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Laboratory of biotechnology and nuclear technologies, LR16CNSTN01, National centre of nuclear
sciences and technologies, Technopole Sidi Thabet, Tunis, Tunisia.
Résumé La mouche méditerranéenne des fruits Ceratitis capitata (Wiedemann) (Diptera: Tephritidae)
est l’un des ravageurs les plus dévastateurs au monde et plus particulièrement dans la région
méditerranéenne. Diverses approches sont appliquées pour contrôler ce ravageur. L'utilisation de la
technique des insectes stériles (TIS) a été approuvée dans de nombreux pays. La TIS est une méthode
de biocontrôle qui nécessite le lâcher de mâles stériles compétitifs par rapport aux mâles sauvages.
Plusieurs études ont porté sur l'amélioration des performances des mâles lâchés grâce à l'étude de leur
microbiote intestinal. Nous nous sommes concentrés sur la quantification de la communauté
bactérienne du tractus intestinal chez des adultes sauvages dérivées de plusieurs fruits hôtes ainsi que
sur ceux de la souche de laboratoire traitée et non traitée par irradiation. La charge bactérienne totale
chez tous les adultes sauvages analysés ne varie pas en fonction du fruit hôte. Par contre, elle diminue
considérablement lorsque les pupes subissent un traitement par irradiation. Nos résultats n'ont montré
aucune différence entre les réserves nutritionnelles des différents adultes sauvages échantillonnés et
ceux du laboratoire. Cependant, nous avons remarqué que l'insecte s'adapte très bien à l'environnement
dans lequel il évolue. En ce qui concerne l'activité protéolytique, nos résultats ont montré une activité
importante sur l'hémoglobine.
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Volume 11 (3). Published October, 15, 2019
www.jnsciences.org
E-ISSN 2286-5314
1. Introduction
La mouche méditerranéenne des fruits (Ceratitis capitata ; Diptera:Tephritidae ; Weidemann),encore
appelée Cératite, est un ravageur d’importance économique clé pour la production fruitière dans le
pourtour du bassin méditerranéen et en Tunisie en particulier. La Cératite est une espèce polyphage
qui s'attaque à plus de 570 plantes hôtes (Liquido et al. 2017). Les femelles pratiquent des piqûres de
pontes sur les fruits, les asticots après leur éclosion se développent dans la pulpe du fruitet accélèrent
son pourrissement et par conséquent sa chute. En Tunisie, sa principale cible est constituée par un
grand nombre de cultures fruitières non apparentées, les arbres fruitiers tels que les Citrus, les
abricotiers, les pêchers, les néfliers, etc. Elle s’attaque à tous les fruits d’hiver et d’été, causant des
dégâts considérables ; ainsi qu’à d’autres espèces telles que le figuier de Barbarie faisant largement
partie du contexte tunisien et qui sert d’hôte refuge lorsque qu’il n’y a pas de fruits cultivés
disponibles.
Diverses approches sont déployées pour lutter contre la mouche méditerranéenne ; la plus répandue est
la lutte chimique. Les traitements chimiques constituent un outil utile pour lutter contre les mouches
nuisibles (Ovruskiet Schliserman 2012; Balaure et al. 2017). En Tunisie, les pesticides sont
couramment appliqués et cela même pour les pesticides organochlorés interdits par la loi (Bachrouch
2012, Salem 2016). En fait, leur utilisation est sujette à de nombreuses controverses, notamment les
substances non sélectives affectant les insectes pollinisateurs et les ennemis naturels des organismes
nuisibles. Leur concentration dans l'environnement constitue une menace sérieuse pour la santé des
animaux et celle de l'homme (Haddaoui 2015). La résistance développée chez les insectes est un
phénomène qui se développe d’une façon inquiétante, l’exemple qui illustre cela parfaitement est la
découverte chez une population espagnole sauvage de C. capitata d’une résistance contre le malathion
(Magana et al. 2007).
Au cours des dernières années, la Technique de l’Insecte Stérile (TIS) a largement été utilisée pour le
contrôle des insectes, c’est une technique différente des méthodes de lutte biologique traditionnelles.
La TIS est par définition spécifique à chaque espèce de ravageur, elle repose sur la production en
masse de l’espèce cible, sa stérilisation et le lâcher des mâles en plein champs. Les mâles stériles
lâchés vont s'accoupler avec les femelles vierges sauvages, ce qui donnera des œufs non viables et la
densité de la population sauvage s'effondrera avec le temps (Klassen 2005). La TIS est une méthode
biologique de suppression ou d'élimination d'organismes nuisibles respectueuse de l'environnement
qui convient très bien à l'approche globale de la gestion intégrée des organismes nuisibles (AW-IPM)
(Knipling 1995). Depuis les années soixante-dix, cette technique est largement appliquée contre les
populations de C. capitata. Cependant, le succès de la TIS est principalement lié à la performanceet à
la compétitivité des mâles lâchés(Dyck et al. 2005). Néanmoins, ces mâles ont subi différents stress
dus à la colonisation, l'élevage en masse et l'irradiation.
Plusieurs études se sont intéressées à améliorer la performance des mâles de la Cératite. Ces travaux
sont basés sur l’ajout de probiotiques au milieu d’élevage des larves et celui des adultes (Niyazi et al.
2004 ; Hamden et al 2013). Ces études ont été effectuées suite aux différences substantielles trouvées
par Ben Ami et al. (2010) entre la composition de la microflore intestinale de la souche sauvage et
celle de l’élevage (Vienne 8). En effet, la composition bactérienne au niveau du tractus digestif a une
influence sur la longévité et la compétitivité chez les mâles de la Cératite par sa contribution dans le
métabolisme du carbone et de l’azote. Cette communauté bactérienne qui est transmise de la mère à sa
descendance (essentiellement composée d’entérobactéries) semble être amplifiée par le fruit hôte et
maintenue au long du cycle de vie de l’insecte (Behar et al. 2008).
L’objectif de ce travail consiste à quantifier la communauté bactérienne du tractus intestinal chez la
Cératite sauvage issue de plusieurs fruits hôtes ainsi que celle du laboratoire traitée et non traitée par
irradiation. Les réserves nutritionnelles et les activités de certaines enzymes digestives chez ces
adultes ont été analysées afin de déceler une éventuelle relation avec la charge bactérienne digestive.
2. Matériel et Méthodes
2.1. La souche de laboratoire de la Cératite Ceratitis capitata
Les adultes de la mouche méditerranéenne des fruits proviennent d'une colonie de la souche à
déterminisme sexuel génétique de la Cératite (GSS) VIENNA 8 (V8) maintenue à l’unité pilote de
production des mâles stériles de la Cératite au Centre national de science et de technologie nucléaires
(CNSTN) (Msaad Guerfali et al 2007,2011). Cette souche a deux mutations avec deux marqueurs wp
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et tsl sur les chromosomes Y-autosome 5, produisant des mâles de type sauvage (pupes brunes) et des
femelles mutantes (pupes blanches) (Franz 2005). Les mouches adultes ont été nourries de sucre:
levure (3: 1) et d’eau. Le régime alimentaire des larves était basé sur la formulation proposée à
l'origine par Tanaka et al. (Tanaka 1969) Elle contenait du son de blé comme substrat (28%), de la
levure torula comme source de protéines (7%), du sucre comme phagostimulant et une source de
glucides (14%) et de l'eau (50%). Toutes les expériences ont été effectuées dans les conditions de
laboratoire (23 ° C ± 1 ° C et 60% HR).
Tableau 1 Amorces utilisées pour la quantification de la charge bactérienne intestinale des adultes de la Cératite
Amorce Séquence, 5’-3’ Application
16SF TCCTACGGGAGGCAGCAGT QPcr pour quantifier le gène 16S rARN
16SR GGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTT des eubactéries
Sens G6PD CGGACGAGCAGGGCAAAATATG
Gène de référence
Anti-sens G6PD AGACGGACGGCGGGTAAGG
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3. Résultats
3.1. La densité relative de la charge microbienne digestive chez la souche sauvage et la souche de
laboratoire irradiée de la Cératite
Les résultats de l’analyse par Pcr quantitative en temps réel de la charge microbienne digestive des
adultes issus des différents fruits échantillonnés ainsi que des adultes de la souche de laboratoire
irradiée ont montré des différences au niveau du nombre de copies (Ct) du gène cible. Les Ct pour les
AO sont de l’ordre de 15.41, pour les AB sont de 16.27, pour les AP 18.22 et pour les nèfles 19.07. En
revanche, la souche de laboratoire irradiée a montré un nombre de Ct équivalent à 30.37 alors que
pour la souche de laboratoire non irradiée nous avons noté une baisse du nombre de Ct à 16.06 (Fig1).
Après correspondance avec la courbe standard établie à partir de la souche Klebtiella oxytoca les Ct
ont été traduits en CFU ce qui correspond à 1,01 109 pour les AP, 1.06 109 pour les AN, 1.41 1010 pour
les AO, 7.73 109 pour les AB, 8.96 109 pour V8 et 3.57 105 pour V8irr.
Selon l’étude statistique, il existerait une augmentation significative des Ct chez la souche de
laboratoire irradiée par rapport à tous les autres échantillons.
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Figure 1. Charge bactérienne du tractus digestif des adultes de la Cératite exprimée en CFU.
AO :Adulte issu d’oranges, AN :adulte issu de nèfles, AB : adulte issu de bigarades, V8 : adulte de la souche du laboratoire
« Vienne 8 », V8irr : adulte de la souche du laboratoire irradiée « vienne8 »
3.4. Dosage du sucre Les quantités moyennes de sucre dosées chez les adultes de la Cératite issus des
fruits infestés ne semblent pas être différentes. En revanche, ces quantités sont différents par rapport à
celles existantes chez la souche sauvage (F=31.41 ; ddl1=5 ; ddl2=12; p<0.01).L’exposition aux
rayons gamma quant à elle ne semble avoir aucun effet sur la quantité de sucre présente chez la souche
de laboratoire (Tableau 2).
Tableau2. Dosage des réserves nutritionnelles en sucres, en lipides et en protéines chez les adultes sauvages issus des
différents fruits ainsi que la souche de laboratoire Vienne 8.
Echantillons
AN AP AB AO V8 V8irr
Sucre
6.06± 0.81a 5.14± 0.38 a 4.39± 0.14 a 4.58± 0.26 a 15.47± 1.8b 12.12±0.18b
(µg/adulte)
Lipide
67.67±1.83 a 56.06±6.18 a 63.33±2.19 a 63.33±2.19 a 42.62±1.28b 64.34±2.1 a
(µg/adulte)
Protéine
57.67±3.23 a 59.84±1.54 a 54.49±4.18 a 54.49±4.58 a 56.82±1.91 a 50.31±7.06 a
(µg/adulte)
Les valeurs représentées sont des moyennes ±ES (n=3), des lettres différentes indiquent une différence significative entre les
moyennes. Sucre (F=31.41, ddl1=5, ddl2=12, p<0.0001), Lipide (F=10.6, ddl1=5, ddl2=12, p<0.001, F=1.73, ddl1=1.73,
ddl1=5, ddl2=12, p<0.2).
AN :adultes issus de nèfles, AP : adultes issus de poires, AB : adultes issus de bigarades, AO : adultes issus d’oranges, V8 :
adultes de la souche de laboratoire Vienne8
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Figure 2. Activité de l’α-glucosidase et de la β-glucosidase au niveau du tractus digestif des adultes de la Cératite.
Figure 3. Activité de l’α-galactosidase et de la β-galactosidase au niveau du tractus digestif des adultes de la Cératite.
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35
*
30
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UE/intestin
20
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0
AN AP AB AO V8 V8irr
Sucrose Maltose
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4. Discussion
Nous avons pu quantifier la charge microbienne intestinale chez des adultes issus de fruits hôtes ainsi
que ceux de la souche du laboratoire (V8) qui ont subi l’irradiation afin de les rendre stériles pour
pouvoir les lâcher en plein champs lors de l’application d’une lutte contre la Cératite par la Technique
de l’Insecte Stérile. Nous avons également dosé les réserves nutritionnelles de ces adultes ainsi que
l’activité de certaines enzymes au niveau de leur tube digestif.
La charge bactérienne totale chez tous les adultes sauvages analysés ne varie pas selon le fruit hôte.
Chez la souche de laboratoire, elle diminue drastiquement lorsque les pupes ont subi un traitement par
irradiation. En effet, Ben Ami et al. (2010) qui ont travaillé sur l’étude de la communauté bactérienne
intestinale chez la Cératite ont trouvé une réduction importante de la charge bactérienne chez les mâles
de la Cératite irradiés. Ils ont aussi pu montrer que cette réduction est accompagnée de modifications
de la structure bactérienne intestinale qui se traduit par l’apparition de souches de Pseudomonas sp.,
absente chez les adultes issus des fruits sauvages. Nous pouvons conclure que la charge bactérienne
n’est pas affectée quantitativement par l’origine de la souche ou par son régime alimentaire. Mais cette
dernière peut avoir une structure différente selon la nature du fruit et selon le stade de développement.
En effet, c’est ce qui a été démontré par Malacrino et al. (2018) qui on trouvé que le microbiote
bactérien hébergé chez la mouche méditerranéenne des fruits diffère selon les stades et les espèces de
plantes hôtes. Une analyse plus poussée utilisant le métabarcodage par le gène 16S ARNr donnera de
plus amples informations sur l’écologie globale de la communauté bactérienne de la souche sauvage
tunisienne selon les fruits et stades de développement.
Il semble donc évident que la composition du milieu dans lequel évolue la larve et la disponibilité des
nutriments va influencer la composition de la charge bactérienne qui a son tour va être déterminante
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5. Conclusion
La charge bactérienne du tube digestif n’est pas influencée par le milieu dans lequel a évolué l’insecte.
En contrepartie, nous avons pu démontrer une dysbiose importante qui est également confirmée par
d’autres travaux suite à l’exposition des mâles de la Cératite aux rayons gamma. Il est donc essentiel
d’étudier la structure du microbiote intestinal des mâles issus de différents fruits pour pouvoir
reconstituer cette flore chez les mâles de laboratoire par l’ajout de probiotiques.
Remerciements:
Nous voudrions remercier tous les techniciens qui ont contribué à la conduite de ce travail, à savoir
Mme Wafa Marzouki, M. Lotfi Sellini et M. noureddine Ben Ali.
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