Magazine Du Cours Linformation Genetique Ses Manipulations en Genie Genetique

LE CYCLE SCIENTIFIQUES
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Thème 2 : La génétique
Chapitre 3 : L’information génétique : Ses manipulations en génie génétique
I- Situations problème :
Situation 1 :
Des colibacilles et des levures qui produisent des protéines et des hormones.
- Une équipe de chercheurs a réussi l’introduction, dans des Colibacilles, du gène qui
contrôle la synthèse de l’ovalbumine par les cellules de l’oviducte de la poule.
Ces bactéries ainsi transformées sont devenues capables de synthétiser cette protéine.
- Des colibacilles et des cellules de levure reprogrammés génétiquement par l’introduction
des gènes humains qui contrôlent la synthèse de l’insuline et l’hormone de croissance
humaine ont synthétisé ces deux hormones.
Observation tridimensionnelle de colibacilles Observation tridimensionnelle de levures
On a constaté, également que le nouveau caractère acquis est transmis dans toute la
descendance issue de la division des cellules ainsi transformées.
1
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Situation 2 :
Des recherches ont réussi l’introduction dans le génome de plante de Tabac, du gène codant
pour la synthèse d’une protéine toxique pour les insectes. Ce gène a été isolé d’une bactérie
Bacillus Thuringiensis utilisée en agriculture biologique pour remplacer les pesticides. Les
plantes transgéniques ainsi obtenues résistent aux insectes et provoquent leur mort.
Plante de tabac ravagée par

un insecte au stade chenille
Plante naturelle de tabac
attaquée par des insectes Plante transgénique de tabac
1- Qu’est-ce que le génie génétique ?

2- Quelles sont les principales applications dans les domaines médical et agronomique
du génie génétique ?
3- Quelles sont les étapes nécessaires pour obtenir un microorganisme ou un
organisme transgénique ?
4- Quelles sont les techniques du génie génétique ?
5- Quels sont les outils utilisés en génie génétique ?
2
II- Rappels des préacquis :

Activité 1 page 191
– Chaque individu animal ou végétal présente un ensemble de caractères héréditaires qui
sont transmis des parents aux descendants. Chaque caractère héréditaire se manifeste par
deux ou plusieurs phénotypes.
– Un caractère héréditaire est déterminé par une information génétique localisée sur un
chromosome, au niveau de l’ADN sous forme d’une séquence de nucléotides ;
on parle de gènes.
– Les gènes s’expriment par les phénotypes correspondants en déterminant la synthèse de
protéines bien déterminées permettant la réalisation de tels phénotypes.
– Au cours de la mitose, une cellule mère donne deux cellules filles identiques. Cette
reproduction conforme s’explique par la réplication de l’ADN pendant l’interphase.
Le document ci-dessous les étapes de l’expression d’un gène chez une cellule eucaryote.
Les étapes de l’expression d’un gène
1- Les étapes de l’expression d’un gène sont :

- Transcription de l’ADN et formation de l’ARNm dans le noyau.
- Transfert de l’ARNm à travers les pores nucléaires vers le cytoplasme.
- Traduction de l’ARNm en protéine
2-a Le noyau est qualifié de bibliothèque qui contient les ″plans de fabrication des protéines″
puisqu’il contient toute l’information génétique de la cellule. Cette information est écrite sous
forme séquences de nucléotides d’ADN formant ainsi de nombreux gènes.
3
2-b- Le cytoplasme est qualifié ″d’atelier de fabrication des protéines″ puisque dans le
cytoplasme se passe la traduction de l’information génétique écrite sur la molécule d’ARNm
en protéines écrite en utilisant 20 acides aminés différents.
3- Les différents acteurs moléculaires impliqués dans la traduction de l’information génétique
et leurs rôles respectifs.
Acteurs Rôles
Support moléculaire bicaténaire qui porte l’information

ADN
génétique sous forme de séquence de nucléotides
Enzyme nucléaire qui assure la transcription de l’ADN en

ARN polymérase
ARNm
Une copie monocaténaire du brin transcrit de l’ADN formé

ARNm
par complémentarité des bases azotées.
Ribosome Traducteur du langage écrit sur l’ARNm en protéines
Adaptateur qui fait correspondre chaque acide aminé à son

ARNt
emplacement précis selon la séquence de l’ARNm.
Eléments constitutifs des protéines, ils sont liés entre eux

Acides aminés
par des liaisons peptidiques.
Forme d’énergie utilisable par la cellule pour assurer la

ATP
transcription et la traduction.
III- Qu’est-ce que le génie génétique ?
Le génie génétique est un ensemble de techniques permettant la manipulation des

gènes et leur transfert dans de nouveaux organismes animaux, végétaux ou
microorganismes.
Les organismes ainsi traités sont appelés organismes génétiquement modifiés ou
OGM ou encore organismes transgéniques.
4
III- Quel est l’intérêt du génie génétique ?

A- Les principales applications du génie génétique :
1-a- D’après les textes pages 192-193-194, le génie génétique est utilisé dans le domaine
agroalimentaire et médical.
Textes Domaines Intérêts
Production d’hormones : hormones de croissance,

Texte 1
l’insuline, …
Texte 2 Production de vaccin contre l’hépatite B

Domaine
médical
Correction du déficit enzymatique et amélioration des
Texte 3
défenses immunitaires
Texte 4 Production d’interférons antiviraux
Texte 5 Production d’alcool à partir du lactose
Texte 6 Production de présure pour la coagulation du lait
Domaine Production de thaumatine pour la production de

Texte 7
agroalimentaire boissons sans sucre
Production de plantes résistantes à l’herbicide

Texte 8
″Basta″
Augmentation de la production des lipides

Texte 9
polyinsaturés
5
1-b Le génie génétique est utilisé aussi dans la fabrication, en quantité industrielle, des
antibiotiques, des vitamines, des médicaments, dans le diagnostic prénatal pour déterminer
les maladies héréditaires, dans l'amélioration de la photosynthèse, amélioration de
l'alimentation animale, transfert d'embryon, des produits chimiques et dans la lutte
biologique.
2- La manipulation génétique des microorganismes et des bactéries consiste à introduire des
gènes de structures à l’origine de la production de nouvelles protéines qui sont utiles pour
l’homme.
Cette manipulation rend ces microorganismes programmés pour produire rapidement des
quantités énormes de ces protéines. Ces modifications génétiques sont à l’origine de
nouveaux caractères héréditaires transmis aux descendants.
3-a Certaines personnes souffrent de drépanocytoses, si on pourrait isoler les gènes qui
codent pour l’hémoglobine normale et faire transporter ces gènes sur des vecteurs (virus)
pour les introduire dans toutes les cellules d’un individu puis les faires exprimer. Dans ce cas
on pourrait guérir la drépanocytose.
3-b Certains fruits résistent mal à la conservation et leur qualité se dégrade rapidement.
Alors on pourrait introduire un gène de résistance dans le génome de ces plantes pour
améliorer la qualité de ses fruits et augmenter la durée de conservation.
4- L’introduction du gène qui présente un intérêt, est accompagnée généralement par un
autre gène de résistance à un antibiotique. Le passage de ce gène de l’organisme
génétiquement modifié à l’animal ou à l’homme constitue une vraie menace.
En agriculture, on introduit chez certaines espèces des gènes de résistance aux herbicides.
Il existe un risque de transfert de ces gènes chez des ″mauvaises″ plantes qui deviendront
alors résistantes aux herbicides.
Dans le cas de consommation des OGM, le principal risque évoqué est l’allergie liée à la
nature de la protéine fabriquée par le gène.
6
IV- Quels sont les différentes techniques et étapes du génie génétique ?

A- Résumé de la manipulation génétique :
Activité 2-A page 195
1- On peut obtenir le gène de l’hormone de croissance à partir des molécules d’ARNm.
2- Les différentes étapes du génie génétique sont :

a- On prélevé l’ARNm correspondant à la synthèse de cette hormone à partir de cellules
de l’hypophyse humaine.
b- A partir de cet ARNm, on synthétise une copie de l’ADN du gène de l’hormone de
croissance.
c- Cette copie du gène ou ADNc est greffée dans l’ADN de colibacille.
d- Les bactéries ainsi transformées sont cultivées pour activer leur multiplication.
e- Les gènes étrangers s’expriment dans les cellules hôtes par la synthèse de la protéine qui
est l’hormone de croissance humaine.
f- On utilise une technique particulière pour expulser l’hormone de croissance synthétisée
en dehors des cellules cultivées.
B- Les étapes de production d’une protéine par génie génétique :

Activité 2-B page 196
Les principales étapes de la production d’une protéine humaine par un colibacille.
1ère étape C 2ème étape A 3ème étape E 4ème étape D 5ème étape B
Obtenir in vitro Introduire le Repérer les Cloner des Faire exprimer
le gène gène codant colibacilles colibacilles le gène dans la
impliqué dans dans le transformés transformés cellule hôte
la synthèse de génome (ou portant le ce qui transformée
la protéine l’ADN) de gène correspond et récolter la
visée : c’est le colibacille. étranger. au clonage protéine
gène codant. du gène synthétisée.
7
Activité 2-C page 196

C- Quelles sont les étapes et les techniques utilisées en génie génétique ?
1ère étape : isolement et repérage d'un gène codant pour une protéine :
Les techniques utilisées pour identifier et isoler un gène in vitro
Deux techniques peuvent être appliquées pour isoler et repérer un gène :
Voie 1 de l’ARNm Voie 2 de l'ADN
- Extraction de l’ARNm - Extraction de l’ADN

- Synthèse d’un brin d’ADN copie simple - Coupure de l’ADN en gène aux enzymes
brin grâce à la transcriptase inverse de restriction
- Synthèse d’ADNc double brin grâce à - Repérage du gène de structure grâce à la
l’ADN polymérase sonde moléculaire radioactive
→ On obtient un gène copié. → On obtient le gène à transférer.
Les outils utilisés au cours de cette étape sont :

Les outils Rôles
Enzyme de Enzyme d’origine bactérienne qui permet de couper l’ADN au niveau des
restriction certaines séquences bien définies.
Transcriptase Enzyme d’origine virale qui permet d’obtenir un brin d’ADN à partir d’un
réverse brin d’ARNm.
Séquence de nucléotides permettant, après marquage radioactif d’un atome
Sonde
qui entre dans la composition des nucléotides, de repérer dans l’ADN une
moléculaire
séquence de nucléotides complémentaire avec laquelle elle s’hybride.
8
Comment utiliser une sonde radioactive pour repérer un gène ?

L’ADN de la sonde moléculaire radioactive, s’hybride (se fixe) selon le principe de la
complémentarité de bases avec l’ADN du gène recherché.
Il suffit ensuite, de rechercher la radioactivité pour détecter le gène recherché.
Ainsi la sonde fonctionne comme l’hameçon qui permet de détecter le poisson.
Activité b page 198

2ème étape : greffe du gène dans un vecteur
1- La greffe du gène nécessite la démarche suivante :
→ Extraction des plasmides à partir des bactéries.
→ Ouverture des plasmides par une enzyme de restriction.
→ Greffe du gène de structure dans un plasmide grâce à l’ADN ligase…
→ Transfert du plasmide recombiné (ou chimère) dans une bactérie Eschérichia Coli.
2- Cette étape nécessite les outils suivants
Outils Rôles
Molécule circulaire d’ADN de petite taille dans le
Plasmide
cytoplasme bactérien
ADN ligase Enzyme qui active la liaison entre deux molécules d’ADN
Enzyme qui coupe l’ADN du plasmide à des endroits bien

Enzyme de restriction
déterminés, ce sont des ciseaux moléculaires.
Microorganismes à culture facile, non pathogènes, à
Colibacilles (E.Coli)
multiplication rapide et contenant des plasmides
Les techniques utilisées pour greffer un gène étranger dans un plasmide
9
3- L’enzyme de restriction utilisée pendant cette étape doit être la même que celle utilisée
dans l’étape précédente, puisque le gène transféré doit être coupé de la même façon que le
plasmide qui va le recevoir. Donc on doit utiliser la même enzyme de restriction.
4- Les cellules hôtes choisies pour recevoir le gène étranger sont des colibacilles car :
- elles sont faciles à se procurer et à cultiver.
- elles se caractérisent par une multiplication rapide.
- ce sont des bactéries non pathogènes de l’intestin humain.
Activité page 199

Comment faire introduire un gène étranger ?
- L’introduction du gène dans une bactérie nécessite un vecteur. Le vecteur le plus souvent
utilisé est un plasmide ou de l’ADN viral. Ce plasmide est ouvert grâce à une enzyme de
restriction.
- L’insertion du gène à transférer dans le vecteur se fait grâce à une autre enzyme appelée la
ligase. Le résultat de cette étape est l’obtention des molécules d’ADN recombinées.
- La cellule hôte la plus utilisée pour recevoir l’ADN recombiné est une bactérie :
Eschérichia Coli.
- Les bactéries sont placées dans un milieu de culture en présence de plasmides
recombinés. Seules quelques bactéries vont incorporer le plasmide recombiné : elles sont
appelées alors des bactéries transformées ou transgéniques ou même OGM.
Les principaux outils utilisés au cours de l’insertion d’un gène

au niveau d’un plasmide
10
Activité D page 199

Comment repérer les bactéries transgéniques ?
Parmi les Colibacilles cultivés, en présence de plasmides recombinés, certains intègrent ce
plasmide alors que d’autres restent non transformés. Pour distinguer ces deux types de
bactéries, on associe avec le gène greffé, un deuxième gène, qui permet la résistance à un
antibiotique tel que la streptomycine.
Les colibacilles de souche sauvage (naturels) sont sensibles à la streptomycine : elles ne se
développent pas en sa présence. Les colibacilles sont cultivées dans un milieu contenant un
antibiotique (tel que la streptomycine). Seules les bactéries transgéniques résistent à
l’antibiotique et se multiplient, les autres sont éliminées.
Activité d page 200

3ème étape : clonage du gène greffé
Clonage des gènes greffés au cours de la

bipartition des bactéries
Sur un milieu nutritif, les bactéries transgéniques se multiplient par bipartition. Cette
multiplication assure le clonage des bactéries ainsi que des plasmides recombinés qui portent
le gène greffé.
Les cellules filles obtenues contiennent plus de plasmides que les cellules mères car la vitesse
de réplication des plasmides est supérieure à la vitesse de réplication des bactéries.
11
1- Sachant que les bactéries se multiplient par bipartition toutes les 20 minutes, alors durant
24 heures, il y a 72 divisions.
Le nombre de bactéries par jour est 272 soit 4,72.1021
La masse des bactéries obtenues par jour est : 4,72.1021 X 10-12 = 4,72.103 = 4720 tonnes.
2- Le nombre de bactéries en deux jours est 2144 soit 2,23.1043 bactéries.
La masse m de bactéries en deux jours est 2,23.1043 X 10-12 = 2.23.1031g = 2,23.1025 tonnes.
Ainsi la masse des bactéries en deux jours (2,23.1025 tonnes) dépasse de loin la masse de la
terre (6.1021 tonnes).
3- Cette bactérie est utilisée en génie génétique car elle est non pathogène, rapide à se
multiplier et simple à cloner. Cependant, cette bactérie possède un grand nombre de
prédateurs et le milieu limite sa multiplication puisque les conditions ne sont toujours
favorables.
8
4ème étape : expression du gène
Les signaux du gène de structure qui assurent son expression

L’expression du gène se fait par des signaux génétiques compréhensibles par la bactérie,
signal de début de transcription (promoteur) et signal de fin de transcription.
- Lors de la transcription, l’ARN polymérase se fixe sur l’ADN au niveau du site promoteur
et commence à transcrire le brin codant de l’ADN. Une fois, l’ARN polymérase rencontre le
signal fin transcription sur l’ADN, elle se libère de l’ADN. Ainsi la transcription de l’ADN
en ARNm est terminée.
- Lors de la traduction, le ribosome se fixe au niveau de codon initiateur AUG et
commence la traduction de l’ARNm en protéine.
Lorsque le ribosome rencontre un codon STOP, il se dissocie et libère le polypeptide et
l’acide aminé initiateur est coupé. Ainsi la protéine prend sa forme tridimensionnelle devient
fonctionnelle.
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Activité page 201

5ème étape : extraction de la protéine synthétisée
L'extraction de la substance synthétisée par la bactérie transgénique se fait par deux
procédés:
 Soit en soumettant les cellules transgéniques à un choc osmotique :
La protéine ainsi synthétisée s’accumule dans le cytoplasme des bactéries.
Ces bactéries sont placées dans un milieu hypotonique (eau distillée).
Alors, la protéine diffuse à travers la paroi bactérienne vers l’extérieur, puis elle est récupérée
et purifiée.
 Soit par la lyse des cellules transgéniques :

La protéine ainsi synthétisée s’accumule dans le cytoplasme des cellules transgéniques.
Ces cellules subissent une lyse de leur membrane externe.
La protéine synthétisée est récupérée entre les débris cellulaires puis purifiée.
Exemple de protéines synthétisées par génie génétique :

L’insuline, l’hormone de croissance, …
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Observation tridimensionnelle de colibacilles Observation tridimensionnelle de levures

Plante de tabac ravagée par

1- Qu’est-ce que le génie génétique ?

II- Rappels des préacquis :

Les étapes de l’expression d’un gène

1- Les étapes de l’expression d’un gène sont :

Support moléculaire bicaténaire qui porte l’information

Enzyme nucléaire qui assure la transcription de l’ADN en

Une copie monocaténaire du brin transcrit de l’ADN formé

Ribosome Traducteur du langage écrit sur l’ARNm en protéines

Adaptateur qui fait correspondre chaque acide aminé à son

Eléments constitutifs des protéines, ils sont liés entre eux

Forme d’énergie utilisable par la cellule pour assurer la

III- Qu’est-ce que le génie génétique ?

Le génie génétique est un ensemble de techniques permettant la manipulation des

III- Quel est l’intérêt du génie génétique ?

Textes Domaines Intérêts

Production d’hormones : hormones de croissance,

Texte 2 Production de vaccin contre l’hépatite B

Texte 4 Production d’interférons antiviraux

Texte 5 Production d’alcool à partir du lactose

Texte 6 Production de présure pour la coagulation du lait

Domaine Production de thaumatine pour la production de

Production de plantes résistantes à l’herbicide

Augmentation de la production des lipides

IV- Quels sont les différentes techniques et étapes du génie génétique ?

2- Les différentes étapes du génie génétique sont :

B- Les étapes de production d’une protéine par génie génétique :

Activité 2-C page 196

Les techniques utilisées pour identifier et isoler un gène in vitro

Deux techniques peuvent être appliquées pour isoler et repérer un gène :

Voie 1 de l’ARNm Voie 2 de l'ADN

- Extraction de l’ARNm - Extraction de l’ADN

Les outils utilisés au cours de cette étape sont :

Comment utiliser une sonde radioactive pour repérer un gène ?

Activité b page 198

Enzyme qui coupe l’ADN du plasmide à des endroits bien

Les techniques utilisées pour greffer un gène étranger dans un plasmide

Activité page 199

Les principaux outils utilisés au cours de l’insertion d’un gène

Activité D page 199

Activité d page 200

Clonage des gènes greffés au cours de la

Les signaux du gène de structure qui assurent son expression

Activité page 201

 Soit par la lyse des cellules transgéniques :

Exemple de protéines synthétisées par génie génétique :

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