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Laisser bouillir deux minutes. Mettre le milieu à 5.6 Appareil de comptage de colonies comportant un
refroidir immédiatement au bain d'eau (5.5) à une système d'éclairage et un compteur numérique mécanique
ou électronique.
température de 44 °C à 47 °C.
5.7 Tubes à essai de dimensions approximatives
Eviter le surchauffage du milieu (un chauffage trop 16 mm x 160 mm.
prolongé ou des chauffages répétés). 5.8 Cloches de Durham de dimensions appropriées en
vue de leur utilisation dans les tubes à essai (5.7).
Ne pas stériliser à l'autoclave.
5.9 Flacons pour l'ébullition et la conservation des
milieux de culture.
Contrôler la stérilité du milieu au moment de l'emploi
(8.2.2). 5.10 pH-mètre précis à 0,1 unité de pH à 25 °C.
5.11 Anse bouclée en platine iridiée ou en nickel
Utiliser le milieu dans les quatre (4) heures qui suivent chrome ayant un diamètre de 3 mm environ ou anses à
sa préparation. usage unique.
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La suspension mère et les dilutions doivent être Si nécessaire, inoculer cinq (5) colonies atypiques dans
préparées conformément aux méthodes relatives à la des tubes de bouillon lactosé bilié au vert brillant (4.3.2).
préparation des échantillons pour essai, de la suspension
mère et des dilutions décimales en vue de l'examen Mettre les tubes à incuber dans l'étuve (5.2) réglée à
microbiologique, fixées par la réglementation en vigueur. 30 °C ou à 37 °C pendant 24 h ± 2 h.
8.2 Ensemencement et incubation : Considérer les colonies présentant une formation de gaz
8.2.1 Prendre deux boîtes de Petri stériles pour le dans les cloches de Durham (5.8) comme des coliformes.
produit liquide et/ou pour chaque dilution choisie. Tenir compte de ces résultats dans le calcul (9).
Transférer à l'aide d'une pipette stérile (5.4), 1 ml de
liquide ou des dilutions appropriées au centre de chaque 9. EXPRESSION DES RESULTATS :
boîte. Utiliser une nouvelle pipette stérile pour inoculer
chaque dilution dans les boîtes. 9.1 Mode de calcul : cas après identification ou
confirmation :
8.2.2 Verser environ 15 ml du milieu VRBL (4.3.1), à
une température de 44 °C à 47 °C , dans chaque boîte de Lorsque la méthode utilisée nécessite une confirmation,
Petri. Le temps qui s'écoule entre la fin de la préparation un nombre déterminé A (en général 5) de colonies
de la suspension mère (ou de la dilution 10-1 dans le cas caractéristiques présumées est confirmé à partir de
d'un produit liquide) et le moment où le milieu est versé chacune des boîtes retenues pour le comptage des
dans les boîtes ne doit pas dépasser 15 mn. colonies. Après confirmation, calculer, pour chacune des
Mélanger soigneusement l'inoculum au milieu de boîtes, le nombre a de colonies répondant aux critères de
culture et laisser le mélange se solidifier en posant les confirmation à l'aide de la formule suivante :
boîtes de Petri sur une surface froide et horizontale. b
a=—xC
Préparer également une boîte témoin avec environ 15
A
ml du milieu pour contrôler sa stérilité.
Où :
8.2.3 Après solidification complète, couler à la surface b : est le nombre de colonies répondant aux critères de
du milieu ensemencé environ 4 ml du milieu VRBL confirmation parmi les A colonies identifiées ;
(4.3.1), à une température de 44 °C à 47 °C. Laisser
solidifier comme décrit ci-dessus. C : est le nombre total de colonies caractéristiques
présumées comptées sur la boîte.
8.2.4 Retourner les boîtes ainsi préparées et les
incuber dans l'étuve (5.2) réglée à 30 °C ou à 37 °C Arrondir les résultats calculés au nombre entier le plus
pendant 24 h ± 2 h. proche. Pour cela, si le premier chiffre après la virgule est
8.3 Dénombrement : inférieur à 5, le chiffre précédent n'est pas modifié ;
si le premier chiffre après la virgule est supérieur ou égal
Après la période d'incubation spécifiée au point (8.2.4), à 5, le chiffre précédent est augmenté d'une unité.
sélectionner les boîtes de Petri ayant, si possible, un
nombre compris entre 10 et 150 colonies. Procéder au Calculer le nombre N de micro-organismes identifiés ou
comptage à l'aide du compteur (5.6) des colonies confirmés présents dans l'échantillon pour essai à l'aide de
violacées ayant un diamètre minimal de 0,5 mm l'équation suivante :
(parfois entourées d'une zone rougeâtre due à la
précipitation de la bile). Ces colonies sont considérées ∑a
comme des colonies typiques de coliformes et ne N = —————
nécessitent pas de confirmation. V x 1,1 x d
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∑a : est la somme des colonies répondant aux critères Vu le décret présidentiel n° 17-243 du 25 Dhou
de confirmation comptées sur les deux boîtes retenues de El Kaâda 1438 correspondant au 17 août 2017 portant
deux dilutions successives ; nomination des membres du Gouvernement ;
V : est le volume de l'inoculum appliqué à chaque boîte, Vu le décret exécutif n° 02-453 du 17 Chaoual 1423
en millilitres ;
correspondant au 21 décembre 2002 fixant les attributions
d : est le taux de dilution correspondant à la première du ministre du commerce ;
dilution retenue.
Vu le décret exécutif n° 05-458 du 28 Chaoual 1426
Arrondir le résultat calculé à deux chiffres significatifs. correspondant au 30 novembre 2005, modifié et complété,
Pour cela, si le troisième chiffre est inférieur à 5, ne pas fixant les modalités d'exercice des activités d'importation
modifier le chiffre précédent ; si le troisième chiffre est de matières premières, produits et marchandises destinés à
supérieur ou égal à 5, augmenter le chiffre précédent d'une la revente en l’état ;
unité.
Exprimer le résultat, de préférence en nombre compris Vu le décret exécutif n° 15-111 du 14 Rajab 1436
entre 1 et 9,9 multiplié par la puissance appropriée de 10, correspondant au 3 mai 2015 fixant les modalités
ou un nombre entier avec deux chiffres significatifs. d’immatriculation, de modification et de radiation au
registre du commerce ;
Exprimer le résultat comme le nombre N de coliformes
par millilitre (produits liquides) ou par gramme (autres Vu le décret exécutif n° 15-249 du 15 Dhou El Hidja
produits). 1436 correspondant au 29 septembre 2015 fixant le
contenu, l’articulation ainsi que les conditions de gestion
EXEMPLE : Un comptage a donné les résultats et d’actualisation de la nomenclature des activités
suivants : économiques soumises à inscription au registre du
— à la première dilution retenue (10-3) : 66 colonies ; commerce ;