Réalisée par:

Sbai Yosra - Bourouni Nour Biotechnologie industrielle

Ichaoui Afra - Bejoui Safa 2 éme année génie bio
Plan

Domaines
Production d’application
Extraction Purification
de l’amylase s
industrielles

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Définition de l’ amylase

Les amylases sont

des enzymes Elles hydrolysent les
ubiquitaire, peuvent liaisons osidiques de
être synthétisées par l’amylose, de
tous les genres de l’amylopéctine, de
microorganismes l’amidon, du
glycogène et
Elles appartient à la d’autres
famille des glycosides polysaccharides
hydrolases contenant plus de
regroupant plus de trois des liaisons α
1700 enzymes. (1,4) D Glucose

Figure n°1 : image

vectorielle de la structure
de l’amylase

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Les types d’amylases

Exoamylases

Endolamylases

γ – Amylase

Amylase

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Origine de l’ amylase
Origine animale:

• Généralement extraite de la salive humaine et du pancréas des

mammifères, tels que les porc set les veaux .

Origine végétale :

• chez les plantes l’α-amylase joue un rôle important dans le

métabolisme glucidique .
• Elle est obtenue par extraction à partir des céréales, notamment le blé,
l’orge, le son ou le riz.

Origine microbienne:

• Chez les microorganisme, on distingue deux types d’α-amylases : α-

amylases bactériennes ,α-amylases fongiques.

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• Ces enzymes possèdent divers applications industrielles.
Dans cette étude, les un sol foresterie de la région de
HassiMamèche (Mostaganem) ont fait l’objet d’un
isolement et purification des actinomycètes. Après la
sélection des souches par des tests biochimiques et
physiologiques, une fermentation dans un milieu liquide
riche en amidon a été réalisée pour une production des
d’amylases. En dernier, les extraits d’amylases obtenus ont
été quantifiés par la méthode colorimétrique de
Biuret.Afin, de déterminer les paramètres cinétiques km,
Vmax et Vi des extraits enzymatiques, dans des conditions

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α-amylases bactériennes
• Ce type d'enzymes est obtenu
principalement par
fermentation de Bacillacées
• Il s’agit de Bacillus subtilis et
Bacillus damyloliquefacien
sont les plus utilisés pour la
production de l’α-amylase
α-amylases fongiques
• Les amylases fongiques
sont celles:
• d’Aspergillus niger et de
Rhizopusoryzoe
• Différentes études ont
démontré la capacité des
souches levuriennes de
produire l’α-amylase :
Aureobesidum pullulaus
N13 ,Pichia burtonii
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Production de l’alpha amylase:
Le choix du milieu approprié à la fermentation est essentiel pour les microorganismes, aussi bien pour la
croissance que pour la production d’enzymes. cette dernière est aussi influencée par différents
paramètres à savoir : température, pH et temps d’incubation.

1 .Composition du milieu de culture

Le milieu de fermentation pour la production de l’enzyme alpha amylase doit présenter une composition
permettant de maximiser le rendement et cela en tenant compte du système régulation de la synthèse de
l’enzyme, par exemple l'addition de différentes sources de carbone et d'azote .

2. Température

• Entre (35 – 80 °C) pour une croissance optimale et la production d’α- amylase à partir des bactéries.

3. pH

• chez les levures le pH optimum de la production d’α- amylase est de 6 alors que chez les
bactéries le pH de la production α-amylasique est plus élevé.

4. Temps d’incubation

• 24 heures 8
• Détermination de l’activité enzymatique
Coloration par Iode
Amidon + l'iode complexe de couleur bleue
• L'hydrolyse de l'amidon ce complexe de couleur brune
rougeâtre
• L'absorbance peut être lue après que la réaction du substrat est
terminée.

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Extraction de l’α amylase
• Ajouter de l’eau distillé au milieu
• Filtration
• Centrifugation
Le surnageant constitue l’extrait enzymatique brut

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Purification

•   La purification est un ensemble d’opérations visant à enlever toutes les impuretés d’un
extrait brut contenant l’enzyme d’intérêt.
• En principe, n'importe quelle méthode destinée au fractionnement de protéines peut être
employée pour la purification d'enzymes.  

l'enzyme amylase brute  peut être précipitée et

concentrée en utilisant des précipitant au sulfate 
d'ammonium ou des solvants organiques.

Par la suite la seconde étape c'est la

chromatographie 

et enfin l 'extraction pour obtenir une pureté élevée 

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•   exemple :
  Les enzymes peuvent être précipitées en utilisant des sels (sulfate d'ammonium) ou solvants
organiques (isopropanol, éthanol et acétone)

  Il existe plusieurs techniques chromatographiques pour la séparation et la purification des

enzymes Ceux-ci comprennent :

l'échange l'exclusion l'interaction

l'affinité
d'ions de taille hydrophobe

Parmi ceux-ci, la chromatographie d'échange d'ions est la plus couramment utilisée pour la
purification enzymatique.  

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 Applications industrielles
L'amylase, une enzyme dégradant l'amidon, a pris de l'importance dans divers
procédés industriels tels que:

Biocarburants:
• Développement des biocarburants de première génération a production
de bioéthanol

Biscuiterie et panification :

• Régulation des activités diastasiques des farines.

• Formation de la mie souple en boulangerie.
• Amélioration de la texture des gâteaux pâtissiers et des biscuits .
Boissons:

• Fabrication d'alcool éthylique, de boissons sucrées non alcoolisées et de

jus de fruits.
• Obtention des bières sans dextrines, dites bières à basses colories.
Détergent s:

• Augmentation du pouvoir blanchissant.

• Dégradation des résidus de féculents tels que les pommes de terre, les
sauces, crème, chocolat. 13
Environnement

• Traitement des eaux résiduaires pour l’élimination de l'amidon.

Industrie pharmaceutique:

• Aide digestive.
• Anti-inflammatoire et anti-œdémateuse .

Textile, la tannerie, de la papeterie

• Désencollage des tissus ainsi que dans les domaines de papeterie et

tannerie.

Sucrerie:

•Facilité des opérations d'extraction et de raffinage du saccharose à partir de

la betterave ou de la canne à sucre pour éliminer des traces d'amidon gênant
la purification.
•Parfois le sirop de canne peuvent se trouver perturbés par la présence de
contamination amylacés augmentant aussi leur viscosité et nuire ensuite au
processus de cristallisation .
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 Références bibliographiques
• Ajita S, Thirupathihalli P, Krishna M,(2014). α-Amylase Production and
Applications. Journal of Applied & Environmental Microbiology, 4, 166-175.

• Subash C, Periasamy A, Thangavel L,1 Chun H,Uda H, Suresh V,(2017).

Biotechnological Processes in Microbial Amylase Production. BioMed Research
International, 6 pages.

• Kiro,M, (2012) . Microbial alpha-amylases and their industrial applications.

International Journal of Management, IT and Engineering, 10, 583-609.

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