TP9 MODALITES DE LA CATALYSE ENZYMATIQUE Fiche sujet – candidat (1/2)

Mise en situation et recherche à mener

L’eau oxygénée ou peroxyde d'hydrogène (H 2O2) sert essentiellement au blanchiment de la pâte à papier à la place du chlore gazeux pour
éviter la production de dioxines. En présence d’une enzyme, la catalase (famille des peroxydases) elle est alors rapidement transformée alors
en eau et dioxygène. H2O2 H2O + O2
Cette réaction enzymatique peut se dérouler à différentes vitesses.
On cherche à mesurer cette vitesse et à montrer qu’elle peut être influencée par différents facteurs.

Photographie
(les différents stades du
Blanchiment de la pâte à papier)
Ressources
Matériel disponible :
- Matériel : Catalase du navet (ou peroxydase).
- Matériel courant de laboratoire (verrerie, instruments,..).
- Matériel de mesures informatique (EXAO).
- Solutions de substrat d’eau oxygénée H2O2 de concentration variable.
- Divers…

Etape A: Concevoir une stratégie pour résoudre une situation problème (durée conseillée : 10 minutes)

Proposer une démarche d’investigation qui permette de mesurer la vitesse d’une réaction enzymatique dans différentes conditions.
Appeler l’examinateur pour vérifier votre proposition et obtenir la suite du sujet.
 Fiche sujet – candidat (2/2)

Etape A : Mettre en œuvre un protocole de résolution pour obtenir des résultats exploitables

Mettre en œuvre le protocole fourni pour déterminer la production d’O2 (= produit) en fonction des concentrations d’eau oxygénée
(substrat).

Appeler l’examinateur pour vérifier les résultats et éventuellement obtenir une aide.

Etape B : Présenter les résultats pour les communiquer

Présenter vos résultats, sous la forme de graphiques annotés de la manière la plus complète possible et calculer les vitesses de réaction
enzymatique dans un tableau.
(La vitesse correspond à la quantité de produit formé par unité de temps. Faire le calcul de la vitesse initiale pour chacune des
courbes, c'est-à-dire pour chaque concentration en substrat, en utilisant la formule suivante : Vi= dO2/dt, calcul entre 30 et 40s).
Construire, sur papier millimétré, la courbe représentant la vitesse de la catalyse enzymatique en fonction de la concentration en substrat.

Répondre sur la fiche-réponse candidat, appeler l’examinateur pour vérification de votre production.

Etape B : Exploiter les résultats obtenus pour répondre au problème

Exploiter les résultats pour expliquer comment la concentration en substrat influence l'activité enzymatique.
 PROTOCOLE : MODALITES DE LA CATALYSE ENZYMATIQUE

Organiser le poste de travail de façon à manipuler proprement et en accord avec les consignes de sécurité.

Etape 1 : Préparation du filtrat contenant la catalase

Râper un demi-navet dans un bécher et compléter celui-ci avec de l’eau distillée.
Laisser reposer 5 minutes puis filtrer dans les 6 tubes à essai.

Etape 2 : Paramétrage des mesures et réalisation du montage

1. Paramétrer la mesure. La durée de la mesure est 60 secondes; cocher « ajouter les courbes » afin que les 6 courbes obtenues se
superposent.
2. Remplir l’enceinte avec la solution de catalase (préalablement agitée)
3. Installer dans l'enceinte la sonde à dioxygène, vérifier l’absence de bulle d’air dans l’enceinte et éponger les débordements éventuels ;
4. Fermer (si nécessaire) les autres orifices avec des bouchons;
5. Lancer l'agitation à vitesse modérée ;
6. Préparer une seringue avec la solution d’eau oxygénée ;
7. Prévoir l’insertion d’un repère légendé sur le graphique précisant le moment de l’injection (édition/marqueurs d’acquisition/remplacer
nouveau marqueur par « injection de substrat »).

Appeler l’examinateur pour vérification du montage

Etape 3 : Protocole d’acquisition des mesures

1. Lancer la mesure ; ne rien injecter pour cette mesure (courbe témoin, concentration nulle en substrat) ;
2. Entre chaque mesure, arrêter l’agitateur, aspirer le contenu de la cuve, changer le filtrat de navet (5 autres tubes) ;
3. A t = 20 secondes ajouter dans le réacteur 0.3 ml de la solution de substrat à 0,1V et insérer un repère légendé sur le graphique ;
4. Poursuivre l’enregistrement durant le temps restant ;
5. Faire de même pour les mesures suivantes (pour les différentes concentrations de substrat : 0,2, 0,5, 1 V et 2 V).
6. Présenter les résultats de façon optimale en jouant sur les fonctionnalités du logiciel ;

Appeler l’examinateur pour vérification.

7. Imprimer vos courbes (imprimante Mimosa-302 ; format paysage)

NB : vider et rincer l’enceinte à l’eau distillée entre les deux manipulations ; rincer également la sonde à dioxygène.
En fin d’épreuve, ranger le poste de travail et fermer le logiciel.