Rapport de sortie:

INRA- Kénitra el menzah

Mehdi Nouha – MPVE- Numéro d’ordre: 18

Moumen Wiam – Numéro d’ordre: 9
 Sommaire:
-INTRODUCTION : .............................................................................................. 2

VARIÉTÉS ET PORTE-GREFFES: SÉLECTION; CRÉATION; CHOIX ET

RECOMMANDATION DES ASSOCIATIONS VARIÉTÉ/PORT-GREFFE ...................... 2

MATÉRIEL DE DÉPART, COLLECTION/COMPORTEMENT-EXPOSITION.................. 5

BIOTECHNOLOGIES APPLIQUÉE À L'AMÉLIORATION DES AGRUMES ................... 7

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 I. Introduction :
L'INRA de Kenitra joue un rôle crucial dans la lutte contre les principaux ravageurs des
agrumes, tels que les insectes émergents qui peuvent propager des maladies
cryptogamiques, ainsi que les mauvaises herbes associées. Son objectif principal est de
développer de nouvelles méthodes moléculaires et sérologiques pour détecter les virus
et les nématodes qui affectent les agrumes et d'autres cultures. En outre, l'INRA se
consacre à la mise au point d'outils d'assainissement des plants d'agrumes, visant à
éliminer les agents pathogènes et nuisibles pouvant compromettre la santé des plants.
Grâce à ses recherches, il contribue de manière significative à la protection des
agrumes, favorisant ainsi le développement durable de l'industrie agrumicole.

II. Variétés et Porte-greffes: Sélection; Création; Choix et

recommandation des associations variété/porte-greffes
Il est a noter que les arbres d’agrumes sont composes d’une partie aérienne “Le
greffon”; c’est la variété cultivée et une partie souterraine “Le porte-greffe” qui permet
l’ancrage de l’arbre au sol et son alimentation en eau et sels minéraux.

L’amélioration génétique des variétés agrumes visent les qualités organoleptiques tel que la
teneur en sucre et aromes ainsi que les aspects pomologiques telque la coloration et le calibre.
Tandis que le développent de Nouvelles porte-greffes a pour but l’adaptation aux conditions
pédoclimatiques et la tolérance/résistance aux pathologies, d’ou son importance pour
améliorer le rendement et la qualité des fruits.

1. Création et sélection des porte-greffes:

Dans le cadre de la création de nouveaux porte-greffes, des programmes de recherche sont mis
en place pour croiser différentes espèces d'agrumes ou d'autres genres apparentés, en vue de
développer des porte-greffes adaptés aux conditions locales et aux besoins spécifiques de
l'industrie. Ces croisements peuvent être réalisés par pollinisation manuelle ou par des
techniques de reproduction assistée, comme l'hybridation in vitro.

• On évalue plusieurs critères notamment le degré de polyembryonie fait référence à la

capacité d'une graine de produire plusieurs embryons. Dans le cas des agrumes, cela
signifie qu'une seule graine peut donner naissance à plusieurs plantules. Ce trait est
d'une grande importance dans la sélection des porte-greffes car il permet une
multiplication rapide et économique des plants. Le type polyembryonie constitue 75 a
98% et inclue: le bigaradier, Poncirus et citranges, Mandarinier Cléopâtre, tangelo
Orlando, lime mexicaine…

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 • En outre, la caractérisation moléculaire qui implique l'analyse des
caractéristiques génétiques et moléculaires des porte-greffes:

è leur diversité génétique

è conditions biotiques: leur résistance aux maladies: Phytophtora, Exocortis,
Nématodes, tristeza.
è Conditions abiotiques: leur adaptabilité à différents climats et sols avec un
système racinaire adapté: On évalue la salinité, l’alcalinité, le stress hydrique et
l’hydromorphie.
è leur affinité et compatibilité avec les variétés d'agrumes greffées:

Si les porte-greffes obtenues sont résistants à la tristeza et la phytophtora, on passe a

des essais du comportement performances agronomiques et si les porte-greffes sont
performants on passer vers l’inscription, protection et assainissement pour ensuite
collecter le Parc semencier et diffuser les semences.

• Il est a noter Les critères de sélection des porte-greffes doivent tenir compte d’un
certain nombre de contraintes et d’effets sur les variétés :
§ Multiplication identique
§ Système racinaire adapté
§ Interaction PG/Variété
Premiers essais des porte-greffes:
- Dans le but de sélectionner des combinaisons variété/porte-greffe performantes
pour la région de Sidi Aissa, une étude a été réalisée en utilisant la variété de
Clémentine et le porte-greffe Citrange Troyer Gharb, qui a montré un rendement
de plus de 60 tonnes par hectare.

- Au total, 200 nouveaux hybrides de porte-greffe ont été obtenus par croisements
dirigés entre des parents tolérants à la Tristeza, dont 32 ont été caractérisés à l'aide
de marqueurs moléculaires pour étudier leur nature hybride.

- Une deuxième série de 200 hybrides de porte-greffe est actuellement en phase de

multiplication par bouturage herbacé.

- Des améliorations ont été apportées à la technique de bouturage herbacé des porte-
greffes d'agrumes pour permettre une multiplication conforme et en masse.

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 - Une sélection a été effectuée pour identifier des associations variété/porte-greffe
tolérantes à la salinité.

- Des hybrides qui accumulent moins de chlore que d'autres, grâce à un suivi attentif
d'un groupe de génotypes tolérants.

2. Programme de sélection et création variétale:

Les variétés et hybrides sont issus de: sélection, sauvetage d’embryons et

irradiation/croisements
On effectue:
è une caractérisation moléculaire
è une évaluation de salinite et d’alcalinité ainsi que les stress hydrique.
è Essais pré-test
è Aspermie
è Qualité de jus et période de maturité

Les variétés prometteuses vont subir:

è des essais d’associations variété/porte-greffe
è Tester leur performances agronomiques
è Si les variétés sont performantes, on passe vers:
Ø Inscription, protection et assainissement.
Ø Collection Parc a bois.
Ø Diffusion des greffons.

3. Association porte-greffes et varieté:

Le choix judicieux du porte-greffe peut influencer des aspects tels que la vigueur de la
croissance, la tolérance aux maladies, la résistance aux ravageurs, l'adaptabilité aux
conditions environnementales spécifiques, le rendement et même la qualité des fruits
produits.

a) Effet sur la qualité des fruits:

Les caractéristiques génétiques et physiologiques du porte-greffe peuvent

affecter des aspects tels que: La couleur et l’épaisseur de la peau, le calibre du
fruits ainsi que la teneur en jus, en sucre et en acide titrable.

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 b) Affinité et Incompatibilité : Il faut avoir une compatibilité entre la variété et le
porte greffe au niveau du point du greffe pour réussir l’opération.

c) Effet sur la résistance aux maladies et ravageurs:

En choisissant un porte-greffe résistant aux maladies spécifiques, on peut
contribuer à la durabilité des vergers et réduire la sensibilité de la variété greffée
à ces pathogènes. notamment: Phytophtora, Exocortis, Nématodes, tristeza.

d) l'adaptabilité aux conditions environnementales spécifiques et croissance: les

porte-greffes sont sélectionnés pour leur tolérance aux conditions telles que la
salinité du sol, la sécheresse, le froid ou le pH élevé.
En utilisant des porte-greffes adaptés, les agrumes peuvent mieux résister aux
stress environnementaux et maintenir une croissance saine dans des conditions
difficiles. Cette adaptabilité accrue permet aux agrumes de prospérer dans des
régions où les conditions environnementales peuvent être limitantes, élargissant
ainsi les zones de culture possible pour ces cultures.

III. Matériel de départ, Collection/Comportement-Exposition:

Matériel de départ: Il est constitué de matériel végétal, provenant directement de
l'obtenteur ou du mainteneur après inscription au Catalogue Officiel ou sur la liste
provisoire, et reconnu authentique et sain.

le materiel de depart certifié comporte les variétés demandées et les nouvelles

obtentions certifiès.

o Un materiel certifié est caractérisé par:

Ø l’autheticité
Ø l’absence des maladies.

- Après croisement, on procède par l’amplification a travers le bouturage (Plante

mère d’où on extrait les baguettes). C’est une multiplication conforme donnant
lieu à une population identique.

- On effectue un greffage des variétés sur des porte-greffes hybrides .

- On installe des tests de comportement et on effectue les test des contraintes

abiotiques telque la salinité, l’alcalinité et le stress hydrique.

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• Parc à bois: Cas des plants.

è Le greffon est extrait à partir du matériel de départ

è On effectue sa multiplication afin d’obtenir le matériel de prébase et de base.
è Cette multiplication nous assure une production en masse ainsi qu’elle témoigne
de la traçabilité.
è Un échantillon des plants est prélevé par l’ONSSA qui assure le contrôle de l’etat
sanitaire et vérifie l’authenticité variétale.

• Parc semencier: Cas des semences.

è Le parc semencier contient des porte-greffes certifies.

è On extrait les semences a partir du parc semencier.
è Un échantillon des semences sera prélevé et testé par l’ONSSA
è Une fois que l’ONSSA contrôle et confirme l’authenticité et la qualité des
semences, il est possible de livrer ces derniers.

• Vente aux pepiniéristes :

Ø Avant: Prix d’un plant 2 dhs/plant puis le pepiniériste doit payer 2,5 dhs/plant
vendu.
Ø Actuellement: INRA vend les greffons a 150 dhs/greffon.



o La durée de production d’une variété prend 17 ans d’où l’importance de son

inscription afin d’assurer le droit d’obtenteur.

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IV. Biotechnologies appliquée à l'amélioration des
agrumes
On cite l’application des outils de biotechnologie telque les marqueurs
moléculaires, Les culture de tissus et la fusion de protoplastes.

• Hybridation somatique couplée avec des marqueurs nucleaires et

chloroplastiques: Association nucléocytoplasmique:

L’hybridation somatique implique la

culture in vitro des tissus végétaux,
tel que les embryons, les jeunes
pousses ou les segments de tige, et
leur fusion pour créer des
combinaisons génétiques. Les cellules
fusionnées se développent ensuite en
plants complets, qui sont ensuite
sélectionnés et évalués pour leurs
caractéristiques agronomiques et
qualitatives. L’hybridation somatique
permet d’accélérer le processus de
Creation variétale, en évitant les
contraintes liées à la reproduction
sexuée et en offrant la possibilité de
créer des combinaisons génétiques
spécifiques qui peuvent ne pas se
produire naturellement.

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 • La technique d’hybridation somatique est utilisée soit pour la creation des
varietes ou des portes-greffes. Il faut avoir le materiel de base: calles
friables embyogenes, le choix des parents est base surtout sur les
genotypes tolerants au tristeza, phytophtora et salinite.

• On realise une maceration enzymatique pour obtenir des protoplastes.

• puis leur purification et rincage pour eliminier les charges elecriques.
• On realise la fusion des protoplastes, puis on observe l’alignement des
protoplastes.
• on mixe et obtient different scenarios calles/calles ou feuilles/feuilles ou
calles/calles.
• Par la suite on passe a la germination: on commence par une culture en
obscurite pour favoriser l'apparition des embryon.
• on verifie le produit s’il s’agit d’un allotetraploide(résulte de la fécondation
de deux gamètes normaux, mais de génomes différents. Si l'on appelle ces
génomes A et B, on a ainsi (gamète n = x1 = A) x (gamète n = x2 = B) =
zygote 2n = x1+x2 = AB), autotetraploide (Cet individu possède quatre
copies homologues de chaque chromosome au lieu des deux
habituellement observées (diploïdie).

Pour la creation des portes greffes on cherche surtout des cybrides ou

tetraploides.

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• Laboratoire de biologie moléculaire:

Je dois passer par ce

laboratoire pour confirmer
l’etat hybride du matériel.

Plusieurs activités se font

au niveau de ce labo don’t
on cite:

L’extraction de l’ADN: salle

d’extraction d’ADN et
ensuite La PCR.

Une fois l’ADN recupere on ustilise le spectrophotometre pour determiner

le dosage et la qualite, il faut respeter la concentration dont on a besoin
pour effectuer le test PCR. On utilise le gel d’agarose pour visualizer la
qualité et si la preparation est bien nette. On passe vers le PCR où a besoin
d’un mélange reactionnel, generalement on utilise des marqueurs
microsatellites, en plus des amerces, ADD, eau, tampon et TAC.

L'utilisation du PCR permet d’amplifier l’ADN a sequencer, on utilise ensuite

le gel d’acrenaline pour separer les proteines et je recuperer les resultats a
travers une coloration utilisant le nitrate d’argent.

Il est a noter que c’est l’interpretation et le choix des amorces qui sont
compliqués.