Travaux pratiques virtuels en HPLC

Qu'est-ce que la HPLC ?

La chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC) est une vaste
technique de chimie analytique utilisée pour séparer les composés d'un mélange
chimique. Ces séparations utilisent l'écoulement sous pression d'une phase
mobile à travers une colonne remplie d'une phase stationnaire.
2-Etudier la rétention des parabènes
 Les parabènes étudiés sont :
Méthylparabène
Ethylparabène
Propylparabène
Buthylparabène
2.1 Ordre d’élution des parabènes :

 Quel ordre d'élution attendez-vous pour les 4 parabènes, sachant que la phase stationnaire est de
la silice greffée C18 ? Justifiez votre réponse.

 Sur une colonne C18, les parabènes élueraient généralement dans l'ordre suivant en
chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC) : méthylparabène,
éthylparabène, propylparabène et butylparabène. Cela est dû à l'augmentation de la taille
 des groupes alkyles, qui conduisent à une rétention plus importante sur la phase
stationnaire C18. La polarité croissante des groupes alkyles favorise une élution dans cet
ordre
2.2 Etudier l’impact de la composition de la phase mobile sur la rétention

Pour la composition de phase mobile 30% :

Pour la composition de phase mobile 10% :

Conclusion :
Lorsque on diminue la composition de phase mobile on ’a augmentation de temps de
rétention et de résolution.
On peut conclure que La composition de la phase mobile en HPLC a un impact
significatif sur la rétention des composés c’est-à-dire une diminution de la polarité de la
phase mobile peut augmenter la rétention en favorisant les interactions entre les analytes
et la phase stationnaire.
En faisant varier librement la proportion d'acétonitrile entre ces valeurs
 quel pourcentage préconiseriez-vous pour avoir une séparation de base (Rs ≥ 1,5), tout en
étant le plus rapide possible
Pour obtenir une séparation de base tout en visant une vitesse maximale un pourcentage
d’acétonitrile d’environ «30% »
 Tracez le graphe log (k') = f (log P). Utiliser des valeurs k' à 30 % d'acétonitrile. Décrivez
Brièvement la forme de la courbe et donnez votre conclusion.
Methylparabene Ethylparabene Propylparapene Butylparabene
Log p 1,8 2,4 2,9 3,4
Log k' -0,021 0,451 0,87 1,21

Log k'
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
1.6 1.8 2 2.2 2.4 2.6 2.8 3 3.2 3.4 3.6
-0.2
 On observe une courbe linéaire log de p proportionnel à log de k’
Lorsque k’ augmente on a tr diminue.
k'
% q méthylparabene ethylparabene propylparabéne butylparabéne
10 0,1 15,78 38,99 96,29 192,86
15 0,15 7,82 20,22 50,67 104,5
20 0,2 3,87 10,49 26,67 56,14
25 0,25 1,92 5,44 14,03 30,29
30 0,3 0,95 2,82 7,39 16,34

méthylparabene ethylparabene
18 45
16 40
14 35
12 30
10 25
8 20
6 15
4 10
2 5
0 0
0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35

propylparabéne butylparabéne
120 250

100 200
80
150
60
100
40

20 50

0 0
0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35

  Vérifier ensuite la relation linéaire de l'équation (2) en traçant les graphiques

des logarithmes du facteur de rétention (log k') en fonction de q. Donnez votre
conclusion
ethylparaben
% F méthylparabene propylparabéne butylparabéne
e
10 0,1 1,198107 1,59095324 1,98358119 2,28524216
15 0,15 0,89320675 1,30578115 1,7047509 2,01911629
20 0,2 0,58771097 1,02077549 1,42602302 1,74927241
25 0,25 0,28330123 0,7355989 1,14705767 1,48129927
30 0,3 -0,02227639 0,45024911 0,86864444 1,21325205
 méthylparabene ethylparabene
1.4 1.8
1.2 1.6
f(x) = − 6.10134462305081 x + 1.80827883479907
2.3 1.4 f(x) = − 5.70318101058812 x + 2.16130777864844
1
1.2
0.8 1
0.6 0.8
0.4 0.6
0.2 0.4
0.2
0
0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0
-0.2 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35
Calculs de la sélectivité et de la rétention

propylparabéne butylparabéne
2.5
2.5
2 f(x) = − 5.3635944751445 x + 2.82235533236893
2
f(x) = − 5.57513345976848 x + 2.5410381351756 1.5
1.5
1
1
0.5
0.5
0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35
0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35

k 2'
=α
K1'
α 1 =2,97
α 2 =2,62
α 3 =2,21
 Quel est le couple critique pour la séparation ?
Cependant, pour déterminer le couple critique, IL faut avoir la paire de composés ayant la
résolution la plus faible, qui est généralement la plus proche de 1.5. Ceci indique la limite de
séparation ces couple critiques sont :
Ethylparabene/Butylparabène