activités
Quercétine
biologiques. Cette approche nous a permis de confirmer la capacité antioxydante des extraits d'ortie, mais aussi de proposer la première preuve d'un autre mécanisme
de leur potentiel antiâge impliquant l'inhibition d'activités enzymatiques. En effet, nos travaux ont démontré que ce second mécanisme implique l'inhibition d'enzymes
de dégradation de la matrice extracellulaire telles que l'élastase et de la collag enase, et ces effets s'attaquants ont et e attribuables principalement à l'acide ursolique
^
et la querc etine présente dans les extraits d'ortie. Nos resultats ont egalement mis en evidence la possibilit e d'extraire de maniere diff erentielle l'acide ursolique, la
querc etine et d'autres compos es ph enoliques pour obtenir un extrait avec une forte capacite antioxydante et une activit e antiage au travers de l'inhibition à la fois
de l'élastase et de la collag enase, ce qui pourrait être d'un inter et particulier pour les applications cosmétiques des extraits d'ortie. © 2016 Académie des sciences.
Edité par Elsevier Masson SAS. Ceci est un article en libre accès sous licence CC BYNCND (http://creativecommons.org/licenses/byncnd/4.0/ ).
1. Introduction Cependant, l'action antioxydante de la quercétine n'est pas simple, et
son activité prooxydante dans certaines circonstances est largement
L'ortie (Urtica dioica L.) est une plante sauvage très répandue qui documentée dans la littérature [10,11]. L'état prooxydant de la
est également cultivée pour des usages spécifiques. Cette vivace quercétine peut fournir des informations sur son apparente mutagénicité
herbacée appartenant à la famille des Urticacées est très commune in vitro [12]. En raison de ces effets secondaires, la quercétine n'est
dans les régions à climat tempéré. Son nom de genre est dérivé du plus utilisée en cosmétique. Ici, une approche de conception factorielle
latin urere, qui signifie piquer, et plus précisément de uro, qui signifie a été utilisée pour produire des extraits avec des concentrations
brûler par frottement. Ses feuilles brillantes, vert foncé et dentelées contrastées d'acide ursolique et de quer cétine. Leurs actions
ainsi que sa tige sont couvertes de poils glandulaires dressés antioxydantes et antiâge (anticollagénase et antiélastase)
contenant de l'acide formique et de l'histamine, responsables de ces correspondantes ont été évaluées. Couplée à une analyse de
effets désagréables. Cette plante est utilisée depuis des siècles dans clustering hiérarchique, cette approche a permis d'attribuer un rôle à
la médecine traditionnelle pour soigner un large éventail de maladies l'acide ursolique et à la quercétine et de proposer un mécanisme
ou de troubles tels que l'arthrite, les rhumatismes et l'eczéma [1]. Une d'action antiâge des extraits d'ortie.
utilisation plus récente des extraits polaires de racines d'ortie est le
traitement de l'hyperplasie bénigne de la prostate [2] tandis que ses
extraits foliaires présentent une puissante action antiinflammatoire 2. Matériels et méthodes
[3]. Les extraits d'ortie sont également utilisés en cosmétique et leur
application topique présente de nombreux bienfaits pour la santé de 2.1. Matériel végétal
la peau (antiinflammatoire et antigonflement par exemple). L'ortie
est également un composant courant du shampooing. Or, l'une des Des graines d'Urtica dioica L. ont été obtenues auprès de Nova
actions les plus intéressantes des extraits d'ortie pour les applications
Flore et les plantules issues de semis ont été cultivées en salle
cosmétiques résulte de leurs propriétés antioxydantes et antiâge.
phytotronique à 25 C sous une photopériode de 16 h (30 mmol m2 s
L'ortie accumule un certain nombre de piégeurs d'espèces réactives 1
de rayonnement photosynthétiquement actif).
de l'oxygène, qui peuvent réduire les dommages des radicaux libres
Des plantes entières âgées de trois mois ont été collectées et
sur la peau et ont donc des effets antiâge [4e6]. À ce jour, la ou les
lyophilisées avant extraction.
molécules responsables de cette action et sa raison d'être sont
largement inconnues. Outre l'action antioxydante, l'activité antiâge
pourrait également être due à l'inhibition d'enzymes dégradantes,
telles que l'élastase ou la collagénase, dont les actions entraînent une 2.2. produits chimiques et réactifs
perte d'élasticité de la peau entraînant des rides [7] .
Tous les solvants d'extraction (eau, éthanol et acétonitrile) utilisés
Parmi les molécules présentes dans les extraits d'ortie, l'acide dans la présente étude étaient de qualité analytique et ont été obtenus
ursolique et la quercétine [5,6] sont les plus intéressantes pour le auprès de Thermo Scientific. Les étalons d'acide ursolique et de
développement de l'action antiâge. L'acide ursolique, qui s'est quercétine provenaient de SigmaAldrich. Tous les réactifs pour la
principalement accumulé dans les racines d'ortie, est une élastase détermination des composés phénoliques totaux, de l'activité
bien connue dans l'inhibiteur [8] , tandis que la quercétine, qui s'est antioxydante et de l'activité de la collagénase et de l'élastase
principalement accumulée dans les feuilles, est l'un des antioxydants les plus iprovenaient
mportants [9].
de SigmaAldrich.
Merci de citer cet article sous presse comme suit : C. Bourgeois, et al., L'ortie (Urtica dioica L.) comme source de phytochimiques antioxydants et anti
âge pour les applications cosmétiques, Comptes Rendus Chimie (2016), http://dx .doi.org/10.1016/j.crci.2016.03.019
C. Bourgeois et al. / CR Chimie xxx (2016) 1e11 3
2.3. Procédure d'extraction la procédure de validation étaient satisfaisantes (moins de 0,65%). La
précision a été évaluée par cinq injections du même échantillon le
L'échantillon (500 mg de poudre lyophilisée de plante entière) a même jour (variation intrajournalière) et sur 5 jours consécutifs
été mis en suspension dans 20 mL d'un solvant d'extraction et (variation interjournalière). La répétabilité a été évaluée en appliquant
homogénéisé à l'aide d'un mélangeur (Ultraturrax, T25 basic) pendant l'ensemble de la procédure d'extraction trois fois au même lot de
1 min à 19 000 rpm. L'addition de 1 M d'acide chlorhydrique a été matériau. La récupération a été déterminée par addition standard à 4
utilisée pour hydrolyser les liaisons glycosidiques afin de simplifier niveaux choisis (0 ng, 10 ng, 50 ng et 100 ng ajoutés à des aliquotes
l'analyse du chromatogramme. La durée d'extraction, la température du même extrait) et le pourcentage de récupération résultant a été
et la concentration d'éthanol ont été choisies comme variables pour déterminé après l'ensemble du processus d'extraction.
obtenir des extraits d'ortie avec des concentrations contrastées
d'acide ursolique, de quercétine et d'autres composés phénoliques.
Ces 3 variables indépendantes ont été codées à 3 niveaux (tableau 2.6. Détermination de la teneur totale en composés phénoliques
1) et 27 lots ont été préparés en utilisant une approche expérimentale
factorielle complète de 33 (tableau 2).
Le contenu phénolique total a été déterminé en utilisant le réactif
2.4. Analyse HPLC et LCeMS de FolinCiocalteu (Sigma) comme décrit dans [13]. Toutes les
mesures ont été réalisées en triple. L'acide gallique (Sigma) était
L'acide ursolique et la quercétine ont été déterminés à l'aide d'un l'étalon pour la courbe d'étalonnage et les teneurs totales en composés
système HPLC Varian équipé d'un dégazeur en ligne (Metachem phénoliques étaient exprimées en mg d'équivalents d'acide gallique
Degasit), d'un échantillonneur automatique (Prostar 410) et d'un pour 100 g de DW.
détecteur à barrette de photodiodes (PDA, Prostar 335). La
séparation a été réalisée à 35°C sur une colonne RP18 (250 4,0 mm 2.7. Activités antioxydantes
di, 5 mm ; Purospher Merck). La phase mobile était composée
d'acétonitrile (solvant A) et d'eau ultrapure acidifiée à 0,1 % (v/v) La capacité antioxydante de chaque extrait d'ortie a été déterminée
d'acide formique (solvant B). La composition de la phase mobile a par les méthodes du pouvoir réducteur/antioxydant ferrique (FRAP)
varié au cours d'une course d'une heure selon un gradient linéaire et de la capacité antioxydante réductrice cuivrique (CUPRAC) décrites
allant d'un mélange 5:95 (v/v) à 100:0 (v/v) des solvants A et B, respectivement dans [14] et [ 15] . Toutes les mesures ont été
respectivement, à un débit débit de 0,6 ml/min. La détection a été effectuées en triple et la capacité antioxydante de chaque extrait a
effectuée à 210 et 254 nm. L'acide ursolique et la quercétine ont été été exprimée en capacité antioxydante équivalente Trolox C (TEAC)
identifiés par comparaison avec des étalons authentiques, des ajouts mesurée avec une concentration standard de 1 mM de Trolox C.
d'étalons et une analyse LCeMS effectuée sur un Water 2695 Alliance
couplé à un spectromètre de masse quadripolaire unique ZQ.
2.8. Dosage de la collagénase
Les données LCESIMS ont été collectées dans les modes positif et
négatif. L'acquisition et le traitement des données ont été réalisés La collagénase de Clostridium histolyticum (Sigma) a été utilisée
avec le logiciel MassLynx 4.0. L'acide ursolique et la quercétine ont pour ce test et l'activité de la collagénase a été estimée par
été quantifiés par rapport à des courbes d'étalonnage à 5 points (tableau 3). spectrophotométrie en utilisant N[3(2furyl)acryloyl]Leu GlyPro
Ala (FALGPA ; Sigma) comme substrat et après la diminution de
2.5. Validation chromatographique absorbance de FALGPA à 335 nm pendant 20 min.
Chaque mesure a été réalisée en triple et le dosage a été réalisé
La séparation HPLC a été validée pour la précision, la répétabilité selon le protocole décrit dans [7]. L'activité anticollagénase a été
et l'exactitude intrajournalière et interjournalière. Les corrélations exprimée en pourcentage d'inhibition par rapport au témoin
linéaires entre la surface du pic et les concentrations standard se correspondant (ajout du même volume de solvant d'extraction) pour
sont avérées élevées, de l'ordre de 50 à 1 000 ng/mL pour le DTC. chaque extrait ou en valeur d'IC50 pour les standards d'acide ursolique
L'équation linéaire résultante et la valeur R2 pour un graphique et de quercétine à l'aide du logiciel ED50plus v1.0.
d'étalonnage à 5 points étaient> 0,999, et la pente de cinq répétitions
du graphique d'étalonnage couvrant la plage analytique pour les
normes d'acide ursolique et de quercétine ne variait pas de plus de 2.9. Dosage de l'élastase
1 % en termes de RSD sur une période de quatre semaines.
La LOD (signal/bruit ¼ 3) et la LOQ (signal/bruit ¼ 10) ont également L'élastase pancréatique porcine (Sigma) a été utilisée pour ce test
été déterminées. Les RSD des temps de rétention pendant et l'activité de l'élastase a été estimée
Tableau
1 Paramètres de validation de la méthode HPLC développée pour la quantification de l'acide ursolique et de la quercétine dans les extraits d'ortie.
Équation de régression R2 Gamme linéaire LOD (ng) LOQ (ng) Précision (%RSD) Répétabilité (% RSD) Récupération (%)
Intrajournalier Interjournalier
Acide ursolique Y ¼ 0,213x ± 0,1107 0,998 50e1000 Quercétine y ¼ 1.15 3,84 0,48 0,94 3.51 103.7

0,1126x ± 2,1546 0,999 50e1000 0,42 1.38 1.24 2,64 2,70 94,3
Les valeurs sont la moyenne et les RSD de 5 répétitions.
Merci de citer cet article sous presse comme suit : C. Bourgeois, et al., L'ortie (Urtica dioica L.) comme source de phytochimiques antioxydants et antiâge pour les
applications cosmétiques, Comptes Rendus Chimie (2016), http://dx .doi.org/10.1016/j.crci.2016.03.019
Tableau par spectrophotométrie en utilisant du NSuccAlaAlaAla
2 Niveaux codés et valeurs expérimentales des 3 variables indépendantes. pnitro anilide (AAAVPN; Sigma) comme substrat et après
Variables indépendantes Unités de code Niveaux des variables codées la libération de pnitroaniline à 410 nm. Chaque mesure a
1 0 þ1
été réalisée en triple et le dosage a été réalisé selon le
protocole décrit dans [7]. L'activité antiélastase a été
Temps (min) X1 30 90 120
25 45 65
exprimée en pourcentage d'inhibition par rapport au témoin
Température (°C) X2
EtOH (% v/v) X3 50 75 100 correspondant (ajout du même volume de solvant
d'extraction) pour chaque extrait ou en valeur d' IC50 pour
Tableau
3 Valeurs expérimentales mesurées déterminées pour les points de conception individuels.
un b c d
Conditions d'extraction Phytochimiques Activités antiâge Activités antioxydantes
Grouper #
X1 X2 X3 Acide ursoliqueQuercétinePhénoliques Collagénase Elastase CUPRAC FRAP
1 1 1 1 5,00 35,58 86,90 16.23 12.75 0,58 0,27
2 1 1 0 3,76 33,67 367,74 14,97 11h38 1,95 0,53
3 1 1 1 0,28 2h30 278.10 1.03 0,80 1.37 0,57
4 1 0 1 4.13 28.06 283.14 12,87 10.19 1.40 0,47
5 1 0 0 3,81 27,23 410,07 12h42 9,75 2.17 0,60
6 1 0 1 1,98 7,83 317,96 3,92 3.42 1,57 0,60
7 1 1 1 14h38 17,64 217,74 12.81 14h65 1.16 0,31
8 1 1 0 14.02 11,27 372,55 10.12 12.74 1,98 0,54
9 1 1 1 2,93 12,68 362,04 6.24 5.35 1,85 0,69
dix 0 1 1 3.19 22,20 225,77 10h15 8.00 1.20 0,38
11 0 1 0 2.43 29,42 464,45 12.74 9h35 2.22 0,58
12 0 1 1 0,99 3,57 265,40 1,83 1.62 1.33 0,55
13 0 0 1 5.21 30,55 215,77 14h30 11.59 0,77 0,27
14 0 0 0 4.47 25,26 482,34 11.89 9.70 2.71 0,57
15 0 0 1 1,53 7.06 304.23 3.43 2,90 1,57 0,61
16 0 1 1 25h40 2,87 162,92 11.31 18.53 0,61 0,18
17 0 1 0 27.74 11,20 428,66 15.57 22.33 2.37 0,43
18 0 1 1 3,80 11,97 409,85 6.31 5,77 1,96 0,70
19 1 1 1 3.15 21.85 116,93 10.00 7,88 0,53 0,19
20 1 1 0 3.25 27,81 456,57 12h42 9.50 2,45 0,44
21 1 1 1 2.32 5.81 287,88 3.25 3.13 1.28 0,57
22 1 0 1 7,79 21.87 178.18 11.87 11.14 0,70 0,22
23 1 0 0 3.56 15,44 427,88 7.60 6.51 2.26 0,63
24 1 0 1 1,82 10,98 290,80 5.12 4.13 1.41 0,61
25 1 1 1 20.34 0,47 127,52 8.32 14h36 0,56 0,15
26 1 1 0 32.41 6,99 396,57 15.76 24.51 2.16 0,41
27 1 1 1 5,55 10,33 356,93 6.35 6,57 1,69 0,73
un b
Conditions d'extraction : voir le tableau 1 pour les valeurs ; Les concentrations phytochimiques sont données en µg/g DW sauf
c
pour la teneur en composés phénoliques donnée en mg/g d'équivalent acide gallique ; Des activités antiâge sont données dans
d
% d'inhibition par rapport au témoin (solvant d'extraction) ; Les activités antioxydantes sont données en TEAC (Trolox
capacité antioxydante équivalente C). Les valeurs présentées sont des moyennes de 3 répétitions indépendantes.
étalons d'acide ursolique et de quercétine à l'aide du logiciel ED50plus répétabilité indiquée par les petites variations mesurées pour les
v1.0. écartstypes relatifs (RSD) correspondants, allant de 0,48 % à 2,64 %
pour les variations intrajournalières et interjournalières et inférieures à
2.10. analyses statistiques 3,51 % pour la répétabilité (tableau 1 ) .
Ces faibles variations ont confirmé la précision adéquate de la méthode
Pour l' approche expérimentale factorielle complète à 33 , les développée. Les taux de récupération, en utilisant 3 niveaux d'ajouts
expériences ont été réalisées en triple et la réponse à chaque point choisis, compris entre 94,3 % pour la quercétine et 103,7 % pour
de conception a été enregistrée. Les données ont ensuite été soumises l'acide ursolique ont indiqué la bonne précision de la méthode. Pris
à une analyse de régression en utilisant la méthodologie de régression ensemble, ces résultats ont démontré que cette procédure HPLC est
des moindres carrés pour obtenir les paramètres du modèle bien adaptée à la détermination simultanée des teneurs en acide
mathématique. Le test t de Student a été utilisé pour vérifier la ursolique et en quercétine dans les extraits d'ortie.
signification statistique des coefficients de régression dérivés du
modèle. L'analyse de la variance (ANOVA) a ensuite été appliquée
pour évaluer la signification statistique du modèle proposé. Des tracés 3.2. Génération d'extraits d'ortie avec des concentrations
de surface de la réponse en fonction des variables indépendantes contrastées d'acide ursolique, de quercétine et d'acides phénoliques
ont été obtenus à l'aide du modèle ajusté. Toutes les données sont
exprimées sous forme de moyenne et d'écarttype d'au moins 3 Le deuxième objectif de cette étude était de développer un
expériences indépendantes. système d'extraction polyvalent et rapide pour générer des lots
L'analyse statistique comparative des groupes a été réalisée à l'aide d'extraits de plantes entières à partir d'ortie avec des teneurs très
de l'ANOVA réalisée par l'analyse DOE (design of experimental) du contrastées en acide ursolique et en quercétine. À cette fin, une
logiciel XLSTAT. L'analyse de clustering hiérarchique a été réalisée approche de conception expérimentale factorielle a été utilisée pour
à l'aide du logiciel MeV 4.4 en utilisant la corrélation de Pearson et en générer ces extraits avec une méthode simple, la macération.
suivant la transformation log2 des données. Il est bien établi que l'efficacité de l'extraction peut être influencée par
de multiples paramètres tels que la durée, la température ou la polarité
du solvant. Ces trois paramètres ont été évalués logiquement : temps
3. Résultats et discussion d'extraction (codé X1, avec des valeurs expérimentales allant de 30 à
90 min), température d'extraction (codée X2, avec des valeurs
3.1. Validation de la méthode HPLC expérimentales allant de 25 à 65 C) et pourcentage d'éthanol (X3,
avec valeurs expérimentales allant de 50 à 100 % (v/v) en mélange
La présence d'acide ursolique dans les extraits de racine d'ortie et avec de l'eau). Les valeurs codées et expérimentales de ces 3
de quercétine dans les extraits de feuilles a été décrite précédemment variables indépendantes sont présentées dans le tableau 2. Le choix
[5,6,16]. Une méthode HPLC a été développée pour déterminer du solvant se fait généralement en fonction de la polarité de la
simultanément l'acide ursolique (Fig. 1B) et la quercétine (Fig. 1B) molécule cible à extraire et de celle des composés indésirables, de
dans des extraits d'ortie (Fig. 1A). Les conditions de séparation son efficacité d'extraction mais aussi des impératifs de coût et de
utilisées ont été adaptées d'une méthode UPLC développée pour sécurité. [18]. Dans notre travail, l'éthanol mélangé à de l'eau a été
quantifier la quercétine et l'acide bétulinique, un dérivé plus hydrophile choisi comme solvant d'extraction pour sa faible toxicité et sa facilité
de l'acide ursolique, dans des extraits de Disporopsis pernyi [17]. d'élimination sous pression réduite. C'est aussi un solvant classique
L'acide ursolique et la quercétine ont été séparés sur une colonne en pour l'extraction de composés naturels avec une large gamme de
phase inverse greffée C18 à l'aide d'un gradient linéaire HPLC polarité ; par exemple, l'ajout d'eau dans l'éthanol est connu pour être
composé d'un mélange d'acétonitrile et d'eau acidifiée à 0,1 % (v/v) un moyen simple d'augmenter l'extraction de composés plus polaires
d'acide formique, allant de 5 % à 100 % d'acétonitrile pendant une [18]. Suite à la détermination des valeurs expérimentales des teneurs
heure. fonctionner à un débit de 0,6 ml par minute. Un chromatogramme en acide ursolique, en quercétine et en composés phénoliques, une
HPLC typique (avec détection réglée à 254 nm) d'un extrait de plante régression multiple a conduit à l'équation polynomiale du second ordre
entière d'ortie montrant la séparation de ces composés est présenté correspondante correspondant au rendement d'extraction en fonction
sur la figure 1C. L'ajout d'étalons ainsi que l'analyse LCeMS (m/z 455 des 3 variables indépendantes étudiées (Tableau complémentaire 1 ) .
[MH] pour l'acide ursolique et m/z 301 [MH] pour la quercétine) ont
confirmé leurs identités respectives. Ici, outre la confirmation de la
présence de ces molécules dans l'ortie, nos résultats ont également
mis en évidence la possibilité de leur extraction simultanée à partir La qualité de l'ajustement des 3 modèles prédictifs était satisfaisante
de la plante entière. comme l'indiquent les valeurs du coefficient de détermination allant
de 0,817 à 0,884 et les valeurs de p toujours inférieures à 0,0001
Pour assurer la précision et l'exactitude, cette méthode de pour l'ANOVA (tableaux supplémentaires 1 et 2 ) . D'après les valeurs
séparation a été validée et les résultats sont présentés dans le tableau mesurées et les tracés de surface de réponse, la concentration en
1. Une bonne linéarité des courbes d'étalonnage des aires de pic (y) éthanol est apparue comme le paramètre le plus critique pour
par rapport aux quantités injectées (x) sur la plage analysée (50e1000 l'extraction de chaque composé (Tableau 3, Fig. 2). Une concentration
ng) a été observé pour l'acide ursolique (210 nm) et la quercétine (254 élevée en EtOH favorisait de manière significative le rendement
nm). Les limites de détection (LOD) et de quantification (LOQ) étaient d'extraction des composés phénoliques alors qu'elle entraînait une
aussi basses que 1,15 ng et 3,84 ng pour l'acide ursolique, et 0,42 ng diminution significative du rendement d'extraction de la quercétine et
et 1,38 ng pour la quercétine, respectivement. La méthode HPLC était de l'acide ursolique (tableau supplémentaire 1). La température
appropriée en termes de précision intrajournalière et interjournalière et d'extraction semble également affecter les rendements d'extraction
Merci de citer cet article sous presse comme suit : C. Bourgeois, et al., L'ortie (Urtica dioica L.) comme source de phytochimiques antioxydants et antiâge pour
les applications cosmétiques, Comptes Rendus Chimie (2016), http://dx .doi.org/10.1016/j.crci.2016.03.019
Fig. 1. A. Plante d'ortie de trois mois poussant dans des conditions de serre. B. Structures de l'acide ursolique et de la quercétine. C. Chromatogramme typique d'un extrait
d'ortie montrant la présence d'acide ursolique et de quercétine (détection à 254 nm).
Fig. 2. Graphiques de surface de réponse pour les effets du temps d'extraction, de la température et de la concentration d'éthanol sur l'acide ursolique, la quercétine et la teneur totale en composés
phénoliques dans les extraits d'ortie.
de manière significative : les températures d'extraction élevées composés (de 86,90 à 482,34 mg par 100 g DW d'équivalent
ont augmenté la teneur en acide ursolique mais ont entravé acide gallique).
l'extraction de la quercétine (tableau supplémentaire 1). Entre
nos mains, les meilleurs rendements ont été obtenus suite à une
extraction de 90 min avec 75% (v/v) EtOH à 65 C pour l'acide 3.3. Activités antioxydantes et antiâge des extraits d'ortie
ursolique, une extraction de 30 min avec 50% (v/v) EtOH à 25 C
pour la quercétine et une extraction de 45 min avec 75 % (v/v) L'étape suivante a consisté à i) évaluer les activités
EtOH à 45 C pour les composés phénoliques. Les lots issus du antioxydantes et antiâge de ces extraits et ii) construire des
dispositif expérimental présentaient des concentrations modèles prédictifs de ces activités (Fig. 3 et 4) afin d'établir des
contrastées d'acide ursolique (de 0,28 à 32,41 mg pour 100 g corrélations entre ces activités biologiques et la composition
DW), de quercétine (de 0,47 à 35,58 mg pour 100 g DW) et de composés
phytochimique
phénoliques td otaux.
e la ortie
Fig. 3. Graphiques de surface de réponse pour les effets du temps d'extraction, de la température et de la concentration d'éthanol sur la capacité antioxydante des extraits d'ortie
déterminés à l'aide des dosages FRAP et CUPRAC.
extraits, en particulier leur teneur en acide ursolique, quer (Tableaux supplémentaires 1 et 2). Les tracés de surface de
cétine et acides phénoliques (Fig. 5). réponse résultants ont révélé une forte corrélation entre les
activités antioxydantes et les concentrations d'acide phénolique
3.3.1. Capacités antioxydantes des extraits (Fig. 3, Tableau supplémentaire 1). L'analyse de
La capacité antioxydante des extraits donnée par les clustering hiérarchique (HCA) a confirmé cette observation et a
dosages CUPRAC et FRAP a révélé une forte activité indiqué que la quercétine n'était pas le principal contributeur à
antioxydante de certains lots allant de 0,53 (lot 19) à 2,71 (lot l'activité antioxydante des extraits d'ortie (Fig. 5). L'action
14) de capacité antioxydante équivalente Trolox C (TEAC) en antioxydante de la quercétine n'est pas simple, et son activité
utilisant le dosage CUPRAC et de 0,15 à 0,73 TEAC en utilisant pro oxydante dans certaines circonstances est largement
le test FRAP (tableau 3). documentée dans la littérature [10,11]. La présence d'autres
La différence observée dans le TEAC déterminé par les composés phénoliques dans les extraits d'ortie peut être
dosages FRAP et CUPRAC pourrait s'expliquer par la nature importante pour stabiliser l'action antioxydante de la quercétine.
physicochimique de l'antioxydant mis en évidence par ces deux Cette observation est apparue en bon accord avec des résultats
tests. La méthode FRAP est utilisée pour évaluer l'activité publiés indiquant la présence d'autres composés antioxydants
antioxydante des substances hydrophiles alors que la méthode potentiels tels que des flavonoïdes (dérivés du kaempférol, par
CUPRAC est appliquée aux antioxydants lipophiles et exemple) ou des lignanes (secoisolariciresinol, par exemple)
hydrophiles [19]. Ici, nos résultats ont indiqué que les principaux dans les extraits d'ortie [6,16] .
contributeurs à cette activité antioxydante étaient principalement
des substances hydrophiles.
Considérant que les présents extraits constituaient un 3.3.2. Activités antiâge
mélange complexe de composés anti et prooxydants, par L'action antiâge de ces extraits a été évaluée par leur
rapport au Trolox C standard, les capacités antioxydantes capacité à inhiber les activités élastase et collagénase car ces
mesurées ont révélé la présence d'au moins une molécule enzymes provoquent la dégradation des protéines de la matrice
antioxydante forte dans les extraits d'ortie. Les modèles extracellulaire dans le derme, entraînant des altérations
prédictifs de la capacité antioxydante des extraits d'ortie étaient cutanées telles que des rides profondes, une perte de peau
statistiquement significatifs pour les tests FRAP et CUPRAC tonus et résilience [7]. L'effet inhibiteur de chaque extrait sur
Fig. 4. Graphiques de surface de réponse pour les effets du temps d'extraction, de la température et de la concentration d'éthanol sur l'activité antiâge des extraits d'ortie en fonction
de leur action inhibitrice sur les activités d'élastase et de collagénase.
l'activité de la collagénase et de l'élastase est présentée dans le tableau 3. Le présent travail constitue le premier rapport sur l'action antiâge
Les potentiels inhibiteurs étaient jusqu'à 16,23 % pour l'inhibition de la potentielle des extraits d'ortie résultant de l'inhibition de ces enzymes
collagénase (lot 1, tableau 3) et jusqu'à 24,51 % pour l'inhibition de dégradant la matrice extracellulaire.
l'élastase (lot 26, tableau 3). Les modèles antiâge déduits prédisant l'effet Fait intéressant, il a été possible d'obtenir des extraits aux propriétés
inhibiteur de chaque extrait sur les activités de la collagénase et de à la fois antioxydantes et inhibitrices visàvis de l'élastase et de la
l'élastase étaient confiants et statistiquement significatifs (tableaux collagénase (lots 17 et 26 ; Tableau 3, Fig. 5) avec EtOH à 75 % (v/v) à
supplémentaires 1 et 2). une température d'extraction de 65 C ; ces extraits étaient riches en acide
Fait intéressant, ces modèles ont indiqué que les substances les moins ursolique et en composés phénoliques totaux.
polaires (mieux extraites avec de l'EtOH pur) n'étaient pas responsables
de ces effets inhibiteurs, comme le confirment les courbes de surface de
réponse (Fig. 4 ) . En ce qui concerne l'extraction de l'acide ursolique, un 3.3.3. Comparaison avec les standards commerciaux
impact positif d'une température d'extraction plus élevée a également été Enfin, le potentiel antioxydant et antiâge des extraits d'ortie a été
noté pour l'action inhibitrice de l'élastase (Fig. 4, Tableau supplémentaire comparé à ceux des standards commerciaux d'acide ursolique et de
1). Une forte corrélation positive entre l'inhibition de l'élastase et la teneur quercétine. Ces tests ont confirmé que la quercétine, l'un des antioxydants
en acide ursolique de l'extrait a été les plus importants [9], présentait une bien meilleure capacité antioxydante
observé et confirmé par le HCA (Fig. 5). De la même manière, une que l'acide ursolique. Cependant, ils ont également montré que les extraits
corrélation positive entre l'inhibition de la collagénase et la teneur en d'ortie présentaient une activité de piégeage très intéressante (tableau 4).
quercétine des extraits d'ortie correspondants a été observée (Fig. 5). Notre HCA a mis en évidence que la quercétine n'était certainement pas
Néanmoins, nous avons également noté que la présence d'acide ursolique l'antioxydant le plus important présent dans les extraits d'ortie, mais
seul pouvait être importante pour l'inhibition de la collagénase puisque pouvait agir avec d'autres composés phénoliques (Fig. 5). Compte tenu
certains lots contenant une faible quantité de quercétine mais riches en de la dualité oxydante de la quercétine [10,11], ces autres composés
acide ursolique (7, 8, 16, 25, 17, 26) présentaient une forte inhibition de phénoliques pourraient favoriser son action antioxydante. Les effets de
collagénase (Fig. 5, Tableau 3). Des inhibitions similaires de l'élastase par l'acide ursolique et de la quercétine sur les activités élastase et colla
l'acide ursolique et de la collagénase par la quercétine ont été décrites génase ont ensuite été estimés (tableau 4). L'acide ursolique était le plus
[8,20]. Néanmoins, à notre connaissance, le efficace contre l'activité de l'élastase avec une IC50
dix C. Bourgeois et al. / CR Chimie xxx (2016) 1e11
de 75,3 mM alors que la quercétine était la plus efficace contre
l'activité de la collagénase avec une IC50 de 79,3 mM, confirmant
nos résultats HCA. Ces résultats avec les étalons étaient en bon
accord avec nos données obtenues avec les extraits d'ortie si l'on
considère que le lot 1, qui présentait une inhibition de la collagénase
de 16,23 %, contenait c. 29 mM de quercétine tandis que le lot 26, qui
présentait une élastase en hibition de 24,51 %, atteignait une
concentration de c. 35 mM d'acide ursolique. Fait intéressant, dans les
tests in vitro avec des normes commerciales, ces deux composés
étaient relativement efficaces pour inhiber à la fois la collagénase et
l'élastase (tableau 4). Des expériences supplémentaires (données
non présentées) ont révélé un mode d'inhibition mixte de l'acide
ursolique contre l'élastase alors que toutes les autres actions
inhibitrices décrites dans le présent travail se sont révélées non
compétitives. La preuve d'un site de liaison de l'acide ursolique sur
1
l'élastase, responsable de son action inhibitrice, a été décrite dans [8].
13
Plusieurs substrats peuvent être utilisés pour mesurer l'activité de
19
l'élastase et une inhibition compétitive ou non compétitive a été
22 7
observée selon le substrat. Cet écart s'explique par la présence de 5
8
soussites actifs indépendants dans l'enzyme élastase, dont la liaison
16
dépend du substrat [8].
25
17
La quercétine s'est avérée être le flavonoïde naturel le plus actif parmi
26
ceux testés pour l'inhibition in vitro de la collagénase [20].
2
4
10
5
4. Conclusions
11
14 L'activité antioxydante des extraits d'ortie (Urtica dioica L.) a déjà
20 été décrite et, à ce jour, elle a été suggérée comme étant responsable
23 des activités antiâge de l'ortie. Ici, nous confirmons cette observation
6 mais fournissons également la première preuve d'un mécanisme
15 supplémentaire impliquant l'inhibition des activités collagénase et
18 élastase. Cela pourrait être attribué à l'acide ursolique et à la quer
3 cétine présents dans les extraits d'ortie. Compte tenu des effets
12 secondaires potentiels de la quercétine, nos résultats ont également
21 démontré la possibilité de choisir des paramètres d'extraction pour
9 permettre une extraction différentielle efficace de l'acide ursolique,
24 de la quercétine et d'autres composés phénoliques afin d'obtenir des
0.0 1.0 1.5 27
extraits à très faible teneur en quercétine.
Fig. 5. Analyse de classification hiérarchique des extraits d'ortie en fonction de leur composition
phytochimique, de leur capacité antioxydante et de leur action inhibitrice sur les activités élastase et
Ici, nous avons montré que de tels extraits présentent une forte
collagénase. capacité antioxydante et des activités antiâge potentielles en raison
de leurs effets inhibiteurs sur l'élastase et la collagénase, ce qui
pourrait présenter un intérêt particulier pour les applications
cosmétiques des extraits d'ortie.
Remerciements
Tableau
4 Activités antioxydantes et antiâge des étalons commerciaux d'acide ursolique et de
quercétine.
Ce travail s'inscrit dans le cadre du projet Natur'ACTIV (HLB1307).
Les auteurs remercient la Région Centre Val de Loire et le Conseil
Antiâge Antioxydant
Départemental d'Eure et Loir pour leur soutien financier. Les auteurs
Élastase Collagénase CUPRACb FRAPb remercient également la Cosmetic Valley pour son soutien.
Urtica dioïque nd nd 1,56 ± 0,1 0,47 ± 0,03
extrait
Acide ursolique 75,3 ± 1,0 97,5 ± 0,3 0,49 ± 0,01 0,14 ± 0,03 4,32 ±
Annexe A. Données supplémentaires
Quercétine 107,6 ± 0,3 79,3 ± 0,1 0,3 2,51 ± 0,2
nd : non déterminé.
un Des données supplémentaires liées à cet article sont disponibles
IC50 donnée en mM.
b
En TEAC (activité antioxydante équivalente au Trolox C), cette valeur est relative à
dans la version en ligne, à l'adresse http://dx.doi.org/10.1016/j.crci.
l'activité antioxydante donnée par le Trolox C (1 mM).
2016.03.019.
Les références [11] S. Fiorucci, J. Golebiowski, D. CabrolBass, S. Antonczak, Proteins
Struct. Fonct. Bioinforma 67 (2007) 961e970, http://dx.doi.org/10.1002/
[1] R. Upton, J. Herb. Méd. 3 (2013) 9e38, http://dx.doi.org/10.1016/
prot.21380 .
[12] M. Harwood, B. DanielewskaNikiel, JF Borzelleca, GW Flamm, GM
j.hermed.2012.11.001.
€
[2] M. Schottner, D. Ganßer, G. Spiteller, Planta Med. 63 (1997) 529e532, Williams, TC Lines, Food Chem. Toxicol. 45 (2007) 2179e2205, http://
http://dx.doi.org/10.1055/s2006957756. dx.doi.org/10.1016/j.fct.2007.05.015.
[3] B. Obertreis, K. Giller, T. Teucher, B. Behnke, H. Schmitz, Arznei [13] I. Dini, GC Tenore, A. Dini, Food Chem. 113 (2009) 411e419, http://
mittelforschung 46 (1996) 52e56. dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2008.07.053.
[4] CA RiceEvans, NJ Miller, G. Paganga, Free Radic. Biol. Méd. 20 (1996) [14] D. Komes, A. BelscakCvitanovic, D. Horzic, G. Rusak, S. Likic, M.
933e956, http://dx.doi.org/10.1016/08915849(95)022279. Berendika, Phytochem. Anal. 22 (2011) 172e180, http://dx.doi.org/
[5] S. Shailajan, H. Harshada, S. Dipti, T. Bhavesh, J. Appl. Pharm. Sci. 4 10.1002/pca.1264 .
(2014) 92e95. [15] L. Rimkiene, L. Ivanauskas, A. Kubiliene, K. Vitkevicius, G. Kiliuviene,
[6] B. Otles, S. Yalcin, Sci. Monde J. (2012) 1e12, http://dx.doi.org/ V. Jakstas, J. Anal. Méthodes Chim. (2015) 1e7, http://dx.doi.org/
10.1100/2012/564367. 10.1155/2015/280167 .
[7] J. Wittenauer, S. M€ ackle, D. Sußmann, U. SchweiggertWeisz, R. [16] D. Orcic, M. Franciskovic, K. Bekvalac, E. Svircev, I. Beara, M. Lesjak,
Carle, Fitoterapia 101 (2015) 179e187, http://dx.doi.org/10.1016/ et al., Food Chem. 143 (2014) 48e53, http://dx.doi.org/10.1016/
j.fitote . 2015.01.005. j.foodchem.2013.07.097 .
[8] QL Ying, AR Rinehart, SR Simon, JC Cheronis, Biochem. J. 277 (1991) [17] Y. Wang, S. Li, D. Han, K. Meng, M. Wang, C. Zhao, J. Anal. Méthodes
521e526. http://www.biochemj.org/content/277/2/521. abstrait. Chim. 2015 (2015), http://dx.doi.org/10.1155/2015/130873.
[18] L. Yu, S. Haley, J. Perret, M. Harris, Food Chem. 78 (2002) 457e461,
[9] AW Boots, LC Wilms, ELR Swennen, JCS Kleinjans, A. Bast, GRMM http://dx.doi.org/10.1016/S03088146(02)001565.
Haenen, Nutrition 24 (2008) 703e710, http://dx.doi.org/ 10.1016 / [19] A. RatzLyko, J. Arct, K. Pytkowska, Ski. Rés. Technol 18 (2012)
j.nut.2008.03.023. 421e430, http://dx.doi.org/10.1111/j.16000846.2011.00588.x.
[10] EJ Choi, K.M. Chee, BH Lee, Eur. J. Pharmacol. 482 (2003) 281e285, [20] PAR Sin, HP Kim, Arch. Pharm. Rés. 28 (nd) 1152e1155. http://dx.
http://dx.doi.org/10.1016/j.ejphar.2003.09.067. doi.org/10.1007/BF02972978.

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Équation de régression R2 Gamme linéaire LOD (ng) LOQ (ng) Précision (%RSD) Répétabilité (% RSD) Récupération (%)

Acide ursolique Y ¼ 0,213x ± 0,1107 0,998 50e1000 Quercétine y ¼ 1.15 3,84 0,48 0,94 3.51 103.7

1 ­1 ­1 ­1 5,00 35,58 86,90 16.23 12.75 0,58 0,27

2 ­1 ­1 0 3,76 33,67 367,74 14,97 11h38 1,95 0,53

3 ­1 ­1 1 0,28 2h30 278.10 1.03 0,80 1.37 0,57

4 ­1 0 ­1 4.13 28.06 283.14 12,87 10.19 1.40 0,47

5 ­1 0 0 3,81 27,23 410,07 12h42 9,75 2.17 0,60

6 ­1 0 1 1,98 7,83 317,96 3,92 3.42 1,57 0,60

7 ­1 1 ­1 14h38 17,64 217,74 12.81 14h65 1.16 0,31

8 ­1 1 0 14.02 11,27 372,55 10.12 12.74 1,98 0,54

9 ­1 1 1 2,93 12,68 362,04 6.24 5.35 1,85 0,69

dix 0 ­1 ­1 3.19 22,20 225,77 10h15 8.00 1.20 0,38

11 0 ­1 0 2.43 29,42 464,45 12.74 9h35 2.22 0,58

12 0 ­1 1 0,99 3,57 265,40 1,83 1.62 1.33 0,55

13 0 0 ­1 5.21 30,55 215,77 14h30 11.59 0,77 0,27

14 0 0 0 4.47 25,26 482,34 11.89 9.70 2.71 0,57

15 0 0 1 1,53 7.06 304.23 3.43 2,90 1,57 0,61

16 0 1 ­1 25h40 2,87 162,92 11.31 18.53 0,61 0,18

17 0 1 0 27.74 11,20 428,66 15.57 22.33 2.37 0,43

18 0 1 1 3,80 11,97 409,85 6.31 5,77 1,96 0,70

19 1 ­1 ­1 3.15 21.85 116,93 10.00 7,88 0,53 0,19

20 1 ­1 0 3.25 27,81 456,57 12h42 9.50 2,45 0,44

21 1 ­1 1 2.32 5.81 287,88 3.25 3.13 1.28 0,57

22 1 0 ­1 7,79 21.87 178.18 11.87 11.14 0,70 0,22

23 1 0 0 3.56 15,44 427,88 7.60 6.51 2.26 0,63

24 1 0 1 1,82 10,98 290,80 5.12 4.13 1.41 0,61

25 1 1 ­1 20.34 0,47 127,52 8.32 14h36 0,56 0,15

26 1 1 0 32.41 6,99 396,57 15.76 24.51 2.16 0,41

27 1 1 1 5,55 10,33 356,93 6.35 6,57 1,69 0,73

Vous aimerez peut-être aussi

1 1 1 1 5,00 35,58 86,90 16.23 12.75 0,58 0,27

2 1 1 0 3,76 33,67 367,74 14,97 11h38 1,95 0,53

3 1 1 1 0,28 2h30 278.10 1.03 0,80 1.37 0,57

4 1 0 1 4.13 28.06 283.14 12,87 10.19 1.40 0,47

5 1 0 0 3,81 27,23 410,07 12h42 9,75 2.17 0,60

6 1 0 1 1,98 7,83 317,96 3,92 3.42 1,57 0,60

7 1 1 1 14h38 17,64 217,74 12.81 14h65 1.16 0,31

8 1 1 0 14.02 11,27 372,55 10.12 12.74 1,98 0,54

9 1 1 1 2,93 12,68 362,04 6.24 5.35 1,85 0,69

dix 0 1 1 3.19 22,20 225,77 10h15 8.00 1.20 0,38

11 0 1 0 2.43 29,42 464,45 12.74 9h35 2.22 0,58

12 0 1 1 0,99 3,57 265,40 1,83 1.62 1.33 0,55

13 0 0 1 5.21 30,55 215,77 14h30 11.59 0,77 0,27

16 0 1 1 25h40 2,87 162,92 11.31 18.53 0,61 0,18

19 1 1 1 3.15 21.85 116,93 10.00 7,88 0,53 0,19

20 1 1 0 3.25 27,81 456,57 12h42 9.50 2,45 0,44

21 1 1 1 2.32 5.81 287,88 3.25 3.13 1.28 0,57

22 1 0 1 7,79 21.87 178.18 11.87 11.14 0,70 0,22

25 1 1 1 20.34 0,47 127,52 8.32 14h36 0,56 0,15