Université Mouloud MAMMERI de Tizi-Ouzou

Faculté des Sciences Biologiques et des Sciences Agronomiques

Département de Biochimie / Microbiologie

L3 : Microbiologie

TP de Parasitologie : TP 3 : Examen parasitologique du sang

Définition : L’examen parasitologique du sang recherche les parasites qui se multiplient ou

qui séjournent pendant une phase de leur cycle dans le sang ou dans les organes
hématopoïétiques. Cette analyse est essentiellement dans le but de montrer la présence
éventuelle de parasites : Plasmodium ; Leishmania ; Trypanosoma ; Microfilaires ;
Toxoplasma.
a) Prélèvement
Prélever 5 ml de sang par ponction veineuse. Le sang est recueilli sur anticoagulant, de
préférence le citrate de sodium à 3,8% à raison de 0,4 ml pour 1,6ml de sang ou à défaut
l’EDTA.
Remarque :
- Les autres anticoagulants sont déconseillés car l’héparine provoque une agglutination des
microfilaires ; le fluorure de sodium et l’oxalate de sodium tuent les microfilaires.

b) Confection :
1- Frottis :
Placer à une extrémité d’une lame une petite goutte de sang. Sans attendre que le sang sèche,
appliquer sur la lame à côté de la goutte, entre elle et le centre de la lame, l’arête d’une lame
rodée. Former environ 45°du côté de la goutte. Reculer la lame jusqu’à ce qu’elle touche la
goutte. Par capillarité, celle-ci s’étale le long du dièdre. Par un mouvement uniforme, sans
excessive rapidité, faire parcourir au dièdre la surface de la lame. Ne pas quitter le contact de
la lame avant la fin de l’étalement. Agiter la lame pour obtenir un séchage rapide. Colorer.
2- Goutte épaisse :
Placer au centre de la lame une goutte de sang. Défibriner le sang en tournant à l’aide du coin
d’une autre lame ou d’un vaccinostyle et étendre la surface de la goutte en raclant la surface
de la lame (1-2 cm).
Laisser sécher 2 h au minimum (étuve à 37°) à l’abri de la poussière et des mouches.
Déshémoglobiniser avec quelques gouttes d’eau jusqu’à lyse totale des hématies. Egoutter,
sécher, colorer.
c) Coloration :
1- Frottis :
- Fixer le frottis avec du méthanol pendant quelques secondes en le trempant dans une cuve
qui en contient.
- Préparer une solution de Giemsa à 10% (1ml de solution mère dans 9 ml d’eau de robinet).
- Recouvrir toute la lame de cette solution et laisser colorer pendant 15minutes.
- Chasser délicatement le colorant de la lame en ajoutant de l’eau propre goutte à goutte. Faire
sécher à l’air libre et examiner au microscope
2- Goutte épaisse :
La coloration se fait comme pour le frottis, exception faite de l’étape de la fixation.
d) Lecture :
Elle se fait à l’objectif à immersion (x 100). La numération des Plasmodiums (parasitémie) est
faite sur la goutte épaisse. Le nombre de parasites par microlitre de sang est établi par rapport
au nombre de leucocytes, fixé à 8000 par microlitre.

e) Album d’image
Plasmodium