UNIVERSITÉ CADI AYYAD

FACULTÉ DES SCIENCES

MARRAKECH

MéMOIRE Présenté Par

Hocine GARMES

Pour l'obtention du

Certificat d'études approfondies

de Chimie Organique

VALORISATION DES ALGUES

MARINES DE LA REGION D'EL JADIDA EN
PARTICULIER LE GELIDIUM SESQUIPEDALE
(Turner) Thuret

Devant le JURY :
Mr. M. EL MERAY
Mr. H. BITAR
Mr. A. BEN HARREF
Mr. S. BAKKAS
Mr. O. ASSOBHEI

Soutenu en Octobre 1990

 UNIVERSITÉ CADI AYYAD
FACULTÉ DES SCIENCES
MARRAKECH

MéMOIRE Présenté Par

Hocine GARMES

Pour l'obtention du

Certificat d'études approfondies

de Chimie Organique

VALORISATION DES ALGUES

MARINES DE LA REGION D'EL JADIDA EN
PARTICULIER LE GELIDIUM SESQUIPEDALE
(Turner) Thuret

Devant le JURY :
Mr. M. EL MERAY
Mr. H. BITAR
Mr. A. BEN HARREF
Mr. S. BAKKAS
Mr. O. ASSOBHEI

Soutenu en Octobre 1990

_/-)_ mes chers parents

en témoignage d’affection et de reconnaissance.

_/-)_ mon cher frère .

_/-)_ ma famille .

_/-)_tous mes amis

 =*= AVANT P R O P 0 S =*=
-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-=-

e travail a été effectué au laboratoire de

Chimie Organique de la Faculté des Sciences d'El Jadid a sous
les hautes directives de Mr. Le Professeur S. BAKKAS à qui je
tiens à exprimer ma grande reconnaissance et mes plus vifs
remerciements.

Il m'est particulièrement agréable d'exprimer

ma profonde gratitude à Mr. O. ASSORHEI pour sa grande
attention et son aide précieuse qu'il m'a apportée.

Je prie tous les membres du laboratoire de

microbiologie de trouver ici l'expression de mes sincères
remerciements.

/)/)es remerciements vont aussi à Mr. A. SADEL

Doyen de la Faculté des Sciences d' El Jadida pour l'intérêt
qu'il donne à la recherche scientifique.

Je remercie également Mr. Le Professeur A. BEN HARREF

d'avoir accepté d'dire mon co-encadreur à Marrakech.

Je tiens à remercier Mr. M. AIT AZIZI pour les

conseils qu'il m'a toujours prodigués.

Que les préparateurs de départements de Chimie

et Biologie veuillent bien trouver ici l'expression de ma
gratitude et de mes remerciements.
 SOMMAIRE
Page
Introduction . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . 1

Première Partie : Etude bibliographique

I. Importance des algues . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

I.1 Importance industrielle . . . . . . . . . . . . . . .. 3

I.2 Importance en agriculture. . . . . . . . . . . . . . . . 3
I.3 Importance dans l'alimentation . . . . . . . . . . . 3
I.4 Importance en médecine . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
5
Il Biologie de l'algue . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

II.1 Nomenclature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
II.2 Description . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
II.3 Ecologie et répartition . . . . . . . . . . . . . . . . 5
7
III Chimie de l'alge . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

III.1 Polysulfudes . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
III.2 Monoterpènes . . . . . . . . . . . . . . .. . . . 8
III.3 Diterpènes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
III.4 lipides . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
IV Importance et utilisation de l'agar . . . . . . . . . . . . . . 11
IV.1 Méthode d’extraction . . . . . . . . . . . . . . 12
IV.2 Structure chimique de l’agar . . . . . . . . . . . . 12
IV. 3 Evaluation de la qualité de l’agar . . . . . . . . . 14

Deuxième partie résultats et discussions

I. Mise au point de la technique d’extraction 17

I.1 Effet de quelques paramètres biologiques 17
a) Variation de la quantité et de la qualité 17
de l’agar en fonction saisons . . . . . .
b) Variation de la quantité et de la qualité 19
de l’agar en fonction de la taille . . . . . . . .
I.2 Etudes des paramètres liés à l’extraction 21
a) Prétraitement . . . . . . . . . . . . . . . . 21
b) Décoction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

I I E t u d e m i c rob i o lo g i q u e d e l’a g a r ex t r a i t . . . . . . . . . .. 24

a ) To x i c i t é . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . 24
b) Diffusion des antibiotiques . . . . . . . . . . . 25
III effet antimicrobien des constituant chimique de l’agar 25

a) Extrait brut . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
 b) Fraction insaponifiable . . . . . . . . . . . . . . 26
c) Fraction F1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26

Conclusion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 28

Partie expérimentale

I Détermination des caractéristiques physiques de l'agar 29

a) Point de gélification . . . . . . . . . . . . . . . . 29
b) Point de fusion . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29
c) Force de gel . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29

Il Protocole d'extraction de l'agar à partir du 30

G. Sesquipédalé . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

IlI Préparation des extraits pour l'étude microbiologique 32

IV Tests microbiologiques . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33

a) Souches . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 33
b) Milieu de culture . . . . . . . . . . . . . . . . . 33
c) Technique des disques . . . . . . . . . . . . . . . . 33
d) Technique du puits . . . . . . . . . . . . . . .. . . 34

Références bibliographiques . . . . . . . . . . . . . . .. . . . 35
 INTRODUCTION

Occupant presque 70% de la surface de notre planète, la mer

représente un gisement inépuisable mis à la disposition de
l’Homme. Ce dernier n'hésite pas à profiter de 400,000 espèces
animales et de 100.000 espèces végétales [1] contenues dans les mers
et les océans. L'exploitation de cette richesse ne cesse pas de se
développer vue les moyens actuels et les besoins croiss ante de
l'humanité en protéines, sels minéraux, médicaments... etc.

Le Maroc avec ses 3000 Km de côtes sur la méditerranée

et l'océan atlantique connaît une diversité dans les espèces
d'algues [2] dont certaines sont exploitées à grande échelle pour
l'extraction de l'agar ou l'exportation à l’état brut.

Les algues jouent depuis longtemps un rôle très important

dans l'économie de nombreux pays. Elles sont utilisées à l'état
brut dans l'alimentation, l’élevage at l'agriculture ou dans
l'industrie après traitement. Malgré ces potentialités, très peu
de travaux ont été effectués sur les algues marines de notre
pays.

Le travail de recherche que nous présentons sur les algues

marines de la région d'El Jadida et en particulier le Gelidium
sesquipédalé a pour objectifs :

-l'amélioration du rendement d'extraction de l'agar et de s

sa qualité.

-la valorisation de l'algue en lui cherchant d'autres

applications (activité antimicrobienne, pharmacologique…etc)
 Le mémoire est divisé en deux parties dont la première
comporte une étude bibliographique sur la biologie de l'algue et
son utilisation dans l'industrie, l'agriculture, l'alimentation,

La deuxième partie est consacrée a la discussion des

résultats
 PREMIERE PARTIE

ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE
 I IMPORTANCE DES ALGUES

Les algues que la mer produit à l'homme parfois en grande

quantité sans qu'il ait besoin de fournir la moindre matière
première ne pourraient manquer d'intérêt comme source
exploitable. Depuis longtemps, ces végétaux jouaient un rôle
capital dans l'économie de certains pays

I-1 Importance Industrielle

Au MAROC, pays de vocation maritime, la possibilité

d'industrialiser l'extraction de l'agar remonte à plusieurs
années. Avant 1974, on comptait quatre unités de production
installées à Casa, Tanger, Berchid et à kénitra. Cette dernière
a commencé à fonctionner vers 1960. De plus, les algues sont la
matière première pour l'extraction de certains produits chimiques
comme la soude, le brome, l'iode...etc.

I-2 Importance en agriculture

Le goémon-épave (mélange d'algues rejeté sur la grève)

est utilisé directement après ramassage ou après fermentation en
tant qu'engrais puisque le prix de revient est relativement
faible et sa richesse par rapport aux autres engrais est élevée.

1-3 Importance dans l'alimentation

A l'exception de certaines microalgues [3] ou de macroalgues

ayant concentré des métaux lourds [4], presque toutes les algues
sont comestibles [5] et ne renferment aucune substance venimeuse
En Orient, elles sont consommées fraîches sous forme de salades
(les ulves, porphyra) ou avec une préalable préparation
culinaire, alors qu'en occident, elles sont utilisées comme
condiments (ulvalactuca, porphyra, Rhodymena palmata). Pa
railleurs, les algues se distinguent par leur richesse en
protéines, en glucides, en vitamines [6, 7] et en oligo-éléments
comme le bore et le magnésium

. 1-4 Importance en médecine

Un grand nombre de produits pharmaceutiques connus jusqu'à

présent par leurs activités médicales étaient extraits pour la
première fois à partir des plantes. Malgré la m odestie ces moyens
et les méthodes d'extraction utilisées en médecine traditionnelle
(infusion, lessivage, macération) une grande partie des plantes a
été caractérisée par son pouvoir de guérison de certaines
maladies. En ce qui concerne les algues marines leur action
thérapeutique a été constatée dans la plupart des pays côtiers
par exemple:

- au Japan, le Gelidium cartilagineum est employé contre le

scrofule; de même les Dictyoptéris polypodioides sur les rives de la
méditerranée.

- en Inde, le Sargassum linifolium est utilisé contre les

troubles de la vessia.

- en Amérique du sud, le Sargassum bacciferum est un remède

contre le goitre et les maladies rénales.

_en Angleterre, la Rhodymenia palmata est reconnue comme un fort

sedatif dans le cas d'excès de fièvre.

- la Delisseria sanguinea possède un pouvoir anti-coagulant, est

utilisée en chirurgie.
 II- BIOLOGIE DE L'ALGUE

II-1 Nomenclature (Position systématique)

Le Gelidium sesquipedale (turner) thuret est la seule

algue exploitée sur place au Maroc. C'est une algue rouge appartenant
à la classe des Rhodophycées, sous classe Florideophycidées, ordre
des Gélidiales et famille des
Gelidiacées.

II-2 Description

L'algue est sous forme de frondes de grandes tailles

(10-25cm) en touffes s’élevant des filaments rampants. Les
rameaux sont minces, aplatis, aigus, à peu -près nus à la base,
puis ils portent des rameaux secondaires. Le Gelidium a un
aspect robuste trapu et une consistance cartilagineuse (Gayral
1958). (voir figure 1 ).

II-3 Ecologie et répartition

Cette espèce est très abondante de RABAT à Mogador

sur les roches de la zone littorale inférieure et infralittorale. En
général, elle est connue le long de la côte atlantique depuis les
côtes anglaises (abondante en Portugal, Espagne, Maroc ). En
méditerranée, cette espèce est rare elle est localisée dans sa
partie méridionale en Corse et en Algérie
Figure 1 : Gelidium sesquipedalé (Turner) Thuret
 III- CHIMIE DE L'ALGUE

La chimie des plantes s'étend de jours en jours en ouvrant

de nouveaux horizons. Ainsi l'étude des métabolites secondaires a été
d'une grande importance pour la compréhension de la présence de
certains produits chez les animaux et que leurs organismes ne peuvent
produire.

La flore marine, constituant a elle-seule une diversité de

métabolites secondaires et présente des centaines de molécules
qui peuvent jouer un rôle très efficace en thérapie.

Les algues, faisant partie de cette flore, étaient à l'origine

de plusieurs produits dont l'intérêt en pharmacologie est
considérable. Elles renferment une quantité considérable d'acides
gras, de bromophénols, de terpénoides, des phloroglucinol [8,9]
et de polysulfures, constituant ainsi une grande variété
d'antibiotiques.

La médecine moderne bénéficie de cette richesse en se basant

sur la force de la chimie et ses méthodes d'extractions et de
séparations très vigoureuses. Ces méthodes ont permis
d'identifier les produits responsables de l'activité médicale et d'éviter
les effets antagonistes de certains produits extraits.

III-1 Les polysulfures

Les polysulfures sont peu fréquents dans la nature, La

concentration élevée de souffre sous ses différentes formes dans
le milieu marin augmente la chance de trouver certains polysulfures :
c'est le cas du nereistoxin (1) qui a été révélé
conne un insecticide [10]. Ses analogues synthétiques sont
maintenant commercialisés
 (1)

En 1971, on a isolé à partir de Dictyopteris plagiogramma

et Dictyopteris australis [11] (algues brunes) une série de
lipides contenant des sulfures qui sont considérés comme des
dérivées d'oxoundecyl-3 mèrcaptan [12]. D'autre part, il y'a un
taux plus au moins élevé de sulfate dans l'agar (l’agarose contient
0,8% de S0 4 tandis que l’agaropectine contient 3,2% de S0 4 ) [13].

III-2- MONOTERPENES

Le monoterpène (2) est isolé pour la première fois dans les

lièvres de mer [14] et dont la source est la placamium
cartilagineum [15]. Cette dernière contient onze monoterpènes
halogénés et linéaires et change de structure en fonction du site
de récolte [16]. Les produits (3), (4) et (5) ont été isolés de
la même espèce. Cette dernière, récoltée en Angleterre, contient
les composés (6), (7), (8) et (9) [17].
 Les produits (8) et (9) isolés de l'algue rouge Placamium
violaceun présentent une activité insecticide et inhibent la
croissance des larves [18].

Le genre Gelidium n'a pas bénéficié d'étude chimique,

mais récemment à Marrakech On a pu et pour la première fois
isoler un monoterpène tétrachloré (10) [19][38] à partir de ce genre

III – 3 DITERPENE
 Le laurencianol (11), un diterpène halogéné est isolé de
l’algue Laurencia obtusa, celui-ci manifeste une activité
antibacterienne [20]

Classe Activité
Espèce B. Subtilis E. Colli

Rhodophyceae
Grateloupia porteus vutz + -
Laurencia obtusa (huds) lomour + Tr
Laurenci abtusa ++ +
Plocamium cartilagineum + Tr
(L)-Dixon
Phaesphydae
Cystosema crinita ++ +
Cystosema susgenana + -
Diplophis spirales ++ -

+ effet d’inhibition,
- pas d’effet,
Tr trace
Tableau 1 : Effet antibactérien de certaines algues [21]
 III-4 LIPIDES

Caccamese et coll ont montré que les lipides, extraits de

plusieurs algues de différentes classes, présentent une activité
antimicrobienne et antivirale [21]. Les espèces choisies et les
résultats obtenus figurent dans le tableau 1 ci-dessus,

IV IMPORTANCE ET UTILISATION DE L'AGAR

L'agar-agar est un polysaccharide doté d'un pouvoir

gélifiant élevé, ce qui lui permet une utilisation dans plusieurs
domaines :

- en agroalimentaire, l'agar est utilisé comme gélifiant et

émulsifiant. Il sert aussi pour épaissir les crèmes glacées et
dans la fabrication des fromages, des moutardes et des
mayonnaises. Il est également utilisé dans la boulangerie comme
agent antihydratant.

- en microbiologie, il sert à solidifier les milieux de

culture et à fixer Ies tissus végétaux ou animaux.

- dans le textile, on l'emploie pour imperméabiliser les

vêtements.

- dans le domaine de la photographie, il remplace la

gélatine dans la fabrication des films.

- en médecine et en pharmacie, l'agar est utilisé dans la

confection des pilules et des pastilles. Il présente des effets
dans la régulation de l'intestin, rôle dans lequel il est
extrêmement efficace et tout à fait inoffensif.
 L'utilisation de l'agar est d'une diversité qu'on ne peut
citer dans ce rapport. Ceci justifie la demande mondiale élevée
de ce produit.

En 1983, le Maroc a produit 520 tonnes (t) d'agar à partir

de 4600 t de matière première ce qui lui donné la troisième
place mondiale parmi les producteurs de l'agar-agar [22].

IV-1 Méthodes d'extraction

Connu depuis longtemps, le procédé d'extraction de la gélose

subi des améliorations pendant les deux derniers sièc les
donnant naissance à plusieurs méthodes.

Toutes les méthodes sont basées sur la solubilité de la

gélose dans l'eau bouillante et l’insolubilité dans l'eau froide.

Parmi les méthodes d'extraction intéressantes, nous avon s

retenu les quatre suivantes (voir tableau 2).

IV-2 Structure chimique de l’agar

Du fait de la complexité des molécules constituant l'agar et

le changement de sa structure chimique en fonction du milieu et
de l'espèce choisie, les travaux entrepris n'ont abouti qu'à une
idée plus ou moins certaine de cette structure.

Il semblerait qu'il s'agit de sel calcique et magnésien d'un

ester sulfurique résultant de la fixation de l'acide sulfurique
sur un carbone de résidu d'un L. Galactopyranose qui termine la
chaîne de 9 résidus de D.Galactose [27).
 Les analyses centésimales faites par PAYEN (1859) (28] ont
permis de proposer la formule C 12 H 18 O 9

Au XX ème siècle viennent les travaux d'ARAKI qui en 1937

[29] et par acétylation sépare l'agar en deux fractions qu’il
appelle Agarose et agaropectine

METODES CONDITIONSD DE TRAVAIL

[20 , 23] - algue lavée abondamment à l’eau et passée à

CHRISTAEN l’alcool bouillant et l’acétone
1981 - extraction 100 degrés avec agitation
- le jus filtré subi une congélation
décongélation
[21, 24] - l’algue lavée s, séchée au soleil, traitée par
TAGWA, NaOH 20% à 90 degrés
AL. - extraction à 130 degrés pendant 3 heures
1960 - Filtration, congélation, décongélation
- séchage
[9, 25] - lavage de l’algue, séchage à 110 degrés
CRISTEL- - algue introduite dans l’eau distillée (pH= 7)
LYS et - extraction à 120 degrés pendant2 heures
al. , 1977 - filtration, congélation, décongélation (2 fois)
- lavage avec l’eau froide
- séchage
Cité [26] - Algue lavée abondamment
FARAJ 1984 - dépigmentation (facultative) faite à
Utilisées L’aide de la soude
Par - Extraction 120-130 degrés pendant 2-3h.
SETEXAM - Filtration, neutralisation, purification
[26] sur terr de diatomée
- Le filtrat congelé lavé à l’eau douce
- Séchage avec l’air chaud
 En 1954, ARAKI et HIRASE [30] ont isolé un disaccharide
appelé "Agarobiose" de structure de base le D -galactopyranosyl
3-6 anhydro. L-galactose (figure 2)

En 1956, ARAKI et ARAI [31 ] isolèrent un autre disaccharide,

le néoagarobiose, il s'agit d'un isomère de l'agarobiose: le 3 -6
anhydro-L-galactosyl D-galactose.

En 1958, ARAKI [32] suggère que l' agarose qui est formé d'une
combinaison de ces deux disaccharides comme unité de répétition
est le constituant de base de l'agar et qu'il est un polymère
linéaire (figure 3).

En 1971, Duck Worth et VAPHE [33] ont conclu que l'agar est
une famille de polysaccharide présentant 3 extrêmes dans sa
conformation : agarose neutre, agarose pyruvaté peu sulfaté et
galactose sulfaté (figure 4)

IV.3 Evaluation de la qualité de l'agar

Pour évaluer la qualité de l'agar, on a recours à la mesure de

quelques caractéristiques physico-chimiques :

- Viscosité qui mesure la résistance à l'écoulement de la solution

d'agar.
- Point de gélification P.G : c'est la température pour
laquelle la surface d'une solution d'agar à une concentration
donnée forme un semi-solide.
- Point de fusion P.F : c'est la température à laquelle la
solution d'agar solide passe à l'état liquide.
- Force de gel F.G: c'est la mesure de la force de pression
nécessaire pour briser un gel dans des conditions précises [34].
 Formule de l’agarobiose
Figure 2 : 3,6-anhudro-4-0-b-d-galactoptranosyl-L-galactose
D’après HIRASE et ARAKI (1954)

Figure 3 : FORMULE DE L’AGARABIOSE D’APRES ARAKI (1958)

Figure 4 : Structures chimiques de l’agar-agar proposées par
DUCKWORTH et YAPHE (1971)
 DEUXIEME PARTIE

RESULTATS ET DISCUSIONS
 I MISE AU POINT DE LA TECHNIQUE D'EXTRACTION

L'objectif notre travail est d'essayer d'améliorer le

rendement d'extraction de l'agar et de sa de qualité en jouant sur
certains paramètres qui sont de deux sortes soit biologiques soit
expérimentaux.:

I-1 Effet de quelques paramètres biologiques

On sait que la composition des algues dépend de

l’environnement [35], l'âge, la saison de récolte [23] ainsi que
la phase de développement dans le cycle biologique,

a) variation de la quantité et de la qualité

l'agar en fonction des saisons

Nous avons essayé de suivre la variation de la qualité et

de la quantité de l'agar selon les saisons. Ceci n'a pas été
souvent facile à cause de la rareté du Gelidium sesquipedalé dans
certains mois et le manque de moyens pour le chercher à une
profondeur de 7 à 12 m. Les résultats obtenus figurent dans le
tableau ci-dessous
 --- Janvier Février Mars Juillet Septembre
Rendement
36 33,5 34 38 32
D’extraction

PF 83-87 82-86 84-88 84-88 87-92

PG 32-38 38-44 35-40 36-42 35-39

FG g/cm2 270,5 370,5 460 215 220

Couleur - - - - --

+ agar coloré
- - - couleur de l’agar DIFCO
PF point de fusion
PG point de gélification
FG force de gel

Tableau 2 : variation saisonnière de la qualité

et de la quantité de l’agar

Nous constatons d'après le tableau que le rendement

d'extraction de l'agar diminue de Janvier à Février puis augmente
en Juillet et septembre. Ceci a été remarqué également
par CRISTELLYS [25] (figure 5) en étudiant la variation de la
quantité de l'agar extraite en fonction de la saison chez le
Gelidium arbuscula et G. cartilaqineum récolté en Espagne. La
teneur en agar est maximale en hiver et en automne. La qualité ne
varie pas beaucoup, la plus grande force de gel est obtenue pour la
récolte de Mars
 c) Variation de la quantité et de la qualité en
fonction de la taille

Selon SOEANE-CAMBA [19] et SALINAS (36] la croissance de

l'algue est à peu près linéaire. En Espagne, par exemple, la
taille moyenne de 10 cm correspond à la première année, 16 cm pour
la deuxième année et 19 cm pour la troisième année.

Au MAROC, la récolte des algues se fait par arrachage

des thalles sans se soucier de la taille. Pour rationaliser
l'exploitation du G. sesquipedalé, nous avons essayé d'étudier le
rendement de l'agar en fonction de la taille de l' algue. La non
homogénéité des échantillons récoltés nous a obligé à les
partager en classes dans lesquelles la taille varie de 5 cm à 10
cm. Les résultats obtenus figurent dans le tableau indiqué ci -
dessous :
No. De classe 1 2 3 4 Difco

Taille (cm) 2,5 – 7,52 7,5 – 12,5 12,5 - 20 20 - 30

Rendement
33.6 30,2 22,5 36
D’extraction
PF 81-84 85-90 84-89 84-88 82-86

PG 32-38 34-40 40-46 35-41 34-38

FG g/cm2 180 200 480 420 190

Couleur + + - - ---

Tableau 3 : Variation quantitative et qualitative de

l’agar en fonction de la taille

Rendement d'extraction (%)

40

35

30

25

20

15

10

0
2,5 – 7,52 7,5 – 12,5 12,5 - 20 20 - 30
Taille (cm)

Figure 6: Variation de la quantité de l’agar

en fonction de la taille
 D’après la figure 6, la quantité d'agar extraite décroit
pour des tailles allant de 2,5 cm à 20 cm, puis augmente pour les
tailles supérieures à 20 cm. Ceci est en conforme aux résultats
obtenus par CRISTELLYS et coll. [25] qui ont montré que la teneur
en agar est plus forte chez les jeunes algues que chez les
thalles plus âgés.

I-2 Étude des paramètres liés à l'extraction

Parmi les méthodes d'extraction d'agar citées dans la

première partie, nous avons retenu celle de CRISTELLYS (1971)
[25] qui donne un bon rendement [22]. L'agar est obtenu en
passant par 3 étapes : prétraitement, décoction et traitement.

a) Prétraitement

Toutes les méthodes d'extraction préconisent un prétraitement

de l'algue dans le but d'éliminer les couleurs (dépigmentation).

Au cours de notre travail, nous avons fait des

prétraitements de l'algue avec de l'eau douce, la chaux et un
mélange de chloroforme méthanol. Les résultats sont donnés dans
le tableau 4
 Rendement
No. De classe PF PG FG couleur
D’extraction

algue traitée
12 85-89 34-38 320 +
avec la chaux
algue traitée
avec l’eau 34,6 86-90 35-40 400 --
douce
algue traitée
avec 33,6 80-85 34-38 400 --
HCCl 3 /CH 3 OH
Algue non
36 84-88 35-45 420 --
traitée

tableau 4: variation de la quantité et de la qualité

de l'agar avec le mode de traitement

- Le traitement, de l'algue pulvérisée par la chaux pendant

18 heures (pH = 9), entraîne une diminution notable du rendement, et
une augmentation de la couleur. Les PF., PG. semblent être peu
affectés par le traitement. Les mêmes constatations sont faites par
RÉANI [22] en faisant des traitements par Na0H. On pour rait
soupçonner une modification de la structure chimique de l'agar en
milieu basique.
- Le passage de la poudre d'algue dans l’eau pendant 18 heures
donne un rendement meilleur et une couleur plus claire.
-Le traitement avec un mélange de chloroforme et de méthanol
donne un rendement comparable au dernier, la couleur est claire.
Le mélange de solvants organiques solubilise une partie des
pigments qui donnent une couleur a l'agar extrait.
 b) décoction

Nous avons fait varier quatre facteurs qui sont : le pH

d'autoclavage, le mode de découpage de l'algue, la température de
décoction et la quantité d'eau utilisée dans l'extraction. Les
résultats sont indiqués dans le tableau 5 ci-dessous.

Rendement Coul-
----- PF PG FG
-eur

Algue extraite à pH= 8 29 85-90 34-38 240 --

Algue coupée en morceaux 33,2 84-88 36-40 450 --

Algue extraite à 100°C 28 83-87 36-42 650 --

Cuisson avec une grande
36 83-87 40-45 400 --
quantité d’eau
Algue pulverisée 36 84-88 35-41 420 --

Tableau 5 : variation de la quantité et de la qualité

de l’agar en fonction des paramètres de décoction

- L'extraction en milieu alcalin (pH = 8) conduit à un

faible rendement et une force de gel inférieure à celle réalisée
en milieu neutre.,

- il ressort du tableau 5 que la quantité d’eau n’a pas

beaucoup d’influence sur le rendement
 L'extraction à 100°C (pression atmosphérique) entraîne une
diminution du rendement et affecte la force de gel qui est
nettement supérieure aux autres

Il Etude microbiologique de l'agar extrait

Dans le paragraphe II (partie1), avons Vu les

différents paramètres physico-chimiques qui déterminent
la qualité de l'agar à. qui savoir PF. PG. et la FG. derniers Ces sont
conformes aux exigences de la microbiologie [37] En effet
l'agar utilisée en microbiologie doit avoir un PG aux environs
de 40°C et une FG. élevée, ce qui est satisfait par l'agar
extrait. Pour pouvoir confirmer que l'agar extrait est utilisable
en microbiologie, nous avons fait les tests suivants :

a) Toxicité

Dans le but de savoir si l'agar extrait contient un agent

toxique: nous avons cultivé deux souches Escherichia Coli et
Klebsiella pneumonaea dans deux boîtes de pétrie contenant l'agar

extrait et un milieu nutritif LB, l'agar Difco sert de témoin.

Après 24 heures d'incubation a 37°C, nous avons constaté que les
deux souches se développent de la même manière sur l'agar extrait
et l'agar Difco. Ceci montre que l'agar extrait ne présente aucun
effet inhibiteur ou toxique pour la croissance des souches
 b) Diffusion des antibiotiques

Pour ce test, nous avons choisi la Bipenicilline G.

La diffusion de ce dernier a été de la même façon dans un milieu de
culture contenant l'agar extrait et un autre contenant l'agar
Difco. Donc, il n'y a pas d'interaction l'agar extrait sur
la diffusion de l'antibiotique.

III. EFFET ANTIMICROBIEN DES CONSTITUANTS CHIMIQUES DE L’ALGUE

Dans le but de trouver de nouveaux produits ayant une

activité biologique, nous avons procédé à une extraction de
l'algue en poudre avec un mélange une HCCl 3 /MeOH 2:1 ce qui nous a
donné un extrait brut. Ce dernier a subi une saponification. LA
partie insaponifiable a subit une séparation sur colonne. La
fraction éluée avec HCCL 3 est désignée par F1 elle contient un
produit qui a cristallisé après évaporation du solvant.
L'identification de ce produit ainsi que celle des autres
produits de l'extrait brut sont en cours.

a) Extrait brut

L'effet antimicrobien de l'extrait brut est testé sur trois

souches différentes, Escherichia coli, Klebseilla pneumonea et un
Entérocoque, selon la technique des disques et la technique des
puits.

Les résultats obtenus par ces deux techniques sont négatifs.

En effet aucune zone d'inhibition n'a été observé avec des
disques de 6 mm contenant 0,15 et 1 mg ou avec des puits
contenant 5 et 10 mg
 b) Fraction insaponifiable

Cette fraction non plus n'a aucune activité antimicrobienne

vis à vis des souches citées ci-dessus.

c) Fraction F1

La méthode des puits a révélé un effet antimicrobien de

cette fraction. La zone d'inhibition est de 2 cm de diamètre à
une concentration de 1 mg/puits.

Ce résultat confirmé par culture an milieu liquide. Deux

cultures d’E. Coli dans le milieu LB liquide sont incubées à 37°C
et sous agitation ; la première ne contenant pas la fraction F1
sert de témoin, la deuxième contient 100 mg de f1

L’agitation est nécessaire pour assurer une bonne croissance

d’ E. coli et une bonne diffusion du produit dans le milieu.

La croissance des bactéries est suivie par

spectrophotométrie à 650 nm (voir courbe fig. 7). On observe un
effet bactériostatique de la fraction F1 qui est traduit par un
pourcentage d'inhibition de 65%. D'autre part, on observe un
effet bactériocide au début de la culture (0-1h 30 ceci est dû
aux conditions physiologiques des jeunes bactéries.

Cette activité ne s'est pas manifestée par l'extrait brut et

la partie insaponifiable à cause de la dilution et peut être à
des effets antagonistes de certains produits
 Conclusion

Cette étude a pour but d’améliorer le rendement d'extraction

de l’agar, de sa qualité et de contribuer à l’étude chimique
de quelques espèces d’algues marines de la région d’El Jadida afin
de les valoriser. Pour cela nous avons effectué une série
d’expériences dont les résultats satisfaisants sont les suivant :

-En ce qui concerne l’agar, les récoltes de Janvier,

juillet et Septembre donnent un bon de rendement et une meilleure
qualité.
-les jeunes thalles (de longueur inférieure à 7,5)
contiennent plus d'agar que les plus âgées (12,5 cm à 20 cm).
-Le traitement en milieu alcalin influe le rendement et
la qualité de l'agar. En effet, nous avons constaté une diminution du
rendement et un noircissement de l'agar extrait.
-Une décoloration partielle de l'algue pulvérisée avec l'eau
douce conduit à un bon rendement et une qualité meilleure. Ceci
peut remplacer la décoloration avec des agents chimiques
-La décoction à pH neutre et à 120°C pendant 2 heures donnent
de meilleurs résultats que la décoction à 100°C.
-Les tests microbiologiques de l'agar extrait so nt positifs
dans le sens où l'agar extrait répond aux no rmes exigées pour une
utilisation de celle-ci en microbiologie.
Pour le G. sesquipedalé, nous avons détecté une activité
antimicrobienne de certains extraits de l'algue. Une étude est en
cours pour identifier les produits responsables de cette
activité

Nous essayerons par la suite d'étendre cette étude chimique

à d'autres espèces d'algues marines de la région d'El Jadida pour
leur trouver des incidences économiques et industrielles
 I DETERMINATION DES CARACTÉRISTIQUES PHYSIQUES DE L'A GAR

a) Point de gélification

Il est mesuré de la façon suivante : 10 ml d'une solution

d’agar à 2% sont mis dans un tube de 15 mm de diamètre et 120 mm
de longueur et chauffé jusqu'à la fusion. Ensuite le tube est
légèrement incliné puis placé à 20°C (température ambiante).
Quand la surface de la solution devient semi -solide, on lit la
température de la gélification sur un thermomètre qui a été place au
préalable dans le tube.

b) Point de Fusion

Un tube à essai (120mm X 12mm) contenant 5ml d'une solution

d'agar à 2% et laissé refroidir pendant toute la nuit à 120C . A
l'aide de micro pipette, on réalise des trous à la surface
du gel. Le tube est placé dans un bain marie où la température
augmente d'environ 1°C par minute. Le point de fusion est noté
au moment où les trous disparaissent complètement.

c) Force de gel

Préparation gel. : Une solution d'agar à 1,5% est

préparée par dissolution d'agar dans l'eau bouillante. La
solution est laissée refroidir à la température ambiante pendant
15 h pour obtenir la pleine force du gel.

Description du gélomètre : Le gélometre utilisé-fabriqué

à la faculté d'El Jadida-est inspiré de celui décrit par REANI
[22]. Il est composé d'une tige verticale de 1cm de section. Celle -ci est
munie d'un plateau. (Fig 8)
 Figure 8 : Gélomètre

Mesure de la force de gel : L'extrémité inférieure de la

tige est placée en contact du gel. Sur le plateau on ajoute des
masses marquées jusqu'à ce que la tige traverse le gel. Le poids
(tige, plateau, masses marquées) traduit la force du gel.

II PROTOCOLE D'EXTRACTION DE L'AGAR A PARTIR DU G. SESQUIPEDAL

Les extractions sont réalisées suivant la méthode

de CRISTELLYS (schéma ci-dessous)
 III PREPARATION DES EXTRAITS POUR L4ETUDE MICROBIOLOGIQUE

L’algue en poudre est extraite à température ambiante avec un

mélange de chloroforme/méthanol 2 :1 suivant le protocole
ci-dessous :

Algue fraîche
Lavage à l’eau douce
séchage à l’air libre
pulvérisation fraîche

Algue pulvérisée
- Extraction à HCCl 3 /MeOH 2 :1
pendant 12h
- filtration

Résidu végétal

Filtrat
- séchage sur MgSO 4 , puis
évaporation du solvant

Extrait brut
- saponification
Séparation
Sur
Partie insaponifiée
colonne
F1 + F2 +..

_ Saponification d’extrait brut : dans un ballon de 100ml, on

place environ 2g d’extrait puis on ajoute 34ml d’une solution
hydroalcoolique de potasse 2M. On chauffe à reflux pendant 2 heures
et on ajoute 67ml d’eau distillée et on extrait à chaud plusieurs
fois avec du chloroforme d’abord et l’éther diéthylique, en suite.
La phase organique est échée sur sulfate de sodium anhydre, après
filtration et évaporation on récupère la partie in saponifiable

_ La chromatographie sur colonne a été effectué avec de la

silice de Riedel-de Haen 20µm, 400 mesh ASTM et une colonne de
longueur 8Ocm. Nous avons utilisé une masse de silice d'environ
400 fois celle du produit.

IV TESTS MICROBIOLOGIQUES

a) Souches

Les souches utilisées sont Les Klebsiella pneumonaea et

Escherichia Coli Elles ont été isolées au laboratoire et de
microbiologie de la acuité des Sciences d'E1 Jadida..

b) Milieu de culture

Le milieu LB a servi comme milieu nutritif soit à l'état

liquide soit à l'état solide, en lui rajoutant de l'agar à raison
de 15 g/l, le milieu LB est constitué de :

Extrait de levure 5 g
Nacl 5 g
H 2 O qsp 11
Le milieu LB est stérilisé à 120° C pendant 45 mn.

c) Techniques des disques

Le milieu de culture contenant 15 g/l d'agar est coulé dans

des boîtes de Pétrie, après solidification, il est inoculé
par une culture de la souche choisie avec le râteau. Un disque de
cellulose imbibé de l'extrait à tester est placé au centre de la
boîte. La culture est incubée a 37°C pendant 24h
 d) Techniques des puits

On creuse un trou de diamètre précis dans la gélose (coul ée

dans la boîte de Petrie) après ensemencement, on remplit le trou avec
le produit à tester et on incube à 37°C.
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