Immobilisation des enzymes

Travail élaboré par :

Khili Maroua
Mezrioui Safa
GE2
plan
Introduction
Généralités sur les enzymes
Définition d’une enzyme immobilisée
but et principe de l’immobilisation des enzymes
Principales méthodes d’immobilisation des enzymes
applications générales
conclusion
Introduction

Dans le but d’atténuer ou résoudre les différents problèmes

liés à l’instabilité des enzymes au cours d’extraction ou
d’utilisation, leur immobilisation artificielle a été proposée
efficacement comme solution.

Une fois immobilisés sur des supports solubles ou

insolubles, ces catalyseurs offrent la possibilité d'une
utilisation répétée dans des domaines très variés et offrent
particulièrement pour des applications analytiques, un
accroissement de la durée de vie de l'enzyme.
Généralités sur les enzymes
La catalyse enzymatique
est vitale

des antibiotiques et des

stéroïdes.
les transformations
chimiques ont lieu dans
les organismes vivants

La connaissance de la la production de
catalyse enzymatique a de médicaments
nombreuses implications
en biologie , en pharmacie
et en chimie.

les applications de
la catalyse enzymatique fermentations se sont
s’est faite grâce aux élargies du secteur
fermentations. alimentaire
Définition de d’une enzyme immobilisée

Diminue après immobilisation

Une enzyme du fait de possibles gênes
stériques et de limitations dans
immobilisée est une
l’accessibilité au site actif .
enzyme liée par des
moyens physico-
chimiques en
surface ou à
l’intérieur d’un augmente sa stabilité dans le
temps.
support solide.
But et principe de l’immobilisation des
enzymes

Les enzymes étant solubles dans l’eau et très fragiles, pour

diverses raisons, leur purification après usage ne peut
généralement être envisagée favorablement.

Une de ces raisons est la valeur commerciale élevée des

enzymes, où on s’est efforcé de mettre au point des
méthodes qui permettent leur réutilisation, une fois la
réaction enzymatique achevée.
L’une de ces Une fois
méthodes est immobilisée,
l’ultrafiltration, qui l’enzyme peut
a donné naissance catalyser, en Le dérivé
aux plus grands milieu insoluble est
développements hétérogène cette ensuite récupéré
par la suite fois, les par filtration,
consistant à rendre réactions sédimentation
l’enzyme insoluble susceptibles de ou
par un traitement l’être en phase centrifugation.
physique ou homogène par
chimique l’enzyme soluble
convenable initial.
 Principales méthodes
d’immobilisation des enzymes
• Par adsorption

la rétention de la les liaisons de Vander

molécule Waals
enzymatique

support  les liaisons

insoluble par intera hydrogène
ction faible

liaisons non
covalentes ou les liaisons ioniques et
secondaires le transfert de charge.
 Les supports les plus utilisés
 Organiques

les polyosides comme l’acétate de cellulose, nitrate de cellulose, dextrane,

agarose, alginate et les polymères comme le polystyrène, le polyéthylène,
etc.

 Inorganiques

Généralement, ils plus stables et sont résistants aux agents chimiques et

aux bactéries.
les matériaux actifs peuvent être des :
 Les argiles
 Verre poreux et silice poreuse
• Autres supports

L’oxyde céramique, collagène, le nylon et le charbon actif

 Comme toutes les techniques d’immobilisation des

enzymes, l’adsorption présente plusieurs avantages et
inconvénients :
 méthode est facile à mettre en œuvre,
il suffit de mettre en contact l'enzyme
et le support.
 régénération possible des complexes
enzyme-support; si jamais l’enzyme
perd son activité durant son
fonctionnement, il serait possible de
la remplacer par une préparation
active.
 Fixation rapide du support et
immobilisation simple et non
dénaturante.
 La fragilité de la fixation (les
enzymes peuvent facilement se
désorber sous l’influence de
variation de pH,
température…)
 L’orientation de l’enzyme ainsi
que la mauvaise accessibilité au
site actif.
• Par inclusion

la rétention des emprisonnement dans

molécules d’enzyme des microcapsules
dans le réseau délimité par une
tridimensionnel d’un membrane semi
polymère insoluble perméable
Il existe 3 types d’immobilisation des enzymes par
inclusion:
Dans un gel

polyacrylamide,
constitué d’une d'alginates,
incorporée dans matrice d'amidon et les
un gel insoluble organique ou fibres de
inorganique polyacétate de
cellulose
 Dans fibres de polyacétate de cellulose

Il s’agit d’un protocole à suivre :

-On réalise une solution de triacétate de cellulose dans le chlorure

de méthylène,

-On ajoute sous agitation une solution d’enzyme dans l’eau froide
ou dans un tampon contenant de glycérol,

-Emulsion obtenue est ensuite extrudée sous pression d’azote dans

un bain de coagulation contenant de toluène,

-Séchage des fibres obtenues sous vide afin d’éliminer les solvants
et conserver à 5°C.
Microcapsulation

Elle consiste à inclure l’enzyme à l’intérieur de la

membrane semi-perméable. Le diamètre des
microcapsules peut varier de quelques microns à une
centaine de microns
 Les réaction de polymérisation et
de gélification sont bien connues.
 Réaction chimiques avec l’enzyme
limitée
 Application à toutes les enzymes
 formes adaptables de supports
obtenus (films, billes, fibre…)
 Elle permet d'immobiliser la
totalité de l'enzyme en une seule
étape
 aucun caractère de spécificité
 applicable à n'importe quelle
enzyme.
 les groupements actifs de
l'enzyme ne sont pas mis en jeu.
• La localisation de l'enzyme à
l'intérieur du polymère pose des
problèmes stériques
• Les conditions de polymérisation
peuvent s'avérer dénaturantes
pour l'enzyme et certaines
polymérisations font appel à des
agents dénaturants.
• Immobilisation par liaisons covalentes
o Sur support

Elle est réalisée par

Ces groupes, en général
l’intermédiaire de
insuffisamment réactif,
liaisons irréversibles et
nécessiteront une
covalentes entre les
activation préalable.
groupements
A priori, il faut
fonctionnels de l’enzyme
activer soit l’enzyme,
et les
soit
groupes réactifs du
le support.
support

l’activation des groupes fonctionnels de l’enzyme peut

conduire à la dénaturation de l’enzyme.
Activation du support Fixation de l’enzyme
 o Par réticulation : sans support
c'est un procédé d'association des différentes
unités biocatalytiques ou de protéines à l'aide d'un agent
réticulant

Elle peut être effectuée après inclusion ou adsorption afin de

stabiliser l’enzyme immobilisée et limiter les phénomènes de
fuites ou de désorption.

 L’agent réticulant le plus utilisés est le Glutaraldéhyde

(OHC-(CH2)3-CHO).
 • Stabilité accrue à cause de la

tuer
liaison covalente
• Grand choix de méthodes
différentes
•Grande variété de support minéra
ux (verre, silice,
céramique…) et organiques

en présence
(cellulose, polymèresynthétiques…)
 
• Possibilité d’effectuer
l’immobilisation en présence de
substrat pour éviter l’inactivation
(protection du site

viter l’inactivatio
actif).
•Mise en œuvre de réactions
chimiques souvent
complexes
•Longueur des expériences (étape
de l’activation du
support)
•Rendements de fixation inferieurs à
100%
•Risques de modifications chimiques
de l’enzyme(perte d’activité)
 
•Nécessite de purifier l’enzyme
préalablement
 
•Investissement important
• La réticulation d'agrégats ou de cristaux
enzymatiques :

En utilisant un réactif bifonctionnel,

elle est utilisée pour préparer des
macroparticules sans support.
L’utilisation d’un support conduit
inévitablement à une «dilution de
l’activité», du fait de l’introduction
d’une grande partie du ballast non
catalytique, allant de 90% à> 99%, ce
qui se traduit par des rendements
spatio-temporels et des productivités
plus faibles.
La situation optimale, du point de
vue de l'activité spécifique, est une
monocouche de molécules
enzymatiques adsorbées à la
surface du support. Par
conséquent, il existe un intérêt
croissant pour les enzymes
immobilisées sans support, telles
que les cristaux enzymatiques
réticulés (CLEC) 12 et les agrégats
enzymatiques réticulés (CLEA) .13
• Cette approche offre des
avantages évidents: activité
enzymatique hautement
concentrée dans le catalyseur ,
une stabilité élevée et des coûts
de production faibles grâce à
l'exclusion d'un support
supplémentaire (coûteux).
• Les CLE sont formés avec des
protéines en solution qui sont liés
entre eux par un agent de
réticulation ayant des tailles de 1
à 100 μm. Par rapport aux
enzymes natives, ce type de le
biocatalyseur améliore leur
stabilité thermique.
• la nécessite le soin
de divers facteurs
tels que le pH, la
quantité d'agent de
réticulation, la force
ionique et la
température.
• faible activité
native rétention
(généralement
inférieure à 50%),
mauvaise
reproductibilité, et
une faible stabilité
mécanique.
Applications générales

Les amylases : industrie textile, Les amyloglucosidases : glucoserie

brasserie, pharmacie,
boulangerie, pâtisserie, Les lipases : pharmacie, fromagerie,
biscuiterie, etc chocolaterie

Les invertases : glucoserie et Les protéases : papeterie,

confiserie blanchisserie, boucherie, brasserie,
Les cellulases et les catalases : fromagerie, boulangerie, pâtisserie,
laiterie (stérelisation) alimentation animale
 En somme, l’immobilisation des
enzymes offrent plusieurs
conclusion applications et utilisations dans
divers domaines tels que le domaine
médical, biologique, industriel et
plusieurs autres.
Elle rapproche plusieurs disciplines
scientifiques tout en ouvrant
toujours la possibilité de découvrir
plus et peut être d’ajouter une valeur
à des recherches scientifiques
précédentes.
Merci pour votre attention.