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Biochimie

Fiche de cours "'-*

-.

Méthodes d'étude des protéines

t Notion tombée 1 fois au concours

tt Notion tombée 2 fois au concours
tÛt Notion tombée 3 fois ou plus au concours

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I
Valeur du pH pour laquelle la charge globale de la protéine est nulle :

1.=,t',t:,.,F-f#-=:-,'
o Elle porte autant de charges (+) que de charges (-)
. Précipitation d'une protéine d'intérêt
o A son pHi
. Précipitation de protéines non intéressantes
o A leur pHi
o Lors de l'étude d'une protéine du sang :
- Albumine =213 des protéines plasmatiques, élimination par
précipitation

. Permet de caractériser une protéine

teirlit\i!i11 aeËi1ittûfi
liHr R farc- de: -
G*S:

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Mêlengede
p-*téires  Ê
=!

-frçrt
.<Fll<*i=

Distribution goutte à goutte d'un

Un mélange de protéines A
et B est déposé au-dessus
de la colonne contenant des
billes chargées
négativement (-)
Le tampon d'élution est à pH
acide : les protéines portent
une charge globale (+) =
adsorption sur les billes par
interactions ioniques
éluant en haut de la colonne :
o Chaque goutte a un pH supérieur
à la précédente
Une protéine se décroche des billes
quand :
PHt".pon = pHi proteineûûû
ll est donc possible de détacher
séquentiellement les protéines

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. Dosage enzymatique pour chaque fraction collectée :

o Pic noir = activité enzymatique

- Superposable à la protéine B

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Dépôt ler temps 2èr" temps

* frcfil

. Un ligand est fixé par covalence sur les billes de la

colonne

. Dans un mélange de protéines, seule la protéine

d'intérêt qui se lie au ligand sera retenueû = la
protéine est affine ûût pour le support

. Ajout d'une solution saturée en ligand :

o Par compétition les ligands de l'éluat vont se lier

aux protéines qui se décrochent

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. Dans un champ E, la molécule est :

o Entrainée par une force F

- Dépendante de la chargeÛ sur la masse

- pr constant Û
o Freinée par une friction f Û r\-,<.rÀ,,*ut ô& (._ Ét-r:*(,r-i*c.n dL!
- Dépendante de la taille de la molécule, donc de sa masseû
. Au total, elle est freinée proportionnellement à sa massettû
o Plus une protéine est grosse, plus elle est freinéeÛ

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