HEMOCULTURES

Pr Adnene HAMMAMI
LABORATOIRE DE MICROBIOLOGIE

Faculté de médecine de Sfax-Tunisie

Réalisation du prélèvement

Milieux de cultures

Transport

Conduite au laboratoire

Interprétation
 Réalisation du prélèvement :
• Indication des hémocultures

Toute fièvre d’origine indéterminée, surtout si elle est

accompagnée de signes cliniques évocateurs d’infection
doit faire pratiquer des hémocultures
• Le plutôt possible dans l’évolution de la maladie
• avant tout traitement antibiotique,
• pics fébriles ou les frissons.
LE PRELEVEMENT
Préparation de matériel:
Chariot de soins à deux étages
-Un plateau à usage unique. Etage supérieur :

-Un antiseptique de type Bétadine.

-Une pipette de sérum physiologique.

-Des gants stériles.

-Des compresses stériles.

-Un dispositif de prélèvement (circuit fermé).

-Deux flacons de milieux de culture différente

(aérobie et anaérobie).

-Sparadrap.

-Thermomètre.

-Un garrot propre et décontaminé.

-Des sachets en plastique permettant

l’isolement des flacons de prélèvement et les

Etage supérieur :

-Bon de laboratoire.

-Etiquette.

--Compresse propre.

-Solution
moussante.
 Etage inférieur :

-Alèse de protection.

-Haricot.

-Container à aiguille appropriée.

 Réalisation du prélèvement :
-Se laver les mains

(Lavage hygiénique).

-Installer confortablement le patient et

effectuer un premier repérage de la veine

à ponctionner.

-Mettre la protection sous le membre du

patient.

-Nettoyer le membre du patient

 Ouvrir les compresses

stériles de façon aseptique

Ouvrir les flacons

d’hémoculture de façon

aseptique
Ouvrir le dispositif de

prélèvement de façon

aseptique

Imbiber les

compresses avec la

Bétadine
Poser le garrot à

environ 15 cm au

dessus de la zone

choisie

Enfiler les gants

stériles
 Désinfecter l’opercule

Désinfecter largement

la partie du membre à

ponctionner de bas

vers le haut.
Désinfection du point de ponction:
 Respect des 5 temps d’antisepsie:
1) Détersion avec un savon antiseptique
(Ex: Bétadine scrub)
2) Rinçage avec le sérum physiologique
3) Séchage
4) Antisepsie avec un antiseptique
alcoolique (Ex: Bétadine alcoolique)
5) Séchage (respect du temps d’action
des antiseptiques)
 Respecter le
temps de contact

Décapuchonner l’aiguille du

dispositif de prélèvement et

ponctionner la veine
Laisser progresser le sang dans le flacon
aérobie. Maintenir le flacon à la verticale
pour lire sur l’échelle le volume de sang
ayant infusé dans le flacon et pour éviter le
retour du bouillon de culture dans la
circulation sanguine
Clamper la tubulure avec la molette après
avoir pris la quantité de sang suffisante
(10 ml)

Retirer l’aiguille du flacon aérobie

et piquer l’opercule du flacon
anaérobie Laisser s’écouler 10 ml
de sang puis fermer la molette
 Une hémoculture=

Un flacon aérobie + Un flacon anaérobie

Enfant: un flacon pédiatrique

Enlever le garrot. Dépiquer le patient
en appliquant une compresse de
Bétadine sur le point de ponction.
Enlever le dispositif de prélèvement
du flacon.

Nettoyer le membre avec des

compresses imbibées de sérum
physiologique pour enlever le
reste d’antiseptique iodé.
Fixer une compresse
sèche avec le sparadrap
et assurer une pression
modérée pour assurer
l’arrêt du saignement

Décapuchonner et
agiter doucement les
flacons
Etiqueter les flacons :
nom et prénom du patient date,
heure et numéro du prélèvement,
nom du service, renseignements
clinique et remplir la feuille de
demande d’examen.
-Mettre les flacons dans le sachet en
plastique, ou envelopper
par le coton cardé.

Noter le soin avec la T° du

patient dans la feuille de
surveillance
Ranger le matériel
Se laver les mains
 Réalisation du prélèvement :

• Nombre / volume++

Respecter la quantité du sang++ :

Dilution du sang : ratio sang/bouillon de culture compris entre 1/5 et 1/10

→ diluer de façon satisfaisante les substances inhibitrices présentes dans le sang

(complément, lysozyme, cellules phagocytaires, antibiotiques)
- Chez l’adulte:
Les bactéries dans le sang: en faible quantité (≈ 1 bactérie/ml).
Volume minimum: 20 ml de sang (10 ml par flacon aérobie + 10 ml par flacon anaérobie).
Volume optimal: 40 à 60 ml, soit un total de 4 à 6 flacons (aérobies et anaérobies)
correctement remplis.

- Chez l’enfant:

La concentration bactérienne dans le sang: plus élevée que chez l’adulte / diminue avec
l’âge

Volume optimal: difficile à déterminer : en général de 1 ml / adaptation en fonction du

 Stratégie de prélèvement:

Prélèvement multiple Prélèvement unique

Nombre de ponctions 2à3 1
Nombre total de flacons 4à6 4à6
mis en culture
Sensibilité - équivalente à nombre de flacons égal
- équivalente lorsque les prélèvements sont espacés dans le temps
ou réalisés simultanément
Taux de contamination Modéré Faible (divisé par 2 à 3)
Avantages Confort du patient (une seule ponction)
Antibiothérapie instaurée plus
rapidement

Rémic 2015
 Milieux de cultures
Varient d’un laboratoire à un autre
De nombreux milieux commercialisés sont proposés et leurs performances
ne sont pas identiques permettant l’ensemencement direct à travers un
opercule de caoutchouc.

Préparé au labo Bactec BacT/Alert

Volume du bouillon variable

 Une hémoculture=

Un flacon aérobie + Un flacon anaérobie

Enfant: un flacon pédiatrique

 Milieux de cultures
 Nature du milieu:
Milieux de culture enrichis : Bouillon coeur-cervelle, Bouillon trypticase-Soja, à base de
peptones

 Pression: flacons fabriqués sous pression réduite (sous vide) permettant un

ensemencement direct du flacon

 Atmosphère: enrichie en CO2

flacon aérobies: CO2 et O2 / flacon anaérobies: CO2 et H2 ou N2

 anticoagulant : le polyanéthol sulfonate de sodium (SPS) Inhibe l’activité bactéricide

du sang la phagocytose, complément, lysozyme et certains ATB/aminosides

 Neutralisation des antibiotiques: résines absorbantes de cations ou charbon

activé ou billes polymériques
Transport

• Acheminer les flacons immédiatement au laboratoire

• Si une série d’HC : attendre les autres flacons

• Jamais à + 4°

• un étiquetage correct des flacons est indispensable en précisant :

 Nom et Prénom
 Service d’origine
 Date et heure du prélèvement
 Température
 Renseignements cliniques
Conduite au laboratoire:
 Conditions d’incubation et détection de la croissance
bactérienne

• Classer et enregistrer les flacons par services pour qu’ils soient

placés à 37°C

• Deux méthodes de surveillance et d’analyse des hémocultures :

Méthodes manuelles Méthodes automatisées

Détection de la croissance bactérienne

Méthodes usuelles:

 Incubation des flacons à 37° pendant 10 jours

 Durée ↗ si bactérie à croissance lente: Brucella, HACEK, Legionella

 Examen macroscopique biquotidien des flacons

 Examen microscopique et repiquage sur milieu gélosé des flacons positifs

Détection de la croissance bactérienne
Méthodes Automatisées:
BactAlert
Détection de la croissance bactérienne
Méthodes Automatisées:
Bactec 9050

Flacon anaérobie Flacon aérobie

 Détection de la croissance bactérienne
Méthodes Automatisées:
Incubation :35°C, 5jours
Avec les systèmes automatisés: pas de subcultures systématiques.
Incubation prolongée pour détecter certains microorganismes à croissance lente/ HACCEK,
Brucella
Les systèmes automatisés améliorent la vitesse de croissance par l’agitation permanente
des flacon →détection de façon plus sensible et plus rapide des flacon positifs grâce à une
détection continue de la croissance bactérienne (lecture des flacons toutes les 10 minutes)

Selon les automates, le principe de détection est fondé:

-Mesure indirecte du CO2 produit par les microorganismes dans les flacons : le fond du flacon
comprend un détecteur de CO2 contenant un indicateur de PH. La production du CO2 entraine
une diminution du PH
- mesure directe de pression de l’atmosphère du flacon, conséquence de la consommation
et/ou de la production de gaz par les microorganismes.
Détection de la croissance bactérienne
 Traitement des flacons positifs
Examen microscopique et subcultures : en urgence

Dès l’observation d’un signe de positivité ou dès que le flacon est

déclaré positif par l’automate:

Examen microscopique : à l’état frais et après coloration de Gram.

 Traitement des flacons positifs

Examen microscopique et subcultures : en urgence

Subcultures :
Repiquages sur :
- Gélose lactosée (ex : BCP)
- Géloses au sang incubées en aérobiose sous 5% de CO2 et en anaérobiose
(si flacon anaérobie).
- Gélose chocolat enrichie au polyvitex incubée en aérobiose sous 5% de CO2
- Milieu de Chapman.
- Gélose Sabouraud (si levures à l’examen direct)

Incubation à 35-37°C pendant 24h

 Traitement des flacons positifs

L’identification bactérienne se fait à partir des colonies en se basant sur les

caractères morphologiques, culturaux, biochimiques et si nécessaire antigéniques.

Gram catalase oxydase

 Traitement des flacons positifs

Pour toute souche isolée et jugée pathogène, un antibiogramme est réalisé

selon des normes standardisées. Il a un double intérêt thérapeutique et
épidémiologique (surveillance de la résistance aux antibiotiques).
 INTERPRETATION DES RESULTATS

Hémoculture positive

Bactérie pathogène Autres/S. aureus, S. pneumoniae,

Staphylocoques à coagulase négative, spécifique / Brucella, streptocoques ß-hémolytiques,
Propionibactéries, Corynébactéries, Bacillus Salmonella Typhi entérobactéries, Neisseria
A interpréter en fonction de la clinique et de meningitidis, Haemophilus,…
l’asepsie du prélèvement

1 seule HC ≥2 HC Quelque soit le nombre ≥2 HC 1 seule HC

Autres prélèvements
périphériques positifs
contexte clinique est en
faveur de sa responsabilité
Contamination probable
Sauf service oncohématologie,
Contamination probable réanimation Infection bactériémique
Cathéter central
Infection associée aux soins
INTERPRETATION DES RESULTATS

Hémocultures négatives

Absence de bactéries dans le sang

MAIS faux négatifs:
- prélèvement effectué au moment non optimal ou trop tardivement au cours de la
maladie
- prélèvement pratiqué sous antibiothérapie
- quantité insuffisante de sang ensemencé
- infection localisée sans bactériémie
- micro-organisme de culture impossible
- origine non bactérienne