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Une technique de bande C haute résolution

Article dans Génome · mai 1986

DOI: 10.1139 / g86-047 · Source: PubMed

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3 auteurs dont:

Marc De Braekeleer
Université de Bretagne Occidentale
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 TECHNIQUE

Une technique de bande C haute résolution

M. DE BRAEKELEER, MARYLINNEKEUSHNIG ET CC LIN ~

Département de pédiatrie et de biochimie médicale, Université de Calgary, Calgary, Alb., Canada 72N
4N1
.University le 06/04/13 à utiliser uniquement

Éditeur correspondant: J. Kuspira

Reçu le 16 juillet 1985
Peking

Accepté le 21 novembre 1985

DEBRAEKELEER, MM KEUSHNIG et CC LIN.1986. Une
Pouvez. J. Genet. Cytol. Téléchargé Pour personnel www.nrcresearchpress.comby

technique de bande C haute résolution . Pouvez. J. Genet. Cytol. 28: 317-322.

Une technique de bande C à haute résolution est décrite. Les principaux avantages de
cette méthode sont sa simplicité et sa fiabilité. Parce que cette technique permet la
reconnaissance d' hétéromorphismes inhabituels en bande C , elle peut être très utile dans
les études cytogénétiques de population.
Mots clés: caryotypage, baguage (C), hétérochromatine, haute résolution.

DE BRAEKELEER, MM KEUSHNIGetC. C. LIN. 1986. Une technique de

bande C à haute résolution . Pouvez. J. Genet. Cytol. 28: 317-322.
Une technique de rkvklation des bandes C a haute rksolution est dkcrite. Les principaux
avantages de cette mkthode sont sa simplicitk et sa reproductivitk. Comrne elle permet de
reconnaitre des hktkromorphesinhabituels dans les bandes C, elle devrait s'avérer utile pour les
ktudes de cytogknktique des populations.
Mots clks: caryotype, bandes C, hktkrochromatine, haute rksolution.
introduction ment des bandes G et C simultanées
Les chromosomes sont constitués . Finalement, des séquences triples ont été
d'euchromatine et d'hétéro-chromatine qui signalées: GQC (Lubs et al. 1973) et QRC
ont des propriétés de coloration différentes. (Rubinstein et al. 1978).
L'hétérochromatine constitutive est D'un autre côté, plusieurs techniques de
constituée d'ADN hautement répétitif et est synchronisation cellulaire ont été développées
colorée par des bandes C (Pardue et Gall pour obtenir un grand nombre de chromosomes
1970; Arrighi et Hsu 1971). à prophase tardive et à métaphase précoce dans
des cultures de lymphocytes humains. Ils
Plusieurs techniques de bandes C ont
dépendent du méthotrexate (Yunis 1976; Pai et
maintenant été décrites (Arrighi et Hsu 1971 ; Thomas 1980; Richer et al.1983; Ronne et
Chen et Ruddle 1971 ; Craig-Holmes et Shaw al.1984), de la bromodésoxyuridine (Dutrillaux
1971; Gagne et al.1971; McKenzie et Lubs 1973; 1975; Dutrillaux et Viegas-Pequignot 1981 ), du
Sumner 1972; Alfi et Menon 1973; Salamanque fluorururacile (Ronne 1984) ou de la
et Armendares 1974). fluorodésoxyuridine ( De Braekeleer et al.,
La plupart des chromosomes ne peuvent pas 1985). Ces techniques ont été largement utilisées
être identifiés avec les techniques de bandes C à pour obtenir des bandes G et (ou) R à
i

moins que les bandes Q, G ou R soient haute résolution (Dutrillaux et Biegas-Pequignot

effectuées sur la même métaphase avant la 1981 ; Richer et al. 1983).
d

bande C. Ces méthodes sont maintenant
appelées techniques de bandes séquentielles.
Plusieurs techniques séquentielles de baguage
QC ont été décrites (Chen 1974; Lubs et
McKenzie 1975; Buckton et al.1976) ainsi que
plusieurs techniques de baguage GC (de la Maza
et Sanchez 1976; Rajasekariah et Garson 1981).
Il convient de noter que de la Maza et Sanchez
(1976) n'ont pas signalé de véritable technique
de bandes GC séquentielles mais plutôt
'adresse actuelle: Départements de
génétique, de pathologie et de pédiatrie,
Université de l'Alberta, Edmonton, Alta,
Canada.
Le présent rapport décrit une technique à
haute résolution de bande C pour les cultures de
lymphocytes humains utilisant la
fluorodésoxyuridine pour synchroniser les cellules
et une technique séquentielle de bandes GC ou
RC, les bandes C étant obtenues par une
modification de la méthode de Sumner.
matériaux et méthodes
Conditions de culture
Des cultures de lymphocytes humains ont été
mises en place en ajoutant 0,5 ml de sang à 10 ml de
milieu (RPMI 1640 + 15 % de sérum de veau fœtal +

POUVEZ. J. GENET. CYTOL. VOL. 28, 1986

ng University le 06/04/13
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y '%

figure. 1. Cellules mitotiques séquentielles à bandes GC provenant de deux cultures différentes de

lymphocytes femelles.
ensuite ajouté aux cultures à une concentration finale fait avant la préparation des diapositives La
vez.

de 0,05 et 4 pM, respectivement, et les cellules ont été suspension cellulaire a été lâchée d'une hauteur de

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figure. 2. Quatre cellules mitotiques à bande C avec des chromosomes à différents stades d'élongation
d'un même mâle. Les pointes de flèches indiquent le chromosome Y.

R66 coloré préparé dans du tampon de Gurr pH 6,8)
pendant 4 min. Les bandes R ont été produites par une
modification de la méthode FPG de Perry et Wolff
(1974). Les lames ont été plongées dans du Hoechst
33258 (Sigma) à une concentration de 1 pg / rnL d'eau
distillée pendant 15 minutes, puis transférées dans des
boîtes de Pétri, inondées dans 2 x
SSC, et exposé pendant 60min sous une lampe UV
(Sylvania FlST8 / BLB 15W) à une distance de 5 cm.
Ils ont ensuite été incubés dans 2 x SSC à 65 ° C
pendant 60 min, rincés dans du tampon de Gurr
(pH 6,8) et colorés pendant 8 min dans une solution
de coloration Giemsa à 5%.

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figure. 3. Chromosomes à bande C montrant différents hétéromorphismes.

Les bandes C ont été induites par une
modification de la technique de Sumner (1972). Les
lames ont été traitées avec du HCl 0,1 N pendant 1 h
à température ambiante, rincées à l'eau du robinet
et placées dans une solution aqueuse à 5%
d'hydroxyde de baryum à 65 ° C pendant 2-3 min.
C t l
femelles sur lesquelles la technique de bandes
GC séquentielles a été appliquée. Les
centromères sont tachés de noir ainsi que
certains satellites des chromosomes des
groupes D et G. Il est également intéressant de
noter que la morphologie des chromosomes est

Ils ont ensuite été rincés à l'eau du robinet et bien conservée et qu'ils ne possèdent pas
incubés pendant 1 h dans du SSC 2 X à 65 ° C, rincés d'apparence "fantôme".
à nouveau à l'eau du robinet et colorés pendant 1 h La figure 2 montre quatre cellules mitotiques
dans une solution de Giemsa à 5%. partielles d'un même mâle dont les
 Résultats
Dix hémocultures de volontaires sélectionnés au
hasard (cinq hommes, cinq femmes) ont été mises
en place en suivant les directives données dans les
matériaux et les méthodes. Dans tous les cas, la
synchronisation cellulaire a fourni un si grand
nombre de cellules mitotiques avec des
chromosomes à différents stades d'élongation
qu'un seul côté était suffisant pour effectuer la
technique de bandes séquentielles.
TECHNIQUE
Discussion
Le premier avantage de la technique décrite
dans ce rapport est sa fiabilité et sa simplicité. Bien
que plusieurs techniques de synchronisation
cellulaire pour les cultures de lymphocytes
Pouvez. J. Genet. Cytol. Téléchargé www.nrcresearchpress.com par Peking University le 06/04/13
humains aient été décrites, toutes nécessitent une
manipulation fastidieuse. Dans la technique de
synchronisation FudR, aucun lavage des cellules
n'est nécessaire avant de libérer le bloc de phase S ,
et peu de dommages aux chromosomes, tels que
des lacunes ou des ruptures de chromatides, sont
observés. Les bandes G sont simplement induites
avec de la trypsine et les bandes R sont facilement
obtenues par une modification de la méthode FPG
de Perry et Wolff. Les résultats des deux techniques
de baguage sont très cohérents.
.Pour usage personnel seulement
Le deuxième avantage de cette méthode est la
reproductibilité élevée des bandes C obtenues par
une modification de la méthode de Sumner.
D'après notre expérience, il semble qu'un
traitement rapide à l'hydroxyde de baryum soit
bénéfique pour les chromosomes tardifs de la
prophase et de la métaphase précoce. Des
traitements plus longs à des températures plus
basses induisent généralement des chromosomes
"fantômes" .
Les résultats montrent que la longueur des
bandes C n'est pas directement liée au degré de
condensation chromogène. Une telle conclusion a
déjà été tirée par Schmiady et Sperling (1976) à
propos de la longueur de la bande C du
chromosome humain n ° 1. En fait, dans les
chromosomes allongés, l'hétérochromatine
constitutive est proportionnellement plus
condensée que l'euchromatine .
La technique des bandes C s'est révélée très utile
pour démontrer la variation de l'hétérochromie
constitutive. Des hétéromorphismes ont été trouvés
dans les bandes C des chromosomes nos 1, 9 et 16
chez différents individus et populations
(Craig-Holmes et al.1973; Nielsen et al.1974; Lubs et
depuis
McKenzie 1975; Buckton et a1.1976; Verma et al.,
1978; Verma et al., 1981). Au cours des 10 dernières
années, de nombreuses études ont été réalisées sur
des populations particulières et elles ont été
examinées par Erdtmann (1982). Bien que certains
auteurs aient montré qu'il existait une relation
entre les variantes de la bande C et les
malformations congénitales, le retard mental, la
trisomie 2 1, plusieurs types de cancer et de
leucémie et le risque d'avortement spontané,
d'autres n'ont trouvé aucune relation.
Il est possible que les bandes C de tous les
chromosomes présentent un certain degré de
polymorphisme de taille et de position (Sofuni et
322
m par Peking
POUVEZ. J. GENET. CYTOL. VOL. 28, 1986
Dans Méthodes en biologie cellulaire. Sous la
direction de D. Prescott. Vol. 6. New York,
ement
Academic Press. pp. 345-380.
chromosomes étaient à bandes C. plus le
chromosome Y est long, plus le bloc
hétérochrome est allongé dans la partie distale
du bras long . Cependant, la longueur de
l'hétérochromatine centromérique de tous les
chromosomes du complément diploïde ne
semble pas être directement liée au degré de
condensation chromosomique.
La figure 3 montre les caryotypes partiels
coupés de plusieurs cellules de 4 des 10 patients
321
peut être très utile dans les études de liaison et la
cytogénétique des populations.
Reconnaissance
M. De Braekeleer est récipiendaire d'une bourse
postdoctorale de l'Alberta Heritage Foundaion for
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