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NUMÉRATION DES LEUCOCYTES (globules blancs)

Publié le 04/01/2016 à 06:11
Par bibirou

Principe :
Le sang est dilué au 1/20ème à l’aide du liquide de Lazarus, un diluant leucocytaire qui lyse les globules
rouges et laisse intacts les globules blancs. On compte alors les leucocytes, au microscope, sur une cellule de
comptage et on calcule le nombre de leucocytes par mm3 ou par litre de sang.
Matériel :
Pipette de Thoma pour globules blancs**, liquide de dilution, cellule de Malassez, lamelles planées optique‐
ment, " chambre " humide
Prélèvement
Par piqûre au bout du doigt ou par ponction veineuse de sang recueilli sur EDTA disodique (2 gouttes d’une so‐
lution à 5% pour 5 ml de sang)
Réactifs :
Liquide de Lazarus :

acide acétique 5 ml
eau distillée QSP 100 ml
bleu de méthylène poudre 1 cristal

Mode opératoire :

Pipeter le sang jusqu'à la graduation 0,5 de la pipette de Thoma,

Essuyer l’extérieur de la pipette en faisant bien attention de ne pas absorber le volume sanguin à l’inté‐
rieur de la pipette ;
Compléter à la graduation 11 avec le liquide de dilution. On obtient ainsi une dilution au 1/20 ;
Bien agiter par retournement pendant 1 minute ;
Laisser reposer dans la pipette pendant 15 minutes
Préparer la cellule de Malassez ;
Réagiter la dilution
Rejeter les 2 premières gouttes
Monter en cellule de Malassez
Laisser reposer 3 minutes en chambre humide
Procéder à la numération des éléments, on obtient ainsi n globules blancs (GB) ;

Calculs :
Malassez : On compte deux bandes : n x 5 x 20 = N GB / mm3
Calcul dans 1 litre de sang : exemple
7 000 globules blancs par mm3= 7x 103/mm3=7x106/cm3= 7x109 /dm3= 7 Giga par litre
Le liquide de Lazarus se conserve bien, à l'abri de l'air et de la lumière.
Valeurs normales :
Adultes : 4 000 à 9 000 leucocytes par mm3 soit 4 à 9 Giga par litre
Enfants < à 1 an : 10 000 à 20 000/mm3soit 10 à 20 Giga par litre
**on peut également effectuer une dilution au 1/20ème dans un tube à hémolyse en prélevant 0,1ml de sang
et 1,9ml de liquide de Lazarus. Bien agiter après la dilution et avant de compter.
Nettoyage des pipettes : voir numération de plaquettes

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