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Comment faire la numération manuelle des Recherchez
réticulocytes Search...

31 mai 2021  |  Aucun commentaire

Les réticulocytes sont globules rouges jeunes qui gardent pendant
environ 1 jour, des restes d’ARN qui les font reconnaître, après coloration
vitale, comme réticulocytes. La  procédure  peut être manuelle. Dans le
texte qui suit, nous allons détailler d’abord  le principe, puis  la procédure
technique de cette numération manuelle.
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publications
Sommaire
Intérêt de la numération des réticulocytes
Technique de prélèvement
Principe de la numération  des réticulocytes
Technique de numération proprement dite
Matériel et réactifs
Etapes techniques proprement dit
Facteurs influençant la numération manuelle  
Lecture du résultat au microscope
Contrôle qualité
Autre technique de numération des réticulocytes

Ne manquez pas
Intérêt  de la numération des réticulocytes nos prochains
Sommairement, la numération des réticulocytes permet de caractériser l’anémie : régénérative, ou arégénérative. Et  de faire articles!
 l’évaluation de la réponse au traitement contre l’anémie, du suivi de patients aplasiques, ou dysplasiques, ou enfin ayant subi
une greffe de moelle osseuse.

Prénom *
Technique de prélèvement
Pour faire une numération des réticulocytes, l’échantillon de sang peut être veineux ou capillaire. Pour les détails concernant la
Adresse e-mail *
technique de prélèvement, voir l’article suivant.

Anticoagulants recommandés
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Parmi les anticoagulants, l’ EDTA est le préféré . Dans ce cas, la stabilité des réticulocytes est de 8 jours, pour un échantillon
conservé entre 2-8°C[1]. Cependant, si l’on utilise l’héparinate de lithium, alors la stabilité de l’échantillon est de 24h.  Mais, du
sang capillaire frais peut être utilisé car, il y a du citrate de sodium, qui jouerait le rôle d’anticoagulant dans la préparation du bleu Nous ne spammons pas !
de cresyl. Consultez notre politique de
confidentialité pour plus
Comme nous le verrons plus loin, le bleu de cresyl est le colorant utilisé pour visualiser et reconnaître les réticulocytes au d’informations.
microscope optique.

Pour un guide efficace du bon usage du microscope optique, voir cet article.

Principe de la numération  manuelle des réticulocytes A propos

Elle repose sur la visualisation et le comptage des réticulocytes. L’on ramène ensuite ce nombre à la numération érythrocytaire
Services
pour donner le nombre en valeur absolue. C’est cela,  et non pas le pourcentage qui est préféré dans l’interprétation par le
médecin.
Académie

Comment reconnaitre un réticulocyte au microscope Blog

Le réticulocyte donnant un globule rouge par diminution de sa taille et perte de l’ARN résiduel, il a une taille et un volume
Contact
légèrement supérieurs à ceux du globule rouge (110-125 fl et  8 µm de diamètre) et possède encore des mitochondries et des
ribosomes.

Après coloration et précipitation de ses particules d’ARN avec certains colorants fluorescents ou des colorants basiques
comme le bleu de méthylène, et le bleu de crésyl brillant, il devient reconnaissable parmi les érythrocytes. Ceux-ci ne présentent
pas ces particules. Articles récents

Colorant utilisé pour la visualisation des réticulocytes Comment faire le comptage sur cellule de

C’est le bleu de crésyl brillant qui est utilisé. C’est un colorant vital, c’est-à-dire qu’il colore les cellules sans exercer d’action Malassez
nocive ou létale immédiate. Il est orthochromatique lorsqu’il est appliqué sur des réticulocytes[2].
 q q pp q y [ ]

Comment faire l’analyse cytobactériologique et

Technique de numération proprement dit biochimique du liquide d’ascite

Matériel et réactifs
Colorant bleu de crésyl brillant : Il est composé de bleu de crésyl pur cristallisé (1g), d’eau physiologique (100 ml), et de citrate
de sodium (0,1g).
Comment faire l’examen cytobactériologique et
Gants ordinaires.
biochimique du liquide pleural
2 lames porte-objet et une lame à bord rodée.
Tube à hémolyse.
Boule de coton cardé
Comment identifier les salmonelles et shigelles
Etuve à 37°c (facultatif)
en coproculture
Microscope optique avec objectif × 10 et  × 100.
2 pipettes pasteur avec tétine.
Poubelle biologique
Procédure d’une hémoculture: intérêt et
Portoir pour tubes.
algorithme
Minuteur.
Marqueur

Etapes techniques proprement dit

Il s’agit de : Au programme
Se laver les mains, enfiler les gants. Académie (24)
Mélanger dans un tube à hémolyse étiqueté 6-8 gouttes de sang bien homogénéisé, et 6-8 gouttes de réactif en les prélevant
Bactériologie (6)
respectivement avec les pipettes pasteur.
Boucher le tube à hémolyse d’un bout de coton cardé et  le mettre l’étuve pendant 10-15 minutes. Remettre en suspension.
Biologie Médicale (12)
Tirer deux frottis très fin et réguliers. Sécher en agitant vivement à l’air.
Lire d’abord à l’objectif ×10, pour repérer une zone où la distribution des réticulocytes est homogène. Passer à l’objectif à
Création et Gestion du laboratoire (4)
immersion pour effectuer la numération.
Elle peut se faire de cette façon[3] :
Hématologie (3)

compter le nombre de réticulocytes dans 100 champs : R.

Parasitologie (3)

Puis compter le nombre total de globules rouges dans 10 champs : G

Sérologie (3)

 Enfin, pour le pourcentage  des réticulocytes, on a : %R = R/Gx10

Techniques de prélèvement (6)

Facteurs influençant la numération manuelle  

Plusieurs facteurs peuvent entraîner une numération inexacte. On peut avoir :

Au niveau de la numération : Archives

Une mauvaise homogénéisation de l’échantillon ne permet pas une bonne numération;
février 2022
Compter très peu de cellules (globules rouges) peut fausser le résultat. Un minimum de 500 cellules doit être adopté[4] ;
Le comptage du nombre de globules rouges  est pénible, d’où les risques  d’erreurs possibles. Et si l’on se contente d’estimer
décembre 2021
qu’il y a 100 globules rouges/champ, cela rend la méthode aléatoire, car la numération érythrocytaire est personnelle aux
patients.
novembre 2021
Ainsi, on peut constater que cette méthode de numération manuelle est de sensibilité et de reproductibilité aléatoire.
Cependant, il est possible de surmonter cette faiblesse en faisant plusieurs comptages du même échantillon. On en tire
octobre 2021
 ensuite une moyenne, que l’on compare aux moyennes d’un 2nd technicien.

septembre 2021
Au niveau des réactifs  et consommables
août 2021
Nous avons par exemple:

juillet 2021
En fonction des fabricants, les teintes des colorants pourraient  légèrement  varier, prêtant à confusion ;
Ne pas filtrer le colorant en début de manipulation peut causer la formation d’agrégats de celui-ci sur le frottis;
juin 2021
Une lame non dégraissée, non sèche, et rayée ne permet pas d’obtenir un frottis fin, homogène, qui rende la numération aisée,
par une bonne répartition des cellules.
mai 2021

Au niveau de la technique proprement dit avril 2021

D’abord, en tirant le frottis, un trop gros volume du mélange entraîne un frottis qui dépasse l’extrémité de la lame porte-objet ;
février 2021
Ensuite, il peut y avoir confusion entre les réticulocytes et les corps de Heinz ;
Enfin,  une confusion entre les réticulocytes et les corps de l’hémoglobine H est également possible.

Les corps de Heinz sont des précipités d’hémoglobine causés par la déficience en glucose -6- phosphate déshydrogénase,
pendant les crises hémolytiques.
Méta
Dans ce cas, comme moyen de les discriminer et ne pas fausser la numération des réticulocytes, l’on peut vérifier leur couleur et
leurs granulations. En effet, ils sont  d’un bleu-violet légèrement plus clair que la réticuline des réticulocytes. Et leur aspect est en Connexion
petits granules,  situés généralement en périphérie de la cellule, ou semblant traverser la membrane.
Flux des publications
De plus,  ils ont des diamètres allant de 1 à 3mm. Et ils peuvent être présents en plusieurs exemplaires dans une même cellule
[4] . Flux des commentaires
 Flux des commentaires

Les corps de l’hémoglobine H quant à eux, se présentent comme des points bleu pâle de tailles variables. Ils apparaissent dans Site de WordPress-FR
l’alpha- thalassémie ou l’hémoglobinose H [4] .

Lecture du résultat  au microscope

Au microscope, les hématies apparaissent colorées en bleu-vert (ou orangé). Les réticulocytes contiennent des filaments et
fines granulations en bleu-violet foncé, disposés en filet : la substance granulo-filamenteuse.

Il y a différents stades du réticulocyte. L’on peut les distinguer, une fois coloré, selon l’aspect de la structure granulo-
filamenteuse. En microscopie optique, ces stades sont difficiles à distinguer les uns les autres. Ceux-ci n’ayant pas d’importance
diagnostique, la numération des réticulocytes comprend tous ces stades à la fois [1].

Pour une image de ces stades et une interprétation détaillée des résultats potentiels, bien vouloir consulter l’article suivant.

Contrôle qualité
Les mesures de contrôle qualité peuvent différer comme toute procédure selon les laboratoires. Mais elles pourraient impliquer
par exemple :

Une filtration du colorant avant usage ;

 Sa conservation au réfrigérateur, tout comme sa traçabilité (marquer le jour de préparation sur le flacon) ;
L’utilisation de lames contrôle pour s’assurer que le colorant utilisé n’induise pas en erreur
 Qu’en ce qui concerne le comptage, il soit  effectué par deux techniciens  différents. Et si leurs résultats ne diffèrent pas de
plus de 20%, l’on peut considérer que le comptage est fiable [4].

  Autre technique de numération des réticulocytes

Nous avons la cytométrie de flux. C’est une technique qui utilise un marquage de l’ARN ribosomal par un fluorochrome et
détecte le signal émis.

C’est une méthode d’une grande sensibilité, reproductibilité et précision. Elle permet même de distinguer facilement les
différents stades de réticulocytes entre eux. Ce qui n’est pas le cas de la technique manuelle. Mais cette technique est plus
coûteuse[5] .   

En définitive, l’on peut voir que faire la numération manuelle des réticulocytes est peu coûteuse, mais demande tout de même
l’œil d’un microscopiste averti. La cytométrie de flux est une excellente alternative à son aspect quelque peu aléatoire. Mais elle
est coûteuse. Dans un prochain article, nous parlerons essentiellement de l’analyse des résultats.

[1] Lupacchino, C. (2008, avril). La stabilité des réticulocytes. Récupéré sur docplayer: https://docplayer.fr/10172270-La-stabilite-
des-reticulocytes.html

[2] Lecomte.2011). Bleu de Crésyl. Repéré à http:// usrers.skynet.be/champignos_passion/Bleude cresyl.htm

[3] Biologie tropicale.(2015).  Numération des reticulocytes. Repéré à http://www.bioltrop.fr/spip.php?article147

[4] Cheesbrough M. (2010).District Laboratory Practice In tropical countries.2nd edition Update.Part2.Cambridge University Press

[5] Alvarez, Chabert, Baufine-Ducrocq, & Quillert. (1997). Evaluation de la numération des réticulocytes sur automate Cell-Dyn
3500® : Comparaison avec une technique par cytométrie en flux. Annales de Biologie Clinique, 55(3), 215‑221

Avertissement: La procédure ci-dessus décrite est un exemple. Pour la rendre applicable dans votre laboratoire, elle doit être
validée par votre directeur technique.

dans votre laboratoire, elle doit être validée par votre

directeur technique.

Les auteures:

-Rédigé par Renée A. LEYEBE, titulaire d’une Licence en Sciences de la Santé, option Analyses Médicales

-Validé par Petronile NGO ETOUNDE, titulaire d’un Master en Microbiologie et Immunologie.

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Étiquettes : principe, reticulocyte, technique numeration manuelle
Comment stocker, sortir et faire l’inventaire des stocks au laboratoire Comment interpréter la numération des réticulocytes

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