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ARTICLE DE RECHERCHE

Quorumquenching chez les bactéries cultivables des communautés microbiennes

côtières marines denses
Manuel Romero1, Ana-Belen Martin-Cuadrado2, Arturo Roca Rivada1, Ana Marı́a Cabello1& Ana
Otero1
1Departamento de Microbiologı́a y Parasitologı́a, Facultad de Biologı́a-CIBUS, Universidad de Santiago de Compostela, Santiago, Espagne ; et
2Groupe de génomique évolutive, Departamento Producción Vegetal y Microbiologı́a, Universidad Miguel Hernández, San Juan de Alicante, Espagne

Téléchargé depuis https://academic.oup.com/femsec/article-abstract/75/2/205/549029 par invité le 10 novembre 2018

Correspondance:Ana Otero, Departamento de
Microbiologı́a y Parasitologı́a, Facultad de
Biologı́a-CIBUS, Universidad de Santiago de
Compostela, 15782 Santiago, Espagne. Tél. : 1
34 881 816 913; fax:134 981 528 006; e-mail :
anamaria.otero@usc.es
Reçu le 24 août 2010 ; révisé le 2 novembre
2010 ; accepté le 8 novembre 2010.
Version finale publiée en ligne le 13 décembre
2010.
DOI :10.1111/j.1574-6941.2010.01011.x
Résumé
Les processus de détection du quorum (QS) médiés par l'acylhomosérine lactone (AHL)
semblent être courants dans l'environnement marin et parmi les bactéries pathogènes
marines, mais aucune donnée n'est disponible sur la prévalence des bactéries capables
d'interférer avec le QS dans la mer, un processus qui a été généralement appelé «l'extinction
du quorum» (QQ). Cent soixante-six souches isolées de différentes communautés
microbiennes denses marines ont été criblées pour leur capacité à interférer avec l'activité
AHL. Vingt-quatre souches (14,4 %) ont pu éliminer ou réduire significativementN-hexanoyl-L-
activité homosérine lactone telle que détectée par la souche du biocapteurChromobactérie
violaceumCV026, un pourcentage beaucoup plus élevé que celui rapporté pour les isolats de
sol, ce qui renforce le rôle écologique de QS et QQ dans le milieu marin. Parmi celles-ci, 15
souches étaient également capables d'inhiberN-décanoyle-L-activité homosérine lactone et

Monteur : Julien Marchesi tous ont été confirmés pour inactiver enzymatiquement les signaux AHL par HPLC-MS. Les
isolats actifs appartenaient à neuf genres différents d'origine principalement ou exclusivement
Mots clés marine, y compris des membres de laAlpha-etGammaprotéobactéries (8),Actinobactéries (2),
Firmicutes (4) etBacteroidetes (1). Si la fréquence élevée et la diversité des bactéries cultivables
MICROBIOLOGIE ECOLOGIE

détection de quorum ; LAH ; lactonase; acylase;

bactéries marines. avec une activité QQ trouvées dans les isolats marins côtiers reflètent leur prévalence parmi
les communautés bactériennes marines pélagiques mérite une enquête plus approfondie afin
de comprendre l'importance écologique des processus QS et QQ médiés par AHL dans
l'environnement marin.

lequel estN-acylé avec un groupe acyle gras au niveauun-

Introduction
Le quorum sensing (QS) constitue un système de communication bactérien
basé sur la production et la sécrétion de petites molécules signal appelées
autoinducteurs qui s'accumulent dans l'environnement extracellulaire
lorsque des densités cellulaires élevées sont atteintes (Fuquaet al.,1994).
Une fois qu'une concentration intracellulaire seuil est atteinte, la molécule
de signalisation déclenche l'expression synchrone de plusieurs gènes dans
la population, régulant des fonctions biologiques importantes telles que le
transfert conjugal de plasmide, la motilité, l'essaimage, l'agrégation, la
luminescence, la biosynthèse d'antibiotiques, la virulence, la symbiose, la
production de sidérophores ou le biofilm. maintenance et différenciation
(Swiftet al.,2001 ; Waters et Bassler, 2005 ; Williams et al.,2007). Le système
de signalisation QS le mieux caractérisé impliqueN-les lactones
d'acylhomosérine (AHL), une famille de molécules constituées d'un anneau
d'homosérine lactone (HSL)
position. Ces signaux ont été initialement décrits comme étant
produits exclusivement par un nombre relativement restreint de
Protéobactéries (Fuqua et Greenberg, 2002 ; Williamset al.,2007),
mais récemment la production de ces signaux a également été
rapportée pour la cyanobactérie colonialeGloéothèque (Chérif et
al.,2008) et différentes marinesBacteroidetes (Huanget al., 2008 ;
Romeroet al.,2010) qui peuvent renforcer le rôle des systèmes
QS dans les populations naturelles de l'environnement.
Les mécanismes à l'origine de l'inactivation des systèmes de
communication QS sont généralement appelés « extinction du
quorum » (QQ) (Donget al.,2001, 2007), bien que certains auteurs
préfèrent restreindre ce terme à la dégradation enzymatique des
signaux AHL (Kjelleberget al.,2008). Les mécanismes QQ décrits
jusqu'à présent dans la nature incluent la production d'inhibiteurs ou
d'antagonistes de la réception du signal par les algues et les
invertébrés marins (Givskovet al.,1996 ; Kim

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et al.,2007 ; Skindersoeet al.,2008), plantes terrestres (Gao et al.,
2003) et des bactéries (Teasdaleet al.,2009) et l'inactivation
enzymatique des signaux trouvés dans les cellules de
mammifères (Xuet al.,2003 ; Chunet al.,2004), plantes (Delalande
et al., 2005) et chez différentes bactéries (Donget al.,2007 ; Uroz
et al., 2009). Deux groupes d'enzymes de dégradation de l'AHL
ont été identifiés jusqu'à présent. Les acylases qui clivent la
liaison amide AHL générant l'acide gras libre correspondant et le
cycle HSL (Romeroet al.,2008), et les lactonases qui hydrolysent
le cycle HSL de la molécule AHL pour produire les acyl
homosérines correspondantes (Donget al.,2007). Un mécanisme
supplémentaire d'inactivation des AHL basé sur la production
enzymatique de l'halogène oxydé HOBr, qui réagit
spécifiquement avec les 3-oxo-acyl HSL, a été décrit pour l'algue
bruneLaminaria digitata (Borchardtet al.,2001). Les enzymes QQ
ont été décrites comme capables de cataboliser d'autres
composés biologiques importants (Parket al.,2005 ; Khan &
Farrand, 2009) ce qui peut augmenter leur importance
écologique.
Bien que les processus QS et QQ aient tous deux été
découverts dans les organismes marins (Nealsonet al.,1970 ;
Givskovet al.,1996) peu d'attention a été accordée jusqu'à
présent à leur importance écologique dans le milieu marin. Les
preuves commencent à s'accumuler sur l'importance des
processus QS médiés par AHL dans la mer. Près de 60 % des
Alphaprotéobactéries isolés de différents échantillons marins, y
compris des souches libres et associées à des algues, ont pu
activer des souches de capteurs AHL, bien que la présence d'AHL
n'ait pas pu être confirmée dans chacun d'eux (Wagner-Dobleret
al.,2005). Un pourcentage élevé de souches productrices d'AHL a
également été signalé pour les isolats de biofilms subtidaux
(Huanget al.,2008) et des éponges (Mohamedet al.,2008). La
faible population bactérienne rencontrée en haute mer et la
faible stabilité chimique des AHL dans l'eau de mer ont conduit à
suggérer que l'activité QS médiée par AHL pourrait être
concentrée dans des microhabitats spécifiques tels que les
biofilms, la neige marine et les niches eucaryotes (Cicirelliet al.,
2008 ; Hmelo & Van Mooy, 2009). Les AHL semblent également
jouer un rôle important dans les interactions eucaryotes-
procaryotes en milieu marin (Taitet al.,2005, 2009 ; Huanget al.,
2007 ; Weinberg et al.,2007). De plus, la production d'AHL est
courante chez les bactéries pathogènes des poissons marins,
contrôlant l'expression d'importants facteurs de virulence
(Defoirdtet al., 2007).
Au contraire, les informations sur les processus QQ dans le milieu
marin sont encore rares ; bien qu'il existe des preuves indirectes qui
indiquent que ces phénomènes pourraient être fréquents. Les
signaux AHL se dégradent plus rapidement dans l'eau de mer
naturelle que dans l'eau de mer artificielle, une observation qui a été
liée à la présence de l'activité enzymatique QQ (Hmelo & Van Mooy,
2009). De plus, l'ajout d'AHL aux milieux de culture a amélioré
l'efficacité de la culture dans les populations naturelles marines, ce
qui peut indiquer que les AHL sont
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M. Romeroet coll.
facilement disponible dans le milieu marin (Brunset al., 2002).
Malgré cela, aucune étude n'a été faite ni sur la présence de
l'activité QQ chez les bactéries marines ni sur son importance
écologique. En revanche, de nombreuses études décrivent la
présence d'activité QQ dans des échantillons de sol, y compris
des criblages de métagénomes de sol (Williamsonet al.,2005 ;
Riazet al.,2008 ; Schipperet al.,2009) qui ont permis d'isoler
plusieurs souches/gènes capables de dégrader les AHL et
d'établir la prévalence des processus QQ dans des échantillons
de sol (Leadbetter & Greenberg, 2000 ; Parket al., 2003 ; Urozet
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al.,2003 ; Wang et Leadbetter, 2005). Récemment, Tinhet coll. (
2007) ont appliqué avec succès des cultures d'enrichissement
AHL pour démontrer la capacité des communautés bactériennes
de l'intestin des crevettes d'élevage à dégrader les signaux, bien
que ni les bactéries marines responsables de cette activité
n'aient été identifiées ni le type d'activité caractérisé.
Le but de ce travail était d'étudier la présence et la prévalence
de bactéries marines cultivables capables d'interférer avec les
systèmes QS médiés par AHL dans différents échantillons
marins. Dans une première approche, nous avons étudié la
présence d'activité QQ parmi des isolats issus de communautés
bactériennes côtières denses. L'analyse a été réalisée avec des
isolats de trois échantillons marins différents caractérisés par
leur forte charge organique et microbiologique : les algues
marines Fucus vésiculeux,un biofilm faiblement attaché dominé
par des diatomées provenant d'un réservoir d'eau de mer filtrée
et le sédiment d'un réservoir de pisciculture intérieur. La
technique de culture d'enrichissement dans laquelle les AHL
sont la seule source de carbone et/ou d'azote utilisée dans de
nombreuses études (Leadbetter & Greenberg, 2000; Parket al.,
2003 ; Urozet al.,2003 ; Tinh et al.,2007) a été évitée, car elle ne
permet pas d'établir la prévalence de l'activité QQ dans un
environnement particulier.
matériaux et méthodes
Quantification bactérienne et isolement des souches
Trois échantillons différents ont été prélevés avec du matériel de
laboratoire stérile de différentes origines marines en juin 2007 pour
l'isolement bactérien et le dépistage de l'activité QQ contre les AHL.
Les sites d'échantillonnage ont été sélectionnés pour leur haute
densité microbienne. Deux des échantillons ont été obtenus dans un
environnement côtier naturel à Illa de Arousa (421.330.45.3200N 81.53
0.08.2300ouest de l'Espagne) ; l'un provenant du biofilm dominé par
les diatomées, attaché de manière lâche à la paroi d'un réservoir
extérieur en béton (25 000 L), qui servait de réservoir d'eau de mer
filtrée pour une installation d'aquaculture et l'autre provenant de
l'algue bruneF. vésiculeuxrécoltée sur les rochers de la zone
intertidale voisine. Le troisième échantillon a été obtenu à partir du
bassin de sédimentation d'un circuit fermé de pisciculture marine à
l'Université de Santiago (Espagne).
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Quorum quenching chez les bactéries marines
Il a été démontré que l'intégrité des systèmes QS est plus importante
dans des conditions de carence en nutriments (Diggle et al.,2007) et nous
nous attendions donc à ce que l'activité QQ soit plus élevée parmi les
bactéries capables de se développer dans des milieux de culture pauvres
en nutriments. Sur la base de cette hypothèse, des milieux de culture
riches et oligotrophes ont été utilisés pour l'isolement bactérien. Milieux
riches inclus gélose tryptone soja 1% NaCl (TSA-I) et gélose marine (MA)
adaptée aux bactéries eutrophes et formulations à faible teneur en
matières organiques incluses MA dilué au 1/100 avec de l'eau de mer (MA
1/100), milieu d'eau de mer autoclavée filtrée (FAS) complété avec 1 g L-1
casaminoacides (FAS-CAS) (Schutet al.,1993) et milieu FAS additionné
de 0,5 g L-1polymères : agarose, chitine et amidon (FAS-POL) (Brunset
al.,2002). Différentes dilutions de 10 fois ont été préparées dans de
l'eau de mer stérilisée pour chacun des échantillons et étalées dans
les milieux de culture mentionnés ci-dessus. Des échantillons de
sédiments et de biofilms ont été prélevés sous le niveau de l'eau à
l'aide d'une pipette stérile de 50 ml et contenaient donc une quantité
importante d'eau. Les échantillons ont été vigoureusement vortexés
afin d'obtenir une suspension homogène pour les dilutions. Un
gramme de égoutté et tranchéF. vésiculeuxa été ajouté à 10 ml d'eau
de mer stérilisée, vigoureusement vortexé et utilisé pour les
dilutions. Les plaques ont été incubées à 15 et 221C pendant 15
jours. Pour l'estimation des UFC, des plaques de 30 à 300 colonies
ont été sélectionnées. Un total de 166 colonies ont été prélevées et
isolées sur la base de sa couleur et de sa morphologie différentes et
utilisées pour le criblage QQ. Les 166 isolats obtenus ont pu être
cultivés sur MA à 221C et par conséquent ces conditions de culture
ont été sélectionnées comme standard pour la manipulation en
laboratoire.
Dépistage QQ
Les 166 souches isolées ont été testées pour leur activité QQ
dans des tests sur plaque solide réalisés avec le biocapteur AHL
Chromobactérie violaceumCV026 (McCleanet al.,1997). Cette
souche répond aux AHL avec des chaînes acyle de quatre à huit
carbones. Les souches marines isolées ont été cultivées dans 1
mL de bouillon marin (MB) à 221C et 200 rpm Après 24 h, 40mL
d'une solution mère (50mgmL-1dans l'eau) deN- hexanoyl-L
-homosérine lactone (C6-HSL, Sigma-Aldrich) ont été ajoutés
pour atteindre une concentration finale de 2mgmL-1
(dixmM), et incubé pendant 24 h supplémentaires. Afin de détecter
l'inhibition de l'activité C6-HSL, 50mL des surnageants ont été
déposés en double dans des puits réalisés dans des plaques Luria-
Bertani (LB) recouvertes de 5 ml d'une dilution au 1/100 d'une culture
d'une nuit deC. violaceumCV026 dans du LB mou (gélose à 0,8 %). 50
autresmL d'eau distillée stérile a été ajoutée aux puits. Du MB stérile
et du MB plus la même quantité de C6-HSL ont été utilisés comme
témoins dans toutes les plaques. Pour vérifier le spectre des
substrats de l'activité QQ, les souches positives ont été analysées
plus avant pour leur capacité à éliminerN-décanoyle-L- activité
homosérine lactone (C10-HSL, Sigma-Aldrich)
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du milieu de culture à l'aide de la souche biocapteur
C. violaceumVIR07 (Morohoshiet al.,2008a) et la même méthodologie.
Les souches de biocapteurs ont été maintenues dans des plaques LB
additionnées de kanamycine (25mgmL-1). La production de quantités
détectables d'AHL qui pourraient interférer avec laC. violaceumLe
test biologique sur plaque QQ a été testé pour les souches positives
en testant la capacité à induire la production de violacéine de 50mL
de milieux de culture usés provenant de cultures de 48 h dans des
essais biologiques sur plaque pour les deux biocapteurs. La capacité
d'interférer avecN-oxododécanoyl-L-l'homosérine lactone (OC12-HSL)
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a été testée avec la souche de biocapteur à base de luxEscherichia
coliJM109 pSB1075 (Winsonet al., 1998). OC12-HSL a été ajouté à 1 ml
d'une culture d'une nuit des souches marines QQ dans MB
(concentration finale 2mgmL-1) et incubé pendant 24 h à 221C.
L'activité AHL restante dans le milieu de culture a été évaluée dans
des plaques LB recouvertes de 5 ml de gélose LB semi-solide
ensemencée avec 50mL d'une culture d'une nuit à 37 ans1C 200 tr/
min deE. coliJM109 pSB1075. Cinquante microlitres de surnageants
de culture ont été chargés dans des puits. Le MB stérile et le MB plus
OC12-HSL ont été définis comme témoins. Les plaques ont été
incubées pendant 3 h à 371C et la production de lumière dérivée de
l'activité AHL ont été examinées à l'aide d'une caméra lumineuse (EG
& G. Berthold).
L'analyse statistique de l'effet de la température, du milieu de culture
et de l'origine de l'échantillon sur le nombre de souches actives QQ
récupérées a été réalisée à l'aide des méthodes exactes de Fisher et de
Pearson.w2tests au seuil de significationun =0,05, avecSPSS
programme de statistiques V17.0 (SPSS Inc.).
Confirmation de l'activité de dégradation de l'AHL par
HPLC-MS
Pour déterminer si les 15 souches présentant une activité
d'inhibition de QS contre C6- et C10-HSL dans les essais
biologiques sur plaque produisaient un inhibiteur/antagoniste
de l'AHL ou dégradaient enzymatiquement le signal, la
concentration finale d'AHL dans le milieu de culture a été
évaluée par HPLC- MME. Des AHL plus courtes et plus longues
ont été sélectionnées pour l'analyse HPLC-MS afin de vérifier le
spectre d'activité.N-butyryle-L-homosérine lactone (C4-HSL) etN-
dodécanoyl-L-homosérine lactone (C12-HSL) ont été ajoutés à 1
mL de cultures de 24 h des souches sélectionnées à une
concentration finale de 50mM et incubé pendant encore 24 h à
221C et 200 rpm Cinq cents microlitres de milieu de culture usé
obtenus après centrifugation (2000g,5 min) ont été extraits
directement tandis que 500 autresmL ont été acidifiés avec HCl à
un pH de 2 et incubés pendant 24 h à 251C avant extraction afin
de faciliter la récupération de l'activité AHL issue de l'hydrolyse
du cycle lactone issue de l'action des lactonases (Yateset al.,
2002). Les surnageants de culture ont été extraits trois fois avec
un volume égal d'acétate d'éthyle, évaporés sous flux d'azote et
remis en suspension dans 200mL d'acétonitrile pour
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Analyse et quantification HPLC-MS. Les échantillons MB
additionnés de la même quantité de C4- ou C12-HSL ont été
traités et extraits de la même manière et utilisés comme
témoins.
Les analyses ont été réalisées avec une HPLC série 1100
(Agilent) équipée d'une précolonne C8 (2.1 12.5 mm, 5mm) et un
ZORBAX Eclipse XDB-C18 2.1 150 mm (5mm granulométrie)
colonne qui a été maintenue à 451C. La phase mobile a été
construit par 0,1 % d'acide formique dans l'eau (A) et 0,1 %
d'acide formique dans l'acétonitrile (B) (Ortoriet al.,2007). Le
2003 ; Urozet al.,2005, 2008 ; Morohoshiet al.,2008a ; Czajkowski
et Jafra, 2009 ; Taitet al.,2009). Afin d'éliminer les lacunes et les
positions alignées sans ambiguïté, Gblocks a été utilisé
(Castresana, 2000) donnant 649 positions disponibles pour la
construction de l'arbre. L'analyse phylogénétique a ensuite été
effectuée à l'aide deMÉGA4 progiciel d'outil phylogénétique
(Zmasek & Eddy, 2001; Kumaret al.,2004) en utilisant les
paramètres par défaut.
Les séquences ont été déposées dans GenBank sous les
numéros d'accès : HQ441213–HQ441227.

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débit était de 0,22 mL min-1. Les conditions d'élution étaient les
suivantes : 0 min 35% B, gradient linéaire à 60% B en 10 min puis
un gradient linéaire de 60% à 95% B en 5 min, puis 5 min 95% B
puis rampe de retour au départ conditions en 9 min. La colonne
a été rééquilibrée pendant 5 minutes au total. Un 2mLe volume L
a été injecté sur la colonne. Les expériences MS présentées ont
été menées sur un spectromètre de masse triple quadripôle API
4000 (Applied Biosystem, CA) équipé d'une source TurboIon
utilisant l'électrospray à ions positifs, mode de surveillance de
réaction multiple (MRM). Les signaux MRM ont été utilisés pour
générer des informations de quantification relative par
comparaison avec une courbe d'étalonnage construite pour
l'abondance des ions moléculaires, en utilisant chacun des
standards synthétiques AHL appropriés (Miltonet al.,2001).
Résultats
Croissance bactérienne et isolement
Des résultats très différents sur le nombre d'UFC ont été obtenus en
fonction du milieu de culture et de la température de croissance pour
chacun des échantillons (Fig. 1). L'échantillon avec la densité
bactérienne la plus élevée était celui obtenu à partir du sédiment du
bassin de pisciculture, atteignant 3 106UFC mL-1. Les UFC les plus
élevées obtenues à partir du biofilm du réservoir d'eau étaient
inférieures d'un ordre de grandeur. Bien qu'il ne soit pas directement
comparable, le nombre de bactéries viables isolées deF. vésiculeux
était similaire, sur une base pondérale, à la densité bactérienne dans

Bassin de pisciculture de sédiments

3.5
Identification bactérienne et analyse 3
dix6x UFC mL-1

phylogénétique basées sur le 16S 2.5

2
L'identification des souches a été réalisée par amplification et 1.5
séquençage partiel du gène ARNr 16S (longueur approximative 1
des amplicons de 1300 pb). L'ADN génomique des différents 0,5
isolats a été extrait (Puregene Tissue Core Kit B) et le gène de
0
TSA-I UN M AM 1/100 FAS-CAS FAS-POL
l'ARNr 16S bactérien a été amplifié à l'aide des amorces
universelles ANT1 (avant, position 8–27) (50 0,14 Réservoir d'eau de mer biofilm

-AGAGTTTGATCATGGCTCAG) et S (revers, position 1491–1509) (50 0,12

dix6x UFC mL-1

0,1
-GGTTACCTTGTTACGACTT) (Martinez-Murcia & Rodriguez-Valera,
0,08
1994). Les PCR ont été réalisées dans les conditions standards
0,06
suivantes : 35 cycles (dénaturation à 941C pendant 15 s, recuit à
0,04
501C pendant 30 s, extension à 721C pendant 2 min) précédé de 0,02
2 min de dénaturation à 941C et suivi d'une extension de 7 min à 0
721C. Les produits PCR ont été partiellement séquencés, révisés TSA-I UN M AM 1/100 FAS-CAS FAS-POL

et corrigés avecBIOEDITProgramme Sequence Alignment Editor (v. 0,035 Fucus vésiculeux

7.0.9.0, http://www.mbio.ncsu.edu/BioEdit/bioedit.html). Un total 0,03
dix6x UFC g-1

de quinze séquences de gènes d'ARNr 16S ont été identifiées et 0,025

comparées aux séquences de gènes d'ARNr 16S disponibles 0,02
0,015
dans GenBank à l'aide de NCBIEXPLOSION(Altschulet al.,1997) et le
0,01
projet de base de données ribosomique (http://
0,005
rdp.cme.msu.edu/). Les séquences du gène de l'ARNr 16S ont été
0
alignées à l'aide deLE MUSCLE(Edgar, 2004) avec leurs plus proches TSA-I UN M AM 1/100 FAS-CAS FAS-POL

parents dans des bases de données identifiées par Fig. 1.UFC ml-1ou UFC g-1obtenus pour chacun des milieux de culture utilisés pour
EXPLOSIONet les isolats avec une acylase ou une lactonase l'isolement des souches marines dans les trois échantillons marins sélectionnés à 151C
précédemment identifiée ou avec une activité QQ connue (Parket al., (barres blanches) et 221C (barres noires).

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biofilm du réservoir d'eau, atteignant 3 105UFC g-1au mieux. La
température de croissance et, plus important encore, le milieu de culture
utilisé pour l'isolement ont également eu une grande influence sur le
nombre de bactéries viables isolées. Température plus élevée (221C) a
permis la croissance d'un plus grand nombre de colonies dans presque
tous les cas. Le MA dilué (MA 1/100) et le FAS-CAS ont été les plus efficaces
pour la récupération des UFC dans les échantillons de sédiments et de
biofilm, tandis que dans leF. vésiculeuxéchantillon, MA et FAS-POL étaient
également efficaces à haute température, produisant trois fois plus d'UFC
que les autres milieux de culture (Fig. 1).
ces milieux de culture riches tandis que dans l'échantillon de biofilm, la
plupart des souches ont été isolées des milieux de culture FAS (tableau 1).
Le nombre de souches isolées aux deux températures différentes utilisées
était très similaire : 91 souches ont été isolées à partir de plaques
maintenues à 221Les souches C et 75 ont été isolées à partir de plaques
maintenues à 151C (données non présentées).
Détection basée sur des essais biologiques de
l'activité d'inhibition du QS
Un essai sur plaque solide a ensuite été réalisé en utilisant la souche

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Un total de 166 isolats ont été obtenus à partir des environnements
reporterC. violaceumCV026 qui produit de la violacéine en réponse à
marins sélectionnés pour le dépistage QQ sur la base de la morphologie
la présence d'AHL à chaîne courte, permettant ainsi la détection de
distincte des colonies, 85 souches de l'échantillon de sédiment du
l'inhibition de l'activité C6-HSL ajoutée en externe (Fig. 2). Ce test
réservoir, 48 du biofilm du réservoir et 33 duF. vésiculeux (Tableau 1).
nous a permis de différencier directement les souches présentant
Malgré le CFUmL plus élevé-1obtenus avec des milieux de culture
une activité inhibitrice de croissance de celles ayant une réelle
oligotrophes dans les deux premiers échantillons (Fig. 1), environ la moitié
activité QQ. LaC. violaceum Le test solide CV026 a permis
des isolats utilisés pour le dépistage QQ ont été obtenus à partir de
l'identification de 24 souches ayant une activité QQ contre C6-HSL, ce
milieux plus riches, TSA 1% NaCl et MA, en raison de la plus grande
qui représente 14,4% des souches isolées (tableau 1). Contre
variabilité des colonies observées. Dans le cas de l'échantillon de
l'hypothèse initiale d'une probabilité plus élevée d'isoler des souches
sédiment, plus de 70 % des isolats provenaient de
actives QQ en utilisant des milieux de culture oligotrophes, aucun
effet statistiquement significatif des milieux de culture utilisés pour
l'isolement n'a été trouvé sur le pourcentage de souches ayant une
Tableau 1.Résumé des souches isolées (types morphologiques) de différents
activité QQ (Tableau 1,w2
échantillons et milieux de culture, montrant le nombre et le pourcentage de
souches ayant une activité d'inhibition QS contre C6-HSL obtenues à l'aide de la test,P40,05). Cinquante pour cent des souches actives ont été
plaque solide Chromobactérie violaceumTest CV026 isolées à 221C et donc l'effet de la température d'isolement
n'était pas statistiquement significatif (test exact de Fisher,P4
Nbre d'isolés
souches Souches QQ % QQ 0,05). Au contraire, un effet important de l'origine de
l'échantillon sur le pourcentage de souches avec QQ
Sédiments d'aquarium
activité a été trouvée (tableau 1,w2test,Po0,05). Alors que les souches
TSA–1 % de NaCl 30 2 6.7
MA 31 4 12.9 isolé des cuves présentait un pourcentage de QQ
MA 1/100 9 1 11.1 entre 6% et 9% (tableau 1), près de 40% des souches
FAS-CAS sept 0 0 isolées de laF. vésiculeuxétaient actifs contre
FAS-POL 8 1 12.5 C6-HSL (tableau 1).
Total 85 8 9.4
La capacité à interférer avec C10-HSL et OC12-HSL des 24
Biofilm du réservoir d'eau
souches capables d'inactiver C6-HSL a été testée plus avant à
TSA–1 % de NaCl 9 0 0
MA 5 0 0 l'aide des souches biocapteursC. violaceumVIR07 etE. coliJM109
MA 1/100 sept 0 0 pSB1075, respectivement (figure 2, tableau 2). Parmi
FAS-CAS 17 2 11.8 eux seulement 15 ont pu éliminer complètement l'activité de
FAS-POL dix 1 10.0 C10-HSL détectée parC. violaceumVIR07 sous 24h
Total 48 3 6.3 (Fig. 2) et par conséquent ces souches ont été sélectionnées pour une
Fucus vésiculeux
caractérisation plus poussée de l'activité QQ et de l'identification.
TSA–1 % de NaCl 9 3 33.3
Ces souches ont été isolées deF. vésiculeux (7), les sédiments du réservoir
MA 9 2 22.2
de poissons (7) et le biofilm du réservoir d'eau (1) (tableau 2). Dix sur
MA 1/100 5 3 60,0
FAS-CAS sept 3 42,9 de ces 15 souches ont également été capables de supprimer complètement la

FAS-POL 3 2 66,7 Activité OC12-HSL détectable au biocapteur (tableau 2),

Total 33 13 39.4 indiquant qu'une large gamme d'AHL peut être inactivée par ces
Tous les échantillons
souches.
TSA–1 % NaCl 48 5 10.4
MA 45 6 13.3
MA 1/100 21 4 19.0
Caractérisation de l'activité QQ par
FAS-CAS 31 5 16.1 Analyse HPLC-MS
FAS-POL 21 4 19.0
Les 15 souches étant capables d'éliminer l'activité de C6- et
Total 166 24 14.4
C10-HSL dans les essais biologiques sur plaque ont pu significativement

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210 M. Romeroet coll.

(un) (b)
168 20J 168 20J Fig. 2.Image du test sur plaque solide pour détecter les
souches QQ marines avec les biocapteurs AHL
Chromobactérie violaceumCV026 (a) etC. violaceum
VIR07 (b). Les souches QQ positives ont dégradé les
Contrôler 176 deux AHL (10mM) après 24 h, éliminant la production
Contrôler
C6-HSL
176 Vibrio C10-HSL de violacéine par rapport au témoin (puits central). Une
Vibrio
anguillarum souche deVibrio anguillaruma également été utilisé
anguillarum
comme témoin négatif.

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Tableau 2.Identification des 15 souches à activité QQ sur la base de la séquence du gène ARNr 16S

% ID au locus du gène
Origine Souche Bactéries cultivées les plus proches ARNr 16S OC12-HSL Séquences putatives

Fucus vésiculeux 2 Hypomonassp. DG895 99 111 Acylase/lactonase

5 Stappiasp. 98 1 Lactonase
168 Alteromonassp. BCw156 99 111 acylase
172 Océanobacillesp. YIM DH3 99 - acylase
173 Rhodococcus érythropolisPR4 100 111 Lactonase
176 Stappiasp. 98 111 Lactonase
177 Phaeobactersp. NH52F 96 111
Sédiments d'aquarium 20J Décoloration du TenacibaculumDSM 99 111
24 18842 Bacille circulantsouche X3 98 111 Lactonase-
30 Océanobacillesp. YIM DH3 Halomonas 99 - acylase
33 taeanensissouche BH539 Rhodococcus 99 -
50 érythropolisMM30 Stappiasp. 99 111 Lactonase
97-1 98 111 Lactonase
97-2 Océanobacillesp. YIM DH3 99 - acylase
Biofilm du réservoir d'eau 61 Roseovarius aestuariiSMK-122 99 111

La capacité à dégrader OC12-HSL est montrée, ainsi que la présence de séquences putatives homologues aux acylases et lactonases connues dans les génomes
séquencés disponibles.
- Basé sur la présence commune de lactonases putatives dans les génomes disponibles des espèces du genreBacille.

réduire la concentration de C4- et C12-HSL telle que mesurée par
HPLC-MS (Fig. 3). Le pH final des cultures après le test de dégradation
de 24 h était inférieur à 7 dans tous les cas et, par conséquent, la
lactonisation spontanée des AHL due à des valeurs de pH élevées
peut être ignorée (Yateset al.,2002). Ce résultat indique la présence
d'une activité de dégradation enzymatique dans toutes les souches.
Océanobacille (souches 172, 30 et 97-2) etHalomonas (souche
33) semblent présenter une activité lactonase à large spectre,
car la quantité d'AHL est partiellement récupérée après
acidification des milieux de culture usés (Fig. 3).
Identification des bactéries et recherche dans la base de données

La récupération de la concentration d'AHL dérivée de
l'acidification du milieu de culture usé à pH 2, qui entraîne la
reformation spontanée du cycle lactone ouvert par l'activité
lactonase, était plus fréquente pour C4-HSL (Fig. 3). Seule la souche
177, une nouvelle espèce deAlphaprotéobactéries relative à
Phaeobacter;souche 2, identifiée commeHypomonas sp.; souche 168,
identifiée commeAlteromonassp.; et la souche 24, identifiée comme
Bacille circulanta produit une dégradation presque complète des
deux AHL qui n'a pas pu être récupérée de manière significative par
acidification, indiquant une activité enzymatique différente de la
lactonase. Plusieurs souches telles que la souche 20J (identifiée
commedécoloration du Tenacibaculum)présentent un profil de
dégradation différent pour les AHL courts et longs, indiquant plus
d'un type d'activité enzymatique, tandis que d'autres appartenant
aux genresStappia (souches 5, 176 et 97-1),
Les séquences du gène ARNr 16S des 15 isolats sélectionnés
ont été obtenues et utilisées pour uneEXPLOSIONrechercher
des séquences dans GenBank afin d'évaluer leur affiliation
taxonomique. L'identification d'isolat la plus proche est
présentée dans le tableau 2. Sur les 15 isolats, deux
appartenaient à Gammaprotéobactéries (33 et 168), six au
Alphaprotéobactéries (5, 97-1, 176, 2, 61 et 177), six à
Firmicutes (24, 30, 97-2 et 172), deux auActinobactéries (50
et 173) et un auBacteroidetes (20J).
Parmi les 15 isolats caractérisés, seuls trois, la souche 24 (B.
circulans98% d'identité) et les souches 50 et 173 (Rhodococcus
érythropolis,99 % et 100 % d'identité, respectivement) appartiennent
à des genres dans lesquels des isolats terrestres avaient été
précédemment décrits comme ayant une activité QQ (Donget al.,
2002 ; Urozet al.,2003). Un autre, souche 20J (T. se décolorer99 %)

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Quorum quenching chez les bactéries marines 211

100

90
C4-HSL C4-HSL acidifié
80

70

60

% LAH
50

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40

30

20

dix

0
CM 2 5 168 172 173 176 177 20J 24 30 33 50 97-1 97-2 61
C4
Fucus Sédiment Biofilm
Souche

100

90
C12-HSL C12-HSL acidifié
80

70

60
% LAH

50

40

30

20

dix
Fig. 3.Analyse HPLC-MS de C4-HSL et C12-HSL dans les
milieux de culture des 15 isolats QQ positifs après 24 h. 0
La concentration initiale d'AHL était de 50mLes milieux
CM 2 5 168 172 173 176 177 20J 24 30 33 50 97-1 97-2 61

de culture usés M. ont été acidifiés à pH 2 afin de

C12
permettre la récupération du cycle lactone après
Fucus Sédiment Biofilm
lactonolyse. Souche

appartient à un genre marin dans lequel l'activité QQ a été récemment
décrite pour l'espèce pathogèneTenacibaculum maritimum (Romeroet al.,
2010), bien que ce dernier ne soit pas capable de dégrader les AHL à
chaîne courte. La présence deBacille espèce n'est pas rare dans les
échantillons marins (Ivanovaet al., 1999), mais la souche 24 a été isolée des
sédiments d'un système d'élevage de poissons dans les eaux intérieures
et, par conséquent, une origine terrestre ne peut être exclue. Deux isolats
obtenus de différentes sources, la souche 50 de sédiments d'aquarium et
la souche 173
deF. vésiculeux,ont été identifiés commeR. érythropolis (Tableau
2). Le genreRhodococcusest largement distribué dans les
habitats aquatiques et terrestres et plusieurs espèces de ce
genre sont capables de dégrader les AHL, toutes d'origine
terrestre (Urozet al.,2008).
Tous les nouveaux isolats présentant une activité QQ appartiennent à
des genres typiques des milieux marins. LaAlphaprotéobactéries Stappia
sp. (souches 5, 176 et 97-1), un genre qui comprend plusieurs espèces
marines anciennement classées comme

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212
appartenir àAgrobactérie,et le firmicuteOcéanobacillesp.
(souches 172, 30 et 97-2), genre regroupant de nombreuses
espèces facultatives alcalinophiles et marines, semblent être
omniprésents car des représentants des deux genres ont pu
être isolés plusieurs fois à partir d'échantillons d'origine très
différente (F. vésiculeuxet sédiments d'aquarium). Parmi les
souches isolées deF. vesiculosus, Hyphomonassp. (souche 2)
appartient au groupe des bactéries prothécates marines qui
sont des épibiontes algaux typiques (Poindexter, 2006),
tandis queAlteromonassp. (souche 168) est un genre de
marinGammaprotéobactériesfréquemment isolé de divers
milieux marins, dont les algues (Gauthier & Breittmayer,
1992). Enfin, la souche 177 représente une nouvelle espèce
de Alphaprotéobactériesqui est lié (ID 96%) àPhaeobacter
sp., un genre de bactérie marine proche de laRoseobacter
clade (Martreet al.,2006 ; Fig. 4), bien que des parents plus
proches aient été décrits parmi les bactéries non cultivables
(Joneset al.,2007).
Parmi les isolats obtenus à partir des sédiments des aquariums, la souche 20J
présentait une identité à 99 % avec l'agent pathogène des poissons
T. se décolore.Le genreTenacibaculumappartient à laCytophaga–
Flavobacterium–Bacteroidescluster, également connu sous le nom de
Bacteroidetes,qui constitue l'un des groupes bactériens
hétérotrophes dominants dans les habitats aquatiques et comprend
plusieurs espèces responsables de la « maladie bactérienne du
glissement » des poissons marins ou ténabaculose/flexibactériose.
Étonnamment, la souche 20J a été isolée dans du TSA–NaCl 1 %, une
caractéristique qui exclurait sa classification comme membre de cette
espèce (Piñeiro-Vidalet al.,2008). La souche 33 a été identifiée comme
un membre du genreHalomonas (ID 99 %), un groupe principalement
marinGammaprotéobactériesqui comprend plusieurs souches
modérément halophiles.
La seule souche active isolée du biofilm de surface du réservoir
d'eau - la souche 61 - a été identifiée commeRoseovarius aesturarii (
ID 99 %), un genre strictement marinAlphaprotéobactéries (Labrenz
et al.,1999). Cette espèce appartient à la Roseobacterlignée dont on
estime qu'elle comprend 20 à 30 % des séquences de gènes d'ARNr
16S dans la zone photique des environnements marins (Wagner-
Dobler & Biebl, 2006).
Les relations entre les 15 souches séquencées et d'autres
séquences de gènes d'ARNr 16S provenant d'autres isolats ayant
une activité QQ (Czajkowski & Jafra, 2009 ; Taitet al.,2009 ; Uroz
et al.,2009 ; Nithyaet al.,2010) sont présentés dans le
dendrogramme de la Fig. 4.Delftiasp. A317 etOchrobactrumsp.
A44, qui ont été décrites comme ayant une activité QQ (Jafraet
al., 2006), n'ont pas été inclus dans l'analyse en raison de la
courte séquence de lecture 16S.
Discussion
Cette étude révèle que QQ est une caractéristique commune parmi
les bactéries cultivables isolées de communautés bactériennes
marines denses. Le pourcentage de souches isolées pouvant
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pour éliminer l'activité AHL obtenue dans cette étude, 14,4% (tableau 1),
est beaucoup plus élevée que les pourcentages obtenus jusqu'à présent
dans les isolats de sol et de plantes. De plus, ce pourcentage pourrait être
sous-estimé car les souches ont d'abord été sélectionnées pour leur
capacité à interférer avec l'activité C6-HSL, tandis qu'une analyse ultérieure
a révélé que la capacité à interférer avec les AHL à longue chaîne est
beaucoup plus fréquente parmi les isolats marins (données non
présentées).
Dans l'étude pionnière qui a permis le clonage de la première
lactonase du genreBacille (Donget al.,2000), seules 24 souches sur
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500 (4,8 %) isolées du sol étaient actives contre les AHL. Les
pourcentages de souches actives obtenus dans des études
ultérieures pour des échantillons de sol étaient encore plus faibles,
n'étant que légèrement supérieurs à 2% (Donget al.,2002 ; D'Angelo-
Picard et al.,2005). Un criblage de plus de 10 000 clones d'une banque
métagénomique du sol a produit un seul clone capable de dégrader
les AHL (Riazet al.,2008), tandis que le criblage de plus de 7000 clones
métagénomiques du sol a permis l'identification de trois clones à
activité lactonase (Schipperet al.,2009). Ces faibles pourcentages
d'activité peuvent ne pas être représentatifs de l'activité QQ réelle
présente dans le sol en raison des difficultés intrinsèques de
récupération de l'activité enzymatique à partir de bibliothèques
métagénomiques à base de fosmide. Au contraire, deux des 16
isolats d'un biofilm provenant d'un système de traitement de l'eau
ont présenté une activité QQ (Linet al.,2003), indiquant déjà la forte
activité présente dans les milieux aquatiques à haute teneur en
matière organique.
La procédure de criblage QQ utilisée dans ce travail a évité
l'utilisation de cultures d'enrichissement basées sur la capacité de
croître avec des AHL comme seule source de carbone et d'azote qui
ont été utilisées dans de nombreuses études (Leadbetter &
Greenberg, 2000; Parket al.,2003, 2006 ; Urozet al.,2003), afin
d'obtenir une image large de la prévalence et de l'importance
écologique des activités QQ dans ces échantillons côtiers marins.
L'un des résultats les plus frappants est que tous les isolats ont
activement dégradé les AHL, même dans des milieux hautement
organiques, dans lesquels d'autres sources de carbone sont plus
facilement disponibles. Ainsi, dans les conditions testées, la capacité
de dégradation de l'AHL ne peut être considérée comme une simple
activité métabolique visant à obtenir de l'énergie.
Bien qu'un fort effet des milieux de culture utilisés pour
l'isolement sur le nombre d'isolats actifs QQ était attendu, un tel effet
n'a pas pu être confirmé. Au contraire, un fort effet de l'origine de
l'échantillon sur le nombre de souches ayant une activité QQ a été
trouvé. Près de 40 % des souches isolées deF. vésiculeuxont pu
dégrader les AHL. LaFucuset les échantillons de biofilm du réservoir
d'eau ont été exposés à la même eau naturelle côtière ; au contraire,
le sédiment de l'aquarium a été obtenu à partir d'un système de
culture en recirculation à l'intérieur des terres et a été exposé à une
charge organique beaucoup plus élevée, comme en témoignent les
valeurs élevées d'UFC obtenues pour cet échantillon. Par conséquent,
aucune corrélation directe entre la charge organique et l'activité QQ
ne peut être conclue. Le haut
FEMS Microbiol Écol75 (2011) 205–217
Quorum quenching chez les bactéries marines 213

Souches à activité positive Souches à acyl-homosérine lactone acylases

Souches de ce travail Souches avec lactonases

Souches à activité oxydase

Gammaprotéobactéries

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Bêtaprotéobactéries

Alphaprotéobactéries
Actinobactéries

Cyanobactéries

Firmicutes

Bactériodètes

Fig. 4.Arbre de jonction voisin basé sur le gène de l'ARNr 16S, montrant les relations entre les isolats marins caractérisés dans cette étude - en rouge - et les espèces avec des
lactonases et des acylases connues ou une activité QQ connue. Le numéro trouvé après chaque nom de taxon est le numéro d'accès pour la séquence respective du gène de l'ARNr
16S. Les valeurs bootstrap supérieures à 50 % de l'analyse de jonction de voisins sont affichées. Barre d'échelle, 0,02 substitutions par position de nucléotide.

pourcentage d'activité QQ obtenu enFucusisolats soutient Outre la fréquence plus élevée avec laquelle les bactéries QQ
l'existence de fortes interactions microbiennes dans la frontière pourraient être isolées, la diversité rapportée pour les bactéries dégradant
eucaryote-procaryote qui favorisent des activités biologiques l'AHL isolées à partir des échantillons marins est beaucoup plus élevée que
uniques (Gaoet al.,2003 ; Éganet al.,2008). celle rapportée à partir des isolats de sol et de plantes. Membres de

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214
neuf genres différents appartenant à laAlpha-et
Gammaprotéobactéries, Actinobactéries, FirmicutesetBacteroidetes
(Fig. 4) ont été isolés de nos échantillons marins et une nouvelle
espèce liée àPhaeobactera été identifié (souche 177). La quasi-totalité
des isolats actifs appartiennent à des genres majoritairement ou
exclusivement marins, excluant leur origine terrestre malgré le
caractère côtier des prélèvements. Seuls trois des isolats
appartiennent à des genres (BacilleetRhodococcus)dans lequel les
isolats terrestres avaient été précédemment décrits comme ayant
une activité QQ (Donget al.,2002 ; Urozet al.,2003). En revanche, dans
un criblage de 800 souches du sol, tous les isolats caractérisés à forte
activité appartenaient au genre Bacille (Donget al.,2002). Dans une
étude distincte, les dégradeurs de l'AHL appartenant aux deuxBacille
sp. et leAlphaprotéobactériespourrait être isolé de la rhizosphère du
tabac, mais encore une fois seulementBacilleespèces pouvaient être
isolées d'un même sol (D'Angelo-Picardet al.,2005).
Afin d'élucider si la perturbation du QS observée dans les souches
positives sélectionnées était due à l'activité enzymatique ou à la
production d'autres AHL ou de substances de type AHL, la production
d'AHL a été testée en utilisant les mêmes conditions d'essai
biologique sur plaque et de culture et l'activité enzymatique des 15
souches sélectionnées a été évaluée à l'aide de techniques HPLC-MS
(Fig. 3). Les essais biologiques sur plaque utilisant
C. violaceumCV026 et VIR07, couvrant toute la gamme des AHL, n'ont
pu détecter la production d'AHL pour aucune des 15 souches
(données non présentées). Les résultats HPLC ont démontré que les
15 souches sélectionnées dégradaient activement à la fois C4- et C12-
HSL. L'activité lactonase semble largement répandue dans le genre
Bacille (Donget al.,2002) mais l'acidification du milieu après
dégradation des AHL dans notreB. circulansl'isolat n'a permis de
récupérer aucune activité C12-HSL et seulement une petite partie de
C4-HSL (Fig. 3), indiquant un type d'activité enzymatique différent de
la lactonase décrite jusqu'à présent pour ce genre. Il reste à
confirmer si une éventuelle AHL oxydase comme celle rapportée
pourBacillus megaterium (Chowdharyet al.,2007 ; Cirouet al.,2009)
est responsable de la capacité QQ de notre marineB. circulansisoler
(souche 24).
Rhodococcus érythropolisLa souche W2 est une souche
particulière car il a été démontré qu'elle était capable d'inactiver une
large gamme d'AHL en utilisant trois mécanismes enzymatiques
différents : une lactonase, une amidohydrolase - ou acylase - et une
activité oxydoréductase qui réduit la 3-oxo-N-AHL à leurs équivalents
hydroxylés (Parket al.,2006 ; Urozet al.,2008). Cette combinaison
unique n'a pu être trouvée dans d'autres espèces terrestresR.
érythropolissouches, dans lesquelles seule la lactonolyse semble être
active pour dégrader les AHL (Urozet al.,2008). Bien qu'une étude
plus détaillée sur les activités enzymatiques présentes dans nos
espèces marinesR. érythropolisisolats est nécessaire, l'analyse HPLC
de la dégradation de C12-HSL a démontré que le pic ne pouvait pas
être récupéré après acidification des milieux de culture (Fig. 3) et
donc une activité enzymatique autre que la lactonolyse devrait être
active dans les deux isolats. Sur
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au contraire, la C4-HSL pourrait être partiellement récupérée après
acidification (Fig. 3), et donc une activité enzymatique complexe comme
celle rapportée pourR. érythropolisW2 est proposé pour ces souches
marines, qui pourraient mériter une caractérisation plus poussée.
La recherche dans les génomes disponibles des espèces actives
QQ a révélé la présence de séquences QQ dans plusieurs d'entre
elles (Tableau 2). Dans certains cas, comme leStappiasouches, qui
présentent une activité lactonase claire, la séquence récupérée est
cohérente avec le type de dégradation de l'AHL révélé par l'analyse
HPLC-MS préliminaire. Au contraire, dans le cas de laOcéanobacille
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spp., l'analyse HPLC indique une activité de type lactonase, alors que
seule une séquence d'acylase a pu être trouvée dans le génome avec
une homologie significative avec les enzymes QQ connues. Le
clonage des enzymes responsables de l'activité QQ chez ces
nouvelles espèces va sûrement étendre nos connaissances sur leur
variabilité et leurs modes d'action. De plus, une caractérisation plus
poussée de ces isolats marins et de leur activité peut conduire au
développement d'applications biotechnologiques, notamment dans
le domaine de l'aquaculture (Defoirdtet al.,2007).
Le pourcentage élevé de souches QQ isolées dans la présente
étude semble indiquer que QQ est une stratégie habituelle adoptée
dans les milieux marins pour obtenir des avantages compétitifs, au
moins dans les environnements côtiers riches en nutriments. Cela
était particulièrement vrai pour les bactéries isolées deF. vésiculeux,
indiquant de fortes interactions bactériennes à la surface des algues.
Des études plus détaillées sur la présence de l'activité QQ dans les
bactéries cultivables en haute mer ajouteraient probablement des
informations utiles pour élucider l'importance écologique des
processus QS et QQ médiés par l'AHL dans l'environnement marin.
Remerciements
Ce travail a été financé par une subvention de Consellerı́a de
Innovación e Industria, Xunta de Galicia PGIDIT06P-XIB200045PR. MR
a été soutenu par une bourse FPU du ministère espagnol des
sciences et de l'éducation et une bourse prédoctorale de la
Diputación de A Coruña. A.-BM-C. a été soutenu par une bourse Juan
de la Cierva, du Ministerio de Ciencia e Innovación espagnol. Nous
tenons à remercier Noemi Ladra pour son soutien sur l'analyse HP
LC-MS.Chromobactérie violaceumLes souches de biocapteurs CV026
et VIR07 ont été gracieusement fournies par le professeur M. Cámara
de l'Université de Nottingham et le professeur T. Morohoshi de
l'Université d'Utsunomiya, respectivement. Le professeur M. Cámara
a également fourni OC12-HSL. Nous tenons également à remercier
Alex Mira pour son soutien dans le séquençage de l'ARNr 16S.
Références
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& Lipman DJ (1997) Gapped BLAST et PSI-BLAST : un nouveau
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